Медицинская микробиология

При положительной реакции в течение 1 часа развивается коричневое окрашивание, интенсивность которого зависит от количества меченных антител, связанных в иммунном комплексе. Для определения неизвестных антител (например, с целью серодиагностики сифилиса или ВИЧ-инфекции) на поверхности лунок сорбируют известный антиген, затем добавляют исследуемую сыворотку крови, промывают, вносят сыворотку с антителами против иммуноглобулинов человека, меченную ферментом,и, после вторичной промывки, добавляет хромогенный субстрат. Учитывают так же. ИФА отличается высокой чувствительностью и специфичностью.

Современные методы молекулярной биологии

ПЦР. В настоящее время метод амплификации нуклеиновых кислот полимеразной цепной реакцией (ПЦР) широко используется в практической медицине. Основным достоинством метода ПЦР является чрезвычайно высокая чувствительность анализа - до 1 копии геномной ДНК возбу-дителя инфекции в исследуемой пробе до 100 копий генома в исследуемой пробе.

Возможности, заложенные в методе ПЦР, позволяют достигать максимальной специфичности анализа, т.е. способности выявлять ДНК конкретного инфекционного агента в присутствии ДНК других микроорганизмов и ДНК организма-хозяина. К настоящему времени метод автоматизирован и позволяет, при необходимости, получать результаты анализа в течение одного рабочего дня.

ПЦР в настоящее время используется для: ранней диагностики инфекционных заболеваний у серонегативных пациентов, когда лечение наиболее эффективно; выявления персистирующих, латентных и рецидивирующих форм инфекций; контроля эффективности лечения; диагностики оп-портунистических инфекций, часто протекающих на фоне иммунодефицита, вследствие чего постановка диагноза только по результатам серологических исследований затруднена из-за имеющихся несоответствий между параметрами иммунного ответа и протёкания заболевания; разрешения сомнительных результатов серологических исследований; эпидемиологических исследо-ваний; выявления наиболее патогенных штаммов инфекционных агентов; исследования инфекционности пулированных образцов крови и ее продуктов, применяемых в терапии.

Инфекционный агент: Вирус гепатита В, Вирус гепатита С, Цитомегаловирус, Вирус простого герпеса, Вирус Эпштейна-Барра. Герпес-вирус типа 6 (HHV-6), Хламидии (trachomatis). Уреа-плазмы (urealiticum), Микоплазмы (hominis), Трихомонас (vaginalis), Гонококки (Gonorrhoeae neisseria), Гарднерелла (vaginalis), Листерии (monocytogenes), Микобактерий (tuberculosis), ВИЧ, выявление мутации в гене CKR-5 и др.

Ход исследования:

На первой стадии при температуре 94°С (или выше) происходит денатурация двойной цепи исследуемой ДНК (стадия денатурации).

На второй стадии используют праймеры, строго специфичные к определенным участкам цепей исследуемой ДНК они связываются с этими участками ДНК (стадия отжига). На третьей стадии при температуре 70-72°С с участием термофильной ДНК-полимеразы происходит синтез новых цепей ДНК. Инициация синтеза ДНК происходит в местах связывания праймеров с исследуемой ДНК, матрицей для синтеза служат исходные цепи ДНК (стадия полимеризации).

Таким образом, за цикл, включающий три стадии, происходит удвоение каждой из двух цепей ДНК. При проведении 20 таких циклов теоретически происходит увеличение количества исходной ДНК в миллион и более раз. Образовавшийся специфический продукт ПЦР (ампликон) в подавляющем большинстве случаев детектируют методом электрофореза в агарозном или полиакриламидном гелях, сравнивая с контрольными образцами.

Для ПЦР-анализа РНК-содержаших инфекционных агентов предварительно проводят стадию обратной транскрипции - получения ДНK, комплементарной вирусной РНК-матрице, для чего используют специфические праймеры к РНК и фермент - РНК-зависимую ДНК-полимеразу (обратную транскриптазу). Далее ПЦР-анализ проводят по схеме, описанной выше.

Для ПЦР анализа используют разнообразный клинический материал: кровь, сыворотку крови, форменные элементы крови, мочу, слюну, соскобы и мазки со слизистых, ликвор, слезную жидкость, содержимое везикул, биоптаты органов и тканей. Для исключения контаминации забор проб производят только одноразовым инструментарием (шприцы, соответствующие зонды, пробоотборники и пр.). Взятый материал помещают в одноразовые пробирки (например, типа "Эппендорф") Для более эффективного использования результатов ПЦР-анализа врачами-клиницистами при постановке, подтверждении диагноза или контроле за лечением нами предложена следующая, система полуколичественной оценки результатов анализа: + - 50-500 копий геномов на пробу; ++ - 500-5000 копий геномов на пробу; +++ - 5000-50000 копий геномов на пробу; ++++ - более 50000 копий геномов на пробу;

Иммуноблоттинг

Качественный метод, позволяющий выявлять антигены и антитела в исследуемой пробе.

Для выявления антител:

Исследуемую сыворотку больного инкубируют с известными антигенами нанесенными на нитроцеллюлозную мембрану, затем добавляют меченную диагностическую сыворотку против иммуноглобулинов человека.

Для выявления антигена:

С помощью электрофореза разделяют белки в исследуемой пробе от больного, затем их переносят на нитроцеллюлозную мембрану и добавляют меченную диагностическую сыворотку против известных антигенов

Иммуноблоттинг широко применяется для подтверждения твердофазного иммуноферментного анализа.



Характеристика некоторых реакции иммунитета (РИ)

РИ Направление исследования

Ингредиенты Дополн.

