Лектины как активные компоненты адаптивных реакций озимой пшеницы к неблагоприятным условиям среды

Через 1 час низкотемпературного воздействия (рис. 3В) происходило полное обновление состава лектинов. Исчезли все присутствующие ранее лектины и были обнаружены новые с мол. м. 98, 60 и 25 кД. После 3 часов воздействия вновь появились лектины с мол. м. 85, 43 и 34 кД и одновременно увеличилось количество низкомолекулярных белков с лектиновой активностью (рис. 3Г). Это может быть связано либо с распадом высоко- и среднемолекулярных белков, либо с изменением их синтеза. Через 6 ч гипотермии наблюдалось повышение активности лектинов (рис. 2), в белковом спектре появляется лектин 70 кД, обнаруженный после 0,5 ч воздействия низкой температуры и который является АГБ, и лектин 98 кД, присутствующий после 1 ч гипотермии (рис.3Д). При этом увеличивается содержание белка во фракции, элюированной глюкозой (табл. 1).

Через сутки закаливания активность лектинов увеличивается еще больше, содержание белка в этой фракции также повышается (табл. 1), исчезает лектин 70 кД, появляются лектины 17, 5 кД и 60 кД (рис. 3Е).

Особый интерес может представлять лектин 70 кД, появление которого отмечено после 0,5 ч и 6 ч гипотермии, в начальные периоды повышения активности лектинов. Поскольку он относится к АГБ, которые могут быть как адгезивными, так и сигнальными молекулами, возможно, его появление можно отнести к пусковым механизмам формирования защитных реакций клеток.

Активность лектинов при действии на растения микоплазменной инфекции в условиях оптимальных температур и гипотермии

Работы разных исследователей подтверждают участие лектинов в механизмах фитоиммунитета (Любимова, Салькова, 1988; Skripal' et al., 1994; Ладыгина, Бабоша, 1996; Хайруллин, 1994; Антонюк, Игнатов, 2001). Межклеточное узнавание, очевидно, является первым этапом взаимоотношения растения-хозяина и микроорганизма, и роль рецепторов в распознавании чужеродных инфекционных структур могут выполнять лектины, связанные с клеточной стенкой, так называемые в-лектины. Существует немало данных о вовлечении в формирование защитных реакций растений и так называемых классических лектинов, локализованных в цитоплазме и вакуоле. Такие лектины способны связываться со спорами патогенных грибов и другими инфекционными структурами патогенов и вследствие этого подавлять их рост и развитие. Поскольку лектин пшеницы проявляет высокую специфичность к N-ацетилглюкозамину и олигомерам хитина, было высказано предположение о его защитной роли при заражении растений хитинсодержащими фитопатогенами (Mirelman et al., 1975; Шакирова, Безрукова, 2007).

Обычно изучается участие растительных лектинов в защитных реакциях на инфицирование грибами и бактериями, которые содержат клеточные стенки. Наш интерес к микоплазмам, самым малым прокариотическим организмам, связан, с одной стороны, с уникальностью их структурной организации (отсутствием клеточной стенки), а с другой - распространенностью фитомикоплазмозов.

Как следует из рис. 4 изменения лектиновой активности клеточной стенки в процессе инфицирования микоплазмами были аналогичны тем, что наблюдались в процессе низкотемпературного закаливания. При совместном действии микоплазм и низких положительных температур обнаружено значительное увеличение активности на 2-е сутки.

Активность растворимых лектинов увеличивалась на 2-е сутки после заражения микоплазмами, после чего наблюдалось ее снижение (рис. 4А). При совместном влиянии инфицирования и низких температур на активность растворимых лектинов наблюдали два пика активности: быстрый (2 сутки), характерный для патогенеза, и медленный (5 сутки), присущий закаливанию (рис. 4А). При этом следует отметить, что закаливание значительно усиливало стимулирующее действие микоплазм на активность растворимых лектинов (первый пик), тогда как инфицирование не оказало существенного влияния на изменения активности лектинов, вызываемых гипотермией (второй пик).

Рис. 4. Динамика активности растворимых лектинов (А) и лектинов клеточной стенки (Б) при инфицировании микоплазмами, низкотемпературном закаливании и совместном действии закаливания и инфицирования.

Электрофоретическое разделение белков в ПААГ (рис. 5) позволило обнаружить в инфицированных микоплазмами растениях пшеницы увеличение содержания полипептидов 76, 48, 25, 18 кД, появление полипептидов 22, 20 кД и исчезновение полипептида 14 кД.

