Фармако-токсикологическая и терапевтическая оценка новых лекарственных форм анандина

Размещено на http://www.allbest.ru/

Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины» (ФГОУ ВПО «СПбГАВМ»)

На правах рукописи

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук

Фармако-токсикологическая и терапевтическая оценка новых лекарственных форм анандина

16.00.04 - Ветеринарная фармакология с токсикологией

Черкай Злата Николаевна

Санкт-Петербург - 2007



Работа выполнена на кафедре фармакологии и токсикологи в Федеральном государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины» (ФГОУ ВПО «СПбГАВМ»).

Научный консультант - заслуженный деятель науки РФ доктор ветеринарных наук, профессор Соколов Владимир Дмитриевич

Официальные оппоненты: доктор биологических наук Андросов Николай Сергеевич;

доктор ветеринарных наук, профессор Уразаев Дмитрий Николаевич;

доктор биологических наук, профессор Великанов Валерий Иванович

Ведущая организация - ФГУ «Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГУ «ВГНКИ»)

Защита состоится «11» октября 2007 года в «13.00» часов на заседании диссертационного совета Д.220.059.03 при ФГОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины» по адресу: 196084, Санкт-Петербург, ул. Черниговская, 5;

тел./факс (812) 388-36-31, 388-10-55. Email: mail @ spbgavm.ru

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины».

Автореферат разослан 2007 г.

Ученый секретарь диссертационного совета О.В. Узюмова



Общая характеристика работы

Актуальность темы. Лекарственные средства являются важной составной частью практической и теоретической ветеринарной медицины. За последние десятилетия существенно расширились возможности фармакотерапии. Это связано, прежде всего, с бурным развитием химико-фармацевтической промышленности и введением в терапевтическую практику новых лекарственных веществ. Кроме того, достижения фундаментальных медико-биологических дисциплин позволяют на молекулярном уровне выявлять новые важные аспекты патогенеза распространенных заболеваний и определять характер воздействия лекарственных препаратов, что существенно влияет на развитие ветеринарной фармакологии (Соколов В.Д. и др., 1989 - 2005; Шахтместер И.Я., Тенцова И.Я., Ажгихин И.С.,2000; Бацанов Н.П., Булгаков Р.И., Алиев А.А., 2001; Карпенко Л.Ю., Бахта А.А.; 2005, Калишин Н.М., Федорова Н.А., 2005).

Обеспечить потребности ветеринарных врачей, лечебных учреждений и владельцев животных в лекарственных средствах сегодня невозможно без развития и поддержки отечественной фармации (Бацанов Н.П., Булгаков Р.И., Алиев А.А., 2001).

Учитывая вышесказанное, особый научный и практический интерес представляет создание политропных фармацевтических препаратов. Перспективность тенденции синтеза таких лекарственных средств определяет их фармакологическая способность одновременно оказывать этиотропное, патогенетическое, симптоматическое и реабилитационное действие. Кроме того, согласно практическому опыту, такие лекарства более эффективны, менее токсичны, технологичнее в применении и практичнее с экономической точки зрения, по сравнению с использованием разрозненных препаратов (Соколов В.Д., 1997; Цепков А.С., Девяткина И.А., Данилевская Н.В., 2001; Смирнов П.Н. и др., 2005; Милаев В.Б., Шабалина Е.В., Милаева О.Н., 2006).

В мировой литературе, имеются многочисленные подтверждения, целесообразности использования индукторов эндогенного интерферона при вирусных и бактериальных инфекциях, а также в качестве противоопухолевых и иммуномодулирующих лекарственных средств (Ершов Ф.И., 1996; Романцов М.Г., 1998; Фрейдлин И.С., 1998; Анников В.В., Хапрова Т.С., 2006; Топурия Л.Ю., 2006; Stites D.P., Terr F.I., 1991; Bikova J., Keisha A., Barene I.,2003).

Связано это с тем, что с иммунобиологической точки зрения, интерфероны рассматриваются, прежде всего, как иммуномодуляторы, влияющие на процессы дифференцировки и функциональную активность эффекторных клеток иммунной системы (Т-лимфоцитов, макрофагов/моноцитов). Под действием интерферона повышается эффективность иммунного распознавания антигена и усиливается фагоцитарная и цитолитическая функции, направленные на элиминацию возбудителя и/или антигенно измененных клеток (Карпенко Л.Ю.,1997; Фрейдлин И.С., 1998; Кузнецова Е.С., 2002; Лямжапова Г.П., 2005; Gaskell R.M., Gaskell C.J, 1988; Arlian L.G., 2003).

Одним из перспективных индукторов эндогенных цитокинов является анандин (1,2:5,6 -ди-о-изопропилиден - б-D-глюкофураноза - 3-0 - (N,N - диметиламинопропил) - 10 - метиленкарбоксилат - 9-акридон) для инъекций, который обладает высокой биологической активностью, низкой токсичностью и отсутствием аллергенного, мутагенного и эмбриотоксического действия на организм животных, хорошо сочетается с традиционными терапевтическими средствами. Перечисленные свойства анандина позволили предположить терапевтическую перспективность его включения с другими фармакологическими веществами (антибиотиками, пиретроидами и др.) в состав лекарственных форм для наружного применения (Коновалова В.Н., Гринявичус, Дуденас Р.З., 1979; Травкин О.В., Шведов О.Г., Яковлева Е.В.,1995; Гринберг Г.И., Этингова Н.И., Андреева Н.Р., 1995; Ершов Ф.И., 1999).

Наиболее известны в настоящее время и применяются в ветеринарной практике «Циклоферон» и «Анандин» (Мухина З.Н., Травкин О.В., 1997, Черкай З.Н., 2005-2006).

Поскольку среди многообразия болезней собак и кошек патологии кожи, ушей и глаз занимают особое место, а препараты, используемые для лечения, нередко рекрутируются из гуманной медицины, то разработка и внедрение новых эффективных ветеринарных препаратов для наружного применения является весьма актуальной.

В виду того, что болезни, как правило, возникают в условиях микробных ассоциаций на фоне сниженной резистентности организма, конструирование политропных лекарственных форм с включением в их структуру иммуномодулирующего компонента, представляет научный и практический интерес.

