Асептика. Микрофлора воды, воздушной среды и объектов производственных помещений аптек

Размещено на http://www.allbest.ru/

Контрольная работа

на тему: Асептика. Микрофлора воды, воздушной среды и объектов производственных помещений аптек



1. Сравнительная характеристика антисептиков и дезинфектантов: с какой целью, и в каких областях применяют

Асептика - это совокупность методов и приемов работы, направленных на предупреждение попадания инфекции в рану, в организм больного, создание безмикробных, стерильных условий для всей хирургической работы путем использования организационных мероприятий, активных обеззараживающих химических веществ, а также технических средств и физических факторов. Асептика в фармации - условия и комплекс мероприятий, направленных на предотвращение микробного и другого загрязнения при получении стерильной продукции на всех этапах технологического процесса. аптека антисептик бактерия стерилизация

Антисептика - система мероприятий, направленных на уничтожение микроорганизмов в ране, патологическом очаге, в органах и тканях, а также в организме больного в целом, использующая активные химические вещества и биологические факторы, а также механические и физические методы воздействия.

Антисептик - любое вещество, препятствующее росту микроорганизмов, в частности бактерий. Антисептики используют для лечения инфицированных ран, при поражении микроорганизмами кожных покровов и слизистых оболочек и др.; их отличие от дезинфектантов чисто формальное: первые применяют для антимикробной обработки поверхности человеческого тела или его полостей, вторые -- для окружающих предметов или выделений больного. И те и другие обладают широким спектром действия и активны в отношении бактерий, бацилл, простейших, грибов. Механизм действия разных препаратов неодинаков и может быть связан с денатурацией белка, нарушением проницаемости плазматической мембраны, торможением важных для жизнедеятельности микроорганизмов ферментов (чаще встречается при низких концентрациях антисептиков).

Для обработки помещения, предметов обстановки, оборудования аптеки используют следующие дезинфектанты: раствор хлорамина Б 1%, раствор гипохлорита натрия 1%, смесь раствора хлорамина Б 0,75% с 0,5% моющего средства, смесь раствора перекиси водорода 3% с 0,5% моющего средства;

Для обработки рук персонала - этиловый спирт 70%, раствор хлоргексидина биглюконата 0,5% в этиловом спирте 70%, йодопирон (йодонат, йодовидон) 1%, раствор хлорамина Б 0,5%;

Для обработки посуды, поступающей в аптеку от населения, из инфекционных и пр. отделений стационаров - раствор активированного хлорамина 1% (активаторы: хлористый, серно-кислый или азотно-кислый аммоний), смесь раствора перекиси водорода 3% с 0,5% моющего средства, раствор хлорцина 1% (раствор солей дихлоризоциануровой кислоты), раствор «ДП-2» 0,2% (на основе трихлоризоциануровой кислоты), содержащий до 40% активного хлора.

Посуду, бывшую в употреблении, подвергают в зависимости от исходного состояния моющедезинфицирующей обработке либо дезинфицируют. После дезинфекции ополаскивают до исчезновения запаха дезинфицирующего средства, затем замачивают, после чего моют ершом или в моечной машине.

После мойки или обработки моющедезинфицирующими средствами всю посуду ополаскивают (флаконы или бутылки -- водой для инъекций, очищенной через фильтр с размером пор не более 5 мкм), стерилизуют и контролируют качество обработки.

Для замачивания и мойки посуды используют порошки «Астра», «Лотос», «Луч», «Зифа», «Сарма»; моющие жидкости «Прогресс», «Посудомой» в концентрации 0,1--0,5% (зависящей от загрязненности посуды и способа обработки). Посуду замачивают при полном погружении на 25 -- 30 мин при 50 -- 60 °С.

Для моющедезинфицирующей обработки посуды новой и бывшей в употреблении используют «Хлорцин» (порошок), «ДП-2» (порошок или таблетки), «Виркон» (гранулированный порошок), «Клор-Клин» (таблетки оранжевого цвета), применяют в концентрациях: 0,05; 0,1; 0,2; 0,3; 0,5; 1 % (в зависимости от моющедезинфицирующей активности и степени загрязненности посуды). К комплексным моющедезинфицирующим средствам можно добавлять «Астру», «Лотос», «Зифу», «Луч», «Сарму» из расчета 5 г на 1 л рабочего раствора.

Дезинфекции подвергают посуду, бывшую в употреблении в инфекционных отделениях ЛПУ. В качестве дезинфицирующих средств применяют 3%-ный раствор водорода пероксида, 1%-ный раствор хлорамина, 0,125; 0,25; 0,5%-ные растворы натрия гипохлорита (из маточного раствора «Элма»), 0,05, 0,1, 0,3%-ные растворы «Клорсепта».

Повторное использование моющедезинфицирующих и дезинфицирующих растворов не допускается, если в методических указаниях по применению средства нет специальных указаний. Следует чередовать разные дезинфицирующие средства с целью предотвращения сохранения устойчивых форм микроорганизмов.

Санитарная подготовка помещений -- одно из важнейших мероприятий по обеспечению чистоты. Цель такой обработки -- сведение к минимуму механических и микробных загрязнений. Дезинфекция поверхностей приводит, как правило, к снижению микроорганизмов на 40--60% от их исходного содержания. При выборе дезинфицирующего вещества необходимо учитывать не только его бактерицидные свойства и спектр действия, но и возможную токсичность для человека. Рекомендуется при уборке применять 2--6% раствор перекиси водорода или другие дезинфицирующие средства.

Дезинфекция (обеззараживание) -- мероприятия, направленные на полное уничтожение вегетативных и покоящихся форм патогенных и условно-патогенных микроорганизмов на объектах внешней среды (в том числе на изделиях медицинского назначения) и ставящие целью предупреждение передачи возбудителя от зараженного организма к незараженному, т. е. разрыв эпидемической цепи.

Для дезинфекции используют фенол, формалин, соединения хлора (хлорамин, хлорная известь), йод, сулема, перекись водорода, поверхностно-активные вещества, т. е. антисептики, а также термические, лучевые и другие воздействия.

Химическая стерилизация - один из методов, основной причиной губительного воздействия которого считается нарушение определенной физико-химической структуры оболочки и протоплазмы микроорганизмов применяемыми химическими агентами.

