Молекулярно-биологические маркеры в диагностике, патогенезе и прогнозе заболеваний щитовидной железы
Оценка цитокинов, молекул межклеточной адгезии у больных с аутоиммунными, доброкачественными и злокачественными заболеваниями щитовидной железы. Анализ пролиферативной активности у больных с основными формами ненаследственных раков щитовидной железы.
| Рубрика | Медицина |
| Вид | автореферат |
| Язык | русский |
| Дата добавления | 29.12.2017 |
| Размер файла | 362,5 K |
Отправить свою хорошую работу в базу знаний просто. Используйте форму, расположенную ниже
Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.
Размещено на http://www.allbest.ru
Размещено на http://www.allbest.ru
Введение
Актуальность проблемы.
Несмотря на относительно скромное место (1-3%) в структуре злокачественных опухолей, проблема рака щитовидной железы (РЩЖ) в последние десятилетия серьезно волнует ученых и врачей из различных областей медицины [Валдина Е.А., 2005; Дедов И.И. и др., 2000; Знаменский А.А. и др., 2006]. Это во многом связано с крайне быстрым ростом заболевания среди лиц молодого и среднего возраста [Жуков С.А. и др., 2003; Davies L., Welch H., 2006]. По данным большинства исследователей, рост заболеваемости наблюдается в индустриально развитых странах и связан в первую очередь с увеличением радиационного воздействия [Берштейн Л.М., 2007; Валдина Е.А., 2001; Дедов И.И. и др., 2000; Williams D., 1996]. Сравнительно небольшие размеры органа и пошаговая прогрессия от гиперплазии до опухолевого узла, дифференциации и развития анапластической карциномы делает изучение опухолевого канцерогенеза и оценки иммунопатогенеза в этом достаточно обособленном органе удобным и оптимальным [Rzeszutko M. et al., 2007].
Основную надзорную функцию за опухолевой прогрессией несет в организме иммунная система, крайне важной задачей которой является сохранение неизменным антигенного гомеостаза жидкостей и тканей организма [Грачева Л.А., 1996; Скуинь Л.М., Кашкин К.П., 2001; Mazzoccoli G. et al., 2003]. Имеющиеся данные о патогенезе противоопухолевого иммунитета малочисленны и подчас противоречивы [Кадагидзе З.Г. и др., 2000; Телетаева Г.М., 2007]. В защите от опухолевых клеток главным образом участвуют клеточные факторы иммунитета (естественные киллерные клетки, натуральные киллерные Т-клетки (ТNK), цитотоксические Т-лимфоциты, макрофаги и моноциты, эозинофилы), оказывающие презентирующее, цитостатическое и цитолитическое действие [Князькин И.В., Цыган В.Н., 2007; Скуинь Л.М., Кашкин К.П., 2001]. Роль и функциональные особенности поведения этих иммунокомпетентных клеток при опухолях и аутоиммунных заболеваниях щитовидной железы (АИЗЩЖ) изучены крайне мало, а сведения о патогенетических механизмах взаимодействия между собой очень противоречивы [Mardente S. еt al., 2005; Zeppa P. et al., 2009]. Регуляция в организме характера и напряженности антигенспецифических иммунных реакций осуществляется при непосредственном участии цитокинов, с использованием механизмов ауто- и паракрийной регуляции [Кашкин К.П., 1998; Фрейдлин И.С., 2001]. Наряду с регуляцией иммунного ответа цитокины участвуют не только как позитивные регуляторы клеточной пролиферации, они также могут контролировать аномальный клеточный рост, индуцируя дифференцировку и подавляя процессы опухолевой трансформации клеток [Антонов В.Г., Козлов В.К., 2004; Кашкин К.П., 1998; Mitsiades N. et al., 2001, 2003]. Поэтому исследование динамики цитокинов представляется достаточно актуальной задачей.
Известно, что инвазия и злокачественный рост опухоли обусловлены не только высоким уровнем пролиферации клеток, но и недостаточной активностью апоптоза или сочетанием этих двух факторов [Антонов В.Г., Козлов В.К., 2004; Кушлинский Н.Е. и др., 2002]. Это является следствием нарушения экспрессии в клетках одного или нескольких нормальных генов пролиферации и дифференцировки, так называемых протоонкогенов [Кашкин К.П., 2006; Пальцев М.А., 2004; Цыган В.Н., 2004]. Наиболее известные из них - это ген, запускающий апоптотическую гибель генетически измененных клеток на определенной фазе клеточного цикла, - ген р53, и семейство генов, блокирующих активность апоптоза, - онкогены семейства bcl-2 - bcl-2, Bax, Bag 3, bcl-xl, Вad и др. [Дедов И.И., 2000; Князькин И.В., Цыган В.Н., 2007; Копнин Б.К., 2003; Chiappetta G. et al., 2007]. Мутации в гене р53 и его регуляторах являются достаточно широко распространенными и встречаются у онкологических больных с опухолями щитовидной железы в 3-67% случаев [Белохвостов А.С., 2003; Марченко И.А., 2009; Трошина Е.А., 1996]. Недостаточно исследованы мутации этого гена у больных со злокачественными, доброкачественными и аутоиммунными заболеваниями щитовидной железы. Неясна степень распространения этих мутаций в пораженных патологическим процессом тканях щитовидной железы и неизменной ткани в других долях железы [Марченко И.А., 2009]. Исследования взаимоотношений между различными параметрами апоптоза и пролиферации в щитовидной железе малочисленны и подчас носят неопределенный характер [Лукьянова Н.Ю. и др., 2000; Марченко И.А., 2009; Орлинская Н.Ю., 2009; Соколова О.В., 2009]. Оценка апоптотического индекса, различных параметров апоптоза и их взаимоотношений между собой (белка р53 и его мутаций, bcl-2, FAS-системы) и с показателями пролиферации (Кi-67) при переходе от доброкачественного процесса к злокачественному и роль в этом процессе аутоиммунных заболеваний (расстройств) являются важной проблемой, требующей своего решения [Зугаирова О.Н., 2010; Кушлинский Н.Е., Трапезников Н.Н., 2000; Соколова О.В., 2009; Bossowski A. et al., 2006, 2007; Rzeszutko M., 2007].
Большое значение имеет степень васкуляризации опухолей и кровоснабжения при онкологических процессах. Одним из основных механизмов инвазии злокачественных опухолей является нарушение окружающей базальной мембраны и внеклеточного матрикса ассоциированными с опухолями протеазами [Трапезникова М.Ф. и др., 2002; Lan L. et al., 2009]. Решающую роль в процессе инвазии и метастазирования среди четырех основных классов протеаз играют сериновые протеазы. Их роль в регуляции межклеточного протеолиза в различных физиологических и патологических процессах: деструкции ткани и миграции клеток, воспалительные реакции, инвазивный рост трофобласта и опухолевых клеток - изучена недостаточно. Большую роль в этом процессе отводят активаторам и ингибиторам плазминогена урокиназного и тканевого типа [Кушлинский Н.Е., Трапезников Н.Н., 2000; Dass K. et al., 2008]. Их связь между собой может оказаться полезной для понимания процессов повышенной реваскуляризации при онкологических и неонкологических процессах в тканях щитовидной железы.
