Вирусный и инфекционные заболевания

Цитотоксический иммунный ответ проходит в 4 этапа.

I. Презентация антигена Т-лимфоцитам CD8, приводящая к их активации.

II. Пролиферация CD8 Т-клеток.

III. Дифференцировка CD8 Т-клеток в цитотоксические Т-лимфоциты (CTL), так называемые «прямые» киллеры.

IV. Реализация цитолиза клеток-мишеней.

Иммунный ответ начинается в очаге инфицирования. С поглощения антигена АПК начинается «процессинг антигена». В ходе переваривания происходит частичная деградация антигена с вычленением эпитопов. В цитоплазме каждый эпитоп соединяется с молекулой МНС I и образуется комплекс «эпитоп + МНС I» -это т.н. «процессированный антиген».

Комплекс «эпитоп + МНС I» выводится на поверхность мембраны АПК. Этот процесс обозначается термином «презентация антигена», а сам комплекс теперь называется «презентированный антиген» и может быть представлен АРК.

С током лимфы дендритные клетки проникают в региональные лимфатические узлы, где мигрируют в Т-зоны.

В Т-зоне дендритные клетки созревают (CD83) и начинают привлекать Т-лимфоциты CD8, специфичные к комплексу антиген-МНС I, которые поступают в узел в процессе рециркуляции. Описанный процесс называется «рекрутированием» Т-лимфоцитов. Т.о. происходит накопление Т-клеток специфичных к антигену в региональном лимфатическом узле.

Комплекс «эпитоп + МНС I» презентируется Т-киллерам (CD8). При этом Т-лимфоциты и дендритные клетки находятся в достаточно тесном контакте и непрерывно взаимодействуют друг с другом. Формируется зона устойчивого межклеточного контакта -- иммунный синапс.

Процесс активации (переход из состояния покоя в функционально активное состояние) Т-лимфоцита начинается с получения им информационных сигналов от антигенпрезентирующей клетки. Первый информационный сигнал обусловлен контактом TСR Т-лимфоцита с презентированным антигеном на поверхности АПК. Второй и последующие - обусловлены корецепторными (CD8) и костимулирующими взаимодействиями Т-лимфоцита с АПК.

Следующий процесс, в который вовлекаются активированные Т-клетки -- пролиферация, т.е. увеличение численности клеток.

Уже в процессе пролиферации начинается дифференцировка Т-лимфоцитов в цитотоксические лимфоциты. Цитотоксические Т-лимфоциты мигрируют из лимфоидных органов в барьерные ткани и очаги воспаления, например - в очаг инфицирования вирусами, где происходит заключительный этап иммунного ответа.

Цитолиз инфицированных клеток Т-лимфоцитами происходит:

с участием перфорина, который вызывает образование поры в мембране клетки-мишени, в клетку поступает вода и клетка-мишень разрушается;

путем контактного киллинга, т.е. передаче летального сигнала в виде цитотоксинов-гранзимов, включающего механизм индукции апоптоза клеток-мишеней.

Клетки, подвергшиеся цитолизу, удаляются макрофагами и дендритными клетками путем фагоцитоза еще до их распада. Поэтому цитолиз не сопровождается развитием гнойной воспалительной реакции и повреждением тканей.

46. Клеточный иммунный ответ. Особенности воспалительного типа иммунного ответа

Воспалительный клеточный иммунный ответ развивается быстрее цитотоксического. Предназначен для защиты от внутриклеточных патогенов - локализуются в фаголизосомах (микробактерии - туберкулез, лейшмании,плазмодии, риккетсии, хламидии, грибы)

Участвуют T-лимфоциты, Tхелперы1 (Th1 - CD4) и макрофаги

Отличительные признаки:

1. Презентация посредством МНС-2 Тхэлперам-0.

2. Макрофаги - и антиген представляющие и эффекторные клетки.

3. Представляют антигены составе МНС-2 Th1 лимфоцитам CD4.

4. Эффекторные механизмы осуществляют - макрофаги и CTL

Этапы:

I. Презентация антигена дендритными клетками Th0 и активация последних

II. Дифференцировка Th0 в Th1.

III. Распознавание антигенов Th1, их активация, выделение цитокинов, активирующих макрофаги и CTL.

IV. Цитолиз патогенов CTL и активированными макрофагами.

Дендритные клетки (см. как в цитотоксическом) презентирует антиген в составе МНС-2 Th0. Th0 активируются, пролиферируют и дифференцируются в Th1. Th1 мигрируют в очаг инфицирования, взаимодействуют с макрофагами, захватившими, но не переварившими антиген - презентуют его в составе МНС-2, в результате образуются активационные сигналы, направленные как в сам Тh1, так и в макрофаг, которые усиливаются засечёт молекул костимуляции. Th1 вырабатывают активационный сигнал, который вызывает активацию Т-лимфоцита CD8 и дифференцировку его в CTL. Далее - как в цитотоксическом типе ответа

Активированные макрофаги выделяют весь спектр провоспалительных и бактерицидных факторов, что приводит к развитию в зоне нахождения антигена гнойной воспалительной реакции. Воспалительный иммунный ответ результативен в борьбе с антигеном, но деструктивен для окружающих тканей. - ИММУННОЕ ВОСПАЛЕНИЕ.

47. Гуморальный иммунный ответ. Этапы. Клетки, участвующие в его реализации

Отличительные черты:

1. В-клетки и АРК и АПК одновременно.

2. В качестве помощников выступают Th2, получившие сигнал от дендритных клеток Th2.

3. Участвуют в костимуляции В-лимфоцитов Антителообр.

4.Клетки иммунного ответа - производные B лимфоцитов

Этапы:

I. Распознавание В-лимфоцитом и стимуляция антигеном с участием Т-хелпера.

II. Активация и пролиферация В-клеток.

III. Переключение изотопа иммуноглобулинового рецептора В-клетки и созревание аффинитета (прочности).

IV. Дифференцировка в плазматические клетки и В-памяти.

Контакт В-лимфоцита возможен в очагах поступления в организм АГ. Однако, вовлечение этих клеток в иммунный ответ возможно только в периферических лимфатических органах с оптимальными условиями для взаимодействия 3 компонентов: антигена, В-лимфоцита, Th2.

