Размещено на http://www.allbest.ru/

АВТОРЕФЕРАТ

Диссертации на соискание ученой степени

доктора фармацевтических наук

Оценка качества и эффективности биологически активных добавок с коэнзимом Q10

Специальности: 15.00.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

14.00.25 - фармакология, клиническая фармакология

Каленикова Елена Игоревна

Москва - 2009 г.

Работа выполнена в Московском государственном университете имени М.В. Ломоносова.

Научные консультанты:

академик РАМН, доктор фармацевтических наук, профессор

Арзамасцев Александр Павлович

доктор медицинских наук, профессор Медведев Олег Стефанович

Официальные оппоненты:

доктор фармацевтических наук,

профессор Белобородов Владимир Леонидович

доктор медицинских наук,

профессор Жердев Владимир Павлович

доктор фармацевтических наук Чистяков Виктор Владимирович

Ведущая организация - ОАО "Всероссийский научный центр по безопасности биологически активных веществ"

Защита состоится "__"_______ _2009 г. в 14⁰⁰ ч на заседании

Диссертационного Совета Д. 208.040.09 при Московской Медицинской Академии им. И.М. Сеченова (119019, Москва, Никитский бульвар, д.13).

С диссертацией можно ознакомиться в Фундаментальной библиотеке ММА им. И.М. Сеченова (117998, Москва, Нахимовский проспект, д.49).

Автореферат разослан "___"___________2009 г.

Ученый секретарь Диссертационного Совета Д. 208.040.09

доктор фармацевтических наук

профессор Садчикова Наталья Петровна

Введение

Согласно существующим международным требованиям, любое оригинальное и воспроизведенное лекарственное средство должно соответствовать следующим критериям: эффективность, безопасность, качество. Это в равной степени следует отнести и к БАД, требования к которым в современных условиях постоянно возрастают. Надлежащий уровень качества обеспечивается соответствующим нормативным документом, отражающим как общие подходы к контролю качества и стандартизации, так и показатели, которые определяются предполагаемым медицинским применением лекарственного средства или БАД.

Достижения молекулярной биологии и биохимии открывают новые возможности лечения заболеваний с учетом патофизиологических механизмов, протекающих на уровне клеточных и субклеточных структур. В основе ведущих метаболических процессов лежат окислительно-восстановительные реакции. Среди них особую роль играют свободнорадикальные реакции, ведущие к образованию перекисных соединений. Активация процессов свободнорадикального окисления вследствие дисбаланса в системе "прооксиданты-антиоксиданты" и последующие изменения в клетках, тканях и системах организма получили название окислительного стресса. Усиление деструктивных процессов при окислительном стрессе может являться патогенетическим фактором заболевания, даже не будучи основной причиной его развития.

Однако сегодня нет единого мнения о биологической роли окислительных реакций с участием свободных радикалов кислорода. Большинство исследователей считают активные формы кислорода важными регуляторами клеточных процессов и ключевым элементом программ дифференцировки, пролиферации и апоптоза клеток. Развитие патологических процессов связано с изменением клеточных программ, следовательно, развитие многих заболеваний определяется балансом прооксидантов и антиоксидантов. Отношение к последним в современной научной литературе варьирует от полного игнорирования и даже отрицания до ожиданий излечения от всех болезней и продления жизни [Е.Б. Меньшикова с соавт., 2008]. В таких случаях важнейшим критерием истины должна стать практика, но пока и она не дала однозначных ответов на многие вопросы.

Среди использующихся в медицинской практике наиболее перспективным антиоксидантом является убихинон (коэнзим Q₁₀, CoQ₁₀) - вещество эндогенной природы, обязательный компонент мембран митохондрий, лизосом, аппарата Гольджи, плазматических мембран.

Струкурная формула коэнзима Q_{10 (}2,3-диметокси-5-метил-6-декапренил-1,4-бензохинон).

Коэнзим Q₁₀ в митохондриях участвует в синтезе АТФ как переносчик электронов, сопрягающий процессы электронного транспорта и окислительного фосфорилирования. В то же время, убихинон - единственный липидорастворимый антиоксидант, синтезирующийся в клетках животных и человека. Еще одно уникальное свойство CoQ_{10 -} постоянная регенерация его окисленной формы с помощью ферментных систем организма и антиоксидантов неферментной природы - аскорбата, б-токоферола (б-TOC), возвращающая ему антиоксидантную активность (схема 1).

