Отмечено изменение содержания МПО и КБ в гранулоцитах у животных при бариевой интоксикации (таблица 94). Содержание МПО увеличилось на 18 и 22 сутки, а КБ снизилось на 18 сутки. Цп не изменял цитохимические показатели лейкоцитов. Увеличение количества МПО опосредованно могло способствовать снижению ХЛ - ответа лейкоцитов, поскольку субстратом для нее являются первичные кислородные радикалы (О2? ), ответственные за интенсивность ХЛ - ответа.

Развитие лейкоцитоза при бариевой интоксикации сопровождалось усилением фагоцитарной функции лейкоцитов: активности и интенсивности фагоцитоза. Введение Цп привело к росту интенсивности фагоцитоза (таблица 95). Как и в предыдущих исследованиях, это может быть связано с влиянием Цп на адгезивную способность лейкоцитов. Как известно, интенсивность фагоцитоза косвенно отражает способность лейкоцитов к адгезии. Активность фагоцитоза под влиянием Цп не подверглась изменению.

Результаты предыдущих исследований по изучению роли Цп в ходе воспалительного процесса позволяют сделать следующее заключение по возможным механизмам влияния Цп на количественный состав и функциональную активность лейкоцитов при «невоспалительных» лейкоцитозах.

За счет способности увеличивать адгезию лейкоцитов Цп изменяет количественный состав лейкоцитов при лейкоцитозе в ответ на экзогенный пироген. Сначала это сопровождается снижением, а затем увеличением циркулирующих нейтрофилов. Мы полагаем, что в первом случае это связано с ростом адгезии лейкоцитов к эндотелию сосудов на периферии, а во втором - к эндотелию синусоидов костного мозга.

В обоих экспериментах отмечено усиление интенсивности фагоцитоза, что также обусловлено увеличением адгезивности лейкоцитов под влиянием Цп.

Раннее нами показано, что Цп обладает эффектом, подобным лейкопоэтическому. Это объясняет увеличение количества гранулоцитов в периферической крови преимущественно за счет палочкоядерных форм нейтрофилов при лейкоцитозе, вызванным бариевой интоксикацией.

Изменения ХЛ лейкоцитов в большей степени носили вторичный характер, зависимый от количества циркулирующих в периферической крови клеток - продуцентов АФК.

Таблица 92

Влияние Цп на хемилюминесценцию лейкоцитов периферической крови при лейкоцитозе на фоне бариевой интоксикации (М+m; )

Группа животных / Показатели хемилюминесценции	Группа 1 Интактные n=8	Группа 2 (барий + физ. р-р) n=7	Группа 3 (барий + Цп) n=5
		18 сутки	22 сутки	18 сутки	22 сутки
Спонтанное свечение	Светосумма, у.е. х мин	8,17+2,33; 8,42	5,11+0,49 1,21	7,25+3,09; 7,58	6,48+1,58; 4,19	9,35+2,51; 6,15
	Максимальная светимость, у.е.	1,32+0,39; 1,42	0,88+0,11; 0,28	1,21+0,50; 1,24	1,01+0,23; 0,62	1,43+0,35; 0,87
Индуцированное свечение	Светосумма, у.е. х мин	34,82+4,87; 17,57	18,65+4,08; 9,99 *	25,09+5,68; 13,92	37,81+6,56; 17,36**	49,84+9,18; 22,48
	Максимальная светимость, у.е.	4,32+0,60; 2,17	2,41+0,53; 1,31*	3,08+0,68; 1,68	4,49+0,81; 2,13	5,79+1,07; 2,61

Примечание. * - достоверность различий с интактными животными (р1-2, р1-3), ** - между опытной и контрольной группами ( р2-3) по t- критерию.

Таблица 93

Влияние Цп на хемилюминесценцию лейкоцитов периферической крови при лейкоцитозе на фоне бариевой интоксикации (М+m; )

Группа животных / Показатели хемилюминесценции / 105 гранулоцитов	Группа 1 Интактные n=8	Группа 2 (барий + физ. р-р) n=7	Группа 3 (барий + Цп) n=5
		18 сутки	22 сутки	18 сутки	22 сутки
Спонтанное свечение	Светосумма, у.е. х мин	4,59+1,19; 4,29	1,01+0,09; 0,24*	1,04+0,28; 0,68 *	1,16+0,41; 1,08*	1,13+0,32; 0,78*
	Максимальная светимость, у.е.	0,73+0,19; 0,71	0,17+0,02; 0,04*	0,18+0,05; 0,11*	0,18+0,06; 0,17*	0,17+0,05; 0,11*
Индуцированное свечение	Светосумма, у.е. х мин	19,15+2,06; 7,44	3,74+0,80; 1,97*	4,32+1,02; 2,49 *	6,64+1,83; 4,84*	6,25+1,39; 3,42*
	Максимальная светимость, у.е.	2,37+0,27; 0,97	0,52+0,13; 0,32*	0,53+0,12; 0,30*	0,79+0,22; 0,58*	0,72+0,16; 0,39*

Примечание. * - достоверность различий с интактными животными (р1-2, р1-3) по t- критерию.

Таблица 94

Влияние Цп на цитохимические показатели лейкоцитов периферической крови при лейкоцитозе на фоне бариевой интоксикации (М+m; )

Группа животных / Показатели, СЦК, у.е.	Группа 1 Интактные n=37	Группа 2 (барий + физ. р-р)n=7	Группа 3 (барий + Цп) n=5
		18 сутки	22 сутки	18 сутки	22 сутки
Миелопероксидаза	0,46+0,03; 0,18	0,70+0,08; 0,19 р1-2<0,05	0,66+0,07; 0,17 р1-2<0,05	0,54+0,06; 0,14	0,58+0,06; 0,15
Катионные белки	0,87+0,06; 0,29	0,59+0,06; 0,14 р1-2<0,01	0,83+0,04; 0,10	0,55+0,04; 0,11 р1-2<0,001	0,85+0,04; 0,09

Примечание. р - достоверность различий между группами по t-критерию.

Таблица 95

Влияние Цп на показатели фагоцитоза лейкоцитов периферической крови при лейкоцитозе на фоне бариевой интоксикации (М+m; )

Группа животных / Показатели фагоцитоза	Группа 1 Интактные n=37	Группа 2 (барий + физ. р-р) n=7	Группа 3 (барий + Цп) n=5
		18 сутки	22 сутки	18 сутки	22 сутки
Активность, % клеток	25,46+0,68; 4,12	35,67+1,02; 4,24 р1-2<0,001	34,50+1,89; 4,64 р1-2<0,01	33,17+1,45; 3,54 р1-3<0,01	33,50+0,76; 1,87 р1-3<0,001
Интенсивность, у.е. / клетку	3,78+0,16; 0,95	4,58+0,26; 0,64 р1-2<0,05	5,11+0,45; 1,09 р1-2<0,05	5,73+0,31; 0,77 р1<0,001 р2-3<0,05	6,69+0,32; 0,77 р1-3<0,001 р2-3<0,05

Примечание. р - достоверность различий между группами по t-критерию.

Глава 5. Патофизиологическая роль церулоплазмина при цитостатической лейкопении

5.1 Влияние церулоплазмина на количественный состав и функциональную активность лейкоцитов при цитостатической лейкопении

Предыдущие исследования показали, что Цп способен изменять количество и функцию лейкоцитов при лейкоцитозах различного генеза. Задача следующего этапа исследования состояла в изучении влияния Цп на количество и функцию лейкоцитов при лейкопении.

В качестве модели лейкопении использовали цитостатическую лейкопению, которую вызывали внутрибрюшинным введением циклофосфана в дозе 250 мг/кг. Циклофосфан относится к обширному классу противоопухолевых препаратов, применяемых в онкологической практике - соединений алкилирующего типа действия. Одним из основных проявлений токсичности препаратов этой группы является развитие гипо - и апластических состояний кроветворения (3, 6, 10, 39, 192, 318).

Экспериментальные животные были поделены на 3 группы: 1) интактные (здоровые) животные, которым не вводили никакие препараты; 2) контрольная группа животных, у которых вызывали цитостатическую лейкопению; 3)опытная группа животных, которой на фоне цитостатической лейкопении в первые сутки вводили Цп в дозе 60 мг/кг однократно.

Выбор дозы определялся собственными данными, полученными при изучении влияния Цп на количество и функцию лейкоцитов у интактных животных и при лейкоцитозах различного генеза.