Основные пути воздействия химических веществ:

1) изменение осмотических свойств клетки;

2) разрушение окислительных и других ферментов клетки;

3) окисление протоплазмы клетки;

4) коагуляция белков оболочки и протоплазмы клетки.

Химическая стерилизация осуществляется:

1) растворами;

2) газами.

Для стерилизации растворами чаще других применяются дезоксон-1 (надкислота) и водорода пероксид. Проводится стерилизация в неповрежденных эмалированных, стеклянных, пластмассовых сосудах. При стерилизации учитывается концентрация действующего химического агента, температура стерилизующего раствора, время стерилизационной выдержки. Например:

1) при стерилизации дезоксоном-1 температура стерилизующего раствора должна быть не менее 18°С, время стерилизационной выдержки -- 45 мин;

2) при стерилизации 6%-ным раствором водорода пероксида температура стерилизующего раствора должна быть не менее 18°С, время стерилизационной выдержки -- 6 ч (при температуре 50°С время выдержки сокращается до 3 ч). Необходимо полностью погружать изделия в стерилизующий раствор, а после стерилизации промывать в стерильной воде в асептических условиях. Для стерилизации газами и аэрозолями используются оксиды этилена и пропилена, полиэтиленоксиды, смеси этилена оксида с углерода диоксидом или метилом бромистым и др.

Режим стерилизации газами зависит от многих факторов -- свойств стерилизуемого материала, его толщины, проницаемости упаковки, а также индивидуальной чувствительности различных микроорганизмов к воздействию газов. Газы подаются в стерилизуемую среду при давлении до 2 кгс/см2, время стерилизации составляет от 4 до 20 ч.

Например, для уничтожения стафилококков концентрация газа (этилена оксида) в воздухе должна составлять до 1000 мг/м3 в течение 6 ч, а для стрептококков концентрация газа снижается до 500 мг/м в течение того же времени.

Метод химической стерилизации применим для резиновых, стеклянных, полимерных (коррозиестойких) изделий. Параметры стерилизации контролируются измерением температуры рабочего раствора и химическим определением концентрации активно¬го химического агента.

2. Ультрафиолетовое излучение: спектр лучей и механизм ингибирующего действия, область применения в фармации

Ультрафиолетовая радиация используется для обеззараживания воздуха, воды и многих других объектов в различных отраслях народного хозяйства. Применение данного вида обеззараживания в аптечных условиях приобрело большое практическое значение благодаря тому, что имеет множество преимуществ перед другими способами обеззараживания. Ультрафиолетовая радиация -- очень мощный стерилизующий фактор, убивающий вегетативные и споровые формы микроорганизмов, при этом исключающий вероятность адсорбирования лекарственными веществами резких запахов (как это часто бывает при использовании дезинфицирующих средств).

Для создания условий асептики и стерилизации объектов метод стерилизации ультрафиолетовой радиацией часто применяется в аптеках и производственных помещениях, но при этом он не включен в Государственную фармакопею XI.

Ультрафиолетовая радиация -- невидимая коротковолновая часть солнечного света с длиной волны менее 300 нм. Воздействие на протоплазму микробной клетки приводит к фотохимическому нарушению ферментных систем, образованию ядовитых пероксидов и фотодимеризации тиаминов.

Ультрафиолетовые лампы нашли широкое применение в аптеках для обеззараживания воздуха, дистиллированной воды, воды для инъекций, различных вспомогательных материалов.

В аптечных помещениях для обеззараживания воздуха применяются бактерицидные лампы (настенные, потолочные, экранированные, неэкранированные). При этом вид, мощность и количество ламп подбираются так, чтобы при прямом облучении на 1 м³ объема помещения приходилось не менее 2--2,5 Вт мощности излучателя, для экранированных ламп этот показатель составляет 1 Вт. Равномерно по всему помещению, по ходу конвекционных потоков воздуха на высоте 1,8--2 м от пола размещают настенные и потолочные бактерицидные облучатели. Стерилизацию воздуха неэкранированными лампами проводят из расчета 3 Вт мощности лампы на 1 м³ помещения в течение 1,5--2 ч в отсутствие обслуживающего персонала.

В присутствии людей обеззараживание воздуха в помещении проводят экранированными лампами (лучи при этом направлены вверх, не оказывая воздействия на кожные покровы и глаза персонала), а количество излучателей определяется из расчета 1 Вт мощности на 1 м³ помещения.

Бактерицидные облучатели, выпускаемые отечественной промышленностью, имеют типичную структуру. Облучатель бактерицидный настенный (ОБН) скомбинирован из двух бактерицидных ламп по 30 Вт (БУВ-30) и рассчитан на обеззараживание воздуха в помещении объемом до 30 м³.

Облучатель бактерицидный потолочный (ОБП) скомбинирован из четыре аппаратов БУВ-30 (двух -- экранированных и двух неэкранированных), объем обеззараживаемого воздуха составляет 30 м³. Облучатель бактерицидный передвижной маячного типа (ОБПЕ) состоит из шести бактерицидных ламп БУВ-30.

Облучатели используют только в отсутствие персонала при оптимальном расстоянии до облучаемого объекта около 5 м.

Разработаны аппараты, сочетающие в себе возможность одновременного воздействия на воздух асептического блока источника ультрафиолетовой радиации и механической фильтрации (с использованием фильтра из ультратонких волокон), -- рециркуляционные воздухоочистители ВОПР-0.9 и ВОПР-1.5. Эти воздухоочистители имеют массу положительных качеств:

1) могут использоваться в присутствии персонала ввиду отсутствия негативного воздействия на человеческий организм;

2) не требуют квалифицированного обслуживания;

3) обсемененность воздуха микроорганизмами снижается в 10 раз при объеме помещения 60--100 м³ за 30 мин работы аппарата.

3. Стерилизация аптечной посуды: цель, режимы, контроль стерильности

Под стерилизацией (обеззараживание, обеспложивание) понимают совокупность физических, химических и механических способов освобождения от вегетативных и покоящихся форм микроорганизмов.

Приказ Минздрава РФ от 21.10.1997 N 309 Об утверждении Инструкции по санитарному режиму аптечных организаций (аптек)

Обработка стеклопосуды включает следующие технологические операции:

- дезинфекция;

- замачивание и мойка (или моюще-дезинфицирующая обработка);

- ополаскивание;

- сушка (или стерилизация);

- контроль качества обработки.