Схема 1. Взаимопревращения окисленной и восстановленной форм убихинона.

По результатам многих клинических исследований CoQ₁₀ рекомендован в качестве дополнительной терапии при хронической сердечной недостаточности, кардиомиопатии, стенокардии, гипертонии, инфаркте миокарда, атеросклерозе; имеются данные о его эффективности при мигрени, болезни Паркинсона, латеральном амиотрофическом склерозе, астме, диабете, почечной недостаточности. Наибольшее число клинических исследований CoQ₁₀ посвящено сердечной недостаточности, однако окончательный вывод о его эффективности при этом заболевании еще не сделан. Актуально проведение дальнейших исследований, направленных, с одной стороны, на выявление препаратов, обладающих максимальной биодоступностью и способных пополнить эндогенные уровни в крови и сердечной мышце, а с другой - на более глубокое понимание патогенетических механизмов (на уровне ткани и клетки) как потенциальных объектов фармакологического воздействия CoQ₁₀.

На мировом фармацевтическом рынке CoQ₁₀ повсеместно доступен в виде биологически активных добавок к пище и лишь в нескольких странах - как активное вещество в составе лекарственных препаратов. Российский современный фармацевтический рынок изобилует предложениями CoQ₁₀-содержащих БАД зарубежного и отечественного производства. Широкая и навязчивая реклама БАД к пище, проводимая средствами массовой информации, приводит к росту их неконтролируемого потребления. Эта ситуация обязывает повышать уровень требований к безопасности и качеству биологически активных добавок, которые на сегодняшний день регламентируются техническими условиями в соответствии с требованиям "Руководства по методам контроля качества и безопасности биологически активных добавок к пище" (Руководство Р 4.1.1672-03). На основании требований Руководства количественный анализ CoQ₁₀ в БАД осуществляется методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с детектированием по поглощению в ультрафиолетовой области спектра. Недостаточная чувствительность определения и условия пробоподготовки ограничивают применение этой методики образцами с высоким содержанием CoQ₁₀, то есть лекарственными препаратами и БАД.

Безопасность БАД на основе CoQ₁₀ контролируется по критериям, предъявляемым к продуктам питания: содержанию токсичных элементов (тяжелых металлов), пестицидов и радионуклидов. Между тем, содержащиеся в БАД активные компоненты могут вызывать терапевтические эффекты и иметь побочные; вещества эндогенной природы при длительном приеме могут оказывать влияние на уровень их синтеза в тканях организма, приводя к формированию небезопасного эффекта отмены. Кроме того, Руководство не предусматривает стандартизации БАД и не требует подтверждения их фармакологической эффективности, что имеет первостепенное значение в случае медицинского применения.

Целью данного исследования явилась комплексная оценка качества и эффективности БАД с CoQ₁₀ для обоснования их применения в качестве кардиопротекторов.

Достижение поставленной цели осуществлялось последовательным решением следующих задач:

1. Разработать ВЭЖХ-методики определения CoQ₁₀ в БАД на основе CoQ₁₀ для оценки их качества и стандартизации.

2. Разработать ВЭЖХ-методики определения коэнзимов Q₉, Q₁₀ и б-TOC в тканях крыс (плазме/сыворотке крови, миокарде, головном мозге) для изучения фармакокинетики БАД на основе CoQ₁₀ при однократном и хроническом введении, а также тканевого содержания коэнзимов Q и б-TOC при патологии миокарда.

3. Провести сравнительное изучение фармакокинетики CoQ₁₀ у крыс после однократного введения внутрь порошка субстанции и различных БАД серии "Кудесан" (раствора и таблеток).

4. Изучить влияние хронического введения БАД "Кудесан" и его отмены на содержание коэнзимов Q и б-TOC в плазме крови и миокарде крыс.

5. Разработать методику определения уровня гидроксильных радикалов в ткани миокарда in vivo с помощью ВЭЖХ с электрохимическим детектированием и микродиализа миокарда для оценки интенсивности окислительных процессов.

