Разнообразие	Дисперсии (суммы квадратов)	Число степеней свободы	Вариансы (средние квадраты)	2х =66,08%+4,63% F = 66,08 =14,29 4,63 F = 74,12 =14,29 5,19 Fкрит=3,05 (при р<0,05)
Факториальное (межгрупповое)	222,37	3	74,12
Случайное (внутригрупповое)	114,14	22	5,19
Общее	336,51	25	13,46

Вывод: влияние фактора достоверно в высшей степени для всех объектов данной категории. Влияние исследуемого фактора может составить (>0,95) не менее 51,98% и не более 80,18% от общего влияния всей суммы факторов.

Таблица 55

Влияние Цп ( 70 мг/кг) на изменение количества палочкоядерных нейтрофилов (109/л) у интактных животных. Дисперсионный однофакторный комплекс по оценке силы и достоверности влияния

Разнообразие	Дисперсии (суммы квадратов)	Число степеней свободы	Вариансы (средние квадраты)	2х =53,72%+6,31% F = 53,72 =8,51 6,31 F = 0,52 =8,51 0,06 Fкрит=3,05 (при р<0,05)
Факториальное (межгрупповое)	1,55	3	0,52
Случайное (внутригрупповое)	1,34	22	0,06
Общее	2,89	25	0,12

Вывод: влияние фактора достоверно с вероятностью >0,999 для всех объектов данной категории. Влияние исследуемого фактора может составить (>0,95) не менее 34,47% и не более 72,96% от общего влияния всей суммы факторов.

У данной группы интактных животных нами зафиксированы следующие изменения функциональной активности лейкоцитов. Цп достоверно не изменял генерацию АФК лейкоцитами по показателям хемилюминесценции цельной крови, в том числе и в пересчете на 105 гранулоцитов (таблицы 56, 57). Однако, на 5 сутки эксперимента отмечена тенденция к снижению ХЛ - ответа лейкоцитов, в том числе и в пересчете на абсолютные величины, а на 8 сутки - к увеличению. К 5 суткам суммарное количество введенного Цп составило 30 мг/кг, а к 8 суткам - 40 мг/кг, то есть соответственно 75% и 100% от физиологического уровня. Интересно, что в модельных системах in vitro Цп в этих дозах вызывал стимуляцию функциональной активности лейкоцитов, а у первой группы интактных животных не вызывал изменения показателей ХЛ - ответа лейкоцитов. Между тем, необходимо учитывать условия и схему введения Цп в сравниваемых экспериментах. Возможное противоречие между результатами экспериментов in vitro и in vivo свидетельствует о том, что не всегда первые можно переносить в условия целостного организма, где имеют место сложные взаимоотношения гуморальных и клеточных регуляторных систем. Первой группе интактных животных препарат вводился одномоментно в дозе 75% от физиологического уровня, а второй группе - в дозе 25% длительно, поэтапно с учетом метаболизма Цп в организме.

Таблица 56

Влияние Цп на показатели хемилюминесценции цельной крови у интактных животных ( 70 мг/кг)

Показатели/ Группа животных	Спонтанное свечение	Индуцированное свечение
	Светосумма, у.е. х мин	Максимальная светимость, у.е.	Светосумма, у.е. х мин	Максимальная светимость, у.е.
	М+m		М+m		М+m		М+m
Контроль n=7	10,50 +3,15	8,34	1,57 +0,34	0,91	14,90 +3,59	9,50	2,13 +0,38	1,02
5 сутки n=7	5,93 +2,72	6,67	1,02 +0,37	0,92	8,35 +3,38	8,28	1,46 +0,45	1,11
8 сутки n=7	18,78 +5,05	12,37	2,92 +0,87	2,13	24,80 +4,66	11,42	4,02 +1,07	2,62
15 сутки n=7	14,24 +2,27	5,56	2,36 +0,57	1,40	19,65 +1,56	3,83	3,20 +0,48	1,17

Таблица 57

Влияние Цп на показатели хемилюминесценции цельной крови у интактных животных в пересчете на 105 гранулоцитов ( 70 мг/кг)

Показатели/ Группа животных	Спонтанное свечение	Индуцированное свечение
	Светосумма, у.е. х мин	Максимальная светимость, у.е.	Светосумма, у.е. х мин	Максимальная светимость, у.е.
	М+m		М+m		М+m		М+m
Контроль n=7	7,99 +2,37	6,27	1,23 +0,31	0,81	12,90 +2,44	5,98	1,79 +0,27	0,66
5 сутки n=7	3,93 +2,04	5,01	0,64 +0,29	0,72	6,17 +2,79	6,84	1,05 +0,38	0,92
8 сутки n=7	12,29 +4,38	10,74	1,83 +0,58	1,43	16,89 +5,02	12,29	2,59 +0,73	1,79
15 сутки n=7	6,85 +1,05	2,56	1,09 +0,20	0,49	10,50 +1,76	4,29	1,64 +0,25	0,60

Отмечено увеличение активности МПО и КБ на 8 сутки с возвращением к значениям показателей контрольной группы на 15 сутки (таблица 58). Как было упомянуто выше, на 8 сутки эксперимента была отмечена тенденция к росту показателей ХЛ лейкоцитов. Это свидетельствует о сопряженности в работе эффекторных систем лейкоцитов: НАДФН - оксидазной и миелопероксидазной. Увеличение количества О2- и других АФК, являющихся субстратом для МПО, приводит к росту активности последней.

По результатам дисперсионного анализа, влияние Цп на содержание МПО достоверно в высшей степени, а сила влияния составляет 40,27%+5,12 % от общего влияния всех факторов (таблица 59).

Таблица 58

Цитохимические показатели лейкоцитов периферической крови крыс при введении Цп интактным животным ( 70 мг/кг)

Группа животных / Показатели, СЦК (у.е.)	Контроль (n=20)	5 сутки (n=7)	8 сутки (n=7)	15 сутки (n=5)
	М+m		М+m		М+m		М+m
Миело- пероксидаза	0,39 +0,03	0,13	0,42 +0,04	0,09	0,66+0,04 р<0,001	0,10	0,45 +0,06	0,14
Катионные белки	0,87 +0,06	0,29	0,80 +0,02	0,06	1,21+0,09 р<0,01	0,19	0.99 +0,06	0,14

Примечание. р - показатель различия с контрольной группой по t - критерию.

Таблица 59

Влияние Цп ( 70 мг/кг) на содержание миелопероксидазы у интактных животных. Дисперсионный однофакторный комплекс по оценке силы и достоверности влияния

Разнообразие	Дисперсии (суммы квадратов)	Число степеней свободы	Вариансы (средние квадраты)	2х =40,27%+5,12% F = 40,27 =7,87 5,12 F = 0,122 =7,87 0,015 Fкрит=2,87 (при р<0,05)
Факториальное (межгрупповое)	0,37	3	0,12
Случайное (внутригрупповое)	0,55	36	0,02
Общее	0,91	39	0,02

Вывод: влияние фактора достоверно в высшей степени для всех объектов данной категории. Влияние исследуемого фактора может составить (>0,95) не менее 25,55% и не более 54,99% от общего влияния всей суммы факторов.

Влияние Цп в дозе 10мг/кг на содержание КБ в гранулоцитах интактных животных достоверно с вероятностью >0,95; сила влияния Цп составляет 22,60 % + 6,45 % (таблица 60).

Таблица 60

Влияние Цп ( 70 мг/кг) на содержание катионных белков в гранулоцитах у интактных животных. Однофакторный дисперсионный комплекс по оценке силы и достоверности влияния

Разнообразие	Дисперсии (суммы квадратов)	Число степеней свободы	Вариансы (средние квадраты)	2х =22,60%+6,45% F = 22,60 =3,50 6,45 F = 0,205 =3,50 0,058 Fкрит=2,87 (при р<0,05)
Факториальное (межгрупповое)	0,61	3	0,205
Случайное (внутригрупповое)	2,11	36	0,058
Общее	2,72	39	0,069

Вывод: влияние фактора достоверно с вероятностью >0,95 для всех объектов данной категории. Влияние исследуемого фактора может составить (>0,95) не менее 4,12% и не более 41,09% от общего влияния всей суммы факторов.