Несмотря на однозначный характер зависимостей апоптоза и пролиферации, необходимо выяснение взаимосвязи между ними для поиска дополнительных диагностических и прогностических критериев, обсуждения вопросов эффективности проводимой терапии. В целом, мутации в генах, в частности в гене р53, которые прямо или косвенно приводят к снижению апоптоза, в основном связаны с плохим прогнозом в отношении целого спектра опухолей [Дедов И.И. и др., 2000].
Таким образом, исследование механизмов функционирования иммунной системы, роли факторов апоптоза и пролиферации, онкогенов и антионкогенов их мутации, а также оценка роли сериновых протеаз в васкуляризации новообразований при опухолевых и аутоиммунных процессах в щитовидной железе являются крайне актуальными проблемами.
Цель работы: комплексное изучение основных иммунологических показателей, цитокинов и молекул межклеточной адгезии, молекулярно-биологических и генетических маркеров, регулирующих апоптоз и пролиферацию, а также некоторых компонентов системы фибринолиза в диагностике, патогенезе и прогнозе заболеваний щитовидной железы.
Задачи исследования:
1. Провести комплексную оценку состояния некоторых параметров иммунной системы у больных со злокачественными, доброкачественными и аутоиммунными заболеваниями щитовидной железы и исследовать характерные особенности вариантов иммунных нарушений, встречающихся в каждой патологии.
2. Провести исследование цитокинов, хемокина, молекул межклеточной адгезии у больных с аутоиммунными, доброкачественными и злокачественными заболеваниями щитовидной железы.
3. Изучить экспрессию FAS-L на хелперных и эффекторных иммунокомпетентных клетках крови у больных со злокачественными новообразованиями щитовидной железы.
4. Оценить молекулярно-биологические (основные, сочетанные) маркеры, регулирующие апоптоз и пролиферацию, в тканях щитовидной железы при аутоиммунных, доброкачественных и злокачественных заболеваниях щитовидной железы.
5. Исследовать возможные механизмы повреждений процессов апоптоза и пролиферативную активность у больных с основными формами ненаследственных (папиллярных и фолликулярных) раков щитовидной железы.
6. Определить фенотипические особенности доброкачественных новообразований щитовидной железы и охарактеризовать возможный прогноз развития аденом по данным маркеров апоптоза и пролиферации.
7. Оценить развитие процесса опухолевой трансформации, используя основные и сочетанные показатели клеток с белками, регулирующими апоптоз и пролиферацию, в морфологически не измененных тканях при раках и аденомах щитовидной железы.
8. Количественно определить, сопоставить и оценить взаимосвязь основных компонентов активаторов плазминогена урокиназного (uPA) и тканевого (tPA) типа, а также их ингибитора (PAI-1) в цитозолях тканей злокачественных и доброкачественных опухолей щитовидной железы с учетом основных клинических и морфологических характеристик заболевания.
9. Оценить значение и рассчитать частоту встречаемости мутаций гена р53 при доброкачественных и злокачественных новообразованиях и аутоиммунных заболеваниях щитовидной железы, проанализировать частоту мутаций в тканях щитовидной железы, не пораженных опухолевым процессом.
Научная новизна.
Полученные комплексные данные об иммунной системе организма у больных с аутоиммунными, доброкачественными и злокачественными заболеваниями щитовидной железы позволили раскрыть основные патогенетические механизмы и особенности иммунного ответа, сопровождающие изучаемые патологические процессы.
В работе представлены сравнительные данные одновременного исследования цитокинов, хемокина и молекул межклеточной адгезии, разработаны наиболее оптимальные соотношения (индексы) цитокинов.
Установлено, что в патогенезе заболеваний щитовидной железы некоторые цитокины играли ключевую роль и не могли быть использованы для
диагностики в других исследуемых группах. Так, при раке щитовидной железы определяющее значение играла растворимая форма молекулы адгезии sE-seleсtin, в патогенезе аденомы щитовидной железы - растворимая форма молекул межклеточной адгезии 1-го типа sICAM-1, а в патогенезе аутоиммунных заболеваний - ИЛ-4.
Получены новые данные о количественном содержании на мембранах иммунокомпетентных клеток рецепторов инициации апоптоза TNF-семейства (FAS-L) в хелперных и эффекторных субпопуляциях лимфоцитов периферической крови у практически здоровых пациентов и больных папиллярным раком щитовидной железы.
В работе комплексно определена взаимосвязь между основными маркерами апоптоза и пролиферации в патологически измененных тканях щитовидной железы у больных с аутоиммунными заболеваниями, доброкачественными и злокачественными новообразованиями.
Описаны и использованы в дифференциальной диагностике и патогенезе новые сочетанные (комбинированные) фенотипы клеток с маркерами апоптоза и пролиферации, исследованы плотности экспрессии рецепторов/белков на поверхности и внутри изучаемых групп клеток.
Представлены новые данные по фенотипическим особенностям основных и сочетанных параметров клеток с использованием маркеров пролиферации и апоптоза у больных с разными вариантами (папиллярный и фолликулярный) рака щитовидной железы.
Впервые описаны разные варианты аденом щитовидной железы, отличающиеся по фенотипическим характеристикам основных и сочетанных параметров клеток с маркерами, участвующими в процессах апоптоза и пролиферации.
Представлены данные о сравнительной характеристике «нормальной», морфологически не измененной и патологической ткани щитовидной железы, подверженной доброкачественному и злокачественному опухолевому процессу, у больных с аденомами и раками в этом органе.
Получены новые патогенетические данные по сравнительному исследованию маркеров реваскуляризации при доброкачественном и злокачественном процессе на основе анализа активаторов тканевого и урокиназного типа и его ингибитора у больных с аденомами и раками щитовидной железы.
Практическая значимость.
Комплексный подход к оценке состояния некоторых компонентов иммунной системы у больных с аутоиммунными, доброкачественными и злокачественными новообразованиями позволил составить целостное представление о механизмах нарушения в иммунной системе и способствовал разработке оптимальных диагностических критериев у данных групп пациентов.
Разработаны наиболее оптимальные соотношения (индексы) цитокинов, которые можно использовать для дифференциальной диагностики аутоиммунных, доброкачественных и злокачественных заболеваний щитовидной железы.
Осуществлен расчет пороговых значений и диагностических показателей чувствительности, специфичности и точности методов диагностики с использованием цитокинов, хемокина и молекул межклеточной адгезии для улучшения дифференциальной диагностики практически здоровых пациентов, больных с аутоиммунными заболеваниями, аденомами и раками щитовидной железы. Установлено, что в дифференциальной диагностике целесообразнее использовать следующие показатели: между злокачественными и аутоиммунными заболеваниями - sE-seleсtin, между доброкачественными и аутоиммунными заболеваниями - ИЛ-6 и sICAM-1, между раком и аденомой щитовидной железы - индекс ИЛ-6/г-ИНФ. Разработана логистическая регрессивная модель дифференциальной диагностики рака щитовидной железы у больных с новообразованиями щитовидной железы на основе оценки показателей ИЛ-6, sE-seleсtin и индекса ИЛ-6/г-ИНФ. Полученные данные рекомендуются к использованию в дополнительном исследовании для выявления рака щитовидной железы на этапе обследования больного.
