Иммуномодулирующие свойства диоксида титана и других красителей пищи и лекарств

Размещено на http://www.allbest.ru/

Учреждение образования

Витебский государственный ордена дружбы народов медицинский университет

УДК: 57.083.3:[615.03:613.29:667]

Иммуномодулирующие свойства диоксида титана и других красителей пищи и лекарств

Автореферат диссертации

на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

по специальности 14.03.09 - клиническая иммунология, аллергология

Аляхнович Наталья Сергеевна

Витебск 2017

Работа выполнена в УО «Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский университет»

Научный руководитель: Новиков Дмитрий Кузьмич, доктор медицинских наук, профессор, акад. РАЕН, РАМТН, заведующий кафедрой клинической иммунологии и аллергологии с курсом ФПК и ПК УО «Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский университет»

Официальные оппоненты:

Федорович Сергей Владимирович, заслуженный деятель науки, лауреат Государственной премии Республики Беларусь, доктор медицинских наук, профессор, главный научный сотрудник лаборатории комплексных методов исследования пищевых продуктов республиканского унитарного предприятия «Научно-практический центр гигиены»

Выхристенко Людмила Ростиславна, доктор медицинских наук, профессор, заведующая кафедрой внутренних болезней №2 УО «Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский университет»

Оппонирующая организация: ГУ «Республиканский научно-практический центр радиационной медицины и экологии человека»

Защита состоится 14 сентября 2017 в 14 часов на заседании совета по защите диссертаций Д 03.16.04 при УО «Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский университет» по адресу: 210023, г. Витебск, проспект Фрунзе, 27, E-mail: all-vgmu@mail.ru. Тел. 8-0212-57-53-80

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке УО «Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский университет»

Автореферат разослан «6» июля 2017 г.

Ученый секретарь совета по защите диссертаций, доктор медицинских наук, профессор Выхристенко Л.Р.

гиперчувствительность краситель синтетический иммунотропность

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

В развитии аллергических заболеваний доказана роль бытовых, эпидермальных, пыльцевых и пищевых аллергенов [Хаитов Р.М., Ильина Н.И., 2009; Паттерсон Р., Грэммер Л.К., Гренбергер П.А., 2000], кроме того, пищевые добавки (ПД), которые долго время считались инертными и безвредными, приобретают свойства аллергенов и/или иммуномодуляторов при постоянном бесконтрольном поступлении в организм человека [Новиков Д.К. [и др.], 2009]. Возрастает значимость «алиментарной» аллергии, т.е. гиперчувствительности на вещества, которые добавляются сознательно или случайно попадают в пищу [Титова Н.Д., 2008; Лусс Л.В., 2009]. В связи с учащением случаев лекарственной гиперчувствительности, сообщениях о нежелательных реакциях при употреблении пищевых продуктов и лекарственных средств (ЛС), актуальным является изучение ПД (пищевых красителей в частности), входящих в их состав.

На сегодняшний день в пищевой промышленности используется более 2500 различных ПД [Branen A.L. [et al.], 2001]. Синтетические красители широко распространены на рынке пищевой продукции и являются обычным компонентом пленочных оболочек ЛС, капсул и сиропов [СанПиН 13-10 РБ, 2002].

Алиментарный кодекс объединяет в себе информацию о стандартах, протоколах и руководствах, применяемых при изготовлении пищи, а Европейское управление по безопасности пищи (EFSA) и администрация по пище и лекарствам США (FDA) устанавливают регламентирующие правила применения ПД [Carocho M. [et al.], 2014]. Требования безопасности ПД, ароматизаторов и технологических вспомогательных средств определяет Технический регламент таможенного союза 029/2012 на территории Республики Беларусь, Российской Федерации и Республики Казахстан [ТС 029/2012, Евраз. экон. комис., 2012].

Тем не менее, регламентирующие документы не учитывают суммарное поступление ПД разными путями, не имеют критериев, оценивающих влияние на систему иммунитета людей с сопутствующими аллергическими заболеваниями и другой иммунопатологией. С разработкой и использованием новейших методов оценки иммунотропности пищевых красителей (ПК) важным является установка современных регламентов в их использовании и критериев оценки их биобезопасности [EFSA ANS Panel, 2009, 2013].

Связь с крупными научными программами и темами

Тема диссертации соответствует приоритетным направлениям научных исследований Республики Беларусь, утвержденным постановлением Совета Министров от 19 апреля 2010 г. №585 «О приоритетных направлениях научных исследований Республики Беларусь на 2011-2015 годы» (подпункт 4.2 «Новые технологии профилактики, диагностики, лечения и реабилитации сердечно-сосудистых, онкологических и других социально значимых заболеваний»), а также от 12 марта 2015 г. №190 «О приоритетных направлениях научных исследований Республики Беларусь на 2016-2020 годы» (подпункт 4.1 «Профилактика, диагностика и лечение социально значимых заболеваний человека инфекционной и неинфекционной этиологии; активация и механизмы защитных эндогенных резервов организма человека при социально значимых заболеваниях; естественно и искусственно воспроизводимые факторы внешней среды в профилактике, лечении и реабилитации»).

Диссертация выполнялась в рамках темы научно-исследовательской работы кафедры клинической иммунологии и аллергологии с курсом ФПК и ПК Витебского государственного медицинского университета «Патогенез, диагностика, лечение и профилактика аллергических и иммунодефицитных болезней», зарегистрированной в центре государственной регистрации научно-исследовательских и опытно-конструктивных работ Республики Беларусь, №20130877 от 10.06.2013.

В ходе выполнения диссертационной работы получены гранты Европейской академии аллергологов и клинических иммунологов (EAACI) и Австрийского фонда международного сотрудничества в образовании и науке (OeAD).

Цель и задачи исследования

Цель настоящего исследования -- выявление иммуномодулирующих свойств диоксида титана и других красителей пищи и лекарств для разработки методов диагностики гиперчувствительности, и оценки их биобезопасности.

Задачи исследования:

1) Выявить клинико-лабораторные признаки различных форм непереносимости диоксида титана и других красителей пищи и лекарств.

2) Разработать и апробировать диагностические провокационные тесты для подтверждения клинической непереносимости пищевых красителей.

3) Определить локальное и системное воздействие красителей на клетки системы иммунитета человека после провокационных тестов.

4) Оценить иммунотропность красителей по их влиянию на секреторную функцию лейкоцитов и фагоцитарную активность нейтрофилов человека.

5) Разработать и апробировать методы определения аллергенных и иммуномодулирующих свойств синтетических красителей in vitro.

Объект исследования: пациенты с аллергопатологией и непереносимостью пищевых красителей и здоровые добровольцы.

Предмет исследования: клинические и иммунологические показатели, полученные при исследовании свойств красителей пищи и лекарств.

Научная новизна

Впервые разработаны и апробированы диагностические провокационные тесты для подтверждения клинической непереносимости пищевых красителей с оценкой локальной - по увеличению пероксидазной активности ротовой жидкости, и общей - по экспрессии IgE⁺ и CD203c⁺ маркеров на базофилах крови, гиперчувствительности к аллергену.

