Гепатопротекторные и иммунометаболические эффекты, вызываемые этанолом в сочетании с энергизаторами и антиоксидантами при различных формах нарушения гомеостаза

Размещено на http://www.allbest.ru/

На правах рукописи

14.00.25 - фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

ГЕПАТОПРОТЕКТОРНЫЕ И ИММУНОМЕТАБОЛИЧЕСКИЕ ЭФФЕКТЫ, ВЫЗЫВАЕМЫЕ ЭТАНОЛОМ В СОЧЕТАНИИ С ЭНЕРГИЗАТОРАМИ И АНТИОКСИДАНТАМИ ПРИ РАЗЛИЧНЫХ ФОРМАХ НАРУШЕНИЯ ГОМЕОСТАЗА

Лосенок С.А.

Курск - 2009

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Курский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию».

Научные консультанты:

доктор медицинских наук, профессор Бровкина Инна Леонидовна

доктор медицинских наук, профессор Покровский Михаил Владимирович

Официальные оппоненты:

член-корр. РАМН, доктор медицинских наук, профессор Лепахин Владимир Константинович

доктор медицинских наук, профессор Провоторов Владимир Яковлевич

доктор медицинских наук, профессор Яворский Александр Николаевич

Ведущая организация:

ОАО «Всероссийский научный центр по безопасности биологически активных веществ».

Защита состоится «____»__________2009 г. в «_____» часов на заседании диссертационного совета Д 208.039.03 при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Курский государственный медицинский университет Росздрава» (305041, г. Курск, ул. К.Маркса, 3)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Курский государственный медицинский университет Росздрава»

Автореферат разослан «_____»__________200 г.

Ученый секретарьдиссертационного совета ПАШИН Е.Н.

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Состояние стресса и возникновение патологических процессов приводят к развитию однотипных метаболических изменений, выражающихся в усилении генерации активных метаболитов кислорода, повышению интенсивности перекисного окисления липидов клеточных мембран, снижению энергообеспечения и функциональной активности клеток, нарушению иммунологических функций. Последние в свою очередь оказывают влияние на метаболические процессы и физиологические функции организма. Возникает сложная последовательность взаимосвязанных отклонений гомеостаза, требующих эффективной коррекции (Л.Г. Прокопенко и др., 2000; 2003). Естественно ожидать, что универсальными корректорами могут быть препараты, повышающие антиокислительный и энергетический потенциалы клеток. Можно было предположить, что в условиях стресса и патологии эффективными корректорами нарушенных функций являются антиоксиданты и средства, активирующие энергетический обмен (энергизаторы). Учитывая, что процессы, лежащие в основе сохранения окислительно-энергетического гомеостаза, связаны с мембранными структурами клеток, вероятно, целесообразным является сочетание антиоксидантных и энергизирующих препаратов со средствами, модифицирующими структуры и функции клеточных мембран эритроцитов, тромбоцитов, иммуноцитов, гепатоцитов, в частности с фосфолипидами (Г.А. Лазарева и др., 2006).

Среди различных форм нарушения окислительно-энергетического гомеостаза особое место занимает алкоголизация, что обусловлено частотой неконтролируемого приема этанола. Нередко на фоне длительного поступления этанола организм подвергается действию различных экстремальных факторов (охлаждению, перегреванию, травматизации, в том числе сочетающимся с кровопотерей), принимает избыточное количество пищи или, напротив, голодает, выполняет интенсивные физические нагрузки. Прием этанола, особенно в сочетании с другими нарушающими гомеостаз условиями является причиной поражения печени, изменения метаболических и функциональных параметров клеток этого органа (И.М. Рослый и др., 2004).

Последствия длительного и кратковременного поступления в организм этанола, как правило, оппозитны. Первое ведет к развитию патологического процесса, второе может вызвать развитие реакций, направленных на коррекцию функций различных органов, нарушенных действием стрессорного агента или патогена (Н.А. Алиев, 1989). Последнее постулируется, но недостаточно обосновано строгими экспериментальными исследованиями. Этанол, как и фосфолипиды, индуцирует возникновение структурных перестроек клеточных мембран, однако направленность их действия в известной степени противоположна. Фосфолипиды в широком диапазоне доз упорядочивают структуру билипидного слоя мембран, снижают их текучесть (А.Д. Гордиенко, 1990; 1992), а этанол разрыхляет мембрану, увеличивает ее текучесть (С.И. Сторожок и др., 2001; В.Д. Прокопьева и др., 2005).

Принимая во внимание изложенное большой интерес представляет изучение эффектов взаимосвязанного влияния препаратов модифицирующих мембраны (фосфолипиды, этанол) и активирующих метаболические процессы (витамины, антиоксиданты и антигипоксанты) на состояние гепатоцитов, свойства эритроцитов и функциональную активность иммуноцитов при различных формах нарушения окислительно-энергетического гомеостаза.

Целью работы было изучение гепатопротекторных и иммунометаболических эффектов интра - и экстракорпорального применения этанола в сочетании с энергизаторами и антиоксидантами при различных формах нарушения гомеостаза.

Задачи

Изучение иммунометаболических эффектов сочетанного применения полиненасыщенных фосфолипидов и активаторов энергетического обмена при интенсивных физических нагрузках.

Изучение иммунометаболических эффектов сочетанного применения полиненасыщенных фосфолипидов, активаторов энергетического обмена и жирорастворимых витаминов при кровопотере.

Изучение иммунометаболических эффектов сочетанного применения полиненасыщенных фосфолипидов и активаторов метаболических процессов при длительном поступлении в организм этанола.

4. Изучение иммунометаболических эффектов, вызываемых кратковременным поступлением в организм этанола.

Изучение эритроцитзависимых иммунометаболических эффектов вызываемых этанолом и жирорастворимыми витаминами при кровопотере и физической нагрузке.

Изучение иммуномодулирующего и гепатопротекторного действия этанола и полиненасыщенных фосфолипидов при нарушении энергетического гомеостаза.

7. Изучение роли эритроцитов и тромбоцитов в развитии иммуносупрессии при различных формах нарушения энергетического гомеостаза.

8. Выяснение роли эритроцитов и тромбоцитов во взаимосвязанном иммуномодулирующем и гепатопротекторном действии полиненасыщенных фосфолипидов, этанола, активаторов обменных процессов при нарушении гомеостаза.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА.

Выявлены особенности иммуномодулирующего и гепатопротекторного действия активаторов метаболических процессов после кровопотери, интенсивной физической нагрузки, длительного поступления в организм этанола.

Показан механизм развития тромбоэритроцитарной иммуносупрессии после выполнения физической нагрузки высокой интенсивности и длительного поступления в организм этанола.

Установлена высокая эффективность сочетанного применения полиненасыщенных фосфолипидов с активаторами энергетического обмена иммунокоррегирующего и гепатопротекторного действия, после кровопотери, интенсивной физической нагрузки и алкоголизации.

Выявлены особенности иммунометаболических эффектов кратковременного и длительного поступления в организм этанола.