Показатели определяли на 4, 8 и 12 сутки эксперимента.

Сначала изучали активность Цп в сыворотке крови при цитостатической лейкопении. Как видно из таблицы 96, применение цитостатика не вызвало изменений активности Цп в сыворотке у экспериментальных животных. Это свидетельствует о том, что при цитостатической лейкопении отсутствует выброс эндогенного Цп.

Таблица 96

Активность Цп в сыворотке крови при цитостатической лейкопении

Группы животных/ Показатель	Интактные животные n=13	Циклофосфан
		4 сутки n=5	8 сутки n =5
	М+m		М+m		М+m
Активность Цп, усл. ед.	72,08+2,41	8,68	75,80+4,79	10,71	74,20+2,15	4,82

У контрольной группы животных после введения циклофосфана отмечено значительное снижение количества лейкоцитов на 4 и 8 сутки эксперимента (таблица 97). К 12 суткам количество лейкоцитов на 46% превышало исходные значения у интактных животных. Во время лейкопении имело место подавление всех популяций лейкоцитов, а палочкоядерные нейтрофилы и эозинофилы полностью исчезали из периферической крови (таблицы 98, 99). Увеличение количества лейкоцитов на 12 сутки было вызвано нейтрофилией с ростом содержания палочкоядерных и сегментоядерных форм.

Полученные нами изменения количественного состава лейкоцитов периферической крови при цитостатической лейкопении согласуются с данными, которые отмечали другие исследователи (145, 162, 318, 331).

Применение Цп привело к увеличению общего количество лейкоцитов в периферической крови на 4 и 8 сутки эксперимента. Причем, этот рост на 4 сутки был обусловлен исключительно клетками нейтрофильного ряда, а на 8 сутки - всеми формами гранулоцитов и лимфоцитами. На 12 сутки эксперимента, как и у животных контрольной группы, отмечалась нейтрофилия, однако, она была более выраженная: общее количество нейтрофилов увеличилось в 12 раз по сравнению со здоровыми животными, а в контрольной группе в это же время только в 6 раз.

Скорей всего, увеличение количества лейкоцитов в периферической крови при цитостатической лейкопении обусловлено влиянием Цп на процессы костномозгового кроветворения. Стимуляция лейкопоэза под влиянием Цп отмечена нами у интактных животных и при асептическом воспалении. Для проверки нашего предположения мы изучали морфологический состав и количество ЯСК в костном мозге и влияние на эти показатели Цп.

Картина костного мозга при цитостатической лейкопении в целом соответствовала изменениям в периферической крови. В костном мозге зафиксировано угнетение гемопоэза, максимальная депрессия общего количества миелокариоцитов наблюдалась на 4 сутки, в среднем до 7 % от исходного уровня (таблицы 100 - 103). Анализ миелограмм показал, что в это время имело место подавление всех ростков кроветворения. Так, на 4 сутки введения циклофосфана на препаратах костного мозга встречались лишь отдельные, как правило, деструктивно измененные незрелые и зрелые нейтрофильные лейкоциты; снижалось количество клеток миелоидного, лимфоидного рядов и ЯСК эритроидного ряда. Опустошенный костный мозг заполнялся макрофагами, плазмоцитами и тучными клетками. К 12 суткам эксперимента на мазках костного мозга наблюдалась гиперплазия миелоидного ростка и восстановление клеточного состава лимфоидного ряда в относительных величинах, однако, пересчет на абсолютные показатели показал, что до исходного уровня восстановился только нейтрофильный ряд, а количество эозинофилов, лимфоцитов оставалось пониженным, хотя и достоверно увеличивалось по сравнению с 4 сутками экмперимента.

Полагают, что механизм миелосупрессивного действия циклофосфана связан со способностью его метаболитов реагировать с нуклеофильными центрами нуклеиновых кислот и белков (197, 417). Активация циклофосфана происходит при энзиматическом окислении в печени с участием микросомальных оксидаз (20, 440). Циклофосфан увеличивает среднюю продолжительность фаз S и G2, блокируя клетки в премитотической стадии путем торможения синтеза ДНК.

Алкилирование N-7 гуаниновых остатков вызывает мобилизацию нуклеозидных связей с последующими спонтанными или ферментативными разрывами полинуклеотидных цепей. (20, 21). В результате нарушаются матричные функции молекул ДНК в процессах репликации и транскрипции, что приводит к митотическим блокам, несбалансированному росту и гибели клеток (301, 336). В механизме действия препарата важная роль отводится также альтерации структур митохондрий, приводящая к нарушению энергетики клетки (21).

Применение Цп при цитостатической лейкопении на 4 сутки эксперимента снижало выраженность миелосупрессии, что выражалось в более высоком содержании общего количества ЯСК в костном мозге, а также нейтрофилов, моноцитов, лимфоцитов и ЯСК эритроидного ряда (таблицы 100 - 103). Таким образом, Цп выступал в роли протектора лейкопоэза при цитостатической лейкопении. Стимулирующее влияние Цп на лейкопоэз роявляется в условиях интактного, стимулированного воспалительным процессом и подавленного цитостатиком кроветворения. На 12 сутки эксперимента применение Цп при лейкопении приводило к гиперплазии гранулоцитарно - моноцитарного ростка, а также увеличению клеток эритроидного ряда в костном мозге. Причем, количество клеток в костном мозге возрастало примерно в 2 раза по сравнению с контрольной группой, а стимулирующее влияние Цп на лейкопоэз сохранялось до 12 суток после однократного введения и проявлялось, несмотря на гиперплазию кроветворной ткани. Это заставляет еще раз предположить, что и в условиях данного эксперимента однократное применение Цп служит пусковым моментом стимуляции лейкопоэза на уровне ранних коммитированных клеток - предшественников.

Необходимо отметить, что основное внимание исследователей цитостатических препаратов привлечено к изучению цитостатических миелосупрессий, их последствий и возможности фармакологической коррекции, то есть нарушениям количественного состава клеток крови. Однако, нужно учитывать, что не менее важным является вопрос влияния цитостатиков на функциональную активность клеток крови и лейкоцитов в частности. Об этом заставляет задуматься и общеизвестная сопряженность между количественным составом клеток и выполняемой ими функции в зависимости от исходных условий (78).

Таблица 97

Влияние Цп на количество лейкоцитов в периферической крови крыс при цитостатической лейкопении (х 109 / л, М+m; )

Группа 1 Интактные крысы n=12	Группа 2 (циклофосфан + физ. р-р) n=6	Группа 3 (циклофосфан + Цп) n=6
	4 сутки	8 сутки	12 сутки	4 сутки	8 сутки	12 сутки
13,85 +0,92; 3,06	0,97 +0,14; 0,35 р1-2<0,01	0,69 +0,25; 0,62 р1-2<0,01	20,27 +3,79; 8,49	1,55 +0,16; 0,41 р1-3<0,01 р2-3<0,05	2,29 +0,45; 1,00 р1-3<0,01 р2-3<0,05	40,30 +10,08; 22,53 р1-3<0,05

Примечание: р - показатель различия между группами по t - критерию.

Таблица 98

Влияние Цп на показатели периферической крови крыс при цитостатической лейкопении (М+m; )

Показатели, %	Группа 1 Интактные крысы n=12	Группа 2 (циклофосфан + физ. р-р) n=6	Группа 3 (циклофосфан + Цп) n=6
		4сутки	8 сутки	12 сутки	4 сутки	8 сутки	12 сутки
Нейтрофилы	П / яд.	2,45+ 0,39; 1,29	0	0	9,60+2,75; 6,15*	0	3,20+0,86; 1,92**	20,00+1,14; 2,55*, **
	С / яд.	12,09+ 0,88; 2,91	3,00+0,68; 1,67*	1,50+0,56; 1,38*	47,40+4,43; 9,91*	9,60+1,63; 3,65**	16,00+1,41; 3,16*, **	41,80+2,80; 6,28*
	Всего	14,63+ 0,96; 3,17	3,00+0,68; 1,67*	1,50+0,56; 1,38*	57,00+3,65; 8,15*	9,60+1,63; 3,65**	19,20+2,08; 4,66*, **	61,80+1,83; 4,09*
Эозинофилы	2,45+ 0,51; 1,69	0	0	0	0,20+0,20; 0,45*	0,80+0,20; 0,45*	0,20+0,20; 0,45*
Лимфоциты	82,82+1,04; 3,46	97,00+0,68; 1,67*	97,50+0,50; 1,22*	43,00+3,65; 8,15*	90,20+1,49; 3,35*, **	79,80+2,18; 4,87**	36,00+1,92; 4,30*
Моноциты	0,27+0,14; 0,47	0	1,00+0,26; 0,63*	0	0	0,20+0,20; 0,45**	0,80+0,58; 1,30

Примечание. * - достоверность различий с интактными животными (р1-2, р1-3), ** - между опытной и контрольной группами ( р2-3) по t- критерию.