Впервые обнаружены иммуномодулирующие эффекты смеси пищевых красителей на секрецию цитокинов лейкоцитами крови больных аллергическими заболеваниями. Впервые выявлено иммуномодулирующее влияние диоксида титана на фагоцитарную активность нейтрофилов крови человека.

Заявлен патент на изобретение «Трансбуккальный способ диагностики аллергии и неспецифической гиперчувствительности» Республика Беларусь, МПК А 61К 39/35 - № а 20150513 от 28.10.2015.

Положения, выносимые на защиту

1. Диоксид титана и тартразин при пероральном поступлении, а также раствор смеси пищевых красителей при оральнобуккальной провокации вызывают повышение пероксидазной активности ротовой жидкости более чем на 30% у лиц с гиперчувствительностью к пищевым красителям, которая чаще встречается при установленной аллергопатологии, и превышает таковую в контрольной группе обследованных. Аналогичное повышение пероксидазной активности ротовой жидкости наблюдается у пациентов с сенсибилизацией к бытовым аллергенам после пероральной провокационной пробы с аллергеном домашней пыли.

2. Пищевые красители диоксид титана и тартразин в качестве причинно-значимых аллергенов у лиц с их непереносимостью, аналогично с аллергеном домашней пыли у больных с бытовой сенсибилизацией после пероральной провокационной пробы изменяют величину IgE⁺CD203c⁺ базофилов обратно пропорционально с исходным уровнем этих клеток. Количество IgE⁺CD203c⁺ базофилов более 10 на 30000 клеток и их уровень от всех IgE⁺ клеток более 3,84% являются достоверно значимыми показателями для диагностики аллергопатологии.

3. 0,001% и 0,01% растворы смеси красителей тартразина, кармуазина, сансета, понсо, диоксида титана стимулируют секрецию ИЛ-17, увеличивают через 3 часа инкубации и ингибируют - через 24 часа секрецию ИФН-г, ингибируют немедленную и замедленную секрецию ИЛ-1в и ИЛ-6 клетками цельной крови лиц с аллергическими заболеваниями.

4. Диоксид титана (0,008 % раствор) увеличивает активность нейтрофилов в НСТ-тесте у больных бронхиальной астмой и здоровых людей, стимулирует фагоцитоз стафилококка у лиц с аллергопатологией.

Личный вклад соискателя

Настоящая работа является самостоятельным научным исследованием. Постановка проблемы проведена совместно с научным руководителем д.м.н., профессором Д.К. Новиковым. Автором выполнен патентно-информационный поиск, разработана форма первичной учетной документации и дизайн исследования. Диссертант лично проводил отбор пациентов, их клиническое и иммунологическое обследование с технической помощью сотрудников УЗ «Витебская областная клиническая больница» и иммунологического отдела научно-исследовательской лаборатории УО «Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский университет». Совместно с научным руководителем диссертантом разработан метод диагностики гиперчувствительности на пищевые красители. Автором самостоятельно проводился сбор и анализ медицинской документации, провокационные пробы, наблюдение и обследование пациентов, составление и обработка статистических баз данных, формулирование выводов и их изложение в диссертационной работе.

Основные положения диссертации легли в основу участия автора в международных программах Европейской академии аллергологов и клинических иммунологов «EAACI Mentorship program» по проекту «Иммуномодулирующие эффекты диоксида титана» 23.06.2014-5.07.2014, а также «EAACI Research Fellowship program» и австрийского фонда международного сотрудничества в образовании и науке (OeAD) по проекту «Эффекты наноразмерного диоксида титана на развитие пищевой аллергии» 1.09.2016-30.11.2016 на базе Венского медицинского университета (Австрия) под руководством доцента PhD, MD Е. Унтерсмаер-Елсенхубер.

Личный вклад соискателя составляет 90%, в публикациях автором написано 5,3 авторских листа.

Апробация результатов диссертации

Основные результаты диссертации докладывались и обсуждались:

- на Международных конгрессах Европейской академии аллергологов и клинических иммунологов (EAACI) и Всемирной организации аллергологов (WAO) «EAACI-WAO World Allergy & Asthma Congress 2013» (Милан, июнь 2013); «EAACI Annual Congress 2015» (Барселона, июнь 2015);

- на 12-ой и 13-ой Зимних школах EAACI «Фундаментальные иммунологические исследования в аллергологии и клинической иммунологии» (Румыния, февраль 2014; Франция, февраль 2015);

- на 71-ой и на 70-ой научных сессиях сотрудников университета «Достижения фундаментальной, клинической медицины и фармации»: (Витебск, 27 янв. - 28 янв. 2016 г., 28 янв. - 29 янв. 2015 г.);

- на IV всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Актуальные проблемы науки XXI века» (Смоленск, апрель 2016).

Подготовлена и утверждена Министерством здравоохранения Республики Беларусь инструкция по применению «Метод диагностики аллергии неуточненной» (утв. 18 марта 2016 г. рег. № 002-0116; соавторы д.м.н., профессор Новиков Д.К., д.м.н., профессор Новиков П.Д., к.м.н., доцент Карпук И.Ю., к.м.н., доцент Смирнова О.В.). Результаты исследования внедрены в учебный процесс и научную работу кафедры клинической иммунологии и аллергологии с курсом ФПК и ПК УО «Витебского государственного медицинского университета», а также в лечебный процесс аллергологического отделения УЗ «Витебская областная клиническая больница».

Опубликованность результатов диссертации

По материалам диссертации опубликовано 17 научных работ, в том числе 7 научных статей (3,27 авторских листа) по результатам собственных исследований, входящих в перечень, рекомендованных ВАК Республики Беларусь и соответствуют требованиям п. 18 Положения о присуждении ученых степеней и присвоении ученых званий в Республике Беларусь, 2 обзорные статьи (1,46 авторских листа) и 1 - краткая статья в тех же журналах (0,31 листа); 7 тезисов в сборниках конгрессов, конференций (0,87 авторских листа), в том числе 3 - в иностранных (0,19 авторских листа), 1 инструкция на метод, утвержденная МЗ РБ (0,1 авторских листа).

Общий объем публикаций составляет 6,01 авторских листа.

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 125 страницах машинописного текста и состоит из оглавления, перечня условных обозначений, общей характеристики работы, основной части, состоящей из обзора литературы, главы материалов и методов исследования, 3-х глав собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций, библиографического списка - 119 публикаций (37 русскоязычных источников, 82 - иностранных), списка работ автора (18), приложения. Работа иллюстрирована 25 рисунками, содержит 22 таблицы.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования

Исследование выполнялось на базе УЗ «Витебская областная клиническая больница». Все обследуемые подписывали информированное согласие на участие в исследовании. Дизайн исследования составлен согласно его целям и задачам. Вид исследования - открытое, проспективное, сравнительное. Протокол исследования одобрен комитетом по этике клинических испытаний УО «Витебский государственный Ордена дружбы народов медицинский университет», протокол №8 от 15.06.2016 г.

Определяемые аналитические признаки в группах лиц с аллергическими заболеваниями и здоровых людей:

1. Клеточная гиперчувствительность гранулоцитов ротовой полости и IgE⁺ клеток периферической крови.