Установлена значительная роль эритроцитов в реализации иммуномодулирующего и гепатопротекторного действия полиненасыщенных фосфолипидов, жирорастворимых витаминов, этанола и активаторов метаболических процессов.

ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ

Экспериментально обоснована целесообразность совместного применения фосфолипидов и кудесана и фосфолипидов с мексидолом для достижения иммуномодулирующего и гепатопротекторного эффектов после кровопотери соответственно. Установлена неэффективность раздельного использования полиненасыщенных фосфолипидов, жирорастворимых витаминов и активаторов энергетического обмена для коррекции иммунометаболических нарушений после кровопотери, интенсивной физической нагрузки и алкоголизации. Доказана возможность коррекции тромбоэритроцитарной иммуносупрессии, вызываемой физической нагрузкой высокой интенсивности, сочетанным введением полиненасыщенных фосфолипидов и милдронатом.

Установлена целесообразность совместного применения фосфолипидов и милдроната, а так же фосфолипидов и менадиона для коррекции иммунометаболических процессов, нарушенных длительным поступлением в организм этанола. Доказано индуцирующее влияние сочетанного использования полиненасыщенных фосфолипидов, жирорастворимых витаминов, активаторов энергетического обмена и этанола на повышение иммуногенных свойств эритроцитов. Экспериментально обоснована целесообразность совместного применения малых доз этанола и жирорастворимых витаминов для коррекции иммунометаболических нарушений, вызываемых кровопотерей и интенсивной физической нагрузкой.

Материалы диссертации включены в рабочие программы по фармакологии, патофизиологии, медицине катастроф, фармацевтической химии, биохимии на кафедрах Курского государственного медицинского университета, Воронежской государственной медицинской академии, Белгородском и Орловском государственных университетах.

ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ.

1. Активаторы метаболических процессов (регуляторы обмена, энергоносители, антигипоксанты, антиоксиданты), применяемые по отдельности не вызывает существенно выраженного иммунометаболического и гепатопротекторного эффектов при состояниях характеризующихся нарушением энергетического гомеостаза (кровопотере, интенсивных физических нагрузках, алкоголизации).

2. Сочетанное применение активаторов метаболических процессов с полиненасыщенными фосфолипидами вызывает выраженные иммуномодудирующий и гепатопротекторный эффекты в условиях нарушения энергетического гомеостаза.

3. Длительное поступление в организм этанола вызывает иммуносупрессорный и гепатопатический эффекты, кратковременное введение этанола стимулирует развитие клеточной и гуморальной форм иммунного ответа в норме и при различных формах нарушений энергетического гомеостаза.

4. Кратковременное введение этанола в сочетании с инъекциями жирорастворимых витаминов при нарушении энергетического гомеостаза вызывает более выраженные иммуно- и гепатопротекторный эффекты, чем раздельное введение препаратов. Наиболее эффективное сочетание - этанол и менадион.

5. Иммуномодулирующее и гепатопротекторное действие эссенциале, этанола и активаторов метаболических процессов реализуется при участии эритроцитов и тромбоцитов крови.

Апробация работы

Материалы диссертации обсуждены на заседаниях Международного конгресса «Иммунитет и болезни от теории к терапии (Москва, 2005) Всероссийский научно-практической конференции, посвященной 120- летию ветеринарной службы Курской области (Курск, 2005), VI Всероссийского научного форума «РеаСпоМед 2006» (Москва, 2006), XII и XIII Международных конгрессов по реабилитации в медицине и иммунореабилитации (Паттайя, Таиланд; Дубай, ОАЭ,2007;2008), IV Международной конференции. «Физиология и патология иммунной системы» (Москва, 2008), научных сессий Курского государственного медицинского университета отделения медико-биологических наук Центрально-Черноземного научного центра РАМН (Курск, 2006, 2008) и межкафедральной научно-практической конференции кафедр фармакологии, биологической химии, микробиологии, патологической физиологии, спортивной медицины и медицинской реабилитации Курского государственного медицинского университета (2008).

Публикации

Опубликовано 26 научных работ, в том числе 14 в реферируемых изданиях и в 1 монографии. Работы содержат полный объем информации, касающейся темы диссертации.

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 207 страницах машинописного текста, иллюстрирована 35 таблицами и 20 рисунками. Работа состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, изложения собственных результатов, заключения, выводов, практических рекомендаций. Список использованных работ включает 349 источников (267 на русском и 82 на иностранных языках).

Материалы и методы исследования

Объект исследования. Исследования проведены на крысах Вистар массой 180 - 200 г. Все животные содержались в одинаковых условиях, на обычном пищевом режиме. Для получения статистически достоверных результатов группы формировали из 8 - 10 животных. В контрольные и опытные группы входили животные одного возраста, полученные из питомника одновременно. Разброс в группах по исходной массе не превышал ± 10%. Исследования проводили с соблюдением принципов, изложенных в «Конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и других целей» (г. Страсбург, Франция, 1986).

Экспериментальные модели.

Кровопотеря. Под легким эфирным наркозом из бедренной артерии крыс одномоментно получали кровь в количестве приблизительно 1% массы тела. Содержание жидкости в кровеносном русле восстанавливали введением соответствующего объема 0,15 М натрия хлорида.

Физическая нагрузка. Однократное плавание в течение 4 часов с грузом 4,5- 5% массы тела при температуре воды 30 ± 10С (Ю.Г. Бобков и др., 1984). В крови плававших животных определяли концентрацию глюкозы и лактата (В.В. Меньшиков, 1987), активность пирофосфатзависимой фосфофруктокиназы (Б.Ф. Коровкин и др., 1999).

Алкогольная интоксикация. В ходе проводимых нами исследований этанол использовали по схемам представленным в таблице 1:

Таблица 1 Введение этанола

№ п/п	Способ введения	Кратность введения	Интервал ч.	Разовая доза
1. 2. 3. 4. 5.	Внутрижелудочно через зонд Внутрижелудочно через зонд Внутрижелудочно через зонд Внутрижелудочно через зонд Внутрижелудочно через зонд	70 60 30 7 1	24 24 24 24 -	3 г/кг 3 г/кг 3 г/кг 3 г/кг 30 г/кг

Выделение и изучение функциональной активности клеток селезенки и лимфоцитов периферической крови.

Клетки селезенки фракционировали по их способности прилипать к стеклянной поверхности (П. Дерфлинг, З. Вихнер, 1987).

Прилипающие к стеклу клетки дополнительно фракционировали при температурном градиенте (С.В. Родионов и др., 1985). Клетки культивировали в среде 199 (107 клеток на 1 мл среды), содержащей 5% телячьей эмбриональной сыворотки и антибиотики (пенициллин и стрептомицин) в течение 4-6 ч. и готовили пул супернатантов прилипающих и не прилипающих к стеклу спленоцитов (СПС и СНС), содержащих равные объемы супернатантов 5-6 животных (А.И. Конопля, Л.Г. Прокопенко, 1982). Белки СПС и СНС после диализа и концентрирования фракционировали на сефадексе G-150 (Г. Детерман, 1970). Получали три фракции белков: фракция I содержала белки с молекулярной массой (ММ) более 150 кД, фракция II - белки с ММ 50-60 кД и фракция III - белки с ММ менее 15 кД. Концентрацию белков во фракциях устанавливали по Бредфорду, используя краситель Кумаси G-250 (С.С. Шишков, 1989). Активность фракций оценивали путем введения их крысам в объеме, содержавшем 500 мкг белка (внутрибрюшинно 3-кратно с интервалом 12 часов) и последующей иммунизацией животных ЭБ.