После связывания антигена лимфоцит распознает его и процессирует на мембрану в составе МНС-2, подготавливая антиген для рецептора Тh. Во взаимодействие вовлекаются ненаивные Th0, а Th2 (образовавшиеся из Th0 под действием антигена). Т и В-лимцофиты покидают место первичной локализации, встречаются на краю фолликулов, где происходит активация В-клеток (осуществляется посредством активационных сигналов, секретируемых Th2). После - пролиферация,

Дифференцировка.

Часть остаются на краю фолликула и дифференцируются в плазмоциты, имеющий рецептор IgM, изотип и неизменный аффинитет.У таких клеток короткий срок жизни - 5-6 суток.

Другие B-лимфоциты мигрируют к периферии, делятся и дифференцируются в долгоживущие плазматические клетки и В-памяти - происходит переключение изотипа с IgM на IgG и нарастание аффинитета.

Участие антител в реализации иммунной защиты может осуществляться как путем прямого действия на антигены, так и опосредованно, путем привлечения дополнительных эффекторных механизмов.

Лучше всего изучены 2 механизма прямой защитной функции антител:

1.Нейтрализация токсинов.

2. Поверхностная блокада патогенов.

Защитная активность антител опосредована:

1. Связыванием с комплексом антиген+антитело комплемента, что приводит к активации комплемента и проявляется литическим действием комплемента.

2.Привлечением эффекторных клеток, прежде всего фагоцитов.

Антитела, связывающиеся с молекулами поверхности патогенов, являются опсонинами, и тем самым облегчают фагоцитоз.

Класс рецепторов на поверхности плазматических клеток - прообраз антител, которые они будут синтезировать. Большинство В-лимфоцитов покидают органы, попадают в ККМ и слизистые оболочки, преимущественно кишечника, где сохраняются десятки лет. При вторичном иммунном ответе происходит дополнительный, существенный рост аффинитета.

48. Механизмы супрессии иммунного ответа. Иммунологическая толерантность

1. Прекращение вовлечения в реакцию новых клеток в связи с устранением АГ.

2. Апоптоз дифференцированных лимфоцитов, отработавших свою программу.

3. Подавление активности клеток за счет синтеза иммуносупрессорных цитокинов.

4. Ингибирование цитокинами дифференцировки Th0 в Th1 и Th2.

5. Ингибирование иммунной реакции избытком АТ (механизм отрицательной обратной связи).

6. «Аутокиллеры» (NKT-лимфоциты) индуцируют апоптоз активированных Т-лимфоцитов

Иммунологическая толерантность - отсутствие ответа при наличии антигена.

Классификация:

1. Врожденная - отсутствие реакции иммунной системы на свои собственные АГ.

2. Приобретенная - можно ее создать, путем введения в организм, подавляющих иммунитет (толерогены, иммунодепрессанты), или введением АГ в эмбриональном периоде или в первые дни после рождения, а также действием облучения

Механизмы:

1. Делеция клона лимфоцитов, связавших АГ рецепторами - вместо активации идёт апоптоз.

2. Анергия клона - отсутствие полномерной активации лимфоцитов, связавших АГ. Например, из-за отсутствия костимулирующих молекул

Приобретенная толерантность:

Активная - создается путем введения в организм толерогена.

Пассивная - создается путем введения иммунодепрессантов.

Иммунологическая толерантность отличается специфичностью.

По степени распространенности:

1.Поливалентная - возникает одновременно на все антигенные детерминанты, входящие в состав конкретного АГ.

2.Расщепленная/моновалентная - избирательная невосприимчивость отдельных антигенных детерминант

49. Цитокины. Их классификация, значение в развитии иммунного ответа

Цитокины - гормоноподобные белковые или пептидные факторы, опосредующие межклеточное и межсистемное взаимодействие, обеспечивающие согласованность действия иммунной, эндокринной и нервной систем в норме и при патологии.

Т.о. цитокины - это «язык» межклеточного общения.

Различают:

Интерфероны;

Интерлейкины (ИЛ1-ИЛ18);

Хемокины;

ФНО (фактор некроза опухоли);

ФТР (трансформирующие ростовые факторы);

CSF (колониестимулирующий фактор)

Наиболее активные продуценты цитокинов - моноциты/макрофаги и Т-лимфоциты (CD4).

Свойства цитокинов:

1.Плейотропизм;

2.Полифункциональность;

3.Взаимосвязь и взаимодействие в системе цитокинов (понятие «цитокиновая сеть»);

4. Близкодействие.

Классификация цитокинов по биологической активности:

1.Цитокины - регуляторы воспалительных реакций:

-провоспалительные цитокины (ФНОб, ИЛ-1, ИЛ-6, ИЛ-17, ИЛ-18).

-противовоспалительные цитокины (ТРФв, ИЛ-10, ИЛ-4)

2. Цитокины - регуляторы клеточного иммунного ответа (ИЛ-1, ИЛ-2, ИЛ-12, ИЛ-10, ИФНг, ТРФв).

3. Цитокины - регуляторы гуморального иммунного ответа (ИЛ-4, ИЛ-5, ИЛ-6, ИЛ- 10, ИЛ13, ИФНг, ТРФв).

Белки острой фазы воспаления (реактанты воспаления) секретируются гепатоцитами. Их продукция при воспалении резко изменяется:

1. Положительные реактанты (усиливается).

2. Отрицательные реактанты (снижается).

50. Понятие иммунопрофилактики. Иммунобиологические препараты, используемые для иммунопрофилактики

Иммунопрофилактика -- это использование иммунологических закономерностей для создания искусственного приобретенного иммунитета (активного или пассивного).

Для иммунопрофилактики можно использовать антигенные препараты (вакцины, анатоксины), при введении которых формируется искусственный активный иммунитет, или антительные препараты (иммунные сыворотки, иммуноглобулины, плазма), с помощью которых создается искусственный пассивный иммунитет.

Для целей иммунопрофилактики можно также использовать человеческий нормальный иммуноглобулин. Его получают из донорской, плацентарной или абортивной крови. Он содержит антитела против возбудителей многих инфекционных заболеваний, образовавшихся как результат бытовой иммунизации, перенесенных заболеваний или вакцинаций. Он используется, например, для профилактики кори, коклюша, скарлатины, менингококковых инфекций, полиомиелита.

Кроме указанных препаратов, в практике специфической профилактики инфекционных болезней весьма ограниченно используются антительные препараты - иммунные сыворотки, получаемые от иммунизированных животных или переболевших людей, или специально иммунизированных доноров. Использование препаратов, полученных от иммунизированных людей, более эффективно.