ф-р Феномен (учетный признак)

Антиген Антитело

РА 1 .Серодиагностика Корпускулярный

диагностикум

(взвесь клеток) Агглютинины

сыворотки крови больного (Х)2 ИХН Образование хлопьев агглютината

2.Идентификация

клеток Взвесь микробных

или др. клеток (X) Агглютинины диагностич. сыворотки Тот же Тот же

РПГА 1.Серодиагностика Эритроцитарный

антигенный диагностикум Агглютинины

сыворотки крови больного (Х) Тот же Образование рыхлого осадка эритроцитов

2.Индикация

антигена Корпускулярный

или растворимый Эритроцитарный иммуноглобулиновый

диагностикум Тот же Тот же

РП Индикация

антигена Прозрачный экстракт (X) Преципитины

диагн. с-ки Тот же Выпадение

осадка

РН 1. Идентификация

токсина Токсинсодер-

жащий экстракт (X) Антитоксины

диагн. сыворотки Тот же Отсутствие

отравления и гибели животных

2.Определение

титра антитоксина Препарат токсина

в известной дозе Испытуемая сыворотка (X) Тот же Тот же

ИФ Индикация

антигена Корпускулярный

(Х) Антитела, меченные флюорохромом Тот же Свечение

клеток при УФО

ИФА 1.Индикация

антигена Корпускулярный

или растворимый

(X) 1 .Фиксированнные AT

2.АТ, меченные

ферментом пероксидазой 1. ИХН

2. 5-АСК

3. Н2Н2 Цветная

реакция

2.Серодиагностика Фиксированный известный 1.Сыворотка больного (X) 2.Антиглобулиновые AT, меченные ферментом Тот же Тот же

Медицинские иммунобиологические препараты

Иммунобиологическими называют препараты, которые оказывают влияние на иммунную систему, действуют через иммунную систему или принцип действия которых основан на иммунологических реакциях, а так же препараты для нормализации состава аутомикрофлоры.

Иммунобиотехнология разработала к настоящему времени более 1000 иммунобиологических препаратов.

Различают следующие группы медицинских иммунобиологических препаратов (МИБП):

- вакцины

- лечебные сыворотки и иммуноглобулины

- препараты из живых микроорганизмов или микробных продуктов (фаги, эубиотики, ферменты)

- иммуномодуляторы

- диагностические препараты (диагностические сыворотки, диагностикумы, аллергены, бактериофаги).

Действие МИБП может быть активным и пассивным, специфическим и неспецифическим.

Активное приводит к активации иммунной системы на выработку антител или клеточно-опосредованных реакций (например, при вакцинации).

Пассивное - к созданию иммунитета, минуя активацию иммунной системы (при введении готовых иммуноглобулинов).

Специфическое - если оно направлено против конкретного антигена (например, противогриппозная вакцина или противодифтерийная сыворотка).

Неспецифическое - приводит к активации иммунной системы и или факторов естественной резистентности в целом (например, активация фагоцитоза или пролиферация иммуноцитов под влиянием иммуномодуляторов).

Характеристика вакцинных препаратов

Классификация вакцин

Живые вакцины Корпускулярные

инактивированиые

вакцины Надмолекулярные вакцины Молекулярные вакцины

Аттенуированные Цельноклеточные

На основе протек-

тивных антигенов

(субъединичные и

субклеточные)

Биосинтетические (ана-токсины)

Дивергентные

Цельновирионные

Химически-

синтезированные антигены

Векторные (рекомбинантные) Генноинженерные

В настоящее время для профилактики инфекционных заболеваний применяют следующие вакцинные препараты:

1) Вакцины живые составляют примерно половину из всех применяемых в практике вакцин. Живые вакцины при введении в организм (обычно в дозе 1 тыс.-1 млн. клеток) приживаются, размножаются, вызывают вакцинальный процесс и формирование активного иммунитета против со-ответствующего возбудителя. Вакцины получают из аттенуированных вакцинных штаммов или из непатогенных для человека природных (дивергентных) штаммов, имеющих общие антигенные свойства с болезнетворными патогенными штаммами представляют собой взвеси выращенных на различных питательных субстратах вакцинных штаммов. Основным свойством живого аттенуированного штамма, используемого в производстве вакцин, является стойкая утрата вирулентности при сохранении способности вызывать иммунную реакцию, схожую с естественной. Вакцинный штамм размножается в организме хозяина и индуцирует клеточный, гуморальный, секреторный иммунитет, создавая защиту всех входных ворот инфекции. Главными преимуществами живых вакцин являются:

-- высокая напряженность, прочность и длительность создаваемого ими иммунитета;

-- возможность применения не только путем подкожного введения, но и другими, более простыми путями (накожно, перорально, интраназально).

Живые вакцины имеют ряд недостатков:

-- сложно комбинируются и плохо дозируются;

-- категорически противопоказаны людям, страдающим иммунодефицитом;

-- вызывают вакцинно-ассоциированные заболевания

-- относительно нестабильны;

-- естественно циркулирующий дикий вирус может тормозить репликацию вакцинного вируса и снизить эффективность вакцины; это отмечалось в отношении вакцинных штаммов полиовируса, размножение которого может подавляться при инфицировании другими энтеровирусами.

В процессе производства, транспортировки, хранения и применения живых вакцин, находимо строго соблюдать меры, предохраняющие микроорганизмы от гибели и гарантирующие сохранение активности препаратов (холодовая цепь).

В Российской Федерации живые вакцины широко применяют с целью специфической профилактики полиомиелита, кори, эпидемического паротита, гриппа, туберкулеза, чумы, туляремии, бруцеллеза, сибирской язвы.

2) Убитые вакцины (инактивированные) получают путем получаемые путем инактивации выращенных штаммов различными методами таким способом, который приводит лишь к минимальному повреждению структурных белков. Чаще всего с этой целью прибегают к мягкой обработке формалином, фенолом, спиртом. Инактивируют нагреванием при температуре 56 С в течение 2-х часов, УФ-лучами. Иммуногенность инактивированных вакцин ниже в сравнении с живыми, иммунитет менее напряженный и непродолжительный.

Убитые вакцины имеют следующие преимущества:

1) хорошо комбинируются, дозируются;

2) не вызывают вакцинно-ассоциированных заболеваний

3) применяются у людей, страдающих иммунодефицитами

В Российской Федерации применяют убитые вакцины (против брюшного тифа, холеры, бешенства, гриппа, клещевого энцефалита, лентосиироза, коклюша.

Лечебные убитые вакцины против бруцеллеза, дизентерии, гонореи, стафилококковых инфекций. Лечебный эффект достигается за счет активации работы иммунной системы и факторов естественной резистентности организма. Лечебные убитые вакцины применяют при хронических, вялотекущих инфекциях; вводят в/мышечно, дозировано под контролем состояния больного.

К недостаткам корпускулярных вакцин (живых и убитых) следует отнести наличие в их составе большого количества «балластных» АГ и других компонентов, не участвующих в формировании специфической защиты; они способны оказывать токсическое и/или аллергизируюшее влияние на организм.