В работе доказано, что определение показателей (количество клеток, плотность экспрессии рецепторов/белков) основных и сочетанных маркеров апоптоза и пролиферативной способности тиреоцитов может служить дополнительным диагностическим и прогностическим тестом к другим основным инструментальным, лабораторным и морфологическим методам исследования для улучшения диагностики исследуемых заболеваний щитовидной железы. Для дифференциальной диагностики аутоиммунных, доброкачественных, злокачественных заболеваний щитовидной железы; папиллярного и фолликулярного рака щитовидной железы; аденом разных типов рекомендованы к использованию общие и сочетанные показатели маркеров апоптоза и пролиферации с расчетом пороговых значений величин и показателей диагностической эффективности.
Отсутствие значимых различий в молекулярно-биологических показателях «нормальных», морфологически не измененных тканей щитовидной железы у больных раком позволяет рекомендовать врачам-хирургам (онкологам) ставить вопрос о целесообразности полного удаления железы и отказываться от таких органосохраняющих хирургических методов лечения, как секторальные резекции, гемиэктомии. Использование общих и сочетанных показателей апоптоза и пролиферации помогает на основании фенотипических особенностей разных вариантов рака щитовидной железы провести дополнительную диагностику и, возможно, в будущем использовать эти данные для мониторирования динамики воздействия новых лекарственных средств и таргетной медикаментозной терапии, в механизмах которых лежит инициализация апоптоза в опухолевых клетках. Установлено, что применение общих и сочетанных параметров апоптоза и пролиферации в диагностике аденом щитовидной железы позволяет выявить тип аденом, который фенотипически отличается от основного типа доброкачественных новообразований, а также, возможно, имеет более неблагоприятный прогноз.
Получены новые данные о том, что в дополнительной дифференциальной диагностике злокачественных и доброкачественных новообразований щитовидной железы могут быть рекомендованы к использованию значения показателей активаторов урокиназного и тканевого типа и их ингибитора.
Своевременное выявление молекулярно-генетических дефектов - мутаций гена р53 у больных с ненаследственными формами злокачественных и доброкачественных новообразований - позволяет на доклинической стадии диагностировать развитие новообразования, своевременно начать терапию и тем самым улучшить прогноз развития заболевания.
Основные положения диссертации, выносимые на защиту.
В практике работы онкологов при дифференциальной диагностике наиболее часто приходится отличать злокачественные новообразования от доброкачественных и аутоиммунных заболеваний щитовидной железы. С помощью клинико-инструментальных методов исследований не всегда можно получить исчерпывающие данные для дифференциальной диагностики, тогда как использование для целей диагностики ключевых параметров иммунной системы помогает получить дополнительную информацию о патологическом процессе.
В дифференциальной диагностике между практически здоровыми пациентами и пациентами с аутоиммунными, доброкачественными и злокачественными заболеваниями в качестве дополнительных критериев диагностики должны использоваться современные методы диагностики цитокинов, а также разработанные индексы (соотношения) цитокинов.
Использование логистической регрессивной модели, основанной на совместном расчете показателей ИЛ-6, sE-seleсtin в плазме крови и индекса
ИЛ-6/г-ИНФ, позволяет с наиболее высокой эффективностью диагностировать рак у больных с новообразованиями щитовидной железы.
У изучаемых нами патологий отмечаются характерные фенотипические изменения в общих и сочетанных (комбинированных) показателях количества клеток и экспрессии на/в них молекулярно-биологических маркеров, участвующих в регуляции апоптоза и пролиферации, которые могут использоваться в дополнительной диагностике этих нозологий.
Исследования фенотипа клеток, основанного на мембранных рецепторах и внутриклеточных белках, участвующих в регуляции апоптоза и пролиферации, у больных папиллярным и фолликулярным РЩЖ позволили выявить особенности течения патологического процесса при бласт-трансформации в зависимости от варианта.
Наличие большого количества клеток с маркерами CD95L у больных с аденомами щитовидной железы позволяет выделить тип аденом, который отличается более напряженными изменениями в показателях количества клеток, содержащих рецепторы и белки, регулирующие апоптоз и пролиферацию, их экспрессии, и соответственно более худшим прогнозом в развитии и озлокачествлении.
Сравнительная характеристика морфологически не измененных тканей и тканей с опухолевым процессом у больных с аденомами и раками щитовидной железы выявила незначительные различия по основным и сочетанным показателям апоптоза и пролиферации, наиболее фенотипически схожие данные были получены в тканях больных раком щитовидной железы.
Личный вклад автора.
Автором проведены все исследования по иммунофенотипированию крови и тканей, исследованию цитокинов, основные этапы по молекулярно-биологическим исследованиям мутаций гена р53. Автор самостоятельно осуществил всю необходимую статистическую обработку полученных данных, интерпретировал полученные результаты.
Реализация результатов исследования.
Результаты исследования внедрены в лечебную практику и используются в эндокринологических, хирургических, радиохирургическом, лабораторных отделениях Главного военного клинического госпиталя им. Н.Н. Бурденко МО РФ, 2 Центрального военного клинического госпиталя им. П.А. Мандрыка МО РФ, 3 Центрального военного клинического госпиталя им. А.А. Вишневского МО РФ, 5 Центрального военного клинического госпиталя ВВС МО РФ, 32 Центрального военно-морского клинического госпиталя МО РФ, 12 Лечебно-диагностического центра МО РФ. Материалы работы используются в лекциях и практических занятиях на кафедре хирургии Государственного института усовершенствования врачей МО РФ. Изданы методические рекомендации для медицинских учреждений Министерства обороны Российской Федерации «Полимеразная цепная реакция в клинико-диагностической практике многопрофильных лечебных учреждений» (2000).
По результатам научно-практической деятельности оформлено 8 рационализаторских предложений, которые внедрены в практику лечебно-диагностической деятельности Главного военного клинического госпиталя им. Н.Н. Бурденко и других военно-медицинских учреждений Министерства обороны Российской Федерации.
Апробация диссертации.
Диссертация выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских программ Главного военно-медицинского управления МО РФ. Апробация работы проведена на совместной научной конференции кафедры клинической биохимии и лабораторной диагностики ФПДО МГМСУ и лаборатории клинической биохимии НИИ клинической онкологии ГУ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН 18 мая 2010 г. (протокол №7).
Основные положения работы доложены на итоговой научно-практической конференции ГВКГ им. Н.Н. Бурденко «Современные подходы к диагностике и лечению злокачественных новообразований» (Москва, 2000); Национальных днях лабораторной медицины России (Москва, 2000); юбилейной научно-практической конференции «Современная специализированная амбулаторно-поликлиническая помощь в Московском регионе» (Москва, 2001); итоговой научно-практической конференции ГВКГ им. Н.Н. Бурденко «Клиническая и экономическая эффективность современных медицинских технологий, методов диагностики и лечения» (Москва, 2001); Всероссийской научной конференции «Биохимия - медицине» (Санкт-Петербург, 2002); юбилейной научно-практической конференции «Актуальные вопросы клинической и военно-морской медицины» (Московская область, г. Железнодорожный, 2003); итоговой научно-практической конференции ГВКГ им. Н.Н. Бурденко «Комбинированная и сочетанная патология: проблемы диагностики и лечения» (Москва, 2003); Третьем съезде онкологов Содружества независимых государств (Минск, 2004); Восьмом Всероссийском научном форуме с международным участием им. академика В.И. Иоффе «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» (Санкт-Петербург, 2004); Национальных днях лабораторной медицины России (Москва, 2004); The Tenth Joint Meeting of the International Cytokine Society (ICS) and the International Society for Interferon and Cytokine Research (ISICR) (Puerto Rico, San Juan, 2004); Третьем Всероссийском тиреоидологическом конгрессе «Диагностика и лечение узлового зоба» (Москва, 2004); XII Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2005); итоговой научно-практической конференции ГВКГ им. Н.Н. Бурденко «Актуальные проблемы клинической онкологии» (Москва, 2005); VI Всероссийском съезде онкологов «Современные технологии в онкологии» (Ростов-на-Дону, 2005); 1-st Joint Meeting of European National Societies of Immunology Under the auspices of EFIS and 16-th European Congress of Immunology (France, Paris, 2006); 17th IFCC - FESCC European Congress of Clinical Chemistry and Laboratory Medicine; 60th National Congress of the Netherlands Society for Clinical Chemistry and Laboratory Medicine (NVKC) (Netherland, Amsterdam, 2007); International Federation of Clinical Chemistry - WorldLab - Clinical Chemistry and Laboratory Medicine (Brasil, Fortaleza, 2008); Тринадцатом Всероссийском научном форуме с международным участием им. академика В.И. Иоффе «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» (Санкт-Петербург, 2009).