Наряду с внутриклеточным изменением метаболизма лейкоцитов по показателям ХЛ и содержанию МПО и КБ на 8 сутки эксперимента отмечено увеличение интенсивности фагоцитоза (таблица 61).

Таблица 61

Влияние Цп на фагоцитоз лейкоцитов периферической крови у интактных животных ( 70 мг/кг)

Группа животных/ Показатели	Контроль n=37	5 сутки n=7	8 сутки n=7	15сутки n=7
	М+m		М+m		М+m		М+m
Активность фагоцитоза, % клеток	25,46 +0,68	4,12	29,67 +3,75	9,18	29,83 +2,02	4,96	28,33 +2,55	6,25
Интенсивность фагоцитоза, у.е. / 1 клетку	3,78 +0,16	0,95	4,89 +0,64	1,56	5,96 +0,49 р<0,05	1,19	4,63 +0,54	1,31

Примечание. р - показатель различия с контрольной группой по t-критерию.

Итак, введение Цп в суммарной дозе 70 мг/кг привело к развитию у интактных животных нейтрофильного лейкоцитоза на 5 - 8 - 15 сутки эксперимента. Изменение функциональной активности лейкоцитов выражалось в тенденции к усилению генерации АФК, достоверному увеличению активности МПО и КБ и росте интенсивности фагоцитоза на 8 сутки эксперимента. Интересно, что функция лейкоцитов, несмотря на дальнейшее введение Цп не изменялась, а показатели функциональной активности лейкоцитов на 15 сутки эксперимента статистически не отличались от показателей контрольной группы. Из этого следует, что Цп способен лишь одномоментно изменять функцию лейкоцитов, а увеличение длительности введения Цп в дозе 10 мг/кг не имеет существенного значения для реализации функций лейкоцитов, то есть на 8 сутки эксперимента под влиянием Цп в суммарной дозе 40 мг/кг был достигнут лимит функциональной активности лейкоцитов. Напротив, увеличение общего количества нейтрофилов в относительных цифрах отмечено лишь на 15 сутки, а до этого имела место лишь тенденция к такому росту. Количество же палочкоядерых нейтрофилов как в относительных, так и в абсолютных величинах начинало увеличиваться с 5 суток эксперимента. Рост количества сегментоядерных нейтрофилов имел место, но не был статистически значимым.

Вышеизложенное явилось стимулом для изучения влияния Цп на количественный состав и функциональную активность лейкоцитов в еще большей дозе. Третьей группе интактных животных Цп вводили по следующей схеме: внутрибрюшинно в дозе 30 мг/кг шестикратно в течение 12 суток. Суммарная доза введенного Цп составила 180 мг/кг. Показатели определяли на 3, 5, 12 сутки от начала введения Цп.

На 5 сутки после введения Цп отмечено повышение общего количества лейкоцитов, которое сохранялось вплоть до 12 суток эксперимента (таблица 62).

Таблица 62

Показатели периферической крови крыс при введении Цп интактным животным ( 180 мг/кг)

Группа животных / Показатели	контроль n=11	3 сутки n=7	5 сутки n=11	12 сутки n=11
	М+m		М+m		М+m		М+m
Количество лейкоцитов, х109/л	10,22+0,75	2,49	11,19 +0,49	1,21	15,41 +0,77 р<0,005	2,57	13,57+0,78 р<0,05	2,58

Примечание. р - показатель различия с контрольной группой по t-критерию.

Таблица 63

Показатели периферической крови крыс при введении Цп интактным животным ( 180 мг/кг)

Группа животных / Показатели	Контроль (М+m; ) n=11	3 сутки (М+m; ) n=7	5 сутки (М+m; ) n=11	12 сутки (М+m; ) n=11
	%	109/л	%	109/л	%	109/л	%	109/л
Нейтрофилы	П / яд.	5,00+0,59; 1,96	0,51+0,07; 0,24	5,83+0,97; 2,38	0,64+0,09; 0,23	8,59+1,29;4,27*	1,29+0,18; 0,59*	4,77+0,69; 2,32	0,64+0,11; 0,35
	С / яд.	17,68+0,97; 3,20	1,79+0,15; 0,49	22,17+2,92; 7,15	2,51+0,39; 0,96	31,64+2,79; 9,27*	4,94+0,58; 1,92*	19,27+2,14; 7,09	2,48+0,17; 0,55*
	Всего	22,91+1,31; 4,34	2,33+0,20; 0,67	28,33+2,89; 7,08	3,19+0,39; 0,96	40,23+3,21; 10,64*	6,23+0,62; 2,05*	24,14+2,14; 7,09	3,14+0,14; 0,47*
Эозинофилы	0,91+0,31; 1,02	0,09+0,03; 0,09	0,92+0,54; 1,32	0,10+0,06; 0,14	0,77+0,26; 0,88	0,11+0,04; 0,13	1,14+0,23; 0,78	0,15+0,03; 0,10
Лимфоциты	75,41+1,17; 3,87	7,72+0,61; 2,02	71,08+2,86; 7,02	7,95+0,49; 1,19	58,23+3,26 10,80*	9,01+0,73; 2,44	74,27+2,19; 7,26	10,22+0,83; 2,74*
Моноциты	1,00+0,24; 0,81	0,10+0,03; 0,09	0	0	0,77+0,23; 0,75	0,11+0,03; 0,11	0,64+0,14; 0,45	0,09+0,02; 0,06

Примечание: * - показатель различия (р<0,05) с контрольной группой по t-критерию.

Размещено на http://www.allbest.ru/

Лейкоцитоз 5 суток обусловлен преимущественно нейтрофилами (таблица 63). В развитие лейкоцитоза 12 суток наряду с сегментоядерными нейтрофилами внесли вклад и лимфоциты, содержание которых достоверно увеличилось в абсолютных цифрах к этому сроку эксперимента. Кроме того, на 5 сутки эксперимента обнаружена относительная перераспределительная лимфоцитопения. Обращает на себя внимание факт, что увеличение суммарной дозы Цп не сопровождалось дальнейшим увеличением количества лейкоцитов, что подтверждается отсутствием достоверных изменений между количеством лейкоцитов на 5 и 12 сутки, а содержание нейтрофилов на 12 сутки достоверно снижалось по сравнению с их содержанием на 5 сутки. Для оценки силы и достоверности влияния Цп в дозе 30 мг/кг на содержание лейкоцитов проведен дисперсионный однофакторный анализ (таблицы 64, 65).

Таблица 64

Влияние Цп ( 180 мг/кг) на изменение общего количества лейкоцитов у интактных животных. Дисперсионный однофакторный комплекс по оценке силы и достоверности влияния

Разнообразие	Дисперсии (суммы квадратов)	Число степеней свободы	Вариансы (средние квадраты)	2х =45,76%+4,65% F = 45,76 =9,84 4,65 F = 56,73 =9,84 5,76 Fкрит=2,87 (при р<0,05)
Факториальное (межгрупповое)	170,20	3	56,73
Случайное (внутригрупповое)	201,72	35	5,76
Общее	371,92	38	9,79

Вывод: влияние фактора достоверно в высшей степени для всех объектов данной категории. Влияние исследуемого фактора может составить (>0,95) не менее 32,40 % и не более 59,13 % от общего влияния всей суммы факторов.

Таблица 65

Влияние Цп ( 180 мг/кг) на изменение количества нейтрофилов (109/л) у интактных животных. Дисперсионный однофакторный комплекс по оценке силы и достоверности влияния

Разнообразие	Дисперсии (суммы квадратов)	Число степеней свободы	Вариансы (средние квадраты)	2х =64,27%+3,06% F = 64,27 =20,98 3,06 F = 31,86 =20,98 1,52 Fкрит=2,87 (при р<0,05)
Факториальное (межгрупповое)	95,58	3	31,86
Случайное (внутригрупповое)	53,15	35	1,52
Общее	148,73	38	3,91

Вывод: влияние фактора достоверно в высшей степени для всех объектов данной категории. Влияние исследуемого фактора может составить (>0,95) не менее 55,46 % и не более 73,07 % от общего влияния всей суммы факторов.

Таким образом, влияние Цп достоверно в высшей степени, а сила влияния составляет 45,76%+4,65% для общего количества лейкоцитов и 64,27%+3,06% для абсолютного содержания нейтрофилов.