6. Определить уровень гидроксильных радикалов в ткани миокарда при патологических состояниях:

в гипертрофированном миокарде крыс с наследственной артериальной гипертензией (линия SHRSP);

в миокарде крыс (Wistar) при острой региональной ишемии и последующей реперфузии

для патогенетического обоснования антиоксидантной терапии.

7. Оценить уровни коэнзимов Q и б-TOC в плазме и гипертрофированном миокарде:

крыс различных возрастов с наследственной артериальной гипертензией;

в постинфарктном ремоделированном миокарде нормотензивных крыс

для патогенетического обоснования применения CoQ₁₀ в качестве кардиопротектора.

8. Оценить кардиопротекторные эффекты БАД "Кудесан" при хроническом введении крысам с наследственной артериальной гипертензией линии SHRSP и крыс Wistar с инфарктом миокарда.

Научная новизна

Разработаны методики определения CoQ10 в БАД: растворе солюбилизированной субстанции CoQ₁₀, таблетках микрокапсулированного CoQ₁₀, плазме крови, тканях мозга и миокарда с применением ВЭЖХ с электрохимическим детектированием, позволяющие одновременно проводить определение CoQ₉ и б-TOC.

Изучена фармакокинетика CoQ₁₀ в порошке, растворе солюбилизированной субстанции и таблетках микрокапсулированной субстанции. Доказаны фармакокинетические преимущества модифицированных субстанций CoQ₁₀. Для раствора солюбилизированного CoQ₁₀ выявлена способность при хроническом введении внутрь повышать уровни в миокарде.

Обнаружен эффект отмены CoQ₁₀: падение концентраций в миокарде через 2 недели после прекращения длительного введения внутрь.

Впервые проведена сравнительная оценка содержания коэнзимов Q₉, Q₁₀ и б-TOC в плазме крови, гипертрофированном миокарде и головном мозге крыс с наследственной артериальной гипертензией различного возраста относительно тканей нормотензивных животных. Выявлена взаимосвязь плазменных и миокардиальных уровней CoQ₁₀ со степенью гипертрофии левого желудочка.

Впервые выявлено снижение содержания коэнзимов Q₉, Q₁₀ и б-TOC в гипертрофированном постинфарктном миокарде после хронической окклюзии коронарной артерии. Обнаружена сильная корреляционная зависимость между размером инфаркта и концентрациями коэнзимов Q в плазме крови.

Разработана ВЭЖХ-методика определения гидроксильных радикалов в ткани миокарда in vivo, обладающая наибольшей чувствительностью из приведенных в литературе аналогов. На примере спонтанно гипертензивных крыс SHRSP впервые выявлены повышенные уровни гидроксильного радикала как одна из причин сниженной устойчивости гипертрофированного миокарда к ишемии и установлена их прямая взаимосвязь со степенью гипертрофии сердечной мышцы. Доказано усиление генерации гидроксильных радикалов во время эпизодов реперфузии ишемического прекондиционирования миокарда. Показано, что ишемическое прекондиционирование сокращает продолжительность реперфузионного выброса гидроксильных радикалов в миокарде крысы после региональной ишемии, что может являться одной из причин многократного сокращения размера зоны повреждения.

Показан кардиопротекторный эффект CoQ₁₀ при длительном введении внутрь на различных экспериментальных моделях гипертрофии миокарда: при развитии первичной артериальной гипертензии у спонтанно гипертензивных крыс и у животных с хроническим инфарктом миокарда. Обнаружено, что выраженность эффекта взаимосвязана с концентрациями CoQ₁₀ в плазме крови и миокарде.

Теоретическая и практическая значимость

· Методики определения CoQ₁₀ на основе ВЭЖХ могут использоваться для его количественного определения в различных композициях, применяемых в качестве БАД и лекарственных препаратов. Высокая чувствительность разработанной методики определения CoQ₁₀ в биологических объектах позволяет применять ее для изучения фармакокинетики при проведении доклинических и клинических испытаний.

· Методика определения уровня гидроксильных радикалов в ткани in vivo на основе микродиализа миокарда и ВЭЖХ предоставляет возможность экспериментальной прижизненной оценки окислительного статуса тканей. Возможность мониторинга тканевых уровней гидроксильного радикала позволяет в фармакологическом эксперименте оценивать on-line эффективность мер, направленных на ограничение генерации активных форм кислорода.

