Размещено на http://www.allbest.ru

На правах рукописи

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

АНАЛИТИЧЕСКИЕ ПОДХОДЫ К ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ СОЦИАЛЬНО ЗНАЧИМЫХ ВИРУСНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ

14.03.10 - клиническая лабораторная диагностика

Сидорова Ирина Флуровна

Саратов 2010

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Самарский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию Российской Федерации»

Научный консультант:

заслуженный деятель науки РФ, доктор медицинских наук, профессор Гильмиярова Фрида Насыровна;

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Коршунов Геннадий Васильевич;

доктор медицинских наук, профессор Высокогорский Валерий Евгеньевич;

доктор медицинских наук, профессор Девдариани Зураб Леванович

Ведущая организация - Российский государственный медицинский университет имени Н.И. Пирогова.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Саратовский государственный медицинский университет имени В.И. Разумовского Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию Российской Федерации».

Ученый секретарь

диссертационного совета

доктор медицинских наук, профессор В.Б. Бородулин

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. В настоящее время в связи с ростом заболеваемости гепатитами В, С и ВИЧ актуальным является поиск способов повышения эффективности выявления инфицирования возбудителями этих социально значимых инфекций. По данным ВОЗ, ежегодно в мире вирусом гепатита В заражается более 50 млн. человек, вирусоносителей насчитывается около 400 млн., из которых у 60 млн. высока вероятность развития гепатоциллюлярной карциномы, а у 45 млн. - цирроза печени (Онищенко Г.Г, 2003; Chisari F.V., 2000; Kirk G.D., Astemborski J., Mehta S.H. et al., 2009). Вирусом гепатита С инфицировано около 3 % населения Земли, в том числе в России - 6 млн. человек. По данным различных авторов инфицированность гепатитом С среди пациентов с иммунодефицитом колеблется от 33 до 59%. (Николаева Л.И., 2008; Boctor F.N., 2003; Kamal S.M., 2004, Deuffic-Burban S. et al., 2007, S.L. George, B.R. Bacon, E.M. Brunt, 2009, E.C. Thomson, E. Nastouli, J. Main, 2009, Barbosa Ade J., Baggio-Zappia G.L., Dobo C. et al., 2009). Острый гепатит С в 80% случаев переходит в хронический с исходом в цирроз печени и гепатоцеллюлярную карциному. (Di Bisceglie A.M. 2000; Alberti A.L. 2002; Idrees M. et al., 2009; Cao W. et al., 2009). В последние годы отмечается снижение заболеваемости острыми формами на фоне роста и широкого распространения хронических, латентных форм и носительства вирусов (Государственный доклад «О санитарно-эпидемиологической обстановке в Российской Федерации в 2009 году»). Современное состояние проблемы их выявления требует изменения подходов к их диагностике, в том числе перехода на более эффективные технологии скрининга, доступные для учреждений практического здравоохранения. инфекционный донорский кровь вирусный

Чрезвычайно активная циркуляция вирусов гепатитов В и С обусловлена их высокой вирулентностью, устойчивостью (Патрушева Н.Б. с соавт., 2001; Суздальцев А.А. с соавт., 2003; Аммосов А.Д., 2004; Воробьев П.А., c соавт., 2006). Установлено, что парентеральные вирусные гепатиты характеризуются выраженной инфекционностью, заражение возникает при инокуляции 10^-6-10^-7 мл вируссодержащей крови. Популяция вирусов гепатитов В и С генетически неоднородна, в частности, идентифицировано 6 генотипов и более 100 субтипов вируса гепатита С (Hu X.B. et al., 2009; Drexler J.F. et al. 2009). Устойчивость вируса гепатита С обусловлена его способностью реплицироваться с высоким уровнем мутаций, в результате чего возникает несколько иммунологически различающихся вариантов, позволяющих вирусу избегать иммунного ответа организма (Frodshan A., Hill A. , 2004, Ivanov Y.D. et all, 2007).

Существующая нормативная база по лабораторной диагностике вирусных гепатитов и ВИЧ, представленная в основном Приказами Минздрава России 90-х и начала 2000-х годов, не учитывает современные достижения биомедицинских технологий в области изучения генетической изменчивости их возбудителей и создания новых, более эффективных методов детекции вирусных маркеров, не определяет порядок их использования при решении различных задач, в том числе для скрининга доноров. В связи с возрастающей потребностью в донорской крови и ее компонентах в службе крови все актуальнее становится вопрос повышения вирусной безопасности гемотрансфузий (Покровский В.В. с соавт., 2000; Дегтярева И.Н. с соавт., 2000; Кудрявцева Е.Н. с соавт., 2000; Панов В.Н., 2003, Чечеткин А.В. с соавт., 2004, Гаврилов А.О. с соавт., 2005; Куандыкова Р.Ж. с соавт., 2005; Воробьев П.А., 2006; Арчаков А.И. с соавт., 2010, Blatti F.A., 2007). Существующие в нашей стране алгоритмы лабораторного исследования донорской крови не исключают остаточный риск посттрансфузионных инфекций. НВsАg является единственным маркером вируса гепатита В, по которому серопозитивные лица отстраняются от донорства в Российской Федерации (Балаян С.А., Михайлов М.И., 1999; Шевченко Ю.Л., Жибурт Е.Б., 2002; Манзенюк О.Ю. с соавт., 2005; Кюрегян К.К. с соавт., 2005, Тарасенко О.А., 2009). Наличие среди доноров крови носителей вируса гепатита В, у которых концентрация HBsAg может быть ниже уровня, детектируемого с помощью существующих лабораторных тестов, требует повышения чувствительности диагностикумов для выявления этого маркёра, для чего необходимы сравнительные исследования аналитической эффективности современных диагностических тестов для выявления этого маркёра.

Детекция маркеров гепатита С является одним из слабых мест лабораторной идентификации актуальных в службе крови вирусов. Результаты тестирования на антитела к вирусу гепатита С методом иммуноферментного анализа (ИФА) остаются основой выбраковки потенциально опасной по данной инфекции донорской крови. Имеются основания утверждать, что выявление антител к вирусу гепатита С обладает рядом недостатков, в частности, обусловленных ложноположительной детекцией вследствие кросс-реактивности антител, низкой чувствительностью в период острой фазы гепатита. Это обуславливает необходимость более детального изучения преаналитического и аналитического этапов лабораторного исследования и разработки более чувствительных методов детекции вирусной инфекции (Жибурт Е.Б., 2005; Литвиненко М.О., 2006, Гураль А.Л., Сергеева Т.А., 2007; Арчаков А.И. с соавт., 2010, Девдариани З.Л. с соавт., 2010, Weber Bernar, 2006, Knowles Sue, 2007, Zoulim F. et all., 2007).