Совершенствование процесса получения лечебных сывороток привело к созданию более концентрированных высокоочищенных от балластных белков препаратов - иммуноглобулинов (гамма-глобулинов). В медицинской практике используются противочумный, противосибиреязвенный, противококлюшный, противостафилококковый, противостолбнячный, антирабический (против бешенства), противогриппозный, противокоревой и др. иммуноглобулины(гамма-глобулины).

Антимикробные и антитоксические сыворотки, человеческий нормальный иммуноглобулин могут быть использованы при экстренной иммунопрофилактике для введения контактным лицам, т.е. бывшим в контакте с больными, например, дифтерией, и которым необходимо быстро создать пассивный иммунитет. Продолжительность защитного действия сывороток находится в пределах 8 - 20 дней.

Вакцины -- это препараты, которые используются для создания искусственного активного приобретенного иммунитета.

Вакцины готовят из специально отобранных штаммов, обладающих полноценными иммуногенными свойствами, т.е. обеспечивающих развитие выраженного иммунного ответа. Такие штаммы называются вакцинными. Большинство из них получено путем селекции спонтанных или индуцированных мутантов с максимально выраженными иммуногенными свойствами из обычных популяций бактерий, вирусов или риккетсий.

Требования к вакцинам:

1. Высокая иммуногенность (обеспечивать надежную противоинфекционную защиту).

Для повышения иммуногенности к вакцинам добавляют различного рода адъюванты (алюмо-калиевые квасцы, гидроксид или фосфат алюминия, масляную эмульсию), создающие депо антигенов или стимулирующие фагоцитоз и таким образом повышающие чужеродность антигена для реципиента.

2. Реактивность (не давать выраженных побочных реакций), безвредностью для макроорганизма.

3. Минимальным сенсибилизирующим действием.

Для специфической профилактики инфекций, возбудители которых продуцируют экзотоксин, применяют анатоксины.

Анатоксин - это экзотоксин, лишенный токсических свойств, но сохранивший антигенные. Поэтому при введении анатоксинов формируется антитоксический иммунитет, т.к. они индуцируют синтез антитоксических антител - антитоксинов.

Широко применяются дифтерийный (АД), столбнячный (АС), стафилококковый анатоксины, холероген-анатоксин.

Существуют моно- и поливакцины - приготовленные соответственно из одного или нескольких возбудителей.

Вакцины, содержащие антигены бактерий и анатоксины, называются ассоциированными. Это вакцина АКДС (адсорбированная коклюшно- дифтерийно-столбнячнаявакцина), в которой коклюшный компонент представлен убитой коклюшной вакциной, а дифтерийный и столбнячный - соответствующими анатоксинами, вакцина TABTe, содержащая О-антигены брюшнотифозных, паратифозных А и В бактерий, и столбнячный анатоксин, брюшнотифозная химическая вакцина с секстаанатоксином (смесь анатоксинов клостридий ботулизма типов А, В, Е, клостридий столбняка, клостридий перфрингенс типа А и эдематиенс - два последних микроорганизма - наиболее частые возбудители газовой гангрены), и др..

В то же время АДС (дифтерийно-столбнячный анатоксин), часто используемый вместо АКДС при вакцинации детей, является просто комбинированным препаратом, а не ассоциированной вакциной, т.к. содержит только анатоксины.

51. Вакцины. Классификация вакцин. Применение вакцин

Вакцины - это препараты, которые используются для создания искусственного активного приобретенного иммунитета.

Вакцины готовят из специально отобранных штаммов, обладающих полноценными иммуногенными свойствами, т.е. обеспечивающих развитие выраженного иммунного ответа. Такие штаммы называются вакцинными. Большинство из них получено путем селекции спонтанных или индуцированных мутантов с максимально выраженными иммуногенными свойствами из обычных популяций бактерий, вирусов или риккетсий.

Требования к вакцинам:

Вакцины должны обладать:

· Высокой иммуногенностью - (обеспечивать надежную противоинфекционную защиту). Для повышения иммуногенности к вакцинам добавляют различного рода адъюванты (алюмо-калиевые квасцы, гидроксид или фосфат алюминия, масляную эмульсию), создающие депо антигенов или стимулирующие фагоцитоз и таким образом повышающие чужеродность антигена для реципиента.

· Реактивностью (не давать выраженных побочных реакций), безвредностью для макроорганизма.

· Минимальным сенсибилизирующим действием.

Классификация

1. По назначению вакцины делятся на:

- профилактические;

- лечебные.

2. По характеру микроорганизмов, из которых они созданы:

- бактериальные;

- вирусные;

- риккетсиозные.

3. По способу приготовления различают вакцины:

Живые (содержат авирулентные штаммы микроорганизмов - возбудителей) - по существу воспроизводят в организме человека легко протекающую инфекцию (но не инфекционную болезнь), в ходе которой формируются те же механизмы защиты, что и при развитии постинфекционного иммунитета. Они создают достаточно длительный и напряженный иммунитет.

Живые вакцины применяют для профилактики: туберкулеза (BCG), особо опасных инфекций (чумы, сибирской язвы, туляремии, бруцеллеза) и гриппа, кори, бешенства(антирабическая), оспы, полиомиелита (Сейбина- Смородинцева-Чумакова),паротита, желтой лихорадки, коревой краснухи.

Между вакцинациями живых вакцин рекомендован интервал не менее, чем в 1 месяц. Согласно теоретическим положениям в противном случае возможны тяжелые побочные реакции, а иммунный ответ может быть пониженным.

- Убитые (содержат убитые культуры возбудителей) - их готовят из микроорганизмов, инактивированных прогреванием (гретые), УФ-лучами, химическими веществами (формалином - формоловые, феноломкарболовые, спиртом и др.) в условиях, исключающих денатурацию антигенов. Иммуногенность убитых вакцин ниже, чем у живых, и иммунитет, вызываемый ими, сравнительно кратковременный и менее напряженный.

Убитые вакцины применяют для профилактики:коклюша, лептоспироза, брюшного тифа, паратифа А и В, холеры, клещевого энцефалита, полиомиелита (Солка), гепатита А (Havrix 1440).

Убитые вакцины (дизентерийная, гонококковая, бруцеллезная) используются и для иммунотерапии в качестве лечебных вакцин.

- Химические (содержат только отдельные химические компоненты возбудителей, обладающие иммуногенностью)- они менее реактогенны и могут использоваться даже у детей дошкольного возраста.