Таблица 99

Влияние Цп на показатели периферической крови крыс при цитостатической лейкопении (М+m; )

Показатели, х 109 / л	Группа 1 Интактные крысы n=12	Группа 2 (циклофосфан + физ. р-р) n=6)	Группа 3 (циклофосфан + Цп) n=6
		4 сутки	8 сутки	12 сутки	4 сутки	8 сутки	12 сутки
Нейтрофилы	П / яд.	0,32+ 0,05; 0,16	0	0	1,73+0,51; 1,14*	0	0,07+0,02; 0,04*, **	8,32+2,60; 5,82*, **
	С / яд.	1,68+ 0,17; 0,57	0,03+0,01; 0,02*	0,010+0,006; 0,01*	9,52+1,71; 3,82*	0,16+0,04; 0,09*, **	0,35+0,06; 0,13*, **	16,60+3,49; 7,82*, **
	Всего	2,01+ 0,17; 0,57	0,03+0,01; 0,02*	0,010+0,006; 0,01*	11,25+1,57; 3,52*	0,16+0,04; 0,09*, **	0,42+0,07; 0,15*, **	24,92+5,93; 13,26*, **
Эозинофилы	0,33+ 0,08; 0,25	0	0	0	0,002+0,002; 0,004*	0,017+0,006; 0,014*, **	0,08+0,08; 0,17*
Лимфоциты	11,49+ 0,82; 2,72	0,94+0,14; 0,34*	0,79+0,25; 0,61*	9,02+2,43; 5,44	1,39+0,15; 0,34*	1,85+0,38; 0,86*, **	13,86+2,99; 6,68
Моноциты	0,04+0,02; 0,07	0	0,007+0,003; 0,007	0	0	0,005+0,005; 0,012	0,53+0,44; 0,99

Примечание. * - достоверность различий с интактными животными (р1-2, р1-3), ** - между опытной и контрольной группами ( р2-3) по t- критерию.

Таблица 100

Влияние Цп на показатели морфологического исследования костного мозга крыс при цитостатической лейкопении на 4 сутки эксперимента

Группа животных / Показатели, % клеток	Группа 1 Интактные крысы n=8	Группа 2 (циклофосфан + физ. р-р) n=6	Группа 3 (циклофосфан + Цп) n=6
	М+m		М+m		М+m
Миелобласты	1,40+0,28	0,80	0,48+0,10*	0,23	0,84+0,26	0,59
Промиелоциты	0,30+0,08	0,24	0	0	0,08+0,05*	0,11
Миелоциты	3,00+0,53	1,50	0,12+0,05*	0,11	0,16+0,12*	0,26
Метамиелоциты	7,43+0,76	2,14	0,12+0,05*	0,11	0,12+0,12*	0,27
П/яд. нейтрофилы	13,80+0,59	1,66	0,84+0,32*	0,71	1,64+0,33*	0,64
С/яд. нейтрофилы	11,20+1,39	3,95	2,48+0,42*	0,94	8,20+2,08*	4,64
Все нейтрофилы	37,00+1,71	4,85	4,04+0,58*	1,29	11,04+1,96*, **	4,38
Эозинофилы	8,68+0,88	2,49	0,32+0,14*	0,30	1,04+0,99*	2,12
Базофилы	0,28+0,11	0,32	0,2+0	0	0,08+0,05	0,11
Моноциты	3,08+0,58	1,65	1,80+0,33	0,75	2,20+0,46	1,03
Лимфоциты	12,90+1,61	4,54	18,64+1,27*	2,83	33,24+2,14*, **	4,79
Мегакариоциты	0,38+0,08	0,19	0,52+0,12	0,27	1,00+0,39	0,88
Плазмоциты	0,18+0,07	0,23	64,40+3,06*	6,85	42,64+4,16*, **	9,31
Тучные клетки	0	0	3,52+2,52	5,65	1,88+1,33	2,98
Макрофаги	0	0	4,60+0,95*	2,13	2,00+0,83	1,85
ЯСК эритро ряда	37,43+2,11	5,98	1,96+0,32*	0,71	4,88+1,63*	3,64
Лейко / эритро	1,71+0,17	0,49	49,15+5,45*	12,18	30,96+9,76*	21,83

Примечание. * - достоверность различий с интактными животными (р1-2, р1-3), ** - между опытной и контрольной группами ( р2-3) по t- критерию.

Таблица 101

Влияние Цп на количество ЯСК и показатели морфологического исследования костного мозга крыс при цитостатической лейкопении на 4 сутки эксперимента

Группа животных / Показатели, 106 клеток/100 г массы тела	Группа 1 Интактные крысы n=8	Группа 2 (циклофосфан + физ. р-р) n=6	Группа 3 (циклофосфан + Цп) n=6
	М+m		М+m		М+m
ЯСК	57,63+2,27	6,42	3,90+0,44*	0,99	8,39+1,15*,**	2,58
Миелобласты	0,82+0,17	0,48	0,020+0,006*	0,01	0,07+0,02*	0,05
Промиелоциты	0,18+0,05	0,14	0	0	0,006+0,004*	0,009
Миелоциты	1,69+0,35	0,99	0,005+0,002*	0,005	0,01+0,01*	0,02
Метамиелоциты	4,35+0,46	1,31	0,005+0,002*	0,005	0,01+0,01*	0,02
П/яд. нейтрофилы	7,94+0,34	0,95	0,03+0,01*	0,02	0,17+0,05*,**	0,11
С/яд. нейтрофилы	6,64+1,05	2,96	0,09+0,02*	0,04	0,92+0,31*,**	0,69
Все нейтрофилы	21,53+1,69	4,79	0,15+0,03*	0,06	1,19+0,34*,**	0,75
Эозинофилы	4,96+0,49	1,38	0,015+0,007*	0,015	0,09+0,08*	0,19
Базофилы	0,17+0,07	0,21	0,008+0,001*	0,002	0,011+0,007	0,015
Моноциты	1,78+0,34	0,97	0,07+0,01*	0,03	0,22+0,04*,**	0,09
Лимфоциты	7,37+0,97	2,74	0,74+0,11*	0,24	3,47+0,80*,**	1,79
Мегакариоциты	0,21+0,04	0,10	0,019+0,005*	0,011	0,12+0,06	0,13
Плазмоциты	0,10+0,04	0,11	2,50+0,28*	0,62	4,07+0,47*	1,05
Тучные клетки	0	0	0,15+0,12	0,26	0,23+0,17	0,39
Макрофаги	0	0	0,18+0,04*	0,09	0,23+0,11	0,25
ЯСК эритро ряда	21,40+1,13	3,20	0,08+0,02*	0,05	0,45+0,12*,**	0,28

Примечание. * - достоверность различий с интактными животными (р1-2, р1-3), ** - между опытной и контрольной группами ( р2-3) по t- критерию.