В условиях широкого распространения парентеральных вирусных инфекций назрела практическая необходимость использования альтернативного биологического материала, который можно получить быстрым и неинвазивным путем для диагностики и мониторинга инфекционных и других заболеваний. Одной из таких биологических сред является ротовая жидкость. Учитывая, что работы, содержащие сведения о составе и свойствах ротовой жидкости в норме и соматической патологии, малочисленны (Гильмиярова Ф.Н., 1999; Dodds M.W. et al., 2000), а работы, изучающие возможности использования ротовой жидкости при вирусных инфекциях, единичны и результаты этих исследований неоднозначны (Воробьев О.В., 2000; Чернецова О.В. и соавт., 2003; Roy K.M. et al., 1998; Wesolowski L.G. et al., 2009), существует необходимость поиска новых аналитических подходов для расширения диагностических возможностей, индивидуализации диагностики и повышения ее качества (Коршунов Г.В., Гладилин Г.П., 2007).

При взаимодействии возбудителя вирусной инфекции с организмом - мишенью его действия, значимым является не только вирулентность, устойчивость, массивность инфекции, но и особенности состояния макроорганизма (Высокогорский В.Е. с соавт. 2006). На наш взгляд, информативным показателем предрасположенности или устойчивости к развитию заболевания могут быть особенности метаболизма, иммунного статуса, ассоциированные с определенной группой крови человека. (Донсков С.И., 2001; Гильмиярова Ф.Н. с соавт., 2007). Сведения о клинико-лабораторных особенностях парентеральных вирусных гепатитов и ВИЧ-инфекции у пациентов с разной группой крови и при разной степени виремии единичны (Дашкова Н.Г. с соавт., 2005, Фрейдин М.Б. с соавт., 2006).

Таким образом, совершенствование лабораторной диагностики социально значимых вирусных инфекций, разработка комплекса интегрированных аналитических подходов к эффективному выявлению их маркеров является в настоящее время актуальной медицинской и социальной проблемой.

Настоящее исследование выполнено в рамках Федеральных программ: «Взаимодействии биологически активных веществ растительного и животного происхождения с системами жизнеобеспечения организма с учетом биологической вариабельности метаболизма, ассоциированной с групповой принадлежностью крови (№ гос.регистрации 0120.0 809698).

«Изучение свойств, состава, биологических эффектов, регуляторного потенциала экопротекторов нового поколения и разработка мер защиты здоровья населения и профилактики заболеваний» (№ гос.регистрации 1.20.03 08339).

Цель работы - разработать аналитические подходы для выработки алгоритма совершенствования лабораторной диагностики социально значимых вирусных инфекций.

Задачи:

1. Провести анализ современных методов обеспечения инфекционной безопасности донорской крови и повышения эффективности выявления инфицированности ВИЧ и вирусными гепатитами В и С при проведении иммуноферментного анализа. Оценить диагностический потенциал современных тест-систем для выявления НBsAg с разным уровнем чувствительности, обосновать целесообразность применения в службе крови тестов с повышенной чувствительностью.

2. Разработать алгоритм выбора наиболее диагностически эффективного и наименее затратного комплекса скрининговых методов исследования доноров. Провести расчет экономических затрат на проведение ИФА с высокой чувствительностью и полимеразной цепной реакции (ПЦР) для обоснования выбора диагностического метода.

3. Оценить диагностическую эффективность определения субтипов и мутантных форм НBsAg (ayw2, ayw3 Var.A, ayw3 Var.B, adrq+, ayw3 T134P, ayw3 S143L, adw3 G145R) разрешенными к применению в практике здравоохранения иммуноферментными тест-системами.

4. Изучить влияние преаналитических и аналитических факторов, связанных с проведением дезинфекционных мероприятий, на результаты лигандных иммунохимических и молекулярно-генетических исследований.

5. Обосновать использование саливодиагностики для расширения возможностей массового скрининга вирусного гепатита С.

6. Оценить биологическую вариабельность иммунологического статуса инфицированных ВИЧ, гепатитами В и С, ассоциированную с групповой принадлежностью крови, для разработки концепции предрасположенности к инфицированию вирусными инфекциями.

Научная новизна. На большом массиве обследованных с использованием различных методических подходов получены новые сведения, характеризующие потенциальные и реальные возможности иммуноферментного анализа, обоснованы ограничения диагностической эффективности ИФА. Установлено, что получение отрицательного результата на наличие серологических маркеров с помощью ИФА и после проведения подтверждающего теста не является полной гарантией безопасности крови и ее компонентов, поскольку в 2 - 10% случаев встречаются ложноположительные или ложноотрицательные результаты. Аргументировано, что низкие концентрации и мутантные штаммы НВsAg вируса гепатита В могут не выявиться современными иммуноферментными тестами.

Экспериментально обоснована возможность сокращения периода «серонегативного окна». Этот результат достигается путем улучшения аналитических характеристик диагностических тестов, применяемых в лабораторной диагностике, повышения чувствительности выявления HBsAg. Подтверждено, что использование полимеразной цепной реакции для оценки возможного инфицирования донорской крови вирусами ВИЧ и гепатита С является методом выбора в диагностической практике, так как позволяет выявить доноров в период серонегативного окна, а также имеющих низкие концентрации серологических маркеров.

Получены новые сведения, объективно иллюстрирующие высокую диагностическую информативность иммуноферментной тест-системы нового поколения с большей специфичностью и чувствительностью выявления и подтверждения НBsAg 0,01 МЕ/мл, что сводит к минимуму получение ложноотрицательных и ложноположительных результатов и таким образом снижает риск инфицирования при гемотрансфузии.

Нами показано, что применение этих тест-систем эффективно при скрининговом исследовании донорской крови. Проведенные расчеты экономических затрат выявили, что использование тест-системы нового поколения, позволяющее выявить образцы, содержащие одну инфицирующую дозу вируса гепатита В, при наличии высокой диагностической информативности существенно экономичнее, чем внедрение ПЦР для массового скрининга донорской крови.

Получен блок новых данных, свидетельствующих о том, что отечественные тест-системы различных производителей, разрешенные к применению в лабораторной диагностике, не способны выявлять некоторые субтипы и мутации HBsAg, в частности, ayw3, ayw3 S143L, adw3 G145R . Такие «ускользающие» HBsAg мутанты способны уходить из иммунологического, диагностического и вакцинального контроля.