Разработаны брюшнотифозная, сыпнотифозная, холерная, менингококковая, пневмококковая, гриппозная химические вакцины.

- Искусственные - от химических они отличаются тем, что помимо антигенного компонента (обычно выделенного и очищенного или искусственно синтезированного антигена возбудителя) содержат вещества (полиионы) стимулирующие иммунный ответ.

- Генноинженерные - содержат векторные штаммы непатогенных бактерий/вирусов, в которые методами генной инженерии введены гены, ответственные за синтез протективных антигенов тех или иных возбудителей.

Примерами генноинженерных вакцин могут служить вакцины против гепатита В - Энджерикс В (фирма СмитКляйнБичем, США) и Рекомбивакс HB (Merck Sharp).

- Антиидиотипические -используя для иммунизации животных определенные идиотипы антител человека, получают анти-антитела, чей активный центр по строению сходен с антигенной детерминантой соответствующих возбудителей.

- В Институте иммунологии МЗ РФ были разработаны вакцины нового поколения. Они представляют собой препараты, состоящие из микробных антигенов исинтетических полиионов (полиакриловая кислота, поливинилпирролидон и др.) - мощных стимуляторов иммуногенеза.

Первая такая вакцина - “Гриппол” - внедрена в практику.

Для специфической профилактики инфекций, возбудители которых продуцируют экзотоксин, применяют анатоксины.

Анатоксин - это экзотоксин, лишенный токсических свойств, но сохранивший антигенные. Поэтому при введении анатоксинов формируется антитоксический иммунитет, т.к. они индуцируют синтез антитоксических антител - антитоксинов.

Широко применяютсядифтерийный (АД), столбнячный (АС), стафилококковый анатоксины, холероген-анатоксин.

- Вакцины, содержащие антигены бактерий и анатоксины, называются ассоциированными:

· Вакцина АКДС (адсорбированная коклюшно-дифтерийно-столбнячная вакцина), в которой коклюшный компонент представлен убитой коклюшной вакциной, а дифтерийный и столбнячный - соответствующими анатоксинами.

· Вакцина TABTe, содержащая О-антигены брюшнотифозных, паратифозных А и В бактерий, и столбнячный анатоксин.

· Брюшнотифозная химическая вакцина с секстаанатоксином (смесь анатоксинов клостридий ботулизма типов А, В, Е, клостридий столбняка, клостридий перфрингенс типа А и эдематиен).

В то же время АДС (дифтерийно-столбнячный анатоксин), часто используемый вместо АКДС при вакцинации детей, является просто комбинированным препаратом, а не ассоциированной вакциной, т.к. содержит только анатоксины.

Применение вакцин.

Вакцины используются для проведения плановой (обязательной) иммунизации по эпидемическим показаниям при возникновении опасности заражения среди отдельных ограниченных групп населения:

1) в определенных районах (вакцина против клещевого энцефалита, туляремии, холерная вакцина, столбнячный анатоксин);

2) при профессиональном контакте с возбудителем, например, военные (вакцина TABTe, брюшнотифозная вакцина с секстаанатоксином), медперсонал (дифтерийный анатоксин, вакцина против гепатитов А и В).

К препаратам, используемым в России для обязательной плановой вакцинации детского населения, относятся: туберкулезная вакцина БЦЖ (BCG), вакцина АКДС, живая полиомиелитная вакцина, коревая вакцина, паротитная вакцина, а с 1996 г. - вакцина Энджерикс В (гепатит В).

Для создания более выраженного иммунного ответа, т.е. более напряженного иммунитета, для некоторых вакцин, входящих в прививочный календарь, предусматривается ревакцинация через определенные интервалы 30 - 45 дней.

Более того, в связи с тем, что искусственный иммунитет после вакцинации сохраняется сравнительно недолго, прививки против одного и того же заболевания проводят неоднократно в течение жизни человека.

52. Реакции иммунитета с меченными компонентами. РИФ, ИФА, ИХА

Реакция иммунитета - это реакция между антигеном и антителом. Они характеризуются высокой чувствительностью (современные методики позволяют обнаруживать единичные молекулы антигена или антитела) и специфичностью, т.е. в реакцию вступают только соответствующие друг другу антиген и антитело.

Для индикации АГ широко используются реакции иммунитета с меченными компонентами (чаще иммунные сыворотки). Это экспресс-методы индикации очень чувствительны и высокоспецифичные. К ним относятся реакция иммунофлюоресценции - РИФ, иммуноферментный анализ - ИФА, радиоиммунный анализ - РИА, иммунохроматографический анализ - ИХА.

В качестве меток используются:

1) Флюорохромы - вещества, способные флюоресцировать при облучении ультрафиолетом (поглощают энергию света определенной длины волны и излучают свет большей длины волны): флюоресцеина изотиоцианат (зеленый цвет), фикоэритрин (оранжевый), родамин (красный); используются в РИФ.

2) Ферменты: пероксидаза хрена, галактозидаза, щелочная фосфатаза; вызывают расщепление субстрата с образованием окрашенных продуктов при взаимодействии с хромогеном; используются для ИФА.

3) Радиоактивные метки - используются в РИА.

1. Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) - основана на том, что антитела иммунной сыворотки метят флюорохромами. Образовавшийся комплекс антиген-антитело легко обнаружить по наличию этой светящейся метки при люминесцентной микроскопии. Это так называемая реакция прямой иммунофлюоресценции.

Недостатком прямого метода является необходимость приготовления широкого наборафлюоресцирующихантисывороток против каждого изучаемого антигена.

· Реакция иммунофлюоресценции может быть поставлена и в непрямомварианте реакции, когда свечение комплексу антиген-антитело придает меченная флюорохромом антиглобулиновая сыворотка, вступающая во взаимодействие с антителами иммунной сыворотки.

Достоинством непрямой РИФ является использование лишь одной светящейся сыворотки (антивидовой или антикомплементарной) при обнаружении различных антигенов. Это значительно удешевляет реакцию.

2. Твердофазный иммуноферментный анализ (ИФА) - в этой реакции ее компонент метят не радиоактивной или флюоресцирующей меткой, а ферментом (пероксидаза хрена), который при положительном результате реакции включается в комплекс антиген-антитело. При добавлении к такому комплексу соответствующего субстрата происходит реакция фермент-субстрат, что легко регистрируется по изменению окраски. Интенсивность окрашивания пропорциональна активности фермента, а количество фермента, присоединенного к твердой фазе, соответствует количеству АГ или АТ.

