Фармако-токсикологические свойства и эффективность применения препарата Азитронит при болезнях органов дыхания у телят

Размещено на http://www.allbest.ru/

МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Московский государственный университет пищевых производств»

Диссертация на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

ФАРМАКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА И ЭФФЕКТИВНОСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ ПРЕПАРАТА АЗИТРОНИТ ПРИ БОЛЕЗНЯХ ОРГАНОВ ДЫХАНИЯ У ТЕЛЯТ

Специальность: 06.02.01 - Диагностика болезней и терапия животных, патология, онкология и морфология животных 06.02.03 - Ветеринарная фармакология с токсикологией

ОСЯНИНА МАРИНА НИКОЛАЕВНА

Научные руководители: доктор ветеринарныхих наук, Уша Б.В.

доктор ветеринарных наук, профессор, В.Е. Абрамов

Москва 2015

Оглавление

Введение

1. Обзор литературы

1.1 Болезни органов дыхания у телят (этиология, патогенез, клинические признаки)

1.2 Терапия болезней органов дыхания у телят

1.3 Характеристика действующего вещества препарата Азитронит

2. Собственные исследования

2.1 Материалы и методы исследований

2.2 Результаты исследований

2.2.1 Определение острой и подострой токсичности препарата «Азитронит»

2.2.2 Морфологические исследования

2.2.3 Определение раздражающего действия и аллергизирующих свойств препарата Азитронит на лабораторных животных

2.2.4 Исследование переносимости препарата Азитронит на телятах

2.2.5 Разработка метода определения действующего вещества препарата Азитронит в плазме крови тканях телят

2.2.6 Исследование фармакокинетики действующего вещества препарата Азитронит в образцах плазмы крови телят

2.2.7 Определение содержания действующего вещества препарата Азитронит в образцах органов и тканей телят

2.2.8 Эффективность применения препарата Азитронит при лечении респираторных заболеваниях телят

2.2.8.1 Определение оптимального режима дозирования Азитронита при лечении острой катаральной бронхопневмонии телят

2.2.8.2 Результаты изучения терапевтической эффективности Азитронита при подострой бронхопневмонии телят

2.2.8.3 Результаты изучения терапевтической эффективности Азитронита при хронической бронхопневмонии телят

2.2.8.4 Результаты изучения терапевтической эффективности Азитронита при остром трахеобронхите

2.2.8.5 Результаты изучения терапевтической эффективности Азитронита при остром бронхите телят

2.2.8.6 Результаты изучения терапевтической эффективности Азитронита при гнойно-катаральной пневмонии, осложненных гастроэнтеритом

Обсуждение

Выводы дыхание телята болезнь азитронит

Практические предложения

Список литературы

Введение

Актуальность темы. В настоящее время в животноводческой отрасли значительная роль отводится скотоводству. Тормозом для повышения продуктивности и сохранности молодняка животных являются болезни, в результате которых возникают наибольшие экономические потери в период выращивания телят.

Дальнейшее развитие животноводства требует разработки и внедрения в практику более эффективных и безопасных лекарственных препаратов для ветеринарного применения, в том числе и для лечения болезней органов дыхания молодняка крупного рогатого скота.

Данные литературных источников указывают на то, что болезни органов дыхания занимают одно из ведущих мест в структуре заболеваемости молодняка и существенно ограничивают рост поголовья и продуктивность крупного рогатого скота [4].

Уровень заболеваемости органов дыхания на территории Российской Федерации зависит от региона, сопутствующих климатических условий, технологии содержания, кормления животных и составляет от 30 до 70%, при этом летальность может достигать 9,7-30,6% [5]. По сведениям литературы [63], болезни органов дыхания регистрируются у 11% поголовья скота, что составляет 25% от всего заболевшего крупного рогатого скота. При этом потери могут соствлять до 40% от числа заболевших животных, с учетом гибели и вынужденного убоя [3]. Болезни органов дыхания у телят проявляются в форме бронхитов, бронхопневмонии, плевритов и т.д. Наиболее часто среди заболеваний дыхательной системы встречаются бронхопневмонии различной этиологии [2].

Несвоевременная и неправильная выпойка молозива, несбалансированное и неполноценное кормление, нарушение условий содержания, сырость, сквозняки и другие изменения микроклимата в родильных отделениях и телятниках приводят к возникновению различных болезней органов дыхания молодняка. В этиопатогенезе этих болезней основную роль играют незаразные болезни, инфекционные и др. При изменении внешней среды и понижении устойчивости организма условно патогенная микрофлора становится патогенной, что может стать причиной развития патологического процесса. Все это, в конечном итоге, при отсутсвии адекватного лечения, приводит к гибели молодняка [1, 6, 8, 9, 14, 20, 24, 30, 38, 55].

На сегодняшний день для лечения болезней органов дыхания молодняка предложены различные схемы и большое количество фармакологических средств, включая антибиотики, сульфаниламиды, фторхинолоны и др [3].

Общим недостатком антимикробных средств является то, что длительное применение одних и тех же препаратов приводит к появлению большого числа устойчивых штаммов микроорганизмов, и тем самым к снижению их лечебной эффективности, что в свою очередь усложняет и удорожает процесс лечения [23].

В этой связи изыскание новых резервных антибактериальных препаратов имеет важное практическое значение в ветеринарной практике.

Для внедрения любого нового препарата в ветеринарную практику необходимо проведение научно-исследовательских работ по выявлению общетоксических свойств препарата, фармакокинетики действующего вещества в организме животных для установления научно - обоснованных доз препарата, кратности его введения, разработки наиболее рациональных схем применения при различных болезнях животных.

Одним из важнейших направлений исследований является обеспечение безопасности животноводческой продукции для потребителя. В связи с этим актуальными остаются вопросы разработки методов определения остаточных количеств антибиотиков в органах и тканях животных. Такие исследования особенно необходимы при создании нового класса антибактериальных препаратов, которые ранее не применялись в ветеринарии и на сегодняшний день не имеют аналогов.

Компанией ООО «НИТА-ФАРМ», г. Саратов был разработан оригинальный инъекционный антибактериальный препарат широкого спектра действия на основе азитромицина, являющегося представителем новой подгруппы макролидных антибиотиков - азалидов.