3) Химические вакцины содержат отдельные компоненты (обладающие иммуногенностью) извлекаемые из микроорганизмов различными химическими методами Химические вакцины имеют следующие преимущества:

-- менее реактогенны, пригодны для детей дошкольного возраста

Химические вакцины имеют ряд недостатков:

-- иммуногенность химические вакцин ниже в сравнении с живыми, поэтому часто в такие препараты добавляют адъювант (гидрат окиси алюминия).

В Российской Федерации применяют вакцины для профилактики брюшного и сыпного тифов, менингококковую, гриппозную и др.

4) Анатоксины, анатоксины, получают путем обезвреживания формалином токсинов, являющихся продуктом метаболизма некоторых патогенных микроорганизмов. Они предназначены для иммунизации людей, используются в виде очищенных, концентрированных препаратов, адсорбированных на гидрате окиси алюминия. Для очистки их от балластных веществ нативные анатоксины подвергают специальной обработке различными химическими методами, в результате чего препараты не только освобождаются от балластных веществ, но и концентрируются по объему, что позволяет вводить необходимую дозу препарата в значительно меньшем объеме. Иммунная система человека не способна эффективно отвечать на одновременное введение нескольких антигенов. Адсорбция антигенов резко повышает эффективность вакцинации. Это объясняется тем, что в месте инъекции адсорбированного препарата создается «депо» антигенов, характеризуется замедленным их всасыванием; дробное поступление антигена из места инъекции обеспечивает эффект суммации антигенного раздражения и резко повышает иммунный эффект.

Анатоксины имеют следующие преимущества:

- препараты относительно термостабильны, однако

Анатоксины имеют ряд недостатков:

- индуцируют только антитоксический иммунитет, что не позволяет предотвратить бактерионосительство и локализованные формы заболеваний

- не допускается замораживание адсорбированных препаратов (АДС, АС, АД, АДС-м, и т.д.).

- требуются повторные ревакцинации

Синтетические и полусинтетические вакцины, разрабатываемые в рамках проблемы повышения эффективности и снижения побочного действия вакцин, состоят из антигена или его детерминанта в молекулярном виде, полимерного носителя (для придания макромолекулярности) и адъюванта, неспецифически повышающего иммуногенность АГ. В качестве носителя используют полиэлектролиты (винилпирролидон, декстран), с которыми соединяют АГ. Разрабатываются син-тетические вакцины против гриппа, гепатита В и др.

5) векторные вакцины получают генно-инженерным способом. Получены сотни рекомбинантных штаммов бактерий, вирусов, дрожжей, несущих определенный антиген (например, сальмонеллезная вакцина против гепатита В)

6) молекулярные вакцины получают путем биосинтеза (анатоксины) или химического синтеза (антигенные компоненты ВИЧ, гепатитов); молекулярные генноинженерные вакцины получают из протективных антигенов, которые нарабатывают рекомбинантные штаммы микроорганизмов (вакцина дрожжевая против гепатита В, против малярии и др.).

7) Ассоциированные вакцины (поливакцины) включают антигены нескольких микробов и нередко в различных видах (убитые клетки, анатоксины и др.), что позволяет одновременно иммунизировать против нескольких инфекций.

В РФ используют одну ассоциированную вакцину АКДС (вакцина АКДС содержит убитые коклюшные бактерии и 2 анатоксина - дифтерийный и столбнячный); за рубежом широко используют ассоциированные вакцины - тетракокк (коклюш, дифтерия, столбняк, полиомиелит); вакцина MMR (корь, эпидемический паротит, краснуха) и др.

Дифтерийный анатоксин (АД): содержит антиген в виде обезвреженного (0,4% р-ром формалина, при 370С, в течение 1 месяца) дифтерийного экзотоксина, соединенного с адъювантом; дозируется в мл, в 1 мл содержится 10 ЛФ (флоккулирующих единиц) дифтерийного анатоксина; используется для плановой специфической профилактики дифтерии путем парентерального (внутримышечно или глубоко подкожно) введения: действие основано на формировании искусственного активного антитоксического иммунитета к дифтерийному токсину.

Способы введения вакцин

1. Внутримышечный способ введения является основным при использовании сорбированых препаратов (АКДС-вакцина, АД, АДС-м, АС, АД-м-анатоксины и др.), поскольку местная реакция при этом менее выражена, чем при подкожном введении. Именно поэтому детям указанные выше препараты вводят только, внутримышечно, взрослым же допускается и подкожный способ вакцинации анатоксинами. Сорбированные вакцины перед введением необходимо тщательно перемешивать путем встряхивания ампул. микробиологический антибиотик инфекция иммунитет

В отношении некоторых препаратов (вакцина против гепатита В) внутримышечный способ введения используют в связи с тем, что при нем происходит более интенсивный иммунный ответ. Для этого вакцину против гепатита В вводят в дельтовидную мышцу.

В связи с большей возможностью повреждения сосудов при внутримышечном введении этот способ иммунизации у больных гемофилией должен быть заменен на подкожный.

Следует также указать, что рекомендации США и ряда других стран предусматривают после укола оттягивание поршня шприц причем вакцина может быть введена только при отсутствии крови в шприце. В противном случае вся процедура должна быть повторена.

2. Подкожная вакцинация обычно используется при введении несорбированных препаратов (коревая, паротитная, менингококковая и другие полисахаридные вакцины). Местом инъекции является подлопаточная область или область поверхности плеча (на границе верхней и средней трети). Внутрикожное введение препаратов осуществляют в область наружной поверхности плеча (введение вакцины БЦЖ) или при постановке внутрикожных проб (реакция Манту, введение лошадиной сыворотки, разведенной 1: 100, введение алергенов и т.п.), в область сгибательной поверхности предплечья. Внутрикожный способ введения требует особо тщательного соблюдения методики: вакцинатор натягивает кожу вакцинируемого большим и указательным пальцем и другой рукой медленно вводит иглу (скосом вверх) в кожу почти параллельно ее поверхности приблизительно на 2 мм. При введении препарата, проводит с определенным напряжением, должна появиться лимонная корочка». При введении объема 0,1 мл ее диаметр равен 6--7 мм.