Результаты реакции учитывают визуально. Для проведения ИФА необходимы полистироловые планшеты, имеющие лунки с плоским дном и автоматические пипетки.

3. Иммунохроматографический анализ (ИХА) -- это иммунохимический метод анализа, основанный на принципе тонкослойной хроматографии и включающий реакцию между антигеном и соответствующем ему антителом в биологических материалах(моча, цельная кровь, сыворотка или плазма крови, слюна, кал и т. д.).

Данный вид анализа осуществляется при помощи индикаторных полосок, палочек, панелей или тест-кассет, которые обеспечивают быстроту проведения тестирования.

Принцип действия состоит в том, что при погружении тест полоски в биологическую жидкость (или другой жидкий образец), она начинает мигрировать вдоль полоски по принципу тонкослойной хроматографии. Вместе с ней движутся нанесенные на нижнюю часть тест-полоски меченые специфические антитела, которые аффинно связываются с анализируемым веществом.

53. Понятие иммунотерапии. Иммунобиологические препараты, применяемые для иммунотерапии

Иммунотерапия - это использование иммунологических закономерностей для лечения больных. В основе данного метода лежит воздействие на систему иммунитета: восстановление, регулирование, временное замещение или подавление ее функций.

Для профилактики и лечения заболеваний большое значение имеет создание профилактических, диагностических и лечебных препаратов, объединяемых в группу иммунобиологических препаратов (ИБП).

По современной классификации А.А. Воробьева иммунологические препараты включают:

· антигенные иммунобиологические препараты;

· иммунобиологические препараты на основеантител;

· иммуномодуляторы;

· адаптогены - сложные химические вещества растительного происхождения, обладающие широким спектром биологической активности, действующие на иммуннуюсистему;

· диагностические препараты и системы для выявления антигенов и антител, ферментов, продуктов метаболизма, биологически активных веществ, чужеродных клеток для постановки кожных проб при аллергиях и иммунопатологических состояниях.

Для иммунотерапии используются: антительные (иммунные сыворотки, гамма-глобулины, плазма) и значительно реже - антигенные (лечебные вакцины, аутовакцины или анатоксины) препараты.

Для лечения заболеваний, возбудители которых продуцируют экзотоксин, острых тяжелых генерализованных форм, некоторых других бактериальных инфекций, используются препараты, содержащие готовые антитела, т.е. экстренно создающие пассивный искусственный иммунитет. Для этих целей используются антитоксические и антибактериальные сыворотки, иммуноглобулины и плазма.

ь Антитоксические сыворотки содержат антитела против экзотоксинов. Их получают путем гипериммунизации животных (лошадей) анатоксином. Активность таких сывороток измеряется в АЕ (антитоксических единицах) или МЕ (международных единицах) - это минимальное количество сыворотки, способное нейтрализовать определенное количество (обычно 100) DLM токсина для животных определенного вида и определенной массы.

Антитоксические сыворотки - противостолбнячная, противоботулиническая, противогангренозная, противодифтерийная. Применение антитоксических сывороток является обязательным при лечении соответствующих инфекций.

ь Антимикробные сыворотки содержат антитела против клеточных антигенов возбудителя. Их получают иммунизацией животных клетками соответствующих возбудителей, и дозируют в мл.

Антимикробные сыворотки могут применяться при лечении: сибирской язвы, чумы, стрептококковых, стафилококковой, синегнойной инфекций. Их назначение определяется тяжестью течения заболевания и не является обязательным.

ь Иммунотерапия антигенными препаратами имеет целью стимулировать собственные механизмы специфической защиты.

Она применяется для лечения больных с хроническими, длительно, вяло текущими формами инфекций.

Обычно используютубитые лечебные вакцины: гоновакцина, бруцеллезная лечебная, стафилококковая вакцины, вакцина СолкоУровак (для лечения хронических инфекций мочевых путей - содержит 6 штаммов кишечной палочки, протеев, клебсиелл и фекальных стрептококков).

ь Особую отдельную группу лечебных вакцин представляют аутовакцины- это вакцины, приготовленные из убитых прогреваниемпри 70-80^оС в течение 1 часа штаммов возбудителей, выделенных от данного больного.

Аутовакцины имеют определенные преимущества, т.к. продуцируют иммунный ответ на антигены конкретного возбудителя.

При проведении иммунотерапии необходимо помнить, что:

· противовирусные антительные препараты не используются, т.к. антитела не действуют на внутриклеточные формы вирусов;

· лечение путем введения антитоксических сывороток должно быть начато, как можно раньше, не дожидаясь результатов микробиологического диагноза, т.к. серотерапия ими эффективна только до адсорбции (фиксации) токсина клетками организма;

· антитоксические иммунные сыворотки часто содержат лошадиный белок и введение таких сывороток пациентам допустимо лишь в случае отсутствия в течение 20-30 мин выраженной кожной реакции на лошадиную сыворотку (в/к, в разведении 1:100, в объеме 0,1 мл);

· в некоторых случаях возможно одновременное введение и антигенных, и антительных препаратов: например, при первичной хирургической обработке ран столбнячный анатоксин вводится вместе с противостолбнячным иммуноглобулином, а при множественных укусах животными людей в область головы и шеи, параллельно с антирабической вакциной вводится и специфический антирабический иммуноглобулин;

· использование иммуноглобулинов, полученных от иммунизированных людей, при иммунотерапии гнойно-воспалительных заболеваний стафилококковой этиологии и столбняка более эффективно, чем использование соответствующих иммунных антитоксических сывороток.

54. Практическое использование явлений иммунитета

Практическое использование учения об иммунитете идет в трех главных направлениях: иммунодиагностики, иммунопрофилактики и иммунотерапии.

Иммунодиагностика - это использование иммунологических закономерностей для диагностики инфекционных и неинфекционных болезней.

Она основана на использовании реакций иммунитета.

Иммунопрофилактика - это использование иммунологических закономерностей для создания искусственного приобретенного иммунитета (активного или пассивного).

Иммунопрофилактика бывает:

· специфическая (направленная против конкретного возбудителя)

· неспецифическая (активизация иммунной системы организма в целом)

· активная (выработка защитных антител самим организмом в ответ на введение вакцины)

· пассивная (введение в организм готовых антител)

Для иммунопрофилактики можно использовать антигенные препараты (вакцины, анатоксины), при введении которых формируется искусственный активный иммунитет, или антительные препараты (иммунные сыворотки, иммуноглобулины, плазма), с помощью которых создается искусственный пассивный иммунитет.