Степень разработанности темы. В настоящее время фрагмент выполненной работы был одобрен экспертным советом и препарат рекомендован к регистрации в Российской Федерации для лечения болезней бактериальной этиологии у крупного и мелкого рогатого скота и свиней.

Цель и задачи исследований. Изучить и внедрить в ветеринарную практику новый антибактериальный препарат Азитронит на основе азитромицина для лечения болезней дыхательной системы у телят.

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

- определить острую и подострую токсичность препарата на лабораторных животных при пероральном и внутримышечном введении;

- изучить раздражающее действие препарата на кожный покров и конъюнктиву кроликов и выявить возможные аллергизирующие свойства препарата на мышах и морских свинках;

- изучить подострую токсичность препарата на телятах;

- разработать метод ВЭЖХ с масс-спектрометрическим определением действующего вещества в биосубстратах;

- изучить фармакокинетику азитромицина в организме телят, чтобы научно обосновать схемы и оптимальные дозировки препарата для лечения болезней дыхательной системы у телят.

- определить наличие остаточных количеств азитромицина в органах и тканях телят после курсового применения препарата;

- изучить клинические проявления болезней дыхательной системы у телят и определить терапевтическую эффективность препарата при данной патологии у молодняка крупного рогатого скота.

Научная новизна работы. Впервые дана фармако - токсикологическая характеристика лекарственного препарата Азитронит для лечения болезней дыхательной системы у телят. Определены параметры острой и подострой токсичности, раздражающего, аллергизирующего действия препарата на лабораторных животных. Изучена токсичность повышенных доз препарата на телятах. Разработан метод ВЭЖХ с масс-спектрометрическим определением действующего вещества в органах и тканях телят.

Изучена фармакокинетика действующего вещества препарата Азитронит в организме телят после однократного внутримышечного введения. Установлены сроки возможного использования мяса и субпродуктов для пищевых целей после курсового применения данного препарата. Научно обоснованы оптимальные терапевтические дозы и схемы применения препарата для лечения болезней дыхательной системы у телят.

Теоретическая и практическая значимость работы. Для лечения болезней дыхательной системы у телят рекомендован новый препарат Азитронит на основе азитромицина. Разработана методика определения остаточных количеств азитромицина в органах и тканях животных с использованием метода ВЭЖХ с масс-спектрометрическим определением. Данные по исследованию фармако-токсикологических свойств, терапевтической эффективности и фармакокинетики легли в основу разработки нормативных документов (СТО и инструкции по применению лекарственного препарата Азитронит).

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

- результаты изучения фармако - токсикологических свойств препарата на лабораторных животных и телятах;

- результаты разработки метода ВЭЖХ с масс-спектрометрическим определением действующего вещества в органах и тканях телят;

- результаты изучения фармакокинетики азитромицина и определение его остаточных количеств в органах и тканях телят.

- результаты изучения терапевтической эффективности препарата при лечении болезней органов дыхания у телят;

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы были доложены и обсуждены на ХХII международной научной конференции студентов и молодых ученых «Живые системы и биологическая безопасность населения», г. Москва (2014 год), 5-ая Международная научно-практическая конференция «Ветеринария-2014», г. Кемер.

Личный вклад соискателя. Основные результаты исследований проведены автором самостоятельно. Статьи, написанные в соавторстве, включают более 80% материалов диссертационной работы. Соавторы не возражают в использовании результатов совместных исследований (справки предоставлены в диссертационный совет).

Публикации результатов исследований. По теме диссертации опубликованы 4 печатных работы в изданиях, входящих в перечень ВАК РФ.

Объем и структура диссертации. Работа изложена на 132 страницах компьютерного текста и состоит из следующих разделов: введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, собственных исследований, обсуждения, выводов, практических предложений, списка литературы и приложения. Список литературы включает 181 источник, в том числе 97 отечественных и 84 иностранных авторов. Работа иллюстрирована 34 таблицами, 12 рисунками и 8 графиками.

1. Обзор литературы

1.1 Респираторные болезни телят

Массовые болезни органов дыхания телят существенно ограничивают возможности развития животноводства в Российской Федерации, являясь серьезной проблемой ветеринарной медицины.

По опубликованным данным, болезни органов дыхания занимают второе место после желудочно-кишечной патологии молодняка [28].

Основной экономический ущерб от болезней животных складывается из падежа, вынужденного убоя, потери продуктивности, повышении затрат корма и медикаментов на выращивание и лечение животных [3].

По данным разных авторов летальность и вынужденный убой телят от патологических процессов в органах дыхания составляют от 5 до 90%, причем ведущее место среди таких патологических процессов принадлежит бронхопневмонии [7, 12, 13].

Нарушение условий содержания животных, наличие сквозняков и сырости в телятниках и родильных отделениях, несбалансированный рацион приводят к снижению иммунного статуса телят. На фоне ослабленного иммунитета патогенные и условно-патогенные микроорганизмы, находящиеся в организме животных в латентном состоянии, приобретают вирулентные свойства, что значительно осложняет течение заболевания и при отсутствии адекватного лечения может привести к гибели животных [1, 6, 8, 10, 26, 32, 41, 105].

Из пораженных очагов в легких, трахеальной и бронхиальной слизи у большинства заболевших и павших животных чаще всего изолируют следующих представителей бактериальной флоры: Streptococcus pneumonia, Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Pasteurella multocida, Pseudomonas aeruginosa, а также различных возбудителей вирусной природы, принадлежащих к высокопатогенным латентным семействам Herpesviridae, Adenoviridae, Paramyxoviridae и др. [15,18, 21, 29, 45, 54, 111, 115].

В последние десятилетия частота смешанных форм заболеваний крупного рогатого скота существенно возросла. Развитие патологического процесса в этом случае обусловлено одновременным или последовательным воздействием на макроорганизм двух или более инфекционных агентов (вирусов, бактерий, микоплазм, хламидий, риккетсий, грибков, бактерий и простейших) [10, 28].

Респираторные заболевания проявляются у телят в форме бронхитов, трахеобронхитов, плевритов, но наиболее часто среди патологий дыхательной системы встречаются бронхопневмонии [25]. Патологический процесс, начинаясь в одном локусе, достаточно быстро распространяется на функционально связанные с этим локусом органы, вследствие чего ветеринарные специалисты обычно имеют дело с системным заболеванием. Например, трахеит обычно сопровождается бронхитом (трахеобронхит), который в свою очередь переходит в бронхопневмонию [46].