Исходя из данных литературы полипептид 18 кД является лектином АЗП. Таким образом, инфицирование растений пшеницы микоплазмами приводило к изменению спектра синтезируемых белков - набора полипептидов и их соотношения.

Рис. 5. Влияние микоплазменной инфекции на полипептидный состав фракции кислоторастворимых белков проросков пшеницы Мироновская 808:

1 - белки-маркеры, 2 - контроль, 3 - инъекция микоплазмами, 4 - инъекция культуральной средой.

Повышение активности лектинов в ответ на инфицирование микоплазмами можно рассматривать как защитный механизм растения, степень реализации которого увеличивается в условиях низкотемпературного закаливания. Вполне вероятно, что стимуляция низкой температурой активности лектинов может привести к запуску механизмов формирования устойчивости к микоплазменной инфекции, или изменения в активности лектинов являются одним из конечных результатов функционирования механизмов устойчивости - в любом случае лектины вовлекаются в формирование устойчивости к стрессорам.

Роль гормонов и их структурных аналогов в регуляции активности лектинов. Действие АБК и картолина на активность лектинов. Как известно, большая роль в координации процессов жизнедеятельности клетки в неблагоприятных условиях принадлежит веществам гормонального типа. В настоящее время не подвергается сомнению тот факт, что АБК выполняет в клетках растений роль триггерного сигнала, способствующего формированию механизмов адаптации к низким температурам через изменение экспрессии генов и синтез новых белков (Song et al., 2008).

Факт регуляции абсцизовой кислотой синтеза и накопления растворимого лектина АЗП хорошо известен (Mansfield, Raikhel, 1990). Было показано, что в ответ на солевой и тепловой стрессоры в клетках растений происходит многократное повышение уровня АБК и лектина (Шакирова, 1995, 1998), причем накопление АБК предшествовало накоплению лектина.

В наших экспериментах АБК, добавляемая в среду выращивания растений, повышала активность лектинов в корнях проростков (рис. 6). Наибольшее увеличение активности как растворимых лектинов, так и лектинов клеточной стенки наблюдалось у менее морозоустойчивого сорта Безостая 1, а наименьшее - у наиболее морозостойкого сорта Альбидум 114 .

Принимая во внимание данные литературы, можно полагать, что повышение активности растворимых лектинов связано с увеличением содержания этого белка. Быстрая регуляция синтеза лектина этим фитогормоном может быть связана с активацией пула запасных форм лектиновых мРНК и изменением скорости посттрансляционных процессов (Шакирова и др., 2000). С течением времени пул лектинов может пополняться и за счет изменения скорости транскрипции мРНК лектинов или её процессинга (Raikhel et al., 1986).

Можно также предположить участие АБК и в биосинтезе лектинов клеточной стенки. Значительное увеличение активности лектинов у менее морозостойких сортов при добавлении экзогенной АБК может быть объяснено недостатком АБК в этих растениях, а изначально высокая активность растворимых лектинов у этих сортов (рис. 1), по-видимому, является компенсаторным механизмом.

На фоне закаливающей температуры АБК практически не оказала влияния на активность лектинов клеточной стенки и незначительно повысила активность растворимых лектинов у Мироновской 808 и Альбидум 114, по сравнению с её действием без закаливания (рис. 6).

Увеличение уровня АБК в первый период действия стрессоров приводит к снижению активности метаболических процессов в клетках и индукции синтеза стрессовых белков. На фоне общей тенденции подавления синтеза "обычных" белков при действии неблагоприятных факторов может происходить усиление синтеза отдельных белков, присущих клетке в нормальных для нее условиях, и, вероятно, участвующих в формировании защитных реакций растений к стрессорам. К таким белкам, очевидно, можно отнести лектины.

Рис.6. Влияние АБК и картолина на активность растворимых лектинов (РЛ) и лектинов клеточной стенки (ЛКС) в корнях незакаленных (А) и закаленных (Б) проростков трех сортов озимой пшеницы: 1-контроль, 2 - АБК, 3 - картолин.

В спектре действия цитокининов и их структурных аналогов, а также соединений цитокининового типа действия присутствует защитный эффект по отношению к неблагоприятным факторам окружающей среды. Так, обнаружено антистрессовое влияние цитокининов при действии на растения засухи, низких температур, засоления, возбудителей болезней (Кулаева, 1973; Poupet et al., 1990; Зауралов и др., 1997; Пустовойтова и др., 1997).