Иммунотерапия - это использование иммунологических закономерностей для лечения больных.

Это раздел практической иммунологии, задача которого -- лечение инфекционных больных иммунологическими препаратами: вакцинами, сыворотками иммунными, гамма-глобулинами и др.

С этой целью используются антительные (иммунные сыворотки, гамма-глобулины, плазма) препараты. Сыворотки и гамма-глобулины применяют при острых формах заболевания (дифтерия, столбняк, ботулизм, цереброспинальный менингит и др.).

Значительно реже используются антигенные (лечебные вакцины, аутовакцины или анатоксины) препараты. Вакцины вводят при лечении затяжных, вяло текущих и хронических форм инфекций (дизентерия, бруцеллёз, туляремия и др.). И сочетают с лечением антибиотиками и химиотерапией.

55. Реакции иммунитета. Механизмы взаимодействия АГ и АТ. Простые и сложные реакции иммунитета.

Реакции иммунитета - это реакции между антигеном и антителом. Они характеризуются высокой чувствительностью (современные методики позволяют обнаруживать единичные молекулы антигена или антитела) и специфичностью, т.е. в реакцию вступают только соответствующие друг другу антиген и антитело.

Реакцию иммунитета можно описать в виде простейшего равенства:

АНТИГЕН + АНТИТЕЛО = РЕЗУЛЬТАТ.

Исходя из принципа специфичности, результат реакции будет положительным, если антиген и антитело, участвующие в ней, соответствуют друг другу. Если же они не соответствуют, то результат будет отрицательным. Но каким бы он ни был (положительный или отрицательный), он всегда известен, т.к. регистрируется визуально или с помощью тех или иных приборных методов. Поэтому появляется возможность по известному результату и одному из компонентов реакции (антиген или антитело) определять второй, неизвестный компонент (соответственно, антитело или антиген).

Таким образом все реакции иммунитета делятся на 2 большие группы.

Первая - это реакции, в которых по результату и известному антигену определяют природу антител. Эти известные антигены представляют собой взвеси микроорганизмов (бактерий, грибов, вирусов) или их антигены, адсорбированные на тех или иных (эритроциты, частицы латекса) носителях. Такие препараты называются диагностикумы(соответственно, бактериальные, эритроцитарные, латексные).

Вторая группа - это реакции, в которых по результату и известному антителу определяют природу антигена. Известный компонент реакций - антитела содержатся в стандартных диагностических (агглютинирующих, преципитирующих и т.п.) иммунных сыворотках, которые получают на специализированных производствах путем иммунизации животных соответствующими антигенами. Антитела могут быть сорбированы на тех или иных (эритроциты, частицы латекса, клетки стафилококков) носителях. Такие диагностические препараты называют антительные эритроцитарные (латексные, КоА-) диагностикумы.

Эти два типа реакций можно представить в виде следующих равенств:

АГ + хАТ=результат или хАГ + АТ=результат.

С помощью реакций первого типа (определение антител) реализуется метод серодиагностики (серум-сыворотки).

Реакции второго типа (определение антигенов) составляют сущность метода иммуноиндикации.

Реакции иммунитета делят на простые (прямые, двухкомпонентные, осадочные) и сложные (непрямые, многокомпонентные). К первым относят реакции агглютинации и преципитации, ко вторым - РСК, РИФ, РИА и др.

Механизм взаимодействия АГ и АТ.

1. Любая реакция иммунитета начинается с взаимодействия антигена с антителом. Это так называемая иммунологическая фаза реакции. Она специфична, ноне видима. Она происходит в первые минуты реакции и сопровождается выделением тепла.

В ходе этой фазы образуется комплекс антиген-антитело. Его дальнейшая судьба определяется различными факторами. Это и природа антигена (растворимый, корпускулярный) и характер реакции (прямые, осадочные или многокомпонентные, непрямые) и ряд других условий.

2. При прямых осадочных реакциях комплексы антиген-антитело, образовавшиеся в первой фазе, укрупняются и выпадают в осадок. Это вторая, физико-химическая фаза таких реакций. Она неспецифична, но зато видима.

Для ее реализации необходим электролит. Оптимальным электролитом является физиологический раствор.

Простые и сложные реакции иммунитета.

К простым реакциям иммунитета относятся:

1. Реакция агглютинации - это склеивание и осаждение корпускулярного антигена (например, бактерий, эритроцитов, лейкоцитов и т.д.) под действием антител в присутствии электролита.

Существуют различные модификации постановки реакции агглютинации:

а) объемная агглютинация в пробирках (классическая);

б) агглютинации на предметном стекле.

Модификации реакции агглютинации имеют более высокую чувствительность и легче регистрируются.

Широкое распространение получили реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации (РНГА или РПГА), латекс-агглютинации, ко-агглютинации.

ь В РПГА один из компонентов (антиген, или антитело) адсорбирован на эритроцитах, которые при образовании комплекса антиген-антитело склеиваются и выпадают в осадок.

ь В латекс-агглютинации в качестве сорбента используют частицы латекса.

ь В ко-агглютинации -в качестве сорбента -клетки стафилококков.

Кроме вышеперечисленных необходимо упомянуть об еще одном варианте использования реакции агглютинации - определении антигенного строения возбудителей инфекционных заболеваний с целью определения (установления) их таксономического положения, т.е. их сероидентификация. Используемая для этой цели реакция применяется как заключительный этап бактериологического исследования и носит название реакция агглютинации по идентификации - это простая, прямая реакция иммунитета между известным антителом (агглютинирующей сывороткой) и неизвестным антигеном (чистой культурой исследуемых бактерий).

Они используются для определения родовой - с помощью поливалентной агглютинирующей сыворотки, групповой - с помощью групповых агглютинирующих сывороток или видовой - с помощью моновалентных видовых агглютинирующих сывороток принадлежности бактерий.

2. Реакция преципитации - это осаждение антигена (полисахариды, токсины, ферменты, глобулины) из раствора под действием антител в присутствии электролита.

Существует несколько методик для реализации этой реакции - преципитация в геле (агаре), кольцепреципитация, иммунофорез.

По своей сущности реакция преципитации аналогична реакции агглютинации. Основным различием между ними является то, что в реакции агглютинации участвует корпускулярный антиген, а в реакции преципитации - растворимыйантиген.

Реакция преципитации используется для определения токсигенности дифтерийных бактерий, концентрации иммуноглобулинов разных классов в сыворотке (реакция Манчини).