Таблица 102

Влияние Цп на показатели морфологического исследования костного мозга крыс при цитостатической лейкопении на 12 сутки эксперимента

Группа животных / Показатели, % клеток	Группа 1 Интактные крысы n=8	Группа 2 (циклофосфан + физ. р-р) n=6	Группа 3 (циклофосфан + Цп) n=6
	М+m		М+m		М+m
Миелобласты	1,40+0,28	0,80	0,40+0,09*	0,20	0,44+0,04*	0,09
Промиелоциты	0,30+0,08	0,24	0,2+0	0	0,24+0,04	0,09
Миелоциты	3,00+0,53	1,50	2,96+0,59	1,33	1,12+0,25*, **	0,56
Метамиелоциты	7,43+0,76	2,14	8,20+1,65	3,69	5,00+0,79	1,77
П/яд. нейтрофилы	13,80+0,59	1,66	27,12+2,18*	4,87	19,72+1,91*, **	4,26
С/яд. нейтрофилы	11,20+1,39	3,95	36,00+5,56*	12,44	46,64+4,14*	9,25
Все нейтрофилы	37,00+1,71	4,85	74,88+2,26*	5,06	73,16+4,36	9,75
Эозинофилы	8,68+0,88	2,49	2,56+1,08*	2,42	8,56+3,84	8,58
Базофилы	0,28+0,11	0,32	0,16+0,04	0,09	0,16+0,04	0,09
Моноциты	3,08+0,58	1,65	4,12+0,61	1,36	4,16+0,53	1,19
Лимфоциты	12,90+1,61	4,54	8,96+1,26	2,83	4,96+0,92*, **	2,05
Мегакариоциты	0,38+0,08	0,19	0,24+0,04	0,09	0,28+0,08	0,18
Плазмоциты	0,18+0,07	0,23	0,12+0,08	0,18	0,04+0,04	0,09
Тучные клетки	0	0	0	0	0	0
Макрофаги	0	0	0	0	0	0
ЯСК эритро ряда	37,43+2,11	5,98	8,96+1,07*	2,39	8,68+1,05*	2,35
Лейко / эритро	1,71+0,17	0,49	10,86+1,54*	3,44	11,33+1,79*	4,01

Примечание. * - достоверность различий с интактными животными (р1-2, р1-3), ** - между опытной и контрольной группами ( р2-3) по t- критерию.

Таблица 103

Влияние Цп на количество ЯСК и показатели морфологического исследования костного мозга крыс при цитостатической лейкопении на 12 сутки эксперимента

Группа животных / Показатели, 106 клеток/100 г массы тела	Группа 1 Интактные крысы n=8	Группа 2 (циклофосфан + физ. р-р) n=6	Группа 3 (циклофосфан + Цп) n=6
	М+m		М+m		М+m
ЯСК	57,63+2,27	6,42	49,58+4,47	10,01	81,60+8,07*,**	18,05
Миелобласты	0,82+0,17	0,48	0,19+0,05*	0,12	0,36+0,04*,**	0,09
Промиелоциты	0,18+0,05	0,14	0,09+0,01	0,02	0,19+0,03**	0,08
Миелоциты	1,69+0,35	0,99	1,52+0,35	0,78	0,85+0,18*	0,40
Метамиелоциты	4,35+0,46	1,31	4,30+1,09	2,44	4,02+0,68	1,52
П/яд. нейтрофилы	7,94+0,34	0,95	13,51+1,74*	3,89	15,77+1,42*	3,18
С/яд. нейтрофилы	6,64+1,05	2,96	17,52+2,27*	5,08	39,22+7,74*,**	17,32
Все нейтрофилы	21,53+1,69	4,79	37,13+3,57*	7,98	60,41+8,85*,**	19,78
Эозинофилы	4,96+0,49	1,38	1,14+0,38*	0,86	6,62+2,98	6,67
Базофилы	0,17+0,07	0,21	0,08+0,02	0,05	0,13+0,04	0,08
Моноциты	1,78+0,34	0,97	2,03+0,29	0,67	3,31+0,37*,**	0,82
Лимфоциты	7,37+0,97	2,74	4,55+0,85*	1,90	3,98+0,78*	1,74
Мегакариоциты	0,21+0,04	0,10	0,12+0,03	0,07	0,25+0,10	0,23
Плазмоциты	0,10+0,04	0,11	0,06+0,04	0,08	0,04+0,04	0,07
Тучные клетки	0	0	0	0	0	0
Макрофаги	0	0	0	0	0	0
ЯСК эритро ряда	21,40+1,13	3,20	4,46+0,67*	1,50	6,86+0,71*,**	1,58

Примечание. * - достоверность различий с интактными животными (р1-2, р1-3), ** - между опытной и контрольной группами ( р2-3) по t- критерию.

Нами отмечены выраженные изменения функциональной активности лейкоцитов при цитостатической лейкопении.

По результатам ХЛ - исследования в различные сроки эксперимента отмечена неоднозначная способность лейкоцитов к генерации АФК (таблицы 104, 105). На 4 сутки эксперимета имело место снижение показателей ХЛ в относительных, но не абсолютных величинах. Пересчет показателей на 105 гранулоцитов показал, что способность фагоцитов генерировать АФК возросла в среднем по показателям СС в 21 раз, а их функциональный резерв вырос в 31 раз по сравнению с интактными животными. На 8 сутки эксперимента, несмотря на то, что спонтанное свечение цельной крови нормализовалось, а индуцированное продолжало оставаться сниженным, активность отдельной клетки не только оставалась повышенной, но и продолжала расти и увеличилась в 300 раз по сравнению с интактными. Функциональный резерв клеток по сравнению с 4 сутками несколько уменьшился, но в 17 раз превышал значения интактных животных. К 12 суткам показатели ХЛ - ответа лейкоцитов практически приближались к норме.

Таким образом, по мере прогрессирующего снижения количества фагоцитирующих клеток их способность к генерации АФК пропорционально возрастала. Максимальное свечение отдельного фагоцита отмечено на 8 сутки эксперимента, то есть в то время, когда их количество в периферической крови было минимальным. Необходимо отметить, что ХЛ является высокочувствительным методом оценки способности лейкоцитов генерировать АФК. Полученный факт является еще одним доказательством правила Вильдера - Лейтеса о том, что функциональная активность системы отличается в зависимости от исходных условий (78).

Содержание МПО и КБ в гранулоцитах периферической крови снижалось на 4 сутки, достигало минимальных значений на 8 и практически восстанавливалось к 12 суткам цитостатической лейкопении (таблица 106). Отчасти это объясняется снижением количества циркулирующих гранулоцитов на 4 и особенно 8 сутки эксперимента. Кроме того, этот факт может быть связан со снижением синтетических процессов в клетках, развивающихся в костном мозге, на фоне применения циклофосфана.

При цитостатической лейкопении уменьшалась фагоцитарная способность лейкоцитов периферической крови (таблица 107). На 4 и 8 сутки эксперимента имело место снижение как активности, так и интенсивности фагоцитоза Фагоцитарная функция восстанавливалась к 12 суткам эксперимента.

Итак, лейкопения, возникающая в ответ на введение цитостатика циклофосфана, приводит к увеличению способности лейкоцитов генерировать АФК, снижению содержания МПО и КБ в гранулоцитах, подавлению фагоцитарной функции лейкоцитов.

Однократное применение Цп при цитостатической лейкопении привело к изменению функциональной активности лейкоцитов. Под влиянием Цп достоверно снижалась бурная генерация АФК фагоцитами по показателям ХЛ (таблицы 104, 105). Если в контрольной группе генерация АФК на 4 и 8 сутки возрастала соответственно в 21 и 300 раз, то в опытной группе в 3 и 21 раз.

Применение Цп приводило к снижению не только базального, но и индуцированного свечения отдельно взятого лейкоцита. К 12 суткам эксперимента все показатели ХЛ ответа в абсолютных величинах достоверно не отличались от интактных животных.

Применение Цп приводило к росту содержания МПО во все сроки эксперимента, а КБ на 4 и 8 сутки цитостатической лейкопении (таблица 106). Это объясняется как увеличением количества циркулирующих гранулоцитов под влиянием Цп, так и ростом содержания катионных белков в клетке.

Возможно, Цп влияет на синтетические процессы в клетках миелоидного ряда: во время их созревания в костном мозге и/или циркуляции в кровотоке. Известно, что Цп как поставщик меди может оказывать влияние на процессы тканевого дыхания, так как медь входит в состав цитохромоксидазы - фермента, непосредственно переносящего электроны с окисляемых субстратов на кислород (115, 154).

Цп вызывал рост фагоцитарной функции лейкоцитов до значений здоровых животных (таблица 107). Если рост активности фагоцитоза, то есть числа фагоцитирующих клеток, обусловлен увеличением количества циркулирующих фагоцитов, то усиление интенсивности фагоцитоза объясняется ростом адгезивных свойств фагоцитов под влиянием Цп.

Интересно, что усиливая адгезивные свойства лейкоцитов, а значит и их прилипание к эндотелию и переход части циркулирующих клеток в пристеночный пул Цп вызывал увеличение количества лейкоцитов в периферической крови. Это свидетельствует о силе влияния Цп на лейкопоэз.