Антителозависимую клеточную цитотоксичность (АЗКЦ) спленоцитов оценивали по величине индекса цитотоксичности (Ю.И. Зимин, В.Ф. Ляхов, 1985).

Выделение и фракционирование эритроцитов крыс. Кровь отстаивали дважды в 10 мМ Na-фосфатном буфере (рН=7,4), содержащем 0,9% хлорида натрия и 3% декстрана Т-500 и последующей очисткой с помощью НВS-целлюлозы в Na-фосфатном буфере. (Beutler, 1985). Эритроциты фракционировали в градиенте плотности яичного альбумина (Т.В. Кобзев и др., 1978). Получали фракции легких эритроцитов (плотность ниже 1,079 г/см3) и тяжелых эритроцитов с плотностью, превышающей 1,117.

Получение фракции эритроцитов тщательно отмывали от альбумина 0,15 М хлоридом натрия и использовали для введения аллогенным животным (внутрибрюшинно по 107 клеток трехкратно с интервалом 12 ч).

Получение плазмы, дефицитной по тромбоцитам и обогащенной тромбоцитами. Гепаринизированную кровь центрифугировали 5 мин при 180g. После расслоения крови на плазму, лейкоцитарный слой и эритроциты, отбирали первые два слоя и центрифугировали в течение 10 мин при 600 g. Супернатант представлял собой плазму, обогащенную тромбоцитами (ПОТ). Для получения плазмы, дефицитной по тромбоцитам (ПДТ), ПОТ центрифугировали в течение 20 мин при 1000g (А.Х. Коган и др., 1992). ПОТ и ПДТ использовали для обработки эритроцитов (107 клеток инкубировали в 1 мл плазмы в течение 1 часа при 37єС). Иммуномодулирующую активность инкубата определяли путем введения в инкубационную среду мононуклеаров.

Включение менадиона в строму эритроцитов крыс. Для включения менадиона в строму эритроцитов использовали метод гипоосмотического гемолиза (Т.П. Генинг и др.,1988; Ж.Ш. Жумадилов, Р.В. Макаренкова, 1990). Эритроциты дважды отмывали изотоническим раствором натрия хлорида путем центрифугирования. К осадку эритроцитов добавляли семикратный объем охлажденной до 0єС дистиллированной воды и снова центрифугировали.

К полученной строме приливали пятикратный объем менадиона, растворенного в охлажденной до 5єС дистиллированной воде. Концентрация препарата в инкубационной среде составляла 1, 2 или 3 мг/мл. Взвесь инкубировали в течение 20 мин при 4єС, затем добавляли 1/10 объема 10% хлорида натрия для восстановления целостности стромы и инкубировали в течении 30 мин при 37єС. После включения менадиона в стромальные сферы, последние дважды отмывали изотоническим раствором натрия хлорида, затем осаждали при1500g в течении 10 мин.

Изученные препараты. В работе использовали следующие препараты: ретинола ацетат (АО «Ай-Си-Эн Октябрь», Россия); токоферола ацетат (АО «Ай-Си-Эн Октябрь», Россия); менадиона бисульфат натрия (Индия, LTD); эссенциале (полиненасыщенные фосфолипиды), («Рон-Пуленк-Рорер); рибоксин (инозин) (ОАО «Дальхимфарм»); милдронат (Grendex); мексидол (ООО МЦ «Элара»); кудесан (КоQ и витамин Е) (ЗАО «Аквион»); гипоксен (ЗАО «Олефин»); тиамин хлорид (ЗАО «Верофарм»); пиридоксин (ЗАО «Верофарм»); кобаламин (ЗАО «Верофарм»); фолиевая кислота («Борисовский химфармзавод»), филлохинон (Serva, ФРГ).

Способ введения препарата соответствовал рекомендациям, приведенным в справочнике М.Д. Машковского «Лекарственные средства» и аннотациях к использованию препаратов. Выбор разовых доз основывался на экспериментальных данных, приведенных в литературе о влиянии препаратов на состояние мембран клеток, в первую очередь эритроцитов (табл. 2).

Иммунологическую реактивность животных, функционально-метаболическую активность нейтрофилов, энергетический, антиоксидантный статус и перекисное окисление липидов эритроцитов и гепатоцитов, метаболические маркеры клеток крови, метаболическое состояние гепатоцитов, параметры белкового и липидного обмена, иммуномодулирующие соединения крови оценивали с помощью стандартных методов исследования (табл. 3).

Статистическая обработка материала. Вычисляли средние арифметические величины определявшихся показателей и их стандартные ошибки. Существенность различий средних величин оценивали по критериям Стьюдента (Г.Ф. Лакин, 1980), Вилкоксона, Манна-Уитни (Е.В. Гублер, А.А. Генкин, 1973). Рассчитывали коэффициенты парной, парциальной и множественной корреляции между показателями, а так же показатели их прямолинейной регрессии (Н.С. Мисюк и др., 1975).

Таблица 2. Применение препаратов

Название препарата	Способ введения	Разовая доза, мг/кг	Схема введения
			Количество инъекций	Интервал между инъекциями (введениями), ч.
Гипоксен	внутрижелудочно	5	5	12
Кудесан	внутрижелудочно	1	5	12
Мексидол	внутримышечно	5 2	5 5	12 12
Менадион	внутрижелудочно	1 10	5 1	12 -
Милдронат	внутримышечно	5 2,5	5 5	12 12
Ретинола ацетат	внутрижелудочно	5 5	5 1	12 -
Рибоксин	внутримышечно	2 1	5 5	12 12
Токоферола ацетат	внутрижелудочно	10 30	5 1	12 -
Тиамин	внутримышечно	2	5	12
Пиридоксин	внутримышечно	2,5	5	12
Фолат (фолиевая кислота)	внутримышечно	1	5	12
Кобаламин	внутримышечно	15	5	12
Филлохинон	внутрижелудочно	10	5	12
Эссенциале	внутривенно внутривенно внутривенно	5 2 10	5 5 1	12 12 -

Примечание: при сочетанном применении дозу препаратов уменьшали в 2 раза.