Результаты проведенных исследований позволили получить новые данные, которые позволят минимизировать ошибки при проведении иммуноферментного анализа на пре- и аналитическом этапе. Установлено, что из девяти разрешенных к применению в практике здравоохранения дезинфицирующих средств разных классов пероксид водорода, хлорсодержащие препараты даже в следовых количествах многократно искажали результаты исследования.

Анализируя распространенность социально значимых вирусных инфекций среди обследованных, составивших группу из 34634 человек, нами установлена неоднородность распределения ВИЧ, гепатитов В и С среди обладателей различных групп крови. Показано, что 40,3% выявленных ВИЧ инфицированных относятся к О(I) группе крови, 40,4% носителей вируса гепатита В и 36,0% носителей вируса гепатита С к А(II) группе, сочетанное носительство ВИЧ инфекции и гепатита С обнаружено у лиц с О(I) группой крови в 36,9%, с В(III) группой - в 31,3% случаев.

В связи с массовостью проведения скрининговых исследований для выявления маркеров вирусных инфекций и значимостью парентерального пути их передачи, нами изучены аналитические перспективы применения ротовой жидкости в лабораторной диагностике вирусного гепатита С. Оценка серологических, биохимических показателей в ротовой жидкости и крови больных гепатитом С выявила корреляционные зависимости между рядом параметров в этих биологических жидкостях. В фазе репликации РНК вируса гепатита С в ротовой жидкости была выявлена у 14% пациентов, Анти-HCV IgM - у 50% и Анти-HCV IgG - у 67%. Таким образом, новыми являются сведения о том, что высокая виремия при вирусном гепатите С сопровождается повышенным уровнем вирусной нагрузки ротовой жидкости, достаточным для детекции маркеров инфекции современными лабораторными методами исследования. Наличие корреляционных связей между показателями метаболизма в ротовой жидкости и сыворотке крови, их корреляция с выявленными иммунологическими маркерами подтверждает перспективность саливодиагностики инфекционных заболеваний.

Научно-практическая значимость. Результаты проведенных молекулярно-биологических, иммунохимических, биохимических и гематологических исследований расширяют наши представления об особенностях взаимодействия вируса иммунодефицита человека и гепатитов В и С с организмом человека, раскрывают преимущества и ограничения применяемых методов лабораторной диагностики. Для выявления доноров с низким содержанием HBsAg эффективно использовать тест-системы с повышенной чувствительностью его выявления. Полученные данные об искажающем влиянии ряда дезинфектантов на преаналитическом и аналитическом этапах проведения иммуноферментного анализа являются фактическим материалом, необходимым при выборе средств обработки инструментов и рабочих поверхностей в лаборатории. Для исключения негативного влияния следовых количеств дезинфицирующих веществ на результаты специфических иммунохимических исследований при проведении противоэпидемических мероприятий в лабораторной службе целесообразно использовать 70% спирт, четвертичные аммониевые соединения, альдегиды и гуанидины.

Теоретическое и прикладное значение имеют данные о соответствии изменений иммунохимических, гематологических и биохимических показателей в ротовой жидкости сдвигам, выявленным в крови, что подтверждено результатами корреляционного анализа. Эти сведения обусловливают возможность оценки динамики процесса, имеют диагностическую и прогностическую ценность. Результаты исследований могут служить основанием для рекомендации использования ротовой жидкости в диагностике и мониторинге лечения парентеральных вирусных инфекций, для проведения биотехнологических разработок с целью повышения аналитических характеристик и расширения спектра применения коммерческих диагностических тестов.

Целесообразно включать образцы, содержащие наиболее распространенные на территории Российской Федерации мутантные штаммы HBsAg, в состав контрольных панелей Федеральной системы внешней оценки качества. Несмотря на отсутствие в нашей стране регламентированных требований по входному контролю качества поступающих в диагностические лаборатории тест-систем для выявления HBsAg, можно рекомендовать самостоятельное проведение такого контроля лабораториями службы крови с использованием доступных контрольных материалов.

Апробация работы. Результаты исследований были представлены на IX Международной научной конференции «Здоровье семьи - XXI век» (Да-лянь, 2005), на съезде Научного общества специалистов клинической лабораторной диагностики (Москва, 2005), Межрегиональной научно-практической конференции «Новая идеология в единстве фундаментальной и клинической медицины» (Самара, 2005), VI Международной научно-практической конференции «Здоровье и образование в XXI веке» (Москва, 2005), Х Международной научной конференции «Здоровье семьи - 21 век» (Бангкок-Паттайя, 2006), VII Международной научно-практической конференции «Здоровье и образование в XXI веке» (Москва, 2006), на научно-практическом симпозиуме с международным участием «Ключевые проблемы совершенствования лабораторного обеспечения медицинской помощи» (Москва, 2007), на Национальных днях клинической лабораторной диагностики (Москва, 2007, 2008, 2009), Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные вопросы современной биохимии, посвященной 20-летию Кировской государственной медицинской академии (Киров, 2007), XI Международной научной конференции «Здоровье семьи - 21 век» (Амстердам-Страсбург, 2007), IV съезде Российского общества биохимиков и молекулярных биологов (Новосибирск, 2008), совместном заседании Самарского отделения Всероссийского биохимического общества и специалистов по клинической лабораторной диагностике, кафедр общей, бионеорганической и биоорганической химии и фундаментальной и клинической биохимии с лабораторной диагностикой ГОУ ВПО «Самарский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» (Самара, 2010).

Внедрение результатов в практику. Результаты исследований используются в работе клинико-диагностической лаборатории Клиник Самарского государственного медицинского университета, централизованной СПИД - лаборатории Государственного автономного учреждения здравоохранения РКВД (г.Уфа), в клинико-диагностической лаборатории Исследовательского центра «Лаборатория» (г.Уфа), в учебном процессе на кафедре фундаментальной и клинической биохимии с лабораторной диагностикой ГОУ ВПО «Самарский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию», на кафедре биохимии ГОУ ВПО «Курский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию», на кафедре клинической лабораторной диагностики Ижевской медицинской академии.

Положения выносимые на защиту.

1. Комплексный подход при проведении скрининговых исследований донорской крови с использованием метода ПЦР и ИФА-тестов с повышенной чувствительностью выявления HBsAg и способностью выявлять его наиболее распространенные мутантные формы позволяет повысить эффективность диагностики вирусных инфекций и обеспечивает снижение риска развития посттрансфузионных инфекционных.