Причинами Цп - обусловленного лейкоцитоза могли быть следующие. Во - первых, увеличение продукции лейкоцитов в костном мозге, во - вторых, перераспределение лейкоцитов за счет выброса зрелых клеток из депо костного мозга. Изменение адгезивных свойств лейкоцитов под влиянием Цп не могло привести к лейкоцитозу, т.к. предыдущие исследования показали, что Цп увеличивает адгезию лейкоцитов к интактному эндотелию, что приводит к снижению количества лейкоцитов в циркулирующем пуле периферической крови. Однако, даже несмотря на рост адгезии лейкоцитов у данной группы интактных животных под влиянием Цп развился лейкоцитоз. Раннее нами было показано, что Цп при воспалении обладает свойством, подобным лейкопоэтическому. Возможно, что подобное влияние Цп является самостоятельным и проявляется в условиях интактного кроветворения. Для проверки этой гипотезы нами проведено исследование количества ЯСК и морфологического состава костного мозга интактных крыс на фоне введения Цп (таблицы 66, 67).

Картина костномозгового кроветворения в целом соответствовала динамике содержания зрелых форм клеточных элементов белого ряда в периферической крови: на 5 сутки отмечено увеличение количества ЯСК, абсолютного содержания палочкоядерных, сегментоядерных нейтрофилов и общего количества клеток нейтрофильного ряда, абсолютная эозинофилия, относительная лимфоцитопения, рост лейкоэритробластического отношения.

Для оценки силы и достоверности влияния Цп в дозе 30 мг/кг на содержание ЯСК и общего количества нейтрофилов в костном мозге проведен однофакторный дисперсионный анализ (таблицы 68, 69). Как видно, влияние Цп статистически значимо и составляет 41,22%+6,92% для ЯСК и 42,73%+6,73% для общего количества нейтрофилов в костном мозге. Причем, вклад Цп в первом случае может составить не менее 16,39% и не более 66,06%от общего влияния всей суммы факторов, а во втором соответственно не менее 18,54% и не более 66,93%.

Таблица 66

Влияние Цп на морфологический состав костного мозга интактных крыс ( 180 мг/кг)

Показатели, % клеток	контроль n=8	5 сутки n=5	12 сутки n=7
	М+m		М+m		М+m
Миелобласты	1,40+0,28	0,80	1,04+0,13	0,29	1,09+0,36	0,95
Промиелоциты	0,30+0,08	0,24	0,36+0,16	0,36	0,40+0,12	0,21
Миелоциты	3,00+0,53	1,50	2,60+0,83	1,85	2,170,29	0,77
Метамиелоциты	7,43+0,76	2,14	5,84+0,74	1,66	6,17+0,49	1,30
П/яд.нейтрофилы	13,80+0,59	1,66	16,24+1,35	3,02	11,11+1,67	4,41
С/яд. нейтрофилы	11,20+1,39	3,95	19,64+1,54*	3,44	14,20+1,41	3,72
Все нейтрофилы	37,00+1,71	4,85	43,72+3,69	8,25	35,14+2,96	7,83
Эозинофилы	8,68+0,88	2,49	10,40+0,62	1,38	8,03+1,38	3,66
Базофилы	0,28+0,11	0,32	0,32+0,08	0,18	0,26+0,07	0,19
Моноциты	3,08+0,58	1,65	4,20+0,99	2,23	3,66+0,33	0,87
Лимфоциты	12,90+1,61	4,54	7,88+1,42*	3,17	11,34+1,15	3,03
Плазмоциты	0,18+0,07	0,19	0,28+0,15	0,33	0,66+0,16	0,43
Мегакариоциты	0,38+0,08	0,23	0,28+0,05	0,11	0,31+0,06	0,16
ЯСК эритроидного ряда	37,43+2,11	5,98	30,92+0,69*	1,55	40,46+2,31	6,12
Лейко/эритро	1,71+0,17	0,49	2,23+0,07*	0,16	1,51+0,14	0,38

Примечание. * - показатель различия (р<0,05) с контрольной группой по t-критерию.

Таблица 67

Влияние Цп на количество ЯСК и морфологический состав костного мозга интактных крыс ( 180 мг/кг)

Показатели, х 106/100 г массы тела	контроль n=8	5 сутки n=5	12 сутки n=7
	М+m		М+m		М+m
ЯСК	57,63+2,27	6,42	77,61+5,99*	13,39	67,41+4,29	11,36
Миелобласты	0,82+0,17	0,48	0,78+0,08	0,17	0,87+0,28	0,74
Промиелоциты	0,18+0,05	0,14	0,29+0,14	0,31	0,26+0,07	0,18
Миелоциты	1,69+0,35	0,99	2,13+0,74	1,66	1,45+0,21	0,54
Метамиелоциты	4,35+0,46	1,31	4,62+0,79	1,78	4,16+0,44	1,17
П/яд.нейтрофилы	7,94+0,34	0,95	12,58+1,44*	3,22	7,11+0,66	1,75
С/яд. нейтрофилы	6,64+1,05	2,96	15,43+2,09*	4,69	9,65+1,25	3,31
Все нейтрофилы	21,53+1,69	4,79	34,69+4,05*	11,07	23,28+1,77	4,69
Эозинофилы	4,96+0,49	1,38	8,00+0,61*	1,37	5,69+1,19	3,15
Базофилы	0,17+0,07	0,21	0,26+0,08	0,17	0,17+0,05	0,13
Моноциты	1,78+0,34	0,97	3,15+0,72	1,62	2,42+0,19	0,50
Лимфоциты	7,39+0,97	2,74	5,83+0,73	1,63	7,64+1,00	2,65
Плазмоциты	0,10+0,04	0,11	0,23+0,13	0,29	0,44+0,11	0,29
Мегакариоциты	0,21+0,04	0,10	0,21+0,04	0,09	0,22+0,05	0,12
ЯСК эритроидного ряда	21,40+1,13	3,20	24,08+2,21	4,95	27,46+2,29*	6,50

Примечание. * - показатель различия (р<0,05) с контрольной группой по t-критерию.

Таблица 68

Однофакторный дисперсионный комплекс по оценке силы и достоверности влияния Цп ( 180 мг/кг) на изменение количества ЯСК в костном мозге у интактных животных

Разнообразие	Дисперсии (суммы квадратов)	Число степеней свободы	Вариансы (средние квадраты)	2х =41,22%+6,92% F = 41,22 =5,96 6,92 F = 624,20 =5,96 104,70 Fкрит=3,59 (при р<0,05)
Факториальное (межгрупповое)	1248,40	2	624,20
Случайное (внутригрупповое)	1780,07	17	104,70
Общее	3028,47	19	159,39

Таблица 69

Однофакторный дисперсионный комплекс по оценке силы и достоверности влияния Цп ( 180 мг/кг) на изменение общего количества нейтрофилов (106/100г) в костном мозге у интактных животных

Разнообразие	Дисперсии (суммы квадратов)	Число степеней свободы	Вариансы (средние квадраты)	2х =42,73%+6,73% F = 42,73 =6,34 6,73 F = 291,71 =6,34 45,99 Fкрит=3,59 (при р<0,05)
Факториальное (межгрупповое)	583,42	2	291,71
Случайное (внутригрупповое)	781,83	17	45,99
Общее	1365,25	19	71,86

Полученные результаты позволяют утверждать, что Цп обладает стимулирующим эффектом в отношении пролиферации клеток гранулоцитарного ростка костного мозга.

Результаты исследований показали, что на 5 сутки эксперимента отмечено как увеличение количества лейкоцитов в периферической крови, так и ускорение их созревания в костном мозге. Поскольку 5 суток - время, необходимое для созревания клеток миелоидного ряда после воздействия стимула, то закономерно отметить, что увеличение пролиферации клеток гранулоцитарного ростка костного мозга сопровождается и ускоренным выходом нейтрофилов в периферическую кровь.

Кроме того, нами отмечены выраженные изменения функциональной активности лейкоцитов. Цп усиливал эффект активации гранулоцитов цельной крови по показателям ХЛ на 5 сутки (таблица 70).