Таблица 3 Материалы и методы

Объект	Крысы Вистар
Модель	Интенсивная физическая нагрузка	Кровопотеря	Алкогольная интоксикация
Показатели
Иммунная реактивность	ГИО (гуморальный иммунный ответ) (К. Мальберг, Э. Зигль, 1987)
	АОК (антителообразующие клетки) к ЭБ	АОК (антителообразующие клетки) к ЛПС
	ГЗТ (гиперчувствительность замедленного типа)
	РМЛ (разница массы лимфоузлов) (Федосеева В.Н. и др., 1993)
Функционально-метаболическая активность нейтрофилов	Фагоцитарная активность (А.Н.Медведев, В.В. Чаленко, 1991)
	ФИ (фагоцитарный индекс)	ФЧ (фагоцитарное число)
	Кислородзависимая активность (В.И. Щербаков, 1989)
	НСТ-сп. (тест восстановления нитросинего тетразолия спонтанный)	НСТ-ст. (тест восстановления нитросинего тетразолия индуцированный)
Энергетический, антиоксидант-ный статус и ПОЛ эритроцитов (Э) и гепатоцитов (Г)	Энергетичский статус (И.Л. Виноградова и др., 1980)
	БФГ (бифосфоглицерат) (Э)	АТФ (аденозинтрифосфат) (Э)
	Антиоксидантный статус
	СОД (супероксиддисмутаза) (Э, Г) (Е.В. Макаренко, 1988)	Каталаза (Э, Г) (М.А. Подильчак 1967)	ГП (глутатионпероксидаза) (Э) (А.П. Гаврилюк, Н.Ф. Хмара, 1986)	ГР (глутатионредуктаза) (Э) (Е.В. Макаренко, 1988)
	ПОЛ
	МДА (малоновый диальдегид) (Э, Г) (И.Д.Стальная, 1977)	ДК (диеновые коньюгаты) (Г) (И.Д.Стальная, 1977)	АГП (ацетилгидроперекиси) (Э) (В.И.Бенисевич, И.Л.Идельсон, 1973)
Метаболические маркеры клеток крови	Полиморфноядерные лейкоциты:	Активность НАДФН-оксидазы (Л.В. Никанкина и др., 2001)
	Лимфоциты:	Содержание фруктозо-2,6-дифосфатазы (Б.Ф. Коровкин и др., 1999)
	Эритроциты:	Активность Mg2+-АТФ-азы (Г.Ф. Рыжкова, С.И. Вишняков, 2005)
	Тромбоциты:	Содержание МДА (Е.В. Негреску, 1992)
Метаболическое состояние гепатоцитов	АЛТ (аланинаминотрансфераза) (В.В.Меньшиков, 1987)	АСТ (аспартатаминотрансфераза) (В.В.Меньшиков, 1987)	ЩФ (щелочная фосфатаза) (В.В.Меньшиков, 1987)	ОБ (общий билирубин) (В.В.Меньшиков, 1987)
Иммуномодули рующие соединения крови	ЛНП (липопротеиды низкой плотности) (В.Г. Кобл, В.С. Камышников, 1976)	ААП (б 1-антипротеаза) (В.Ф.Нартикова, Г.С. Пасхина, 1979)	АМГ (б2-макроглобулин) (В.Ф. Нартикова, Г.С. Пасхина, 1979)

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Иммунометаболические эффекты сочетанного применения эссенциале и витаминов при кровопотере.

Установлено, что введение эссенциале здоровым животным или крысам, подвергнутым кровопусканию (КПК) не оказывало влияния на функционально-метаболическую активность полиморфноядерных лейкоцитов (ФМА ПЯЛ), развитие ГИО и ГЗТ, индуцированных ЭБ. Инъекции тиамина, пиридоксина, фолата или кобаламина не изменяли активность нейтрофилов периферической крови и иммунологическую реактивность у здоровых крыс, но повышали выраженность иммунологических функций у КПК. Наиболее выраженным было иммуномодулирующее действие пиридоксина, однако даже в случае введения этого витамина параметры иммунологических функций не нормализовались полностью.

Сочетанное применение эссенциале с тиамином, пиридоксином, фолатом или кобаламином вызывало у КПК существенное повышение всех показателей, характеризующих ФМА нейтрофилов и выраженность развития ГИО на ЭБ, однако только при сочетании эссенциале с кобаламином их величины достигали контрольного уровня.

Таким образом, эссенциале проявляли себя как усилитель иммуномодулирующей активности тиамина, фолата и особенно кобаламина. Совместное введение эссенциале с пиридоксином не усиливало иммуномодулирующей активности последнего. Это, вероятно, объясняется биокаталитической самодостаточностью пиридоксина, коферментная форма которого, фосфопиридоксаль, участвует в катализе большого числа реакций аминокислотного, витаминного и гормонального метаболизма. Совокупность этих реакций, по-видимому, достаточна для коррекции иммунологических функций при кровопотере без изменения скорости процессов, активируемых эссенциале.

В крови КПК имело место снижение содержания эритроцитов и гемоглобина. В эритроцитах уменьшалась концентрация макроэргических соединений (БФГ и АТФ), активность антиоксидантных ферментов (СОД и каталазы), повышалось содержание продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ) (АГП и МДА). Легкие эритроциты КПК при аллогенном переносе угнетали ФМА нейтрофилов, развитие ГИО и ГЗТ на ЭБ.

Введение после кровопотери витаминов по отдельности не оказывало существенного влияния на энергетический и антиоксидантный потенциал эритроцитов, на содержание в них продуктов ПОЛ и иммуносупрессирующие свойства легких клеток и индуцировало появление иммуностимулирующих свойств у тяжелых эритроцитов. Эссенциале с тиамином повышали концентрацию БФГ и АТФ, активность СОД и каталазы, снижали содержание АГП и МДА в эритроцитах КПК. В легких эритроцитах эти сдвиги были выражены сильнее, чем в тяжелых. Введение эссенциале с фолатом или кобаламином уменьшало выраженность метаболических изменений преимущественно в тяжелых эритроцитах.

Кровопотеря приводила к усилению гемолиза эритроцитов и накоплению в крови фрагментов стромы легких и тяжелых эритроцитов (ФСЛЭ и ФСТЭ). Учитывая это, интересно было выяснить влияние препаратов на иммуномодулирующее действие ФСЛЭ и ФСТЭ.

Оказалось, что ФСЛЭ и ФСТЭ КПК не влияют на развитие ГИО и ГЗТ, индуцированных ЭБ у интактных крыс. Не обладала иммунотропной активностью также строма эритроцитов КПК, получавших инъекции эссенциале и тиамина. ФСЛЭ КПК, получавших эссенциале и фолат или кобаламин, была не активна, а ФСТЭ крыс, которым после кровопотере вводили препараты, при аллогенном переносе стимулировали развитие ГИО на ЭБ. В большей степени это было выражено при введении эссенциале с кобаламином.

Большой интерес представляет изучение иммуномодулирующего действия эссенциале и жирорастворимых витаминов. Введение КПК ретинола ацетата, токоферола ацетата и филлохинона повышали (но не нормализовали) ФМА нейтрофилов, иммунологическую реактивность в организме в отношении ЭБ. Инъекции эссенциале не влияли на эффекты, вызываемые токоферола ацетатом, но усиливали иммуномодулирующее действие ретинола ацетата и, особенно, филлохинона.