2. Преаналитические и аналитические факторы, связанные с проведением профилактической дезинфекции, ухудшают эффективность выявления антител к вирусу гепатита С высокотехнологичными методами исследования.

3. Особенности показателей метаболизма, ассоциированные с определенной группой крови в системе АВО, могут рассматриваться в качестве предикторов инфицирования вирусами гепатитов В, С и ВИЧ.

4. Саливодиагностика расширяет возможности проведения безопасного массового скрининга для выявления маркеров парентеральных вирусных инфекций.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 29 работ, в том числе 2 монографии, 2 патента, 9 работ - в ведущих рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК РФ.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, главы, посвященной описанию материала и методов исследования, трех глав собственных данных, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы.

Диссертация изложена на 251 странице, иллюстрирована 19 рисунками, содержит 56 таблиц. В работе использовано 388 источников, из них 178 отечественных и 210 зарубежных авторов.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования

Исследования проводились на кафедре фундаментальной и клинической биохимии с лабораторной диагностикой ГОУ ВПО «Самарский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию», в клинико-диагностической лаборатории Клиник Самарского государственного медицинского университета, СПИД-лаборатории Самарской областной станции переливания крови, централизованных СПИД-лабораториях Государственного автономного учреждения здравоохранения РКВД (г.Уфа), Городской клинической больницы №5 (г.Тольятти).

Всего обследовано 34634 человека, из них 33442 донора, 599 больных вирусными гепатитами В и С, 593 ВИЧ-инфицированных. 200 клинически здоровых лиц составили контрольную группу.

Таблица 1

Распределение обследованного контингента по полу

Пол\ группа	Контрольная группа	Доноры	Пациенты с вирусными гепатитами В и С	ВИЧ-инфици-рованные
	Абс.	%	Абс.	%	Абс.	%	Абс.	%
Мужчины	123	66,5	20229	57,5	436	69,5	451	76
Женщины	67	33,5	13212	42,5	163	30,5	142	24
Всего	200	100	33442	100	599	100	593	100

Во всех изучаемых группах преобладали мужчины (табл. 1).

Средний возраст обследованных пациентов составил 33,5±2,25 лет, контрольной группы 31,8±1,50 лет.

Объектом наших исследований были сыворотка, плазма крови и ротовая жидкость.

Иммуноферментный метод. НВsAg определяли при помощи тест-систем «ИФА - HBsAg - м» - тест-система иммуноферментная для выявления HBs-антигена модифицированная», производства НПО «Диагностические системы», г. Нижний Новгород.

Подтверждение серопозитивных в скрининге образцов проводили с помощью тест-систем «ИФА - НВsAg - подтверждающий тест» производства НПО «Диагностические системы» г. Нижний Новгород. Часть исследований проводилась с помощью автоматизированного анализатора Genesis RМP 150 производства фирмы «Tecan» с использованием тест-систем «Вектогеп В - HBsAg - антиген/авто» производства ЗАО «Вектор-Бест» г. Новосибирск.

Суммарные антитела к вирусу гепатита С (аnti - HCV IgM и IgG) определяли при помощи тест-системы «ИФА - АНТИ - НСV» производства НПО «Диагностические системы» г. Нижний Новгород.

Подтверждающий тест для идентификации спектра антител класса IgM и IgG к вирусу гепатита С и подтверждения результатов anti-НСV скрининга «ИФА-АНТИ-НСV-СПЕКТР-GМ» производства НПО «Диагностические системы» г. Нижний Новгород.

Обнаружение антител к вирусу иммунодефицита человека 1 (ВИЧ1) и вирусу иммунодефицита человека 2 (ВИЧ 2) и ВИЧ антигена в крови производилось с помощью французских иммуноферментных тест-систем фирмы «BIO-RAD» «ДЖЕНСКРИН ПЛЮС ВИЧ АГ-АТ», основанных на принципе «сэндвич» метода.

Оптическую плотность растворов в лунках измеряли при длине волны 450 нм на спектрофотометрах Sunrise (фирма «Tecan») и Sanofi (фирма «Bio-Rad» PR 1100). Для интерпретации полученных результатов использовали формулы, предложенные фирмой-производителем тест-системы.

В экспериментальных исследованиях была использована «Панель сывороток, содержащих разные субтипы и мутантные формы HBsAg гепатита В» производства ЗАО «Вектор-Бест».

Полимеразно-цепная реакция. В настоящем исследовании использовалась гибридизационная детекция на твердой фазе - гибридизация с иммобилизованным на поверхности лунок микропланшета ДНК-зондом.

РНК вируса иммунодефицита человека определяли при помощи тест-системы для выявления РНК вируса иммунодефицита человека в плазме крови методом ПЦР, совмещенной с обратной транскрипцией РНК производства НИИ Эпидемиологии МЗ РФ. РНК вируса гепатита С определяли при помощи тест-системы «АмплиСенс РНК-ВГС/ВКО-48» ЦНИИ Эпидемиологии МЗ РФ. ДНК вируса гепатита В определяли при помощи тест-системы «АмплиСенс HBV-470s/ВКО-770» ЦНИИ Эпидемиологии МЗ РФ.

Определение группы крови по системе АВ0. Определение группы крови системы АВО проводили перекрестным способом и с помощью цоликлонов, что представляет собой одновременное определение групповых агглютиногенов в эритроцитах испытуемой крови при помощи стандартных сывороток и групповых агглютининов в сыворотке исследуемой крови при помощи стандартных эритроцитов.

Биохимические методы. Исследования показателей обмена в крови и в ротовой жидкости проводили на автоматическом биохимическом анализаторе «Hitachi - 902» фирмы «Roch-Diagnostics» с помощью коммерческого набора реактивов фирмы «Roch-Diagnostics» (Швейцария). Контроль качества при выполнении исследований осуществляли с использованием контрольной сыворотки двух уровней "Precinorm", "Precipat", фирмы «Roch-Diagnostics», (Швейцария) с построением контрольных карт и применением критериев Вестгарда. В крови и в ротовой жидкости определяли концентрацию общего белка, альбумина, мочевины, креатинина, глюкозы, мочевой кислоты, общего и прямого билирубинов, магния, кальция, фосфора, железа, С-реактивного белка, общего холестерина, триглицеридов, липопротеинов высокой плотности, липопротеинов низкой плотности, рассчитывали коэффициент атерогенности, определяли концентрацию иммуноглобулинов А, G и М, активность -глутамилтранспептидазы, креатинкиназы, креатинкиназы-МВ фракции, лактатдегидрогеназы, б-амилазы, щелочной фосфатазы, липазы, аланинаминотрансферазы, аспартатаминотрансферазы. Анализ белковых фракций: альбуминов, б1-глобулинов, б2-глобулинов, в-глобулинов, г-глобулинов проводили на аппарате для электрофореза «Астра» (Россия).

