Результаты клинического и биохимического анализа крови телят представлены в таблице 13.

Из полученных результатов исследований видно, что введение Азитронита в терапевтической и трехкратной терапевтической дозах в течение 9 дней подряд не вызывало статистически значимых изменений гематологических и биохимических показателей крови. Все показатели находились в пределах физиологической нормы для данного вида животных и соответствовали показателям контрольной группы.

При введении пятикратной терапевтической дозы на следующий день после отмены препарата отмечали снижение количества лейкоцитов на 23,7%, повышение уровней АлАТ и АсАТ соответственно на 28,2 и 40,3%, что свидетельствовало о его негативном влиянии в этой дозе на состояние печени.

К 7 суткам после прекращения введения препарата уровень АсАТ и лейкоцитов приходил в норму и соответствовал таковому в контрольной группе, а АлАТ-превышал норму на 39,4%. К 14 суткам перечисленные показатели не отличались от таковых в контрольной группе.

Таким образом, доза препарата 3,0 мл/20 кг массы животного при ежедневном применении в течение 9 дней подряд является максимальной переносимой дозой, а 5,0 мл/20 кг массы животного при таком же курсе - пороговой.

Таблица № 13

Результаты гематологического и биохимического исследования крови телят после внутримышечного введения препарата в течение 9 дней

Доза препарата	Сутки	Hb, г/л	Эритроциты, х1012/л	Лейкоциты, х109/л	Общий белок, г/л	Билирубин, мкмоль/л	АсАТ, Ед/л	АлАТ, Ед/л	Мочевая кислота, мМ/л
Вода для инъекций (контрольная группа)	1	127 11	8,1 0,6	11,4 0,5	68 3	5,15 0,21	39,0 2,2	7,7 0,9	3,21 0,19
	7	133 14	8,3 0,9	11,0 0,7	71 5	5,23 0,18	38,2 3,5	7,2 0,6	3,16 0,27
	14	135 17	7,9 0,4	10,5 0,9	66 4	5,37 0,26	36,6 4,3	6,8 0,4	3,00 0,22
1 мл/20 кг (терапевтическая доза)	1	122 13	7,7 0,8	11,2 0,3	72 6	5,14 0,25	40,2 3,9	7,3 0,3	3,28 0,18
	7	135 16	7,8 0,7	10,5 0,2	65 4	5,37 0,31	36,1 1,8	6,6 0,5	2,96 0,16
	14	137 19	7,4 0,5	10,9 0,4	69 5	5,29 0,26	37,5 1,9	6,8 0,8	3,04 0,31
3 мл/20 кг (3-кратная терапевтическая доза)	1	131 11	7,1 0,3	10,4 0,7	73 7	5,34 0,28	35,5 2,6	6,5 0,6	2,89 0,19
	7	128 15	7,7 0,6	11,2 0,5	66 3	5,05 0,26	37,1 3,1	6,7 0,3	3,66 0,26
	14	122 14	6,3 0,4	10,7 0,3	68 5	5,14 0,23	32,2 2,5	6,4 0, 4	3,47 0,31
5 мл/20 кг (5-кратная терапевтическая доза)	1	134 18	8,0 0,2	8,7 0,3*	71 6	5,27 0,16	50,0 3,9*	10,8 0,6*	3,41 0,24
	7	129 16	7,2 0,7	10,6 0,5	67 8	5,33 0,37	32,3 2,9	9,2 0,5*	3,46 0,14
	14	124 12	7,4 0,5	10,4 0,4	65 7	5,24 0,27	37,2 2,4	7,1 0,3	3,29 0,26

?- p?0,05

Размещено на http://www.allbest.ru/

2.2.5 Разработка метода определения азитромицина в плазме крови и тканях телят

Хроматомасс-спектрометрическое детектирование является наиболее специфичным из доступных на сегодняшний день методов исследования биосубстратов на наличие низких концентраций химиотерапевтических соединений, поэтому на основании литературных данных нами был выбран именно этот метод для определения азитромицина в плазме крови и тканях телят.

Принцип метода заключался в хроматомасс-спектрометрическом определении азитромицина в экстрактах плазмы крови или ткани телят, полученных твердофазной экстракцией аналита при помощи ABN-картриджей (Biotage, Швеция), и обработки полученных данных с помощью программно-аппаратного комплекса AnalystSoftware 1.4.2. Нами были подобраны оптимальные условия хроматографии, обеспечивающие получение стабильных результатов при анализе проб, содержащих низкие концентрации антибиотика. При помощи контрольных образцов тканей и плазмы, содержащих известные концентрации азитромицина была проведена метрологическая аттестация разработанного метода по параметрам: линейность, точность, погрешность метода, предел детектирования и предел количественного определения.

В водной среде при pH<7 молекулы азитромицина приобретают положительный заряд, что позволяет качественно и количественно определять их с использованием метода (ESI)-масс-спектрометрии в положительном режиме при нейтральных и кислых значениях pH.

Как видно из приведенного масс-спектра раствора азитромицина - пик родительского иона имеет отношение массы к заряду равное 749,5 (рис. 8).



Рисунок № 8 МС спектр молекулярного иона азитромицина (Виден пик иона с m/z=749.5000)

Для количественного определения азитромицина методом MRM было проведено исследование распада ионов азитромицина под действием бомбардирующего потока молекул азота с последующим разрешением продуктов распада (методика MS2). Как видно из спектра фрагментации (рис. 2) - наибольшую интенсивность при выбранных условиях имеют пики продуктов с отношением массы к заряду 158.1, 375.2, 591.5.



Рисунок № 9 МС/МС спектр молекулярного иона азитромицина (m/z=749.5000). На рисунке выделены молекулярный и основные продукт-ионы



Рисунок № 10 Образцы МС-хроматограмм 3-х основных продукт-ионов. Калибровочная кривая

Для построения калибровочной кривой в 10 мл элюента был приготовлен раствор азитромицина с концентрацией 1 мг/мл (с учетом содержания азитромицина в стандарте 94.4%). Путем последовательных разбавлений из данного раствора были получены растворы азитромицина в элюенте с концентрациями: 1, 10, 100 и 1000 нг/мл.

Процедуру градуировки азитромицина повторяли 2 раза (в разные дни).

Для определения степени извлечения азитромицина из плазмы крови в образцы плазмы, полученные от контрольного теленка, вносили стандартный раствор азитромицина таким образом, чтобы получить в плазме крови концентрации аналита 1, 10, 100 и 1000 нг/мл. Затем проводили экстракцию этих растворов по описанной выше методике.

Полученные данные отражены в таблице № 8, а также на графике № 9.

Строили график корреляции площади хроматографического пика и концентрации азитромицина в плазме крови телят и рассчитывали степень извлечения (Си) азитромицина по следующей формуле:

Си = Sоб. / К * Сст., где: Sоб. - площадь пика азитромицина в модельной пробе, counts; К - градуировочный коэффициент (рассчитан по градуировочному графику в элюенте 2-й день); Сст. - внесенная концентрация азитромицина в пробе, нг/мл.