Совместное введение КПК эссенциале и филлохинона не влияло на иммунометаболическое состояние легких эритроцитов, но уменьшало выраженность сдвигов показателей, характеризующих энергетический потенциал, антиоксидантный статус и интенсивность ПОЛ тяжелых эритроцитов, а также индуцировало появление иммуностимулирующих свойств у этих клеток. Выраженной иммуностимулирующей активностью обладали ФСТЭ КПК, получавших инъекции филлохинона и эссенциале.

Все изложенное позволяет постулировать участие триады «эссенциале - кобаламин - филлохинон» в механизме индукции иммуномодулирующих свойств у тяжелых эритроцитов. Для подтверждения этого постулата проведены следующие варианты экспериментов: после кровопотери животным, получавшим инъекции эссенциале, вводили эктракорпорально обработанные кобаламином или филлохиноном ФСТЭ интактных крыс (вариант 1); КПК, получавшим инъекции кобаламина или филлохинона, вводили экстракорпорально обработанные эссенциале ФСТЭ интактных крыс (вариант 2).

В первом варианте имел место иммуномодулирующий эффект, во втором такой эффект не выявлен. Это позволяет считать, что участие кобаламина и филлохинона в индукции иммуностимулирующих свойств у тяжелых эритроцитов реализуется на уровне их взаимодействия с мембранными структурами клеток, а эссенциале являются активатором эффектов, вызываемых кобаламином и филлохиноном в мембране эритроцитов. Для проверки последнего предположения ФСТЭ экстракорпорально обрабатывали кобаламином и эссенциале, филлохиноном и эссенциале, или сочетанием всех трех соединений (табл. 4).

Таблица 4 Влияние витаминов и ФСТЭ здоровых животных, экстракорпорально обработанных витаминами, на ФМА нейтрофилов и иммунологическую реактивность КПК

Условия опыта	ИАФ, ед	ОРН, ед	АОК, 103/орган	РМЛ, мг
1. Контроль	53,6±5,1	26,4±2,8	27,5±3,0	5,8±0,6
2. Кровопотеря	14,9±2,1*1	11,2±1,4*1	9,2±1,1*1	2,4±0,2*1
3. Кровопотеря, введение эссенциале и ФСТЭ, обработанных кобаламином	31,8±3,2*1,2	17,4±1,4*1,2	18,2±2,3*1,2	3,6±0,3*1,2
4. Кровопотеря, введение эссенциале и ФСТЭ, обработанных филлохиноном	46,4±4,6*1-3	22,1±2,3*1-3	23,3±2,5*1-3	4,7±0,5*1-3
5. Кровопотеря, введение кобаламина и ФСТЭ, обработанных эссенциале	16,1±1,5*1,3,4	12,8±1,3*1,3,4	10,1±1,2*1,3,4	2,6±0,7*1,3,4
6. Кровопотеря, введение филлохинона и ФСТЭ, обработанных эссенциале	16,9±1,6*1,3,4	12,2±1,0*1,3,4	8,8±0,9*1,3,4	2,4±0,2*1,3,4

Примечание: в этой и следующих таблицах * - существенность различий с вероятностью р<0,05.

Установлено, что ФСТЭ, обработанные кобаламином и эссенциале, при аллогенном переносе не вызывают иммуномодулирующего эффекта, ФСТЭ, инкубированные с филлохином и эссенциале обладали слабо выраженной активностью, а строма, экстракорпорально взаимодействовавшая с кобаламином, филлохиноном и эссенциале значительно повышала ФМА нейтрофилов и иммунологическую реактивность у КПК (табл. 5).

Кобаламин, филлохинон и эссенциале в парных комбинациях коррегируют состояние мембран гепатоцитов, окислительно-энергетический потенциал эритроцитов и функционально-метаболическую активность иммуноцитов. Кобаламин ограничивает угнетающе влияние кровопотери на ФМА нейтрофилов. Это, по-видимому, обусловлено стимулирующим влиянием кобаламина на ферменты гликолиза, являющегося основным источником энергообеспечения клеток этого типа. Филлохинон предотвращает вызываемые кровопотерей появление иммуносупрессирующих свойств у легких эритроцитов. В основе этого лежит нормализующее влияние филлохинона на окислительно-энергетический потенциал эритроцитов (Л.Г. Прокопенко, И.Л. Бровкина, 2003). Эссенциале стабилизирует клеточные мембраны за счет антиоксидантного и заместительного эффектов (Г.А. Лазарева и др., 2006). Стабилизация мембран служит необходимым условием эффективного действия витаминов, этим объясняется высокая эффективность после кровопотери изученных парных сочетаний препаратов.

Таблица 5 Влияние ФСТЭ здоровых крыс, экстракорпорально обработанных эссенциале, кобаламином и филлохиноном, на ФМА нейтрофилов и иммунологическую реактивность КПК

Условия опыта	ИАФ, ед	ОРН, ед	АОК, 103/орган	РМЛ, мг
1. Контроль	53,6±5,1	26,4±2,8	27,5±3,0	5,8±0,6
2. Кровопотеря	14,9±2,1*1	11,2±1,4*1	9,2±1,1*1	2,4±0,2*1
3. Кровопотеря, введение ФСТЭ, обработанных эссенциале и кобаламином	15,6±1,9*1,2	12,7±1,6*1,2	10,7±1,1*1,2	2,6±0,3*1,3
4. Кровопотеря, введение ФСТЭ, обработанных эссенциале и филлохиноном	23,7±2,8*1-3	19,4±2,2*1-3	18,3±2,1*1-3	3,1±0,3*1-3
5. Кровопотеря, введение ФСТЭ, обработанных эссенциале, кобаламином и филлохиноном	41,8±4,3*1-4	23,1±2,5*1-4	23,6±2,7*1-4	4,5±0,4*1-4

Иммунометаболические эффекты сочетанного применения эссенциале и регуляторов энергетического обмена при кровопотере.

Изучено влияние сочетанного применения препарата полиненасыщенных фосфолипидов - эссенциале и регуляторов энергетического обмена - мексидола, кудесана и гипоксена на иммунологические функции и метаболические процессы в печени после острой кровопотери.

Установлено, что в эритроцитах крыс, подвергнутых кровопотере снижалась концентрация БФГ и АТФ, активность СОД и ГР, повышалось содержание АГП и МДА. Легкие эритроциты крыс при аллогенном переносе вызывали иммуносупрессирующий эффект. В плазме крови повышалась активность АЛТ, АСТ и ЩФ. Кровопотеря подавляла ФМА лейкоцитов, угнетала развитие ГИО и ГЗТ, индуцированных ЭБ.

Введение каждого из исследованных препаратов по отдельности не оказывало существенного влияния на величины определявшихся параметров. Мексидол в сочетании с кудесаном уменьшал выраженность снижения показателей, характеризующих ФМА лейкоцитов и развитие ГИО или нормализовал их величины. На развитие ГЗТ сочетание указанных препаратов не оказывало существенного влияния.