Необходимо подчеркнуть, что нарушение техники внутрикожного введения вакцины БЦЖ (БЦЖ-м) может привести к образованию холодных абсцессов.

3. Накожная (скарификационная) вакцинация используется при проведении прививок

живыми вакцинами против особоопасных инфекций (чумы, туляремии и др.). При этом каплю (капли) вакцины, нанесенной в соответствующем месте на поверхность кожи (обычно наружную поверхность на границе верхней и средней трети), сухим оспопрививочным пером наносят регла-ментированное число поверхностных неглубоких (допускается появление «росинок» крови) надрезов. При проведении надрезов кожу рекомендуется натягивать как при внутрикожном введении.

Необходимо при введении того или иного препарата строго соблюдать регламентированную дозу (объем). Следует учитывать, что нарушение дозировки при использовании сорбированных препаратов, так же как и БЦЖ вакцины, может быть результатом их перемешивания. В этой связи к требованию «тщательно встряхнуть перед употреблением» надо отнестись очень добросовестно. Прививку следует проводить в положении лежа или сидя во избежание падения при обморочных состояниях, которые встречали, хотя и чрезвычайно редко, во время процедуры у подростков и взрослых. Наблюдение за привитыми осуществляется в соответствии с инструкцией по применению препарата в течение первых 30 минут.

Перспективы создания новых вакцин

Вакцины для местного введения

Ведется разработка аэрозольных вакцин, предназначенных для интраназального введения, особенно вакцин против респираторых вирусов и вируса кори. Они должны стимулировать выработку антител у входных ворот инфекции.

2. Субъединичные вакцины

Субьединичные компоненты можно получить расщеплением вириона, благодаря чему вакцина будет содержать только те компоненты, которые необходимы для индукции протективных антител. Этот подход предполагает применение более эффективных процедур очистки, удаляющих невирусные белки и снижающих вероятность побочных реакций на вакцину. Очищенный материал можно вводить в более концентрированной форме, содержащей большее количество специфического иммуногена.

3. Аттенуация вирусов путем генетического манипулирования

Ведется работа по получению рекомбинантов или мутантов, которые можно использовать для приготовления живых вирусных вакцин. Предполагают, что в результате получения измененного, но не инактивированного вируса будут созданы вакцины, при введении которых вирус может размножаться, но реверсии к вирулентности происходить не будет.

4. Рекомбинантные ДНК

Использование авирулентных вирусных векторов. Методы рекомбинантных ДНК используют для вставки гена, кодирующего иммунизирующий белок одного вируса в геном другого авирулентного вируса, который можно вводить в виде вакцины. В качестве векторов можно использовать не только авирулентные вирусы, но и бактерии, дрожжи.

Сконструирована живая рекомбинантная вакцина против гепатита А, в которой аттенуированные бактерии Salmonella typhimyrium служат вектором для доставки иммуногена при пероральном введении вакцины.

Характеристика лечебных сывороток и иммуноглобулинов

К этой группе МИБП, действующим началом, которым являются антитела, относят лечебно-профилактические иммунные сыворотки и иммуноглобулины (концентраты антител).

Иммунные сыворотки получают из крови животных (лошадей, ослов, мулов) после гипериммунизации их соответствующими антигенами (вакцинами), а также из крови иммунизированных людей (доноров), плацентарной или абортной крови.

Иммуноглобулины получают из нативных иммунных сывороток после удаления из них балластных веществ и концентрирования антител физико-химическими методами (с применением ферментов, спирта, высаливания, ультрафильтрации, аффинной хроматографии).

Иммунные сывороточные препараты, полученные из крови животных называются гетерологичными, из крови людей - гомологичными.

Активность сывороточных препаратов выражают в титрах антител (вируснейтрализующих, комплементсвязывающих и т.д.), активность (силу) антитоксических сывороток - в международных, антитоксических единицах (ME; AE) по способности нейтрализовать определенную дозу (например, 100 DLM) соответствующего экзотоксина. Дозируют эти препараты в мл. Контролируют их активность, стерильность, безвредность; выпускают, как правило, в жидком виде. Применяют иммун-ные сывороточные препараты для специфической терапии и экстренной профилактики (при непосредственной угрозе заражения или отравления) за счет быстрого создания искусственного пассивного иммунитета. Основной механизм их действия сводится к связыванию и нейтрализации антителами бактерий, вирусов и их антигенов. Сывороточные препараты вводят парэнтерально (внутримышечно, подкожно, реже внутривенно). Эффект наступает сразу после введения и продолжается в течение 4-5 недель (гомологичные).

Гетерологичные препараты, особенно при повторном введении могут вызвать аллергические реакции на чужеродный белок, поэтому перед их введением обязательно проводят пробу на повышенную чувствительность организма к чужеродному белку. Например, перед введением лошадиной иммунной сыворотки необходимо вначале ввести внутрикожно 0,1 мл лошадиной сыворотки в разведении 1:100 и, если в течение 20 мин отсутствует выраженная кожная реакция (диаметр зоны покраснения и припухлости не превышает 9 мм), ввести такое же количество неразведенной сыворотки и наблюдать еще в течение 40 мин. после чего вводят всю дозу сыворот ки внутримышечно. При положительной пробе т. е. более 9 мм препарат применяют по жизненным показаниям. Проводят десенсибилизацию организма по принципу, предложенному A.M. Безредко. Сыворотку в разведении 1:100 вводят дробно подкожно в объеме 0,5, 2,0, 5,0 мл с интервалом 20 мин, затем подкожно 0,1 и 1,0 мл неразведенной сыворотки и затем всю дозу на фоне средств антишоковой терапии или под наркозом. Антитоксические сыворотки целесообразно вводить как можно раньше, поскольку антитела способны нейтрализовать экзотоксин только до его адсорбции на клетке - «мишени».

Препараты содержат консервант - хлороформ хранятся при температуре холодильника +60С

Гетерологичные препараты имеют строго ограниченное применение из-за опасности аллергических осложнений; используются при лечении дифтерии, столбняка, газовой анаэробной инфекции, бешенства, сибирской язвы и других инфекций.