Средняя степень извлечения азитромицина из плазмы крови телят составила 75%.

Таблица № 14

Градуировка азитромицина в плазме крови телят

Внесенное количество, нг/мл	Площадь пика/ Степень извлечения	1	2	3	Mean ±SD
1	Площадь пика, counts	1060	993	1010	1021 ± 35
	Степень извлечения, %	78	73	74	75 ± 3
10	Площадь пика, counts	10000	10200	10100	10100 ± 100
	Степень извлечения, %	73	75	74	74 ± 1
100	Площадь пика, counts	102000	97200	99900	99700 ± 2406
	Степень извлечения, %	75	71	73	73 ± 2
1000	Площадь пика, counts	1060000	1050000	1070000	1060000 ± 10000
	Степень извлечения, %	78	77	78	78 ± 1

График № 1 Градуировка азитромицина в плазме крови телят

Для определения точности и воспроизводимости методики с помощью построенной калибровочной кривой были определены концентрации в растворах азитромицина, приготовленных на контрольной плазме крови телят с концентрациями: 20, 100 и 1000 нг/мл. В соответствии с описанными выше методиками осуществляли экстракцию и анализ содержания азитромицина в пробах. Полученные результаты отражены в таблице № 15.

Таблица № 15

Определение внесенных количеств азитромицина в плазме крови телят

Внесенное количество, нг/мл	Измеренная концентрация, нг/мл	Mean ±SD
	1	2	3
20	18,5	17,8	16,7	17,7 ± 0,9
100	87,7	93,3	89,8	90,2 ± 2,8
1000	931,7	1010	877,9	939,8 ± 66,5

Предел обнаружения (LOD) и предел измерения (LOQ) азитромицина в плазме крови телят устанавливали экспериментально на основании полученных пустых хроматограмм (рис.11).

LOD для азитромицина составил 0.83 нг/мл, а LOQ - 2.77 нг/мл. Пример пустой хроматограммы, использованной для вычисления LOD и LOQ азитромицина в плазме крови телят, приведен на рисунке № 11. На рисунке выделен "пик" шума, располагающийся там, где должен быть пик азитромицина. LOD оценивается как концентрация азитромицина, соответствующая утроенной площади этого "пика", а LOQ - как его концентрация, соответствующая десяти площадям данного "пика".



Рис. 11 Пример пустой хроматограммы, использованной для вычисления LOD и LOQ азитромицина в плазме крови телят

Для вычисления концентрации азитромицина в экстрактах плазмы крови телят применили уравнение, полученное при калибровке стандарта азитромицина в плазме крови:

C = S/1059.4, где

C- искомая концентрация азитромицина в плазме крови телят, нг/мл;

S - площадь пика азитромицина в пробе, counts.

Метрологические характеристики метода

Средняя степень извлечения азитромицина из плазмы крови телят составила 75%. Поскольку средняя степень извлечения азитромицина более 70% - следовательно, предложенная пробоподготовка позволяет в достаточной степени экстрагировать азитромицин из плазмы крови телят. Предложенный метод был линеен в диапазоне 1-1000 нг/мл (R2>0,999) и показал хорошую воспроизводимость. Метод позволяет идентифицировать азитромицин на хроматограммах модельных проб и образцов.

На основании полученных пустых хроматограмм были экспериментально установлены предел обнаружения (LOD) и предел измерения (LOQ) азитромицина в плазме крови телят. LOD составил 0.83 нг/мл, а LOQ - 2.77 нг/мл.

Основные метрологические характеристики метода определения азитромицина в плазме крови представлены в таблицах № 16 и № 17.

Таблица № 16

Линейность и параметры определения метода в плазме

Вещество	Предел обнаружения, нг/мл	Предел количественного определения, нг/мл	Стандартная калибровочная кривая, нг/мл	Диапазон линейности, нг/мл
Азитромицин	0,83	2,77	y=1059,4x	1-1000

Таблица № 17

Характеристики прецизионности и точности метода

Диапазон измерений, нг/мл	Показатель повторяемости RSD, %	Показатель точности (границы относительной? погрешности при вероятности Р = 0,95) ±д, %
1-1000	5	20

Определение азитромицина в образцах органов и тканей телят проводилось методом хроматомасс-спектрометрии, как это было описано выше для определения азитромицина в плазме крови телят.

Калибровочная кривая

В качестве калибровочной кривой азитромицина в элюенте использовали калибровку, полученную ранее при определении данного лекарственного вещества в плазме крови телят (см. таблицу № 15 и график №1). Для определения степени извлечения азитромицина из органов и тканей телят в контрольные образцы тканей вносили 1, 10, 100 и 1000 нг/г азитромицина. Данные о степени извлечения азитромицина из образцов органов и тканей отражены в таблице № 18.

Таблица № 18

Степень извлечения азитромицина из печени телят

Внесенное количество, нг/ 1 г ткани		Номер пробы	Mean ±SD
		1	2	3
1	Площадь пика, counts	1210	1180	1110	1167 ± 51
	Степень извлечения,%	89	86	81	85 ± 4
10	Площадь пика, counts	12000	11900	11600	11833 ± 208
	Степень извлечения,%	88	87	85	87 ± 2
100	Площадь пика, counts	108000	103000	116000	109000 ± 6557
	Степень извлечения,%	79	75	85	80 ± 5
1000	Площадь пика, counts	1100000	1070000	1200000	1123333 ± 68069
	Степень извлечения,%	80	78	88	82 ± 5

Таблица № 19

Степень извлечения азитромицина из сердца телят

Внесенное количество, нг/ 1 г ткани		Номер пробы	Mean ±SD
		1	2	3
1	Площадь пика, counts	1210	1180	1110	1167 ± 51
	Степень извлечения,%	89	86	81	85 ± 4
10	Площадь пика, counts	12000	11900	11600	11833 ± 208
	Степень извлечения,%	88	87	85	87 ± 2
100	Площадь пика, counts	108000	103000	116000	109000 ± 6557
	Степень извлечения,%	79	75	85	80 ± 5
1000	Площадь пика, counts	1100000	1070000	1200000	1123333 ± 68069
	Степень извлечения,%	80	78	88	82 ± 5

Таблица № 20

Степень извлечения азитромицина из мышечной ткани телят

Внесенное количество, нг/ 1 г ткани		Номер пробы	Mean ±SD
		1	2	3
1	Площадь пика, counts	1070	1050	1100	1073 ± 25
	Степень извлечения,%	78	77	80	78 ± 2
10	Площадь пика, counts	11300	10600	11100	11000 ± 361
	Степень извлечения,%	83	78	81	81 ± 3
100	Площадь пика, counts	109000	97200	111000	105733 ± 7457
	Степень извлечения,%	80	71	81	77 ± 6
1000	Площадь пика, counts	1060000	1070000	1170000	1100000 ± 60828
	Степень извлечения,%	78	78	86	81 ± 5