· Доказана патогенетическая значимость усиленной генерации активных форм кислорода и сниженных миокардиальных уровней CoQ₁₀ при острых и хронических патологических состояниях миокарда. Выявленный дисбаланс между прооксидантными и антиоксидантными факторами существенно дополняет представление о патогенетической роли окислительного стресса при сердечно-сосудистых заболеваниях.

· Доказана кардиопротекторная эффективность CoQ₁₀ в составе БАД "Кудесан" раствор на различных моделях гипертрофии миокарда. Полученные результаты являются теоретическим основанием для проведения полного доклинического изучения CoQ₁₀ и решения вопроса о создании лекарственных средств на его основе.

· Впервые выявленный для CoQ₁₀ эффект отмены требует пересмотра отношения к нему как абсолютно безопасному фармакологическому агенту. Возможность резкого снижения содержания CoQ₁₀ в миокарде ниже нормальных значений после прекращения его приема обязывает с крайней осторожностью применять высокие дозы CoQ₁₀ и диктует необходимость разработки фармакокинетически обоснованных безопасных режимов дозирования.

Материалы диссертации доложены и обсуждены на 13 всероссийских (18 докладов) и 13 международных (23 доклада) съездах, конференциях, симпозиумах, конгрессах.

Публикации:

По теме диссертации опубликовано 56 печатных работ, из них 15 статей, в том числе 13 - в ведущих рецензируемых отечественных журналах.

Объем и структура работы:

Диссертация состоит из семи частей: введения, обзора литературы, экспериментальной части, включающей 4 главы, заключения, выводов, списка цитируемой литературы и трех приложений. Диссертация изложена на 196 страницах, содержит 66 рисунков и 25 таблиц. Список литературы представлен 205 наименованиями, из которых 192 - зарубежных.

Основные положения, выносимые на защиту:

коэнзим биологическая активная добавка

Обоснование применения CoQ₁₀ для кардиопротекции по результатам изучения прооксидантных и антиоксидантных характеристик гипертрофированного миокарда.

Оценка качества БАД по содержанию CoQ₁₀ методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с электрохимическим детектированием.

Результаты изучения фармакокинетики CoQ₁₀ в составе различных БАД серии "Кудесан": "Кудесан" раствор, таблетках "Кудесан форте", жевательных таблетках "Кудесан для детей" для разработки эффективных и безопасных режимов дозирования.

Оценка эффективности БАД "Кудесан" как кардиопротектора при гипертрофии миокарда различного генеза.

Содержание работы

2,5-ДГБК 40% 2,3-ДГБК 49% пирокатехин 11%

Схема 2. Продукты биотрансформации салициловой кислоты.

Микродиализ проводили с помощью линейного диализного волокна, прошитого в стенку миокарда левого желудочка наркотизированных животных с открытой грудной клеткой (рис.11). После имплантации диализатор перфузировали раствором Рингера не менее 1 ч, а затем раствором Рингера с салициловой кислотой до установления стабильного уровня 2,3-ДГБК. Пробы диализата собирали непрерывно 5 - или 10-минутными порциями и анализировали on-line ввиду нестабильности салицилата и возможности завышения уровней 2,3-ДГБК.

Рис.11. Расположение лигатуры (1) на ветви левой нисходящей коронарной артерии и диализатора (2), прошитого в миокард левого желудочка крысы.

Хроматографический анализ проводили в обращеннофазовом изократическом режиме элюентом, содержащим К-дигидрофосфатный буферный раствор (рН 2,5), лимонную кислоту, Na₂ЭДТА, октилсульфонат натрия и 11% (об/об) метанола. Электрохимическое детектирование осуществляли при потенциалах - 40 мВ на первом и +350 мВ на втором, измерительном электроде. Предел обнаружения для 2,3-ДГБК - 2 пг.

Рис.12. Хроматограмма диализата миокарда до ишемии (А) и при реперфузии (В).1 - 2,5-ДГБК; 2 - 2,3-ДГБК; 3 - салициловая кислота. Колонка HR-80 С18, 80 х 4,6 мм, 3 мм (ESA, США).