Бронхит - это воспаление слизистой оболочки и подслизистой ткани бронхов. Чаще бронхитом болеют молодые, старые и ослабленные животные. По течению различают острые и хронические бронхиты, по поражению бронхов -макробронхиты, когда воспалительный процесс локализуется в крупных бронхах, микробронхиты, когда в процесс вовлекаются мелкие бронхи, и диффузный, когда воспаление распространяется вдоль всего бронхиального дерева. По характеру воспаления бронхиты подразделяют на катаральные, гнойные, геморрагические и фибринозные. По степени поражения бронхиальной стенки бронхиты подразделяют на эндобронхиты (когда процесс локализуется в слизистой оболочке и подслизистом слое) и перибронхиты (поражаются наружные слои бронхиальной стенки и серозный покров) [50, 57, 60, 176].

При отсутствии своевременного лечения бронхит обычно переходит в бронхопневмонию. Бронхопневмония - это заболевание, характеризующееся воспалением бронхов и лёгких, скоплением в бронхах и альвеолах экссудата, состоящего из большого количества слизи, отторгнутой эпителиальными клетками слизистой оболочки, лейкоцитов, выключением поражённых участков из дыхательной функции, расстройством кровообращения и газообмена с нарастающей дыхательной недостаточностью и интоксикацией организма [4, 6].

Регистрируется бронхопневмония преимущественно у молодых животных. Болезнь возникает обычно в зимне-весенний и летний сезоны. Зимне-весенняя вспышка чаще начинается в феврале, максимальное количество больных животных и их гибель наблюдается с марта по апрель. Болеют преимущественно телята от 2-недельного до 4-месячного возраста. В период летней вспышки заболевают телята в возрасте 2-3 месяцев и даже 4 месяцев [87].

Бронхопневмонию рассматривают не только как местный воспалительный процесс с локализацией в легких, но и как общее заболевание, проявляющееся нарушением функционирования всех органов и систем организма вследствие недостаточного поступления в ткани кислорода и интоксикации [88].

По своему происхождению бронхопневмонии, как и бронхиты, подразделяют на первичные и вторичные.

Первичные бронхопневмонии обычно возникают вследствие воздействия неблагоприятных факторов внешней среды и нарушения санитарно-гигиенического режима содержания [8, 41].

Вторичные бронхопневмонии наблюдаются при ряде инфекционных заболеваний и осложняют течение патологического процесса в других органах и системах.

При остром течении болезни вначале поражаются, как правило, поверхностно лежащие дольки легких. Как указывают большинство авторов, основными клиническими признаками острой бронхопневмонии являются: лихорадка с повышением температуры тела на 1-2 °С, вялость, напряженное дыхание, смешанная одышка, отечность слизистой носовой полости и трахеи, серозно-катаральное или катаральное истечение из носовых отверстий, выделение во время кашля катарального экссудата, хрипы в грудной клетке, глубокий кашель. В начальных стадиях бронхопневмонии и при остром ее течении в верхушечных и сердечных долях обнаруживают множественные дольковые поражения в виде пневмонических очажков, расположенных поверхностно или в толще легкого [63, 110].

Подострая бронхопневмония характеризуется более затяжным течением и более длительной лихорадкой.

Для хронических бронхопневмоний характерно длительное течение, часто с периодами обострений и затуханий. Клиническая картина в таких случаях обычно не характерна, животные отстают в развитии, у них снижен аппетит, наблюдается потеря массы. В зависимости от длительности процесса, в результате слияния дольковых поражений часто обнаруживаются плеврит, перикардит [99, 100, 113].

1.2 Терапия болезней органов дыханиятелят

Учитывая полиэтиологическую структуру заболеваний органов дыхания телят, для лечения следует использовать антибактериальные препараты широкого спектра действия, так как типирование возбудителя заболевания требует специальных методов исследования, недоступных специалистам на местах [44].

Важным фактором при выборе антибактериального препарата является активность его в отношении внутриклеточных возбудителей - микоплазм и хламидий.

В настоящее время наиболее эффективными в отношении возбудителей пневмоний являются фторхинолоны и макролиды [3]. Максимальную активность в отношении гемолитических стрепто - и стафилококков проявляет энрофлоксацин (МПК 0,05-0,38 мкг/мл). При гнойно-катаральных бронхопневмониях показаны внутритрахеальные введения стерильных растворов антибиотиков или сульфаниламидов. Растворы антибиотиков или сульфаниламидов назначают 1-2 раза в сутки в течение 3-5 дней [31].

Для лечения животных, больных бронхопневмонией, в настоящее время широко используются многочисленные антибактериальыне препараты. Создано их большое количество и выпускаются новые модификации [85].

Так, например, терапевтическая эффективность комплексного препарата на основе флолфеникола и доксициклина в дозе 1,0 мл/7,5 кг массы животного, один раз в сутки, в течение 5-7 дней при бронхопневмонии телят составила 92,3-100% [3].

Рядом авторов установлена лечебная эффективность левоксида (препарата на основе левомицетина, окситетрациклина гидрохлорида, полиэтиленоксида) при бронхопневмонии у телят на уровне 94,1% [94].

Имеются данные о высокой эффективности препарата на основе тилмикозина фосфата при бронхопневмонии телят в дозе 12,5 мг/кг массы тела животного, 2 раза в день, в течение 5 суток, при оральном применении индивидуальным способом [61].

Окситетрациклин также имеет высокий лечебный эффект при применении животным с поражениями легочного тракта и носовых путей [49].

Несмотря на широкий спектр различных химиотерапевтических препаратов, проблема заболеваемости телят респираторными инфекциями по-прежнему не решена. К любому антибактериальному средству со временем развивается привыкание микроорганизмов, что требует повышения доз или изменения схем лечения.