Общий анализ крови проводился с помощью автоматического гематологического анализатора «Sysmex KX-21» («Roche», Япония) с помощью коммерческого набора реактивов фирмы «Roche». Скорость оседания эритроцитов определяли по унифицированной микрометодике Панченкова.

Статистическая обработка результатов проводилась с применением программ Statistica 7.0, S-Plus 2000, Microsoft Exсel. Были использованы статистические характеристики: средняя арифметическая (М), стандартная ошибка от средней арифметической (m), медиана (Ме), квартили (Q1 - Q3), max, min, стандартное отклонение (Std.dev.), 95 % интервал. Оценивали показатели скошенности и крутизны, отражающие асимметрию распределения, тесты на нормальность с помощью критерия Колмогорова-Смирнова с поправкой Лилиефорса и Шапиро-Уилки. Нами использовался непараметрический U критерий Манна-Уитни с поправкой Бонферони в качестве альтернативы t-критерию Стьюдента (Боровиков В., 2001; Реброва.В., 2002). С учетом отклонения от нормальности различных величин дисперсий, применяли непараметрический аналог дисперсионного анализа -- анализ Краскела-Уолллиса. Для изучения взаимосвязей показателей ротовой жидкости и сыворотки крови применяли корреляционный анализ Спирмена (Платонов А.Е., 2000).

Результаты и их обсуждение

Скрининг донорской крови на наличие серологических маркеров ВИЧ, вирусных гепатитов В и С производился методом иммуноферментного анализа с использованием подтверждающих тестов. Нами исследовано 101 427 проб, полученных с помощью аппаратного и дискретного плазмафереза, цитафереза, а также взятия цельной крови. Вся донорская кровь тестировалась также по показателю активности фермента аланинаминотрансферазы.

Рис.1 Результаты выявления HBsAg в донорской крови методом ИФА

Количество проб, содержащих HBsAg, составило 329 (0,32 %) по отношению к общему количеству донаций (рис.1).

Из 33 442 доноров инфицированными вирусом гепатита В оказалось 173 человека, что составляет 0,51 % от общего количества доноров. Из них мужчины составили 128 (0,64 %) человек, а женщины - 39 (0,30 %) человек. Необходимо подчеркнуть, что данное небольшое число инфицированных с выявленным HBsAg вируса гепатита В формируется в основном за счет доноров впервые сдавших кровь.

Из общего количества серопозитивных по HBsAg в подтверждающем тесте проб показатели активности АЛАТ оказались повышенными всего в 35 (10,9 %) образцах крови.



Рис 2. Результаты выявления антител IgM и IgG к вирусу гепатита С в донорской крови методом ИФА

Серопозитивными по суммарным антителам IgM и IgG к вирусу гепатита С после проведения подтверждающего теста оказались 1 479 проб (1,47 % по отношению к общему количеству донаций) (рис.2).

Из общего количества серопозитивных в подтверждающем тесте доноров показатели активности аланинаминотрансферазы оказались повышенными у 450 (30,4%) лиц (рис.3).

Рис. 3 Результаты тестирования серопозитивных по HBsAg и антителам к гепатиту С доноров на активность аланинаминотрансферазы

Данный показатель в 3 раза выше аналогичного при вирусном гепатите В так как вирус гепатита С оказывает более глубокое повреждающее воздействие на печень, в результате чего даже в фазу ремиссии заболевания ее функциональные возможности полностью не восстанавливаются.

По рекомендации ВОЗ в настоящее время принята двухэтапная схема серологической диагностики ВИЧ-инфекции, которая предусматривает на первом этапе обнаружение антител/антигенов ВИЧ с использованием тестов для совместного определения антител и р24 антигена ВИЧ с последующим отдельным подтверждением наличия антител в реакции иммунного блотинга и р24 антигена в тестах для его определения. (Болотова В.И., Худякова Е.Н., 1992).

Таблица 2

Результаты исследования донорской крови на наличие суммарных антител IgM и IgG к ВИЧ 1, ВИЧ 2 и ВИЧ антигена

Маркеры ВИЧ-инфекции	Обследовано донаций	Иммуноферментный анализ, первичный скрининг	Исследование первично серопозитиных проб методом иммунного блота
		Серопозитивные образцы,%	Серонегативные образцы, %	Серопозитивные образцы,%	Серонегативные образцы,%	Неопределенный результат, %
Антитела к ВИЧ, антиген р24	100 893	160 (0,16)	100 733 (99,8)	76 (47,5)	73 (45,6)	11 (6,9)

Среди обследованных доноров дважды серопозитивных по вирусу иммунодефицита человека в иммуноферментном анализе выявлено 160 лиц, что составляет 0,16 % от общего числа донаций. Серонегативных по данной инфекции оказалось 100 733 (99,8%) человека (табл. 2).

Таким образом, от 0,2 до 1,5 % потенциально опасной донорской крови удается выбраковывать по показателю инфицированности возбудителями социально значимых вирусных инфекций методом ИФА.

Однако отрицательный результат выявления серологических маркеров инфекции в иммуноферментном анализе даже при проведении подтверждающего теста не означает полной инфекционной безопасности крови и ее компонентов. Для гемоконтактных заболеваний существует период серонегативного «окна» - промежуток времени от момента инфицирования до появления серологических маркеров заболеваний, который может составлять несколько недель. Применение метода полимеразной цепной реакции, основанного на выявлении нуклеиновых кислот вирусов, может существенно сократить этот период (Бацких С.Н. с соавт., 2007, Brojer E. et al., 2006, Liu C.J. et al., 2006). В то же время, в некоторых случаях в период латентной стадии заболевания или при хроническом процессе сыворотка пациента содержит крайне низкий уровeнь РНК вируса гепатита С.