Таблица № 21

Степень извлечения азитромицина из почек телят

Внесенное количество, нг/ 1 г ткани		Номер пробы	Mean ±SD
		1	2	3
1	Площадь пика, counts	1070	1120	1210	1133 ± 71
	Степень извлечения,%	78	82	89	83 ± 6
10	Площадь пика, counts	11900	11100	11800	11600 ± 436
	Степень извлечения,%	87	81	86	85 ± 3
100	Площадь пика, counts	103000	116000	110000	109667 ± 6506
	Степень извлечения,%	75	85	80	80 ± 5
1000	Площадь пика, counts	1160000	1090000	1020000	1090000 ± 70000
	Степень извлечения,%	85	80	75	80 ± 5

Таблица № 22

Степень извлечения азитромицина из легких телят

Внесенное количество, нг/ 1 г ткани		Номер пробы	Mean ±SD
		1	2	3
1	Площадь пика, counts	1160	1180	1110	1150 ± 36
	Степень извлечения,%	85	86	81	84 ± 3
10	Площадь пика, counts	11800	10800	11600	11400 ± 529
	Степень извлечения,%	86	79	85	83 ± 4
100	Площадь пика, counts	112000	108000	113000	111000 ± 2646
	Степень извлечения,%	82	79	83	81 ± 2
1000	Площадь пика, counts	1050000	1090000	1100000	1080000 ± 26458
	Степень извлечения,%	77	80	80	79 ± 2

Таблица № 23

Степень извлечения азитромицина из жировой ткани телят

Внесенное количество, нг/ 1 г ткани		Номер пробы	Mean ±SD
		1	2	3
1	Площадь пика, counts	1080	1000	1010	1030 ± 44
	Степень извлечения,%	79	73	74	75 ± 3
10	Площадь пика, counts	10500	10000	10200	10233 ± 252
	Степень извлечения,%	77	73	75	75 ± 2
100	Площадь пика, counts	102000	107000	103000	104000 ± 2646
	Степень извлечения,%	75	78	75	76 ± 2
1000	Площадь пика, counts	1060000	1130000	1080000	1090000 ± 36056
	Степень извлечения,%	78	83	79	80 ± 3

Для всех тканей степень извлечения превышала 70%, следовательно, предложенный метод пробоподготовки позволял экстрагировать большую часть анализируемого вещества из биосубстрата.

Для вычисления остаточных количеств азитромицина в экстрактах органов и тканей телят применяли уравнение, полученное для линий тренда градуировочных графиков по экстрактам:

C = S/X, где:

C - искомая концентрация азитромицина в образце органа или ткани, нг/г;

S - площадь пика азитромицина в пробе, counts;

X - градуировочные коэффициенты линий трендов градуировочных графиков азитромицина. Градуировочные коэффициенты, использованные для вычисления остаточных количеств азитромицина в образцах органов и тканей телят, представлены в таблице № 24 и на графиках № 2-7.

На основании полученных пустых хроматограмм были экспериментально установлены предел обнаружения (LOD) и предел измерения (LOQ) азитромицина в органах и тканях телят. Вычисление LOD и LOQ в органах и тканях телят осуществляли способом, использованным для вычисления LOD и LOQ в плазме крови телят, который был описан выше. Полученные результаты приведены в таблице № 24.

Таблица № 24

Градуировочные коэффициенты, использованные для вычисления количеств азитромицина в органах и тканях телят.

Печень	1123
Сердце	1066,8
Мышцы	1099,6
Почки	1090,1
Жир	1089,5
Легкие	1080,3

Таблица № 25

Пределы обнаружения (LOD) и пределы количественного измерения (LOQ) азитромицина в органах и тканях телят

Вид органа	LOD, нг/г	LOQ, нг/г
Печень	1	3,32
Сердце	1,13	3,76
Мышцы	1,03	3,43
Почки	0,98	3,26
Жир	1,09	3,62
Легкие	0,99	3,29

График № 2 Градуировка азитромицина в экстрактах печени телят

График № 3 Градуировка азитромицина в экстрактах сердец телят



График № 4 Градуировка азитромицина в экстрактах мышц телят

График № 5 Градуировка азитромицина в экстрактах почек телят

График № 6 Градуировка азитромицина в экстрактах жира телят

График № 7 Градуировка азитромицина в экстрактах легких телят

Метрологические характеристики метода

Линейность наблюдалась в диапазоне 1-1000 нг/г (R2>0.99). Степени извлечения азитромицина из образцов органов и тканей телят представлены в таблице № 26. Пределы обнаружения (LOD) и пределы количественного измерения (LOQ) азитромицина в органах и тканях телят приведены в таблице № 27.

Таблица № 26

Линейность и параметры метода определения азитромицина в тканях

Ткань	Предел обнаружения, нг/мл	Предел количественного определения, нг/мл	Стандартная калибровочная кривая, нг/мл	Диапазон линейности, нг/мл
Печень	1	3,32	y=1123x	1-1000
Сердце	1,13	3,76	y=1066,8x	1-1000
Мышцы	1,03	3,43	y=1099,6x	1-1000
Почки	0,98	3,26	y=1090,1x	1-1000
Жир	1,09	3,62	y=1089,5x	1-1000
Легкие	0,99	3,29	y=1080,3x	1-1000

Таблица № 27

Характеристики прецизионности и точности метода определения азитромицина в органах и тканях

Ткань	Диапазон измерений, нг/мл	Показатель повторяемости RSD, %	Показатель точности (границы относительной? погрешности при вероятности Р = 0,95) ±д, %
Печень	1-1000	4	26
Сердце	1-1000	7	18
Мышцы	1-1000	5	21
Почки	1-1000	9	29
Жир	1-1000	7	27
Легкие	1-1000	6	24

2.2.6 Исследование фармакокинетики азитромицина в образцах плазмы крови телят

Результаты определения содержания азитромицина в плазме крови телят представлены в таблицах № 28 (площади пиков) и № 29 (соответствующие концентрации азитромицина, рассчитанные по градуировочному графику).

Площади пиков азитромицина в пробах плазмы крови телят после однократного применения препарата «Азитронит».

Таблица № 28

Время отбора проб, час.	Концентрация, нг/мл	Mean ± SD, counts
	№1	№2	№3	№4
0	350	307	222	297	294 ± 53
0.5	1100000	887000	1260000	970000	1054250 ± 162785
1	604000	551000	663000	634000	613000 ± 47840
3	575000	521000	584000	560000	560000 ± 27821
6	341000	399000	314000	377000	357750 ± 37713
12	132000	109000	140000	113000	123500 ± 14888
24	114000	97500	120000	107000	109625 ± 9673
48	55100	46600	72000	64600	59575 ± 11076
72	40300	29700	44500	39200	38425 ± 6249
96	20100	14800	23300	24400	20650 ± 4305

Концентрации азитромицина в пробах плазмы крови телят после однократного применения препарата «Азитронит».