Скорость развития и степень выраженности устойчивости связаны также с видом и даже штаммом возбудителя. Наиболее быстро и часто резистентность к антибактериальным препаратам возникает у стафилококков, эшерихий, сальмонелл, синегнойной палочки. [108]. Наиболее распространенным механизмом резистентности является инактивация антибиотиков энзимами, изменения структуры чувствительных к действию антибиотиков органелл в микробной клетке, формирование «обходного пути» метаболизма и снижение проницаемости микробной стенки. Резистентность может быть как наследуемым видовым признаком, так и приобретенным. Важную роль в распространении генов резистентности играют хромасомные мутации и R-плазмиды [140].

Одним из путей решения данной проблемы является разработка и внедрение в ветеринарную практику новых соединений, к которым у микроорганизмов еще не сформировались механизмы устойчивости.

К числу препаратов, способных оказывать положительное влияние на устранение патологического процесса в респираторных органах, относится азитромицин. Он применяется в медицинской практике для лечения органов дыхания, но пока еще не нашел широкого практического применения в лечении респираторных болезней телят.

1.3 Характеристика действующего вещества препарата Азитронит

Происхождение азитромицина

Азитромицин является полусинтетическим антибиотиком, первым представителем подкласса азалидов, несколько отличающихся по структуре от классических макролидов [20].

История рождения класса макролидных антибиотиков начинается с 1952-го года, когда из культуры Streptomyces erythreus, полученной из образцов почвы филиппинского острова Paray, был выделен эритромицин, который с успехом применялся в течение многих лет при инфекциях кожи и мягких тканей, дыхательных путей и др. Однако низкая биодоступность эритромицина при приеме его внутрь, большое число нежелательных явлений, быстрая элиминация, требующая частого повторного приема препарата, с одной стороны, и осознание клинического значения в патологии человека таких возбудителей, как Legionella spp., Mycoplasma spp., Chlamydophila spp., Campylobacter spp. и других внутриклеточных патогенов - с другой, послужили толчком к созданию новых препаратов с более высокой кислотоустойчивостью, биодоступностью, привлекательным профилем безопасности и широким спектром антимикробного действия [86, 107].

В настоящее время известно более 20 макролидных антибиотиков и их производных, из которых 11 разрешены к клиническому применению на территории Российской Федерации.

По происхождению макролиды подразделяются на природные, полусинтетические и пролекарства. Основу всех макролидов составляет макроциклическое лактонное кольцо, связанное с одним или несколькими углеводными остатками. В зависимости от числа атомов углерода макролидные антибиотики подразделяются на 14-членные (природные - эритромицин, олеандомицин; полусинтетические - кларитромицин, рокситромицин, диритромицин), 15-членные (азалиды) - азитромицин (полусинтетический препарат) и 16-членные (природные - спирамицин, джозамицин, мидекамицин; полусинтетические - рокитамицин, мидекамицина ацетат). Пролекарства представляют собой эфиры, соли и соли эфиров природных макролидов, характеризующиеся большей кислотоустойчивостью и, соответственно, более высокой биодоступностью при приеме внутрь по сравнению с исходными продуктами, выпускаемыми в виде оснований [117, 140, 149, 152, 163].

Исследовательская группа, возглавляемая Slobodan Dokic фармацевтичеcкой компании «PLIVA» (Хорватия), в 1981 г. путем включения атома азота в 14-членное лактонное кольцо эритромицина между 9-м и 10-м атомами углерода синтезировала новый антибиотик, отнесенный к группе полусинтетических 15-членных макролидных антибиотиков - азалидов, в которой азитромицин до настоящего времени остается единственным представителем. В 1988 г. по завершении многочисленных доклинических и клинических исследований азитромицин был выведен на мировой фармацевтический рынок [118].

Физико-химические свойства

Химическое название:

1-Oxa-6-azacyclopentadecan-15-one, 13-[(2,6- dideoxy-3-C-methyl-3-O-methyl-alpha-L-ribohexopyranosyl)oxy]-2-ethyl-3,4,10-trihydroxy- 3,5,6,8,10,12,

14-heptamethyl-11-[[3,4,6-trideoxy-3-(dimethylamino)-beta-D-xylo-hexopy-ranosyl] oxy] -, dihydrate, [2R- (2R*, 3S*, 4R*, 5R*, 8R*, 10R*, 11R*, 12S*, 13S*, 14R*)] (The United States Pharmacopeial Convention, Inc.; 2005);

Структурная формула:

Молекулярная формула: C₃₈H₇₂N₂O₁₂₂·H₂O (The United States Pharmacopeial Convention, Inc.; 2005).

Молекулярная масса: 785,02 (The United States Pharmacopeial Convention, Inc.; 2005).

Внешний вид: Азитромицин дигидрат - белый кристаллический порошок (Azithromycin package insert (Zithromax, Pfizer--US),2002).

Растворимость: 39 мг азитромицина растворяется в 1 мл воды (рН 7,4) при 37 °С (McEvoy GK, 2001).

Фармакологическое действие

Азитромицин высокоактивен в отношении вероятных возбудителей инфекций нижних дыхательных путей: пневмококков (МПК 0,03-0,12 мкг/мл), микоплазм (МПК 0,001-0,01 мкг/мл), хламидий (МПК 0,06-0,25 мкг/мл), гемофиллюсов (МПК 0,25-1 мкг/мл), моракселл (МПК 0,03-0,06 мкг/мл), стафилококков (МПК 0,06-0,5 мкг/мл), легионелл (МПК 0,5 мкг/мл) [13, 70].

Азитромицин стоит на первом месте среди макролидов по активности в отношении H. influenzae, M. catarrhalis, N. gonorrhoeae, R. rickettsii, B. melitensis, включая их бета-лактомазопродуцирующие штаммы. По действию на H. influenzae он уступает аминопенициллинам и цефалоспоринам, но превосходит эритромицин в 2-8 раз. При концентрации 1 мкг/мл азитромицин подавляет рост 100%, эритромицин - 16%, а рокситромицин - 5% штаммов H. Influenzae [115].

Минимальная бактерицидная концентрация (МБК), приводящая к гибели 99,9% штаммов гемофильной палочки, для азитромицина составляет 4 мкг/мл, для эритромицина - 16 мкг/мл, для рокситромицина - 64 мкг/мл [86, 103, 132].

Для азитромицина и других макролидов характерен постантибиотический эффект, т.е. сохранение антимикробного действия препарата после его удаления из среды. Это обусловлено необратимыми изменениями рибосом возбудителя, ведущими к блокированию транслокации [16, 52, 68, 77].