Некоторые исследователи считают, что ПЦР не может использоваться в качестве единственного метода в массовых скрининговых исследованиях (Allain J.P., 2004, Dhatti F.A. et al., 2007). Несмотря на более чем пятилетнюю практику внедрения ПЦР в качестве обязательного метода в службу крови некоторых стран, вопрос о целесообразности использования этого дорогостоящего метода в скрининге доноров остается открытым (Арсенин С.Л., 2001; Пак С.Г., Малов В.А., 2002; Legler T.G., 2000; Loubiere S., 2001; Bush M.P., 2003; Jackson M.P. et al., 2003; Pillonel J., 2005;).

В настоящее время тестирование донорской крови методом полимеразной цепной реакции на наличие вирусных нуклеиновых кислот в Российской Федерации не является обязательным. По Приказу Минздравсоцразвития РФ от 16.04.2008 N 175н только плазму, предназначенную для фракционирования, с отрицательными результатами серологических ИФА-тестов объединяют в минипулы и подвергают исследованию на наличие нуклеиновых кислот ВИЧ, вирусов гепатитов В, C.

С целью улучшения выявления гемотрансмиссивных вирусных заболеваний, в частности ВИЧ-инфекции, все отрицательные в ИФА образцы донорской крови были исследованы нами методом ПЦР.

Из 38 239 серонегативных донаций, исследованных методом полимеразной цепной реакции, РНК вируса гепатита С была обнаружена в 34 (0,09 %) пробах, не содержали РНК НСV - 38 205 (99, 91%) образцов крови.

Из 100 серопозитивных образцов вирусная РНК была обнаружена в 64 случаях (рис.4).

Рис.4. Результаты тестирования методом ПЦР доноров серопозитивных в ИФА по антителам к вирусу гепатита С

Из 30 691 донации, серонегативной в иммуноферментном анализе, удалось выявить 1 (0,003%) образец, который содержит РНК ВИЧ, что, свидетельствует о присутствии в данной пробе вируса иммунодефицита человека. Донор при сдаче крови находился в стадии «серонегативного окна», его длительность в среднем 1-3 недели. Большая часть донаций, а именно 30 690 (99,997%) проб не содержала РНК ВИЧ (табл. 3).

Таблица 3

Результаты выявления РНК ВИЧ в серонегативных образцах донорской крови

Маркер вируса иммунодефицита человека	Обследовано доноров	Результаты полимеразной цепной реакции
		РНК ВИЧ определена, %	РНК ВИЧ не определена, %
РНК ВИЧ	30 691	1 (0,003)	30 690 (99,997)

Небольшое количество выявленных положительных проб свидетельствует о высокой диагностической эффективности использованных в исследовании широко распространенных иммуноферментных тест-систем, в то же время благодаря генамплификационному методу выявляются доноры, находящие в стадии серонегативного «окна» или имеющие низкие концентрации серологических маркеров, кровь которых потенциально может быть перелита реципиентам. Проведенные исследования доказывают целесообразность тестирования на выявление нуклеиновых кислот ВИЧ и вирусных гепатитов в службе крови.

Эффективность лабораторной диагностики гепатита В ограничивает отсутствие в Российской Федерации нормативной базы по контролю качества неколичественных методов исследования. Обязательный контроль аналитической чувствительности в отечественной лабораторной практике проводится только с помощью Отраслевого стандартного образца, утвержденного ГИСК им. Тарасевича ОСО-HBsAg с концентрацией 20 МЕ/мл и не имеющего статуса Национального стандарта.

Одним из путей повышения эффективности лабораторной диагностики является улучшение аналитических характеристик применяемых в лабораторной практике диагностических тестов.

В 2007 году в Российской Федерации были зарегистрированных и разрешены к применению не имеющие зарубежных аналогов иммуноферментные тест-системы нового поколения для выявления и подтверждения HBsAg с чувствительностью 0,01 МЕ/мл, в 10 раз превышающей требуемую согласно Приказа МЗ РФ №322 от 21.10.02 г. - "ИФА-Бест- HBsAg" производства ЗАО "Вектор-Бест" и "ДС-ИФА- HBsAg-0,01" производства ООО "НПО "Диагностические системы". Для оценки их диагностической эффективности 534 образца сыворотки крови практически здоровых лиц были нами проанализированы одновременно в двух ИФА системах -"ИФА - Бест - HBsAg" и тест-системе "ДС - ИФА - HBsAg" с разрешенной в настоящее время чувствительностью выявления HBsAg 0,1 МЕ/мл (табл. 4).

Таблица 4

Результаты выявления HBsAg в тестах с разной чувствительностью

Кол-во	Тест с чувствительностью 0,01 МЕ/мл	Тест с чувствительностью 0,1 МЕ/мл
	Отриц. в скрининге	Первично полож.	Положит. в подтв. тесте	Отриц. в скрининге	Первично положит.	Положит. в подтв. тесте
			Абс.	% от общего кол-ва			Абс.	% от общего кол-ва
534	527	7	6	1,31	527	7	5	0,94

При первичном скрининге обе тест-системы выявили по 7 положительных образцов, 5 из которых совпали. После проведения подтверждающего исследования в более чувствительной системе подтвердились 6, а в менее чувствительной - 5 образцов, содержащих HBsAg - один положительный образец не был выявлен тест-системой с меньшей чувствительностью.

Меньшее количество неподтвержденных ложноположительных при первичном исследовании результатов в тест-системе нового поколения свидетельствует о более высокой специфичности наряду с более высокой чувствительностью.

Таким образом, тест-системы с повышенной чувствительностью выявления HBsAg позволяют выявлять образцы с низким его содержанием - на уровне одной инфицирующей дозы вируса гепатита В. Нам представляется целесообразным применение тестов с чувствительностью не менее 0,01 МЕ/мл при скрининге донорской крови. Экономические затраты на их внедрение существенно ниже, чем при организации массового скрининга доноров методом ПЦР, поскольку не требуется дополнительного оснащения лаборатории, дешевле тест-системы. Стоимость реагентов на одно определение составляет в среднем 12-15 рублей, что 1,8-2 раза больше, чем при использовании тестов с низкой чувствительностью, но в 3-4 раза меньше, чем стоимость одного определения методом ПЦР с использованием отечественных реагентов.

Одной из общих проблем лабораторной диагностики вирусных инфекций является высокая гетерогенность и изменчивость вирусов, появление трудно диагностируемых геномных мутаций. В настоящее время изучение мутантных форм HBsAg перешло из области академического интереса в практику, поскольку эти мутации могут обусловить ложнонегативный результат при первичном обследовании пациента, что особенно важно в службе крови, где выявление инфицированности вирусом гепатита В у доноров проводится только по одному тесту на обнаружение HBsAg (Levicnik-Stezinar S., 2004, Roque-Afonso A.M. et all., 2005, Tabor E., 2006). Согласно последним исследованиям, наиболее часто встречающимися «ускользающими» мутациями являются замены в 145 и 143 аминокислотных положениях б-детерминанты HBsAg (Уланова Т.И. с соавт., 2007, Bartholomeusz A., 2006).