Таким образом, применение Цп при цитостатической лейкопении снижает глубину миелодепрессивного действия циклофосфана, увеличивает количество лейкоцитов в периферической крови за счет усиления пролиферативной активности клеток - предшественников в костном мозге. Цп на фоне цитостатической лейкопении модулирует функциональную активность лейкоцитов: генерацию АФК, внутриклеточное содержание МПО и КБ, фагоцитарную функцию. Чрезмерно бурная активность лейкоцитов подавляется, а сниженная стимулируется, приближаясь по своим значениям к нормальным показателям.

Таблица 104

Влияние Цп на показатели хемилюминесценции цельной крови крыс при цитостатической лейкопении (М+m; )

Группа животных / Показатели хемилюминесценции	Группа 1 Интактные крысы n=12	Группа 2 (циклофосфан + физ. р-р) n=6	Группа 3 (циклофосфан + Цп) n=6
		4 сутки	8 сутки	12 сутки	4 сутки	8 сутки	12 сутки
Спон-танное свечение	Светосумма, у.е. х мин	9,21 +1,83; 6,32	1,98+0,68; 1,68*	9,49+2,97; 6,65	76,37+20,64; 46,14*	1,03+0,33; 0,73*	29,47+17,85; 39,91	63,58+21,56; 48,20*
	Максимальная светимость, у.е.	1,32+ 0,23; 0,78	0,27+0,11; 0,26*	1,54+0,46; 1,02	12,87+3,92; 8,77*	0,23+0,09; 0,26*	3,67+2,16; 4,83	12,53+4,41; 9,93*
Индуци-рован-ное свечение	Светосумма, у.е. х мин	22,68+5,58; 19,34	6,71+3,12; 7,64*	1,89+0,95; 2,14*	86,64+15,84; 35,42*	2,75+1,01; 2,26*	44,09+25,96; 58,06	293,08+58,43; 130,65*, **
	Максимальная светимость, у.е.	2,91 +0,69; 2,41	0,91+0,40; 0,98*	0,29+0,10; 0,23*	9,94+1,89; 4,24*	0,39+0,12; 0,27*	5,39+3,12; 6,97	33,18+7,01; 15,67*, **

Примечание. * - достоверность различий с интактными животными (р1-2, р1-3), ** - между опытной и контрольной группами ( р2-3) по t- критерию.

Таблица 105

Влияние Цп на показатели хемилюминесценции цельной крови крыс при цитостатической лейкопении в пересчете на 105 гранулоцитов (60 мг/кг однократно)

Группа животных / Показатели хемилюминесценции	Группа 1 Интактные крысы n=12	Группа 2 (циклофосфан + физ. р-р) n=6	Группа 3 (циклофосфан + Цп) n=6
		4 сутки	8 сутки	12 сутки	4 сутки	8 сутки	12 сутки
Спон-танное свечение	Светосумма, у.е. х мин	3,43 +0,62; 2,06	73,64+19,83; 48,57*	1029,2+285,7 594,2*	7,43+1,66; 4,07*	9,36+3,98; 8,91**	41,69+22,21; 49,66**	2,17+0,46; 1,04**
	Максимальная светимость, у.е.	0,52 +0,08; 0,27	10,49+4,16; 10,18*	169,51+44,68 99,89*	1,21+0,27; 0,67*	2,06+0,94; 2,09	6,87+3,55; 7,94**	0,42+0,09; 0,19**
Индуци-рован-ное свечение	Светосумма, у.е. х мин	8,00 +1,54; 5,09	249,34+101,16; 247,80*	134,11+25,2; 56,55*	7,86+0,59; 1,49	17,53+8,04; 17,99**	79,55+43,91; 98,19	13,05+2,08; 4,65**
	Максимальная светимость, у.е.	1,04 +0,19; 0,65	35,43+13,24; 32,44*	22,94+4,64; 10,37*	0,90+0,07; 0,18	2,67+0,94; 2,10**	9,78+5,27; 11,78	1,46+0,21; 0,47**

Примечание. * - достоверность различий с интактными животными (р1-2, р1-3), ** - между опытной и контрольной группами ( р2-3) по t- критерию.

Таблица 106

Влияние Цп на цитохимические показатели лейкоцитов периферической крови крыс при цитостатической лейкопении (М+m; )

Группа животных / Показатели СЦК, у.е.	Группа 1 Интактные крысы n=12	Группа 2 (циклофосфан + физ. р-р) n=6	Группа 3 (циклофосфан + Цп) n=6
		4 сутки	8 сутки	12 сутки	4сутки	8 сутки	12сутки
Миело-пероксидаза	0,46+0,03; 0,18	0,18+0,04; 0,09*	0,12+0,04; 0,09*	0,39+0,05; 0,11	0,34+0,04; 0,08*, **	0,67+0,06; 0,13*, **	0,75+0,01; 0,03*, **
Катионные белки	0,87+0,06; 0,29	0,45+0,05; 0,13*	0,29+0,05; 0,12*	0,58+0,05; 0,12*	0,62+0,04; 0,09*, **	0,74+0,05; 0,12**	0,68+0,07; 0,17*

Примечание. * - достоверность различий с интактными животными (р1-2, р1-3), ** - между опытной и контрольной группами ( р2-3) по t- критерию.

Таблица 107

Влияние Цп на фагоцитоз лейкоцитов периферической крови крыс при цитостатической лейкопении (М+m; )

Группа животных / Показатели фагоцитоза	Группа 1 Интактные крысы n=12	Группа 2 (циклофосфан + физ. р-р) n=6	Группа 3 (циклофосфан + Цп) n=6
		4 сутки	8 сутки	12 сутки	4 сутки	8 сутки	12 сутки
Активность, % клеток	25,46+0,68; 4,12	12,17+ 0,87; 2,14*	12,40+1,72; 3,85*	31,00+1,45; 3,24*	20,40+2,20; 4,93*, **	25,60+3,44; 7,70**	30,00+2,98; 6,67
Интенсивность, у.е. / клетку	3,78+0,16; 0,95	2,89+0,25; 0,62*	1,26+0,23; 0,51*	3,26+0,09; 0,19	5,77+0,69; 1,56*, **	3,93+0,58; 1,30**	3,61+0,17; 0,38

Примечание. * - достоверность различий с интактными животными (р1-2, р1-3), ** - между опытной и контрольной группами ( р2-3) по t- критерию.

5.2 Влияние церулоплазмина на количество и функцию лейкоцитов при асептическом воспалении, протекающем на фоне цитостатической лейкопении

Далее нас интересовало, как протекает асептическое воспаление на фоне лейкопении, и какое влияние может оказывать Цп на количество и функцию лейкоцитов при этом. Актуальность данной проблемы связана, прежде всего, с ее клинической значимостью. Известно, что развивающаяся у онкобольных в условиях проведения химиотерапии (или после ее окончания) лейкопения и иммуносупрессия способствуют возникновению инфекционных осложнений, воспалительных процессов различной локализации, что во многом затрудняет лечение пациентов и течение реабилитационного периода (41, 178).

В эксперименте находилось 3 группы животных: 1) группа интактных (здоровых) животных; 2) контрольная группа животных, у которых первоначально моделировали цитостатическую лейкопению внутрибрюшинным однократным введением циклофосфана в дозе 125 мг/кг, а на 3 сутки лейкопении вызывали асептическое воспаление подкожным введением 1,0 мл скипидара; 3) опытной группе животных при тех же условиях, что и у контрольной, в 1 сутки эксперимента вводили Цп однократно в дозе 60 мг/кг.

Показатели исследовали на 4,8,11,16 сутки эксперимента.

Воспалительный процесс на фоне цитостатической лейкопении сопровождался выраженной лейкопенией на 4 и 8 сутки эксперимента, а на 11 сутки - лейкоцитозом, к 16 суткам эксперимента количество лейкоцитов достоверно не отличалось от группы интактных животных (таблица 108). Причем, если на 4 сутки лейкопения была обусловлена снижением количества всех популяций лейкоцитов, то на 8 сутки - только лимфоцитов (таблицы 109, 110). Количество нейтрофилов на 8 сутки увеличивалось по сравнению с 4 сутками и даже достигало значений здоровых животных. Это интересный факт, поскольку ранее нами было показано, что на 8 сутки от введения циклофосфана в периферической крови наблюдается выраженная лейкопения за счет всех популяций лейкоцитов, в том числе и нейтрофилов, а на 5 сутки асептического воспаления развивается лейкоцитоз за счет клеток нейтрофильного ряда (рисунки 6, 7). Таким образом, даже на фоне цитостатической лейкопении воспалительный процесс служит стимулом индукции гранулоцитопоэза за счет выброса цитокинов, стимулирующих лейкопоэз и приводит к увеличению количества циркулирующих в периферической крови гранулоцитов. Лейкоцитоз 11 суток был связан с увеличением количества нейтрофилов и лимфоцитов, нейтрофилия сохранялась вплоть до 16 суток эксперимента.