Цель работы. Разработать теоретическое, экспериментальное и клиническое обоснование перспективности создания лекарственных форм для наружного применения с анандином и внедрить их в ветеринарную практику в качестве терапевтических средств и препаратов выбора для ветеринарных специалистов.

Задачи исследования

1. Разработать и обосновать рецептуру капель глазных-интраназальных с анандином.

2. Изучить безвредность анандиновых глазных-интраназальных капель на лабораторных животных.

3. Разработать нормативно-техническую документацию для капель глазных-интраназальных «Анандин» и определить условия контроля качества препарата в соответствии с требованиями, предъявляемыми к глазным каплям.

4. Провести клинические испытания глазных-интраназальных капель «Анандин» и определить их терапевтическую активность при конъюнктивитах и инфекционном ринотрахеите кошек.

5. Разработать и обосновать лекарственную формулу ушных капель с анандином, обладающих противовоспалительным, антимикробным и регенерирующим действием (ушные капли «Анандин»).

6. Разработать и обосновать рецептуру ушных капель с анандином, обладающих противовоспалительным, антимикробным, регенерирующим и акарицидным действием (ушные капли «Анандин-плюс»).

7. Изучить безвредность и терапевтическую активность ушных капель «Анандин» и «Анандин-плюс» для лабораторных и мелких домашних животных (собак и кошек).

8. Установить методы контроля качества ушных капель с анандином. Разработать нормативно-техническую документацию на ушные капли «Анандин» и «Анандин-плюс».

9. Изучить антимикотические свойства «Анандина для инъекций» in vivo в эксперименте.

10. Разработать и обосновать рецептуру мази с анандином.

11. Провести биотестирование мази «Анандин» и определить ее безвредность на лабораторных животных.

12. Установить терапевтическую активность мази «Анандин» при дерматитах у собак.

13. Разработать нормативно-техническую документацию и методы контроля качества лекарственной формы «Анандин-мазь».

14. В сравнительном аспекте изучить терапевтические возможности и конкурентоспособность новых лекарственных форм «Анандина».

Научная новизна. Впервые разработаны и предложены фармацевтической промышленности рецепты следующих лекарственных форм с анандином: капли глазные-интраназальные «Анандин»; 2%-ная мазь «Анандин»; капли ушные «Анандин»; капли ушные «Анандин-плюс».

Дано теоретическое и практическое обоснование их лекарственных формул. В сравнительном аспекте детально изучены фармако-токсикологические свойства новых лекарственных форм анандина.

Установлена безвредность капель глазных-интраназальных «Анандин» на лабораторных животных и соответствие их качества жестким требованиям, предъявляемым Государственной фармакопеей XI к глазным лекарственным формам. Разработаны чувствительные и воспроизводимые методики количественного определения лекарственного вещества (анандина) в глазных каплях, позволяющие осуществить контроль их качества. На основании клинических исследований показана терапевтическая эффективность капель глазных-интраназальных «Анандин» при конъюнктивитах и инфекционном ринотрахеите кошек.

Впервые изучены антимикотические свойства анандина in vivo. Выяснены фармако-токсикологические свойства 2%-ной мази «Анандин». На основании разностороннего биотестирования установлена терапевтическая активность 2%-ной мази «Анандин» при питироспорозе и поверхностном кандидозе у собак.

Впервые разработаны рецепты отечественных ушных капель политропного действия «Анандин» и «Анандин-плюс».

Изучены: безвредность для животных, противовоспалительная и антимикробная активность ушных капель «Анандин». Отработаны схемы применения препарата при отитах у собак.

Исследована акарицидная активность ушных капель «Анандин-плюс». Доказана их терапевтическая активность и разработана оптимальная схема применения при отодектозе у кошек и собак, в том числе осложненном отитом. Предложена воспроизводимая методика количественного определения анандина в составе ушных капель, позволяющая контролировать их качество.

Теоретически обоснована и экспериментально доказана стратегия создания сложных лекарственных форм для наружного применения с целью достижения многопланового терапевтического действия (антимикробного, противовирусного, противогрибкового, противовоспалительного, регенерирующего и т.д.).

Приоритет проведенных исследований подтвержден техническими условиями, регистрационными удостоверениями и сертификатами соответствия на каждый вид лекарственной формы анандина, а также патентом «Способ лечения отодектоза кошек».

Практическая значимость работы. Для применения в ветеринарно-медицинской практике при работе с мелкими домашними животными предложены новые конкурентоспособные лекарственные формы: капли глазные-интраназальные «Анандин», 2%-ная мазь «Анандин», ушные капли «Анандин» и ушные капли «Анандин-плюс», имеющие ряд преимуществ. Разработаны эффективные схемы применения новых лекарственных препаратов для собак и кошек в терапевтических целях. Обоснована новая оригинальная концепция включения в рецептуру лекарственных форм для наружного применения веществ обладающих иммуномодулирующей и интерфероногенной активностью.

На основании данных, полученных в ходе экспериментальных исследований, научно обоснованы рациональные составы и технология глазных-интраназальных капель «Анандин», ушных капель «Анандин» и «Анандин-плюс», 2%-ная мазь «Анандин».

Многолетние научно-практические испытания лекарственных форм с анандином завершены созданием и утверждением четырех видов технических условий:

ТУ 9337-003-46913214-00 Капли глазные-интраназальные «Анандин»; ТУ 9337-002-46913214-00 Мазь "Анандин"»;

ТУ 9337-004-46913214-00 Капли ушные "Анандин"»;

ТУ 9337-005-46913214-00 Капли ушные "Анандин-плюс"».

На все лекарственные формы в Департаменте Ветеринарии Министерства сельского хозяйства Российской Федерации нами получены Регистрационные удостоверения: РУ № Р078-2-2.0-0942 на препарат капли глазные-интраназальные "Анандин"; РУ № Р078-2-2.0-0940 на препарат капли ушные "Анандин"; РУ № Р078-2-2.0-0941 на препарат капли ушные "Анандин-плюс"; РУ № Р078-2-2.0-0943 на препарат мазь "Анандин".

Обобщенные данные наиболее ценных научно-практических результатов представлены в монографии «Новые лекарственные формы индуктора эндогенного интерферона - анандина. Опыт применения в ветеринарной медицине» (2006) и внедрены в ветеринарных клиниках Северо-Западного и Центрального региона Российской Федерации (Санкт-Петербурге, Мурманске, Калининграде, Ярославле и Смоленске) с лечебной целью для собак и кошек.