Мониторинг фонового уровня ОН в гипертрофированном миокарде спонтанно-гипертензивных крыс SHRSP показал, что интенсивность генерации ОН увеличена относительно нормотензивных крыс Wistar, WKY (рис.13) и прямо взаимосвязана со степенью гипертрофии левого желудочка (рис.14).

Рис. 13. Средние и индивидуальные значения уровня 2,3-ДГБК в диализате миокарда крыс линий WKY, Wistar и SHRSP (% к содержанию в перфузионном растворе).

Рис. 14. Взаимосвязь cредниx индивидуальных значений уровня 2,3-ДГБК в диализате миокарда со степенью гипертрофии ЛЖ SHRSP.

Динамику уровня ОН при ишемии-реперфузии изучали у крыс SHRSP и Wistar. Региональная ишемия миокарда создавалась 30-минутной перевязкой нисходящей ветви левой коронарной артерии (рис.11); 60-минутная реперфузия стартовала после снятия лигатуры (рис.15).

Рис.15. Уровни 2,3-ДГБК в диализате миокарда крыс линий SHRSP (1) и Wistar (2) (% к содержанию в перфузионном растворе). Значимые различия: & - с фоновым уровнем в группе, * - между группами SHRSP и Wistar.

Показано, что суммарный ишемический и реперфузионный выброс ОН в миокарде SHRSP положительно коррелировал с фоновым уровнем генерации и был в 1,6 раза больше, чем у крыс Wistar (рис.16,17). Величина зоны некроза в гипертрофированном миокарде SHRSP оказалась на 40% больше, чем у Wistar, при равных размерах зоны риска (рис.18).

Рис. 16. Количество 2,3-ДГБК в диализате миокарда крыс линий Wistar (1) и SHRSP (2) до, во время ишемии и при реперфузии. Значимость различий между группами: *p = 0,02; ** p 0,0002.

Рис. 17. Взаимосвязь cредниx фоновых уровней ОН в диализате SHRSP с суммарным выбросом ОН при реперфузии (r = 0,752, p < 0,05).

Рис.18. Величина зоны риска (отношение зоны ишемии ко всему миокарду ЛЖ, %) и зоны некроза (отношение зоны некроза к зоне ишемии, %) в миокарде крыс линий Wistar (1) и SHRSP (2). Значимость различия между группами: * p < 0,005.

Полученные результаты доказали меньшую устойчивость гипертрофированного миокарда SHRSP к острому окислительному стрессу. Факторами большего некротического повреждения могут являться, с одной стороны, выявленный усиленный выброс АФК, а с другой - дефицит в системе 2-й линии антиоксидантной защиты гипертрофированной ткани.

Известно, что ишемическое прекондиционирование миокарда (ИП) способно ограничить повреждение сердечной мышцы, вызванное последующими ишемией и реперфузией. Предварительное введение антиоксидантов предотвращает развитие эффекта ИП и АФК рассматриваются как возможный эндогенный фактор развития резистентности. На очередном этапе исследований оценивали влияние ИП миокарда на тканевые уровни ОН на протяжении ИП, региональной ишемии и реперфузии.

Рис. 19. Уровни 2,3-ДГБК (M±SE) в диализатах миокарда крыс двух групп. - животные с 30-мин ишемией (n=6); ? - животные с ИП перед 30-минутной ишемией (n=5).

# - p<0,05 по сравнению с фоновым уровнем в группе с 30-минутной шемией;

* - p<0,05 по сравнению с фоновым уровнем в группе ИП;

& - p<0,05 между руппами.

Мониторинг уровня 2,3-ДГБК выявил всплески генерации ОН на кратких эпизодах реперфузии ИП (рис. 19), подтверждающие гипотезу о роли АФК как эндогенного фактора развития резистентности миокарда к ишемическому воздействию. Действительно, оказалось, что ИП предотвращает ишемический и приводит к сокращению продолжительности реперфузионного выброса ОН, что сопровождалась 5-кратным уменьшением размера зоны некроза (табл.4).