Мексидол в сочетании с кудесаном и мексидол, введенный с гипоксеном снижали активность АЛТ, АСТ и ЩФ, повышали концентрацию ОБ, а также сокращали время наркотического сна. Таким образом, иммунологические функции эффективно корригируются сочетанным применением мексидола с кудесаном, а метаболическая активность гепатоцитов - применением обоих сочетаний препаратов.

Во всех парных сочетаниях препараты повышали активность антиоксидантных ферментов и снижали содержание продуктов ПОЛ в эритроцитах, но не влияли на концентрацию в них макроэргических соединений (табл. 6).

Таблица 6 Влияние мексидола, кудесана, гипоксена на окислительно-энергетический потенциал эритроцитов после кровопотери

Условия опыта	СОД, ЕД/мл	ГР, мкмоль/л	АГП, ?D233/мл	МДА, мкмоль/л	БФГ, мкмоль/л	АТФ, мкмоль/л
1. Контроль	54,7±4,0	112,9±12,2	1,4±0,2	33,7±3,9	5,3±0,6	1,7±0,2
2.Кровопотеря	40,8±3,7*1	109,4±10,5	3,1±0,7*1	48,2±4,7*1	3,2±0,3*1	0,8±0,1*1
3.Кровопотеря, введение мексидола и кудесана	51,7±4,1*2	114,7±13,5	1,8±0,3*2	35,4±4,2*2	3,0±0,3*1	0,6±0,1*1
4.Кровопотеря, введение мексидола и гипоксена	46,8±4,3*1,2	117,1±11,4	1,5±0,2*2	35,0±3,8*2	3,4±0,3*1	0,8±0,1*1
5.Кровопотеря, введение кудесана и гипоксена	49,8±4,5*2	106,0±10,8	1,7±0,3*2	36,9±4,0*2	3,1±0,3*1	0,7±0,1*1

Совместное введение препаратов после кровопотери не уменьшало выраженность иммуносупрессирущих свойств эритроцитов КПК. Обращает на себя внимание тот факт, что мексидол в сочетании с кудесаном не влиял на иммуносупрессирующие свойства эритроцитов, но повышал ФМА лейкоцитов и иммунологическую реактивность в отношении ксеногенных эритроцитов. Вероятно, совместное применение мексидола с кудесаном повышало резистентность иммуноцитов к действию эритроцитов, приобретающих после кровопотери иммуносупрессирующие свойства.

Изучено влияние эссенциале на протективные эффекты, вызываемые мексидолом, кудесаном и гипоксеном в отношении метаболических процессов в печени и иммунологических функций.

Установлено, что введение крысам после кровопотери эссенциале с кудесаном нормализовало величины показателей ФМА ПЯЛ и иммунологической реактивности. Эссенциале с мексидолом нормализовали большинство показателей метаболических функций печени. Каждое из парных сочетаний уменьшало выраженность изменений некоторых показателей других функций, однако избирательность влияния эссенциале на действие мексидола, кудесана и гипоксена была очевидной.

Эссенциале в сочетании с мексидолом повышало активность антиоксидантных ферментов и снижал содержание продуктов ПОЛ в эритроцитах, совместное применение эссенциале с кудесаном или гипоксеном наряду с антиоксидантным эффектом повышали в эритроцитах концентрацию макроэргических соединений. Эссенциале с мексидолом предотвращали появление в крови КПК легких эритроцитов, обладающих иммуносупрессирующими свойствами, а эссенциале с кудесаном помимо указанного эффекта, индуцировали появление у тяжелых эритроцитов иммуностимулирующей активности.

Введение эссенциале с гипоксеном не оказывало влияния на иммунологическую активность легких и тяжелых эритроцитов. Сопоставление особенностей сочетанного влияния эссенциале другими препаратами на метаболическое состояние эритроцитов и их иммунологическую активность позволяет считать, что нормализация окислительно-энергетического потенциала эритроцитов является необходимым условием отмены иммуносупрессирующих свойств у легких и появления иммуностимулирующей активности у тяжелых клеток.

Результаты проведенных исследований показывают, что эссенциале оказывает селективное влияние на протективную активность мексидола и кудесана в отношении функций гепатоцитов и иммуноцитов при кровопотере. Они свидетельствуют о важной роли эритроцитов в регуляции иммунологических функций.

Иммунометаболические эффекты сочетанного применения эссенциале и регуляторов энергетического обмена при физических нагрузках. Изучено влияние физической нагрузки высокой интенсивности на иммунометаболические параметры организма и возможность их коррекции эссенциале и регуляторами энергетического обмена (рибоксином, милдронатом, мексидолом).

Установлено, что плавание приводило к значительному увеличению в крови активности фосфофруктокиназы (до 12,8 ± 9,7, после 85,7 ± 9,8 ммоль/(л.с.)). В крови плававших крыс снижалась концентрация глюкозы (до 5,7 ± 0,8, после 4,2 ± 0,7 ммоль/л) и увеличивалась концентрация лактата (до 2,5 ± 0,7 ммоль/л, после 3,8 ± 1,2 ммоль/л). Показатели кислотно-основного равновесия после плавания не отличались от контроля. Результаты исследований показали, что в условиях проведенных экспериментов, крысы выполняли нагрузку высокой (но не максимальной или субмаксимальной) интенсивности, плавание снижало ИАФ и ОРН, тормозило развитие ГИО и ГЗТ. При раздельном применении рибоксин, милдронат, мексидол и эссенциале не оказывали существенного влияния на ФМА нейтрофилов и иммунологическую реактивность плававших крыс. Эссенциале в сочетании с рибоксином или мексидолом повышали параметры, характеризующие иммунологические функции животных, а эссенциале с милдронатом нормализовали их.

Плавание существенно снижало выраженность АЗКЦ спленоцитов (до плавания - 12,3 ± 1,2%, после плавания 6,3 ± 0,7%). Введение плававшим крысам эссенциале с рибоксином или эссенциале с мексидолом уменьшало степень снижения АЗКЦ (соответственно 8,7 ± 0,9% и 8,3 ± 0,8%), а инъекции эссенциале с милдронатом нормализовали выраженность этого феномена (11,0 ± 1,3%).

В регуляции механизмов иммунологической защиты организма важную роль играют полиморфноядерные лейкоциты, мононуклеары, модифицированные различными агентами эритроциты и активированные тромбоциты.

Плавание подавляло активность НАДФН - оксидазы ПЯЛ, Mg2+ АТФазы эритроцитов, снижало концентрацию ФДФ в лимфоцитах и повышало содержание МДА в тромбоцитах. Инъекции плававшим крысам рибоксина уменьшали выраженность снижения активности Mg2+ - АТФазы стромы эритроцитов, введение мексидола повышало активность НАДФН - оксидазы ПЯЛ, а инъекции милдроната увеличивали концентрацию ФДФ в лимфоцитах. Эссенциале, введенный по отдельности, не влиял на метаболические параметры клеток крови, а в сочетании с рибоксином нормализовал активность Mg2+ - АТФазы стромы эритроцитов, с мексидолом - НАДФН - оксидазы ПЯЛ, а с милдронатом содержание ФДФ в лимфоцитах и МДА в тромбоцитах (табл. 7).