В различных регионах циркулируют свои разновидности вируса гепатита В, поэтому постоянное изучение и контроль диагностических возможностей тест-систем в отношении «диких» и мутантных вариантов HBsAg является актуальным (Баженов Ф.И. и др., 2008, Weber B., 2005). «Ускользающие» HBsAg мутанты способны уходить от иммунологического, вакцинального или диагностического контроля. Влияние на диагностику генетической вариабельности вируса гепатита В определяется по уровню разрешения чувствительности иммунологических и молекулярно-биологических тестов. Ошибки при выявлении "ускользающих" HВsAg-мутантов вируса гепатита В обусловлены, прежде всего, широким использованием в современных диагностических тест-системах моноклональных антител (мАТ) к HBsAg. Применение в тест-системах мАТ, по сравнению с использованием поликлональных антител, повышает специфичность иммунодетекции HBsAg "дикого" типа. Однако, с другой стороны, их относительно узкая специфичность способна ограничивать возможности выявления мутантного HBsAg. Выявление мутантных форм HBsAg с такой же чувствительностью, которая достигнута для HBsAg «дикого» типа, является нерешенной проблемой. По мнению Scheiblaauer H. (2006) необходимо продолжать мониторинг чувствительности тест-систем для выявления HBsAg, исследовать значимость разных мутантных форм для иммуноферментной диагностики вирусного гепатита В.

Нам представляется важным оценить диагностические возможности разрешенных к применению в практике российского здравоохранения коммерческих иммуноферментных тест-систем отечественного производства в отношении разных субтипов и мутантных штаммов HBsAg.

Для проведения сравнительного исследования были взяты иммуноферментные наборы реагентов, предназначенные для выявления поверхностного антигена вируса гепатита В четырех российских производителей - «ДС - ИФА - HBsAg» (ООО «НПО «Диагностические системы»), «ИФА - HBsAg» (ЗАО «Эколаб»), «HBs - антиген - ДС» (ЗАО «Медикобиологический союз») с чувствительностью 0,1 МЕ/мл и «Вектогеп В - HBsAg» (ЗАО «Вектор-Бест») с чувствительностью 0,05 МЕ/мл.

Предварительно чувствительность взятых для сравнения тест-систем была проверена по отраслевому стандартному образцу HBsAg. Во всех четырех наборах он определялся в концентрации 0,125 МЕ/мл, что свидетельствует об их хорошей чувствительности при выявлении «дикого» типа поверхностного антигена вируса гепатита В.

В качестве контрольного материала была использована коммерческая панель сывороток, содержащих разные субтипы и мутантные формы HsAg в трех разведениях, представленные в таблице 5.

Таблица 5

Характеристика панели сывороток, содержащих HBsAg

№ сыворотки панели	Субтип, мутант HBsAg	Концентрация, у.е./мл, (1 у.е.=1 МЕ/мл)
1	ayw2	0,1
2	ayw2	0,05
3	ayw2	<0,05
4	ayw3	0,1
5	ayw3	0,05
6	ayw3	<0,05
7	ayw3,Var.A	0,1
8	ayw3,Var.A	0,05
9	ayw3,Var.A	<0,05
10	ayw3,Var.B	0,1
11	ayw3,Var.B	0,05
12	ayw3,Var.B	<0,05
13	adrq+	0,1
14	adrq+	0,05
15	adrq+	<0,05
16	ayw2 T134P	0,1
17	ayw2 T134P	0,05
18	ayw2 T134P	<0,05
19	ayw3 S143L	0,1
20	ayw3 S143L	0,05
21	ayw3 S143L	<0,05
22	adw3 G145R	0,16
23	adw3 G145R	0,08
24	adw3 G145R	<0,05

Таблица 6

Результаты выявления образцов панели разными тест-системами

Номер образца	Концентрация	«ДС-ИФА-HBsAg» ОП Крит-0,075	«Вектогеп В- HBsAg» ОП Крит-0,72	«ИФА - HbsAg» ОП Крит=0,059	«HBs-антиген-ДС» ОП Крит=0,119
		Оценка	ОП ср.	Оценка	ОП ср.	Оценка	ОП ср.	Оценка	ОП ср.
1	0,1	Пол	0,155	Пол	0,351	Пол	0,113	Пол	0,232
2	0,05	Отр	0,064	Пол	0,186	Отр	0,058	Пол	0,146
3	<0,05	Отр	0,050	Пол	0,109	Отр	0,045	Отр	0,118
4	0,1	Пол	0,139	Пол	0,187	Пол	0,070	Отр	0,091
5	0,05	Пол	0,077	Пол	0,146	Отр	0,052	Отр	0,096
6	<0,05	Отр	0,058	Пол	0,105	Отр	0,034	Отр	0,085
7	0,1	Пол	0,150	Пол	0,217	Пол	0,094	Пол	0,219
8	0,05	Отр	0,074	Пол	0,107	Отр	0,058	Пол	0,132
9	<0,05	Отр	0,046	Пол	0,105	Отр	0,041	Отр	0,095
10	0,1	Пол	0,170	Пол	0,283	Пол	0,107	Пол	0,212
11	0,05	Пол	0,095	Пол	0,135	Пол	0,062	Пол	0,133
12	<0,05	Отр	0,049	Пол	0,078	Отр	0,045	Отр	0,099
13	0,1	Пол	0,123	Пол	0,277	Пол	0,091	Пол	0,205
14	0,05	Отр	0,068	Пол	0,146	Сомн.	0,059	Пол	0,132
15	<0,05	Отр	0,045	Пол	0,086	Отр	0,039	Отр	0,096
16	0,1	Пол	0,112	Пол	0,167	Пол	0,079	Пол	0,156
17	0,05	Отр	0,046	Пол	0,238	Отр	0,047	Отр	0,083
18	<0,05	Отр	0,057	Пол	0,129	Отр	0,042	отр	0,109
19	0,1	Пол	0,822	Пол	1,220	Пол	0,400	Отр	0,066
20	0,05	Пол	0,099	Пол	0,130	Отр	0,052	Отр	0,063
21	<0,05	Отр	0,027	Отр	0,047	Отр	0,025	Отр	0,067
22	0,16	Отр	0,027	Пол	0,163	Отр	0,024	Отр	0,060
23	0,08	Отр	0,020	Пол	0,088	Отр	0,023	Отр	0,062
24	<0,05	Отр	0,19	Отр	0,030	отр	0,021	Отр	0,064

Субтипы HBsAg ayw2, ayw3 Var.А, ayw3 Var.B, adrq+, ayw3 T134P в максимальной концентрации были выявлены всеми тест-системами, а вариант В субтипа ayw3 даже в концентрации 0,05 МЕ/мл (табл. 6 ).