Результаты проведенного в очаге ишемии-реперфузии мониторинга уровня ОН в гипертрофированном миокарде крыс выявили прямую связь между интенсивностью генерации ОН и размером очага некроза. Обнаруженное усиленное образование ОН определило дальнейшую задачу исследований: изучение содержания антиоксидантов 2-й линии защиты - CoQ и б-TOC в тканях миокарда с повышенным оксидантным статусом и кардиопротекторной эффективности ведения экзогенного CoQ₁₀ в составе БАД "Кудесан".

Таблица 4. Характеристики уровней гидроксильного радикала в миокарде крыс при реперфузии после 30-минутной ишемии и степени повреждения миокарда (среднее значение±стандартное отклонение)

* - значимость отличий от группы без ишемического прекондиционирования, p<0,0001.

В четвертой главе оценивается антиоксидантный статус миокарда и других тканей SHRSP относительно крыс WKY, а также постинфарктного гипертрофированного миокарда крыс Wistar по содержанию коэнзимов Q и б-TOC. Представлены результаты длительного введения внутрь БАД "Кудесан" раствор - свидетельства его защитного действия на миокард.

Гипертензивные животные SHRSP всех исследованных возрастных групп имели повышенное артериальное давление и гипертрофию левого желудочка сердца; индекс массы правого желудочка SHRSP не отличался от равновозрастных крыс WKY. Содержание CoQ₉, CoQ₁₀ и б-TOC в плазме крови, миокарде и головном мозге определяли у крыс SHRSP в возрасте 6, 12, 24 и 50 недель (рис. 20). В плазме крови SHRSP относительно WKY к 12-недельному возрасту снижается содержание CoQ₁₀, в головном мозге - CoQ₉. В гипертрофированном ЛЖ SHRSP всех возрастных групп выявлен дефицит CoQ₁₀, CoQ₉ и б-TOC. Наименее страдает содержание CoQ в ЛЖ самых молодых животных, располагающем 4-кратным избытком б-TOC. В ПЖ при отсутствии гипертрофических изменений уровни CoQ₁₀ были снижены у 12-недельных крыс, CoQ₉ - с возраста 24 недели. Достаточные уровни CoQ в ПЖ 6-недельных животных, возможно, поддерживаются 10-кратным избытком б-TOC, содержание которого падает до возрастной нормы к 12 неделям жизни при одновременном развитии дефицита CoQ.

а) б)

с)

Рис. 20. Содержание коэнзимов Q₁₀ (а), Q₉ (б) и б-TOC (с) в правом (ПЖ) и левом (ЛЖ) желудочках сердца SHRSP относительно WKY.

* - значимые различия абсолютных уровней между WKY и SHRSP.

У молодых SHRSP в возрасте 6-ти недель, на раннем этапе развития гипертрофии миокарда, индекс массы ЛЖ был прямо пропорционален концентрации CoQ₁₀ в плазме крови (r=0,944; p<0,05) и обратно пропорционален содержанию CoQ₁₀ в миокарде (r=-0,658; p<0,05) (рис.21).

Рис. 21. Зависимость индекса массы от содержания CoQ₁₀ в плазме крови и миокарде левого желудочка 6-недельных крыс SHRSP.

Пополнение содержания CoQ₁₀ в миокарде SHRSP для изучения возможности ограничения развития гипертрофии достигалось введением внутрь БАД "Кудесан" раствор (10 мг CoQ₁₀, 1,5 мг б-TOC /кг в день) с 6-й по 12-ю неделю жизни. Содержание коэнзимов Q и б-TOC измеряли в плазме, миокарде и головном мозге животных через 17-19 часов после последнего введения БАД. Плазменные уровни CoQ₁₀ были в 3,5 раза выше по сравнению с контрольными животными (44+/-7.6 vs 13.7+/-0.9 нг/мл соответственно, p<0.0001). Данные табл.5 подтверждают способность БАД "Кудесан" при приеме внутрь повышать содержание CoQ₁₀ в миокарде SHRSP; одновременно происходил подъем уровней CoQ₉ и б-TOC относительно нелеченных животных. Тот же эффект наблюдался и в миокарде ПЖ при отсутствии изменений CoQ₁₀ и CoQ₉ в головном мозге.