1. Материал и методы исследования
Клинический раздел работы включает анализ 178 больных с аутоиммунными, доброкачественными и злокачественными заболеваниями ЩЖ, средний возраст больных составил 49,4±13 (от 19 до 75) лет. Среди пациентов было 138 (77,53%) женщин и 40 (22,47%) мужчин. Все больные по характеру патологии были разделены на три основные группы: больные с аутоиммунными заболеваниями ЩЖ, больные с доброкачественными заболеваниями ЩЖ, больные со злокачественными заболеваниями ЩЖ (табл. 1).
В группе больных аутоиммунными заболеваниями ЩЖ находились пациенты с аутоиммунным тиреоидитом Хашимото, болезнью Грейвса (16 больных); в группе с доброкачественными заболеваниями ЩЖ - пациенты с аденомами щитовидной железы (61 больной); в группе со злокачественными заболеваниями ЩЖ - пациенты с преимущественно РЩЖ (101 больной).
Таблица 1. Распределение больных по нозологическим группам
|
Группа |
Клинико-патоморфологический диагноз |
Количество больных |
||
|
абс. |
% |
|||
|
I |
Аутоиммунные заболевания ЩЖ: - Хашимото - Грейвса |
16 15 1 |
100 93,75 6,25 |
|
|
II |
Доброкачественные заболевания ЩЖ: - аденома - цистаденома |
61 60 1 |
100 98,36 1,64 |
|
|
III |
Злокачественные заболевания ЩЖ: - папиллярный рак - фолликулярный рак |
101 92 9 |
100 91,09 8,91 |
|
|
В с е г о … |
178 |
100 |
Все больные перенесли оперативные вмешательства - тиреоидэктомия, субтотальная резекция, гемитиреоидэктоимия.
Группу больных с доброкачественными заболеваниями ЩЖ составили пациенты (61 больной), которым по клиническим и функциональным свойствам была показана частичная или полная тиреоидэктомия или тиреоидэктомия по поводу АЩЖ.
В группу больных с аутоиммунными поражениями ЩЖ входили больные с заболеваниями Хашимото (15 больных) и болезнью Грейвса (1 больной), которым в связи с выраженным объемом проводили оперативное удаление части ЩЖ с одновременным гистологическим подтверждением диагноза.
Наиболее значимую группу больных занимали пациенты со злокачественными новообразованиями (101 больной) в одной или нескольких долях ЩЖ. При этом по данным гистологических исследований злокачественные новообразования выявлялись в одной доле, а в другой доле, как правило, отмечались аутоиммунные расстройства, доброкачественные изменения (микро и макрофолликулярная аденома) или неизмененные гистологические здоровые ткани.
После операции проводился гистологический анализ удаленного препарата в соответствии с Гистологической классификацией опухолей щитовидной железы ВОЗ (1989) (табл. 2).
Таблица 2. Распределение больных раком щитовидной железы по стадиям заболевания
|
Стадии FIGO |
TNM (международная классификация) |
Количество больных |
||
|
абс. |
% |
|||
|
I |
T1N0M0,T2N0M0 до 41 года |
1 |
1,01 |
|
|
II |
T2N0M0; T3N0M0 |
51 |
50,5 |
|
|
III |
T4N0M0; Т любое N1M0 |
42 |
41,56 |
|
|
IV |
T любое, N любое, M1, низкодифференцированный рак |
7 |
6,93 |
|
|
Всего … |
101 |
100 |
Всем больным на этапе обследования проводилось иммунофенотипирование крови методом проточной цитометрии на аппарате COULTER EPICS XL-MCL фирмы «Beckman Coulter» (США) с рабочей станцией COULTER FLOW CENTRE в двух- и (или) трехцветных протоколах для определения основных субпопуляционных характеристик лимфоцитов, характеризующих клеточное звено специфического иммунитета с определением относительного и абсолютного количества основных иммунокомпетентных групп хелперных и эффекторных клеток:
СD3+ - зрелые Т-клетки, CD3+/4+, СD3+/8+ - субпопуляции Т-клеток, СD19+ - В-лимфоциты, СD16+56+ - NK-клетки, CD3+/16+56+ - TNK-клетки, CD3-/16+56+ - NK истинные.
Подсчитывалось общее число поверхностных маркеров в условных единицах по средней интенсивности свечения флуоресценции (MFI), пропорциональной номеру канала, измеренного в логарифмическом режиме (средняя плотность экспрессии рецепторов в исследуемой группе клеток).
Для оценки состояния иммунитета рассчитывали также иммунорегуляторный индекс CD4/CD8.
Для оценки FAS-L на лимфоцитах использовали одинарные моноклональные антитела (МКА) - СD3-FITC, СD19-FITC, CD4-FITC, CD8-FITC, CD16-FITC - в комбинации с МКА CD95L-PE.
Оценку параметров клеточного звена иммунитета, FAS-L на основных субпопуляциях лимфоцитов проводили методом проточной цитометрии с подсчетом 3000 событий в лимфоцитарном гейте с определением относительного и абсолютного количества и плотности экспрессии рецепторов на клетке.
В основных исследуемых группах больных и в контрольной группе проводили определение цитокинов, хемокина и некоторых молекул межклеточной адгезии: INF-г, IL-4, IL-6, IL-10, TNF-в, MCP-1, sICAM-1 и sE-selectin. Для определения цитокинов использовали метод проточной цитометрии и симплексные наборы фирмы «Bender Medsystems Gmbh» (Австрия) с использованием технологии Multiplex. В работе с использованием логического метода сравнения изучены и используются для дополнительной дифференциальной диагностики обследуемых патологий следующие соотношения (индексы) цитокинов: г-INF/IL-4, г-INF/IL-10, г-INF/TNF-в, IL-6/г-INF, г-INF/MCP-1, г-INF/sICAM-1, г-INF/sE-seleсtin. Расчеты соотношений (индексов) определяли по формуле:
Индекс = (Цитокин1/Цитокин2)Ч100.