Азитромицин (в меньшей степени эритромицин и кларитромицин) обладает и суб-МПК-постантибиотическим эффектом - влиянием на микроорганизмы после воздействия субингибирующих концентраций антибиотика. Под влиянием концентраций этих препаратов даже ниже МПК микроорганизмы, в том числе обычно резистентные к ним (синегнойная палочка), становятся более чувствительными к факторам иммунной защиты [80].

Азитромицин проявляет постантибиотический и суб-МПК-постантибиотический эффект в отношении S. pyogenes, S. pneumoniae, H. influenzae, L. pneumophila, по продолжительности которого превосходит кларитромицин [17, 81].

Механизм действия азитромицина аналогичен действиям других макролидов, а именно ингибирование РНК-зависимого синтеза удлинения белковой молекулы бактерии, чувствительной к действию антибиотика. Антибиотик обратимо связывается с 50S-субъединицей бактериальной рибосомы, блокируя процессы транспептидации и/или транслокации, в результате преждевременно отщепляется растущая тРНК-полипептидная цепочка и прекращается сборка белковой молекулы. Характер антимикробного действия макролидов бактериостатический, но при определенных условиях (в зависимости от вида микроорганизма, концентрации антибиотика, размера инокулюма и pH среды) в отношении таких микроорганизмов, как Streptococcus pneumoniae и Streptococcus pyogenes возможен и бактерицидный эффект. Данное свойство наиболее выражено именно у азитромицина за счет создания высоких внутриклеточных концентраций. Кроме того, азитромицин характеризуется наличием значимого постантибиотического и суб-МПК эффекта в отношении S. pneumoniae, S. pyogenes, Haemophilus influenzae и Legionella pneumophila. При этом продолжительность постантибиотического эффекта против гемофильной палочки и L. pneumophila превосходит таковую кларитромицина [44, 52, 76, 82, 136].

Азитромицин также обладает противовоспалительными, иммуномодулирующими и мукорегулирующим свойствами [16, 52, 53]. Антибиотик способен подавлять активность свободнорадикального окисления, ингибирует синтез цитокинов - интерлейкина-1 (ИЛ), ИЛ-6, ИЛ-8, фактора некроза опухоли-a, усиливает экспрессию противовоспалительных медиаторов. Создавая высокие концентрации в клетках-фагоцитах, азитромицин стимулирует процессы хемотаксиса и фагоцитоза. Благодаря мукорегулирующиму действию, антибиотик оказывает благоприятное влияние на клиренс бронхиального и назального секретов. Существуют данные о том, что макролиды, в том числе и азитромицин, способны тормозить экспрессию факторов вирулентности Pseudomonas aeruginosa и Proteus mirabilis, препятствуют их адгезии на слизистой оболочке дыхательных путей и тем самым снижают выраженность колонизации бронхиального дерева данными микроорганизмами [16, 17, 52, 53, 68, 77, 97, 122, 146, 175].

Фармакокинетика

Фармакокинетические параметры азитромицина отличают препарат от других макролидов тем, что он более устойчив к действию соляной кислоты желудочного сока, чем другие макролиды, не оказывает ингибирующего влияния на микросомальную систему цитохрома Р-450 (что характерно для 14-членных макролидов), вследствие чего, характеризуется низкой вероятностью лекарственных взаимодействий [115, 133, 136].

Уникальными свойствами азитромицина являются длительный период полувыведения: Т1/2 после первого приема составляет 10-14 ч, в интервале от 8 до 24 ч после приeма -- 14-20 ч, от 24 до 72 ч -- 35-55 ч, при многократном приeме - 48-96 ч, в среднем 68-71 ч, что позволяет назначать антибиотик только один раз в сутки. Период полувыведения из тканей значительно больше [40].

Терапевтическая концентрация азитромицина в тканях сохраняется в течение 5-7 дней после отмены (эритромицина -- 1-3 дня) [106].

Макролиды имеют, в основном, внепочечный путь элиминации. Они подвергаются биотрансформации (деметилированию, гидроксилированию) в печени при участии цитохрома Р-450 (преимущественно его изофермента CYP3A4) и выводятся с желчью в высоких концентрациях в виде активных (кларитромицин, мидекамицин) или неактивных метаболитов и в неизменeнном виде. Азитромицин частично подвергается биотрансформации в печени (известно 10 его метаболитов), а 50% дозы выводится с желчью в неизменeнном виде. Небольшая часть дозы (у азитромицина - 6% пероральной и 11-14% внутривенной дозы) выделяется с мочой [81, 115].

Таблица 1

Сравнительная фармакокинетика азитромицина с другими макролидами

Препарат	Доза, мг	Тmax, ч	Сmax, мг/л	AUC, мг/(ч*л)	Т1/2, ч
Азитромицин	500	2-3	0,4	6,7	35-54
Kларитромицин	500	2-3	0,4	18,9	5
Эритромицин	500	1-5	1,9-3,8	5,8-11,2	1,5-2,5
Джосамицин	1000	1	3,8	7,9	1,5-2,5
Рокситромицин	150	1-3	5,4-7,9	53,0-81	10,5
Спирамицин	3000	5-10	1,6-2,8	13,6	8
Примечание. Тmax - время достижения пиковой концентрации в крови; Сmax - величина пиковой концентрации; AUC - площадь под фармакокинетической кривой; Т1/2 - период полувыведения.

Биодоступность азитромицина 37%, у других препаратов этой группы она колеблется от 10 до 68%.

Максимальная концентрация азитромицина в плазме крови после приема внутрь составляет 0,3-0,62 мкг/мл и достигается через 2,5-2,9 ч (после приема 500 мг максимальная концентрация 0,41-0,5 мкг/мл создается через 2,2 ч). После однократного приема регистрируются два пика максимальной концентрации. Второй пик (нередко превышающий первый) обусловлен способностью макролидов накапливаться в желчи с последующим повторным всасыванием из кишечника. После внутривенной капельной инфузии в течение 1 часа концентрация азитромицина в крови достигала 3,6 мкг/мл, а через 24 часа - снижалась до 0,2 мкг/мл [80, 81, 118].