2. Секреция цитокинов клетками периферической крови.

3. Фагоцитарная активность нейтрофилов периферической крови.

Критерии включения в исследуемую группу:

- пациенты в возрасте от 18 до 70 лет, дети 5-17 лет;

- верифицированный диагноз аллергического заболевания;

- наличие жалоб на непереносимость пищевых красителей и/или пищевой аллергии в анамнезе и/или аспириновой триады;

- пациенты, способные адекватно оценивать свое состояние;

- наличие письменного информированного согласия на добровольное участие в исследовании.

Критерии невключения в исследуемую группу:

- наличие острых и декомпенсация хронических заболеваний;

- беременные и кормящие женщины.

Контрольную группу составили лица без аллергопатологии.

Критерии исключения из исследования:

- отказ пациента выполнять условия протокола;

- ухудшение общего состояния в процессе лечения;

- неявка обследуемого на проводимые исследования.

Обследован 181 человек, 129 женщин (71%), 52 мужчины (29%), средний возраст составил 31 [29,5; 33,2] год. Из них 110 (61%) - имели аллергическое заболевание в анамнезе, 71 (39%) - были здоровы. Из лиц с аллергопатологией 76 человек (69%) страдали бронхиальной астмой (БА) аллергической или смешанной формы легкой или средней степени тяжести в сочетании или без аллергического ринита (АР). У 30 (40%) из них БА сочеталась с пищевой аллергией (ПА), проявляющейся приступами бронхоспазма, ринита и/или высыпаниями по типу крапивницы. Среди 19 человек с диагнозом АР, 10 (53%) имели ПА. 11 человек страдали ПА с клиникой крапивницы, 4 - хронической крапивницей и отеками Квинке неустановленного генеза. 29 человек из 71 (41%) контрольной группы имели отягощенный наследственный анамнез по аллергии.

Обследовано 39 детей 5-17 лет с аллергической бронхиальной астмой легкой степени тяжести, средний возраст детей составил 11 [10,0; 12,8] лет.

Материалом для исследования служили: ротовая жидкость, сыворотка крови, цельная кровь с гепарином, клетки периферической крови. Исследованные ПК: тартразин (Е102), кармуазин (Е122), понсо (Е124), сансет (Е110) (изготовитель: Индия "Роха") и диоксида титана (Е171) (Titanium (IV) oxide, anatase, Aldrich, Sigma). Забор ротовой жидкости проводился в микропробирки натощак через 10 минут после ополаскивания рта физиологическим раствором (ФР). Пациент за 48 часов до тестирования не употреблял алкоголь, продукты с кофеином, никотин, противоаллергические лекарственные средства. За 1 час до исследования не курил. Пероральный провокационный тест (ППТ) проводился до постановки кожных проб с аллергенами. Все участники проходили клиническое, а также аллергологическое обследование с постановкой кожных проб с бытовыми и эпидермальными аллергенами (ОАО «Биомед» им. И.И. Мечникова, Москва).

Пероральная провокационная проба и методы ее оценки

Слепой ППТ проводился с ПК (с диоксидом титана (TiO₂) в порошке, с тартразином (Т) в белой желатиновой капсуле ((ЖК) в состав которой входило 200 мкг TiO₂), с Т и пшеничной мукой (ПшМ)). Пробы сравнения ставили с аллергеном домашней пыли, ПшМ, ФР, пустыми ЖК, желатином.

Язык тестируемого орошали 0,05 мл аллергена в разведении 100 PNU/ml или ФР, либо высыпали 2 мг ПК на язык в виде порошка или тестируемый глотал ЖК с 2 мг ПК внутри или тщательно жевал 2 г термически обработанной ПшМ или 2 г ПшМ с 2 мг Т. До и после ППТ проводился забор ротовой жидкости и/или крови, а также проводилась спирометрия с оценкой функции внешнего дыхания.

Пероксидазную активность ротовой жидкости (ПАРЖ) оценивали до и после ППТ в соответствии с разработанной нами инструкцией по применению («Метод диагностики аллергии неуточненной» № 002-0116 от 18 марта 2016 г.).

Фенотипирование клеток крови по экспрессии IgE и CD203c проводилось на проточном цитометре Cytomics FC 500 (Beckman Coulter Inc., США) с использованием тест-системы IgE-203c ОДО «НИКП Ресан» (Беларусь), содержащей синтетический пептид p137-142FcеRIб-FITC и моноклональные антитела IgE-FITC и CD203c-РЕ (ThermoFisher Scientific, США). К 100 мкл гепаринизированной крови добавляли 2,5 мкл раствора тест-системы IgE-203c, перемешивали на вортексе и инкубировали 15 минут при комнатной температуре, добавляли лизирующий эритроциты раствор и инкубировали 10 минут при 37°С. Добавляли 500 мкл буферного раствора, проводили фенотипирование.

Оценка содержания и количества цитокинов в надосадочной жидкости цельной крови, взятой утром, натощак, проводилась с использованием стандартных ИФА тест-систем ИЛ-1в (каталожный номер А-8766), ИФН-г (А-8752), ИЛ-6 (А-8768) (ЗАО «Вектор-Бест», РФ) и ИЛ-17 (КАС1591) (Invitrogen, BioSource Europe S.A., Belgium). Проводилась инкубация крови в течение 3 часов с 0,001% и 0,01% смесью взятых в равных частях растворов TiO₂, Т, кармуазина, понсо, сансета и в течение 24 часов с 0,01% и 0,001% растворами Т. Пробы сравнения ставили с конконавалином А (Кон А) (0,02 мг/мл) и ФР. После инкубации пробы центрифугировали 10 минут при 1500 об/мин. В надосадочной жидкости методом ИФА определяли концентрацию цитокинов.

Фагоцитарную активность нейтрофилов оценивали в периферической крови (5 мл с гепарином 20 ЕД на 1 мл), взятой утром, натощак. Отстаивали до момента отделения эритроцитов от лейкоцитов. Отсасывали взвесь лейкоцитов с аутологичной плазмой, центрифугировали при 1000 об/мин, плазму отсасывали, осадок лейкоцитов разводили ФР с добавлением 20% аутологичной плазмы до 5 х 10⁶ клеток в 1 мл. Фагоцитоз активировали убитой нагреванием взвесью Staphylococcus aureus (Stf). Для исследования брали 0,1 % раствор НСТ. В исследуемые пробы добавляли 0,008 % раствор TiO₂ (из данных его среднесуточного потребления - 1 мг/кг массы тела). Пробы инкубировались 30 минут при 37⁰С, центрифугировались 3 минуты при 1000 оборотов, мазки микроскопировались с подсчетом количества формазанположительных гранулоцитов в НСТ-тесте и клеток, поглотивших 1 и более частиц Stf.