Результатом фармако-токсикологических и клинических исследований стало получение сертификата соответствия № РОСС RU. ПР15.В.12549, № 0001.11ПР15 на серийный выпуск продукции «Ветпрепараты на основе Анандина» согласно приложению № 1142784: 10%-ный раствор «Анандина для инъекций», капли глазные-интраназальные “Анандин", мазь "Анандин", капли ушные для собак и кошек " Анандин" и "Анандин-плюс".

На основе объективных научно-практических данных разработаны и утверждены Временные наставления по применению «Ветеринарных препаратов на основе анандина» (1998), которые заменены в настоящее время Инструкциями по применению на следующие лекарственные формы: капли глазные-интраназальные «Анандин»; мазь «Анандин»; капли ушные «Анандин» и «Анандин-плюс», утвержденные Россельхознадзором России (2006).

В 2003 году нами получен Аттестат ФГУ «Всероссийский государственный научно-исследовательский институт контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов», удостоверяющий соответствие требованиям, предъявляемым к производству ветеринарных препаратов, и наличие условий для выпуска: капель глазных-интраназальных «Анандин», 2%-ной мази «Анандин», ушных капель «Анандин» и «Анандин-плюс».

Репрезентативная информация о научно-исследовательской работе используется в учебном процессе ветеринарных факультетов высших учебных заведений Минсельхоза России.

На защиту выносятся следующие положения и результаты

1. Результаты теоретических и экспериментальных исследований по разработке рецептуры и технологии новых лекарственных форм анандина (3 вида капель и мазь).

2. Результаты фармако-токсикологического анализа их безвредности.

3. Результаты клинических испытаний по изучению терапевтической активности глазных-интраназальных капель «Анандин» при конъюнктивитах и инфекционном ринотрахеите кошек.

4. Результаты клинических испытаний по изучению терапевтической эффективности ушных капель «Анандин» при отитах у собак.

5. Результаты клинических испытаний по изучению терапевтической активности ушных капель «Анандин плюс» при отодектозе кошек и собак.

6. Результаты изучения антимикотической активности «Анандина для инъекций».

7. Результаты клинических испытаний мази «Анандин» при питироспорозе и поверхностном кандидозе у собак.

Апробация результатов диссертации. Основные положения диссертационной работы доложены и одобрены на ежегодных заседаниях Ученого совета ФГОУ ВПО «Санкт-Петербургская Государственная академия ветеринарной медицины» (ФГОУ ВПО «СПбГАВМ»), научных конференциях профессорско-преподавательского состава, научных сотрудников, молодых ученых и аспирантов ФГОУ ВПО «СПбГАВМ» (1995-2003); Международных межвузовских научно-практических конференциях «Новые фармакологические средства в ветеринарии» (Санкт-Петербург, 1998-2004, 2007 гг.); конференции Ассоциации практикующих ветеринарных врачей «Актуальные проблемы ветеринарной медицины мелких домашних животных» (Санкт-Петербург, 1999), Международных симпозиумах «Современные проблемы ветеринарной диетологии и нутрициологии» (2001-2005 гг.), Международных научно-практических конгрессах «Ветеринария. Зоотехния» (2001-2006 гг.). Ряд выступлений отмечены Почетными дипломами.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 40 научных работ, из них 10 статей в рецензируемых изданиях, рекомендованных ВАК России, 10 - в материалах международных и российских конференций, З учебных пособия, в том числе «Новые лекарственные формы индуктора эндогенного интерферона - анандина. Опыт применения в ветеринарии» (Гриф Минсельхоза России, 2006).

Объем и структура диссертации. Материалы диссертации изложены на 308 страницах компьютерного текста и включают введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение полученных результатов, заключение, выводы, практические предложения, список использованной литературы (460 источников, из которых 328 отечественных и 132 иностранных). Работа содержит 36 таблиц, 19 схем, 4 цветных фотографии и 40 приложений.



Собственные исследования

1. Материал, объекты и методы исследований

Работа выполнена в течение 1998 - 2007 годов на базе кафедры фармакологии и токсикологии ФГОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины», лаборатории научно-исследовательского общества «Медитэр», а также в государственных ветеринарных станциях по борьбе с болезнями мелких домашних животных и частных ветеринарных клиниках Санкт-Петербурга, Мурманска, Калининграда, Смоленска и Ярославля.

Опыты были поставлены на 120 белых мышах, 20 белых крысах, 60 морских свинках, 95 кроликах-альбиносах, 335 кошках и 620 собаках различных пород.

Объектом исследований стало сложное низкомолекулярное химическое соединение -1,2:5,6-ди-о-изопропилиден-б-D-глюкофураноза-3-0-(N,N-диметиламинопропил)-10-метиленкарбо-ксилат-9-акридон, именуемое далее как «Анандин®», включенное в состав лекарственных прописей четырех новых лекарственных форм глазных-интраназальных капель «Анандин», двух видов капель для ушей: «Анандин» и «Анандин плюс» и 2%-ной мази «Анандин».

Все исследования по безвредности новых лекарственных форм анандина проводили по общепринятым в фармакологии и токсикологии методам, в соответствии с Государственной Фармакопеей Российской Федерации (1990).

Дифференциальная диагностика дерматитов осуществлялась по методу, описанному Р.М. Васильевым (1995). На границе здорового и пораженного участков кожи у собак делали соскоб и готовили три препарата. Первый - нативный, содержащий соскобленный эпидермис. Его помещали на предметное стекло с 2 каплями 10%-ного раствора едкого калия и проводили микроскопию при малом (8х7) и среднем (40х7) увеличении. Это позволяло исключить паразитарные болезни кожи и сделать предварительное заключение о наличие в эпидермальных клетках и волосяных луковицах микроорганизмов и микромицетов.

Кроме того, при появлении на месте соскоба тканевой жидкости и крови, готовили второй и третий препараты - мазки-отпечатки. Оба препарата окрашивали по методу Филипсона и подвергали микроскопии при большом (90х7) увеличении. Второй препарат служил для идентификации микрофлоры в пораженном очаге. На основании третьего препарата выводили цитограмму, для выведения которой подсчитывали 200 клеток.