К сложным реакциям иммунитета относятся:

1. Реакция связывания комлемента (РСК) - сложная, многокомпонентная непрямая реакция иммунитета. В ней участвуют две системы: исследуемая, состоящая из антигена и антитела (один из них неизвестен), и индикаторная, состоящая из эритроцитов барана и гемолитической сыворотки, содержащей антитела к ним, а также комплемент.

Если в исследуемой системе антиген и антитело соответствуют друг другу, они образуют комплекс, и этот комплекс связывает комплемент. В этом случае в индикаторной системе изменений не произойдет и эритроциты осядут на дно пробирки.

Если же в исследуемой системе антиген и антитело не соответствуют друг другу, комплекс антиген-антитело не образуется, и комплемент остается свободным. В этом случае он обуславливает гемолиз эритроцитов индикаторной системы.

РСК не имеет ограничений по природе антигенов и широко используется как для серодиагностики бактериальных, вирусных и грибковых инфекций, так и для индикации их антигенов.

Для индикации антигенов широко используются реакции иммунитета с меченными компонентами (чаще иммунными сыворотками). Это экспресс-методы индикации. Они являются очень чувствительными и высокоспецифичными. К ним относятся: РИФ, РИА, ИФА, ИХА и т.д.

2. Радиоиммунный анализ (РИА) - основан на использовании меченных, например, радиоактивным йодом ¹²⁵I, ¹³¹I или радиоактивным водородом H², антител.

Образующийся комплекс антиген-антитело содержит радиоактивную метку и легко обнаруживается с помощью соответствующих приборов (радиометров). При этом можно измерить не только наличие радиоактивности, но и ее интенсивность.

РИФ, ИФА, ИХА смотреть № 52.

56. Серодиагностика. Реакции иммунитета, применяемые для серодиагностики

Серодиагностика - метод диагностики, с помощью которого в сыворотке обследуемого обнаруживают антитела и нарастание их титра.

Реакции иммунитета - взаимодействие антигена и антитела - характеризуются высокой чувствительностью и специфичностью, т.е. в реакцию вступают только соответствующие друг другу антиген и антитело.

Для реализации этого метода используют различные реакции иммунитета:

- Простые (агглютинация и ее разновидности)

- Сложные (РСК, ИФА и др.)

Подробнее о реакциях см. 52 и 55

Этот тип реакций можно представить в виде следующего равенства ? АГ + хАТ = результат.

Нарастание титра антител, т.е. их инфекционная природа, устанавливается при исследовании парных сывороток. Так называют сыворотки, взятые от одного больного в разные сроки болезни с интервалом 5-7 дней.

При исследовании сыворотки любого человека в ней можно обнаружить антитела различного происхождения - инфекционные, постинфекционные, нормальные, поствакцинальные. Концентрации трех последних различны, но на протяжении достаточно длительных промежутков времени титр их находится на одном и том же уровне или постепенно снижается.

При инфекционных заболеваниях в связи с размножением возбудителей нарастает антигенное раздражение. В ответ на это в сыворотке возрастает количество инфекционных, связанных с заболеванием, антител.

Таким образом, титр инфекционных антител нарастает в динамике заболевания, при этом абсолютно не важно, в каком количестве обнаруживаются специфические антитела при первом исследовании.

Серологический метод диагностики применяют с конца первой, начала второй недели заболевания.

Для осуществления серологических реакций, т.е. взаимодействия антител с антигеном, при серодиагностике для обнаружения искомого антитела к сыворотке прибавляют известный антиген - или микроорганизмы, вызвавшие их образование, или их компоненты, обладающие иммуногенностью. В качестве известного антигена для серодиагностики используются разнообразные антигенные диагностикумы. Они могут быть обычными диагностикумами, представляющими собой взвесь убитых микроорганизмов или их отдельных антигенов, или эритроцитарными диагностикумами - взвесью эритроцитов, на которых адсорбированы микроорганизмы или их антигены.

57. Иммуноиндикация. Реакции иммунитета, применяемые при иммуноиндикации

Иммуноиндикация ? метод диагностики, имеющий целью обнаружение в исследуемом материале (от больного или в объектах внешней среды) микробных (или иных) антигенов.

Метод реализуется постановкой реакций иммунитета второго (РПГА, иммунофлюоресценции), третьего (ИФА, РИА) поколений.

Этот тип реакций можно представить в виде следующего равенства - хАГ + АТ=результат.

Стандартным диагностическим препаратом, т.е. известным компонентом реакций, содержащим антитела, при реализации этого метода являются иммунные (полученные на специализированных производствах путем иммунизации животных соответствующим антигеном) сыворотки (агглютинирующие, преципитирующие и т.п.).

Известные антитела для этой группы реакций могут быть адсорбированы на тех или иных носителях (эритроциты, частицы латекса, клетки стафилококков). В этом случае такие стандартные диагностические препараты называются, соответственно, эритроцитарными (латексными, коагглютинирующими ? КоА) антительными диагностикумами.

Для целей иммуноиндикации широко применяются реакции иммунитета с мечеными компонентами. Это методы иммунолюминесцентного, радиоиммунного, иммуноферментного анализа и ряд других иммунологических методик.

Реакции иммунитета, в которых по известному результату и известному антителу определяют природу неизвестного антигена, составляют суть метода иммуноиндикации.

58. Иммуноидентификация бактерий и вирусов. Реакции иммунитета, применяемые для иммуноидентификации бактерий и вирусов

Иммуноидентификация - определение свойств антигена, выделенной в ходе бактериологического исследования, определения чистой культуры бактерий.

Реакция позволяет изучить особенности выделенной культуры микроорганизмов.

Обычно данная реакция - заключительный этап бак. исследования.

Особенности выделенной культуры микроорганизмов изучаются с помощью иммунных диагностических сывороток, т. е. сывороток крови гипериммунизированных животных, содержащих специфические антитела (серологическая идентификация микроорганизмов.)

При идентификации (серотипирования) чистой культуры возбудителя часто ставят ориентировочную пластинчатую реакцию агглютинации. На стекла вносят капли диагностических агглютинирующих сывороток, в которые вносят изучаемую чистую культуру возбудителя. Результат учитывается через несколько минут.

Если сыворотки неадсорбированные - после ориентировочной ставят развернутую реакцию агглютинации.