Статистический анализ данных проводился с использованием прикладных программ «Statistica» (Версия 10,0) и «Excel 2010». В тесте Колмогорова-Смирнова проверяли нормальность распределения показателей. Для параметрических величин применялся тест Стъюдента (T-test), вычислялось среднее арифметическое значение и доверительный интервал М [-ДИ; +ДИ]. Сравнение непараметрических величин проводилось критериями Манна-Уитни (M-U), Валд-Волфовитца (W-W), Уилкоксона (WPT), корреляции Спирмана (Sp Corr), вычислялась медиана и интерквантильный размах Ме (25%;75%). Влияние факторов оценивалось в тесте Factorial ANOVA. Мощность выборки считалась достаточной при значении не менее 0,7 [Bland M., 2000]. Значимость критериев оценивалась ROC-анализом, рассчитывался оптимальный порог отсечения (MedCalc - version 15.6.1), чувствительность и специфичность теста - JavaStat (Chi-Square Tests Pearson).

Уровень достоверности нулевой гипотезы (р) для принятия решения о значимости полученных результатов был принят равным или менее 0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Прирост пероксидазной активности ротовой жидкости после провокационной пробы с тартразином и диоксидом титана у пациентов с аллергическими заболеваниями

Обследовано 109 человек (85 женщин, 24 мужчины). 70 человек имели аллергическое заболевание (40 - АБА, 15 - АР, 14 - хроническую крапивницу, 27 - ПА с клиникой бронхоспазма, высыпаний, либо ПА в сочетании с БА и/или АР), 39 человек отрицали наличие аллергических реакций в прошлом, из них 12 человек имели наследственную отягощенность по аллергии. Проведено 35 ППТ с TiO₂ (в ЖК или в виде порошка), 34 ППТ с Т (в ЖК), 40 ППТ с ПшМ+Т, в качестве контроля проводились пробы с ПшМ (34 пробы), с желатином (10 проб), а также пробы без аллергена (12 проб).

Непереносимость некоторых пищевых продуктов (с клиникой высыпаний, заложенности носа, бронхоспазма) участники отметили в 71% случаев, непереносимость ПК, в составе пищи и/или ЛС (с клиникой высыпаний, ринита, бронхоспазма) - в 54% случаев.

Для оценки диагностической точности разработанного метода 12 лицам с верифицированной бытовой сенсибилизацией и 8 здоровым обследованным проведен ППТ с аллергеном домашней пыли. Обнаружено увеличение пероксидазной активности ротовой жидкости (ПАРЖ) у всех участников с бытовой сенсибилизацией. У 83% из них (10 человек из 12) прирост ПАРЖ после ППТ был выше, чем 30%. В контрольной группе у 1 человека (12,5%) отмечена положительная реакция, что оказалось достоверно реже, по сравнению с исследуемой группой (р=0,006). Диагностическая точность метода составила 85(59-95)%, чувствительность 91(67-99)% и специфичность 78(49-88)% (p=0,002).

При исследовании гиперчувствительности к ПК: ПАРЖ у 27 обследованных с аллергией через 40 минут после ППТ с 2 мг Т в ЖК (1,588) превышала исходную (1,204) (парный T-test: t=-3,13, р=0,004) (Рисунок 1). ПАРЖ до провокации в группах больных и здоровых не различалась, после ППТ с Т - была достоверно выше (1,980), чем у здоровых лиц (1,203) (t=2,32; p=0,03) (Рисунок 2).

Рисунок 1 - Оптическая плотность ротовой жидкости до и после провокации тартразином в желатиновой капсуле у пациентов с аллергическими заболеваниями

Рисунок 2 - Оптическая плотность ротовой жидкости после провокации тартразином в желатиновой капсуле у пациентов с аллергическими заболеваниями и здоровых добровольцев

После ППТ с ПшМ ПАРЖ имела тенденцию к снижению. Контрольные пробы без аллергена не вызывали увеличения ПАРЖ. Абсолютное и относительное количество положительных ППТ у лиц с аллергией было выше, чем в контрольной группе. Лица с аллергическими заболеваниями чаще отвечали на провокационные пробы с ПК, чем на ПшМ или желатин (Таблица 1).

Таблица 1 - Результаты провокационной пробы с различными аллергенами в исследуемой и контрольной группах

Провокационные пробы n=155	Тартразин +TiO2 n=34	Тартразин+ ПшМ n=40	TiO2 n=35	ПшМ n=34	Контроль n=12
Больные аллергией (n=70, 119 проб)	n=27	n=34	n=18	n=32	n=8
Положительные пробы (к-во/% от выполненных)	17/63	14/41	9/50	4/13	-
Умеренно 30-50% (к-во/% от положительных)	3/11	3/8	4/22	-	-
Выраженно 50-100% (к-во/% от положительных)	9/33	4/12	3/17	2/6	-
Резко выраженные > 100 % (к-во/% от положительных)	5/19	2/6	2/11	2/6	-
Контрольная группа n=36 (36 проб) проб/положит. (% от выполненных)	n=7/0	n=6/1 (17%)	n=17/1 (6%)	n=2/0	n=4/0

Из 4 положительных проб на ПшМ, у 3 человек (75%) были жалобы на непереносимость мучной пищи с приступами крапивницы и бронхоспазма. Из 14 человек, отреагировавших на ПшМ+Т, 11 человек (79%) имели высыпания на пищу и/или ПК в анамнезе. 94% отреагировавших на Т в ЖК и 67% отреагировавших на TiO₂ жаловались на непереносимость некоторых пищевых продуктов и/или ПК. Расчет прироста ПАРЖ проводился по формуле: (ОП после пробы - ОП до пробы) / ОП до пробы * 100%.

По результатам ROC-анализа значимый порог прироста ПАРЖ после ППТ равнялся 16,6 % (чувствительность - 42%, специфичность - 100%, AUC= 0,712, p=0,0001). Прирост от 16 до 29 % считался слабо положительной реакцией на ППТ, градация результатов пробы приведена в таблице 1.

Прирост ПАРЖ в исследуемой группе превышал показатели в контрольной, где он отсутствовал или был ниже диагностически значимых (менее 16%). После контрольных ППТ с ПшМ прирост ПАРЖ был низким в обеих группах, но повышался при добавлении T в ПшМ и при провокации ПК в порошке или в ЖК (Таблица 2). Включение Т в состав ПшМ увеличивало ПАРЖ в среднем на 16,1 [2,7; 29,5], но не настолько сильно как Т в ЖК 37,0 [19,7; 54,4] (Таблица 2). Большинство обследованных (кроме 2 человек) реагировали либо на чистый Т, либо на Т в составе ПшМ, но не на обе пробы, что увеличивало выявляемость гиперчувствительности к ПК в целом.