Также исследовали другие показатели, характеризующие гуморальное звено специфического и неспецифического иммунитета, - иммуноглобулины классов А, М, G, Е, компоненты комплемента С3, С4, ЦИК, некоторые показатели аутоиммунитета - антитела к тиреоглобулину, тиреопероксидазе и микросомальной фракции, показатели, отражающие функциональное состояние ЩЖ - ТТГ, Т3, Т4, Т3С, Т4С, паратгормона, показатель активации системы иммунитета - неоптерин.
У всех больных из операционного материала (тканей) готовили суспензию клеток, окрашивая тиреоциты моноклональными антителами к мембранным рецепторам и внутриклеточным белкам. В работе использовались МКА для оценки параметров апоптоза и пролиферации фирмы «CALTAG» (Австрия) - Bcl-2-Fits, CD95-PE-Cy5, CD95L-PE-Cy5 и фирм «DAKO» и «BD» - p53-Fits, Ki-67-РЕ.
При подсчете клеток оценивали показатели в локальной области, используя гейтирование (рис. 1), при котором определялось окно, куда попадали клетки размером до 25 мкн.
Определяли количество клеток и их плотность с маркерами, распределенными на поверхности клеток, CD95, CD95L и внутриклеточных маркеров пролиферации Кi-67 и апоптоза bcl-2, p53, в которых выделяли группы общих p53-клеток, клеток р53dim, р53bright, общих bcl-2-клеток, клеток bcl-2dim, bcl-2bright.
Фенотипирование проводили на проточном цитофлуориметре с подсчетом 100 000 событий в образце и расчетом относительного количества клеток, а также показателем плотности экспрессии рецепторов (белков) на клетках или группе клеток.
Рис. 1. Гистограммы распределения суспензии клеток по размеру и структуре с ограниченной зоной гейтирования (А)
Цифровые данные (гистограммы) в виде файлов (.LMD) анализировались в специальной аналитической программе CXP ver.2.2 с получением результатов проведенных исследований.
Также исследовали малочисленные группы клеток, образованные возможными комбинациями: р53/Ki-67, p53/CD95, bcl-2/Ki-67, bcl-2/CD95, CD95/Ki-67, p53/CD95L, CD95/CD95L, bcl-2/CD95L.
Показатели активаторов плазминогена урокиназного и тканевого типа и их ингибитора исследовали в цитозолях, приготовленных из тканей ЩЖ у больных с новообразованиями, иммунохимическим методом с использованием неконкурентного непрямого твердофазного гетерогенного иммуноферментного анализа (ELISE) в модификации двойного сендвич-метода и с применением наборов реактивов, разработанных в лаборатории профессора Т. Benraad'a (Ниймеген, Нидерланды) [Grebenschikov et al., 1997].
В материале, взятом из парафиновых блоков, у больных с аутоиммунными заболеваниями, доброкачественными и злокачественными новообразованиями проводили исследование мутаций гена р53 в 273 кодоне 6-го экзона методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) по методике М. Zou и соавт. (1993).
Статистическая обработка результатов выполнялась на персональном компьютере с помощью статистического пакета SPSS 13,0 и MS Office Excel XP с расчетом средних арифметических значений. Для оценки значимости различий между группами использовали непараметрический критерий Манна-Уитни. Корреляционный анализ проводили по методу Спирмена. Различия и рассчитанные коэффициенты корреляции (r) считались достоверными при уровне значимости p<0,05. Для расчета логистической регрессивной модели использовали регрессионный анализ [Реброва О.Ю., 2003]. Для оценки информативности диагностического теста использовали ROC-анализ.
2. Результаты исследования и их обсуждение
Для комплексного исследования механизмов нарушения иммунной системы у больных с аутоиммунными, доброкачественными и злокачественными заболеваниями щитовидной железы нами было изучено клеточное и гуморальное звено специфического и неспецифического иммунитета. Результаты исследования показывают, что у больных с АИЗЩЖ отмечаются выраженные изменения в клеточном звене специфического иммунитета, характеризующиеся наличием повышенного относительного и абсолютного количества Т-лимфоцитов (CD3+), Т-хелперов (СD3+CD4+), TNK-лимфоцитов (СD3+CD16+56+), относительного снижения Т-цитотоксических лимфоцитов (СD3+CD8+). Аутоиммунные заболевания ЩЖ характеризовались также развитием и функционированием аутоаллергического состояния в иммунной системе, которое характерно для всех аутоиммунных и аллергических заболеваний, проявившихся в повышении индекса иммунорегуляции.
Показатели клеточного звена иммунной системы больных со злокачественными и доброкачественными новообразованиями ЩЖ имели сходные нарушения, проявляющиеся в относительном снижении процентного и абсолютного количества общих лимфоцитов, Т-лимфоцитов (CD3+), Т-хелперов (СD3+CD4+), Т-цитотоксических лимфоцитов (СD3+CD8+). Схожесть процессов онкогенеза у больных со злокачественными и доброкачественными новообразованиями ЩЖ характеризовалась и сходными нарушениями в иммунной системе. У больных с новообразованиями ЩЖ выявлено развитие иммунодефицитного состояния иммунной системы с характерным снижением иммунорегуляторного индекса. Больные со злокачественными новообразованиями имели более выраженные изменения в показателях основных субпопуляций лимфоцитов, характеризующих клеточное звено специфического иммунитета.
Сравнительная характеристика доброкачественных и злокачественных новообразований ЩЖ показала наличие у больных с аденомами повышенного относительного и абсолютного количества общих NK-клеток (CD16+56+), а также их субпопуляций - ТNK- клеток (СD3+/CD16+56+) и натуральных киллерных клеток (СD3-/CD16+56+), что является патогномоничным признаком для пациентов с АЩЖ, в отличие от больных РЩЖ.
Анализ показателей гуморального звена неспецифического иммунитета показал, что потребление С3-компонента комплемента было наиболее выражено у больных с доброкачественными и злокачественными новообразованиями ЩЖ, менее - у больных с АИЗЩЖ. С4-компонент комплемента, по нашим данным, не играл значительной роли в патогенезе нарушений иммунной системы.
Исследование гуморального звена специфической иммунной системы у больных с аутоиммунными заболеваниями, доброкачественными и злокачественными новообразованиями ЩЖ показывает повышение количества иммуноглобулина Е в сыворотке всех исследуемых групп больных. Наиболее выраженное повышение отмечалось в крови больных с АИЗЩЖ - 240,92 МЕ/мл. Менее выраженное повышение - 217,16 МЕ/мл - отмечено у больных со злокачественными новообразованиями ЩЖ. Повышенный уровень иммуноглобулина Е был отмечен и в группе больных с АЩЖ - 177,06 МЕ/мл.
Функциональные расстройства ЩЖ были более выражены у больных РЩЖ, чем у больных с доброкачественными новообразованиями. Функциональные расстройства характеризовались нормальной или сниженной до нижних границ концентрацией Т4, превышением концентрации Т3 на 50-100% по сравнению с нормальным уровнем этого гормона.
В патогенезе развития аутоиммунных, доброкачественных и злокачественных заболеваний ЩЖ большое значение придается интерлейкинам, хемокинам, молекулам адгезии и иным цитокинам, которые наряду с регуляцией антигенспецифических иммунных реакций иммунной системы, осуществляемых по механизмам аутокрийной и паракрийной регуляции, способны, невзирая на локальное их действие, оказывать позитивный или негативный ответ на регуляторы клеточной пролиферации, механизмы апоптоза и способствовать клеточному росту, дифференцировке, подавлять аномальный опухолевый рост, играть значительную роль в процессах трансформации иммунокомпетентных клеток и их субпопуляций.