Для оценки действия веществ цитокининового типа на активность лектинов нами был использован картолин. Препарат картолин, синтезированный на основе отдаленных структурных аналогов цитокининов пуринового ряда и дифенилмочевины Ю.А. Баскаковым с сотр. (1988), обладает некоторыми цитокининовыми свойствами: увеличивает количество рибосом в составе полисом, оказывает криопротекторное действие на белоксинтезирующий аппарат при засухе, высоких и низких температурах, грибном патогенезе, а также повышает устойчивость растений к действию стрессоров различной природы.

Выращивание растений на среде с картолином приводило к усилению активности лектинов клеточной стенки в корнях незакаленных растений трех сортов озимой пшеницы (рис. 6). Наибольший эффект картолина наблюдался у маломорозоустойчивого сорта Безостая 1, наименьший - у высокоморозоустойчивого сорта Альбидум 114, что может быть следствием повышенной отзывчивости менее морозоустойчивого сорта на данный препарат.

Следует отметить, что после 7-суточного закаливания картолин уменьшал активность лектинов в растениях сорта Безостая 1 и практически не оказал влияния на лектины клеточной стенки у Мироновской 808 и Альбидум 114 (рис. 6). Мы показали, что у более морозоустойчивого сорта Альбидум 114 наблюдается большая активность лектинов у незакаленных растений. По-видимому, стимулирующее действие картолина на активность связанных с клеточной стенкой лектинов клеточной стенки у незакаленных растений необходимо для последующего усиления адаптационных процессов в клетке.

Добавление картолина в среду выращивания растений всех трех сортов озимой пшеницы приводило к повышению активности растворимых лектинов у незакаленных растений, наиболее выраженное у морозоустойчивого сорта Альбидум 114. После 7-суточного закаливания (рис. 6) активность лектинов увеличивалась в большей степени, чем в варианте без закаливания. Наибольший эффект картолина на активность лектинов наблюдали у слабоморозоустойчивого сорта Безостая 1, наименьший - у высокоморозоустойчивого сорта Альбидум 114.

Вероятно, механизм действия картолина, направленный на поддержание активного состояния белоксинтезирующего аппарата, является ключевым в проявлении его защитного эффекта на растения при действии неблагоприятных условий окружающей среды.

В то же время защитный эффект картолина может проявляться и через изменение гормонального баланса растений. Основываясь на способности картолина вызывать накопление АБК в растениях (Ефремов и др., 1992), можно предположить, этот препарат, включаясь в механизмы регуляции синтеза стрессовых белков через повышение уровня эндогенной АБК, вызывает увеличение активности лектинов.

Влияние салициловой кислоты на активность лектинов пшеницы при инфицировании микоплазмами. В формировании иммунитета растений к патогенам также важную роль играют стрессовые фитогормоны, в частности, салициловая кислота, которую в последнее время относят к веществам гормонального типа. Считается, что экзогенная салициловая кислота, активируя ряд сигнальных систем, вызывает экспрессию генов, образование защитных белков и формирование системной приобретенной устойчивости (Gaffiney et al., 1993; Jung et al., 1993; Тарчевский и др., 1996). В формировании ответных реакций, например, при грибном патогенезе, участвует и лектин пшеницы (Chrispeels, Raikhel, 1991; Хайруллин и др., 2001).

Рис. 7. Влияние салициловой кислоты (СК) и инфицирования микоплазмами на активность растворимых лектинов (А) и лектинов клеточной стенки (Б) в корнях проростков озимой пшеницы.

Салициловая кислота при инфицировании практически снимает индуцируемые микоплазмами изменения в активности растворимых лектинов (рис. 7А).

Такой же эффект салициловой кислоты в инфицированных растениях наблюдался и на лектины клеточной стенки (рис. 7Б). Можно полагать, что такое действие салициловой кислоты на активность лектинов после заражения растений связано с тем, что салициловая кислота ускоряет прохождение фазы повреждения и наступление фазы адаптации. Также нельзя исключать и возможное влияние салициловой кислоты непосредственно на микоплазмы. Известно, что салициловая кислота частично подавляет рост ряда микроорганизмов (Lev et al., 2008).

Влияние салициловой кислоты на активность лектинов и морозоустойчивость озимой пшеницы

Существует предположение, что обработка салициловой кислотой способствует предадаптации растений к стрессовым воздействиям. В частности, было показано, что предобработка проростков пшеницы салицилатом снижала повреждающее действие NaCl на их рост и ускоряла репарацию ростовых процессов в них после удаления соли из среды (Шакирова, 1999).