Таблица 70

Влияние Цп на показатели хемилюминесценции цельной крови у интактных животных ( 180 мг/кг)

Показатели/ Группа животных	Спонтанное свечение	Индуцированное свечение
	Светосумма, у.е. х мин	Максимальная светимость, у.е.	Светосумма, у.е. х мин	Максимальная светимость, у.е.
	М+m		М+m		М+m		М+m
Контроль n=12	14,53 +2,63	9,11	2,21 +0,33	1,14	18,38 +4,34	15,38	2,35 +0,63	1,84
3 сутки n=6	13,53 +1,90	4,66	2,14 +0,35	0,85	13,86 +3,46	8,47	1,82 +0,39	0,97
5 сутки n=11	20,31 +2,62	8,69	2,92 +0,38	1,25	34,63 +6,17 *	20,46	4,19 +0,69	2,31
12 сутки n=7	15,25 +1,94	5,14	2,18 +0,29	0,76	31,63 +9,87	26,12	4,42 +1,35	3,58

Примечание. * - р<0,05 по сравнению с контрольной группой по t-критерию.

Но этот эффект обусловлен ростом количества гранулоцитов, а не возрастанием функции, так как пересчет на 105гранулоцитов подобных изменений не обнаружил (таблица 71). Более того, имело место снижение спонтанной светосуммы свечения и максимальной светимости на 5 и 12 сутки эксперимента.

Таблица 71

Влияние Цп на показатели хемилюминесценции цельной крови у интактных животных в пересчете на105гранулоцитов ( 180 мг/кг)

Показатели/ Группа животных	Спонтанное свечение	Индуцированное свечение
	Светосумма, у.е. х мин	Максимальная светимость,у.е.	Светосумма, у.е. х мин	Максимальная светимость, у.е.
	М+m		М+m		М+m		М+m
Контроль n=11	6,06 +1,08	3,57	0,98 +0,12	0,41	8,56 +2,11	6,98	1,12 +0,25	0,84
3 сутки n=6	4,67 +0,84	1,88	0,74 +0,18	0,39	6,31 +1,67	3,74	0,99 +0,37	0,86
5 сутки n=11	3,49 +0,57 р<0,05	1,79	0,50 +0,08 р<0,01	0,25	6,35 +0,91	2,88	0,77 +0,10	0,33
12 сутки n=6	3,85 +0,53 р<0,05	1,31	0,64 +0,08 р<0,05	1,19	6,87 +1,74	4,27	1,43 +0,38	0,92

Примечание. р - показатель различия с контрольной группой по t-критерию.

Результаты проведенного дисперсионного однофакторного анализа показали, что влияние Цп на показатели спонтанного ХЛ - ответа лейкоцитов статистически значимо, причем, влияние Цп на СС может составить не менее 1,0 % и не более 48,0 %, а на МС не менее 7,54% и не более 51,91% от общего влияния всей суммы факторов (таблицы 72, 73).

Таблица 72

Дисперсионный однофакторный комплекс по оценке силы и достоверности влияния Цп ( 180 мг/кг) на изменение показателей спонтанной ХЛ цельной крови (СС, у.е. х мин/105гранулоцитов) у интактных животных

Разнообразие	Дисперсии (суммы квадратов)	Число степеней свободы	Вариансы (средние квадраты)	2х =24,59%+8,08% F = 24,59 =3,04 8,08 F = 19,49 =3,04 6,40 Fкрит=2,95 (при р<0,05)
Факториальное (межгрупповое)	58,48	3	19,49
Случайное (внутригрупповое)	179,31	28	6,40
Общее	237,79	31	7,67

Таблица 73

Дисперсионный однофакторный комплекс по оценке силы и достоверности влияния Цп (30мг/кг) на изменение показателей спонтанной ХЛ цельной крови (МС, у.е. х мин/105гранулоцитов) у интактных животных

Разнообразие	Дисперсии (суммы квадратов)	Число степеней свободы	Вариансы (средние квадраты)	2х =29,73%+7,53% F = 29,73 =3,95 7,53 F = 0,43 =3,95 0,11 Fкрит=2,95 (при р<0,05)
Факториальное (межгрупповое)	1,28	3	0,43
Случайное (внутригрупповое)	3,02	28	0,11
Общее	4,30	31	0,14

Активность МПО достоверно увеличилось на 3 сутки (таблица 74), а активность КБ - на 5 сутки и достигло максимума на 12 сутки. Результаты однофакторного дисперсионного анализа по влиянию Цп в суммарной дозе 180 мг/кг на цитохимические показатели лейкоцитов приведены в таблицах 75, 76. Таким образом, влияние Цп достоверно с вероятностью >0,95 для МПО и >0,995 для КБ, а сила влияния составляет 25,85%+6,01% и 33,94%+5,34% соответственно.

Таблица 74

Цитохимические показатели лейкоцитов периферической крови крыс при введении Цп интактным животным ( 180 мг/кг)

Группа животных/ Показатели, СЦК (у.е.)	Контроль (n=20)	3 сутки (n=7)	5 сутки (n=7)	12 сутки (n=5)
	М+m		М+m		М+m		М+m
Миело-пероксидаза	0,39 +0,03	0,13	0,58 +0,05*	0,14	0,46 +0,05	0,13	0,37 +0,04	0,09
Катионные белки	0,87 +0,06	0,29	0,75 +0,01	0,04	1,09 +0,06*	0,16	1,28 +0,07*	0,17

Примечание. * - р<0,05 по сравнению с контролем.

Интересно отметить, что увеличение активности МПО произошло на 3 сутки после введения Цп в суммарной дозе 60 мг/кг, то есть примерно в той же дозе, что и у второй группы интактных животных (на 8 сутки после суммарной дозы 40 мг/кг). Можно предположить, что уменьшение количества АФК, продуцируемых фагоцитами на 5 и 12 сутки эксперимента, связано с увеличением активности МПО на 3 сутки эксперимента. Таким образом, первоначальное увеличение активности фермента повлекло за собой снижение содержания субстрата (О2- и другие АФК). В литературе имеются данные о том, что Цп снижает уровень спонтанной ХЛ крови экспериментальных животных (86). Кроме того, показано, что Цп в 100 раз более эффективно, чем СОД в цитоплазме фагоцитов (Cu, Zn - СОД) перехватывает OCl Ї , однако, в 10 раз менее эффективно взаимодействует с О2Ї радикалом; удаление ионов меди из молекулы Цп не влияет на его способность тушить ХЛ (23, 393).

Таблица 75

Влияние Цп ( 180 мг/кг) на содержание миелопероксидазы у интактных животных. Дисперсионный однофакторный комплекс по оценке силы и достоверности влияния

Разнообразие	Дисперсии (суммы квадратов)	Число степеней свободы	Вариансы (средние квадраты)	2х =25,85%+6,01% F = 25,85 =4,29 6,01 F = 0,0704 =4,29 0,0164 Fкрит=2,86 (при р<0,05)
Факториальное (межгрупповое)	0,211	3	0,704
Случайное (внутригрупповое)	0,606	37	0,016
Общее	0,817	40	0,020

Вывод: влияние фактора достоверно с вероятностью >0,95 для всех объектов данной категории. Влияние исследуемого фактора может составить (>0,95) не менее 8,66% и не более 43,04% от общего влияния всей суммы факторов.

Таблица 76

Влияние Цп ( 180 мг/кг) на содержание катионных белков (СЦК, у.е.) в гранулоцитах у интактных животных. Однофакторный дисперсионный комплекс по оценке силы и достоверности влияния

Разнообразие	Дисперсии (суммы квадратов)	Число степеней свободы	Вариансы (средние квадраты)	2х =33,94%+5,34% F = 33,94 =6,34 5,34 F = 0,3603=6,34 0,0568 Fкрит=2,86 (при р<0,05)
Факториальное (межгрупповое)	1,081	3	0,3603
Случайное (внутригрупповое)	2,103	37	0,0568
Общее	3,183	40	0,0790

Вывод: влияние фактора достоверно с вероятностью >0,995 для всех объектов данной категории. Влияние исследуемого фактора может составить (>0,95) не менее 18,64% и не более 49,26% от общего влияния всей суммы факторов.

Показатели фагоцитоза достоверно возрастали, начиная с 3 суток, максимальный рост активности и интенсивности фагоцитоза отмечен на 5 сутки (таблица 77). Влияние Цп на показатели фагоцитоза по результатам дисперсионного анализа достоверно в высшей степени (таблицы 78, 79).