Таблица № 29

Время отбора проб, час.	Концентрация, нг/мл	Mean ± SD, нг/мл
	№1	№2	№3	№4
0	0	0	0	0	0
0.5	1038	837	1189	916	995 ± 154
1	570	520	626	598	579 ± 45
3	543	492	551	529	529 ± 26
6	322	377	296	356	338 ± 36
12	125	103	132	107	117 ± 14
24	108	92	113	101	104 ± 9
48	52	44	68	61	56 ± 10
72	38	28	42	37	36 ± 6
96	19	14	22	23	20 ± 4

После однократного внутримышечного введения Азитронита в дозе 1 мл на 20 кг массы тела азитромицин быстро и хорошо всасывался из места введения. Уже через 0,5 часа его концентрация в плазме крови достигла уровня 1 мкг/мл. Через час концентрация азитромицина в плазме резко снизилась до 580 нг/мл, но в последующие периоды исследования концентрация антибиотика снижалась очень плавно: 529 нг/мл - через 3 часа, 338 нг/мл - через 6 часов, порядка 100 нг/мл - через 12 и 24 часа. Также следует отметить, что азитромицин в небольших концентрациях определялся в плазме на протяжении 96 часов.

На основании полученных экспериментальных данных рассчитывали основные фармакокинетические параметры Азитронита и строили график зависимости концентрации азитромицина от времени. Основные фармакокинетические параметры азитромицина в составе препарата «Азитронит» представлены в таблице № 30.

Экспериментальные данные по содержанию азитромицина в плазме крови после введения телятам препарата «Азитронит» были апроксимированы математически с построением однокамерной модели со всасыванием C = A* (e^бt + e^-вt) и расчетом основных фармакокинетических параметров: периода полураспределения, периода полувыведения лекарственного вещества, констант всасывания и элиминации, времени достижения максимальной концентрации, величины максимальной концентрации, объема распределения, клиренса, площади под кривой "концентрация лекарственного вещества - время".

Таблица № 30

Фармакокинетические параметры азитромицина в составе препарата «Азитронит» после его введения телятам

Фармакокинетические параметры	Азитронит
kel (час-1)	0,191972
AUC (нг/мл*час)	11370
Cmax (нг/мл)	995
Tmax (час)	0,5
Cl (л/час)	55,40897
t1/2 (час)	3,61
MRT (час)	5,21
Vz (л)	288,6305
Cmax/AUC (ч-1)	0,087526

2.2.7 Анализ содержания азитромицина в образцах органов и тканей телят

Результаты исследований содержания остаточных количеств азитромицина в образцах органов и тканей телят представлены в таблице №35.

Через 20 суток после отмены препарата во всех органах и тканях регистрировали невысокие, но тем не менее значимые уровни азитромицина. Наибольшую концентрацию антибиотика наблюдали в почках - порядка 200 нг/г. Также высокое содержание азитромицина отмечали в легких - порядка 100 нг/г. Примерно на том же уровне находилось содержание азитромицина в жировой ткани - чуть меньше 100 нг/г. В печени и сердце концентрация азитромицина у всех животных не превышала 87 нг/г. Самый низкий уровень антибиотика отмечали в мышечной ткани: 18-51 нг/г.

Через 30 суток уровень азитромицина существенно снижался и не превышал: в почках 152 нг/г, в легких 103 нг/г, в жировой ткани только у одного теленка (№2) отмечали концентрацию азитромицина 59 нг/г, в то время как у других животных этой группы содержание азитромицина было значительно ниже - 4-6 нг/г. В мышцах и сердце у третьего теленка и в мышцах у первого теленка концентрация азитромицина была ниже предела количественного детектирования. В печени отмечали следовые количества препарата порядка 5-20 нг/г.

Остаточные количества азитромицина в органах и тканях у большинства телят через 35 суток и у всех исследованных животных через 40 суток после трехкратного внутримышечного введения препарата «Азитронит» в дозе 1 мл на 20 кг массы не достигают пределов количественного определения азитромицина.

Таблица № 31

Остаточные количества азитромицина в органах и тканях телят (нг/г ткани) после курсового инъекционного применения препарата «Азитронит»

Ткань	20 суток	30 суток	35 суток	40 суток
	№1	№2	№3	№4	№1	№2	№3	№4	№1	№2	№3	№4	№1	№2	№3	№4
Печень	56	87	24	65	12	23	5	14	<LOQ	18	<LOQ	<LOQ	<LOQ	<LOQ	<LOQ	<LOQ
Сердце	71	53	39	44	34	20	<LOQ	4	<LOQ	<LOQ	<LOQ	<LOQ	<LOQ	<LOQ	<LOQ	<LOQ
Мышцы	32	51	18	36	<LOQ	31	<LOQ	19	<LOQ	<LOQ	<LOQ	<LOQ	<LOQ	<LOQ	<LOQ	<LOQ
Почки	203	224	187	251	108	152	4	124	21	<LOQ	<LOQ	17	<LOQ	<LOQ	<LOQ	<LOQ
Жир	74	136	48	104	4	59	6	4	<LOQ	<LOQ	<LOQ	<LOQ	<LOQ	<LOQ	<LOQ	<LOQ
Легкие	138	82	94	118	103	49	67	83	34	<LOQ	13	<LOQ	<LOQ	<LOQ	<LOQ	<LOQ

2.2.8 Эффективность применения препарата Азитронит при лечении болезней органов дыхания телят

2.2.8.1 Определение оптимального режима дозирования Азитронита при лечении острой катаральной бронхопневмонии телят

У больных телят наблюдали следующую клиническую картину болезни: угнетенное состояние, снижение аппетита, напряженное и учащенное дыхание, повышение температуры тела, учащение пульса; громкий, сухой, болезненный кашель, двусторонние истечения из носовых ходов бурого цвета; при аускультации легких выявляли жесткое везикулярное дыхание, крепитацию, влажные крупнопузырчатые хрипы; при перкуссии - очаги притупления.

Результаты исследования показали, что лечение острой катаральной бронхопневмонии телят Энромагом 10% в дозе 0,5 мл/10 кг массы животного один раз в сутки в течение 3 - 5 дней способствовало понижению температуры тела до физиологической нормы к концу 4 - началу 5 суток. Дыхание у животных становилось мягче, хрипы практически не прослушивались. На 8-10 сутки очагов притупления в легких и хрипов у телят не обнаруживали.

Обобщённые результаты опыта по определению оптимальной дозы препарата представлены в таблице 32.