Для выяснения возможности повышения морозоустойчивости пшеницы под влиянием салициловой кислоты мы определяли LT50 листьев (табл. 2). Наиболее значительное повышение морозоустойчивости под действием салициловой кислоты наблюдалось у незакаленных проростков в концентрации 10-3 М. Следует отметить, что при этой концентрации происходило достоверное увеличение активности лектинов клеточной стенки у незакаленных растений. Эти результаты еще раз свидетельствуют в пользу предположения о том, что более высокий уровень активности лектинов клеточной стенки соответствует и большей морозоустойчивости растений.

Таблица 2. Влияние салициловой кислоты на активность лектинов и морозоустойчивость проростков озимой пшеницы Мироновская 808

Известно, что обработка растений многими химическими средствами защиты приводит к накоплению АБК в отсутствии стрессового воздействия (Джемилев и др., 1990). Салициловая кислота также способна индуцировать повышение уровня АБК (Шакирова, Безрукова, 1997), увеличение содержания которой вызывает возрастание активности лектинов пшеницы и морозоустойчивости растений. Возможно, влияние салицилата на морозоустойчивость растений, опосредованное действием АБК, можно рассматривать как проявление слабого химического стресса, предадаптирующего растение к действию других стрессоров.

Как правило, первичным ответом клетки на действие различных биогенных и абиогенных стрессоров, является активация различных сигнальных систем. В то же время, эти стрессоры вызывают достаточно быстрое и интенсивное накопление стрессовых фитогормонов, которые также могут вызывать активацию или ингибирование тех или иных сигнальных систем клеток и осложнять картину «чистого» первичного ответа со стороны сигнальных систем на действие того или иного стрессора. Поскольку и стрессоры (низкая температура, микоплазменая инфекция), и фитогромоны (АБК, салицилат, структурный аналог цитокининов - картолин) в наших экспериментах вызывали повышение активности лектинов, то вполне вероятно, что это может быть обусловлено функционированием сигнальных систем клеток.

Активность и состав лектинов клеточной стенки при действии ингибиторов кальциевой сигнальной системы. Адекватная реакция растительных тканей на действие различных стрессорных факторов во многом определяется состоянием пусковых сигнальных систем клеток, обеспечивающих скоординированное функционирование в клетках защитно-приспособительных систем. Важными составляющими этих систем могут быть лектины клеточных стенок.

Известно, что некоторые АГБ содержат карбоксилтерминальные гликозил фосфатидилинозитольные «якори», при помощи которых они закрепляются на плазматической мембране. Воздействие низких температур вызывает активацию фосфолипаз С и Д, которые отсекают фосфотидилинозитольный домен АГБ, высвобождая АГБ из плазматической мембраны в клеточную стенку и изменяя их конформацию. Следствием этого может быть появление первого пика активности лектинов клеточной стенки, наблюдаемого через 30 минут гипотермии. Блокирование активности фосфолипазы С неомицином (рис. 8Б) приводит к уменьшению этого пика, а второй пик смещается на более позднее время.

Рис. 8. Активность растворимых лектинов (А) и лектинов клеточной стенки (Б) при действии низких температур и ингибиторов кальциевой сигнальной системы

Ингибиторы потенциал-зависимых Ca2+-каналов верапамил и дилтиазем, также как и неомицин, уменьшали первый пик активности лектинов клеточной стенки (рис. 8Б) и задерживали его появление. Увеличение активности наблюдали лишь через 1 и 3 часа гипотермии соответственно, после чего активность постепенно уменьшалась и в течение первых суток достигла уровня незакаленных растений.

Резкое снижение активности растворимых лектинов под действием исследуемых ингибиторов (рис. 8А) указывает на решающую роль кальциевой сигнальной системы в регуляции их активности.

На фоне дилтиазема после 30 мин действия низких температур (рис. 9А) спектр лектиновых белков не изменился по сравнению с незакаленными растениями (рис. 3). После 1 ч гипотермии (рис. 9Б) с дилтиаземом появились белки с мол. м. 105, 70 и 34 кД, которые в контроле (вариант без дилтиазема) были выявлены через 0,5 ч низкотемпературного воздействия. Через 3 ч гипотермии повышалась активность лектинов в варианте с дилтиаземом (рис. 8Б), увеличивалось количество пиков лектинов (рис. 9В) и содержание белка, элюированного глюкозой (табл. 1). Состав лектинов (рис. 9) незначительно отличался от белков с лектиновой активностью контрольных растений (рис. 3). Исключение составили низкомолекулярные лектины 25 и 11 кД, которые появились через 1 ч и остались после 3 ч действия низких температур.