Таблица 77

Влияние Цп на фагоцитоз лейкоцитов периферической крови у интактных животных ( 180 мг/кг)

Группа Животных/ Показатели	Контроль n=37	3 сутки n=7	5 сутки n=7	12сутки n=7
	М+m		М+m		М+m		М+m
Активность фагоцитоза, % клеток	25,46 +0,68	4,12	35,00 +0,95 р<0,001	2,12	41,40 +1,90 р<0,001	4,34	37,86 +1,86 р<0,005	4,91
Интенсивность фагоцитоза, у.е. / 1 клетку	3,78 +0,16	0,95	4,95 +0,24 р<0,05	0,54	5,38 +0,31 р<0,01	0,69	5,03 +0,39 р<0,05	1,04

Примечание. р - показатель различия с контрольной группой по t-критерию.

Таблица 78

Влияние Цп ( 180 мг/кг) на фагоцитоз лейкоцитов (активность, % клеток) у интактных животных. Дисперсионный однофакторный комплекс по оценке силы и достоверности влияния

Разнообразие	Дисперсии (суммы квадратов)	Число степеней свободы	Вариансы (средние квадраты)	2х =69,68%+1,82% F = 69,68 =38,31 1,82 F = 650,65 =38,31 19,68 Fкрит=2,79 (при р<0,05)
Факториальное (межгрупповое)	1951,96	3	650,65
Случайное (внутригрупповое)	849,25	50	19,68
Общее	2801,20	53	52,85

Вывод: влияние фактора в высшей степени достоверно для всех объектов данной категории. Влияние исследуемого фактора может составить (>0,95) не менее 64,61% и не более 74,76% от общего влияния всей суммы факторов.

Таблица 79

Влияние Цп ( 180 мг/кг) на фагоцитоз лейкоцитов (интенсивность, у.е./клетку) у интактных животных. Дисперсионный однофакторный комплекс по оценке силы и достоверности влияния

Разнообразие	Дисперсии (суммы квадратов)	Число степеней свободы	Вариансы (средние квадраты)	2х =33,22%+4,01% F = 33,22 =8,29 4,01 F = 6,99 =8,29 0,84 Fкрит=2,79 (при р<0,05)
Факториальное (межгрупповое)	20,97	3	6,99
Случайное (внутригрупповое)	42,15	50	0,84
Общее	63,12	53	1,19

Вывод: влияние фактора достоверно в высшей степени для всех объектов данной категории. Влияние исследуемого фактора может составить (>0,95) не менее 22,05% и не более 44,40% от общего влияния всей суммы факторов.

Итак, на основании изучения в условиях in vivo показано влияние Цп на количественный состав и функциональную активность лейкоцитов у интактных животных.

Применение Цп в дозе 10 мг/кг многократно (суммарная доза 70 мг/кг) и 30 мг/кг однократно не приводило к достоверному изменению общего количества лейкоцитов в периферической крови, что согласуется с данными других исследователей (29 ).

Стимуляция лейкопоэза отмечена при введении Цп в дозе 30 мг/кг с интервалом 48 часов уже на 5 сутки, то есть в суммарной дозе 60 мг/кг.

Цп изменяет функциональную активность лейкоцитов. Увеличение внутриклеточного содержания МПО и КБ в гранулоцитах, рост фагоцитарной активности лейкоцитов под влиянием Цп может быть обусловлен рецепторными взаимодействиями и влиянием Цп на адгезивную способность лейкоцитов. Это подтверждается данными литературы о наличии рецепторов для Цп на плазматической мембране моноцитов и гранулоцитов (149, 391).

Вероятно, взаимодействие Цп с гранулоцитами через специфические рецепторы приводит к активации фагоцитирующих клеток, следствием чего, в частности, является увеличение активности МПО и КБ в гранулоцитах.

Рост интенсивности фагоцитоза свидетельствует об увеличении адгезивной и поглотительной способности фагоцитов под влиянием Цп.

В ходе экспериментов было показано, что Цп увеличивает содержание МПО, которая сопряжена с кислородзависимыми бактерицидными механизмами, обеспечивающими эффективный киллинг целого ряда возбудителей в аэробных условиях. Кроме того, под влиянием Цп отмечено увеличение содержания КБ, которые относят к кислороднезависимой бактерицидной системе. Вышеизложенное позволяет предположить участие Цп в неспецифической антимикробной резистентности (рисунок 5).

Таким образом, результаты проведенных экспериментов по изучению патофизиологической роли Цп при воспалении позволяют высказать следующее заключение.

Цп обладает самостоятельным влиянием на количественный состав и функциональную активность лейкоцитов, циркулирующих в периферической крови в ходе воспалительного процесса.

Применение Цп при воспалении приводит к усилению пролиферативной активности белого ростка костного мозга и одновременно к снижению количества циркулирующих в периферической крови лейкоцитов. Причем, подобный лейкопоэтическому эффект Цп является самостоятельным и независимым от воспаления, он проявляется в условиях интактного кроветворения. Снижение количества циркулирующих в периферической крови лейкоцитов при воспалении, несмотря на стимуляцию лейкопоэза, вызвано усилением их адгезивной способности к эндотелию под влиянием Цп.

Цп выступает в качестве модулятора функциональной активности лейкоцитов при воспалении. На клеточном уровне это проявляется снижением активности и увеличением интенсивности фагоцитоза. Механизм изменения фагоцитарной функции лейкоцитов связан со снижением количества фагоцитирующих клеток и увеличением адгезивной способности фагоцитов под влиянием Цп. На субклеточном уровне Цп содержание МПО снижает, а КБ - увеличивает. Цп нормализует способность лейкоцитов при воспалении к генерации АФК, приближая показатели ХЛ к группе интактных животных.

Размещено на http://www.allbest.ru/

Глава 4. Патофизиологическая роль церулоплазмина при «невоспалительных» лейкоцитозах

4.1 Влияние церулоплазмина на количественный состав лейкоцитов при «невоспалительных» лейкоцитозах

На предыдущем этапе работы было показано, что Цп способен изменять количество и функцию лейкоцитов при лейкоцитозе, вызванным асептическим воспалением. Возникает вопрос: влияние Цп на количественный состав и функциональную активность лейкоцитов ограничивается только воспалительным лейкоцитозом или имеет место при других, «невоспалительных» перестройках количественного состава лейкоцитов.

В качестве моделей «невоспалительных» лейкоцитозов использовали лейкоцитоз, развивающийся при введении растворимого экзогенного пирогена и интоксикацию солями бария.

Известно, что пирогенал - это лекарственный препарат, изготавливаемый из липополисахаридов, образующихся в процессе жизнедеятельности микроорганизмов Pseudomonas aeruginosaе и др. При введении пирогенала наряду с повышением температуры тела наблюдаются кратковременная лейкопения, сменяющаяся лейкоцитозом, увеличение проницаемости тканей, подавление развития рубцовой ткани, улучшение восстановительных процессов в нервной ткани (93).

Лейкоцитоз в ответ на пирогенал вызывали однократным внутримышечным введением препарата в дозе 5 мкг/кг массы тела. Опытной группе животных одновременно с пирогеналом вводили внутрибрюшинно однократно церулоплазмин в дозе 60 мг/кг. Контрольной группе животных вводили стерильный физиологический раствор.

Показатели изучали через 8 и 24 часа от введения пирогенала.

В качестве другой модели лейкоцитоза была выбрана интоксикация хлоридом бария, поскольку показано, что длительное введение солей бария вызывает гиперплазию миелоидного ростка костного мозга и приводит к увеличению количества лейкоцитов в периферической крови (77, 143).

Подопытным животным вводили хлорид бария из расчета 10 мг/кг массы тела подкожно длительно в течение 20 суток до повышения количества лейкоцитов в периферической крови. Опытной группе животных на фоне бариевой интоксикации вводили церулоплазмин внутрибрюшинно в дозе 30 мг/кг массы тела на 7, 10, 13 сутки от начала введения хлорида бария. Показатели определяли на 11, 18, 22 и 30 сутки эксперимента.

Все животные в экспериментах были разделены на 3 группы. Группа 1 - интактный контроль, этой группе животных не вводили никаких веществ. Группа 2 - животные, у которых моделировали лейкоцитоз, вызванный введением пирогенала или бариевой интоксикацией. Группа 3 - животные, которым на фоне лейкоцитоза вводили церулоплазмин по описанным выше схемам.