В ходе эксперимента определяли содержание лизосомально-катионных белков в нейтрофильных гранулоцитах капиллярной крови области поражения по методу М.Г. Шубича (1974) и миелопероксидазы - по методу Грейма-Кнолля (1963); проводили количественное определение аутомикрофлоры кожи по Н.Н. Клемпарской и Г.А. Шальновой (1966) и рН кожи - по Г.П. Лепневу в модификации М.Я. Левина (1993).

Кровь для исследования брали до кормления из лучевой вены в две пробирки, в одной ее стабилизировали, а другая служила для получения сыворотки. В крови определяли число эритроцитов и лейкоцитов на СФЭКе, количество гемоглобина - на ФЭКе по Г.В. Дервизу и А.И. Воробьевой (1959), скорость оседания эритроцитов по Панченкову, мазки крови для выведения лейкограммы окрашивали по методу Филипсона, содержание лизосомально-катионных белков в нейтрофилах и содержание миелопероксидазы определяли методами описанными выше, фагоцитарную активность нейтрофилов - по В.В. Никольскому (1974), общий белок - рефрактометрическим способом, содержание иммуноглобулинов определяли методом дискретного осаждения по Ж. Бадину и Ф. Роусселету в модификации М.А. Костыны (1983). Идентификацию Т- и В-лимфоцитов в одном препарате проводили методом Е-РОК и ЗС-РОК (1985).

Статистическую обработку полученных данных проводили согласно методике Г.С. Григоряна с соавт. (1988).

Безвредность новых лекарственных форм анандина изучали согласно методам, представленным в руководстве М.А. Беленького (1963).

Моделирование грибковых инфекций и изучение противогрибковой эффективности 10%-ного раствора «Анандина для инъекций» и 2%-ной мази «Анандин» осуществляли согласно методикам, описанным Т.М.Кокушиной, А.П.Кашкиным и О.Н.Экземпляровым (1983).

Среднюю продолжительность жизни белых мышей с экспериментальной моделью генерализованного кандидоза рассчитывали по методу Пригге, рекомендуемому Г.Н. Першиным (1959), для вычисления средней гармонической. Гармоническая средняя продолжительность жизни подопытных животных в этом случае получается следующим образом: сумма обратных величин продолжительности жизни погибших животных делится на общее количество животных в группе. От полученного частного берется обратная величина, которая и является гармонической средней продолжительности жизни отдельного животного данной группы.

Широкие клинические испытания проводили в пяти городах Российской Федерации на двух видах мелких домашних животных: кошках и собаках. Терапевтическую активность глазных-интраназальных капель «Анандин» изучали при остром конъюнктивите и инфекционном ринотрахеите кошек, в сравнительном аспекте, одним животным назначая только глазные-интраназальные капли, другим в сочетании с 10%-ным раствором «Анандина для инъекций». Лечебную эффективность ушных капель «Анандин» при острых наружных отитах у собак изучали в сравнении с препаратами-аналогами, используемыми в медицинской и ветеринарной врачебной практике. Сравнительную терапевтическую активность ушных капель «Анандин плюс» изучали при отодектозе и отодектозе, осложненном отитом, у кошек и собак. Антимикотическую активность 2%-ной мази «Анандин» изучали при питироспорозе и поверхностном кандидозе кожи у собак. Диагнозы при проведении широких клинических испытаний в каждом случае ставили комплексно с учетом клинической картины, лабораторного подтверждения и эпизоотической ситуации.



2. Результаты исследований

2.1 Обоснование лекарственной формулы глазных-интраназальных капель «Анандин»

Частые респираторные инфекции служат индикатором иммунодефицитных состояний и связанных с ними осложнений, например, рецидивирующий, хронический ринит. Актуальность создания эффективных противовирусных глазных и интраназальных лекарственных форм очевидна.

В этой связи было предложено в качестве базисного лекарственного вещества использовать анандин в виде 10%-ного стерильного раствора по ТУ 080-64-19-50 в количестве 20% от общего объема раствора. В качестве растворителя, для обеспечения изотоничности и стерильности, использовали воду для инъекций (ГФ Х, ст.74). Для пролонгирования действия и замедления всасывания, а также чтобы придать вязкость раствору в состав лекарственной формы вводили глицерин (ГОСТ 6259-75) в количестве 5% от общего объема. Воду для инъекций вводили в состав препарата в количестве необходимом для получения 100% объема лекарственного средства.

Высокая противовирусная активность анандина в отношении ДНК- и РНК-геномных вирусов, способность индуцировать синтез интерферона в больном организме: INF-б, активирующего естественные киллеры, ингибирующего репродукцию вирусов и пролиферацию клеток и INF-г, проявляющего иммунорегуляторные и антипролиферативные свойства, а также усиливающего эффекторные функции макрофагов, их антимикробную активность; стимулирующего выработку туморнекротизирующего фактора-альфа; низкая токсичность и отсутствие аллергенных свойств явились основополагающими факторами создания новой лекарственной формы на его основе



Схема 1 Рецепт глазных-интраназальных капель «Анандин»

Разработанный препарат обладает стерильностью, удовлетворяя первое и основное требование, предъявляемое к глазным каплям. В связи с тем, что концентрация лекарственных веществ в глазных каплях не превышает 3% препарат отвечает требованию - изотоничности, так как это означает, что осмотическое давление полученного раствора приближается к осмотическому давлению слезной жидкости. Из чего следует, что болевой эффект при инстилляции его в глаза будет нивелирован. Использование глицерина в составе лекарственной формы обеспечивает ее вязкость, способствует пролонгированию терапевтического действия на месте приложения и стабильности препарата, что удовлетворяет третьему требованию. Отсутствие механических примесей заведомо обеспечило агрегатное состояние составляющих прописи, а также обязательное фильтрование в конце технологического цикла приготовления лекарственной формы.

Соответствие рецепта глазных-интраназальных капель «Анандин» основным положениям Государственной Фармакопеи Х (ст.319) позволило нам продолжить исследования, следующим этапом которых стало изучение безвредности и терапевтической активности нового препарата.

2.2 Изучение местного раздражающего действия глазных-интраназальных капель «Анандин»

При изучении местного действия на конъюнктиву испытуемые капли инстиллировали однократно кроликам-альбиносам, с массой тела 2,0-2,5 кг и многократно (4 раза в день в течение недели) кошкам различных пород, с массой тела 2,5-5,5 кг. Контрольным животным инстиллировали по две капли изотонического раствора натрия хлорида для инъекций.