Чистую посуду сушат и хранят в закрытых шкафах. Флаконы, предназначенные для инъекционных растворов и глазных капель, стерилизуют.

Режим стерилизации: горячим воздухом при 180° C - 60 минут или насыщенным паром под давлением при 120° C - 45 минут. После снижения температуры в стерилизаторе до 60 - 70° C посуду вынимают, закрывают стерильными пробками и используют для розлива растворов.

Контроль качества вымытой посуды

1. Определение степени чистоты вымытой посуды

Контроль качества вымытой посуды проводят визуально по отсутствию посторонних включений и по равномерности отекания воды со стенок флаконов после их ополаскивания.

При необходимости, полноту смываемости синтетических моющих и моющих и дезинфицирующих средств определяют по величине рН потенциометрическим методом (рН воды после последнего ополаскивания посуды должен соответствовать рН исходной воды).

После ополаскивания каждый флакон и бутылку накрывают алюминиевой фольгой для предотвращения её загрязнения.

2. Определение полноты смываемости моющих средств

Испытуемый вымытый флакон ополаскивают очищенной водой (флакон наполняется водой полностью). Промывной водой смачивают ватный тампон, наносят на него 1-2 капли спиртового раствора фенолфталеина.

Наличие остатка моющих средств дает розовое окрашивание ватного тампона. Средства и режимы дезинфекции различных объектов (термические)

Наименование объекта	Дезинфицирующий агент	Режим дезинфекции термическими методами	Условия проведения дезинфекции
		температура С	время выдержки
		номинальное значение	предельное отклонение	номинальное значение	предельное отклонение
Изделия из стекла, металла, термостойких полимерных материалов, резины (шпатели, ножницы, пинцеты, трубки, щетки для	Вода очищенная или вода очищенная с 2% натрия гидрокарбоната	96	_ + 1	30	+5	Кипячение при полном погружении изделий в воду
мытья рук, ершики)				15		дезинфекционный кипятильник
Изделия из стекла, металла, резины, латекса и термостойких полимеров	Водяной насыщенный пар под избыточным давлением Р=0,05 МПА (0,5 кгс/ см2)	110	_ +2	20	+5	В паровом стерилизаторе, упакованные в стерилизационные коробки
Изделия из стекла, металла	Сухой горячий воздух	120	_ +4	45	+5	В воздушном стерилизаторе без упаковки (в лотках)

Контроль стерильности

Аптечную посуду, приготовленную для розлива растворов для инъекций и глазных капель, отбирают в момент их приготовления, в количестве трех штук одинаковой емкости. Флаконы доставляют в лабораторию в укупоренном виде, используя при этом аптечные пробки и прокладки (для отпуска лекарственных средств).

Пробки (корковые, полиэтиленовые, резиновые) и прокладки отбирают в момент приготовления растворов для инъекций и глазных капель пинцетом после фламбирования и помещают по пять штук в широкогорлую стерильную посуду (колбы, банки) с последующим закрытием стерильными ватно-марлевыми пробками и бумажными колпачками.

Фильтровальные воронки, мерные колбы, цилиндры, используемые для приготовления растворов для инъекций, контролируют путем ополаскивания их 10 см3 стерильной водопроводной воды, пробирки со смывной жидкостью доставляют в лабораторию для исследования.

Используемые в аптеках пипетки прополаскивают несколько раз в пробирке, содержащей 10 см стерильной водопроводной воды, пробирки со смывной жидкостью доставляют в лабораторию для исследований.

Исследования аптечной посуды, пробок, прокладок, воронок, цилиндров:

1) подготовка к исследованию:

три одноименных флакона, доставленных в лабораторию, последовательно ополаскивают в 10 см3 стерильной водопроводной воды. Воду из флакона во флакон переливают над пламенем горелки, тщательно споласкивая каждый флакон.

В посуду с доставленными пробками и прокладками наливают 10 см стерильной водопроводной воды и тщательно ополаскивают;

2) определение количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов в смывной жидкости. Число колоний, установленное в 1 см3 смывной жидкости умножают на десять, что соответствует содержанию бактерий на всей смывной поверхности трех одноименных флаконов или на поверхности отобранных пробок и прокладок, или на поверхности другой аптечной посуды (цилиндры, воронки, пипетки);

3) определение наличия бактерий группы кишечных палочек проводится следующим образом: оставшиеся 8 см3 смывной жидкости засевают в 1 см3 концентрированной глюкозо-пептонной среды и инкубируют при температуре 370С в термостате в течение восемнадцати - двадцати четырех часов.

Аптечная посуда, пробки, прокладки, воронки, цилиндры и так далее. Предельно-допустимое количество мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов - сто пятьдесят (на поверхности трех флаконов, пяти прокладок, пяти пробок, другой аптечной посуды).

Бактерии группы кишечных палочек не допускается в 8 см3 смывной жидкости.

Учет результатов контроля стерильности

Посевы просматривают ежедневно и по окончании периода инкубации. О наличии роста микроорганизмов в питательных средах судят по появлению мутности, пленок или каких-либо других доказательств их присутствия при визуальном просмотре посевов в рассеянном свете, а также подтвержденных микроскопией.

Образец считается стерильным, если ни в одной из засеянных пробирок не наблюдается роста.

В случаях роста хотя бы в одной из засеянных пробирок контроль стерильности повторяют на удвоенном количестве образцов препарата, проверяя каждый образец в соответствии с представленной выше схемой.

4. ЛАЛ-тест. как метод определения пирогенности воды для инъекций и инъекционных растворов, достоинства и недостатки

Определение содержания бактериальных эндотоксинов (ЛАЛ-тест)

Для определения содержания бактериальных эндотоксинов в препаратах допускается использование различных модификаций ЛАЛ-теста вместо предлагаемого метода, в том случае, если они приведены в частной фармакопейной статье.

Для проведения ЛАЛ-теста необходимы ЛАЛ-реактив, рабочий стандартный образец (РСО) эндотоксина и "вода для ЛАЛ-теста".

Подготовка посуды. Посуда (пробирки, пипетки и др.), используемая для проведения ЛАЛ-теста, должна быть стерильна и свободна от бактериальных эндотоксинов. Для этого стеклянную посуду следует тщательно вымыть и обработать сухим жаром при температуре 250 °С в течение одного часа; при температуре 180 °С - три часа.