Таблица 2 - Прирост пероксидазной активности ротовой жидкости после провокационной пробы в исследуемой и контрольной группах

Вид ППТ	Разведение ротовой жидкости	Величины прироста пероксидазной активности ротовой жидкости в виде М [-ДИ; +ДИ], %
		Лица с аллергическими заболеваниями	Здоровые обследованные
ПшМ	2	7,6 [0,5; 15,7]	1,8 [0,6; 24,1]
	4	12,0 [0,5; 24,5]	0
	8	6,36 [0,9; 13,7]	0
ПшМТ	2	7,7 [1,2; 14,1]	8,9 [0,8; 23,7]
	4	16,9 [3,4; 30,3]	6,2 [0,4; 17,8]
	8	16,1 [2,7; 29,5]	0,4 [0,7; 1,5]
Т+ЖК	2	17,6 [0,5; 15,7]	0,6 [0,8; 2,0]
	4	10,9 [5,9; 29,2]	2,1 [0,2; 5,5]
	8	37,0 [19,7; 54,4]*	1,6 [0,3; 5,6]
TiO2	2	23,9 [5,7; 42,2]**	5,5 [0,4; 10,7]
	4	16,2 [2,6; 29,7]	10,4 [0,8; 23,5]
	8	18,0 [3,5; 32,4]	9,4 [0,7; 23,4]

Примечания -

1. * - различия по отношению к приросту пероксидазной активности ротовой жидкости после провокационной пробы с тартразином в желатиновой капсуле у здоровых (p=0,025, M-U).

2. ** - различия по отношению к приросту пероксидазной активности ротовой жидкости после провокационной пробы с диоксидом титана у здоровых (p=0,046, M-U).

Из 38 человек с подозрением на непереносимость ПК, ППТ подтвердился у 19 человек (50%). Пробы проводились с двумя ПК, что оставляет вероятность реакций на другие ПД. В 41% случаев реакции на ПК выявлены у аллергиков, отрицавших реакции на них. TiO2 редко указывался как причина аллергии, но по результатам ППТ TiO2 вызывал увеличение ПАРЖ у 50% обследованных.

Оральнобуккальная провокация с раствором смеси ПК TiO₂, Т, кармуазина, понсо и сансета приводила к аналогичным результатам. Прирост ПАРЖ после ППТ наблюдался в исследуемой группе (+15%, +33% в разных разведениях) и в группе риска (+19% , +26%), в контрольной группе - не зарегистрирован (p=0,037, M-U). Отягощенный по пищевым продуктам (1) и по ПК (2) аллергоанамнез являлся значимым критерием положительного результата ППТ (Многофакторная ANOVA, F₁=7,9, p=0,01; F₂=5,1, p=0,03). Гиперчувствительность к ПК выявлена в 34% случаев (11 человек из 32 обследованных), в группе лиц с аллергией - 44%, в группе риска - 40%.

Эффекты провокационных проб с причинно-значимым аллергеном на изменение фенотипа CD203c⁺базофилов и IgE⁺позитивных клеток крови

При обследовании 39 детей с АБА легкой степени (средний возраст 11 [10,0; 12,8] лет) получено 105 образцов крови. Показано, что определение количества клеток, связавших IgE, с помощью синтетического пептида p137-142FcеRIб, фрагмента активного центра высокоаффинного рецептора к иммуноглобулину Е, не уступает стандартному методу определения с помощью моноклональных антител. У детей с эозинофилией количество IgE⁺ клеток больше, чем у детей с нормальным уровнем эозинофилов. Эозинофилы являются большой, но не единственной популяцией клеток, связывающих IgE в крови. В 14% случаев преобладали другие (кроме эозинофилов) IgE⁺ клетки [6].

Обследовано 50 человек, средний возраст - 35 [31; 40] лет (в исследуемую группу включены 29 человек с установленной аллергопатологией, в контрольную группу - 21 здоровый человек).

Таблица 3 - Исходные средние количества клеток с IgE и CD203c маркерами в исследуемой и контрольной группах

Группы	Лица с аллергопатологией, n=39	Контрольная группа, n=21
Показатели:	Среднее значение [доверительный интервал]
абсолютное количество IgE+CD203c+ базофилов на 30000 клеток крови	25,3 [16,1;34,5]*	12,2 [6,4;18,0]
относительное количество IgE+CD203c+ базофилов от всех клеток	0,09 [0,06;0,11]**	0,04 [0,02;0,06]
относительное количество IgE+CD203c+ базофилов от IgE+ клеток	4,2 [3,1;5,3]	2,4 [2,1;2,8]
относительное количество IgE+CD203c+ базофилов от CD203c+ базофилов	90,4 [84,9;95,8]	82,9 [72,4;93,5]
относительное количество CD203c+ базофилов от IgE+ клеток	2,6 [1,7;3,5]	1,7 [1,0;2,3]
относительное количество CD203c+ базофилов от всех клеток	0,12 [0,06;0,18]	0,05 [0,03;0,07]
абсолютное количество IgEbright клеток на 30000 клеток крови	495,7 [335,2;656,2]***	334,8 [251,0;418,6]
относительное количество IgEbright клеток от общего количества IgE+ клеток	34,9 [27,2; 42,6]	45,5 [34,8;56,1]

Примечания -

1. * - различия по отношению к абсолютному количеству IgE⁺CD203c⁺ базофилов лиц контрольной группы (p=0,04, М-U),

2. ** - различия по отношению к относительному количеству IgE⁺CD203c⁺ базофилов лиц контрольной группы (p=0,04, М-U),

3. *** - различия по отношению к абсолютному количеству IgE^bright клеток лиц контрольной группы (p=0,04, W-W).



По данным анамнеза на бытовые аллергены реагировали 60% участников; на пищевые аллергены - 36%; непереносимость ПК отмечали 28% участников; 36% имели наследственную отягощенность по аллергии. 26 лицам проведен ППТ с ПК (22 - с TiO2, 4 - с T в ЖК), 25 - ППТ с раствором аллергена домашней пыли.

В исследуемой группе клетки чаще экспрессировали IgE и CD203c (Таблица 3), а также в случае аллергических реакций на бытовые и пищевые аллергены (р<0,05): процент IgE+CD203c+ базофилов от всех IgE+ клеток (1) и абсолютное количество IgEbright+CD203c+ базофилов (2) были исходно выше, чем у лиц, отрицающих реакцию на бытовые аллергены (M-U: U1=249, p1=0,03; W-W: Z2=-2,3, p2=0,02); абсолютное и относительное количество IgE+CD203c+ базофилов, а также относительное количество CD203c+ базофилов от всех IgE+ клеток были выше, чем у лиц без пищевой и алиментарной аллергии (M-U: U=230-260, p<0,05).

Методом ROC-анализа установлено, что значимыми (AUC=0,660) для выявления аллергопатологии является абсолютное количество IgE⁺CD203c⁺ клеток более 10 на 30000 клеток крови (чувствительность 64% и специфичность 71%) (р=0,03), чему соответствовали 23 человека (82%) с аллергическими заболеваниями и 5 человек (18%) без них, из которых у 1 человека была отягощенная наследственность по аллергии, у 1 - непереносимость некоторых пищевых продуктов, у 1 - эпизоды аллергических реакций на бытовые аллергены.

После ППТ наблюдалось как повышение, так и снижение экспрессии CD203c и IgE на лейкоцитах. У всех обследованных степень изменения количества IgE⁺CD203c⁺ базофилов была обратно пропорциональна исходному их числу (ANOVA: F=20, p=0,0001): при высоком первоначальном значении уровень снижался, при низком - повышался (Рисунок 3).