Гомологичные сывороточные препараты широко применяют для профилактики и лечения кори, гриппа, вирусного гепатита, клещевого энцефалита, для лечения столбняка, ботулизма, стафилококковых и других инфекций. Нормальный иммуноглобулин человека, получаемый из пула (смеси) донорской плазмы или плацентарной крови, используют для экстренной профилактики и лечения кори, коклюша, менингококковой инфекции, полиомиелита, скарлатины и других инфекций; антитела к их возбудителям присутствуют у здоровых людей в результате бытовой иммунизации, перенесенных инфекций или вакцинацией.

Пример описания лечебных сывороток и иммуноглобулинов

Противодифтерийная сыворотка 20 т ME: гетерологичная, лечебно-профилактическая антитоксическая сыворотка, полученная путем гипериммунизации лошадей дифтерийным анатоксином; содержит антитела, нейтрализующие дифтерийный анатоксин, в количестве 20 тысяч международных единиц; применяют для лечения дифтерии; препарат вводят парэнтерально с предварительной постановкой внутрикожной пробы на чувствительность к чужеродному белку; сразу после введения создается искусственный пассивный антитоксический иммунитет к дифтерийному токсину, который сохраняется в течение 2 - 3-х недель.

Иммуномодуляторы

К иммуномодуляторам относят лекарственные вещества (естественного происхождения или синтетические), способные стимулировать, угнетать или регулировать иммунные реакции в результате воздействия на иммунокомпетентные клетки и иммунные процессы.

По происхождению иммунокорректоры делятся на три группы:

1. Препараты экзогенного происхождения.

К этой группе относятся вещества микробного (в основном бактериального и грибкового) происхождения: пирогенал (липополисахарид Ps. aeruginosa), продигиозан (липополисахарид Ps. prodigiosum), рибомунил (комплекс рибосом Kl. pneumoniae, Str. pneumoniae, Str. pyogenes, H. influenzae и мембранных пептидогликанов Kl.pneumoniae), нуклеинат натрия (натриевая соль дрожжевой нуклеиновой кислоты, получаемая из дрожжей). Показанием к их применению являются хронические инфекции бактериальной, грибковой или вирусной природы.

2. Препараты эндогенного происхождения.

Эти иммунорегуляторные пептиды образуются в центральных органах иммунной системы (вилочковой железе, костном мозге) и их получают путем экстрагирования. Препараты тимусного проихождения - Т-активин, тималин, тимоптин, тимактид, тимостимулин, вилозен (пептиды из ви-лочковой железы крупного рогатого скота) -- показаны больным с поражением Т-системы иммунитета или с аллергическими заболеваниями у них дыхательных путей. Препараты костномозгового происхождения - миелопид (пептиды, синтезируемые клетками костного мозга)- применяются при заболеваниях с поражением гуморального звена иммунитета (В-системы).

К препаратам эндогенного происхождения относятся и цитокины - (биологически активные белки, продуцируемые лимфоцитами и макрофагами - интерлейкины, монокины и интерфероны. В медицинской практике используются генноинженерные рекомбинантные препараты: молграмостин, (лейкомакс), реаферон (альфа-интерферон) и др. Эти иммуностимуляторы применяют при лечении вирусных инфекций, опухолей и лейкопении.

3. Синтетические и химически чистые препараты.

Эта группа объединяет синтетические аналоги препаратов эндогенного или экзогенного происхождения, такие как тимоген (глутамил-триптофан - синтетический аналог Т-активина), ликопид (глюкозаминилмурамил дипептид - минимальный компонент клеточной стенки всех бактерий). Показанием к их применению являются заболевания, сопровождающиеся поражением клеточного иммунитета, острые и хронические гнойно-воспалительные процессы, хронические заболевания легких, кожи, псориаз.

К этой же группе относят и ранее известные левамизол и диуцифон обладающие иммуностимулирующими (иммуномодулирующими) свойствами. Их применяют при лечении первичных и вторичных иммунодефицитов, аутоиммунных процессов, некоторых опухолей и заболеваний с поражением Т-системы иммунитета.

В результате направленного синтеза получен ряд новых активных иммунокорректоров (собственно синтетические препараты): полудан (полиаденил-уридиловая кислота), леакадин (2-карбамоилазиридин), кемантан (адамантансодержашее соединение). Их, соответственно, применяют при лечении вирусных заболеваний глаз, лейкопений, тромбоцитопений, вторичных иммунодефицитов и синдрома хронической усталости. Основанием для назначения всех этих препаратов является клинико-иммунологическое обследование. Они, безусловно, показаны больным с клини-ческими проявлениями нарушения функции иммунной системы и изменениями иммунологических показателей. Для больных с клиническими проявлениями нарушения функции иммунной системы, но в отсутствие изменений иммунологических показателей, определяемых лабораторными тестами, терапия данными препаратами только рекомендуется. Для лиц, имеющих только изменения иммунологических показателей без клинических проявлений недостаточности функции иммунной системы, они не показаны, так как изменения иммунограммы могут быть нормой для данного индивидуума.

Лейкоцитарный Ь-интерферон получают в культурах лейкоцитов крови доноров, он обладает выраженным противовирусным и противоопухолевым действием. Связываясь с ганглиозидами и другими рецепторами клеток организма, интерферон индуцирует в них выработку ряда ферментов, в т.ч. эндонуклеазы и протеинкеназы. Эндонуклеаза расщепляет вирусную иРНК, а протеинкиназа блокирует трансляцию вирусных белков, что в целом приводит к нарушению репродукции вирусов в клетке хозяина.

Фибробластный в-интерферон, получаемый в полуперевиваемых культурах диплоидных клеток человека, обладает преимущественно противоопухолувой активностью. Иммунный г-интерферон получают в перевиваемых культурах лимфобластных клеток после воздействия митогенов; для него в большей степени характерно выраженное иммуномодулирующее действие. В настоящее время выпускаются рекомбинантные (генноинженерные) интерфероны, всех трех классов; их преимуществом является отсутствие видовых ограничений активности. Широко используются такие препараты, как левамизол (декарис), регулирующих созревание Т-лнмфоцитов и гранулоцитов, левакадин, стимулирующий Т-хелперы и ингибирующий Т-супрессоры, нуклеинат натрия, оказывающий влияние на СМФ, иммунодепрессант циклоспорин, иммуномодуляторы микробного происхождения (пирогенал, продигиозан, мурамилдипептид, липополисахариды), в целом повышающие антиинфекционную резистентность, в т.ч. за счёт стимуляции эндогенного интерферона.

