Обмен веществ и продуктивные качества гусей при использовании пробиотиков

Размещено на http://www.allbest.ru/

Размещено на http://www.allbest.ru/

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Обмен веществ и продуктивные качества гусей при использовании пробиотиков

Герасименко Вадим Владимирович

Боровск - 2008

1. Общая характеристика работы

Актуальность работы. Повышение продуктивных качеств сельскохозяйственных животных и птиц возможно только при глубоком изучении физиолого-биохимических процессов, протекающих в их организме (Егоров И.А., 2002; Фисинин В.И., 1999, 2005). Сравнительно недавно для нормализации метаболических процессов в организме сельскохозяйственных животных и птицы стали использовать пробиотические препараты, которые, по сути, являются живой микробной добавкой к корму и оказывают свое позитивное воздействие на организм за счет улучшения его кишечного микробного баланса (Тараканов Б.В., 2007; Данилевская Н.В., 2006; Панин А.Н., Малик Н.И., 2002; Fuller R., 1989).

Между тем, большая часть исследований посвящена определению эффективности воздействия пробиотиков на продуктивные качества сельскохозяйственных животных и птиц. При этом доля физиолого-биохимических экспериментов по данному направлению чрезвычайно мала, а сами эксперименты в основном ограничиваются определением минимального набора клинических показателей. Однако не стоит забывать о том, что новое столетие - это фундаментальные исследования физиологии и биохимии питания птицы (Фисинин В.И., 2002). Кроме этого, в данный момент пробиотики практически не рассматриваются как регуляторы антиоксидантного статуса макроорганизма, что, однако, не исключает их вероятную и эффективную роль в поддержании устойчивости организма к активным формам кислорода.

Уникальным объектом для проведения экспериментов по выявлению характера и степени воздействия пробиотических препаратов на физиолого-биохимический статус макроорганизма являются гуси (Тараканов Б.В., Никулин В.Н. с соавт., 2004). У гусей, как ни у каких других сельскохозяйственных птиц, пищеварительные процессы, а следовательно, и обмен веществ в целом зависят от микрофлоры желудочно-кишечного тракта. Из этого следует и тот факт, что применение пробиотических препаратов именно в промышленном выращивании гусей должно оказывать максимальное воздействие на метаболические процессы, а также на продуктивные качества и экономическую эффективность.

С учетом высокого качества продукции гусеводства и потребности в ней продовольственного и промышленного рынка, а также большого спроса населения на молодняк закономерным должно быть повышение производства мяса, пера и пуха гусей. Однако в последние десятилетия в России отмечены отрицательные моменты в развитии гусеводства. Так, количество поголовья гусей на 2004 год достигло отметки 600 тысяч, что составляет около 0,2 % от общего количества всех видов сельскохозяйственной птицы, при этом доля мяса гусей от общей массы производимого мяса птицы составляет 0,1 % (Материалы общего собрания Росптицесоюза, 2004; Ройтер Я.С., Лукьянов А.Ф. с соавт., 2004). Одной из причин данного снижения является недостаточная изученность физиолого-биохимических особенностей организма гусей.

Цель и задачи исследований. Целью настоящих исследований являлось выявление общих закономерностей воздействия пробиотических препаратов на физиолого-биохимический статус организма гусей и их продуктивные качества.

Для достижения поставленной цели предусматривалось решение следующих задач:

1. Определить дозы пробиотических препаратов лактомикроцикола, лактоамиловорина и микроцикола, обеспечивающие биологическую и экономическую эффективность промышленного выращивания гусей.

2. Установить особенности физиолого-биохимического статуса организма гусей, выращиваемых на мясо и перо-пуховое сырье, при использовании лактомикроцикола, лактоамиловорина и микроцикола.

3. Изучить воздействие пробиотических препаратов на показатели антиоксидантного статуса организма гусей.

4. Выявить характер и степень влияния пробиотиков на физиолого-биохимический статус организма гусынь-несушек и их репродуктивные качества.

5. Определить влияние пробиотиков на выводимость гусиных яиц, последующую сохранность и продуктивность молодняка.

6. Изучить эффективность выращивания гусей при их инокуляции кишечной микрофлорой взрослой птицы в раннем возрасте.

7. Провести производственную апробацию новых пробиотиков при промышленном выращивании гусей.

Научная новизна. 1. Впервые получен фактический материал о возрастных изменениях гематологических, физиологических и биохимических показателей организма гусей, а также о характере и степени воздействия лактоамиловорина, микроцикола и лактомикроцикола на данные показатели. Выявлены особенности механизмов воздействия пробиотиков на белковый, углеводный, липидный и минеральный обмен в организме гусей. Предложен способ снижения уровня холестерола в крови и продукции гусей за счет кратковременного использования в их кормлении штамма Lactobacillus amylovorus БТ 24/88 (патент RU № 2270580).