В условиях проведенных нами экспериментов в эритроцитах снижалась активность СОД и каталазы, повышалась концентрация АГП и МДА. Физическая нагрузка высокой интенсивности проводила к снижению активности СОД и каталазы, повышению ДК и МДА в печени.

Введение после интенсивной физической нагрузки регуляторов энергетического обмена по отдельности не влияло на метаболические параметры эритроцитов и печени. Совместное применение эссенциале и рибоксина повышало, но не нормализовало активность СОД и каталазы в эритроцитах. Эссенциале с мексидолом или милдронатом нормализовали активность СОД и каталазы, а также уменьшали выраженность изменений содержания АГП и МДА в эритроцитах и печени.

Результаты проведенных экспериментов показывают, что угнетение иммунологических функций после интенсивной физической нагрузки возникает на фоне нарушения антиоксидантного статуса и процессов перекисного окисления липидов в печени и эритроцитах. Введение длительно плававшим животным полиненасыщенных фосфолипидов, в сочетании с активаторами различных звеньев процессов энергообеспечения, вероятно, предотвращает окислительное модифицирование липопротеинов низкой плотности и появление иммуносупрессирующей активности у тромбоцитов и эритроцитов (эффект фосфолипидов и рибоксина), снижение функциональной активности нейтрофилов и лимфоцитов (эффект милдроната и мексидола).

Таблица 7 Влияние регуляторов энергетического обмена и эссенциале на показатели функциональной активности клеток крови после ИФН

Условия опыта	НАДФН-оксидаза ПЯЛ	ФДФ лимфоцит	Mg2+ - АТФазы эритроцит	МДА тромбоцит
!1. Контроль(без плавания и введения препаратов)	1,32±0,21	0,96±0,14	0,66±0,08	0,61±0,06
2. Плавание	0,53±0,10*1	0,40±0,09*1	0,32±0,03*1	0,90±0,09*1
3. Плавание, введение рибоксина	0,60±0,12	0,43±0,08*1	0,46±0,05*1,2	0,87±0,08*1
4. Плавание, введение милдроната	0,56±0,09*1	0,66±0,11*1-3	0,27±0,03*1,3	0,93±0,09*1
5. Плавание, введение мексидола	0,91±0,16*1-4	0,43±0,10*1,4	0,33±0,04*1,3	0,86±0,10*1
6. Плавание, введение эссенциале	0,64±0,10*1	0,42±0,10*1,3-5	0,35±0,03*1,3	0,84±0,11*1
7. Плавание, введение рибоксина и эссенциале	0,77±0,13*1-6	0,68±0,13*1,3	0,69±0,08*2-6	0,92±0,10*1
8. Плавание, введение милдроната и эссенциале	0,68±0,13*1,5	0,94±0,20*2-7	0,44±0,06*1,2,4-7	0,58±0,062-7
9. Плавание, введение мексидола и эссенциале	1,35±0,23*2-8	0,70±0,15*1-3,4-6	0,28±0,03*1,3,7,8	0,88±0,11*1,8

Возникновение кровотечения реальных условиях нередко происходит на фоне интенсивных физических нагрузок. Усиление свободно-радикальных процессов при кровопотере и физических нагрузках сопровождается снижением энергообеспечения клеток. В связи с этим можно предположить, что эффективная коррекция иммунометаболических процессов при кровопотере и физической нагрузке будет иметь место в случае применения эссенциале с активаторами цикла трикарбоновых кислот и окислительной цепи митохондрий.

Экспериментальная проверка этого предположения показала, что после кровопотери в сочетании с физической нагрузкой введение мексидола или кудесана не влияло на иммунометаболические параметры, а применение этих препаратов с эссенциале уменьшало выраженность изменения (но не нормализовало) определявшихся параметров.

Таким образом, кровопотеря на фоне интенсивных физических нагрузок становятся причиной развития резко выраженных, трудно поддающихся коррекции иммунометаболических нарушений.

Изменение иммунометаболических параметров и их коррекция милдронатом, рибоксином и эссенциале при длительном поступлении в организм этанола. Изучено влияние многократного (30 дней подряд и длительного (70 дней подряд) поступления в организм низких доз этанола (0,3 г/100 г массы тела) на неспецифическую резистентность и иммунологическую реактивность организма, метаболизм и функциональную активность гепатоцитов и эритроцитов, а также на содержание в плазме крови соединений, характеризующих состояние углеводного, липидного и белкового обменов.

Установлено, что после многократного введения этанола наблюдалось нерезко выраженное снижение ФМА нейтрофилов и угнетение развития ГИО на ЭБ и ЛПС.

В печени увеличивалась активность СОД и каталазы, содержание ДК и МДА. В эритроцитах после многократного введения этанола увеличивалась активность СОД и каталазы, повышалось содержание АГП и МДА. Все остальные определявшиеся показатели (БФГ и АТФ, активность Mg2+- АТФ-азы, ГП и ГР) не отличались от уровня контроля (рис.1).

В крови алкоголизированных животных активность АСТ не отличалась от нормы, а АЛТ была значительно повышена. Существенно снижался коэффициент де-Ритиса (АСТ/АЛТ). Повышалась активность ЩФ, концентрация ТАГ и холестерина. Не изменялось активность фосфокреатинкиназы (ФКК) и концентрация белка и мочевины.

При длительном приеме этанола у животных ФМА нейтрофилов была существенно подавлена, а развитие ГИО на ЭБ и ЛПС резко угнетено.

В печени крыс активность СОД и каталазы была существенно снижена, а концентрация ДК и МДА увеличена. В эритроцитах имело место снижение содержания БФГ и АТФ. Снижалась активность Mg2+- АТФ-азы, СОД, ГП, ГР и каталазы. Увеличивалось содержание АГП и МДА.

В крови животных второй группы повышены активность АЛТ и, особенно АСТ (коэффициент де-Ритиса становится выше 1), ЩФ, увеличивалась концентрация общего билирубина, ТАГ, холестерина, ДК и МДА. Повышалась активность ФКК и снижалась концентрация белка.

Изучено иммуномодулирующее действие милдроната, рибоксина и эссенциале при длительном поступлении в организм этанола. Этанол вводили внутрижелудочно через зонд 60-кратно с интервалом 24 часа по 0,3 г/100 г массы тела.

Введение милдроната усиливало, но не нормализовало выраженность показателей ФМА ПЯЛ, иммунологическую реактивность и состояние мембраны гепатоцитов. Рибоксин и эссенциале в выбранных дозах не оказывали существенного влияния на функции иммуноцитов и состояние мембран.

В сочетании с рибоксином милдронат нормализовал ФМА ПЯЛ, развитие ГИО и ГЗТ. Совместное применение милдроната с эссенциале нормализовало большинство определявшихся показателей функциональной активности иммуноцитов и гепатоцитов.