Сначала изучали активность Цп в сыворотке крови у животных при введении пирогенала. Результаты представлены в таблице 80. Как видно, при введении пирогенала не отмечено изменения активности Цп в сыворотке через 8 и 24 часа. Это связано с тем, что в данном случае отсутствует повреждение тканей, стадия альтерации классического воспалительного процесса, а сам лейкоцитоз в ответ на введение растворимого экзогенного пирогена поэтому относится к «невоспалительным».

Активность Цп на фоне бариевой интоксикации определяли в момент максимального содержания лейкоцитов в периферической крови на 18 сутки эксперимента. Как видно из таблицы 81, активность Цп в сыворотке при этом достоверно не изменилась. Полученный факт, как и в случае с пирогеналом, позволяет отнести этот вид лейкоцитоза к «невоспалительным».

Таблица 80

Активность Цп в сыворотке крови при введении пирогенала

Группы животных / Показатель	Интактные животные n=13	Пирогенал
		8 часов n=5	24 часа n =5
	М+m		М+m		М+m
Активность Цп, усл. ед.	72,08+2,41	8,68	70,40+2,84	6,35	72,80+2,31	5,17

Таблица 81

Активность Цп в сыворотке крови на фоне бариевой интоксикации

Группы животных / Показатель	Интактные животные n=13	Барий 18 сутки n=5
	М+m		М+m
Активность Цп, усл. ед.	72,08+2,41	8,68	65,60+5,89	13,16

Ответная реакция на введение экзогенного пирогена выражалась в появлении у животных контрольной группы лейкоцитоза со сдвигом лейкоформулы влево через 8 часов (таблицы 82 - 84). Лейкоцитоз был обусловлен увеличением количества молодых и зрелых форм нейтрофильных лейкоцитов как в относительных, так и в абсолютных величинах. В это же время имел место относительный перераспределительный лимфоцитоз. Полагают, что увеличение количества лейкоцитов в периферической крови в ответ на введение пирогенала обусловлено выбросом зрелых клеток из костномозгового депо. В пользу этого свидетельствуют быстрота наступления реакции и увеличение количества молодых форм нейтрофилов, что говорит о поступлении клеток из костного мозга и исключает перераспределительный лейкоцитоз, обусловленный мобилизацией пристеночного пула лейкоцитов (304).

Через 24 часа от введения пирогенала количество лейкоцитов и их популяций в периферической крови у контрольных животных не отличалось от нормы.

Цп не приводил к изменению общего количества лейкоцитов при лейкоцитозе в ответ на экзогенный пироген (таблица 82). Однако, анализ лейкоформулы показал, что через 8 часов от начала эксперимента у животных опытной группы имело место снижение в относительных величинах количества нейтрофилов и лимфоцитов в периферической крови (таблица 83). Пересчет на абсолютные величины обнаружил только снижение количества нейтрофилов преимущественно за счет сегментоядерных форм (таблица 84). Отмеченный факт, вероятно, связан с влиянием Цп на адгезивную способность лейкоцитов. Предыдущие исследования показали, что Цп способен увеличивать адгезию лейкоцитов к интактному и активированному гистамином эндотелию. В пользу этого предположения свидетельствует также и то, что уменьшалось количество сегментоядерных, то есть зрелых в функциональном отношении лейкоцитов, на которые способен оказывать влияние Цп. Через 24 часа от начала эксперимента под влиянием Цп количество нейтрофилов снижалось по сравнению с 8-м часом, однако, было достоверно выше, чем у контрольной группы. Причем, нейтрофилия была обусловлена исключительно сегментоядерными клетками.

Увеличение количества нейтрофилов не могло быть связано со стимуляцией синтетических процессов и пролиферативной активности костного мозга под влиянием Цп, так как время, необходимое для созревания нейтрофилов составляет в среднем 5 суток. Это не могло быть связано и с влиянием Цп на адгезивную способность лейкоцитов периферической крови к эндотелию сосудистой стенки, поскольку это привело бы к снижению количества нейтрофилов в циркулирующем пуле.

Не отрицая возможности других механизмов, мы предполагаем, что нейтрофилия, развившаяся в опытной группе на 24 час эксперимента, связана с влиянием Цп на выход клеток из пула постмитотических клеток костного мозга. Неделящиеся гранулоциты, метамиелоциты, палочкоядерные и сегментоядерные клетки, сохраняются в костном мозге в виде резерва, который при необходимости может быть мобилизован (72, 211, 253, 437). Адгезия зрелых гранулоцитов к внеклеточному матриксу и эндотелиальной выстилке синусоидов костного мозга является ключевой фазой выхода клеток в кровоток (227 - 229, 369). Мы полагаем, что Цп увеличивает прилипание зрелых форм нейтрофилов к эндотелию синусоидов и тем самым способствует выходу их из костного мозга.

Цп, таким образом, может обладать способностью не только усиливать пролиферацию белого ростка костного мозга в условиях интактного и стимулированного кроветворения, но и способствовать выходу созревших лейкоцитов из костного мозга.

Таблица 82

Влияние Цп на количество лейкоцитов в периферической крови крыс при введении пирогенала ( х 109/л, М+m; )

Группа 1 Интактные крысы n=12	Группа 2 (пирогенал + физ. р - р) n=6	Группа 3 (пирогенал + Цп) n=6
	8 часов	24 часа	8 часов	24 часа
12,99+0,35; 1,21	15,21+0,84; 2,37 р1-2<0,05	12,83+1,08 2,65	14,56+0,97; 2,38	15,09+1,49; 3,34

Примечание. р - достоверность различий между группами по t- критерию.

Таблица 83

Влияние Цп на показатели периферической крови крыс при введении пирогенала (М+m; )

Показатели, % клеток	Группа 1 Интактные крысы n=12	Группа 2 (пирогенал + физ. р - р) n=6	Группа 3 (пирогенал + Цп) n=6
		8 часов	24 часа	8 часов	24 часа
Нейтрофилы	П / яд.	3,08+0,48; 1,68	5,67+0,33; 0,82*	2,50+0,56; 1,38	4,17+0,48; 1,17**	2,40+0,60; 1,34
	С / яд.	11,83+0,89; 3,09	30,33+1,67; 4,08*	10,50+0,43; 1,05	18,00+1,98; 4,86*,**	14,00+1,52; 3,39
	Всего	14,91+1,09; 3,78	36,00+1,69; 4,15*	13,17+0,75; 1,83	22,17+2,23; 5,46*, **	16,40+1,66; 3,71
Эозинофилы	1,33+0,41; 1,44	1,33+0,49; 1,21	2,67+0,84; 2,07	1,50+0,34; 0,84	2,20+0,58; 1,30
Лимфоциты	83,42+1,41; 4,87	62,33+1,93; 4,72*	84,17+1,08; 2,64	75,50+2,45; 5,99*, **	81,20+1,74; 3,89
Моноциты	0,33+0,14; 0,49	0,33+0,21; 0,52	0,33+0,21; 0,52	0,83+0,31; 0,75	0,20+0,20; 0,45

Примечание. * - достоверность различий с интактными животными (р1-2, р1-3), ** - между опытной и контрольной группами ( р2-3) по t- критерию.

Таблица 84

Влияние Цп на показатели периферической крови крыс при введении пирогенала (М+m; )

Показатели, х 109 / л	Группа 1 Интактные крысы n=12	Группа 2 (пирогенал + физ. р - р) n=6	Группа 3 (пирогенал + Цп) n=6
		8 часов	24 часа	8 часов	24 часа
Нейтрофилы	П / яд.	0,39+0,06; 0,19	0,89+0,09; 0,23*	0,31+0,06; 0,15	0,63+0,11; 0,27	0,34+0,08; 0,18
	С / яд.	1,56+0,14; 0,49	4,76+0,39; 0,95*	1,33+0,10; 0,25	2,67+0,41; 1,00* ,**	2,09+0,26; 0,58**
	Всего	1,95+0,17; 0,57	5,65+0,45; 1,11*	1,66+0,09; 0,24	3,29+0,49; 1,21*,**	2,43+0,26; 0,57**
Эозинофилы	0,17+0,05; 0,17	0,22+0,08; 0,19	0,36+0,14; 0,33	0,22+0,05; 0,13	0,30+0,05; 0,12
Лимфоциты	10,83+0,29; 1,03	9,75+0,67; 1,65	10,81+0,94; 2,31	10,92+0,59; 1,46	12,32+1,43; 3,21
Моноциты	0,04+0,02; 0,07	0,06+0,04; 0,09	0,03+0,02; 0,05	0,12+0,05; 0,12	0,04+0,04; 0,09

Примечание. * - достоверность различий с интактными животными (р1-2, р1-3), ** - между опытной и контрольной группами ( р2-3) по t- критерию.