Рисунок 3 - Изменение (в %) исходно низкого количества IgE⁺CD203c⁺ базофилов (<10 на 30000 клеток) (0) и исходно высокого (>10 на 30000 клеток) (1)

С учетом двунаправленности экспрессии IgE⁺ и CD203c⁺ на базофилах после ППТ результаты разделены на две подгруппы: снижения (<0) и повышения (>0). В исследуемой группе таких оказалось 14 и 9 человек соответственно. В этих подгруппах обнаружено достоверное изменение исследуемых показателей после ППТ (WPT: p<0,01), в отличие от контрольной группы.

После проведения ППТ у 20 человек (87%) исследуемой группы изменение IgE⁺CD203c⁺ базофилов было выше 16%, из них у 16 испытуемых (71%) показатели изменялись более чем на 30% (высокочувствительные): повышение абсолютного количества IgE⁺CD203c⁺ клеток - у 22%; снижение - у 48%.

Исходное относительное количество IgE⁺CD203c⁺ базофилов от всех IgE⁺ клеток более 3,84% считалось дополнительным критерием оценки ППТ (чувствительность 36%, специфичность 100%). Ему соответствовали 11 (46%) человек, почти исключительно (92%) лица с аллергическими заболеваниями. Изменение этого показателя более чем на 30% после ППТ наблюдалось у 38% человек, все лица с аллергией в анамнезе (у 40% - повышался, у 60% - снижался).

С учетом абсолютного и относительного от всех IgE⁺ клеток количества IgE⁺CD203c⁺ базофилов, у 17 из 23 человек (74%) исследуемой группы наблюдались изменения более 30% после ППТ с причинно-значимым аллергеном: в 54% - с аллергеном домашней пыли; в 83% - с ПК. Выраженность кожных проб с бытовыми, пыльцевыми, пищевыми аллергенами прямо коррелировала с изменением количества IgE⁺CD203c⁺ клеток после ППТ с аллергеном (Factorial ANOVA: F=9,6, p=0,01). Таким образом, базофилы, связавшие IgE, а также их активация с экспрессией CD203c⁺, важны для диагностики аллергопатологии, так как изменяются после взаимодействия с причинно-значимым аллергеном.

Влияние пищевых красителей на секрецию цитокинов клетками крови

Обследовано 38 человек (29 женщин, 9 мужчин) с аллергическими заболеваниями (БА, АР). Средний возраст - 37 [33;41] лет. 28 человек (74%) отмечали непереносимость пищевых продуктов, 25 (66%) - ПК (исследуемая группа); 13 (34%) - отрицали реакции на ПК (группа сравнения).

3-часовая инкубация цельной крови с 0,001% раствором смеси пяти ПК в 100% и с 0,01% раствором - в 42% случаев стимулировала секрецию ИЛ-17, по сравнению с ФР, уровень ИЛ-17 увеличивался от 0-14,5 пг/мл до 1,4-23,2 пг/мл. 0,001% раствор смеси ПК стимулировал секрецию ИЛ-17 наравне с Кон А и превышал таковую в пробе с ФР (Рисунок 5). Индукция выброса ИЛ-17 под действием 0,001% раствора ПК, по сравнению с ФР, наблюдалось в группах больных, как с отягощенным, так и с неотягощенным анамнезом по ПК.

Рисунок 5 - Секреция ИЛ-17 под действием 3 часовой (слева) и ИФН-г под действием 24 часовой (справа) инкубации с растворами пищевых красителей, конконовалина А, физиологического раствора, где * - р<0,05, **- р<0,01, ***- р<0,001 в тесте парная ANOVA

Растворы ПК чаще ингибировали (в 58%), чем стимулировали (в 17%) немедленную секрецию ИЛ-1в и ИЛ-6, по сравнению с ФР; в равных количествах ингибировали и стимулировали секрецию ИФН-г (в 33%) в обеих концентрациях. У больных с отягощенным анамнезом по ПК их растворы ингибировали выделение ИЛ-1в через 3 часа инкубации, в отличие от проб в группе сравнения.

После 24-часовой инкубации крови с 0,001% раствором Т (в 80%), с 0,01% раствором (в 50%) увеличивалась секреция ИЛ-17; обе концентрации ингибировали секрецию ИЛ-6 (в 50%), чаще ингибировали, чем стимулировали секрецию ИЛ-1в (в 27% против 8% случаев) и секрецию ИФН-г (в 46-54% против 8% случаев соответственно), по сравнению с ФР. 0,01% раствор Т ингибировал секрецию ИФН-г, по сравнению с ФР и Кон А (р<0,05) (Рисунок 5).

У больных с отягощенным анамнезом по ПК, 0,001% раствор Т стимулировал секрецию ИЛ-17, но ингибировал секрецию ИЛ-1в, ИФН-г, ИЛ-6 после 24-часовой инкубации, в отличие от группы без реакций на ПК в анамнезе, в которой наблюдалось только уменьшение секреции ИФН-г под действием 0,01% раствора Т, по сравнению с ФР (р<0,05).

Кон А после инкубации в течение 3 часов и 24 часов вызывал более сильную секрецию ИЛ-1в, ИЛ-17, ИЛ-6, чем растворы ПК (р<0,05).

Таким образом, установлено, что ПК в гигиенически допустимых дозах оказывают немедленные и замедленные эффекты на клетки крови.

Изменение фагоцитарной активности нейтрофилов под влиянием диоксида титана

Обследовано 17 человек - 10 человек с АБА (средний возраст - 38[28;48] лет), вторая группа (контрольная) 7 человек - здоровые люди (средний возраст - 23[21;26] лет).

Обнаружено, что TiO₂ стимулировал фагоцитоз стафилококка нейтрофилами крови у 53% обследованных на 8-30% (p=0,02). Под влиянием TiO₂ активность фагоцитов значительно увеличивалась, по сравнению с таковой в спонтанном НСТ-тесте (p=0,0001), но была ниже, чем при индукции стафилококком (р=0,049).

У пациентов с аллергопатологией TiO₂ стимулировал фагоцитоз стафилококка и активность нейтрофилов в НСТ-тесте также эффективно, как и культура стафилококка (31,2% по сравнению с 34,3%). В группе здоровых людей раствор TiO₂ усиливал активность нейтрофилов в НСТ-тесте, по сравнению с ФР (в среднем и в 71% случаев на 10-18%), но в меньшей степени, чем культура стафилококка (24%, по сравнению с 39,7%) (Таблица 4).

Выявлена прямая корреляция между отягощенной наследственностью по аллергии у здоровых людей и величиной активности нейтрофилов в НСТ-тесте с TiO₂ (0,78).