УСЛОВНЫЕ ОБОЗНАЧЕНИЯ: 1-контроль (без введения этанола); 2-введение этанола 30-кратно; 3-введение этанола 70-кратно.

_-существенность различий (р ‹ 0,05) относительно 1;

?-существенность различий (р ‹ 0,05) относительно 2.

Рисунок 1. Влияние этанола на концентрацию макроэргических соединений (БФГ и АТФ), активность антиоксидантных ферментов (СОД, КАТ, ГП и ГР) и содержание продуктов перекисного окисления липидов (ДК и МДА) в эритроцитах.

В эритроцитах крыс, получавших этанол, милдронат и рибоксин или эссенциале, уменьшалась выраженность изменений БФГ, АТФ, СОД, АГП и МДА. Легкие эритроциты таких животных при аллогенном переносе не влияли на ФМА ПЯЛ, развитие ГИО и ГЗТ (рис. 2)

На основании полученных данных можно прийти к заключению о важной роли эритроцитов в развитии иммуносупрессии при алкогольной интоксикации и в реализации иммуномодулирующего действия регуляторов энергетического обмена и полиненасыщенных фосфолипидов.



Рисунок 2. Влияние милдроната, рибоксина и эссенциале на иммуносупрессирующие свойства эритроцитов при алкогольной интоксикации.

Примечания: А - АОК; Б - РМЛ. По оси абсцисс: 1. Контроль (без введения этанола и эритроцитов); 2. Введение эритроцитов, получавших этанол крыс; 3. Введение эритроцитов, получавших этанол, милдронат и рибоксин; 4. Введение эритроцитов крыс, получавших этанол, милдронат и эссенциале.

Иммуномодулирующее действие иммобилизованного эритроцитами менадиона и эссециале в норме и после длительного поступления в организм этанола. Изучено влияние синтетического водорастворимого аналога витамина К2 - менадиона на свойства эритроцитов. Эритроциты интактных и алкоголизированных крыс инкубировали с менадионом (0,1, 0,2 или 0,5 мг препарата в 1 мл изотонического раствора NaCl + 107 эритроцитов; инкубация 30 мин при 37єС). После инкубации эритроциты интактных и алколизированных крыс приобретали иммуностимулирующие свойства. Наиболее выраженными они были после обработки 0,2 мг препарата.

Изучено влияние стромы эритроцитов включившей менадион (СЭВМ) интактных крыс, на развитие иммунного ответа индуцированного ЭБ у здоровых и алкоголизированных крыс. СЭВМ вводили внутрибрюшинно 5-кратно с интервалом 24 ч по 108 клеток на 1 кг массы тела интактным и алкоголизированным крысам. Одновременно с первой инъекцией СЭВМ животных иммунизировали ЭБ. Контролем служили животные, получавшие инъекции стромы эритроцитов, не содержащей менадион.

СЭВМ стимулировал развитие иммунного ответа на ЭБ у интактных крыс. Наиболее эффективной была строма с включенными в нее менадионом при содержании его в инкубационной среде в дозе 0,2 мг. Строма эритроцитов, полученная при содержании менадиона 0,2 мг, нормализовала развитие иммунного ответа у алкоголизированных крыс, а строма, в которую менадион включался при содержании его в среде в дозе 0,1 мг или 0,5 мг, усиливала, но не нормализовала этот процесс у алкоголизированных животных.

Изучено влияние СЭВМ и менадиона, адсорбированного на эритроцитах (МАЭ), на выделение цитокинов клетками селезенки крыс. Оказалось, что МАЭ индуцирует выделение иммуностимулирующего фактора прилипающими к стеклу клетками селезенки, а СЭВМ активирует выделение иммуностимулирующего фактора прилипающими и неприлипающими клетками. Супернатант прилипающих спленоцитов нормализует или снижает величины показателей ПОЛ и антиоксидантного статуса алкоголизированных животных. Иммунологически активный супернатант неприлипающих клеток не оказывал влияния на определявшиеся показатели антиоксидантного статуса.

Стабильность восстановленной стромы эритроцитов, вероятно, можно повысить путем обработки ее эссенциале. Полиненасыщенные фосфолипиды этого препарата, включаясь в билипидный слой стромы, по-видимому, будут служить дополнительным фактором сшивки и вызывать изменения композиции эпитопов поверхностного слоя мембраны. Последнее может быть причиной повышения активности взаимодействия стромы с макрофагальными и лимфоидными клетками, приводящего к выделению иммунорегуляторных цитокинов. Принимая во внимание эти исходные положения, была предпринята попытка получения соиммобилизированных с помощью стромы эритроцитов менадиона и полиненасыщенных фосфолипидов эссенциале. С этой целью получали СЭВМ и инкубировали его с эссенциале (108 частиц восстановленной стромы + 1мл эссенциале, инкубация 2 ч при 37єС). После инкубации строму 2 раза отмывали холодным изотоническим раствором NaCl. Полученный препарат вводили по принятой схеме интактным и алкоголизированным крысам, иммунизированным ЭБ. Установлено, что менадион и эссенциале, соиммобилизованные с помощью стромы эритроцитов (МЭССЭ), стимулировали развитие иммунного ответа на ЭБ в большей степени, чем СЭВМ (табл. 8).

Таблица 8 Иммуномодулирующая активность МАЭ, СЭВМ и МЭССЭ.

Условия опыта	АОК, интактных животных, 103/орган	АОК, алкоголизированных крыс, 103/орган
1. Контроль (без введения иммобилизированных препаратов)	24,7±2,8	8,6±0,9
2. Введение МАЭ	56,4±6,9*1	17,8±16,2*1
3. Введение СЭВМ	84,0±9,6*1,2	20,6±2,1*1
4. Введение ЭОЭ	79,8±8,7*1,2	18,5±1,9*1
5. Введение МЭССЭ	118,5±12,0*1-4	27,4±3,1*1-4

Примечание: ЭОЭ - эритроциты, обработанные эссенциале.

Существенной характеристикой эффективности иммуномодулирующего действия различных средств является продолжительность вызываемого ими эффекта. Установлено, что МЭССЭ вызывал более длительный иммуностимулирующий эффект, чем СЭВМ, а действие МАЭ оказалось двухфазным. Эффект стимуляции сохранялся в течение 24 ч после заключительной инъекции МАЭ, 72 ч после СЭВМ и 120 ч после введения МЭССЭ. Иммунизация через 72 ч после введения МАЭ индуцировала развитие иммунного ответа, выраженность которого была меньше, чем у контрольных животных. Спустя 120 ч, реактивность животных не отличалась от контроля.

Изучение влияния СЭВМ и МЭССЭ на иммунологическую реактивность алкоголизированных животных, показало, что обе иммобилизованные формы усиливают развитие иммунного ответа на ЭБ, причем эффект усиления при инъекциях алкоголизированным крысам МЭССЭ был выражен сильнее, чем при введении СЭВМ.

Результаты проведенных экспериментов показывают, что МЭССЭ являются более эффективным, чем СЭВМ, иммуномодулятором как в норме, так и при длительном введении этанола.