Установили, что капли глазные-интраназальные «Анандин» не обладают местным раздражающим действием на слизистую оболочку глаз кроликов и кошек. Признаки воспаления, отек, гиперемия, слезотечение, ожег и болевая реакция отсутствовали, состояние век было удовлетворительным.

2.3 Изучение аллергенных свойств глазных-интраназальных капель «Анандин»

В опыте задействовали 10 кроликов-альбиносов, с массой тела 2,0-2,5 кг. Пять кроликов сенсибилизировали, пять - являлись контрольными. Для сенсибилизации использовали дозу, составляющую одну каплю тестируемого препарата. Препарат в указанной дозе инстиллировали в конъюнктивальный мешок каждого глаза кроликам из опытной группы, ежедневно в течение трех суток. Затем делали перерыв и на 8-й день вводили еще один раз в той же дозе. Спустя 14 дней с момента первой инстилляции препарата, его в той же дозе вносили в конъюнктивальный мешок обоих глаз как опытных, так и контрольных животных. Наблюдение вели в течение первого часа с момента введения разрешающей дозы. В результате опыта установили что новый препарат не вызывает воспаления в глазу, слезотечения и анафилактического шока у лабораторных животных. Следовательно, глазные-интраназальные капли «Анандин» не обладают аллергенными свойствами.

2.4 Клинические испытания глазных-интраназальных капель «Анандин» при остром конъюнктивите кошек

В клинических исследованиях были задействованы 60 кошек различных пород в возрасте от 2,5 до 5 лет, с массой тела от 2 до 5,5 кг с диагнозом острый конъюнктивит. Условно было сформировано 2 группы по 30 животных в каждой. Животным из 1-ой опытной группы в терапевтических целях назначали капли глазные-интраназальные «Анандин», а кошкам из 2-ой опытной группы - тетрациклиновую глазную мазь. Оба препарата назначали курсом: 4 раза в день, в течение 10 дней.

Об эффективность лечебного действия препаратов судили по срокам купирования патологического процесса, скорости исчезновения неблагоприятных клинических признаков, стабильности изменения симптомокомплекса под действием лекарств, отсутствию рецидивов болезни.

В результате проведенного терапевтического курса в 1-ой опытной группе, где применяли новые глазные-интраназальные капли «Анандин» выздоровели 24 кошки (80%), для 6-ти кошек с конъюнктивитом, вызванным хламидиями понадобилось дополнительное назначение этиотропного препарата. Во 2-ой опытной группе, где применяли тетрациклиновую глазную мазь, констатировали выздоровление всех кошек.

Таким образом, было показано, что в случае острого конъюнктивита, обусловленного разнообразными возбудителями, назначение только капель глазных-интраназальных «Анандин» может быть не достаточным для выздоровления 100% кошек.

2.5 Терапевтическая активность глазных-интраназальных капель «Анандин» при инфекционном ринотрахеите

Клинические испытания проводили на 75 кошках различных пород в возрасте от 1 до 3 лет, с массой тела от 2 до 6 кг, больных инфекционным ринотрахеитом. Поскольку животных подбирали для опыта по принципу аналогов, то у всех пациентов отмечали хорошо выраженный острый ринит и конъюнктивит. Диагноз на общее заболевание ставили комплексно с учетом анамнеза, клинических признаков, эпизоотической ситуации и данных лабораторного исследования. Было сформировано 3 группы по 25 особей в каждой. Кошкам из 1-ой опытной группы назначали: капли глазные-интраназальные «Анандин» 3 капли/глаз, 3-4 раза в день в течение 10 дней; ампициллин или окситетрациклин в терапевтических дозах в течение 5 дней, для контроля развития возможных осложнений, обусловленных секундарной бактериальной микрофлорой, а также витамины А, С и группы В курсом в терапевтических дозах. Животным из 2-ой опытной группы назначали аналогично, капли глазные-интраназальные «Анандин», но в течение недели, а также «Анандин для инъекций» из расчета 10 мг/кг массы тела подкожно или внутримышечно 1 раз в сутки, 3 дня подряд и витамины А, С и группы В курсом. Пациентам из 3-ей опытной группы назначали традиционное лечение, заключающееся в применении антибиотиков широкого спектра действия, с целью предупреждения развития вторичной бактериальной инфекции. А именно, парэнтерально назначали ампициллин или окситетрациклин в терапевтических дозах в течение недели, тетрациклиновую глазную мазь 3-4 раза в день и витамины, указанные выше, в лечебных дозах курсом.

На протяжении всего курса лечения осуществляли ежедневный мониторинг за состоянием здоровья пациентов, а на десятый день анализировали сравнительную эффективность лечения во всех группах.

Анализируя полученные результаты терапии в динамике необходимо подчеркнуть следующие моменты. Несмотря на то, что одинаково успешным было лечение животных в 1-ой и 2-ой опытных группах, скорость купирования неблагоприятных клинических признаков была быстрее, и выздоровление пациентов наступало раньше во 2-ой опытной группе. По нашему мнению, это было обусловлено, во-первых, местным применением препарата при вирусном конъюнктивите, во-вторых, за счет системного действия как противовирусного, так и иммуномодулирующего «Анандина для инъекций» и, в-третьих, за счет ограничения стрессового воздействия манипуляции инъецирования, благодаря короткому - 3-х-дневному курсу применения анандина. В итоге был получен быстрый и стойкий терапевтический эффект.

По результатам лечения животных из 3-ей опытной группы, следует отметить, что отсутствие этиотропного компонента терапии, безусловно, затягивает процесс выздоровления. В нашем случае, терапевтический курс (10 дней) оказался недостаточным для выздоровления семи пациентов из двадцати пяти. Таким образом, терапия кошек, страдающих герпесвирусной инфекцией, с включением препаратов анандина является эффективной и сокращает сроки выздоровления животных в среднем на 4 дня.