Степень связывания азитромицина с белками плазмы относительно невелика и варьирует от 7% (при концентрации 1-2 мкг/мл) до 51% (при концентрации 0,02-0,1 мкг/мл). Как известно, чем меньше степень связывания лекарства с белком, тем больше его активная концентрация и тем скорее оно покидает сосудистое русло, проникая в ткани. Для сравнения, среди макролидов в наибольшей степени с сывороточными белками связывается рокситромицин (на 92-96%). Благодаря хорошей растворимости в липидах азитромицин легко проникает в ткани, накапливаясь в них, о чем свидетельствует большой объем распределения -- 31,1 л/кг. AUC0-24 азитромицина 4,3 мкгґч/мл. По способности проникать через гистогематические барьеры (кроме гематоэнцефалического) азитромицин превосходит бета-лактамы и аминогликозиды. Среди макролидов азитромицин создает самую высокую тканевую концентрацию (в десятки и сотни раз превышающую сывороточную, в большинстве тканей от 1 до 9 мкг/г), поэтому уровень его в плазме крови низкий. Наибольшая сывороточная концентрация отмечается при приеме рокситромицина, вследствие его меньшего проникновения в ткани. Азитромицин обнаруживается в высоких концентрациях в лeгких, мокроте, альвеолярной жидкости. Через 48-96 ч после однократного приeма 500 мг азитромицина его концентрация в слизистой оболочке бронхов в 195-240 раз, в лeгочной ткани - более чем в 100 раз, а в бронхиальном секрете -- в 80-82 раза превышает сывороточную [81, 101, 118].

Максимальное накопление азитромицина наблюдается в легочной ткани, жидкости, выстилающей слизистую оболочку бронхов и альвеолы, бронхиальном секрете, слюне, миндалинах, среднем ухе, синусах, слизистой оболочке желудочно-кишечного тракта (ЖКТ), предстательной железе, конъюнктиве и тканях глаза, коже, желчи, уретре, матке, придатках и плаценте. Антибиотик обладает способностью накапливаться в фибробластах, альвеолярных макрофагах и полиморфноядерных лейкоцитах, создавая в них концентрации, многократно превышающие таковые в сыворотке крови. При миграции в очаг воспаления фагоциты выполняют транспортную функцию, доставляя антибиотик непосредственно к месту локализации бактерий, где под влиянием микробных стимулов происходит выделение азитромицина из клеток, что позволяет создавать высокие и длительно сохраняющиеся концентрации антибиотика в очаге инфекции [17, 98, 101].

Азитромицин имеет некоторые преимущества в лечении инфекций у животных в сравнении с другими макролидами (эритромицин) [101]. После орального применения он хорошо всасываются у кошек (биодоступность 58%), собак (биодоступность > 90%), жеребят (биодоступность от 39 до 56%). Концентрация азитромицина в тканях может быть в 100 раз выше концентрации в сыворотке, а концентрации в лейкоцитах может быть от 200 до 300 раз выше, чем концентрация в сыворотке. Период полувыведения азитромицина из лейкоцитов жеребят: 49,2 часов; человека - от 34 до 57 часов [78]. Выделение азитромициина из организма кошек происходит в основном с желчью (50% в неизмененном виде) [113, 133, 136, 168].

Токсичность

LD₅₀ азитромицина для мышей и крыс при пероральном введении составляет от 3000 до 4000 мг на кг массы тела (мг / кг). Случаев гибели или выраженных клинических признаков у животных не наблюдались в течение 14-дневного периода наблюдения. Все животные прибавили в весе во время исследования. При вскрытии животных не было выявлено патологических изменений во внутренних органах животных[175, 179, 180].

Подострая токсичность. При оральном введении 15-ти взрослым крысам в дозе 40 мг/кг/день (10 дней дача, 10 дней не давали) в течение 190-193 дня и 25-ти взрослым крысам в дозах 10, 20 мг/кг/день было отмечено: спорадическое небольшое повышение АСТ и АЛТ произошло во всех группах во время и после периода введения. Не было никаких доказательств фосфолипидоза [180].

При оральном введении 10 четырехдневным крысам в дозах 10, 20 и 40 мг/кг/день в течение 18 дней было отмечено, что самцы в дозе 20 мг/кг весили значительно больше, чем контрольная группа на 7 день, 13-й и 22 день после родов. Не было никаких гистологических признаков фосфолипидоза [180].

При оральном введении 10 четырехдневным крысам в дозах 40, 60, 80 мг/кг/день в течение 18 дней не было отмечено никаких клинических признаков токсичности или влияния на массу тела. Введение азитромицина новорожденным крысам через желудочный зонд в течение 18 дней выявило четкие доказательства наличия обратимого фосфолипидоза эпителия желчных протоков у самцов и самок во всех дозах [180].

При оральном введении 10 четырехдневным крысам в дозах 100, 120, 140 мг/кг/день в течение 18 дней не отмечено клинических признаков токсичности. Введение азитромицина новорожденным крысам через желудочный зонд в течение 18 дней показывает четкие доказательства обратимого фосфолипидоза эпителия желчных протоков во всех группах [180].

Фосфолипидоз выявляли во многих органах только у собак, получивших дозу 100 мг/кг/день в течение 2 месяцев. Эта доза у собак приводит к концентрации в тканях до уровня выше 5000 мг/г. Также было отмечено минимальное увеличение в сыворотке крови уровней трансаминаз у крыс и собак в дозе 20 мг/кг/день и выше, но они согласуются с результатами для эритромицина. Особое внимание было уделено эффекту фосфолипидоза в сетчатке при даче азитромицина собакам в дозе 30 и 100 мг/кг/день в течение 2 и 6 месяцев соответственно. Никаких доказательств, указывающих на вредное действие азитромицина на зрение, не было выявлено [180].

При оральном введении трем 3-5 дневным собакам в дозах 10, 30, 60 мг/кг/день в течение 5 недель отмечено: за исключением возможного отставания в весе тела щенков, не было никаких патологических признаков, связанных с введением азитромицина. Средние концентрации азитромицина в крови, в основном зависели от дозы, особенно при дозе 10 и 30 мг / кг - были несколько выше на 24 день, чем на 2-й день. У взрослых собак, доза, вызывающая фосфолипидоз, была замечена в отдельных тканях. Эффект был минимальным в дозе 10 мг / кг. Фосфолипидоза не наблюдалось в мозге или в печени [180].