Интоксикация солями бария привела к развитию лейкоцитоза на 11 сутки, а максимальное количество лейкоцитов отмечено на 18 сутки эксперимента (таблица 85). Анализ лейкоформулы показал, что лейкоцитоз был обусловлен клетками нейтрофильного ряда в относительных величинах, а в абсолютных - нейтрофилами и лимфоцитами (таблицы 86, 87). Полученные данные согласуются с результатами других исследователей, изучавших реакцию кроветворной ткани на введение хлорида бария (77, 143).

Применение Цп на фоне бариевой интоксикации привело к следующим изменениям количественного состава лейкоцитов. Общее количество лейкоцитов достоверно увеличилось по сравнению со второй группой на 11 сутки эксперимента (таблица 85). В другие сроки имело место перераспределение среди популяций лейкоцитов, которое приводило к достоверному росту палочкоядерных нейтрофилов на 11, 18, 22 и 30 сутки и общего количества нейтрофилов на 30 сутки эксперимента (таблицы 86, 87). Кроме того, при сравнении с животными второй группы на 11 и 18 сутки увеличилось количество эозинофилов, а на 22 и 30 сутки - моноцитов. Таким образом, нейтрофилия во все сроки эксперимента была обусловлена исключительно палочкоядерными клетками.

На основании данных предыдущих исследований, можно предположить, что рост числа нейтрофильных лейкоцитов и эозинофилов в периферической крови, начиная с 11 суток эксперимента, обусловлен влиянием Цп на лейкопоэз и увеличением количества пролиферирующих клеток - предшественников гранулоцитопоэза. Моноцитоз на поздних стадиях эксперимента связан с реакцией системы крови на хроническую интоксикацию ксенобиотиком.

Таблица 85

Влияние Цп на количество лейкоцитов в периферической крови крыс при лейкоцитозе на фоне бариевой интоксикации ( х 109/л, М+m; )

Группа 1 (интактные крысы) n=13	Группа 2 (Барий + физ. р-р ) n=6	Группа 3 (Барий + Цп) n=7
	11 сутки	18 сутки	22 сутки	30 сутки	11 сутки	18 сутки	22 сутки	30 сутки
10,33+0,38; 1,37	17,46+0,83; 2,04 р1-2<0,001	20,13+1,31 3,21 р1-2<0,001	19,56+2,17 5,31 р1-2<0,01	16,61+1,59 3,89 р1-2<0,01	20,66+0,78; 2,07 р1-3<0,001 р2-3<0,05	20,21+2,12; 5,60 р1-3<0,01	19,44+1,79; 4,75 р1-3<0,01	24,45+3,15; 7,72 р1-3<0,01

Примечание. р - достоверность различий между группами по t- критерию.

Таблица 86

Влияние Цп на показатели периферической крови крыс при лейкоцитозе на фоне бариевой интоксикации (М+m; )

Показа-тели, % клеток	Группа 1 интактные n=13	Группа 2 (барий + физ. р-р) n=6	Группа 3 (барий + Цп) n=7
		11 сутки	18 сутки	22 сутки	30 сутки	11 сутки	18 сутки	22 сутки	30 сутки
Нейтрофилы	П / яд.	5,15+0,62; 2,23	6,17+1,17; 2,86	7,83+0,91; 2,23*	10,50+1,26; 3,08*	10,33+0,99; 2,42*	10,14+0,91; 2,41*, **	14,71+1,25; 3,30*, **	15,71+0,78; 2,06*, **	13,83+1,47; 3,60*
	С / яд.	11,00+0,83; 3,00	15,50+0,76; 1,87*	17,17+1,01; 2,48*	18,33+1,78 4,37*	19,00+0,58 1,41*	14,14+1,20; 3,18	16,29+1,36; 3,59*	20,14+1,12 2,97*	19,33+1,65 4,03*
	Всего	16,15+1,17; 4,28	21,67+1,58; 3,88*	25,00+1,65; 4,05*	28,83+1,90; 4,67*	29,33+1,49; 3,67*	24,28+1,66; 4,39*	31,00+2,09; 5,54*, **	35,85+1,74; 4,59*, **	33,17+2,63; 6,43*
Эозиноф.	1,08+0,29; 1,04	0,83+0,31; 0,75	0,50+0,22; 0,55	1,67+0,61; 1,51	1,83+0,40; 0,98	2,00+0,31; 0,82*, **	1,86+0,26; 0,69**	3,71+0,75; 1,98*	2,83+0,75; 1,83
Лимфоц.	82,31+1,17; 4,23	77,50+1,71; 4,18*	73,83+1,58; 3,87*	69,00+2,46; 6,03*	68,83+1,82; 4,45*	73,29+1,49;3,95*	67,00+2,14; 5,66*, **	59,29+1,57; 4,15*, **	63,00+3,34; 8,17*
Моноц.	0,46+0,14; 0,52	0	0,67+0,33; 0,82	0,50+0,22; 0,55	0	0,57+0,29; 0,79	0,14+0,14; 0,38	1,14+0,26; 0,69*	1,00+0,26; 0,63**

Примечание. * - достоверность различий с интактными животными (р1-2, р1-3), ** - между опытной и контрольной группами ( р2-3) по t- критерию.

Таблица 87

Влияние Цп на показатели периферической крови крыс при лейкоцитозе на фоне бариевой интоксикации (М+m; )

Показа-тели, х 109/л	Группа 1 Интактные n=13	Группа 2 (барий + физ. р-р) n=6	Группа 3 (барий + Цп) n=7
		11 сутки	18 сутки	22 сутки	30 сутки	11 сутки	18 сутки	22 сутки	30 сутки
Нейтрофилы	П / яд.	0,52+0,06; 0,21	1,08+0,23; 0,57*	1,55+0,16; 0,39*	1,96+0,16; 0,38*	1,74+0,26; 0,64*	2,11+0,22; 0,58*, **	2,91+0,31; 0,83*, **	3,04+0,28;0,74*, **	3,22+0,27; 0,70*, **
	С / яд.	1,13+0,09; 0,34	2,72+0,22; 0,55*	3,41+0,14; 0,34*	3,61+0,64 1,56*	3,19+0,38 0,93*	2,93+0,29; 0,75*	3,25+0,38; 0,99*	3,96+0,43 1,13*	4,62+0,55 1,34*
	Всего	1,65+0,12; 0,44	3,80+0,39; 0,94*	4,96+0,23; 0,56*	5,57+0,68; 1,65*	4,93+0,62; 1,51*	5,04+0,44; 1,17*	6,17+0,59; 1,58*	6,99+0,69; 1,84*	7,84+0,71; 1,74*. **
Эозиноф.	0,11+0,03; 0,11	0,14+0,05; 0,11	0,10+0,05; 0,11	0,33+0,16; 0,39	0,31+0,07; 0,18*	0,41+0,06; 0,15*, **	0,37+0,06; 0,15*, **	0,66+0,11; 0,30*	0,69+0,18; 0,43*
Лимфоц.	8,52+0,36; 1,31	13,52+0,68; 1,66*	15,00+1,23; 3,00*	13,58+1,67; 4,10*	11,37+1,02; 2,50*	15,13+0,61; 1,60*	13,66+1,74; 4,61*	10,03+1,92; 5,11	15,69+2,59; 6,36*
Моноц.	0,05+0,02; 0,05	0	0,13+0,07; 0,17	0,08+0,03; 0,08	0	0,12+0,06; 0,16	0,02+0,02; 0,05	0,21+0,04; 0,10*. **	0,23+0,06; 0,15*. **

Примечание. * - достоверность различий с интактными животными (р1-2, р1-3), ** - между опытной и контрольной группами ( р2-3) по t- критерию.