Применение Цп при асептическом воспалении, протекающем на фоне цитостатической лейкопении, привело к увеличению на правах тенденции общего количества лейкоцитов на 8 сутки эксперимента и достоверному снижению их на 11 сутки (табл. 108 - 110). Отмеченные изменения являются проявлением продемонстрированных на предыдущих этапах работы и уже установленных закономерностей механизмов действия Цп. Тенденция к лейкоцитозу на 8 сутки эксперимента обусловлена усилением гранулоцитопоэза под влиянием Цп. Позднее, на 11 сутки, когда количество лейкоцитов превышало исходные значения, Цп, усиливая адгезивную способность лейкоцитов, способствовал переходу их из циркуляции в очаг воспаления. Несмотря на то, что достоверно снижалось только количество лимфоцитов, можно предположить, что Цп способствовал также миграции в очаг воспаления гранулоцитов, однако в условиях стимуляции гранулоцитопоэза и кинетики гранулоцитов в периферической крови это не удалось установить (229, 299).

Таблица 108

Влияние Цп на количество лейкоцитов в периферической крови крыс при воспалении на фоне цитостатической лейкопении (109/л, М+m; ).

Группа 1 Интактные крысы n=8	Группа 2 (циклофосфан + воспаление + физ. р-р) n=6	Группа 3 (циклофосфан + воспаление + Цп) n=6
	4 сутки	8 сутки	11 сутки	16 сутки	4 сутки	8 сутки	11 сутки	16 сутки
9,37+0,42; 1,19	0,52+0,09; 0,22 р1-2<0,05	3,71+0,36; 0,81 р1-2<0,05	22,73+2,26; 5,06 р1-2<0,05	11,49+1,73; 3,87	0,68+0,22; 0,54 р1-3<0,05	5,31+1,37; 3,36 р1-3<0,05	16,02+1,93; 4,74 р1-3<0,05 р2-3<0,05	17,25+2,83; 6,34 р1-3<0,05

Примечание. р - достоверность различий между группами по t- критерию.

Таблица 109

Влияние Цп на показатели периферической крови крыс при воспалении на фоне цитостатической лейкопении (М+m; )

Показа-тели % клеток	Группа 1 Интактные n=8	Группа 2 (циклофосфан + воспаление + физ. р-р) n=6	Группа 3 (циклофосфан + воспаление + Цп) n=6
		4сутки	8 сутки	11сутки	16 сутки	4сутки	8 сутки	11сутки	16 сутки
Нейтрофилы	П / яд.	5,50+1,05; 2,98	5,00+1,24; 3,03	8,60+0,81; 1,82	12,00+1,97; 4,42*	8,00+1,00; 2,24	12,00+2,07; 5,06*, **	12,33+1,20; 2,94*, **	14,17+1,97; 4,83*	8,50+1,50; 3,35
	С / яд.	15,13+1,32; 3,72	13,33+1,76; 4,32	37,80+1,96; 4,38*	40,00+2,74 6,12*	33,50+2,31 5,17*	26,00+5,11; 12,52**	38,50+3,27; 8,02*	41,17+3,35 8,21*	20,25+1,16 2,59*, **
	Всего	20,63+1,79; 5,07	18,33+1,20; 2,94	46,40+2,29; 5,13*	52,00+1,58; 3,54*	41,50+3,19; 7,12*	38,00+5,89; 14,42*, **	50,83+3,72; 9,11*	55,33+3,63; 8,89*	28,75+1,49; 3,34*, **
Эозиноф.	1,13+0,39; 1,13	1,00+0,68; 1,67	1,60+0,98; 2,19	0,50+0,39; 0,87	0,50+0,22; 0,50	1,00+0,45; 1,09	0,83+0,31; 0,75	0,83+0,40; 0,98	1,00+0,45; 1,00
Лимфоц.	77,75+1,76; 4,98	79,67+1,89; 4,63	51,60+2,54; 5,68*	46,00+1,05; 2,35*	57,25+3,12; 6,98*	60,67+6,17;15,11*, **	48,00+3,69; 9,06*	43,50+3,57; 8,73*	70,00+1,87; 4,18*, **
Моноц.	0,50+0,19; 0,53	1,00+0,45; 1,09	0,40+0,24; 0,55	1,50+0,50; 1,12	0,75+0,37; 0,83	0,33+0,33; 0,82	0,33+0,21; 0,52	0,33+0,33; 0,82	0,25+0,19; 0,43

Примечание. * - достоверность различий с интактными животными (р1-2, р1-3), ** - между опытной и контрольной группами ( р2-3) по t- критерию.

Таблица 110

Влияние Цп на показатели периферической крови крыс при воспалении на фоне цитостатической лейкопении (М+m; )

Показа-тели, х 109/л	Группа 1 Интактные n=8	Группа 2 (циклофосфан + воспаление + физ. р-р) n=6	Группа 3 (циклофосфан + воспаление + Цп) n=6
		4сутки	8 сутки	11сутки	16 сутки	4сутки	8 сутки	11сутки	16 сутки
Нейтрофилы	П / яд.	0,52+0,09; 0,26	0,03+0,01; 0,02*	0,32+0,03; 0,07	2,84+0,69; 1,54*	0,89+0,17; 0,38	0,09+0,05; 0,12*	0,62+0,14; 0,34	2,27+0,42; 1,02*	0,86+0,19; 0,43
	С / яд.	1,34+0,17; 0,47	0,07+0,02; 0,05*	1,41+0,16; 0,37	8,81+0,55 1,24*	3,78+0,60 1,34*	0,17+0,06; 0,15*	2,06+0,54; 1,32	6,73+1,55 2,81*	3,47+0,55 1,23*
	Всего	1,86+0,15; 5,07	0,10+0,02; 0,06*	1,73+0,18; 0,41	11,65+0,92; 2,05*	4,68+0,76; 1,69*	0,26+0,11; 0,26*	2,68+0,66; 1,62	9,00+1,39; 3,41*	4,81+0,64; 1,42*
Эозиноф.	0,11+0,04; 0,11	0,01+0,004; 0,01*	0,06+0,04; 0,09	0,14+0,11; 0,24	0,07+0,03; 0,07	0,01+0,003; 0,01*	0,03+0,01; 0,02	0,12+0,07; 0,16	0,16+0,08; 0,17
Лимфоц.	7,29+0,41; 1,15	0,41+0,06; 0,15*	1,90+0,19; 0,41*	10,56+1,21; 2,70*	6,63+0,99; 2,23	0,41+0,13; 0,31*	2,59+0,74; 1,81*	6,86+0,79; 1,95**	12,24+2,26; 5,06*, **
Моноц.	0,05+0,02; 0,05	0,01+0,003; 0,01	0,02+0,01; 0,02	1,01+0,48; 1,08	0,11+0,06; 0,14	0,003+ 0,003; 0,01	0,01+0,01; 0,02	0,04+0,04; 0,11	0,08+0,06; 0,13

Примечание. * - достоверность различий с интактными животными (р1-2, р1-3), ** - между опытной и контрольной группами ( р2-3) по t- критерию.

Рисунок 6. Количество лейкоцитов в периферической крови крыс при асептическом воспалении, цитостатической лейкопении и асептическом воспалении, протекающем на фоне лейкопении. Доверительные интервалы при р=0,05

Рисунок 7. Количество нейтрофилов в периферической крови крыс при асептическом воспалении, цитостатической лейкопении и асептическом воспалении, протекающем на фоне лейкопении. Доверительные интервалы при р=0,05

Функция лейкоцитов в данном эксперименте также подверглась изменению. В контрольной группе животных на 4 сутки эксперимента отмечено достоверное снижение МС и тенденция к снижению других показателей ХЛ - ответа лейкоцитов (таблица 111).

При пересчете показателей на 105 гранулоцитов, напротив, обнаружилась тенденция к увеличению генерации АФК (таблица 112). Что является вполне целесообразным при сниженном количестве лейкоцитов в периферической крови, то есть снижение количества лейкоцитов компенсировалось их гиперфункцией. На 8 сутки эксперимента достоверно увеличилось индуцированное свечение лейкоцитов, функциональный резерв отдельно взятой клетки, ее готовность к осуществлению эффекторной функции при стимуляции. На 11 и 16 сутки достоверно снизилось спонтанное свечение лейкоцитов, а их функциональный резерв продолжал оставаться повышенным (таблица 112).