При оральном введении четырем 3-5 и 25-ти дневным собакам в дозах 10, 30, 60 мг/кг/день в течение 11 недель было отмечено: не было выявлено никаких последствий, связанных с влиянием азитромицина на массу тела, гематологию, клинической химию или вес внутренних органов. Доказательства фосфолипидоза (PL) наблюдали при микроскопическом исследовании в конце периода введения в селезенке собак, получавших дозы 30 и 60 мг/кг/день. Не было никаких доказательств PL в печени или мозга. После 1 мес. периода отмены тканевая концентрация азитромицина в печени, почках и селезенке была примерно на 1,5% ниже по сравнению с концентрацией в конце периода введения, что указывает на элиминацию азитромицина из этих органов. Обратимость PL в сетчатке предполагает элиминацию азитромицина [180].

Внутривенное введение взрослым животным. При внутривенном введении 10 взрослым крысам в дозах 10, 20, и 20 мг/кг/день, через день, в течение 14 дней не отмечено неблагоприятных последствий [180].

При внутривенном введении 3 взрослым собакам доз 10, 20 и 40 мг/кг/день, через день, в течение 14 дней было отмечено: у 3 животных в первых двух группах - спорадическое повышение уровня ферментов печени, у 2 из 3 сук при максимальной дозе; в сыворотке активность щелочной фосфатазы постепенно увеличивается у одной суки при дозе 10 мг/кг/день; фосфолипидоз с накоплением вакуолизированных макрофагов в слизистой оболочки желчного пузыря и в брыжеечных лимфатическик узлах собак, получавших 20 мг/кг/день [180].

При внутривенном введении 3-м взрослым собакам в дозах 5, 10, и 20 мг/кг/день через день в течение 36 дней отмечено: незначительные повышения SGPT произошли у 4/6 животных при максимальной дозе вместе с небольшим увеличением в сыворотке крови активности щелочной фосфатазы. Незначительное увеличение SGPT были также отмечены у 1 животного при низкой дозе и у 1 контрольного животного. Гистологические изменения при высокой дозе были ограничены наличием фосфолипидоза. Не было никаких доказательств фосфолипидоза в дозе 5 мг/кг/день [180].

Влияние на фертильность самок и самцов. Азитромицин орально вводили 40 самцам (в течение 64 дней) и 80 самкам (за 15 дней до спаривания и непрерывно в течение 3 недель спаривания) в дозах 0, 30 мг/кг/день. Группы соединялись следующим образом:

Группа 1: обработанных лекарством самцов спаривали с обработанными лекарством самками.

Группа 2: обработанных лекарством самцов спаривали с контрольными самками.

Группа 3: необработанных самцов спаривали с обработанными лекарством самками.

Группа 4: необработанных самцов спаривали с контрольными самками.

Частота наступления беременности составляла: 1- группа - 84%, 2- группа 89%, 3- группа - 90%, 4- группы - 96%. Частота наступления беременности была статистически значительно ниже, в сравнении с контрольной группой, когда самцы и самки обрабатывались азитромицином (группа 1). Частота наступления беременности (84%) в этой группе была, однако, выше, чем в двух предыдущих исследованиях. Почти идентичные проценты беременности в группах 2 и 3 (89% и 90%, соответственно) не указывают на влияние наступления беременности у животных [63].

Фетотоксичность и тератогенные свойства. При оральном введении 20 мышам азитромицина в дозах 0, 10, 20, 40, 50, 100, 200 мг/кг/день, в течение 6-13 дней беременности, было отмечено, что азитромицин не токсичен для материнского организма и плодов, при этом так же не было доказательств тератогенного действия [179].

Пери- и постнатальное влияние. При оральном введении азитромицина 15 крысам в дозах 10, 20, 40 мг/кг/день и 20 крысам в дозах 0, 50, 100, 200 мг/кг/день с первого дня и до конца беременности, а также в течение всего периода лактации было отмечено, что вещество не токсично для материнского организма, плодов и молодняка [175].

Канцерогенность. Длительные исследования на животных по оценке канцерогенных свойств не проводились, поскольку препарат рекомендуется для кратковременного приема и соединение не обладает признаками наличия канцерогенного потенциала [155, 181].

Мутагенность. Азитромицин не проявлял мутагенных свойств в стандартных лабораторных тестах на мутагенность: тест на клетках мышиной лимфомы, кластогенный тест на клетках лимфоцитов человека, кластогенный тест на клетках костного мозга мышей [155, 181].

Антигенная активность. Азитромицин был испытан для индукции системной реакции анафилаксии у морских свинок и кроликов. Азитромицин не обладает антигенным потенциалом в условиях, применяемых в исследованиях [180].

Методы анализа

В литературе имеется несколько публикаций, посвященных количественному определению азитромицина в биологических жидкостях методом ВЭЖХ. Анализ проводили методом ВЭЖХ с электрохимическим детектором и чувствительностью обнаружения препарата в плазме крови 10 нг/мл т [86].

Также описаны условия определения азитромицина методом ВЭЖХ с детектором по флюоресценции Чувствительность в этом случае составила 98,8 нг/мл [86].

Приведены результаты сравнения методов ВЭЖХ с масс-спектрометрическим (химическая ионизация при атмосферном давлении) и электрохимическим детектированием, использованных для количественного обнаружения препарата в плазме крови. В этом исследовании удовлетворительная точность и воспроизводимость результатов анализа наблюдалась в диапазоне концентраций 10 - 250 нг/мл и оба метода показали хорошую корреляцию между собой [86].

Авторы [86] проводили анализ на жидкостном хроматографе «Agilent 1100» (США), оснащенным вакуумным дегазатором, градиентным насосом, автосамплером и термостатом колонок, а также масс - спектрометрическим детектором «Agilent 1100VL» (США) c ионизацией при атмосферном давлении в электроспрее (API-ES). При приготовлении пробы использовались вакуумный концентратор DNA mini (Австрия) и картриджи для твердофазной экстракции AccuBond II ODS-C18, 100 мг производства «Agilent» (США).

В работе использовали следующие реактивы: ацетонитрил 1-го сорта («Криохром», Санкт-Петербург), муравьиная кислота (Merck), ацетат аммония и ацетат натрия (Merck) [86].