Таблица № 32

Титрация доз Азитронита для лечения острой катаральной бронхопневмонии телят

Показатели	Группа животных
	I	II	III	IV	Энромаг 10%
Количество животных, голов	10	10	10	10	12
Доза препарата, мл/20 кг массы	0,5	0,8	1,0	1,5	0,5мл/10кг
Кратность введения	3х	2х	2х	2х	3-5
Интервал между введениями, ч	24	48	24	48	24
Выздоровело, голов	-	10	10	10	12
Потребовалось дополнительное лечение	8	0	0	0	0
Пало, голов	0	0	0	0	0
Вынужденно убитых, голов	2	0	0	0	0
Длительность лечения, суток	9	4	2	4	3-5
Клиническое выздоровление, суток	14-16	7-8	4-5	4-5	8-10
Терапевтическая эффективность, %	-	100	100	100	100

Процесс выздоровления телят, которых лечили Азитронитом в дозе 0,5 мл/20 кг массы животного, шел медленно. На 7 сутки лечения симптомы бронхопневмонии не исчезли, общее состояние оставалось угнетенным, температура тела и частота дыхания находились выше нормы. Во избежание осложнения болезни и гибели телят в дальнейшем их лечили по схеме, принятой в хозяйстве. Улучшение общего состояния наблюдали на 9 сутки, а клиническое выздоровление телят отмечали на 14 -16 сутки.

Применение Азитронита в дозе 0,8 мл/20 кг способствовало понижению температуры тела телят до физиологической нормы на 4-5 сутки лечения, дыхание у животных становилось мягче. На 7-8 сутки хрипов и очагов притупления в легких не обнаруживали.

Лечение телят в дозах 1,0 и 1,5 мл/20 кг массы животного снизило температуру тела до физиологической нормы к концу 3-х началу 4-х суток. У животных на 4-5 сутки отсутствовали истечения из ноздрей, хрипы и очаги притупления в легких, а общее клиническое состояние приближалось к норме.

Результаты изучения эффективности различных доз и схем применения препарата показали, что наиболее оптимальным режимом дозирования при острой бронхопневмонии телят является 1,0 на 20 кг массы животного, дважды, с интервалом 24 часа.

2.2.8.2 Результаты изучения терапевтической эффективности Азитронита при подострой бронхопневмонии телят

Клиническая картина подострой бронхопневмонии была аналогичной таковой при остром течении болезни, однако, менее выраженной.

По результатам бактериологического исследования от павших животных из пораженной и здоровой легочной ткани и слизистой бронхов были выделены и изолированы микоплазмы, 12 штамов кишечной палочки, причем 5 только из пораженной легочной ткани;

4 - пастерелл, 7 - золотистого стафилококка, 4- диплококка, 2- гемолитического стрептококка из всех исследуемых участков легкого.

Результаты исследования терапевтической эффективности препарата Азитронит в сравнении с препаратом аналогичного назначения Энромагом 10% представлены в таблице 33.

Проведенное лечение подострой бронхопневмонии телят Энромагом 10% показало, что животные выздоравливали через 8-10 суток. Из 14 животных, подвергнутых лечению, пало 2 животных. Эффективность лечения составила 85,7%.

Лечение больных телят подострой бронхопневмонией Азитронитом в дозе 1,0 мл/20 кг массы животного двукратно, с интервалом 48 часа показало, что значительное улучшение клинического состояния наступало на 5 сутки лечения. Температура тела у больных телят снижалась на 0,5-1,4 ?С. Постепенно ослаблялись хрипы и кашель, меньше наблюдалось выделений из ноздрей, дыхание становилось ровным. Клиническое выздоровление животных наступало на 7-8 сутки лечения. Из 14 животных, подвергнутых лечению, пал 1 теленок. Эффективность применения препарата составила 92,8%.

2.2.8.3 Результаты изучения терапевтической эффективность Азитронита при хронической бронхопневмонии телят

Животные, больные хронической бронхопневмонией, отставали в росте, у них был изменчивый аппетит, постоянно присутствовал кашель, температура тела незначительно повышена. Из носовых отверстий выделялись серозные истечения, отмечался цианоз слизистых оболочек. При аускультации прослушивались сухие хрипы в легких, при перкуссии - очаги притупления.

Результаты исследований представлены в таблице 33.

Лечение хронической бронхопневмонии телят препаратом Энромаг 10% показало, что животные выздоравливали через 13-15 суток, хрипы и кашель отсутствовали, дыхание было ровным, температура находилась в пределах физиологической нормы.

Из 8 животных, подвергнутых лечению, было вынужденно убито 2 теленка. Эффективность лечения составила 75,0%.

Лечение больных телят хронической бронхопневмонией Азитронитом в дозе 1,0мл/20 кг массы животного трехкратно, с интервалом 48 часов показало, что клиническое выздоровление животных наступало на 10-12 сутки лечения. Из 14 животных, подвергнутых лечению, пал 1 теленок. Эффективность применения препарата составила 91,6%.

2.2.8.4 Результаты изучения терапевтической эффективности Азитронита при остром трахеобронхите телят

Диагноз ставили на основании клинических признаков болезни. Животные были вялые, малоподвижные, волосяной покров взъерошен, видимые слизистые оболочки были бледными, у некоторых животных отсутствовал аппетит. У телят регистрировали сухой болезненный кашель, слизистые носовые истечения при кашле. После физической нагрузки появлялась одышка, которая сохранялась на протяжении 5-10 минут, и сухие хрипы. При аускультации отмечали жесткое учащенное дыхание, в бронхах - характерные булькающие хрипы. В таблице 37 представлены результаты изучения эффективности разных схем применения Азитронита при остром трахеобронхите телят.

При введении препарата в дозе 1,0 мл/20 кг массы животного двукратно, с интервалом 24 часа положительную динамику отмечали через 12-16 часов после первой инъекции. Клиническое выздоровление животных наступало на 3-5 сутки. Дополнительного лечения или изменения режима дозирования не потребовалось.

При двукратном введении препарата телятам в той же дозе с интервалом 48 часов также отмечали положительную динамику через 12-16 часов после первой инъекции.

Значительное улучшение состояния у животных регистрировали после 2 инъекции препарата на 5 сутки. Клиническое выздоровление телят наступало на 6-7 сутки после начала лечения. Побочных реакций на введение Азитронита при всех режимах дозирования не отмечали.

2.2.8.5 Результаты изучения терапевтической эффективности Азитронита при остром бронхите телят

Клиническая картина проявления острого бронхита была практически такой же, как описанная выше для трахеобронхита. В таблице 33 представлены результаты изучения эффективности разных схем применения Азитронита при остром бронхите телят.

При введении препарата в дозе 1,0 мл/20 кг массы животного 2-3-кратно с интервалом 24 часа положительную динамику отмечали через 12-16 часов после первой инъекции, а клиническое выздоровление животных наступало на 4-6 сутки. Дополнительного лечения или изменения режима дозирования не потребовалось.