Вода для ЛАЛ-теста. Вода, используемая для проведения ЛАЛ-теста, должна быть свободна от бактериальных эндотоксинов. Такого качества вода (содержание эндотоксинов < 0,001 ЕД э/мл) обычно входит в состав наборов для анализа по ЛАЛ-тесту.

Стандарт эндотоксина. В качестве рабочего стандартного образца (РСО) эндотоксина может быть использован препарат эндотоксина, оттитрованный фирмой-производителем по Американскому национальному стандарту эндотоксина RSE (ЕС-5).

Содержание эндотоксина выражается в единицах эндотоксина (ЕДэ).

Эндотоксин, включенный в набор для анализа по ЛАЛ-тесту, может быть в виде раствора или в виде сублимационно высушенного вещества. В последнем случае его разводят водой для ЛАЛ-теста в соответствии с указаниями фирмы производителя.

При хранении не допускается замораживание раствора эндотоксина. Рабочие разведения эндотоксина хранению не подлежат, за исключением тех случаев, когда способ хранения описан фирмой-производителем.

ЛАЛ-реактив. Растворение, использование и хранение ЛАЛ-ре-актива должно соответствовать инструкции фирмы-производителя. ЛАЛ-тест должен проводиться тем методом, который предписан для данного ЛАЛ-реактива.

Подтверждение возможности применения ЛАЛ-теста для определения в испытуемом препарате содержания эндотоксинов. Испытуемый препарат может усиливать или ингибировать реакцию между ЛАЛ-реактивом и эндотоксином. Поэтому при разработке частной фармакопейной статьи должна быть проведена работа по выявлению этих эффектов и определению методов их устранения.

рН раствора испытуемого препарата должен находиться в пределах 6,7-7,5. Для коррекции этого показателя в раствор препарата следует добавлять стерильные, свободные от эндотоксинов растворы NaOH, HC1 или подходящий буфер.

Проведение ЛАЛ-теста и интерпретация результатов

Качественный тест. Испытуемый препарат проверяют в одном теоретически рассчитанном разведении, при котором реакция должна быть отрицательной. Содержание ампулы или флакона с испытуемым препаратом разводят водой для ЛАЛ-теста. Кратность разведения (К) определяют по формуле:

К =А/л

А -- максимально допустимое содержание эндотоксина в препарате, указанное в частной фармакопейной статье;

л - чувствительность ЛАЛ-реактива, указанная фирмой-производителем на этикетке упаковки.

Определение проводят в двух параллельных пробах. Полученный раствор препарата по 0,1 мл помещают в две стеклянные пробирки диаметром 10 мм и добавляют по 0,1 мл ЛАЛ-реактива. В двух других пробирках проводят контроль ингибирования испытуемым препаратом реакции эндотоксина с ЛАЛ-реактивом. Для этого к раствору испытуемого препарата добавляют стандартный эндотоксин в концентрации, вдвое превышающей чувствительность ЛАЛ-реактива.

Одновременно ставят положительный и отрицательный контроль опыта. Для проведения положительного контроля в две пробирки помещают по 0,1 мл ЛАЛ-реактива и по 0,1 мл раствора РСО эндотоксина в концентрации, в два раза превышающей чувствительность ЛАЛ-реактива. Для проведения отрицательного контроля в две пробирки помещают по 0.1 мл ЛАЛ-реактива и по 0,1 мл воды для ЛАЛ-теста.

Все реакционные смеси аккуратно перемешивают и одновременно помещают на 60 минут в водящую баню или термостат с температурой 37° ± 1 °С. Следует избегать вибрации и ударов во время инкубации. По истечении указанного срока результаты регистрируют только как положительные или отрицательные. Положительная реакция характеризуется образованием плотного геля, который не разрушается при переворачивании пробирки на 180°. При отрицательной реакции такой гель не образуется.

Результаты испытания лекарственного препарата с помощью ЛАЛ-теста можно оценивать лишь в том случае, когда в обеих пробирках с отрицательным контролем реакция отрицательна, а в обеих с положительным контролем -- положительна.

Если в контроле ингибирования испытуемым препаратом взаимодействия эндотоксина с ЛАЛ-реактивом реакция отрицательна, это означает, что данный препарат способен препятствовать указанной реакции. В этом случае результаты проведенного ЛАЛ-теста признаются недействительными.

Препарат считают выдержавшим испытания, если реакция отрицательна в обеих параллельных пробах. Если реакция положительна хотя бы в одной из проб, испытание повторяют с помощью полуколичественного теста.

Полуколичественный тест. Испытуемый препарат проверяют в ряду последовательных двукратных разведений водой для ЛАЛ-теста. Условия проведения количественного теста такие же, как и для качественного теста. Определение проводят в двух повторностях. Контроль ингибирования испытуемым препаратом реакции эндотоксина с ЛАЛ-реактивом готовят для каждого разведения и также повторяют дважды. Отрицательный и положительный контроли ставятся для всех серий разведений. Все пробирки инкубируются одновременно.

Для расчета количества эндотоксина в испытуемом препарате отмечается наиболее высокое разведение, дающее плотный гель, хотя бы в одной повторности. Содержание бактериальных эндотоксинов (С) определяется по формуле:

Т - титр наиболее высокого разведения препарата, дающего плотный гель;

л - чувствительность ЛАЛ-реактива, указанная фирмой-производителем на этикетке упаковки.

Препарат считают выдержавшим испытание, если полученное при определении количественное содержание эндотоксина в нем не превышает максимально допустимую величину, указанную в частной фармакопейной статье.

С целью уменьшения риска возникновения пирогенов в результате размножения бактерий в воде, установлены следующие требования: вода для инъекций может быть использована по назначению в течение 24 часов с момента её получения при условии соблюдения требования ФС. 42-2620-89. Не использованная вода может быть использована только для технических нужд аптеки.

Замена теста на пирогены альтернативным ему - определением в препарате эндотоксинов - тем более оправдано, так как доказана более низкая чувствительность кролика к пирогенам по сравнению с человеком.

Еще одним явным преимуществом ЛАЛ-теста перед тестом на пирогены на кроликах является тот факт, что определенные группы инъекционных препаратов и технологического оборудования невозможно или некорректно испытывать на животных.

Экономически выгодно заменить также тест на кроликах определением эндотоксинов для таких препаратов, введение которых животному резко ограничивает возможность его дальнейшего использования (препараты антигенной природы, препараты крови).