2. Выявлено, что применение пробиотиков с целью стимуляции репродуктивных качеств гусынь-несушек неоднозначно, и на основании комплекса физиолого-биохимических и хозяйственных признаков доказано, что наиболее целесообразным является использование штамма Escherichia coli S 5/98, входящего в состав пробиотика микроцикола.

3. Впервые показано, что предварительная обработка инкубационных гусиных яиц пробиотиками повышает их инкубационные качества, а также выводимость, жизнеспособность и массу тела молодняка гусей, при этом максимальное положительное воздействие оказывает комплексный препарат лактомикроцикол, содержащий штаммы Lactobacillus amylovorus БТ 24/88 и Escherichia coli S 5/98.

4. Впервые установлено положительное воздействие кратковременного скармливания суточным гусятам комплекса микрофлоры взрослой птицы в виде кишечной массы гусаков на физиолого-биохимический статус организма молодняка птицы, а также на их продуктивные качества.

5. Доказано, что использование пробиотиков не влечет за собой глубоких изменений в анатомии гусей, а повышение массы тела происходит за счет увеличения абсолютной массы всех органов пропорционально. Установлено антистрессовое воздействие пробиотиков на организм гусей.

6. Обнаружено качественно новое свойство пробиотических препаратов воздействовать на антиоксидантный статус макроорганизма. На модели гусей получен новый фактический материал о воздействии лактоамиловорина, микроцикола и лактомикроцикола на активность супероксиддисмутазы, глутатионпероксидазы и каталазы крови, содержание малонового диальдегида и общую антиокислительную способность плазмы крови, что позволяет расширить и углубить знания по данному вопросу, а в некоторых случаях использовать пробиотики с целью коррекции антиоксидантных процессов в организме птицы и животных.

Практическая значимость. 1. Настоящая работа относится как к области фундаментальных, так и прикладных исследований. Результаты комплексных исследований белкового, углеводного, липидного и минерального обмена, уровня естественной резистентности и, как следствие, продуктивности и сохранности гусей при использовании лактоамиловорина, микроцикола и лактомикроцикола позволяют рекомендовать применение данных пробиотиков в установленных дозах при выращивании гусей на мясо и перопуховое сырье. При этом наиболее эффективным является использование лактоамиловорина, который повышает сохранность молодняка на 2,6 %, живую массу - на 12,5 % и выход перопухового сырья - на 7 %.

2. С целью стимуляции репродуктивных качеств гусынь-несушек рациональным является использование микроцикола, который повышает сохранность на 0,67 %, яйценоскость на среднюю несушку - на 2,61 %, выход инкубационного яйца - на 0,47 %, вывод и выводимость молодняка гусей - на 1,61 и 0,74 % соответственно, а также сохранность молодняка - на 0,45 %.

3. Для повышения эффективности инкубирования гусиных яиц, увеличения продуктивных качеств молодняка гусей целесообразной является предварительная обработка инкубационного яйца лактомикроциколом, что позволяет повысить вывод гусят - на 7 %, выводимость - на 8,9 % и живую массу гусят - в среднем на 7 %.

4. Применение микробно-ферментного инокулята от взрослых гусаков в кормлении молодняка гусей позволяет повысить сохранность и живую массу на 11 и 12,7 % соответственно, при этом валовой выход перопухового сырья возрастает на 21,2 %.

5. Вышеуказанные технологические приемы позволяют рекомендовать производству дополнительные резервы повышения экономической эффективности промышленного выращивания гусей за счет использования рациональных схем применения пробиотиков. Результаты диссертационной работы имеют важное народнохозяйственное значение, поскольку направлены на решение крупной научно-практической задачи - повышения эффективности промышленного выращивания гусей. Осуществлено внедрение новых пробиотиков в практику выращивания гусей в ОАО «Спутник», СПК «Птицефабрика «Гайская» и ЗАО «Птицефабрика Оренбургская».

6. В результате исследований разработаны и изданы: 1. Рекомендации по кормлению и использованию пробиотических препаратов при выращивании гусей (Рассмотрены и одобрены администрацией Оренбургской области департаментом агропромышленного комплекса. Оренбург, 2004); 2. Методические рекомендации по использованию пробиотика лактоамиловорина в животноводстве и ветеринарии (Рекомендации одобрены и рекомендованы к изданию ученым советом ВНИИФБиП сельскохозяйственных животных и на заседании секции физиологии и биохимии Россельхозакадемии. Боровск, 2007), а также монография «Научные и практические аспекты разведения гусей» для специалистов, занимающихся разведением гусей (Москва, 2004), монография «Методы физиолого-биохимических исследований крови» для аспирантов и научных сотрудников (Оренбург, 2005) и монография «Биологические основы применения пробиотических препаратов в сельском хозяйстве» для специалистов сельского хозяйства (Оренбург, 2007).