При двукратном введении препарата телятам в той же дозе с интервалом 48 часов также отмечали положительную динамику их физиологического состояния через 18-24 часа после первой инъекции. Значительное улучшение больных животных регистрировали на 3 сутки лечения, а клиническое выздоровление наступало на 4-5 сутки. Побочных реакций на введение Азитронита при всех режимах дозирования не отмечали.

2.2.8.6 Результаты изучения терапевтической эффективности Азитронита при гнойно-катаральной пневмонии, осложненной гастроэнтеритом

Опыты по изучению эффективности Азитронита при лечении осложненных респираторных инфекций проводились в 2 хозяйствах Саратовской области.

Основные клинические проявления пневмонии были следующие: животные вялые, истощенные, малоподвижные, волосяной покров взъерошен, тремор скелетной мускулатуры, температура тела повышена видимые слизистые оболочки были бледными, аппетит снижен, у некоторых животных отсутствовал. У телят регистрировали сухой болезненный кашель, слизисто-гнойные носовые истечения при кашле, после физической нагрузки появлялась одышка, которая сохранялась на протяжении 5-10 минут, и сухие хрипы. При аускультации отмечали жесткое учащенное дыхание, в бронхах - характерные булькающие хрипы. При гастроэнтерите дополнительно отмечали: брюшная стенка при пальпации болезненная, перистальтика кишечника усилена, слышны урчащие звуки в кишечнике, дефекация частая (2-3 раза в час), фекалии жидкие, водянистые с примесью слизи.

При патологоанатомическом исследовании павшего теленка выявили: труп истощен, слизистые бледные, при вскрытии грудной полости верхушечные доли легких были красно-серого цвета, дряблые. Имелись участки гнойного воспаления легочной ткани и ателектазы, бронхи были заполнены мутным тягучим экссудатом, в передне-нижних долях обнаруживали эмфизематозные очаги. Органы брюшной и тазовой полости не были изменены.

При исследовании пораженной и здоровой ткани и слизистой оболочки бронхов бактериологами было выделено и типировано16 штамов кишечной палочки, 9 штамов золотистого стафилококка, 3-белого стафилококка, 5- пастерелл,7 - диплококка,4 - гемолитического стрептококка.

Коковая микрофлора и пастереллы были выделены как из пораженного участка, так и демаркационной зоны.

Проведенное лечение телят с гнойно-катаральной пневмонией, осложненной гастроэнтеритом, показало высокую эффективность Азитронита, однако для выздоровления потребовалось 5 инъекций препарата. Улучшение состояния телят наблюдалось на 4-5 сутки после начала лечения, через 10-12 дней клинические признаки пневмонии практически отсутствовали. Из 22 подвергнутых лечению телят, выздоровело 20, два животных были вынужденно убиты до окончания лечения ввиду тяжелого течения болезни. Эффективность лечения составила 93,3%.

Внутримышечное применение Флорона 30% больным телятам в дозе 1,0 мл на 15 кг массы животного, трехкратно, с интервалом 48 часов, обеспечило эффективность равную 90%

Полученные в ходе эксперимента результаты представлены в таблице 33.

Как видно из представленных данных Азитронит не уступал по эффективности препарату Флорон 30%. Инъекции Азитронита хорошо переносились телятами, побочных явлений и аллергических реакций зафиксировано не было.

Таблица 33

Терапевтическая эффективность Азитронита при болезнях органов дыхания телят

Препарат	Кол-во жив-х	Доза	Кратность введения	Интервал между введениями	Выздоро-вело, гол	Пало, гол	В/убито, гол	Длительность лечения	Выздоровление, сут	Эффективность, %
ПОДОСТРАЯ БРОНХОПНЕВМОНИЯ
Азитронит Энромаг 10%	14 14	1,0 мл/20 кг 0,5 мл/10 кг	2 3-5	48 24	13 12	1 2	0 0	4 3-5	7-8 8-10	92,8 85,7
ХРОНИЧЕСКАЯ БРОНХОПНЕВМОНИЯ
Азитронит Энромаг 10%	14 8	1,0 мл/20 кг 0,5 мл/10 кг	3 5	48 24	13 6	1 0	0 2	6 5	10-12 13-15	92,8 75,0
ОСТРЫЙ ТРАХЕОБРОНХИТ
Азитронит	25 25	1,0 мл/20 кг 1,0 мл/20 кг	2 2	24 48	24 23	0 0	1 2	2 4	3-5 6-7	96 92
ОСТРЫЙ БРОНХИТ
Азитронит	30 20	1,0 мл/20 кг 1,0 мл/20 кг	3 2	24 48	20 18	0 0	0 2	2 4	3-4 7-8	100 90
ГНОЙНО-КАТАРАЛЬНАЯ ПНЕВМОНИЯ, ОСЛОЖНЕННАЯ ГАСТРОЭНТЕРИТОМ
Азитронит Флорон 30%	22 17	1,0 мл/20 кг 1,0 мл/15 кг	3-5 3	24 48	20 15	0 1	2 1	3-5 6	10-12 10-14	93,3 90,0

Обсуждение

Болезни органов дыхания телят неспецифической, вирусной, микоплазменной, хламидийной или бактериальной этиологии занимают одно из ведущих мест в структуре заболеваемости молодняка крупного рогатого скота в Российской Федерации. Во многих хозяйствах страны по этой причине падеж телят составляет 20-30% от общего числа поголовья [4]. Болезни органов дыхания, среди которых ведущая роль принадлежит бронхопневмонии, являются существенным фактором, сдерживающим рост поголовья крупного рогатого скота, снижающим продуктивность животных, увеличивающим затраты на кормление, лечение и содержание животных, что ограничивает возможности развития этого сектора агропромышленного комплекса.

Инфекционные заболевания дыхательных путей обычно протекают в смешанной форме, что осложняет течение болезни и выбор эффективного лекарственного средства. Наиболее часто первичным этиологическим фактором в развитии бронхопневмонии выступают вирусы, микоплазмы или хламидии, которые запускают патологический процесс при снижении резистентности организма вследствие плохих условий содержания, отсутствия сбалансированного рациона или других неблагоприятных факторов внешней среды. Эти патогены создают условия для размножения условно-патогенной микрофлоры респираторного тракта, что значительно осложняет течение заболевания и в случае острого течения могут привести к гибели животного. Сами по себе микоплазменные и хламидийные инфекции обычно протекают в хронической форме и не сопровождаются ярко выраженной клинической симптоматикой, что приводит к определенным трудностям в диагностике данных патологий. Основными клиническими проявлениями в таких случаях являются: потеря массы, снижение или даже потеря аппетита, вялость и, как следствие, снижение продуктивности. Для постановки точного диагноза необходимо проведение ряда иммунологических анализов или ПЦР-диагностика, что может представлять определенные трудности в условиях хозяйства. Учитывая смешанный характер возбудителей респираторных заболеваний, при выборе схемы лечения следует остановиться на препарате, обладающем не только активностью в отношении бактерий, но также и в отношении микоплазм и хламидий. В настоящее время такими препаратами являются соединения из группы фторхинолонов и макролидов, такие как тилозин или тиамулин. Общим недостатком антимикробных средств является избирательная активность и развитие устойчивости микрофлоры к антибактериальным средствам, ограничивающие эффективность их применения [3].