ЛАЛ-тест считается наиболее надежным и перспективным способом проверки потенциальной пирогенности лекарственных средств.

Преимущества этого теста - высокая чувствительность, простота выполнения, надежность, хорошая воспроизводимость, возможность анализировать в короткий срок большое число образцов.

При массовом использовании этот метод, безусловно, дешевле теста на кроликах.

5. Значение микрофлоры человеческого организма в контаминации воды очищенной, воды для инъекций и инъекционных растворов

В аптеках строго регламентированы: 1) требования к помещению, в котором получают воду; 2) подготовка аппаратов и правила их эксплуатации; 3) условия сбора, хранения воды очищенной и для инъекций; 4) способы подачи воды на рабочее место фармацевта и провизора-технолога; 5) правила эксплуатации, мойки и дезинфекции трубопроводов из разных материалов, способы обработки стеклянных трубок и сосудов; 6) условия и сроки хранения; 7) нормы микробиологической чистоты нестерильной воды; 8) контроль качества воды очищенной и для инъекций.

Вода очищенная ФС 42-2619-89 (Aqua purificata), используемая в производстве инъекционных лекарственных форм, должна быть максимально химически очищена и отвечать соответствующей НТД. В каждой серии полученной воды обязательно проверяют значение рН (5,0--6,8), наличие восстанавливающих веществ, угольного ангидрида, нитратов, нитритов, хлоридов, сульфатов, кальция и тяжелых металлов. Допускается наличие аммиака -- не более 0,00002%, сухого остатка -- не более 0,001%.

Нормативы санитарно-микробиологического состояния воды очищенной регламентируются ФС 42-2619-97: ОМЧ 100 микроорганизмов суммарно (бактерии и грибы) в мл, отсутствие энтеробактерий, синегнойной палочки и золотистого стафилококка; срок хранения не более 3 суток; не должна быть апирогенной.

Согласно требованиям ФС 42-2620-89 вода для инъекций (Aqua pro ingectionibus) должна удовлетворять всем требованиям, предъявляемым к воде очищенной, а также должна быть стерильной и апирогенной. Стерильность воды определяется методами, изложенными в статье «Испытания на стерильность» ГФ XI издания, с. 187--192. Испытание пирогенности воды проводят биологическим методом, приведенным в статье «Испытание на пирогенность» ГФ XI издания, с. 183--185.

Пирогены, введенные парентерально в составе раствора, могут вызвать целый ряд нежелательных реакций в организме человека -- озноб, повышение температуры, цианоз. Кроме внешних проявлений, возможны патологические изменения в работе внутренних органов, нарушение обменных процессов (дисфункция сердечно-сосудистой системы, нарушение углеводного обмена, изменение лейкоцитарной формулы, кровоизлияния и некрозы в тканях внутренних органов).

Чем выше микробная контаминация исходного раствора, тем выше количество пирогенных веществ в готовом препарате. Наиболее опасна в этом отношении грамотрицательная микрофлора. На внешней мембране этих бактерий находится вещество липополисахаридной природы, которое и является активной частью пирогенного комплекса. Удаление пирогенов из готовых препаратов -- энергоемкий и технически сложный процесс (в условиях аптеки он в подавляющем большинстве случаев невыполним), поэтому одной из наиглавнейших задач, стоящих перед производителями вышеперечисленных лекарственных форм, является достижение условий асептики на различных стадиях технологического процесса.

Качество очищенной воды зависит от ряда факторов: качества исходной воды; совершенства используемой аппаратуры и правильности ее эксплуатации; соблюдения условий получения, сбора и хранения в соответствии с Инструкцией по санитарному режиму аптек.

Обеспечение качества исходной воды. Качество исходной питьевой воды регламентировано СанПиН «Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения. Контроль качества» и санитарными правилами и нормами «Требования к качеству воды нецентрализованного водоснабжения. Санитарная охрана источников».

Гигиенические требования к питьевой воде. Питьевая вода должна быть безопасна в эпидемиологическом и радиационном отношениях, безвредна по химическому составу, иметь благоприятные органолептические свойства.

Безопасность питьевой воды в эпидемиологическом отношении определяется ее соответствием нормативам по микробиологическим и паразитологическим показателям. Общее микробное число в питьевой воде должно быть не более 50.

В соответствии с рекомендациями ВОЗ приняты нормативы содержания вредных, часто встречающихся, получивших глобальное распространение химических веществ, поступающих в источники водоснабжения в результате хозяйственной деятельности человека.

Перед получением воды очищенной может возникнуть необходимость проведения водоподготовки, что предполагает освобождение:

* от летучих веществ (отстаивание, кипячение); от аммиака (обработка алюмокалиевыми квасцами из расчета 5,0 г на 10 л воды с последующим удалением образующегося хлорида водорода путем добавления 3,5 г натрия фосфата двузамещенного на 10 л воды);

* от механических примесей (отстаивание, фильтрование);

* от временной жесткости, обусловленной присутствием гидрокарбонатов кальция и магния (кипячением или обработкой 5%-ным кальция гидрооксидом);

* от постоянной жесткости, обусловленной присутствием хлоридов и сульфатов тех же катионов (обработка 5 -- 6%-ными растворами натрия карбоната);

* от органических веществ (обработка в течение 6 --8 ч 1%-ным раствором калия перманганата из расчета 25 мл на 10 л воды).

Вода водопроводная, прошедшая соответствующую водоподготовку, все же содержит достаточное количество солей, которые при дистилляции, например, оседают на стенках испарителя и электронагревательных элементах, в результате чего значительно снижается производительность аквадистиллятора, и быстрее выходят из строя электронагревательные элементы.

Стадия предварительной очистки питьевой воды предупреждает образование накипи и продлевает срок службы аквадистилляторов, а освобождение воды от веществ коллоидного характера сводит к минимуму закупорку пор обратноосмотических мембран.

Для предварительной обработки воды применяют фильтры из активированного угля и окисляющие добавки, например, соединения хлора. Более актуально создание аппаратов в комплексе с водоподготовителями. В настоящее время при получении воды очищенной методом дистилляции предложена электромагнитная обработка воды. При этом воду пропускают через зазоры, образованные в корпусе специального устройства между подвижными и неподвижно установленными магнитами. Под действием магнитного поля изменяются условия кристаллизации солей при дистилляции. Вместо плотных осадков солей образуется взвешенный шлам, который легко удаляется при промывке испарителя.