Клинические испытания проводили на 60 собаках, различных пород, с массой тела 10,0-52,5

2.6 Обоснование рецепта ушных капель «Анандин»

Наружный отит - часто встречающийся диагноз у собак. В связи с этим, разработка и внедрение новых препаратов для лечения животных с отитами всегда будет актуальной, что обусловлено существованием многообразия возбудителей, разнообразием их сочетаний в процессе течения болезни, индивидуальными особенностями организма пациентов и скоростью их привыкания к тем или иным препаратам.

Примерно двадцать лет назад для лечения мелких домашних животных, страдающих отитами, специалисты использовали медицинские препараты, или антибиотикотерапию. В настоящее время появились и ветеринарные препараты. Однако по объективным причинам вопрос создания новых лекарственных форм в этой области остается открытым. В связи с этим нами был разработан рецепт новой лекарственной формы анандина - ушных капель.

Схема 2 Рецепт ушных капель «Анандин»

Согласно рецепту в состав новой лекарственной формы для наружного применения - ушных капель «Анандин» были включены следующие компоненты. Стерильный 10%-ный раствор анандина для обеспечения мобилизации местных защитных и противовоспалительных реакций, за счет: стимуляции выработки эндогенного интерферона, способного осуществлять антибактериальное, противовирусное и противогрибковое действие; повышения функциональной активности Т-лимфоцитов и макрофагов, обеспечивающих нейтрализацию патологических агентов; выброса интерлейкинов, оказывающих противовоспалительное действие. Масло как заживляющее и очищающее средство. Антибиотик Грамицидин С, используемый в форме 2%-ного спиртового раствора, - незаменимый антимикробный компонент широкого спектра действия, в отношении стафилококков, стрептококков, синегнойной палочки, протея. Изопропиловый спирт и дистиллированная вода, выполняя функцию растворителя, объединяют все перечисленные лекарственные вещества в единую лекарственную форму - ушные капли.

2.7 Изучение безвредности ушных капель «Анандин»

Установлено, что анандин относится к группе низкотоксичных препаратов и при парэнтеральном применении выводится из организма в неизмененном виде в течение 16-20 часов через почки. Что же касается других лекарственных веществ, входящих в состав капель, то они очень давно применяются в ветеринарии и медицине в составе препаратов для наружного применения и, в качестве ингредиентов ушных капель «Анандин» они содержатся в такой малой дозе, что говорить о резорбтивном токсическом действии их не приходится. При этом с точки зрения безвредности наибольший интерес представляло - обладают ли ушные капли «Анандин» местным раздражающим действием и аллергенным свойствами, то есть, не будет ли их применение оказывать дополнительное негативное действие на животное, страдающее отитом. Поэтому мы изучили характер местного действия и аллергенные свойства новой лекарственной формы - ушных капель «Анандин» на кожу наружного слухового прохода здоровых домашних животных: собак и кошек.

2.7.1 Изучение местного раздражающего действия и аллергенных свойств препарата в опытах на собаках

Местное раздражающее действие ушных капель «Анандин» изучали на собаках различных пород и возрастных групп. В 1-ю опытную группу объединяли 10 щенков в возрасте 2 месяцев, которым инстиллировали испытуемый препарат по 2 капли в наружный слуховой проход правого уха, в левое ухо препарат не вносили, оно служило контролем. Процедуру осуществляли трехкратно: в первый, третий и пятый дни, чтобы удостовериться в объективности результата. Во 2-ю опытную группу объединяли 10 собак в возрасте от 2 до 5 лет разных пород, которым в наружный слуховой проход правого уха инстиллировали ушные капли «Анандин» из расчета 2-3 капли 2 раза в день в течение 5 дней, в левое ухо препаратов не вносили - оно служило контролем.

В результате установили: новая лекарственная форма не вызывает гиперемии, отека, шелушения, зуда и ожога на месте приложения у животных, то есть ушные капли не обладают местным раздражающим действием.

Аллергенные свойства новой лекарственной формы анандина изучали на 20 собаках в возрасте от 1 до 2,5 лет, клинически здоровых, принадлежащих к следующим породам: французский бульдог, стафордширский терьер, немецкая овчарка, пекинес, ротвейлер. Собаки каждой породы принадлежали к одному помету, содержались в аналогичных условиях и получали примерно одинаковое питание. Условно было сформировано 2 группы: опытная и контрольная, по 10 собак в каждой, из них по две собаки каждой породы представляли ту и другую группы. Собакам малых пород из опытной группы препарат вносили в каждое ухо по 3 капли, собакам крупных пород - по 5 капель по схеме: 1 раз в день, в течение 3-х дней подряд, затем еще один раз вносили препарат на 8-й день. На 14-й день с момента первичного применения ушных капель «Анандин» препарат инстиллировали, в указанной дозе животным обеих групп. Наблюдение вели в течение первого часа с момента последнего применения лекарственного средства и спустя 1 сутки.

В результате установили: ушные капли «Анандин» не обладают аллергенными свойствами, поскольку на месте приложения препарата не наблюдали характерных для аллергии признаков (гиперемия, отек, сыпь, зуд).

2.7.2 Подтверждение безвредности нового препарата в опытах на кошках

Эксперимент по изучению возможного местного раздражающего действия ушных капель «Анандин» проводили на кошках различных пород, двух возрастных групп. В 1-ю опытную группу объединяли 10 котят в возрасте 3 месяцев, которым вносили изучаемый препарат в дозе 1 капля в наружный слуховой проход правого уха, в левое ухо служило контролем. Процедуру осуществляли трехкратно: в первый, третий и пятый дни. Во 2-ю опытную группу объединяли 10 кошек в возрасте от 2 до 3,5 лет разных пород, которым в наружный слуховой проход правого уха вносили ушные капли «Анандин» из расчета 2 капли 2 раза в день в течение 5 дней, а левое ухо служило контролем.

В результате применения ушных капель «Анандин» котятам и кошкам разных пород не было установлено у препарата наличия местного раздражающего действия. Это выражалось в отсутствии клинических признаков: гиперемии, отека, шелушения кожи, зуда и следов ожога. Кроме того, состояние кожи, как правого, так и левого уха экспериментальных животных не имело визуальных отличий по перечисленным параметрам.