Рис. 9. Влияние дилтиазема на профиль элюции белков клеточной стенки при действии низких температур в течение 0.5 ч (А), 1 ч (Б), 3 ч (В).

Можно предполагать, что блокирование дилтиазем-чувствительных кальциевых каналов замедляет ответную реакцию организма на стрессовое воздействие и не позволяет клетке быстро реагировать на неблагоприятные условия. Следует также отметить, что спектр индуцированных холодом белков под влиянием дилтиазема (рис. 9) отличался от белков контроля (рис. 3). Так, в варианте с дилтиаземом не были обнаружены белки 110, 98 и 60 кД (рис. 9). Логично предположить их важную роль в формировании морозоустойчивости, поскольку закаливание растений в присутствии дилтиазема не приводило к повышению устойчивости.

В последнее время широко обсуждается возможная роль лектинов клеточной стенки, в частности АГБ, киназ, ассоциированных с клеточной стенкой, и рецепторных протеинкиназ, связанных с лектинами, в осуществлении контакта между клеточной стенкой и плазмалеммой и их участие в проведении сигнала через клеточную поверхность (Sardar et al., 2006; Sardar, Showalter, 2007; Gouget et al., 2006; Baluska et al., 2003). С другой стороны, высказывается предположение о существовании сигнальных путей в апопласте растений (Chivasa et al., 2002). На это указывают данные о существовании протеинкиназ в клеточной стенке и фосфорилирования по тирозину белков клеточной стенки.

Таким образом, нами показано, что быстрые и значительные изменения активности и состава лектинов клеточной стенки при действии низких температур зависят от кальциевой сигнальной системы и могут быть связаны с участием лектинов в проведении сигнала внутрь клетки или непосредственно в апопластном пространстве.

Цитоскелет-зависимые изменения активности лектинов

Влияние модификаторов микротрубочек на активность лектинов

Ввиду отсутствия в высших растениях настоящих гомологов интегринов и кадеринов - белков, осуществляющих связь внеклеточного матрикса с цитоскелетом в клетках животных, предполагается, что в качестве молекул, связывающих цитоскелет и клеточную стенку растений, могут выступать киназы клеточной стенки и АГБ (Baluska et al., 2003). Имеющиеся данные свидетельствуют о возможности участия АГБ в проведении сигнала от клеточной стенки к цитоскелету в цитоплазму (Baluska et al., 2003).

Для выяснения связи активности лектинов клеточной стенки и структурной целостности цитоскелета был применен ингибиторный анализ (Тимофеева и др., 1999, 2008; Беляева и др., 2002; Чулкова и др., 2005; Timofeeva et al., 2001, 2003).

Для модификации микротрубочек использовали оризалин. Оризалин, связываясь с микротрубочками, ингибирует полимеризацию тубулиновых белков и вызывает исчезновение микротрубочек (МТ) в клетках высших растений, одновременно препятствуя образованию новых микротрубочек (Morejohn et al., 1987).

Оризалин сортоспецифично повышал активность лектинов клеточной стенки (рис. 10) в корнях и листьях незакаленных растений всех трех сортов. Наибольший эффект ингибитора полимеризации микротрубочек наблюдали у слабоморозоустойчивого сорта Безостая 1 (196%), наименьший - у высокоморозоустойчивого сорта Альбидум 114 (136%).

В закаленных растениях Мирновской 808 и Альбидум 114 активность лектинов под влиянием оризалина увеличивалась меньше, чем в незакаленных, а у Безостой 1 так же, что коррелирует с иммуноцитохимическими данными о стабильности МТ (Хохлова, Олиневич, 2003).

Эти результаты свидетельствуют о связи между лектинами клеточной стенки и структурной целостностью цитоскелета. Возможно, лектины принимают участие в связывании элементов цитоскелета с плазмалеммой и клеточной стенкой. Разрушение микротрубочек может приводить к высвобождению лектинов из плазмалеммы в клеточную стенку и окружающую среду.

Таким образом, если существует зависимость активности лектинов от состояния цитоскелета, логично было предположить, что модификация цитоскелета будет изменять активность лектинов.