Иммунокоррегирующая терапия

Достижения теоретической иммунологии явились основой для развития нового направления медицины - иммунокоррегирующей терапии. Она направлена на нормализацию нарушений функциональной активности иммунной системы.

Совершенно очевидно, что такая терапия должна назначаться и проводиться под строгим контролем работы иммунной системы с учетом как клинических, так и лабораторных показателей ее активности.

Иммунодефицитные состояния (особенно вторичные иммунодефицита) встречаются достаточно часто. Однако весьма широкое в настоящее время использование иммунотропных препаратов далеко не всегда оправданно.

По эффекту действия на иммунную систему различают: иммуносупрессоры (иммунодепрессанты), иммуностимуляторы, стимулирующие иммунную систему, и иммуномодуляторы оказывающие разнонаправленный эффект в зависимости от исходного состояния иммунной системы.

Пример описания препарата

Тимоген: гетерологичный иммуиомодулятор, синтетический дипептид, оказывающий иммуностимулирующее действие и повышение антиинфекционной резистентности организма; назначается для лечения иммунодефицитных состояний, сопровождающихся снижением показателей клеточного иммунитета, а также для профилактики инфекционных осложнений после операций или имунодепрессивной терапии.

Препараты из живых микроорганизмов или микробных продуктов

Бактерифаги - иммунобиологические препараты, содержащие живые вирусные частицы, способные распознать и вызвать лизис чувствительных к ним бактериальных клеток. Бактерифаги (фаги) получают из бульонных культур бактерий, лизированных соответствующим фагом, путем фильтрования. Количество фаговых частиц определяют в ходе титрования на агаровых или бульонных культурах. Титром фага называют максимальное разделение препарата, при воздействии которого отмечается лизис чувствительной культуры бактерий. Активность фага выражается числом фаговых частиц, содержащихся в 1мл или 1 таблетке.

С профилактической или лечебной целью фаги используют местно (например, для орошения раны) или перорально длительными курсами. Перед приемом жидких препаратов per os содержимое желудка необходимо нейтрализовать содовым раствором. В нашей стране выпускаются препараты ди-зентерийного, холерного, сальмонеллёзных, коли-протейного, стафилококкового, сине гнойного и других бактериофагов; с их помощью проводят экстренную профилактику и лечение кишечных и гнойных инфекций, особенно вызванных антибиотико-резистентными возбудителями. С лечебной целью фаг назначают после определения чувствительности к нему возбудителя. После отмены препарата фаг быстро удаляется из организма.

Пример описания

Коли-протейный бактериофаг, 100мл; лечебно-профилактический препарат, содержащий живые вирусы, способные распознавать и лизировать клетки протеев P.vulgaris, P.mirabilis и патогенных вариантов кишечных палочек (O-l11, 0-55); получен после фильтрования бульонных культур протеев и эшерихий, заражённых соответствующими бактериофагами, дозируется в мл; применяется перорально после нейтрализации содержимого желудка для лечения и экстренной профилактики протейной и/или эшерихиозной инфекции.

Эубиотики - препараты, приготовленные из представителей нормальной микрофлоры тела человека и предназначенные для лечения или санации дисмикробиозов (дисбактериозов). Эти препараты представляют собой лиофильно высушенные живые культуры антагонистически активных штаммов, обычно в таблетированной форме. Дозируются по числу микробных клеток, которое указывается на этикетке. Выпускают их обычно в ампулах или флаконах. Хранение должно осуществляться в щадящих условиях (в темноте при +4 - 8°С). Назначают эубиотики обычно per os послерастворения в свежекипяченой воде комнатной температуры; применяют 2 -- 3 раза в день курсами от 1 до 6 месяцев в сочетании с другими методами лечения. Наиболее часто применяют следующие эубиотики: колибактерин (содержит Е. coli штамма М17, антогонистнчески активные в отношении шигелл и других возбудителей кишечной инфекции), бифидобактерии (антагонистически активные В. bifidum штамма N), бификол (E.coli М17 + В. bifidum N1); лактобактерии (антагонистически активные штаммы L. acidophilus или других видов); бактисубтил (ферментативно и антагонистически активные Bacillus subtilis штамма IP5832).

Бифидумбактерин - эубиотик, содержащий лиофильно высушенную живую культуру Bifidobacterium bifidum (штамм N1); получают культивированием штамма на питательной среде с последующим отделением микробной массы, дозируют по числу микробных клеток (одна доза - не менее 100 млн.); применяют перорально после растворения в кипячёной воде комнатной температуры при дисбактериозах кишечника для лечения и профилактики; нормализация микрофлоры обусловлена антагонистическим действием вводимых бифидобактерий.

Диагностические препараты

Для текущей и ретроспективной диагностики инфекционных и неинфекционных заболеваний создано несколько сотен диагностических иммунобиологических препаратов. Помимо инфекционных болезней с их помощью диагностируют пищевые, профессиональные и другие виды аллергий; локализацию злокачественных опухолей (рак печени, лёгких, прямой кишки и др.); иммунные взаимоотношения матери и плода, беременность; совместимость органов и тканей при пересадках; иммунодефицитные состояния. Кроме того, диагностические препараты необходимы для проведения иммуноэпидемиологического анализа (выявление источников инфекции, размеры очагов инфекции, прогноз заболеваемости, определение иммунологической эффективно-сти вакцинации и др.). К диагностическим препаратам относятся: диагностические иммунные сыворотки и иммуноглобулины, моноклональные антитела, диагностикумы (антигены), аллергены, диагностические бактериофаги, токсины, а также диагностические тест-системы. Чувствитель-ность и специфичность диагностических препаратов, основанных па иммунологических реакциях (реакция антиген-антитело, клеточные реакции), как правило, выше, чем других методов диагностики. Чувствительность характеризуется минимальным количеством антигенов или антител, которое выявляет данная реакция. Под специфичностью понимают способность антигенов реагировать только с гомологичными антителами. Применение моноклональных антител и очищенных антигенов еще более повышает специфичность диагностических препаратов.

Диагностические иммунные сыворотки и иммуноглобулины

(антимикробные, антитоксические, антиглобулиновые, антитканевые) в качестве антительных препаратов предназначены для выявления соответствующих антигенов в реакциях иммунитета. Для их получения данными антигенами проводят гипериммунизацию животных (кроликов, баранов, ослов), в крови у которых накапливаются соответствующие антитела. С помощью иммунных сывороток и иммуноглобулинов определяют вид, серовар бактерий или их экзотоксина, тип и подтип вирусов, видовую принадлежность антигенов и проч. Различают сыворотки агглютини-рующие, лизирующие, преципитирующие, люминесцирующие.