Принадлежность микроорганизма к данному виду или типу устанавливают лишь в том случае, если он агглютинируется соответствующей диагностической сывороткой не менее чем до Ѕ или ѕ ее титра.

Реакция агглютинации основана на специфическом взаимодействии антител (агглютининов) с целыми микробными или другими клетками. В результате такого взаимодействия образуются частицы-агломераты, выпадающие в осадок (агглютинат). В реакции агглютинации могут участвовать бактерии, простейшие, грибы, дрожжи, риккетсии, эритроциты и другие клетки, как живые, так и убитые. Протекает реакция в две фазы: первая -- специфическое соединение антигена и антитела, вторая -- кеспецифическая, т. е. образование видимого агглютината. Выпадение агглютината происходит в присутствии электролитов, например хлорида натрия. Находящиеся в агглютинате микроорганизмы остаются живыми, но теряют подвижность.

59. Интерфероны: виды, механизм действия

Интерфероны - это вещества белковой природы, обладающие общими защитными свойствами. Продуцируются они клетками организма в ответ на внедрение болезнетворных вирусов.

В зависимости от того, какими клетками синтезируется интерферон, выделяют три типа: б, в и г-интерфероны.

Альфа-интерферон вырабатывается лейкоцитами (лейкоцитарный); (фарм - альфаферон, виферон, альтевир)

Бета-интерферон синтезируется фибробластами (фибробластный) (фарм - авонекс, бетаферон, инвибета)

Гамма-интерферон -- он вырабатывается активированными Т-лимфоцитами, макрофагами, естественными киллерами (иммунный) (фарм - ингарон)

Выработка интерферона резко возрастает при инфицировании вирусами, а также при воздействии индукторов интерферона, например: РНК, ДНК, сложных полимеров. Такие индукторы интерферона получили название интерфероногенов

Механизм действия.

Интерферон связывается со специальными рецепторами клеток и оказывает влияние на процесс репродукции вируса внутри клетки на стадии синтеза белков.

Используют с профилактической целью при многих вирусных инфекциях, например гриппе, а также с лечебной целью при хронических вирусных инфекциях, таких как парентеральные гепатиты (В, С, D), герпес, рассеянный склероз и др. Интерферон дает положительные результаты при лечении злокачественных опухолей и заболеваний, связанных с иммунодефицитами.

Получение интерферона

а) путем инфицирования лейкоцитов или лимфоцитов крови человека безопасным вирусом, в результате чего инфицированные клетки синтезируют интерферон, который затем выделяют и конструируют из него препараты интерферона;

б) генно-инженерным способом -- путем выращивания в производственных условиях рекомбинантных штаммов бактерий, способных продуцировать интерферон. Обычно используют рекомбинантные штаммы псевдомонад, кишечной палочки со встроенными в их ДНК генами интерферона.

Интерферон, полученный генно-инженерным способом, носит название рекомбинантного. В нашей стране рекомбинантный интерферон получил официальное название «Реаферон».

60. Методы микробиологической диагностики инфекционных заболеваний, их характеристика

Основная задача микробиологической диагностики инфекционных заболеваний - установление их этиологической природы.

Эта задача решается:

- Выделением из исследуемого материала микроба-возбудителя

- Обнаружением в материале его АГ или нуклеотидных последовательностей

- Выявлением образующихся в ходе развития инфекционного заболевания иммунологических изменений или АТ, или сенсибилизированных Т-лимфоцитов.

Выделяют три группы методов обнаружения возбудителя в исследуемом материале:

1. Классическое Бактериологическое исследование.

Цель: выделение и идентификация возбудителя.

Алгоритм бактериологического исследования:

- Первичная микроскопия (необязательно)

- Первичный посев для выделения чистой культуры

- Накопление чистой культуры

- Изучения комплекса биологических свойств выделенной культуры и ее идентификация.

Недостатки:

- Это достаточно длительный процесс (минимум 3-4 дня)

- Не всегда удается выделить возбудителя ( характерно для вирусных инфекций)

В связи с этим в настоящее время все большее развитие получают методы диагностики без выделения чистой культуры - «nonculturemethods». Эти методы позволяют обнаружить возбудителя или какие-либо его компоненты непосредственно в клиническом материале.

Примеры:

- Иммуноиндикация ? метод диагностики, имеющий целью обнаружение в исследуемом материале (от больного или в объектах внешней среды) микробных (или иных) антигенов. Метод реализуется постановкой реакций иммунитета второго (РПГА, иммунофлюоресценции), третьего (ИФА, РИА) поколений.

Молекулярно - генетическими методами в исследуемом материале обнаруживают нуклеотидные последовательности ДНК возбудителя:

- Метод ДНК-гибридизации.

Основан на способности денатурированной одноцепочечной ДНК возбудителя достраивать гомологичную цепь в бесклеточной системе. В качестве материала для второй нити используют ДНК зонды - лабораторно приготовленные фрагменты ДНК, гомологичные фрагментам ДНК искомого возбудителя.

Зонд метят радиоактивным изотопом или ферментом. В последнем случае для регистрации включения ДНК - зонда в ДНК бактерий к пробе добавляют субстрат, соответствующий использованному ферменту.

Положительная реакция субстрат-фермент проявляется в изменении окраски субстрата и свидетельствует о соответствии ДНК-зонда ДНК возбудителя, находящегося в исследуемом материале.

- Полимеразная цепная реакция (ПЦР)

Представляет собой метод направленной амплификации ДНК, позволяющий найти в исследуемом материале небольшие участки генетической информации любого организма и многократно умножить их.

Для реализации ПЦР создают набор праймеров - фрагментов ДНК - маркеров данного возбудителя. При добавлении такого праймера к пробе исследуемого материала, содержащей денатурированную одноцепочечную ДНК, происходит их соединение с комплементарным участком ДНК.

Образовавшийся двунитевой стартовый участок воспроизводится с помощью фермента Taq-полимеразы, входящей в набор для ПЦР. Вновь синтезированные фрагменты ДНК служат матрицей для синтеза новых нитей в следующем цикле амплификации и т.д. Это и ест цепная реакция.

В течение нескольких часов происходит 30-40 циклов амплификации и синтезируется кол-во ДНК, достаточное для визуального учета.

Преимущества:

- Высокая специфичность и чувствительность. Позволяет обнаруживать в исследуемом материале единичные клетки возбудителя.

2. Серодиагностика

Серодиагностика - это метод диагностики, целью которого является обнаружение в сыворотке обследуемого антител и нарастания их титра (количества).