Подобное снижение базальной активности циркулирующих гранулоцитов на 11 сутки может быть объяснимо значительной нейтрофилией, а на 16 сутки могло быть обусловлено снижением активности или блокадой НАДФН - оксидазы токсическими продуктами, в избытке образующимися в ходе воспаления, блокадой поверхностных рецепторов гранулоцитов, изменением физического состояния (микровязкости) липидной фазы мембран лейкоцитов в связи с нарушением нормального лейкопоэза под влиянием циклофосфана, а также изменением активности ферментов - перехватчиков АФК: СОД, каталазы или другими причинами (70).

Наряду с этим отмечено снижение содержания МПО и КБ в гранулоцитах (таблица 113), уменьшение интенсивности фагоцитоза и рост активности фагоцитоза (таблица 114).

В опытной группе животных на 11 и 16 сутки достоверно увеличилось базальное свечение лейкоцитов, не отличаясь по своим значениям от группы интактных животных. Цп, таким образом, вызывал стимуляцию генерации АФК лейкоцитами в момент их наиболее значительной депрессии (таблицы 111, 112). Интересно, что на 16 сутки также увеличилось содержание МПО, что еще раз свидетельствует о сопряженности в работе эффекторных систем фагоцитов: НАДФН - оксидазной и миелопероксидазной.

Во все сроки эксперимента под влиянием Цп увеличивалось содержание КБ (таблица 113). Аналогичный эффект по влиянию Цп на цитохимические показатели гранулоцитов отмечен нами при цитостатической лейкопении.

Однако применение Цп при цитостатической лейкопении вызывало снижение показателей ХЛ, а в данном случае - повышение. Возможно, это объясняется тем, что в первом случае Цп снижал исходно повышенные показатели ХЛ, а во втором - повышал исходно сниженные.

Таким образом, Цп модулирует функциональную способность лейкоцитов генерировать АФК в зависимости от исходных условий.

Цп изменял фагоцитарную функцию лейкоцитов: увеличивал активность фагоцитоза на 4 сутки и его интенсивность во все сроки эксперимента (таблица 114).

Итак, отмеченные на данном этапе работы свойства Цп являются отражением уже установленных закономерностей его действия на количественный состав и функциональную активность лейкоцитов.

Таблица 111

Влияние Цп на показатели хемилюминесценции периферической крови крыс при воспалении на фоне цитостатической лейкопении (М+m; )

Показа-тели светимости	Группа 1 Интактные n=8	Группа 2 (циклофосфан + воспаление + физ. р-р) n=6	Группа 3 (циклофосфан + воспаление + Цп) n=6
		4сутки	8 сутки	11сутки	16 сутки	4сутки	8 сутки	11сутки	16 сутки
Спонтанная	СС	1,39+0,42; 1,19	0,45+0,25; 0,55	3,19+0,79; 1,78	22,69+16,47; 36,84	0,70+0,15; 0,34	1,95+0,73; 1,78	6,86+2,87; 6,43	6,20+2,14; 5,68	0,70+0,15; 0,34
	МС	0,20+0,04; 0,12	0,09+0,03; 0,07*	0,79+0,28; 0,62*(U)	8,21+5,92; 13,24*(U)	0,18+0,02; 0,05	0,38+0,08; 0,20**	1,75+0,68; 1,52*(U)	1,19+0,28; 0,68*	0,18+0,02; 0,05
Индуциров.	СС	2,73+0,97; 2,38	0,78+0,33; 0,75	38,87+4,54; 10,14*	100,87+32,39 72,42*	28,51+10,11 22,59*(U)	1,69+0,68; 1,66	95,65+33,14; 74,09*	80,26+11,15 27,31*	28,51+10,11 22,59*(U)
	МС	0,39+0,13 0,32	0,15+0,03; 0,07	4,54+0,67; 1,49*	11,38+3,59; 8,02*	3,25+1,16; 2,59*	0,25+0,09; 0,21	11,32+3,79; 8,49*	9,32+1,30; 3,19*	3,25+1,16; 2,59*

Примечание. * - достоверность различий с интактными животными (р1-2, р1-3), ** - между опытной и контрольной группами ( р2-3) по t- критерию.

Таблица 112

Влияние Цп на показатели хемилюминесценции периферической крови крыс при воспалении на фоне цитостатической лейкопении (М+m; )

Показатели ХЛ /105 грануло-цитов	Группа 1 Интактные n=8	Группа 2 (циклофосфан + воспаление + физ. р-р) n=6	Группа 3 (циклофосфан + воспаление + Цп) n=6
		4сутки	8 сутки	11сутки	16 сутки	4сутки	8 сутки	11сутки	16 сутки
Спонтанная	СС	0,75+0,21; 0,59	7,42+4,19; 9,37	2,12+0,81; 1,81	0,14+0,03; 0,07 *	0,15+0,04; 0,09 *	10,70+4,49; 11,00*(U)	1,19+0,43; 0,96	0,75+0,38; 0,92**(U)	0,45+0,19; 0,42**(U)
	МС	0,11+0,02; 0,06	1,21+0,60; 1,35	0,51+0,20; 0,45	0,58+0,39; 0,89	0,29+0,20; 0,45	2,40+0,89; 2,17*	0,29+0,10; 0,23	0,13+0,04; 0,09	0,08+0,03; 0,06
Индуциров.	СС	1,23+0,41; 0,99	10,86+6,22; 13,91	22,38+3,56; 7,96*(U)	5,66+0,66 1,48*	3,27+0,49 1,12*	8,12+4,45; 10,89*(U)	13,97+2,01; 4,49*	9,79+1,88 4,61*	6,17+1,55 3,46*
	МС	0,18+0,06; 0,14	1,76+0,77; 1,73	2,66+0,43; 0,97*	0,91+0,22; 0,49*	0,73+0,28; 0,63*(U)	1,20+0,47; 1,17*(U)	1,66+0,24; 0,54*	1,14+0,21; 0,52*	0,69+0,17; 0,39*

Примечание. * - достоверность различий с интактными животными (р1-2, р1-3), ** - между опытной и контрольной группами ( р2-3) по t- критерию (U - критерию Манна-Уитни).

Таблица 113

Влияние Цп на цитохимические показатели лейкоцитов периферической крови крыс при воспалении на фоне цитостатической лейкопении (М+m; )

Показатели СЦК, у.е.	Группа 1 Интактные n=28	Группа 2 (циклофосфан + воспаление + физ. р-р) n=6	Группа 3 (циклофосфан + воспаление + Цп) n=6
		4сутки	8 сутки	11сутки	16 сутки	4сутки	8 сутки	11сутки	16 сутки
Миело- перокси- даза	0,46 +0,03; 0,18	0,27 +0,05; 0,13 р1-2<0,05	0,09 +0,03; 0,07 р1-2<0,001	0,26 +0,02; 0,03 р1-2<0,01	0,45 +0,05; 0,11	0,37 +0,06; 0,15	0,46 +0,08; 0,21 р2-3<0,01	0,51 +0,07; 0,16 р2-3<0,01	0,70 +0,05; 0,12 р1-2<0,01 р2-3<0,01
Катионные белки	0,87 +0,06; 0,29	0,14 +0,03; 0,07 р1-2<0,001	0,12 +0,01; 0,02 р1-2<0,001	0,07 +0,01; 0,02 р1-2<0,001	0,12 +0,03; 0,06 р1-2<0,001	0,31 +0,07; 0,17 р1-3<0,001 р2-3<0,05	0,35 +0,03; 0,08 р1-3<0,001 р2-3<0,001	0,42 +0,06; 0,16 р1-3<0,001 р2-3<0,001	0,36 +0,04; 0,09 р1-3<0,001 р2-3<0,001

Примечание. р - достоверность различий между группами по t- критерию.