В диагностике исследуемых патологий большую роль могут играть соотношения (индексы) цитокинов, использование которых позволяет получить дополнительные диагностические критерии иной раз с более высокими показателями диагностической эффективности.
Сравнительная характеристика цитокинов у больных с аутоиммунными, доброкачественными и злокачественными заболеваниями ЩЖ представлена в табл. 3, а соотношения (индексы) - в табл. 4.
Представлены данные по пороговым значениям, показателям диагностической эффективности (чувствительность, специфичность, точность, достоверность), которые могут использоваться в дифференциальной диагностике между группами практически здоровых пациентов, больных с аутоиммунными заболеваниями, доброкачественными и злокачественными новообразованиями ЩЖ по показателям цитокинов и их соотношений (индексов).
Таблица 3. Значения цитокинов, молекул межклеточной адгезии и неоптерина в плазме крови у больных с аутоиммунными заболеваниями, доброкачественными и злокачественными опухолями щитовидной железы
|
Исследуемые показатели, пг/мл |
Группы больных и контроля |
||||
|
I (контроль), n=10 |
II (АИЗЩЖ), n=12 |
III (АЩЖ), n=15 |
IV (РЩЖ), n=24 |
||
|
г-ИНФ |
8,47±0,26 |
7,553,01 |
9,554,09 |
6,895,56 |
|
|
ИЛ-4 |
40,6612,73 |
111,7144,29 є |
83,4770,73 |
147,57126,02 |
|
|
ИЛ-6 |
7,610,63 |
34,2814,85 є |
16,537,16 є ~ |
31,317,41 є * |
|
|
ИЛ-10 |
9,990,97 |
11,882,77 |
21,7810,55 є ~ |
24,113,67 |
|
|
ФНО-в |
8,350,57 |
9,821,34 є |
10,251,5 є |
11,747,09 |
|
|
MCP-1 |
109,22±5,62 |
155,7727,2 є |
171,6343,3 є |
202,0859,65 є |
|
|
sE-seleсtin |
39,541,47 |
44,9320,63 |
45,8313,11 |
68,5627,42 є * |
|
|
sICAM-1 |
233,9321,11 |
255,6830,56 |
412,90159,03 є ~ |
296,8676,01 |
|
|
Неоптерин |
2,020,26 |
3,750,29 |
4,51,01 |
5,713,63 |
Примечание. є - статистическая достоверность между группами I и II, III, IV (р<0,05); ~ - статистическая достоверность между группами II и III (р<0,05); * - статистическая достоверность между группами III и IV (р<0,05); - статистическая достоверность между группами II и IV (р<0,05).
Нами изучались данные по дифференциальной диагностике аутоиммунных заболеваний и практически здоровых людей. Для этих целей можно с высокой достоверностью использовать следующие цитокины и их соотношения: ИЛ-4, ИЛ-6, ФНО-в, MCP-1, индексы г-ИНФ/ИЛ-4 и ИЛ-6/г-ИНФ. Наиболее значимыми цитокинами в патогенезе аутоиммунных заболеваний являются ИЛ-6 и MCP-1.
Для дифференциальной диагностики доброкачественных новообразований и практически здоровых пациентов были выявлены такие показатели цитокинов, которые имеют высокую диагностическую эффективность: ИЛ-6, ИЛ-10, ФНО-в, хемокин MCP-1, молекула адгезии sICAM-1 и индекс г-ИНФ/ИЛ-10. Можно с уверенностью отметить, что цитокины, имеющие наиболее достоверные отличия, а также самую высокую диагностическую эффективность, играют значительную роль в патогенезе АЩЖ. Среди изучаемых цитокинов и их соотношений такими данными обладал ИЛ-6.
Таблица 4. Показатели некоторых расчетных индексов цитокинов, хемокина, молекул межклеточной адгезии в плазме крови в контроле, у больных с аутоиммунными заболеваниями, злокачественными и доброкачественными опухолями щитовидной железы
|
Исследуемые показатели |
Группы больных и контроля |
||||
|
I (контроль), n=10 |
II (АИЗЩЖ), n=12 |
III (АЩЖ), n=15 |
IV (РЩЖ), n=24 |
||
|
Индекс г-ИНФ/ИЛ-4 |
22,85±8,5 |
8,36±7,28є |
214,38±172,69~ |
7,72±5,45 |
|
|
Индекс г-ИНФ/ИЛ-10 |
85,35±8,64 |
64,83±27,44 |
43,70±20,62 є ~ |
24,53±16,83 є |
|
|
Индекс г-ИНФ/ФНО-в |
101,74±6,94 |
79,20±34,5 |
100,37±46,13 |
52,54±38,81 |
|
|
Индекс ИЛ-6/г-ИНФ |
90,15±9,95 |
485,9±171,5є |
282,4±169,2~ |
2664,9±1198,5є* |
|
|
Индекс г-ИНФ/MCP-1 |
7,78±0,65 |
5,00±2,35 |
5,42±2,53 |
4,19±3,52є |
|
|
Индекс г-ИНФ/sE-seleсtin |
21,45±1,38 |
18,62±9,97 |
22,17±9,47 |
12,48±9,01є |
|
|
Индекс г-ИНФ/ sICAM-1 |
3,64±0,33 |
2,97±1,11 |
2,78±1,74 |
2,3±1,12 |
Примечание. є - статистическая достоверность между группами I и II, III, IV (р<0,05); ~ - статистическая достоверность между группами II и III (р<0,05); - статистическая достоверность между группами II и IV (р<0,05); * - статистическая достоверность между группами III и IV (р<0,05).
Для дифференциальной диагностики злокачественных новообразований ЩЖ и практически здоровых пациентов были получены пороговые значения для следующих показателей цитокинов: ИЛ-6, ИЛ-10, MCP-1, sE-seleсtin и соотношений - индекс г-ИНФ/ИЛ-4, индекс г-ИНФ/ИЛ-10, индекс г-ИНФ/MCP-1, индекс г-ИНФ/sE-seleсtin и индекс ИЛ-6/г-ИНФ. Среди используемых в диагностике цитокинов важную роль в патогенезе развития РЩЖ имеют интерлейкины ИЛ-6, ИЛ-10 и хемокин MCP-1.
Нами определены и рассчитаны критические значения для показателей цитокинов и их соотношений, которые могли бы использоваться в дифференциальной диагностике злокачественных и аутоиммунных заболеваний ЩЖ. Это такие цитокины, как ИЛ-10, MCP-1, sE-seleсtin и индекс г-ИНФ/ИЛ-10. Эти показатели имели удовлетворительные и хорошие значения диагностической эффективности и поэтому в той или иной мере принимали участие в патогенезе развития РЩЖ железы.
В дифференциальной диагностике доброкачественных новообразований и аутоиммунного заболевания ЩЖ было доказано, что можно использовать показатели цитокинов ИЛ-6, ИЛ-10 и молекулы межклеточной адгезии sICAM-1, а также с высокой эффективностью применять расчетные индексы г-ИНФ/ИЛ-4, г-ИНФ/ИЛ-10, ИЛ-6/г-ИНФ. Представленные показатели также имели хорошую и удовлетворительную диагностическую информативность, однако не было возможности выделить наиболее значимые цитокины, которые могли бы участвовать в патогенезе развития АЩЖ.