Сывороточные препараты перед выпуском контролируют па чувствительность, специфичность и титр в той реакции, для которой они предназначены. Титром называют максимальное разведение сыворотки (для преципитирующих сывороток - максимальное разведение антигена), с которым отмечается положительная реакция. На практике специфичной считают реакцию, протекающую в титре или половине тифа сыворотки. Для повышения специфичности некоторые сыворотки подвергают адсорбции по методу Кастеллани. Например, для удаления из антимикробной агглютинирующей сыворотки групповых антител к ней добавляют микробные взвеси родственных бактерий, на которых эти антитела адсорбируются; после удаления иммунных комплексов в адсорбированной сыворотке сохраняются типоспецифические антитела. Сыворотки, в которых после адсорбции остаются антитела к одному антигену, называют монорецепторными. Агглютинирующие адсорбированные сыворотки, как правило, применяют в реакции на стекле, не-адсорбированные - после серийных разведений в пробирках.

Активность антитоксических сывороток выражают в ЕА/мл (антитоксических единицах, т.е. по способности нейтрализовать определенное число доз соответствующего экзотоксина).

Примеры описания.

Сыворотка холерная Огава адсорбированная - диагностическая антимикробная агглютинирующая сыворотка, содержащая антитела к холерным вибрионам серовара Огава; полученная путём гипериммунизации лабораторных животных соответствующим микробным антигеном с по-следующей адсорбцией групповых антител; применяется в реакции агглютинации па стекле для идентификации холерных вибрионов Огава по антигенной структуре. Протовосибиреязвенная сыворотка, меченная ФИТЦ - диагностическая антимикробная сыворотка (глобулиновая фракция), содержит антитела к Bacillus anthracis соединённые с флюорохромом (ФИТЦ); получена путем гипериммунизации лабораторных животных сибиреязвенными палочками с последующей конъюгацией антител с красителем; используется в рабочем разведении для быстрого обнаружения возбудителя сибирской язвы в материале прямым методом ИФ.

Гемолитическая сыворотка кроличья титр 1:1200 - диагностическая антитканевая гемолитическая сыворотка, содержит антитела, способные в присутствии комплемента визировать бараньи эритроциты; получают путем гипериммунизации кроликов бараньими эритроцитами; используют в разведении 1:400 для титрования комплемента в реакции гемолиза и в составе гемолитической системы РСК.

Диагностикумы

Диагностикумы (антигены) в качестве антигенных препаратов используют для выявления соответствующих антител в реакциях иммунитета. Корпускулярные диагностикумы могут представлять собой взвесь известных микробов, инактивированных прогреванием, добавлением формалина, этанола или известные растворимые антигены, адсорбированные на инертных частицах (латексный, угольный и др. диагностикумы) или клетках (эритроцитарный диагностикум, стафилококковый конъюгат для реакции коагглютинации). Диагкостикумы должны обладать высокой активностью (чувствительностью), специфичностью, а корпускулярные также гомогенностью и стабильностью. Эти качества диагностикумов контролируют в тех реакциях, для которых они предназначены.

Примеры описания.

Эритроцитарный Vi-диагностикум - диагностический антигенный препарат, содержащий человеческие эритроциты O(I) группы, на поверхности которых адсорбирован очищенный Vi-антиген брюшнотифозных бактерий; предназначен для выявления РПГА антител к Vi-антигену при отборе лиц, подозрительных на брюшнотифозное носительство, для серодиагностики брюшного тифа, оценивают сероконверсии у привитых брюшнотифозными вакцинами.

Диагностикум из сальмонелл тифи «О» - диагностический препарат, содержащий О-антиген Salmonella typhi в виде суспензии инактивированных микробных клеток; предназначен для выявления антител к О-антигену возбудителя брюшного тифа в развёрнутой РА (Видаля), которая ставится: целью серодиагностики брюшного тифа.

Аллергены

Аллергены представляют собой известные антигены микробного растительного или животного происхождения (чаще растворимые предназначенные для выявлении сенсибилизации к ним организма в аллергических пробах или аллергопробах in vitro. В основе проб может лежать гиперчувствительность замедленного типа (инфекционная аллергия) или анафилактические реакции немедленного типа (аллергия на гетерогенные сыворотки). Микробные аллергены готовят из инактивированных микробных клеток, их экстрактов или продуктов жизнедеятельности.

Пример описания

Антраксин - аллерген (комплекс антигенов) из сибиреязвенной палочки, предназначенный для постановки кожно-аллергической пробы с целью выявления инфекционной аллергии (ГЗТ) к Bacillus anthracis; положительная реакция (покраснение и припухлость на месте препа-рата через 24 - 28 ч) наблюдается у больных, переболевших или привитых сибиреязвенной вакциной (СТИ).

Диагностические бактериофаги

Диагностические бактериофаги различной специфичности, содержат вирулентные фаги, способные лизировать клетки только микробных видов или фаговаров (типовые бактериофаги). Они предназначены для идентификации и/или фаготипирования микробных культур, напри-мер, в ходе диагностики инфекций микробиологическим методом. Получают эти препараты из фаголизатов соответствующих микробных культур. Активность препарата определяется титром, значение которого необходимо знать для приготовления рабочего разведения. Титром препарата называют максимальное его разведение, при котором еще наблюдается лизис соответст-вующей микробной культуры.

Пример описания

Типовой стафилококковый бактериофаг тип -77. Титр 10-4 - диагностический препарат, содержащий живые вирулентные бактериофаги (фильтрат фаголизата типовой культуры стафилококка), способные в опыте фагии лизировать клетки только Staphylococcus aureus фаговара 77; предназначен для фаготипирования.

Иммунотерапия

Иммунотераиия - это применение иммунологических закономерностей для лечения больных. Для этого используются антительные (иммунные сыворотки, гамма-глобулины, плазма) и значительно реже - антигенные (лечебные вакцины, аутовакцины или анатоксины) препараты.