4.2 Влияние церулоплазмина на функцию лейкоцитов при «невоспалительных» лейкоцитозах

При лейкоцитозе в ответ на введение пирогенала нами отмечено изменение функциональной активности лейкоцитов. В контрольной группе, по данным ХЛ - исследования цельной крови, через 8 часов от введения пирогенала зафиксировано увеличение спонтанного и индуцированного свечения лейкоцитов по показателям СС и МС, а через 24 часа от начала эксперимента - снижения спонтанного свечения лейкоцитов (таблица 88).

Пересчет ХЛ - показателей на 105 гранулоцитов не обнаружил подобных изменений активности отдельной клетки, имело место лишь снижение базальной активности лейкоцитов на 24 час эксперимента по показателям СС (таблица 89).

Таким образом, рост показателей ХЛ лейкоцитов был обусловлен исключительно увеличением количества нейтрофилов в периферической крови, а не изменением их функционального состояния. Снижение активности фагоцитирующих клеток через 24 часа от введения пирогенала может быть связано с уменьшением числа зрелых нейтрофилов - сегментоядерных клеток - в периферической крови, которые являются основными продуцентами АФК. Следует отметить, что их функциональный резерв, по показателям индуцированного свечения, сохранился.

Применение Цп у животных опытной группы не привело к изменению ХЛ - ответа отдельного лейкоцита на 8 час эксперимента (таблица 89). Через 24 часа светосумма спонтанного свечения лейкоцитов достоверно увеличилась по сравнению с контрольной группой и не отличалась от нормы. Последнее обусловлено увеличением количества сегментоядерных нейтрофилов в периферической крови под влиянием Цп.

Таблица 88

Влияние Цп на показатели хемилюминесценции цельной крови крыс при введении пирогенала (М+m; )

Группа животных / Показатели хемилюминесценции	Группа 1 Интактные крысы n=11	Группа 2 (пирогенал + физ. р - р) n=6	Группа 3 (пирогенал + Цп) n=6
		8 часов	24 часа	8 часов	24 часа
Спонтанное свечение	Светосумма, у.е. х мин	7,63+1,18; 3,92	15,32+3,13; 7,66*	4,08+0,83; 2,04*	6,00+2,21; 5,41**	14,35+1,84; 4,52*, **
	Максимальная светимость, у.е.	1,06+0,14; 0,46	2,79+0,51; 1,25*	0,82+0,24; 0,59	1,20+0,48; 1,18**	1,82+0,26; 0,63*, **
Индуцированное свечение	Светосумма, у.е. х мин	17,33+2,35; 7,79	50,57+7,79; 19,08*	16,38+4,14; 10,14	32,02+5,72; 14,02*	28,97+10,20; 24,99
	Максимальная светимость, у.е.	2,23+0,31; 1,04	6,11+1,02; 2,50*	2,09+0,50; 1,23	4,03+0,73; 1,78*	3,74+1,27; 3,10

Примечание. * - достоверность различий с интактными животными (р1-2, р1-3), ** - между опытной и контрольной группами ( р2-3) по t- критерию.

Таблица 89

Влияние Цп на показатели хемилюминесценции цельной крови крыс при введении пирогенала (М+m; )

Группа животных / Показатели хемилюминесценции в пересчете на 105 гранулоцитов	Группа 1 Интактные крысы n=11	Группа 2 (пирогенал + физ. р - р) n=6	Группа 3 (пирогенал + Цп) n=6
		8 часов	24 часа	8 часов	24 часа
Спонтанное свечение	Светосумма, у.е. х мин	4,19+0,80; 2,66	3,00+0,95; 2,34	2,01+0,35; 0,85*	2,06+0,88; 2,16	5,13+0,78; 1,74**
	Максимальная светимость, у.е.	0,58+0,09; 0,32	0,54+0,16; 0,39	0,40+0,10; 0,25	0,40+0,19; 0,47	0,66+0,11; 0,24
Индуцированное свечение	Светосумма, у.е. х мин	9,99+2,14; 7,09	9,02+1,22; 2,99	8,19+2,06; 5,05	9,09+0,84; 2,06	7,78+2,56; 5,73
	Максимальная светимость, у.е.	1,30+0,29; 0,96	1,14+0,09; 0,41	1,05+0,25; 0,62	1,14+0,09; 0,24	1,03+0,34; 0,77

Примечание. * - достоверность различий с интактными животными (р1-2, р1-3), ** - между опытной и контрольной группами ( р2-3) по t- критерию.

В условиях лейкоцитоза при введении пирогенала изменились и другие функции лейкоцитов. По данным цитохимических исследований, во все сроки эксперимента увеличилось содержание КБ в гранулоцитах, однако через 24 часа имело место снижение содержания МПО (таблица 90). Последний факт наряду со снижением ХЛ - показателей говорит о депрессии эффекторных функций фагоцитов - генерации АФК - через 24 часа от введения пирогенала. Применение Цп не привело к изменению цитохимических показателей лейкоцитов. Однако, необходимо отметить, что содержание миелопероксидазы в гранулоцитах у опытных животных не отличалось от нормы. Таким образом, Цп при лейкоцитозе в ответ на экзогенный пироген обладает способностью изменять эффекторные функции фагоцитирующих клеток, приближая их по своим значениям к показателям здоровых животных.

Таблица 90

Влияние Цп на цитохимические показатели лейкоцитов при введении пирогенала (М+m; )

Группа животных / Показатели, СЦК, у.е	Группа 1 Интактные крысы n=23	Группа 2 (пирогенал + физ. р - р) n=6	Группа 3 (пирогенал + Цп) n=6
		8 часов	24 часа	8 часов	24 часа
Катионные белки	0,87+0,06; 0,29	1,92+0,04; 0,11 р<0,001	1,65+0,10; 0,25 р<0,01	2,01+0,08; 0,19 р<0,001	1,57+0,03; 0,07 р<0,001
Миело- перокси-даза	0,46+0,03; 0,18	0,33+0,06; 0,16	0,24+0,03; 0,07 р<0,001	0,49+0,08; 0,20	0,38+0,09; 0,19

Примечание. р - достоверность различий с интактными по t- критерию.

У контрольной группы животных на 8 час лейкоцитоза снизилась интенсивность фагоцитоза (таблица 91).

В опытной группе животных на фоне применения Цп отмечен достоверный рост интенсивности фагоцитоза во все сроки наблюдения. Вероятно, это обусловлено ростом адгезивной способности лейкоцитов под влиянием Цп.

Таблица 91

Влияние Цпна фагоцитоз лейкоцитов периферической крови крыс при введении пирогенала (М+m; )

Группа животных / Показатели фагоцитоза	Группа 1 Интактные крысы n=37	Группа 2 (пирогенал + физ. р - р) n=6	Группа 3 (пирогенал + Цп) n=6
		8 часов	24 часа	8 часов	24 часа
Активность, % клеток	25,46+0,68; 4,12	26,50+ 2,22; 5,43	28,80+2,52; 5,63	27,50+1,48; 3,62	24,80+1,11; 2,49
Интенсив-ность, у.е./клетку	3,78+0,16; 0,95	2,68+0,10; 0,26 р1-2<0,001	3,69+0,24; 0,54	5,27+0,63; 1,54 р1-3<0,05 р2-3<0,01	6,46+0,32; 0,74 р1-3<0,001 р2-3<0,001

Примечание. р - достоверность различий между группами по t-критерию.

Развитие лейкоцитоза на фоне интоксикации барием сопровождалось изменением функциональной активности лейкоцитов.

По результатам ХЛ - исследования цельной крови имело место снижение индуцированного свечения на 18 сутки эксперимента (таблица 92). Пересчет показателей на 105 гранулоцитов показал, что произошло снижение всех показателей ХЛ лейкоцитов в абсолютных величинах на 18 и 22 сутки эксперимента (таблица 93).

Вероятно, полученный факт является отражением известной закономерности о связи между количеством и функциональной активностью клеток. На 18 и 22 сутки эксперимента в периферической крови имело место максимальное содержание лейкоцитов в периферической крови. Вполне закономерно, что функциональная активность отдельной клетки при этом снизилась, поскольку суммарная активность лейкоцитов в единице объема крови не изменилась.

Применение Цп на фоне лейкоцитоза не привело к изменению показателей ХЛ лейкоцитов в абсолютных величинах (таблица 93).