Предложены также электродиализный метод водоподготовки с применением полупроницаемых мембран и ионообменный -- с применением гранулированных ионитов и ионообменного целлюлозного волокна.

Основными потенциальными источниками микроорганизмов в воде для фармацевтических целей на фармацевтическом предприятии или в аптеке являются источник воды и используемое оборудование. Присутствующие в исходной питьевой воде микроорганизмы могут адсорбироваться и задерживаться фильтрами с активированным углем, многослойными фильтрами, ионообменными смолами, мембранными элементами, микро- и ультрафильтрами, инициируя образование биопленок. Системы вентиляции (отсутствие защиты и/или неисправность фильтров), обратный ток воды из систем канализации, воздушные зазоры сливных устройств так же могут служить источником микроорганизмов. Часто причиной микробной контаминации является замена фильтрующих сред (активированного угля, ионообменных смол и др.) Микроорганизмы могут «прикрепляться» к взвешенным в воде частицам, например, угольной пыли, и становиться причиной контаминации следующего далее оборудования водоподготовки.

Другим источником бактериального загрязнения является система хранения и распределения ВО и ВДИ. При неправильно спроектированной системе и отсутствии периодической санитарной обработки трубопроводов и накопительных емкостей может происходить рост на внутренних поверхностях труб, вентилей, соединительных элементов, в застойных зонах. Это становится причиной образования биопленок, являющихся постоянным источником микробиологического загрязнения. Микроорганизмы в биопленках защищены от воздействия многих биоцидных агентов. Сорванные с места первичного образования и перенесенные в другое место биопленки становятся источниками микроорганизмов далее по ходу движения воды.

Основными бактериальными показателями загрязнения воды являются: сапрофитные бактерии, указывающие на поступление в воду легко разлагающихся органических веществ; бактерии - обитатели кишечника человека и теплокровных животных, указывающие на загрязнение воды фекальными и хозяйственно-бытовыми отбросами.

Оценка общего числа микроорганизмов позволяет определить численность разнообразных групп микроорганизмов, способных образовывать колонии на питательном агаре, оценить уровень микробного загрязнения воды. Данный показатель весьма чувствителен к увеличению в воде легкоусвояемых органических веществ, поэтому динамика возрастания сапрофитной микрофлоры, особенно по сравнению с ее численностью в поступающей воде, характеризует санитарное состояние отдельных стадий водоподготовки.

Общее микробное число является косвенным показателем, так как характеризует общее содержание микроорганизмов в воде без их качественной характеристики.

Размножение сапрофитной микрофлоры в системе предварительной подготовки воды для фармацевтических целей может явиться причиной вторичного загрязнения воды. При этом накопление биомассы создает дополнительные условия для размножения индикаторных, условно-патогенных и патогенных микроорганизмов.

Особое значение данный показатель приобретает при ежедневном контроле качества воды в одной и той же точке. Внезапное возрастание общего микробного числа (даже в пределах нормы) является сигналом для поиска причины загрязнения.

Главным источником микробного загрязнения является человек: его выделения верхних дыхательных путей, фекалии, слущивающийся эпидермис, волосы с колоссальным количеством микроорганизмов.

Среди персонала могут быть носители патогенных микроорганизмов и больные с легкими формами заболевания, которые они переносят на ногах (дизентерия, брюшной тиф, паратифы А и Б, сальмонеллёзы и т. д.). Попавшие на объекты внешней среды микроорганизмы, в том числе и патогенные, как правило, не размножаются на них. Но такие объекты служат пассивными посредниками при передаче возбудителя. Возможность заражения и заболевания в таких случаях зависит от концентрации микроба, его вирулентности, сроков выживания во внешней среде. Так, патогенные энтеробактерии (сальмонеллы, шигеллы) могут выживать во внешней среде 60-80 и 14-36 дней соответственно.

Таблица 1 Классификация микрофлоры толстой кишки человека

Микрофлора	Типы классификаций
	От периодичности встречаемости	От фактора присутствия	От количественного соотношения
Анаэробы (95-99%) Бифидобактерии Бактероиды Лактобактерий Аэробы (1-5%) Кишечная палочка Энтерококки	Облигатная (наиболее постоянная)	Индигенная, резидентная, Постоянная, обязательная (состав которой детерминирован генетически)	Главная (более 90% всех микробов) Сопутствующая (около 10%)
Условно-патогенные энтеробактерии (цитробактер, энтеробактер, протей, клебсиелла, серрация, гафния, неферментирующие грамотрицательные палочки: псевдомонады, ацинетобактеры) Клостридии Стафилококки Дрожжеподобные грибы Кандида	Факультативная (менее 1%)	Транзиторная, случайная, временная	Остаточная (менее 1%)

6. Факторы, способствующие микробной контаминации воздушной среды производственных помещений аптек. Нормативные требования к микробиологической чистоте воздуха асептического бокса и мероприятия по поддержанию данных нормативов

Воздушная среда не является подходящей для длительного пребывания в ней микроорганизмов, особенно патогенных. Отсутствие влаги, питательных веществ, действие ультрафиолетовых лучей и т. д. ведут к гибели большинства микроорганизмов.

Нормальная микрофлора воздуха складывается из резидентной и транзиторной. Резидентная микрофлора - сапрофитная: бактерии с липохромным пигментом (сарцины, микрококки, сапрофитный стафилококк и др.); бациллы (сенная палочка, микоидные бациллы и др.); плесневые и дрожжевые, дрожжеподобные грибы.

Все эти микроорганизмы имеют структуры или механизмы, защищающие их от губительного действия ультрафиолетовых лучей, отсутствия влаги, питательных веществ.

Транзиторная микрофлора - патогенные и условно-патогенные бактерии, вирусы. Они являются возбудителями воздушно-капельной инфекции, раневой инфекции, гнойно-воспалительных заболеваний и т. д.

Это могут быть: золотистый и эпидермальный стафилококк, дифтерийная, туберкулёзная, синегнойная палочки, энтеробактерии (клебсиелла, протей, серрация и др.); вирусы кори, гриппа и т. д.

В неочищенном воздухе во взвешенном состоянии находятся инородные включения различных размеров:

0,03-0,30 мкм - вирусы, бактерии; 10,0-100,0 мкм - частицы пыли; 30,0-200 мкм -- волокна, волосы.