Наиболее сложной в диагностическом плане является дифференциальная диагностика злокачественных и доброкачественных новообразований, основанная на пороговых значениях цитокинов. Было выявлено, что в диагностике рака и аденомы ЩЖ можно применять ИЛ-6, sE-seleсtin, а также использовать индекс ИЛ-6/г-ИНФ. В связи с относительно удовлетворительной и хорошей диагностической эффективностью используемых нами показателей не было возможности предложить наиболее эффективный цитокин, который мог бы вносить значительный вклад в патогенез РЩЖ и отличать ее от АЩЖ с 99,9% эффективностью.
В этой связи нами разработана на основе регрессивного анализа логистическая модель, которая включала используемые показатели некоторых наиболее значимых цитокинов и индекса ИЛ-6/г-ИНФ для улучшения диагностики рака щитовидной железы от аденомы. Полученная модель обладает более высокой достоверностью различия и более высокими показателями точности и специфичности и позволяет использовать ее для диагностики этих схожих по механизму канцерогенеза патологий.
В результате проведенного логического регрессивного анализа была получена следующая формула модели:
Y= 0,017X1+0,005X2+0,0000774Х3+1,654,
где Y - рассчитанный коэффициент, равный 2,2485; Х1 - значение ИЛ-6; Х2 - значение sE-seleсtin; Х3 - значение индекса ИЛ-6/г-ИНФ; 1,654 - константа А (определяет смещение по оси ординат).
При Y более 2,2485 была высока вероятность развития РЩЖ.
При Y менее 2,2485 вероятность развития рака отсутствовала и соответственно была высока вероятность развития АЩЖ.
Сравнительная характеристика sE-seleсtin, ИЛ-6, индекса ИЛ-6/г-ИНФ и разработанной нами модели с показателями достоверности, площади под ROC-кривой, чувствительности, специфичности и точности методов представлена в табл. 5.
Таким образом, полученная в результате логистического регрессивного анализа модель диагностики РЩЖ у больных с доброкачественными и злокачественными новообразованиями, основанная на анализе показателей, имевших достоверные различия между группами, сравниваемыми по ИЛ-6 и sE-seleсtin, является более диагностически эффективной и обладает более высокой достоверностью (р=0,005) и более высокими значениями площади под ROC-кривой (0,914).
Таблица 5. Диагностическая эффективность использования sE-seleсtin, ИЛ-6, индекса ИЛ-6/г-ИНФ и разработанной логистической регрессивной модели при дифференциальной диагностике злокачественных и доброкачественных новообразований щитовидной железы
|
Показатель |
Значение |
Достоверность, р |
Площадь под кривой AUC |
Чувствительность, % |
Специфичность, % |
Точность метода, % |
|
|
ИЛ-6 |
Более 18,16 |
0,015 |
0,857 |
71,4 |
80 |
75,7 |
|
|
sE-selektin |
Более 56,39 |
0,04 |
0,800 |
71,4 |
90 |
80,7 |
|
|
Индекс ИЛ-6/г-ИНФ |
Более 421,32 |
0,015 |
0,857 |
85,7 |
90 |
87,95 |
|
|
Логистическая модель |
Более 2,2584 |
0,005 |
0,914 |
85,7 |
80 |
82,85 |
В процессе исследования цитокинов и их индексов можно использовать следующий простой алгоритм диагностики по одному показателю между аутоиммунными, злокачественными и доброкачественными заболеваниями ЩЖ.
Для дифференциальной диагностики между злокачественными и аутоиммунными заболеваниями мог использоваться показатель MCP-1, который не был диагностическим критерием в других группах.
Показатель величины sICAM-1 был характерен для диагностики между доброкачественными и аутоиммунными заболеваниями ЩЖ.
Для дифференциальной диагностики между раком и аденомой ЩЖ можно использовать величину соотношения ИЛ-6/г-ИНФ или логистическую регрессионную модель.
Таким образом, в патогенезе заболеваний ЩЖ некоторые цитокины играли ключевую роль и не могли быть использованы для диагностики в других исследуемых группах. Так, например, при РЩЖ определяющее значение имела растворимая форма молекулы адгезии sE-seleсtin, при АЩЖ - растворимая форма молекулы межклеточной адгезии 1-го типа sICAM-1, а при аутоиммунных тиреоидитах определяющее значение имел цитокин ИЛ-4.
В работе представлены исследования FAS-L-рецепторов на поверхности иммунокомпетентных клеток основных, хелперных и эффекторных субпопуляциях лимфоцитов у больных со злокачественными заболеваниями ЩЖ и в контрольной группе.
У больных со злокачественными заболеваниями ЩЖ показано значительное повышение FAS-L на основных субпопуляциях лимфоцитов: общих Т-лимфоцитов с FAS-L, В-лимфоцитов с FAS-L, Т-хелперов с FAS-L, Т-цитотоксических с FAS-L, натуральных киллерных клеток (лимфоцитов, несущих маркер CD16+) с FAS-L. При одновременном значительном увеличении на основных, хелперных и эффекторных клетках маркеров CD178+ отмечалось незначительное снижение плотности распределения этого маркера.
Значительное повышение CD178+-рецепторов на основных субпопуляциях иммунокомпетентных клеток у больных со злокачественными новообразованиями ЩЖ, особенно на эффекторных клетках (CD8+- и CD16+ -лимфоцитах), позволяет предположить создание иммунной системой больного человека условий для контакта с опухолевыми клетками посредством механизма FAS-L/FAS запуска процессов апоптоза в опухолевых клетках. Наличие повышенного количества FAS-L на других клетках позволяет предположить, что посредством механизма отбрасывания FAS-L в растворимую форму увеличивается количество FAS-L в крови и позволяет сывороточному FAS-L достигать удаленных участков тканей и провоцитовать апоптоз в клетках, содержащих большое количество FAS-рецептора, например, на тиреоцитах у больных с АИЗЩЖ.
Были разработаны и представлены в работе критические значения и оценена диагностическая эффективность показателей, имеющих достоверные различия в контрольной группе и группе больных РЩЖ для проведения дифференциальной диагностики РЩЖ по показателям количества иммунокомпетентных клеток и плотности распределения рецепторов на поверхности в каждой группе, несущих маркеры FAS-L.
Интересные результаты получены при исследовании показателей апоптоза и пролиферации в тканях ЩЖ у больных с аутоиммунными заболеваниями, доброкачественными и злокачественными новообразованиями ЩЖ.
Исследовалась суспензия клеток, приготовленных из морфологически измененной ткани ЩЖ, по данным основных маркеров, регулирующих апоптоз и пролиферацию (количество клеток, несущих маркеры CD95, CD95L, p53, bcl-2, Ki-67, и плотность их экспрессии в группах клеток, позитивных по одному из маркеров).
В работе также представлено исследование количества клеток с сочетанными (комбинированными) маркерами апоптоза и пролиферации и плотности распределения рецепторов в этих группах клеток в тканях исследуемых групп больных.
Выявлено значительное увеличение количества клеток с маркерами FAS на мембранах тиреоцитов у больных с аутоиммунными тиреоидитами. У больных этой же группы отмечено повышенное содержание клеток с маркерами СD178+ по сравнению с больными из группы доброкачественных и злокачественных новообразований.