Таблица 5. Содержание коэнзимов Q и б-TOC в миокарде ЛЖ у 12-недельных крыс WKY, SHRSP и SHRSP, получавших БАД "Кудесан" раствор в течение 6-ти недель (среднее значение стандартное отклонение) ¹

¹ - количественное определение проводили в цельных гомогенатах миокарда.

* - значимые отличия от группы SHRSP, p?0,01;

^# - значимые отличия от группы WKY, p?0,01.

Таблица 6. Показатели артериального давления, частоты сердечных сокращений и гипертрофии ЛЖ у 12-недельных крыс WKY, SHRSP и SHRSP, получавших БАД "Кудесан" раствор в течение 6-ти недель (среднее значение стандартное отклонение)

* - значимые отличия от группы SHRSP, p?0,01.

^# - значимые отличия от группы WKY, p?0,01.

Небольшое снижение среднегруппового АД и индекса массы ЛЖ в леченной группе не было статистически значимым. Более четким было снижение ЧСС, приведшее к сближению среднегрупповых значений с контрольной группой WKY (табл.6).

Рис.22. Взаимосвязь степени гипертрофии левого желудочка SHRSP и содержания коэнзимов Q в миокарде ЛЖ. А - группа SHRSP; Б - группа SHRSP+Q. Коэффициенты корреляции: для А1 r=-0,859 (p<0,05), А2 r=-0,936 (p<0,01); для Б1 r=-0,746 (p<0,05), Б2 r=-0,819 (p<0,05).

В обеих группах гипертензивных животных индекс массы ЛЖ был обратно пропорционален содержанию в миокарде CoQ₁₀ и CoQ₉ (рис.22). Иными словами, степень гипертрофии миокарда ЛЖ была меньше у животных с более высоким тканевым содержанием коэнзимов Q.

Выраженность признаков гипертрофии миокарда на тканевом уровне оценивали микроскопически с помощью светового микроскопа Leitzt (Германия) и электронного микроскопа Philips CM-10 (Голландия).

При светооптическом исследовании миокарда обеих групп SHRSP наблюдали однотипные структурные изменения: увеличение размеров кардиомиоцитов и их ядер, полиморфизм последних, разрывы мышечных волокон, разобщенность клеток и увеличение межклеточных пространств, дезорганизацию миофибрилл, утрату клетками поперечной исчерченности, кровоизлияния. Деструктивные изменения были выражены и в сосудах, особенно в крупных. Просветы сохранившихся капилляров были, как правило, расширены, часто со стазом эритроцитов. В межклеточных пространствах встречались очаги образования соединительной (рубцовой) ткани.

Гипертрофия миокарда, будучи процессом компенсаторно-приспособительным, сочетает деструктивные изменения с регенераторными - приспособительными реакциями, которые легче обнаружить в ткани на ультраструктурном уровне. При электронно-микроскопическом исследовании сердец SHRSP, не получавших БАД, в кардиомиоцитах наблюдали увеличение размеров ядер и деструктивные изменения: расширения околоядерного пространства, разрывы и фрагментацию миофибрилл. Митохондрии располагались хаотично, большая часть была с разрушенным матриксом: частичное или почти полное отсутствие крист, концентрическая, дугообразная или иная формы у сохранившихся. Деструктивные изменения в миокарде этих животных носили выраженный, тотальный характер; признаков компенсаторно-приспособительных реакций не было обнаружено.

Изучение ультраструктуры сердечной мышцы левого желудочка SHRSP, получавших "Кудесан", также показало выраженные деструктивные изменения в ее клетках (разрушение миофибрилл, хаотичное расположение митохондрий, и др.) и сосудах. Однако процессы деструкции не носили столь тотального характера, как в миокарде нелеченных животных. Часть кардиомиоцитов сохраняла миофибриллы с правильной поперечной исчерченностью и цепочечное расположение митохондрий, свойственное этим клеткам в норме. Присутствовали признаки компенсаторно-приспособительных реакций: ядра кардиомиоцитов нередко имели фестончатую форму, увеличивающую поверхность ядра и свидетельствующую об активации его функции; сохранившие свое строение капилляры прилежали к сарколемме миоцитов, осуществляя таким образом тесный контакт с ними, что необходимо для обеспечения нормального обмена веществ в клетках (рис.23).