Бактерии находятся в воздухе в виде аэрозоля, который по размерам частиц делится на фазы:

а) крупнокапельная или быстро оседающая фаза - капли с диаметром более 100 мкм;

б) мелкоядерная фаза -- капли и частицы с диаметром менее 10 мкм. Они длительно находятся во взвешенном состоянии, и часть из них высыхает раньше, чем оседает ("бактериальная пыль").

Человек постоянно выделяет аэрозольные частицы, число которых колеблется от 1 тысячи до 30 млн в минуту, в зависимости от характера производимых им движений, состояния верхних дыхательных путей, интенсивности разговора. Капельки слюны, слизи при чихании, разговоре, кашле вместе с микробами попадают в воздух и с током воздуха могут разноситься далеко от источника. Бактерии могут оседать на пылевые частицы и "путешествовать" вместе с ними. Мелкодисперсные аэрозольные частицы практически не оседают и постоянно находятся во взвешенном состоянии.

До 90% микробов, попадающих в воздух, погибают в течение 1 часа.

Воздух производственных помещений аптек - один из немаловажных источников микробного обсеменения лекарственных препаратов. Одновременно воздух является каналом передача микрофлоры из одного помещения в другое.

Поэтому микробная чистота воздуха является хорошим мероприятием по профилактике заноса микробов в лекарственные формы. Для контроля степени микробной обсемененности воздуха в аптеках и на предприятиях фармацевтической промышленности регулярно проводится определение следующих микробных показателей:

а) общее микробное число воздуха (ОМЧ) - количество микроорганизмов в 1 м^З воздуха;

б) наличие в воздухе золотистого стафилококка, грибов (плесневых, дрожжевых, дрожжеподобных), синегнойной палочки, энтеробактерии.

Санитарно-микробиологическое обследование объектов и окружающей среды аптек проводится:

1) для осуществления контроля за общим гигиеническим состоянием (текущий надзор);

2) выявления фекального загрязнения (микробиологический контроль санитарно-гигиенического режима);

3) выявления контаминации патогенными микроорганизмами объектов окружающей среды, как возможных факторов при передаче возбудителей инфекционных заболеваний (обследование по показаниям).

Показания для санитарно-микробиологического обследования предприятий фармацевтической промышленности и аптек

1. Текущий санитарный контроль.

2. Микробиологический контроль санитарно-гигиенического режима.

3. Обследование по показаниям -- при выявлении патогенных и санитарно-показательных микробов во внешней среде или лекарственных формах.

Объектами микробиологического контроля в аптеках являются исходные, промежуточные и готовые продукты, вспомогательные вещества и материалы, руки и санитарная одежда персонала, воздушная среда и поверхности помещений и оборудования.

Выполнение производственных функций аптеки, основы техники безопасности и производственной санитарии отражены в приказе МЗ РФ № 309 от 21.10.1997 г. «Об утверждении Инструкции по санитарному режиму аптечных организаций (аптек)».

Таблица 2. Нормативы оценки санитарного состояния воздуха аптечных помещений (по количеству микробов, оседающих на 1м² поверхности в минуту)

Помещения аптеки	Оценка санитарного состояния воздуха (на 1м2/мин)
	хорошо	удовлетворительно	плохо
Асептическая, кубовая-стерилизационная	до 50	50-75	более 75
Моечная	до 125	125-150	более 150

Аспирацпонный метод изучения микрофлоры воздуха. В этом методе используется принцип ударной струи воздуха, получаемый с помощью аппарата Кротова. Достоинства этого метода:

а) точно учитывается объем воздуха, пропускаемого через чашку с питательной средой, установленную в аппарате;

б) принцип ударной струи способствует фиксации в питательной среде всех взвешенных частиц аэрозоля.

Таким образом, удается фиксировать на поверхности плотной питательной среды максимальное количество микроорганизмов, обитающих в воздухе. Используя различные виды элективных и дифференциально-диагностических питательных сред, можно выявлять в воздухе все основные группы патогенных и условно-патогенных микроорганизмов.

Таблица 3. Нормативы оценки санитарного состояния воздуха аптечных помещений при использовании аспирационного метода (количество микробов в 1м³)

Помещения аптеки	Условия работы	Количество микроорганизмов в 1 м
		ОМЧ	St. aureus	Грибы
Асептический блок, стерилизационная (чистая половина)	до работы после работы	до 500 до 1000	в 250 л = 0 в250л = 0	в 250 л = 0 в 250 л = 0

Помещения асептического блока должны размещаться в изолированном отсеке и исключать перекрещивание "чистых" и "грязных" потоков. Асептический блок должен иметь отдельный вход или отделяться от других помещений производства шлюзами.

В целях обеспечения соответствующего санитарно-противоэпидемического режима в этих помещениях перед входом в асептический блок должны лежать резиновые коврики или коврики из пористого материала, смоченные дезинфицирующими средствами.

Уборку помещений асептического блока (полов и оборудования) проводят не реже 1 раза в смену в конце работы с использованием дезинфицирующих средств. Один раз в неделю проводят генеральную уборку помещений.

Для достижения максимальной степени чистоты уборку асептического блока следует проводить в строгой последовательности. Начинать следует с асептической. Вначале моют стены и двери от потолка к полу. Движения должны быть плавными, обязательно сверху вниз. Затем моют и дезинфицируют стационарное оборудование и в последнюю очередь полы. Все оборудование и мебель, вносимые в асептический блок, предварительно обрабатывают дезинфицирующим раствором. Для уборки и дезинфекции поверхностей рекомендуются поролоновые губки, салфетки с заделанными краями из не волокнистых материалов. Для протирки полов можно использовать тряпки с заделанными краями из суровых тканей.

Для обеспечения санитарно-противоэпидемического режима в асептическом блоке, в шлюзе должны быть предусмотрены скамья для переобувания с ячейками для спецобуви, шкаф для халата и биксов с комплектами стерильной одежды; раковина (кран с локтевым приводом), воздушная электросушилка и зеркало; гигиенический набор для обработки рук; инструкции о порядке переодевания и обработке рук, правила поведения в асептическом блоке.

В ассистентской-асептической не допускается подводка воды и канализации. Трубопроводы для очищенной воды следует прокладывать таким образом, чтобы можно было легко проводить уборку.