Аллергенные свойства ушных капель «Анандин» изучали на 20 кошках в возрасте от 2,5 до 5 лет, клинически здоровых, принадлежащих к следующим породам: сиамской, сибирской, персидской и беспородных животных. Было сформировано 2 группы: опытная и контрольная, по 10 кошек в каждой, из них по две кошки каждой породы и четыре беспородных представляли ту и другую группы. Всем кошкам из опытной группы препарат вносили в каждое ухо по 2 капли по схеме: 1 раз в день, в течение 3-х дней подряд, затем еще один раз вносили препарат на 8-й день. На 14-й день с момента первичного применения ушных капель «Анандин» препарат инстиллировали, в указанной дозе животным из обеих групп. Наблюдение вели в течение первого часа с момента последнего применения лекарственного средства и спустя 1 сутки.

В результате установили: ушные капли «Анандин» не обладают аллергенными свойствами, поскольку при применении их кошкам констатировали отсутствие характерных для аллергии признаков как через 1 час с момента последнего применения лекарственного средства, так и спустя 1 сутки.

2.8 Определение антимикробных свойств ушных капель «Анандин» in vivo

В виду того, что возбудителями воспаления наружного слухового прохода у собак наиболее часто являются стафилококки, б- и в-гемолитические стрептококки и протей мы применили новую лекарственную форму - ушные капли «Анандин» при инфекциях наружного уха с учетом профилирующего патологического действия одного из трех перечисленных возбудителей (на основании бактериологического исследования). Сформировали 6 опытных групп по 10 собак в каждой. Животные относились к разным породам, возраст их колебался от 2,5 до 6 лет, масса тела - от 7 кг до 35 кг. Для лечения животных из трех опытных групп использовали ушные капли «Анандин», а для собак из трех контрольных групп - специально подтированные антибиотики для каждого животного индивидуально, в зависимости от чувствительности основного возбудителя спровоцировавшего болезнь.

Животным из трех опытных групп назначали курсом ушные капли «Анандин» по схеме 3-4 капли в каждое ухо два раза в день в течение двух недель (в особо трудных случаях предполагалось продление курса терапии еще на одну неделю). Каждой собаке из 4-й контрольной группы назначали на основании индивидуальной антибиотикограммы тот бактерицидный препарат, который показывал наилучший результат in vitro в отношении Staphylococcus intermedius. Каждому животному из 5-й контрольной группы назначали на основании индивидуальной антибиотикограммы тот бактерицидный препарат, который показывал наилучший результат in vitro в отношении Streptococcus spp. И, наконец, каждому пациенту из 6-й контрольной группы назначали на основании индивидуальной антибиотикограммы тот бактерицидный препарат, который показывал наилучший результат in vitro в отношении Proteus vulgaris. Среди препаратов можно назвать: амоксиклав, цефалексин, цефотаксим, цефазолин энрофлоксацин, линкомицин, клоксациллин, неомицин, гентамицин и некоторые другие. Антибиотики назначали по показаниям, соблюдая дозирование и кратность применения для каждого препарата в отдельности на основании инструкции по применению, сроком от 2 до 3-х недель. Перед первичным применением лекарственных средств каждому животному проводили предварительную санацию наружного слухового прохода, которая заключалась в удаление шерсти из слухового прохода и промывании его теплым стерильным изотоническим раствором натрия хлорида или официнальным раствором хлоргексидина. При осуществлении повторных лечебных манипуляций, по обстоятельствам производили освобождение наружного слухового прохода или сухим стерильным ватным тампоном, или смоченным обозначенными препаратами. Об эффективности проводимого лечения судили по срокам купирования патологических симптомов и скорости выздоровления больных собак.

Таблица 1 Сравнительный анализ эффективности ушных капель «Анандин» при лечении собак с диагнозом наружный отит

Группа	Количество больных животных	Количество здоровых животных, к
		7 дню	14 дню	21 дню
1-я опытная	10	2	8	-
2-я опытная	10	1	9	-
3-я опытная	10	0	10	-
4-я контрольная	10	2	6	2
5-я контрольная	10	2	5	3
6-я контрольная	10	0	7	3

Полученные результаты свидетельствуют о том, что антимикробная терапия была подобрана граммотно на основании учета чувствительности микробов к препаратам, однако этого оказалось недостаточно для восстановления положительного status quo в течение 2 недель. В то же время, обеспеченное ушными каплями «Анандин» иммуномоду-лирующее, противовоспалительное и регенерирующее действие сыграло положительную роль в достижении более быстрого терапевтического эффекта и позволило справиться с болезнью всем животным в течение двух недель. Повторное бактериологическое исследование ушного секрета подтвердило эффективность всех используемых в эксперименте препаратов. Однако, новая лекарственная форма - ушные капли «Анандин» не только обладает эффективным противомикробным действием по отношению к таким возбудителям как Staphylococcus intermedius, Streptococcus spp. и Proteus vulgaris, но и сокращает сроки выздоровления животных в среднем на 1 неделю.



2.9 Клинические испытания ушных капель «Анандин»

Широкие клинические испытания ушных капель «Анандин» проводили в сравнении с препаратами-аналогами в нескольких городах РФ на собаках различных пород и возраста с диагнозом острый наружный отит. В качестве комплексных препаратов-аналогов для сравнительной оценки терапевтической активности нового препарата использовали следующие официнальные ушные капли: «Софрадекс®» (содержащий в своем составе неомицин, грамицидин, дексаметазон), «Аурикан®» (метасульфобензоат натрия, гексамедина изотионат, тетракаина гидрохлорид, линдан) и «Отоферонол®» (циклоферон, изопропиловый спирт, полиэтиленоксид).

В эксперименте задействовали 400 собак, которых условно подразделили на 4 опытные группы. Всем животным лекарственные препараты назначали 2 раза в день в течение 10 дней, в дозе для собак малых пород - 3 капли, для средних и крупных пород - 4-5 капель в каждое ухо, для «Аурикана» - 5-10 капель. Пациентам из 1-ой опытной группы закапывали ушные капли «Анандин», из 2-ой опытной группы - «Софрадекс», из 3-ей опытной группы - «Аурикан», из 4-ой опытной группы - «Отоферонол». На протяжении всего эксперимента вели наблюдение за изменениями клинической картины болезни, отмечали сроки купирования патологического процесса.