Для лечения острых тяжелых заболеваний, возбудители которых продуцируют экзотоксин, и некоторых других бактериальных инфекции используются препараты, содержащие готовые антитела, создающие пассивный искусственный иммунитет. Это антитоксические и антибактериальные сыворотки, иммуноглобулины и плазма.

Антитоксические сыворотки, получаемые путем гипериммунизации животных (лошадей) анатоксином, содержат антитела против экзотоксинов. Активность таких сывороток измеряется в АЕ (антитоксических единицах) или ME (международных единицах). Это минимальное количество сыворотки, способное нейтрализовать 100 DLM токсина для животных определенного вида и определенной массы. К таким сывороткам относятся: противостолбнячная, противоботулиническая. противогангренозная, противодифтерийная. Применение антитоксических сывороток обязательно при лечении соответствующих инфекций.

Антимикробные сыворотки, получаемые иммунизацией животных клетками соответствующих возбудителей и дозируемые в миллилитрах, содержат антитела против клеточных антигенов возбудителя. Их применяют при лечении сибирской язвы, чумы, стрептококковых, стафилококковой, синегнойной инфекций. Их назначение определяется тяжестью течения заболевания и не является обязательным.

Иммунотерапия антигенными препаратами имеет целью стимулировать собственные механизмы специфической защиты. Она применяется для лечения больных с хроническими, длительными, вялотекущими формами инфекций. Наиболее употребительны убитые лечебные вакцины (гоновакцина, бруцеллезная лечебная, стафилококковая вакцины, вакцина Солко-Уровак - для лечения хронических инфекций мочевых путей, содержит 6 штаммов кишечной палочки, протеев, клебсиелл и фекальных стрептококков.

Особую отдельную группу лечебных вакцин представляют аутовакцины, приготовленные из убитых прогреванием при 70-80°С в течение 1 часа штаммов возбудителей, выделенных от данного больного. Аутовакцины имеют определенные преимущества, гак как индуцируют иммунный ответ на антигены конкретного возбудителя.

При иммунотерапии необходимо помнить, что:

1) противовирусные антительные препараты не используются, так как антитела не действуют на внутриклеточные формы вирусов;

2) лечение путем введения антитоксических сывороток должно быть начато, как можно раньше, не дожидаясь результатов микробиологического исследования;

3) антитоксические иммунные сыворотки часто содержат лошадиный белок, и введение таких сывороток пациентам допустимо лишь в случае отсутствия в течение 20-30 мин выраженной кожной реакции на лошадиную сыворотку (в/к, в разведении 1:100, в объеме 0,1 мл); в других случаях сыворотку вводят по особой методике или заменяют гомологичным препаратом;

4) в некоторых случаях возможно одновременное (но не в одном шприце и не в один участок!) введение и антигенных, и антительных препаратов. Например, при первичной хирургической обработке ран столбнячный анатоксин вводится вместе с противостолбнячным иммуноглобулином, а при множественных укусах животными людей в область головы и шеи параллельно с антирабической вакциной вводится и специфический антирабический иммуноглобулин.

Химиотерапевтические препараты антибиотики

Химиотерапией называют лечение инфекционных, паразитарных заболеваний или опухолей химиотерапевтическими средствами (химиопрепаратами). Химиотерапевтические препараты (ХТП) - это химические вещества природного или синтетического происхождения, которые в не-изменённом виде или после превращения оказывают подавлявшее действие на паразитов во внутренней среде организма без повреждения организма хозяина. Такие вещества должны обладать выраженной этиотропностью (губительным действием, на возбудитель) и минимальной органотропностью /безвредностью для хозяина, а также хорошо растворяться и сохранять активность в организме, быстро всасываться и относительно медленно выводиться из организма, разрушаться в нем, сохранять активность при хранении.

Выделяют следующие основные группы ХТП: антибиотики, сульфаниламиды, нитрофураны, препараты висмута, ртути, мышьяка, антиметаболиты, производные имидазола. В зависимости от вида ХТП, его дозы и чувствительности возбудителя различают действие статическое (задержка роста и размножения) и цидное (полная гибель паразитов). Антимикробным спектром химиоп-репарата называют круг (перечень) чувствительных к нему микробов; спектр может быть узким или широким.

Антибиотики являются наиболее обширной группой ХТП. Антибиотическая промышленность - наиболее развитая отрасль биотехнологии. Всего известно около 6000 антибиотиков, из которых в практике используется 50-100. Антибиотики были открыты в начале XX века при изучении микробного антагонизма - конкурентного взаимодействия двух видов, приносящего обоюдный вред. Вредное влияние может проявляться в виде: прямого паразитизма (бактериофаги), конкуренции за питательный субстрат, изменения рН среды, образования простых токсических веществ или специализированных антибиотиков, бактериоцинов (пинов). Бактериоцины - белковые вещества с узким спектром подавляющей активности (как правило, по отношению к микробам того же вида).

Антибиотики - это вещества, в основном, природного происхождения и различной химической структуры, которые в малых концентрациях вызывают' задержку размножения или гибель микробов и опухолевых клеток.

Химическая природа антибиотиков различна: полипептиды, ациклические, ароматические, сложные гетероциклические соединения. В отличие от дезинфектантов, являющихся общепротоплазматическими ядами, антибиотики действуют избирательно, специфически нарушая процессы жизнедеятельности только у определенных групп микробов (их можно считать продуктами и инструментами антагонизма).

По источникам и методам получения различают антибиотики природные, синтетические и полусинтетические.

1. Антибиотики природного происхождения (получают путём биосинтеза)

1) микробного происхождения (их большинство) - образуются актиномицетами (тетрациклины, аминогликозиды, эритромицин, актиномицины), некоторыми бактериями (полимиксины), грибами (пенициллин, гризеофульвин) для их получения штаммы-продуценты выращивают в жидкой питательной среде, после чего клетки удаляют, а препарат в неизменённом виде выделяют из питательной среды и очищают;

2) растительного происхождения (фитонциды) получают физико-химическими методами из растений - листьев эвкалипта (хлорофиллипт), зверобоя (иманин), из лука и чеснока (летучие эфирные масла);

3) животного происхождения - из лейкоцитов (интерфероны, лизоцим), эритротроцитов (эритрин), молоки рыб (экмолин); их получают из соответствующих клеток и тканей, а интерфероны также путем биосинтеза (генно-инженерный препарат).