Таблица 4 - Фагоцитарная активность нейтрофилов крови в пробах с диоксидом титана в исследуемой и контрольной группах

Группа

Лица с аллергической бронхиальной астмой

Контрольная (здоровые)

Показатель

ФИ (%)

НСТ (%)

ФИ (%)

НСТ (%)

Вид пробы

Stf

Stf+ TiO2

ФР

TiO2

Stf

Stf+ TiO2

Stf

Stf+ TiO2

ФР

TiO2

Stf

Stf+ TiO2

Среднее значение, %

65,2

75,7*

12,2

31,2**

34,3

41,8

62,7

66,0

13,4

24,0***

39,7

40,3

Примечания -

1. * - различия по отношению к ФИ после инкубации со Stf без TiO₂ (t₁=-2,86, р₁=0,02, парный Т-тест Стъюдента),

2. ** - различия по отношению к НСТ после инкубации в ФР без TiO₂ в группе больных аллергическими заболеваниями (t₂=-4,48, р₂=0,002, парный Т-тест Стъюдента),

3. *** - различия по отношению к НСТ после инкубации в ФР без TiO₂ в группе здоровых (t₃=-3,3, р₃=0,02, парный Т-тест Стъюдента).

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

1. Впервые обнаружена иммуноаллергомодулирующая активность пищевых красителей диоксида титана, тартразина и других в провокационных пробах in vivo и в реакциях in vitro у больных аллергическими заболеваниями и у лиц с отягощенной наследственностью по аллергии [2, 4, 7, 8, 9].

2. Установлено, что диоксид титана и тартразин при пероральной провокации, как и раствор смеси диоксида титана, тартразина, кармуазина, понсо и сансета при оральнобуккальной провокации, вызывают повышение пероксидазной активности ротовой жидкости более чем на 30% у лиц с гиперчувствительностью к пищевым красителям, которая преобладает у людей с установленной аллергопатологией и превышает таковую у обследованных в контрольной группе (p=0,03) [2, 10, 11, 12, 13]. Аналогичное повышение пероксидазной активности ротовой жидкости наблюдается у пациентов с установленной сенсибилизацией к бытовым аллергенам после пероральной провокационной пробы с аллергеном домашней пыли [3].

3. Выявлено, что пищевые красители диоксид титана и тартразин в качестве причинно-значимых аллергенов у лиц с их непереносимостью (в 83% случаев), аналогично с аллергеном домашней пыли у больных с бытовой сенсибилизацией (в 54 % случаев) после пероральной провокационной пробы изменяют величину IgE⁺CD203c⁺ базофилов обратно пропорционально с исходным уровнем этих клеток (p=0,0001): при исходно высоком уровне показатель снижается, при низком - увеличивается [7]. Количество IgE⁺CD203c⁺ базофилов более 10 на 30000 клеток и их уровень от всех IgE⁺ клеток более 3,84% являются достоверно значимыми показателями для диагностики аллергопатологии (р=0,027) [6, 7]. Выраженность стандартных кожных аллергопроб с бытовыми аллергенами прямо пропорционально коррелируют с изменением абсолютного количества IgE⁺CD203c⁺ базофилов после пероральной провокационной пробы с аллергеном (p=0,01) [7].

4. Определено, что 0,001% и 0,01% растворы смеси пищевых красителей диоксида титана, тартразина, кармуазина, сансета и понсо стимулируют секрецию ИЛ-17 (р=0,002), увеличивают через 3 часа и ингибируют через 24 часа инкубации секрецию ИФН-г (р=0,001), ингибируют немедленную и замедленную секрецию ИЛ-1в (р=0,02) и ИЛ-6 (р=0,01) клетками цельной крови лиц с аллергическими заболеваниями. Секреция ИЛ-17 лейкоцитами периферической крови имеет дозозависимый характер: 0,001% раствор смеси пищевых красителей стимулирует выброс ИЛ-17 (р=0,002) у всех обследованных наравне со стимулятором конконавалином А, тогда как 0,01% раствор - лишь у 42% пациентов с аллергическими заболеваниями [8].

5. Доказано, что 0,008 % раствор пищевого красителя диоксида титана увеличивает активность нейтрофилов в НСТ-тесте, как больных с атопической бронхиальной астмой (р=0,002), так и здоровых людей (р=0,02), по сравнению со спонтанной активностью, а также стимулирует фагоцитоз стафилококка нейтрофилами периферической крови у лиц с аллергопатологией (р=0,02). Увеличение метаболической активности нейтрофилов в НСТ-тесте с диоксидом титана коррелирует с отягощенной наследственностью по аллергии в группе клинически здоровых обследованных (0,78, р<0,05) [9, 14].

РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ПРАКТИЧЕСКОМУ ИСПОЛЬЗОВАНИЮ РЕЗУЛЬТАТОВ

Синтетические красители пищи и лекарств диоксид титана, тартразин и сходные с ним азокрасители (кармуазин, сансет, понсо) следует рассматривать как иммуномодуляторы и потенциальные аллергены. Рекомендуется ограничить или исключить их прием у лиц с гиперчувствительностью на данные пищевые добавки.

Необходимо ограничить применение наиболее опасных красителей и их смесей (диоксид титана, тартразин, кармуазин, понсо, сансет), в первую очередь в пищевых продуктах и напитках для детей и в лекарственных средствах.

Разработанный метод диагностики гиперчувствительности к пищевым красителям (инструкция по применению «Метод диагностики аллергии неуточненной», утв. 18 марта 2016 г.; рег. № 002-0116) рекомендуется применять до явных признаков болезни (профилактически) или при ее наличии, для разовых и массовых скрининговых исследований.

Показания к применению: Аллергия неуточненная (Т78.4).

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ СОИСКАТЕЛЯ УЧЕНОЙ СТЕПЕНИ

Статьи в рецензируемых журналах

1. Аляхнович, Н.С. Пищевой краситель и фармацевтик диоксид титана как патоген / Н.С. Аляхнович, Д.К. Новиков // Иммунопатол., аллергол., инфектол. - 2015. - № 1. - С. 71-77.

2. Аляхнович, Н.С. Метод диагностики аллергии на пищевые красители по увеличению пероксидазной активности в слюне / Н.С. Аляхнович, В.В. Янченко, Д.К. Новиков // Иммунопатол., аллергол., инфектол. - 2015. - № 3. - С. 108-114.

3. Трансбуккальный метод диагностики аллергии по увеличению пероксидазной активности в слюне / Н.С. Аляхнович [и др.] // Иммунопатол., аллергол., инфектол. - 2015. - № 4. - С. 35-43.

4. Аляхнович, Н.С. Взаимодействие диоксида титана с биологическими средами организма / Н.С. Аляхнович, Д.К. Новиков // Иммунопатол., аллергол., инфектол. - 2016. - № 1. - С. 37-42.

5. Аляхнович, Н.С. Распространенность, применение и патологические эффекты диоксида титана / Н.С. Аляхнович, Д.К. Новиков // Вестн. Вит. гос. мед. ун-та. - 2016. - Т. 15, № 2 - С. 7-16.

6. Выявление IgE-позитивных лейкоцитов крови синтетическим пептидом и моноклональными антителами / Н.С. Аляхнович [и др.] // Иммунопатол., аллергол., инфектол. - 2016. - № 2. - С. 28-34.

7. Аляхнович, Н.С. Влияние провокационной пробы с аллергеном на IgE⁺CD203c⁺ базофилы крови / Н.С. Аляхнович, В.В. Янченко // Вестн. Вит. гос. мед. ун-та. - 2016. - Т. 15, № 3 - С. 60-67.