Рис. 10. Оризалин-индуцированные изменения активности лектинов клеточной стенки в обработанных АБК корнях трех сортов озимой пшеницы: 1 - Безостая 1; 2 - Мироновская 808; 3 - Альбидум 14

В наших экспериментах на фоне АБК активность лектинов под влиянием оризалина увеличивалась в меньшей степени по сравнению с вариантом без АБК (рис. 10). Наиболее выраженным этот эффект был у сорта Безостая 1. Уменьшение влияния оризалина на активность лектинов под действием АБК, вероятно, связано с тем, что абсцизовая кислота может принимать участие в стабилизации цитоскелетных структур, что согласуется с данными иммуноцитохимических анализов (Хохлова, Олиневич, 2003). Поскольку мембранно - цитоскелетный комплекс является динамичной системой, чувствительной к уровню ионов Са2+ (Марков, Медведева, 1998), и связывание с филаментами цитоскелета ассоциированных с плазмалеммой белков регулируется наличием этих катионов (Aderem, 1997), можно предположить, что эффект АБК опосредован изменением концентрации кальция.

Совместная обработка АБК и низкими температурами растений Безостая 1 и Мироновская 808 приводила к уменьшению влияния оризалина на активность лектинов, наиболее выраженному у маломорозоустойчивого сорта (рис. 10). У Альбидум, наоборот, в этих условиях эффект оризалина усиливался. Вероятно, экзогенная АБК является дополнительным к действию низких температур фактором, повышающим устойчивость растений к холоду через увеличение стабильности тубулинового цитоскелета, лишь в растениях маломорозоустойчивого сорта.

Таким образом, сравнение наших данных о влиянии АБК на оризалин -индуцированные изменения активности лектинов клеточной стенки с результатами иммуноцитохимии (Хохлова, Олиневич, 2003), позволяющими непосредственно наблюдать влияние гормона на стабильность микротрубочек, дает основание для использования изменений лектиновой активности в качестве показателя, отображающего степень стабильности тубулиновых филаментов.

В следующей серии экспериментов изучали влияние картолина на оризалин-индуцированные изменения активности лектинов в корнях отличающихся по морозоустойчивости сортов озимой пшеницы.

Рис. 11. Оризалин-индуцированные изменения активности лектинов клеточной стенки в обработанных картолином корнях трех сортов озимой пшеницы: 1 - Безостая 1; 2 - Мироновская 808; 3 - Альбидум 14

Картолин уменьшал эффект оризалина на активность лектинов клеточной стенки в растениях всех трех сортов, и особенно у Безостой 1 (рис. 11). Принимая во внимание способность АБК оказывать стабилизирующее влияние на цитоскелетные структуры (Хохлова, Олиневич, 2003), можно предположить, что реакция лектинов на оризалин при добавлении картолина также является АБК-опосредованной. При добавлении картолина в среду выращивания закаленных растений наблюдали уменьшение влияния оризалина на активность лектинов клеточной стенки у сорта Безостая 1, тогда как у Мироновской 808 и Альбидум 114 эффект ингибитора полимеризации микротрубочек на фоне картолина изменялся на противоположный (рис. 11). По-видимому, это связано с положительным влиянием картолина на поверхностный аппарат растительной клетки, включающий клеточную стенку, плазмалемму (Хохлова и др., 1990) и цитоскелет.

Известно, что картолин принимает участие в регуляции кальциевого гомеостаза, предотвращая значительные колебания его концентрации в цитозоле (Хохлова и др., 1993). Это также может быть одной из причин стабилизирующего влияния картолина на микротрубочки, что и нашло отражение в уменьшении эффекта оризалина на активность лектинов.

Влияние цитохалазина Б на активность лектинов. Как известно, реорганизация актинового цитоскелета является необходимым условием развития морозоустойчивости растений (Quellet et al., 2001; Хохлова, Олиневич, 2002). Часть одиночных периферических микрофиламентов располагается в промежутке между кортикальными микротрубочками и параллельно им, связываясь с ними латеральными мостиками. Другие кортикальные микрофиламенты связаны с плазмалеммой одним плюс-концом и отходят от неё под разными углами (Васильев, 1996). В результате система периферических микрофиламентов оказывается заякоренной на плазмалемме, а через микрофиламент-связывающие белки - на клеточной оболочке (Williamson, 1993).

Ингибитор полимеризации актиновых белков цитохалазин Б относится к группе антибиотических веществ грибного происхождения. Он обнаруживает сходство с кэпирующими белками, связывается с плюс-концом микрофиламента, блокирует полимеризацию, что в конечном итоге приводит к разборке фибриллы. Обработка цитохалазином Б подавляет полимеризацию и функционирование актиновых филаментов (Заварзин и др., 1992).