Цикличность выращивания животных приводит к персистенции бактерий и вирусов и появлению устойчивых инфекций, трудно поддающихся лечению. Одновременно с ростом количества антибактериальных препаратов, при-меняемых в животноводстве, увеличивается количество возбудителей, устойчивых к антимикробным средствам. Антибиотикорезистентность является одной из ведущих проблем современной фармакологии во всем мире. Одним из путей преодоления устойчивости к антибактериальным средствам является использование комбинированных препаратов на основе разных антибактериальных соединений, что позволяет также расширить спектр действия лекарственного средства. Другой способ - использование новых соединений, к которым еще не сформировались механизмы устойчивости.

В медицинской практике среди всех макролидных антибиотиков выделяется лекарственный препарат для медицинского применения «Сумамед®» производства «Плива» (Хорватия), который содержит в качестве действующего вещества оригинальное соединение - азитромицин. Это вещество относится к новому подклассу макролидных антибиотиков - азалидам. Азитромицин был синтезирован в 1981 году, а в 1988 году выведен на рынок медицинских фармацевтических препаратов, и, таким образом, является относительно новым антибактериальным соединением. В ветеринарии до настоящего времени азитромицин не применялся, следовательно, возникновение устойчивых к нему бактерий, хламидий и микоплазм маловероятно.

От других макролидов азитромицин выгодно отличается своими фармакокинетическими свойствами: он хорошо проникает в ткани из плазмы крови, накапливается там в высоких концентрациях и длительное время (до 10 суток) оказывает терапевтическое действие. За счет создания высоких концентраций в тканях азитромицин проявляет бактерицидный эффект в отношении целого ряда возбудителей и демонстрирует значительно более высокую активность по сравнению с другими макролидами в отношении микроорганизмов, вызывающих инфекции нижних дыхательных путей -- Н.infuenzae (включая штаммы, продуцирующие бета-лактамазы), М.catarrhalis, М.pneumoniae, Legionella pneumophila, и несколько меньшую, но вполне достаточную для эрадикации Ch.pneumoniae, Str.pneumoniae и Bordetella pertussis [86].

Применение азитромицина при инфекциях нижних отделов респираторного тракта основано, во-первых, на его способности создавать высокие и длительно поддерживающиеся концентрации в бронхиальном секрете, слизистой оболочке бронхов, легочной ткани и жидкости, покрывающей эпителий альвеол, во-вторых -- на оптимальном спектре активности в отношении как типичных, так и атипичных респираторных патогенов. Азитромицин достаточно широко применяется в гуманной медицине, однако в ветеринарии до последнего время практически не использовался. Несмотря на то, что определенные исследования в этом направлении сейчас проводятся, на сегодняшний день отсутствуют официально разрешенные для ветеринарного применения лекарственные формы на основе азитромицина. Вышесказанное дает основание предполагать, что применение азитромицина для лечения бактериальных инфекций животных, в частности, купного рогатого скота, будет весьма перспективным.

Разработка и внедрение в ветеринарную практику нового антибактериального лекарственного препарата требует всестороннего исследования его фармако-токсикологических свойств на лабораторных животных, безопасности и эффективности применения на сельскохозяйственных животных.

На первом этапе доклинических исследований нам предстояло выяснить терапевтическую широту препарата в опытах на лабораторных животных, выявить основные органы-мишени азитромицина, оценить влияние токсических доз на жизненно важные органы и системы организма.

При исследовании острой токсичности препарата было установлено следующее: однократное пероральное введения препарата в дозах до 30 г/кг не вызвало гибели мышей, а также проявления признаков интоксикации вплоть до 14 дней после введения. Доза 30000 мг/кг (что соответствует 3000 мг/кг по действующему веществу) была максимально возможной для перорального введения мышам. Таким образом, согласно ГОСТ 12.1.007-76 препарат можно отнести к малоопасным веществам. Согласно литературным данным ЛД₅₀ азитромицина при пероральном введении [86] составляет 3000-4000 для мышей и более 2000 мг/кг для крыс. В наших исследованиях лекарственная форма на основе азитромицина оказалась менее токсичной: введение максимально возможной для перорального введения дозы (3000 мг/кг в пересчете на азитромицин) не вызвало гибели животных и признаков интоксикации.

Внутримышечное введение Азитронита оказалось более токсичным. После введения дозы 5000 мг/кг в правую нижнюю конечность отмечали общее угнетение, отек в месте введения, конечность была вытянута и не реагировала на прикосновения. Отмеченные изменения частично проходили на следующие сутки после введения. Все животные этой группы остались живы. При повышении дозы препарата до 10000 мг/кг (соответствует примерно 0,15 мл/мышь) наблюдали аналогичную картину интоксикации, через час одно животное пало, через сутки погибла еще одна особь. Введение дозы препарата 15000 мг/кг (0,3 мл/мышь) привело к быстрой гибели всей опытной группы животных в течение 1-2 часов.

Согласно литературным данным ЛД₅₀ при внутрибрюшинном введении азитромицина составила для мышей 400-600 мг/кг, для крыс - 500-900 мг/кг [86].

Согласно результатам наших исследований ЛД₅₀ при внутримышечном введении мышам в пересчете на азитромицин составила 930 мг/кг, а доза 500 мг/кг не вызвала эффекта. Учитывая, что внутрибрюшинное введение оказывает действие, близкое по токсичности к внутривенному введению, и более токсично по сравнению с внутримышечным введением отмеченное различие вполне объяснимо.

Исследование подострой токсичности Азитронита при внутримышечном введении белым крысам показало, что введение Азитронита во всех дозах отразилось статистически значимым образом на текущих значениях привесов. Начиная с 5 суток и на протяжении всего опыта животные всех опытных групп неохотно потребляли корм и воду в сравнении с контрольной группой, что соответственно отразилось на привесах. В группах, получавших 2 максимальные дозы 930 и 465 мг/кг, отмечали отрицательный прирост по отношению к исходной массе тела: 82,12 и 88,41% соответственно.

Для более наглядного представления полученные данные по приросту массы крыс представлены в виде графика на рисунке 12.