8. Аляхнович, Н.С. Влияние пищевых красителей на секрецию цитокинов клетками крови больных аллергическими заболеваниями / Н.С. Аляхнович // Иммунопатол., аллергол., инфектол. - 2016. - № 3. - С. 31-40.

9. Аляхнович, Н.С. Стимуляция диоксидом титана фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови / Н.С. Аляхнович // Иммунопатол., аллергол., инфектол. - 2017. - № 1. - С. 58-64.

Статьи и тезисы в сборниках

10. Аляхнович, Н.С. Сенсибилизация гранулоцитов слюны к пищевому красителю тартразину в аллергенспецифическом тесте - реакции выброса миелопероксидазы / Н.С. Аляхнович // Достижения фундаментальной, клинической медицины и фармации: материалы 70-ой научной сессии сотрудников университета, Витебск, 28 янв. - 29 янв. 2015 г. / Вит. гос. мед. ун-т; редсовет: В.Я. Бекиш [и др.]. - Витебск, 2015. - С. 75-76.

11. Аляхнович, Н.С. Cенсибилизация гранулоцитов слюны к пищевому красителю тартразину в аллергенспецифическом тесте - реакции выброса миелопероксидазы / Н.С. Аляхнович, Е.С. Лазуцкая // Медицинская Иммунология. - 2015. - № 3s; Том 17. - С. 62-63.

12. Аляхнович, Н.С. Метод диагностики гиперчувствительности по увеличению пероксидазной активности в слюне / Н.С. Аляхнович // Достижения фундаментальной, клинической медицины и фармации: материалы 71-ой научной сессии сотрудников университета, Витебск, 27 янв. - 28 янв. 2016 г. / Вит. гос. мед. ун-т; редсовет: А.Т. Щастный [и др.]. - Витебск, 2016. - С. 92-93.

13. Аляхнович, Н.С. Выявление гиперчувствительности к пищевым красителям трансбуккальным методом / Н.С. Аляхнович, Е.Ф. Мацко // Актуальные проблемы науки XXI века: материалы IV всероссийской научно-практической конференции с международным участием // Смоленск: Изд-во СГМУ, 2016. - №1. - С. 148-151.

14. Аляхнович, Н.С. Оценка фагоцитарной и метаболической функции нейтрофилов периферической крови в присутствии диоксида титана / Н.С. Аляхнович, Е.Ф. Мацко // Актуальные вопросы современной медицины и фармации: материалы 69-й итоговой научно-практ. конф. студентов и молодых ученых, Витебск, 19-20 апр. 2017 г. / Вит. гос. мед. ун-т; редкол.: С.А. Сушков [и др.]. - Витебск, 2017. - С.464-466.

Тезисы в иностранных сборниках

15. Aliakhnovich, N. Tartrasin challenge in food dye allergy survey / N. Aliakhnovich // Basic Research in Allergy and Clinical Immunology: materials of the 12^th EAACI Immunology Winter School, Poiana Brasov, Romania, 30 Jan - 2 Febr. 2014 / EAACI, 2014. - P. 29.

16. Aliakhnovich, N. Granulocytes sensitization to the food dye in myeloperoxidase release test // N. Aliakhnovich // Basic Research in Allergy and Clinical Immunology: materials of the 13^th EAACI Immunology Winter School, Les Arcs 1800, France, 5-8 Febr. 2015 / EAACI, 2015. - P. 34.

17. Aliakhnovich, N. Successful desensitization experience in patients with food dye allergy / N. Aliakhnovich, D. Novicov, V. Janchenko // Allergy Eur. J. Clin. Imm. Allerg. - 2015. - № 70 (s101). - P. 389.

Инструкция по применению

18. Метод диагностики аллергии неуточненной / Аляхнович Н.С., Новиков Д.К., Новиков П.Д., Карпук И.Ю., Смирнова О.В., утв. 18 марта 2016 г.; рег. № 002-0116. - Витебск, 2016. - 6 с.

РЭЗЮМЭ

Аляхновiч Наталля Сяргееўна

Імунамадулюючыя ўласцівасці дыяксіду тытану і іншых фарбавальнікаў ежы і лекаў

Ключавыя словы: харчовыя фарбавальнікі, дыяксід тытану, TiO₂, тартразiн, перaксiдазная актыўнасць ротавай вадкасці, правакацыйная спроба, гіперадчувальнасць, IgE⁺, CD203c⁺, фагацытоз, НБТ-тэст.

Мэта работы: выяўленне імунамадулюючых уласцівасцяў дыяксіду тытану і іншых фарбавальнікаў ежы і лекаў дзеля распрацоўкі метадаў дыягностыкі гіперадчувальнасці, і ацэнкі іх біябяспекі.

Метады: клінічныя, імуналагічныя, лабараторныя, інструментальныя, статыстычныя.

Атрыманыя вынікі і іх навуковая навізна

Упершыню выяўлена, што харчовыя фарбавальнікі дыяксід тытану, тартразiн і іншыя валодаюць iмунaалергaмадулюючай актыўнасцю in vivo і in vitro ў хворых на алергічныя захворванні, у асоб з абцяжаранай спадчыннасцю па алергіі і ў асоб з гіперадчувальнасццю да харчовых фарбавальнікаў.

Упершыню распрацаваны і клінічна апрабаваны метад выяўлення гіперадчувальнасццi да харчовых фарбавальнікаў па змяненні перaксiдазнай актыўнасці ротавай вадкасці і экспрэсіі IgE⁺ i CD203c⁺ маркераў на базaфiлах крыві пасля правакацыйнага тэставання.

Выяўлена, што колькасць IgE⁺CD203c⁺ базaфiлaў больш за 10 на 30000 клетак і іх узровень ад усіх IgE⁺ клетак больш за 3,84% з'яўляюцца значнымі паказнiкамі для дыягностыкі алергапаталогii.

Вызначана, што растворы дыяксіду тытану, тартразiну, кармуазiну, cансэту і понсэ ў гігіенічна дапушчальных канцэнтрацыях стымулююць сакрэцыю ІЛ-17, а таксама мадулююць сакрэцыю IФН-г, ІЛ-1в і ІЛ-6 клеткамі суцэльнай крыві асоб з алергічнымі захворваннямі.

Устаноўлена, што раствор дыяксіду тытану павялічвае актыўнасць нейтрафілаў у НБТ-тэсце, як хворых з атапічнай бранхіяльнай астмай, так і здаровых людзей, у параўнанні са спантаннай актыўнасцю, а таксама стымулюе фагацытоз стафілакока нейтрафілаў перыферычнай крыві у асоб з алергaпаталогiей.

Галiна ўжывання: імуналогія, алергалогія.

РЕЗЮМЕ

Аляхнович Наталья Сергеевна

Иммуномодулирующие свойства диоксида титана и других красителей пищи и лекарств

Ключевые слова: пищевые красители, диоксид титана, TiO₂, тартразин, пероксидазная активность ротовой жидкости, провокационная проба, гиперчувствительность, IgE⁺, CD203c⁺, фагоцитоз, НСТ-тест.