Тест-система «HBs-антиген-ДС», основанная на применении моноклональных антител, не определила HBsAg субтипа ayw3 ни в одном из разведений.

Мутации в 143 и 145 аминокислотных положениях в концентрации менее 0,05 МЕ/мл не удалось обнаружить ни одной из испытуемых тест-систем. Обращает на себя внимание, что три образца с содержанием HBsAg субтипов ayw3, ayw3 Var.B и мутацией в 143 положении были выявлены тест-системой «ДС-ИФА-HBsAg» в концентрации 0,05 МЕ/мл, что свидетельствует о большей, чем заявленная производителем, чувствительности в отношении этих вариантов HBsAg .

Все образцы, кроме мутаций в 143 и 145 положении в концентрации менее 0,05 МЕ/мл определила правильно только тест-система «Вектогеп В - HBsAg», имеющая большую чувствительность.

Наиболее сложной в диагностике оказалась мутация G145R нативного HBsAg генотипа D, субтипа adw3. Три тест-системы не выявили ее ни в одном из разведений, а тест-система, показавшая лучшие результаты, не определила ее в минимальной концентрации. Таким образом, полученные нами данные свидетельствуют о неспособности разрешенных к применению в практике здравоохранения тест-систем с чувствительностью 0,1 МЕ/мл выявлять отдельные субтипы и мутации HBsAg.

Целесообразно включать образцы, содержащие наиболее распространенные на территории Российской Федерации мутантные штаммы HbsAg, в состав контрольных панелей Федеральной системы внешней оценки качества. Несмотря на отсутствие в нашей стране регламентированных требований по входному контролю качества поступающих в диагностические лаборатории тест-систем для выявления HBsAg, можно рекомендовать самостоятельное проведение такого контроля лабораториями службы крови с использованием доступных контрольных материалов. Включение в перечень требований к оценке тест-систем контролирующими и регистрирующими органами РФ способности выявлять наиболее распространенные мутации HBsAg способствовало бы повышению эффективности выявления инфицированности ВГВ, повысило безопасность переливания крови и ее компоненов.

По современным представлениям, до 80 % лабораторных ошибок приходится на преаналитический и аналитический этапы лабораторных исследований. Диагностическая эффективность современных высокочувствительных и специфичных иммунохимических и молекулярно-биологических методов может быть снижена при недооценке влияния различных источников ошибок на этих этапах лабораторного анализа.

В немногочисленных исследованиях отмечено, что растворы и пары 6% перекиси водорода и хлорсодержащих дезинфектантов оказывают значительное негативное влияние на результаты исследований методом иммуноферментного анализа (Нетесова И.Г. и др., 2005, Ястребова О.Н. и др., 2006). Экзогенный пероксид водорода, попадающий в лунки иммунологического планшета, например, с загрязненных наконечников для дозирующих устройств, лабораторной посуды, может конкурировать с субстратом в ходе ферментативной стадии анализа, что приводит к искажению полученных результатов. В последнее годы появились новые классы многокомпонентных дезинфектантов, состоящих из разных по механизму действия активнодействующих веществ, влияние которых на результаты иммунохимических методов исследования не изучено. Многочисленность этих средств с учетом их полифункциональности, зачастую создает трудности при выборе наиболее безопасных с аналитической точки зрения вариантов (Селькова Е.П. с соавт.,2006).

С целью выбора оптимальных методов и средств дезинфекции в клинико-диагностических лабораториях нами было изучено влияние 9 разрешенных к применению в практике здравоохранения дезинфицирующих средств разных классов на результаты иммуноферментного анализа (табл. 7).

Для проведения экспериментов использовались образцы сыворотки крови, содержащие и не содержащие антитела к вирусу гепатита С. По 100 мкл испытуемых дезинфектантов в рабочих разведениях добавлялись в 10 мл разводящих растворов коньюгата и хромогена для моделирования попадания микроколичеств дезрастворов в лунки планшета.

Таблица 7

Характеристика дезинфектантов

Группы препаратов	Дезинфектант (концентрация рабочего р-ра)
Амины	«Биолок» (1%)
Четвертичные аммониевые соединения (ЧАС)	«Велтолен-Экстра» (2%)
Четвертичные аммониевые соединения +спирт	«Самаровка-Комби» (0,5%)
Четвертичные аммониевые соединения + производные гуанидина	«Дезавид+» (5%)
Производные гуанидина	«Дез-Яхонт» (0,5%)
Альдегиды	«Гигасепт ФФ» (5%)
Спирты	Этиловый спирт (70%)
Кислородсодержащие препараты	Перекись водорода (6%)
Хлорсодержащие препараты	Гипохлорит кальция (3%)

Как показали эксперименты, в присутствии перекиси водорода и хлорсодержащего препарата значения оптической плотности отрицательных образцов существенно возрастали, при этом часть образцов из области отрицательных значений переходила в положительные (рис.5).

Влияние на положительные образцы выражалось в снижении оптической плотности и оценке части результатов как отрицательных. В то же время современные композиции дезинфицирующих средств, содержащие активные вещества других групп (этанол, гуанидины, четвертичные аммониевые соединения (ЧАС) и их комбинации), не оказывают существенного влияния на качество анализа высокоположительных образцов сыворотки крови. Влияние их на слабоположительные и отрицательные сыворотки оказалось разнонаправленным.

Рис. 5 Влияние дезинфектантов на серонегативные сыворотки

Влияние на положительные образцы выражалось в снижении оптической плотности и оценке части результатов как отрицательных. В то же время современные композиции дезинфицирующих средств, содержащие активные вещества других групп (этанол, гуанидины, четвертичные аммониевые соединения и их комбинации), не оказывают существенного влияния на качество анализа высокоположительных образцов сыворотки крови. Влияние их на слабоположительные и отрицательные сыворотки оказалось неоднозначным.