Полученные данные наглядно иллюстрируют, что при первичном остром наружном отите лекарственные средства дают положительный терапевтический эффект более чем в 60% случаев, особенно если в их состав входят антибиотики или антисептики широкого спектра действия, а также глюкокортикоиды и местные анестетики («Софрадекс» и «Аурикан»). Однако следует особенно подчеркнуть, хороший терапевтический результат, полученный в 1-й опытной группе, где применяли новый лекарственный препарат - ушные капли «Анандин». В его составе не было ни глюкокортикоидов, ни местных анестетиков, но количество исцелившихся животных составило 92%. Высокий противовоспалительный эффект от применения новых ушных капель был обусловлен фармакологическими эффектами «Анандина», а именно способностью индукции высоких титров эндогенного интерферона в больном организме, запускающего каскад выработки противовоспалительных цитокинов. Содержание Грамицидина С в составе капель, позволило оказать быстрое и сильное бактерицидное действие, что также способствовало выздоровлению большинства пациентов к 10-му дню в этой группе.

В группах, где применяли: «Софрадекс» к 10-му дню выздоровело 95% собак, «Аурикан» - 94%, «Отоферонол» - 64%. Самый низкий лечебный эффект получен в 4-й опытной группе. Следовательно, одного интерфероногенного препарата недостаточно для исцеления от острого гнойного отита. Залогом успешной терапии может быть лишь его сочетание с антибиотиками.

Таким образом, по терапевтической эффективности новый отечественный лекарственный препарат - ушные капли «Анандин», не уступает препаратам-аналогам: Аурикану и Софрадексу, превосходя Отоферонол, при лечении острого наружного отита у собак, являясь приемлемым по своей экономической стоимости для широкого круга потребителей.

2.10 Обоснование рецепта ушных капель «Анандин плюс»

В международной ветеринарной практике для лечения животных, страдающих отодектозом, предложен целый ряд препаратов из разных химических групп. Однако наиболее перспективными лечебными средствами при отодектозе плотоядных считают пиретроиды в виду их высокой акарицидной способности и сравнительно низкой токсической активности.

Нами был модифицирован рецепт ушных капель «Анандин» включением синтетических пиретроидов: перметрина или циперметрина, тем самым, обеспечив препарату бактерицидные, регенерирующие и акарицидные свойства.

Схема 3 Рецепт ушных капель «Анандин плюс» (1)

Схема 4 Рецепт ушных капель «Анандин плюс» (2)

Циперметрин обладает более сильными акарицидными свойствами (примерно в 2 раза) по сравнению с перметрином, поэтому его количество в рецепте уменьшено на 0,001 г, что составляет около 40%.

2.11 Клинические испытания ушных капель «Анандин плюс» при отодектозе кошек

Терапевтическую эффективность капель «Анандин плюс» изучали в сравнении с двумя препаратами, наиболее часто используемыми в практике ветеринарного врача: мазью «Акаробор» и «Неостомозаном».

Клинические испытания ушных капель «Анандин плюс» проводили на 120 кошках, различных пород, с массой тела 2,5-5,5 кг. Перед началом испытаний проводили клинический осмотр животных и по принципу аналогов формировали опытные группы по 20 кошек в каждой. Методом микроскопии у животных был подтвержден диагноз отодектоз. Каждый препарат применяли в 2-х группах: в одной - кошки, страдающие отодектозом, в другой - животные с симптомокомплексом отита и отодектоза. Всего было 6 групп.

Животным из 1-й группы назначали ушные капли «Анандин плюс» на 1-й, 2-й дни, а затем двукратно 1 раз в 5 дней, в дозе 3 капли в каждое ухо. Предварительно проводили тщательную обработку ушей. Кошкам из 4-й группы с симптомокомплексом отита и отодектоза тоже назначали «Анандин плюс» по аналогичной схеме. Во 2-й и 5-й группах опытным животным назначали мазь «Акаробор» по схеме: тонким слоем на 1-й, 2-й, 7-й, 12-й день, после обработки ушной раковины и слухового прохода. Кошкам из 3-й и 6-й групп назначали 0,1%-ный раствор «Неостомозана» в дозе 3 капли в каждое ухо по схеме аналогичной в 1-4-й группах. За животными вели наблюдение на протяжении двух недель. Учитывали характер изменения симптомов болезни, общее состояние кошек, скорость купирования патологического процесса. На 15-й день с момента начала лечения проводили повторную микроскопию материала, взятого с внутренней поверхности наружного уха и слухового прохода, на предмет обнаружения возбудителей Otodectes cynotis.

Из таблицы 2 видно, что ушные капли «Анандин плюс» являются эффективным акарицидным средством, по своей терапевтической активности не уступают эталону - мази «Акаробор» и могут быть рекомендованы для широкого применения в ветеринарии при отодектозе кошек. В тех случаях, когда течение отодектоза осложнял отит, выздоровление животных было медленнее. Особое внимание обращали на возможности препаратов оказывать не только этиотропное, но и патогенетическое и симптоматическое действие.

Применение политропных лекарственных средств при микст-болезнях, бесспорно является более эффективным, чем применение этиотропных препаратов, поскольку они, обладают сразу несколькими лечебными свойствами. Они удобны с практической и экономической точек зрения, а также доставляют меньше беспокойства больному животному.

Ушные капли «Анандин плюс» являются эффективным средством для лечения отодектоза и при его осложнении. При этом он не уступает по лечебному эффекту мази «Акаробор» и превосходит «Неостомозан» (на 5-20%%). анандин животное ушной глазной

Таблица 2 Терапевтическая эффективность ушных капель «Анандин плюс», «Акаробор» и «Неостомозан»

Группа	Препарат	Диагноз	Количество здоровых кошек на 15-й день, %
1	«Анандин плюс»	Отодектоз	95
4	«Анандин плюс»	Отодектоз + отит	100 90
2	«Акаробор»	Отодектоз	95
5	«Акаробор»	Отодектоз + отит	100 90
3	«Неостомозан»	Отодектоз	90
6	«Неостомозан»	Отодектоз + отит отит	80 50

2.12 Клинические испытания ушных капель «Анандин плюс» при отодектозе собак

На основании клинических признаков, с учетом эпизоотической ситуации и лабораторного подтверждения животным был поставлен диагноз отодектоз, в отдельных случаях осложненный отитом. Для лечения животных использовали три лекарственных препарата: ушные капли «Анандин плюс», мазь «Акаробор» и ушные капли «Отоферонол плюс». Условно формировали 6 групп по 10 голов в каждой.