Хроматографическое разделение осуществляли на колонке Eсlipse SB-C18, 5 мкм, 4,6 х 150 мм (США) при температуре 70°С. Элюирование проводили в изократическом режиме. Состав подвижной фазы: ацетонитрил - 0,1 M ацетат аммония - 0,002 M ацетат натрия (60:20:20, об/об). Скорость потока 0,7 мл/мин [86].

В масс-спектре азитромицина полученном при ионизации вещества в электроспрее на приборе с одним квадрупольным анализатором наблюдался интенсивный пик с m/z 749,1 соответствующий протонированному молекулярному иону [М+H]+ и с m/z 771,5 - иону аддукта [М+Nа]+. Параметры работы детектора подбирались для достижения максимального выхода аддукта [М+Nа]+: фрагментор 200, напряжение капилляра 4500 В, температура газа 3500С, скорость 12,0 л/мин, давление небулайзера 40 psig [86].

Для выделения азитромицина из плазмы крови и очистки экстракта использовался метод твердофазной экстракции. Картридж предварительно промывали последовательно 1,0 мл ацетонитрила и 2 мл 10% водного раствора ацетонитрила. К 1 мл плазмы добавляли 0,5 мл ацетонитрила, перемешивали на vortex 2 минуты, центрифугировали 5 минут при 13 000 об/мин. Супернатант переносили в картридж. Картридж промывали 1,0 мл 10% водного раствора ацетонитрила, затем элюировали азитромицин 4 мл смеси ацетонитрил - 0,01 М ацетат натрия - муравьиная кислота (90:10:0,1, об/об). Полученный элюат упаривали досуха под вакуумом при температуре 60?С. Пробу растворяли в 200 мкл метанола и аликвоту 50 мкл переносили в хроматограф. Количественное определение проводили методом абсолютной калибровки с использованием программного обеспечения Chemstation фирмы «Agilent» [86].

Значения всех рассчитанных авторами [86] параметров фармакокинетики статистически достоверно не отличаются. Так, площадь под фармакокинетической кривой (от нуля до последней точки забора крови) для препарата Азитромицин составляла - 1,84+0,4 мкг ч/мл, а для препарата Сумамед - 1,94+0,49 мкг.ч/мл. Остальные параметры фармакокинетики (T1/2, MRT, Cmax/AUCo-t) также были близкими. Среднее значение биодоступности (fў) препарата Азитромицин по отношению к препарату Сумамед составляет 0,96+0,11 (доверительный интервал 0,90-1,02). Значение относительной степени всасывания (fўў) для изучаемых препаратов составляет 0,99+0,17 (доверительный интервал 0,91-1,108).

Таким образом, не выявлено статистически достоверных различий в процессе всасывания (как по полноте, так и по скорости всасывания) препаратов азитромицин и сумамед.

Терапевтические дозы азитромицина для некоторых видов животных

Данные литературных источников свидетельствуют, что при лечении азитромицином хламидийной инфекции у пяти кошек в дозах от 10 до 15 мг/кг массы тела, с интервалом 24 часа, в течение 3 дней, а затем 2 раза в неделю, в течение 22 дней, не было отмечено никаких побочных эффектов [109, 133, 160, 168].

Безопасность и эффективность применения азитромицина по литературным данным изучены при пероральных дозах от 3 до 5 мг/кг массы тела, которые вводились каждые двадцать четыре часа в течение трех-четырех дней для лечения восприимчивых бактериальных инфекций животных. При инфекциях, требующих долгосрочного лечения, азитромицин вводили в течение максимум 3 или 4 дней в неделю (путем введения дозы от 3 до 5 мг на кг через день или путем введения этих же доз один раз в три последующих дня каждую неделю, без лечения в другие четыре дня недели) [109, 133, 160, 16886].

По литературныи источникам выявлено, что проводились исслеодания в целях лечения пневмонии жеребят, вызванной Rhodococcus, путем применения оральной дозой азитромициина 10 мг/кг массы тела каждые 24 часа в течение пяти дней, после чего - 10 мг/кг массы тела каждые 48 часов. Указанные выше дозы были введены одновременно с рифампицином в дозе 5мг/кг массы тела каждые 12 часов. Вышеуказанные дозы рекомендованы на основании ретроспективных клинических исследований и исследования фармакокинетики азитромицина у жеребят [113, 126, 138].

2. Собственные исследования

2.1 Материалы и методы исследований

Научно - исследовательскую работу выполняли в период с 2012 по 2014 гг. на базе ФГБОУ ВПО «МГУПП» (г. Москва), в ФГБНУ «ВНИИП ИМ. К.И. СКРЯБИНА»; ООО МНИЦ «ОЗОС» (г. Москва). Клинические исследования проводили в хозяйствах Нижегородской и Саратовской областях.

Предметом исследования выбран новый оригинальный отечественный препарат Азитронит. В исследованиях использовали опытный образец препарата «Азитронит», серия 002270412, предоставленный фирмой ООО «Нита-фарм», Россия.

В доклинических и клинических исследованиях препарата Азитронит было использовано 40 белых беспородных крыс, 140 мышей и 10 кроликов, 20 морских свинок, 282 теленка.

Грызуны и телята содержались в закрытом помещении в стандартных условиях: температура воздуха + 20±2°С, относительная влажность 65±5%, 9-часовое освещение.

Грызуны содержались в клетке на стандартном пищевом рационе (свободный доступ к воде и корму).

В качестве корма для телят использовали стандартный комбикорм, сбалансированный по основным показателям в соответствии с нормами кормления. Кормление осуществляли 2 раза в день в соответствии с нормами, установленными для данной возрастной категории животных. В период карантина и в процессе опыта потребление воды было неограниченно.

Животные были распределены на две группы - основную и контрольную Экспериментальные группы формировались по принципу аналогов (по породе, возрасту, полу и массе). В опыте использовали белых беспородных мышей мышей массой 18-20 г., крыс - самцы массой 230-240 г., кроликов породы шиншилла массой 2,75 - 2,98 кг., морских свинкок массой 400-500 г., телят голштино-фризской породы в возрасте от 2 суток до 4 месяцев с массой тела 50-132 кг.