Таблица 114

Влияние Цп на показатели фагоцитоза лейкоцитов периферической крови крыс при воспалении на фоне цитостатической лейкопении (М+m; )

Показатели фагоцитоза	Группа 1 Интактные крысы n=37	Группа 2 (циклофосфан + воспаление + физ. р-р) n=5	Группа 3 (циклофосфан + воспаление + Цп) n=5
		4сутки	8 сутки	11сутки	16 сутки	4сутки	8 сутки	11сутки	16 сутки
Активность, % клеток	25,46 +0,68; 4,12	23,00 +1,89; 4,24	33,80 +2,84; 6,34 р1-2<0,05	32,80 +0,66; 1,48 р1-2<0,05	35,80 +1,02; 2,28 р1-2<0,05	35,60 +1,78; 3,97 р1-3<0,05 р2-3<0,05	32,60 +1,03; 2,30 р1-3<0,05	35,80 +1,56; 3,49 р1-3<0,05	33,60 +1,17; 2,61 р1-3<0,05
Интенсив-ность, у.е./клетку	3,78 +0,16; 0,95	2,71 +0,30; 0,68 р1-2<0,05	2,44 +0,36; 0,81 р1-2<0,05	2,49 +0,07; 0,15 р1-2<0,05	2,89 +0,12; 0,26 р1-2<0,05	5,60 +0,41; 0,92 р1-3<0,05 р2-3<0,05	5,12 +0,36; 0,81 р1-3<0,05 р2-3<0,05	5,67 +0,55; 1,22 р1-3<0,05 р2-3<0,05	6,00 +0,64; 1,43 р1-3<0,05 р2-3<0,05

Примечание. р - достоверность различий между группами по t- критерию.

Размещено на http://www.allbest.ru/

Заключение

Реактанты острой фазы представляют собой гетерогенную группу соединений белкового происхождения, объединяющую более 50 веществ. К ним относят пентраксины, транспортные белки, протеазы и другие ферменты острой фазы, ингибиторы протеаз, факторы коагуляции и фибринолиза, факторы комплемента, белки, участвующие в создании матрикса соединительной ткани, факторы, регулирующие активность тромбоцитов и эндотелиальных клеток. Такую гетерогенную в структурном и функциональном отношении группу веществ объединяет способность изменять свою концентрацию в сыворотке крови при различного рода повреждениях (111).

Интерес к РОФ обусловлен несколькими причинами. Во - первых, фундаментальным аспектом изучения роли различных РОФ в физиологических условиях и при различных патологических состояниях, механизмов регуляции их уровня в организме. Во - вторых, прикладным аспектом возможного применения РОФ в клинической практике, поскольку некоторые из них выделены в чистом виде и выпущены в форме лекарственных препаратов. Кроме того, изучение роли РОФ в организме показало их диагностическое значение при ряде заболеваний, а также прогностическое значение в динамике лечения.

Исследования последних лет позволили вскрыть биологическое значение РОФ первого эшелона, концентрация которых при различных повреждениях повышается наиболее значительно. Установлена лигандная активность пентраксинов, их взаимодействие с компонентами соединительной ткани и цитокинами, роль в иммунорегуляции (109 - 111, 129 - 142).

Представляют интерес работы, освещающие роль РОФ второго эшелона. Установлены иммуномодулирующие функции 1 - кислого гликопротеина во время острофазовой реакции (311, 317, 413), его участие в неспецифической защите организма (155 - 159). Показана противовоспалительная активность гаптоглобина, связанная с ингибицией метаболизма нейтрофилов, снижением хемотаксиса фагоцитов, угнетением пролиферации мононуклеаров крови на митогены, ингибицией катепсина В (388, 397, 363, 364).

Цп относится к РОФ третьего эшелона, поскольку его концентрация при различного рода повреждениях увеличивается в среднем на 50 %. Цп - это медьсодержащий гликопротеин б2 - глобулиновой фракции сыворотки крови человека и высших позвоночных. На современном этапе развития медицинской науки многообразие функциональных возможностей Цп может быть представлено следующим образом:

· регулятор обмена меди и железа в организме;

· участник ответа острой фазы;

· сывороточный антиоксидант: ингибитор ПОЛ, перехватчик супероксидных радикалов и других АФК;

· прооксидант: окисляет липопротеины низкой плотности;

· регулятор уровня биогенных аминов за счет аминооксидазной активности.

Особого внимания заслуживают гематотропные свойства Цп. Участвуя в регуляции обмена железа: Fe2+ > Fe3+ > трансферрин > гем, Цп рассматривается как компонент системы антианемических факторов. В эксперименте продемонстрирован его эритропоэтический эффект в условиях нормального и стимулированного кроветворения за счет усиления пролиферации и дифференцировки эритроидных элементов в костном мозге независимо от уровня эритропоэтина в сыворотке (71, 82, 151, 158).

Кроме того, установлено, что Цп влияет на количество и функцию тромбоцитов. Цп способен увеличивать количество тромбоцитов в интактном организме и на фоне хронической кровопотери. Показано, что он изменяет адгезивно - агрегационную активность тромбоцитов в норме и при экспериментальных нарушениях гемостаза опосредованно через изменение интенсивности процессов свободно - радикального окисления в плазме крови и тромбоцитах (54, 81, 83).

Возникает вопрос о возможности влияния Цп на лейкоциты. Как известно, именно лейкоцитам принадлежит ведущая роль в ответе на повреждение. В литературе содержатся скудные данные о подобного рода свойствах Цп. В эксперименте продемонстрирована его способность снижать количество лейкоцитов в ходе воспалительного процесса (104). Заслуживают внимание работы, демонстрирующие иммуномодулирующие свойства Цп (1, 14, 17, 105). Однако данные литературы по этому вопросу малочисленны и зачастую противоречивы, не вскрыты основные механизмы количественных и качественных перестроек лейкоцитов под влиянием Цп в физиологических условиях и при патологии. Это послужило основой для выбора темы настоящего исследования, целью которого было изучение характера и некоторых механизмов влияния Цп на количественный состав и функциональную активность лейкоцитов в условиях интактного организма и при экспериментальном моделировании лейкоцитозов и лейкопений различного генеза.

В экспериментах на интактных животных нами показано, что Цп способен увеличивать содержание лейкоцитов в периферической крови. Причем, этот эффект Цп существенно зависел от дозы. Однократное введение Цп в дозе 30 мг/кг не приводило к изменению количественного состава лейкоцитов в периферической крови. Применение Цп в дозе 10 мг/кг семикратно через 48 часов (суммарная доза 70 мг/кг) вызвало нейтрофильный лейкоцитоз за счет палочкоядерных форм на 5 сутки эксперимента, который сохранялся вплоть до 15 суток, однако, общее количество лейкоцитов при этом не изменилось. В литературе имеются сведения (29) о действии длительного введения Цп в дозе 10 мг/кг массы на показатели периферической крови у животных. Однако изучалось лишь общее содержание лейкоцитов, которое в ходе эксперимента достоверно не изменялось, исследователи обошли вниманием подсчет лейкоформулы.

При использовании Цп в дозе 30 мг/кг уже после двукратного введения с интервалом в 48 часов у интактных животных зафиксирован лейкоцитоз за счет клеток нейтрофильного ряда (рисунок 8). Дальнейшее введение Цп не приводило к изменению количества лейкоцитов в динамике, тем не менее, оно сохранялось повышенным, а к 12 суткам наряду с нейтрофилией развился лимфоцитоз. По данным дисперсионного однофакторного анализа, влияние Цп на количество лейкоцитов составляет от 32,40% до 59,13% от общего влияния суммы факторов.

Рисунок 8. Влияние Цп на показатели периферической крови интактных крыс. Доверительные интервалы при р=0,05

Таким образом, Цп в суммарной дозе 60 мг/кг способен вызывать лейкоцитоз у интактных животных. Увеличение количества лейкоцитов в периферической крови могло быть обусловлено несколькими причинами. Во - первых, усилением пролиферации клеток - предшественников в костном мозге. Во - вторых, усилением выброса зрелых клеток из костномозгового депо. В - третьих, перераспределением лейкоцитов за счет изменения адгезивных свойств лейкоцитов и /или эндотелия.

Нами показано, что Цп увеличивает содержание ЯСК и клеток миелоидного ряда в костном мозге у интактных животных с максимумом на 5 сутки, то есть в момент лейкоцитоза в периферической крови (рисунок 9). 5 суток - время, необходимое для созревания клеток миелоидного ряда в костном мозге. Итак, Цп вызывает лейкоцитоз у интактных животных через стимуляцию лейкопоэза.

Рисунок 9. Влияние Цп на количество клеток миелоидного ряда в костном мозге (1) и нейтрофилов в периферической крови (2) у интактных крыс. Доверительные интервалы при р=0,05