Учитывая особый режим работы в асептическом блоке, для исключения поступления воздуха из коридоров и производственных помещений в асептический блок в последнем необходимо предусмотреть приторно-вытяжную вентиляцию, при которой движение воздушных потоков должно быть направлено из асептического блока в прилегающие к нему помещения, с преобладанием притока воздуха над вытяжкой (+4--2). Рекомендуется с помощью специального оборудования обеспечить создание горизонтальных или вертикальных ламинарных потоков чистого воздуха во всем помещении или в отдельных локальных зонах для защиты наиболее ответственных участков или операций (чистые камеры). Чистые камеры или столы с ламинарным потоком воздуха должны иметь рабочие поверхности и колпак из гладкого прочного материала. При этом скорость ламинарного потока регламентируется на уровне 0,3--0,6м/с.

В помещении для обработки посуды в асептическом блоке уборку производят ежедневно в конце рабочего дня. Оборудование протирают влажной, а затем сухой ветошью. Полы обрабатывают раствором моющих средств и дезинфицируют 2 % раствором хлорамина. В санитарные дни стены моют горячей водой с моющими средствами.

Уборку дистилляционной комнаты производят также по окончании работы. Стены и пол моют раствором гидрокарбоната натрия или 2% раствором хлорамина. Доступ в дистилляционную комнату ограничивается даже для аптечных работников.

Для дезинфекции воздуха и различных поверхностей в асептических помещениях устанавливают бактерицидные лампы (стационарные или передвижные облучатели) с открытыми или экранированными лампами. Количество и мощность бактерицидных ламп должны подбираться из расчета не менее 2--2,5 Вт мощности неэкранированного излучателя на 1 м3 объема помещения. При экранированных бактерицидных лампах -- 1 Вт на 1 м3. Настенные бактерицидные облучатели ОБН-150 устанавливают из рас¬чета 1 облучатель на 50 м3 помещения; потолочные ОБЛ-300 -- из расчета 1 на 60 м3; передвижной ОБП-450 с открытыми лампами используют для быстрого обеззараживания воздуха в помещениях объемом до 100 м3. Оптимальный эффект наблюдается на расстоянии 5 м от облучаемого объекта.

7. Цель и методы обследования посуды и объектов внешней среды аптек на наличие Staph. aureus и Ps. aeruginosa

Золотистый стафилококк (Staphylococcus aureus) является главной патогенной бактерией в клинической области

Санитарно-показательными микроорганизмами загрязнения воздуха закрытых помещений являются стафилококки (Staph, aureus), а также зеленящие и гемолитические стрептококки, постоянно обитающие на слизистой оболочке верхних дыхательных путей и выделяющиеся в воздушную среду при разговоре, кашле, чиханье. Во внешней среде стрептококки сохраняют жизнеспособность в течение примерно тех же сроков, что и возбудители дифтерии, а стафилококки -- даже дольше. Чем большее количество стрептококков обнаруживают в воздушной среде, тем вероятнее возможность заражения человека воздушно-капельными инфекциями. Нарастание обсемененности воздуха Staph, aureus и частое его обнаружение свидетельствуют о санитарно-эпидемиологическом неблагополучии.

В последние годы возрастает значение Ps. aeruginosa в патологии человека. Обнаружение Ps. aeruginosa в объектах окружающей среды сигнализирует одновременно об эпидемическом (как патоген) и санитарном (как индикатор биологического загрязнения) неблагополучии. Известны острые кишечные инфекции псевдомонадной этиологии водного происхождения и различные формы заболеваний (отиты, поражения кожного покрова) у купающихся в бассейнах, септические заболевания грудных детей с летальным исходом в результате купания в питьевой воде централизованного водоснабжения, содержавшей Ps. aeruginosa.

Объекты санитарно-бактериологического обследования:

а) оборудование, инвентарь, посуда и др. с целью проверки эффективности санитарной обработки;

б) смывы с рук, санитарной одежды, личных полотенец (с целью проверки соблюдения правил личной гигиены персоналом);

Используется метод смывов с целью контроля эффективности санитарной обработки инвентаря, оборудования, посуды, санитарной одежды и рук персонала. Метод смывов дает возможность объективно оценить санитарное содержание обследуемых учреждений.

Бактериологический контроль методом смывов с поверхностей инвентаря, оборудования, рук и санитарной одежды персонала может преследовать две цели:

а) установить эффективность санитарной обработки, для этого смывы с инвентаря, оборудования, рук и санитарной одежды персонала производят перед началом работы или, если это невозможно, в перерывах, после того как руки и оборудование подверглись санитарной обработке, т.е. смывы производят с чистых объектов. Кроме того, смывы с рук берутся у персонала после посещения туалета до возобновления работы;

б) определить роль оборудования и рук персонала в бактериальном обсеменении продукта

Доставка проб должна производиться в термоконтейнерах (с охлаждаемыми вкладышами).

Время доставки проб продуктов и смывов в лаборатории для осуществления исследования не должно превышать 2-х часов, так как затягивание этого срока отражается на достоверности результатов анализа.

При взятии смывов с мелких инструментов обтирается вся поверхность предмета, при заборе смывов с тарелок протирают всю внутреннюю поверхность. При взятии смывов с мелких предметов одним тампоном протирают три одноименных объекта - три тарелки, три ложки и т.п. У столовых приборов протирают их рабочую часть.

При взятии смывов с рук протирают тампоном ладонные поверхности обеих рук, проводя не менее 5 раз по каждой ладони и пальцам, затем протирают межпальцевые пространства, ногти и подногтевые пространства.

При взятии смывов с санитарной одежды протирают 4 площадки по 25 кв. см - нижнюю часть каждого рукава и 2 площадки с верхней и средней частей передних пол спецовки. С различных мест полотенца берут 4 площадки по 25 кв. см.

Взятие смывов производится с помощью стерильных увлажненных ватных тампонов. Стерильные ватные тампоны на стеклянных, металлических или деревянных палочках, вмонтированных в пробирки с ватными пробками, заготавливают заранее в лаборатории. В день взятия смывов в каждую пробирку с тампоном наливается (в условиях бокса над горелкой) по 5 мл стерильного 0,1% водного раствора пептона или изотонического раствора хлорида натрия таким образом, чтобы ватный тампон не касался жидкости.