Анализ количества клеток с онкосупрессором р53 (общим) выявил наличие повышенного количества клеток в группе больных аутоиммунными тиреоидитами (66,9±3,9%). Значение плотности рецепторов р53 (общего) было наибольшим в группах больных АЩЖ (4,79±1,09) и аутоиммунными заболеваниями, где этот показатель составил 4,07±0,28. Количество клеток с белком р53dim было значительно повышено у больных РЩЖ - 51,07±6,81%, статистически достоверно (р=0,026) отличаясь от этого показателя у больных АЩЖ, где количество клеток с белком р53dim составило 38,73±5,42%. Обнаружено значительное снижение количества клеток с фенотипом р53bright в группе больных РЩЖ (9,07±3,85%) по сравнению с больными АЩЖ - 21,82±7,84% (р=0,003) и АИЗЩЖ - 19,21±1,75% (р=0,0001). Плотность экспрессии белка р53 в группе р53bright - клеток была значительно снижена у больных РЩЖ и составила 7,27±0,85 по сравнению с этим показателем в группах больных АЩЖ (10,93±2,21) (р=0,0001) и аутоиммунными тиреоидитами (9,28±1,07) (р=0,033).
Исследование внутриклеточного маркера пролиферации Ki-67 у пациентов с заболеваниями ЩЖ показало, что количество клеток, несущих данный маркер, было наибольшим при АИЗЩЖ (4,23±1,86%) и минимальным при АЩЖ (1,49±0,58%) и РЩЖ (1,45±0,77%).
Динамика содержания общего количества клеток с антиапоптотическим белком bcl-2 у больных с патологией ЩЖ выявила, что общее количество клеток с белком bcl-2 было наибольшим у пациентов с аутоиммунными тиреоидитами (82,52±2,01%) и сопровождалось повышенной величиной плотности распределения этого внутриклеточного белка (8,12±0,65). Общее количество клеток у больных АЩЖ составило 70,11±10,36%, а величина его плотности - 4,51±1,65. У больных РЩЖ количество клеток с bcl-2 составило 70,54±8,37%, показатель плотности распределения белка в исследуемых клетках был значительно снижен и составил 2,36±0,49.
Выявлено, что количество клеток с bcl-2dim у пациентов с аутоиммунными заболеваниями было минимальным и составило 28,25±4,48% при относительно небольшой величине плотности распространения этого белка - 1,71±0,11. У больных АЩЖ показатели количества bcl-2dim-клеток были более высокими в сравнении с группой пациентов с АИЗЩЖ и составили 48,47±12,83% и при более низких значениях плотности распространения bcl-2dim - 1,53±0,1. Наиболее высокие показатели количества bcl-2dim-клеток обнаружены у больных РЩЖ - 56,44±9,95% при схожей с группой АЩЖ величине плотности распределения bcl-2-белка - 1,59±0,15.
Наиболее интересные результаты получены при сравнительном анализе показателей количества bcl-2bright-клеток и величин плотности экспрессии bcl-2-белка в исследуемых группах. Наибольшее количество клеток с фенотипом bcl-2bright и показатель плотности распределения белка bcl-2 в bcl-2bright-клетках были обнаружены у больных аутоиммунными тиреоидитами и составили 51,48±3,82% и 12,32±0,08 соответственно. В группе больных с доброкачественными опухолями ЩЖ количество bcl-2bright-клеток было в 2,5 раза ниже, чем в группе больных АИЗЩЖ, и составил 18,12±7,29%; при этом показатель плотности экспрессии белка bcl-2 в этой группе клеток незначительно превышал этот же показатель в группе АИЗЩЖ и составил 13,66±2,79. В группе больных РЩЖ обнаружено значительное снижение показателя количества клеток с фенотипом bcl-2bright (8,85±2,76%), а также показателя плотности распределения белка bcl-2 в bcl-2bright-клетках, значение которого не превышало 8,32±1,03. Получены статистически значимые различия по показателю количества bcl-2bright-клеток как между группами больных РЩЖ и АЩЖ (р=0,042), так и между группами РЩЖ и аутоиммунными заболеваниями ЩЖ (р=0,0001), а также по величине плотности экспрессии bcl-2 в этой группе клеток между группами РЩЖ и АЩЖ (р=0,001) и в группах РЩЖ и аутоиммунными тиреоидитами (р=0,0001).
Подобные документы
Рак щитовидной железы как опухоль, развивающаяся из клеток эпителия щитовидной железы. Частота факторов, способствующих развитию заболеваний щитовидной железы. Классификация рака щитовидной железы по стадиям. Сущность лимфогенного пути метастазирования.
реферат [32,3 K], добавлен 08.03.2011Изучение заболеваний щитовидной железы и нарушения ее функций в зоне с неблагоприятной экологической обстановкой. Диагностика и профилактика заболеваний щитовидной железы. Анализ данных по заболеваемости щитовидной железы у детей города Новомосковска.
дипломная работа [624,2 K], добавлен 23.01.2018Доброкачественные и злокачественные опухоли щитовидной железы. Морфологические варианты аденомы щитовидной железы, их характеристика, клинические симптомы, особенности диагностики и лечения. Классификация злокачественных новообразований щитовидной железы.
презентация [3,1 M], добавлен 02.04.2017Классификация и химическая природа гормонов щитовидной железы. Участие гормонов щитовидной железы в обменных процессах организма. Влияние тиреоидных гормонов на метаболические процессы организма. Проявление дефицита и избытка гормонов щитовидной железы.
реферат [163,5 K], добавлен 03.11.2017Гистологическое строение щитовидной железы. Факторы риска и предрасполагающие факторы онкологических заболеваний щитовидной железы. Классификация по стадиям. Гистогенетическая классификация опухолей. Дифференцированный рак. Папиллярная аденокарцинома.
презентация [846,4 K], добавлен 29.02.2016Разработка и верификация математической модели динамики объема щитовидной железы в зависимости от антропометрических показателей детей школьного возраста. Физиология, анатомия щитовидной железы, ее кровоснабжение и иннервация. Патологии щитовидной железы.
курсовая работа [594,4 K], добавлен 22.11.2014Анатомия щитовидной железы, ее функции, механизм образования гормонов. Определение концентрации свободного тироксина. Метаболические проявления заболеваний щитовидной железы (гипотиреоз и гипертиреоз), их клинические проявления, лабораторная диагностика.
курсовая работа [39,9 K], добавлен 30.04.2014Понятие о гормонах щитовидной железы. Гипертиреоз и гипотериоз как состояния, связанные с повышенным или недостаточным их производством. Показания для назначения анализа на гормоны щитовидной железы. Влияние показателей на репродуктивную функцию.
презентация [630,2 K], добавлен 24.05.2016Классификация узлов щитовидной железы. Факторы риска злокачественных заболеваний, диагностика. Опухолеподобные поражения. Тактика лечения и мониторинга узлового/многоузлового зоба. Препараты гормонов щитовидной железы. Показания к оперативному лечению.
презентация [1,4 M], добавлен 17.02.2016Анатомо-физиологические особенности эндокринной системы и обмена веществ. Пороки развития щитовидной железы, диагностика и лечение. Основные симптомы тиреотоксикоза и гипотиреоза. Организация сестринского процесса при заболеваниях щитовидной железы.
реферат [209,6 K], добавлен 25.03.2017