Рис. 12 Динамика прироста массы животных

На представленном графике показано расхождение данных по динамике прироста массы животных, при введении Азитронита во всех дозах в сравнении с контрольными значениями. Кроме того, наглядно представлено резкое снижение массы крыс, при введении препарата в дозах 930 и 465 мг/кг, которое отмечали в первую неделю опыта. От дозы 465 мг/кг во вторую неделю масса крыс практически не менялась, а максимальная доза 930 мг/кг вызвала дальнейшее и резкое снижение массы животных, что свидетельствует об отрицательном влиянии препарата на общее состояние подопытных крыс.

При введении Азитронита в дозе 186 мг/кг, к концу опыта крысы прибавили в массе (114,58% по отношению к исходной массе тела), однако меньше, чем у крыс контрольной группы, у которых прирост составил 129,95%. Данное различие было статистически достоверным. Следует отметить, что ориентировочная терапевтическая доза препарата составляет 0,05 мл/кг массы, что значительно меньше испытанных в опыте доз, поэтому развитие токсических эффектов при соблюдении режима дозирования маловероятно.

Длительное введение Азитронита в дозе 930 мг/кг проявилось в некотором снижении таких гематологических показателей крыс, как гематокрит, гемоглобин и содержание эритроцитов, которые составили соответственно 43,12±0,77; 144,67±3,04 и 7,57±0,16 против контрольных значений 46,87±0,75; 160,33±3,13; 8,25±0,19. Остальные показатели не отличались от контрольных значений. В то же время следует отметить, что все показатели находились в пределах физиологической нормы для данного вида животных. Отмеченные изменения, скорее всего, являются следствием пониженного потребления корма и потери массы тела.

При изучении биохимических показателей было установлено, что введение препарата в дозах 930 мг/кг и 465 мг/кг вызывает статистически достоверное изменение уровня аспартатаминотрансферазы: соответственно 250,83±16,39 и 225,67±14,06 против данных контроля 167,83±12,04; в верхней дозе наблюдается повышение уровня лактатдегидрогеназы 2494,33±231,80 против контрольных значений 1830,33±101,31. Остальные биохимические показатели не претерпели статистически значимых изменений и находились в пределах физиологической нормы, однако имела место дозозависимая тенденция к повышению уровня креатинина, общего и прямого билирубина в опытных группах. Описанные изменения носили скорее функциональный характер (повышение уровня ферментов не было значительным) и свидетельствовали о повышенной нагрузке на органы, осуществляющие обезвреживание и выведение из организма чужеродных веществ - печень и почки.

В исследованиях Тягнибединой Н.И. также было выявлено достоверное повышение уровней билирубина и креатинина [86].

Согласно литературным данным изменение активности ферментов печени (АЛТ, АСТ) является наиболее частым симптомом интоксикации при отравлении азитромицином. При оральном введении доз 100 и 200 мг/кг в день в пересчете на азитромицин было также отмечено повышение АСТ, АЛТ и щелочной фосфатазы [86].

Наши результаты согласуются с описанными выше литературными источниками; на основании имеющихся данных можно сделать вывод, что основным органом-мишенью азитромицина является печень.

При определении массовых коэффициентов внутренних органов были выявлены достоверные снижения относительных масс легких, печени и сердца во всех опытных группах, селезенки и почек - в 2 максимальных дозах. Значения относительной массы сердца, печени и легких в дозе 186 мг/кг претерпели достоверные изменения и снизились соответственно на 10%; 15% и 46% по сравнению с контрольными значениями.

Следует отметить, что изменения относительной массы внутренних органов не были дозозависимы: наибольшее снижение массового коэффициента сердца (на 37%) отмечали в средней группе, получавшей 465 мг/кг, в то время как в максимальной и в минимальной группе этот показатель был практически одинаковым и уменьшился соответственно на 14% и 10%.

Аналогичная картина наблюдалась в случае с печенью: в средней дозе масса органа снизилась на 30%, а в максимальной и минимальной дозах - на 16% и 15% соответственно. В случае с легкими наибольшее различие по сравнению с контрольной группой наблюдалось в группе, получавшей минимальную дозу: массовый коэффициент снизился на 46% по сравнению с контрольной группой, в то время как в группах, получавших 2 максимальные дозы, коэффициенты снизились на 23% и 21%.

Массовые коэффициенты почек и селезенки статистически значимо отличались от контрольной группы только у крыс, получавших внутримышечно препарат в дозах 930 и 465 мг/кг: относительная масса селезенки в этих группах снизилась соответственно на 29% и 33%, почек - соответственно на 21% и 20%.

В группе, которой препарат вводили в дозе 186 мг/кг, массовый коэффициент селезенки снизился на 15%, а почек - на 9%, но эти изменения не были статистически значимы при р?0,05.

Учитывая отсутствие дозозависимого эффекта, описанные выше изменения массовых коэффициентов внутренних органов вряд ли обусловлены введением препарата. Кроме того, существенных изменений биохимических показателей не было выявлено в ходе опыта, повышенные уровни ферментов печени скорее носили функциональный характер и были обусловлены повышенной нагрузкой на детоксицирующую и экскреторную функцию органа при введении высоких доз ксенобиотика. Причина существенных различий коэффициентов внутренних органов может быть в неоднородности популяции подопытных животных. Микроскопическое исследование внутренних органов не выявило патологии в печени, почках, селезенке и сердце, что подтверждает вывод об отсутствии дистрофических изменений в этих органах.

Введение препарата в максимальной дозе 930 мг/кг выявило изменения при гистологическом исследовании легких крыс: были выявлены участки альвеолярной эмфиземы, расширение просвета альвеол, разрыв межальвеолярных перегородок; скопления лимфоидной ткани вокруг бронхов. В отдельных участках легких наблюдали признаки застойной гиперемии и отека; в таких участках отмечали выпотевание транссудата в просвет альвеол и в бронхи. Как известно из литературных источников и как показали наши исследования, азитромицин имеет тропизм к легочной ткани, следовательно, данные изменения легких вполне ожидаемы.

Наиболее существенные изменения при гистологическом исследовании были выявлены в мышечной ткани с места инъекции и были характерны для разлитого гнойного воспаления, особенно в максимальной дозе. Изменения мышечной ткани отмечены во всех дозах, но степень ее повреждения зависит от дозы препарата, при 186 мг/кг они незначительные, в дозе 465 мг/кг выражены сильнее, а в дозе 930 мг/кг отмечено разрушение клеток ткани. Таким образом, препарат оказывал выраженное раздражающее действие при внутримышечном введении крысам в высоких дозах, однако воспалительная реакция была локализована и не вызывала системных эффектов. Следует отметить, что в формате данного исследования испытывались дозы препарата, в 4-20 раз превышающие терапевтическую, а также курс обработки составил 14 дней, в то время как согласно рекомендациям по применению препарата, курс лечения обычно не превышает 3 введений. Учитывая вышесказанное, при соблюдении режима дозирования появление побочных реакций и признаков местной воспалительной реакции маловероятно.