7. Научные разработки использованы при подготовке учебного пособия «Основы аналитической химии» с грифом МСХ РФ № 13-03/1005 от 13.10.2004 и учебного пособия «Биохимия мяса и молока» с грифом МСХ РФ № 13-03-2/556 от 16.03.2005, а также обучающей компьютерной программы для студентов аграрных вузов. Результаты исследований используются в учебном процессе аграрных вузов Российской Федерации.

8. Работа отмечена 2 дипломами и серебряной медалью на VI и VII Московском международном салоне инноваций и инвестиций (Москва, 2006; 2007), дипломом на Ярмарке бизнес-ангелов и инноваторов (Саранск, 2006), дипломом на Российском экономическом форуме «Россия Единая» (Нижний Новгород, 2007), серебряной медалью на Российской агропромышленной выставке «Золотая осень» (Москва, 2007). За проведение и внедрение данной работы автор удостоен званий: лауреата премии администрации Оренбургской области для молодых ученых и специалистов (Оренбург, 2005; 2008), лауреата премии Губернатора Оренбургской области в сфере науки и техники (Оренбург, 2006), лауреата премии Правительства Оренбургской области (Оренбург, 2007), а также награжден нагрудным знаком «Участник ВВЦ» № 12, постановление от 21.11.2007 № 51 (Москва, 2007).

Связь исследований с научной программой. Диссертационная работа выполнялась в соответствии с тематическими планами научно - исследовательских работ Оренбургского ГАУ по теме № 01200105542 и ВНИИФБ и П с.-х. животных по разделу № 01.9.70.002735, согласно договорам о совместных научных исследованиях между ФГОУ ВПО ОГАУ и ГНУ ВНИИФБиП с.-.х. животных от 26.11.1996; от 6.12.2000; от 20.12.2005. По межведомственной координационной программе фундаментальных и приоритетных прикладных исследований РАСХН, МСХ РФ, РАН (Головное учреждение - ГНУ ВНИИФБиП с.-х. животных) по научному обеспечению развития агропромышленного комплекса РФ № V 1.03. По межведомственной координационной программе РАСХН (Головное учреждение - ГНУ ВНИТИП), Проблема - VII, Задание - 02. усовершенствовать систему нормированного кормления птицы. Данная научно-исследовательская работа выполнялась при финансовой поддержке грантов Губернатора Оренбургской области № 20/05 от 09.06.2005 и № 19/243-п от 19.07.2007, а также РФФИ и администрации Калужской области, грант № 01-04-96027.

Положения, выносимые на защиту.

1. Пробиотики лактомикроцикол, микроцикол и лактоамиловорин оказывают существенное воздействие на обмен белков, минеральных веществ, углеводов и липидов в организме гусей.

2. Изменение эффективности межуточного обмена в организме гусей за счет использования пробиотиков сопровождается интенсификацией гемо- и эритропоэза и повышает уровень неспецифической резистентности.

3. Пробиотические препараты оказывают модулирующее действие на антиоксидантный статус организма гусей.

4. Пробиотики стимулируют метаболизм основных питательных веществ в организме гусынь-несушек в репродуктивный период. Обработка инкубационных яиц пробиотиками повышает выводимость гусят и их последующую продуктивность.

5. Кратковременное введение с кормом микробно-ферментного инокулята взрослой птицы стимулирует обмен веществ, а также факторы неспецифической защиты молодняка гусей и повышение их продуктивности.

6. Использование лактоамиловорина, микроцикола и лактомикроцикола в промышленном гусеводстве повышает сохранность, живую массу, выход перопухового сырья и увеличивает диетическую ценность мяса.

Апробация работы. Основные материалы диссертационного исследования представлялись и одобрены на межрегиональных научно-практических конференциях «Пути увеличения производства и повышения качества животноводческой продукции» (Оренбург, 2001; 2002); расширенных заседаниях Ученого совета факультета технологии производства и переработки продукции животноводства Оренбургского ГАУ (Оренбург, 2001; 2002); заседаниях Ученого совета факультета ветеринарной медицины и биотехнологии ФГОУ ВПО ОГАУ (Оренбург, 2003; 2004; 2005; 2006; 2007); I Всероссийской научно-практической конференции «Здоровьесберегающие технологии в образовании» (Оренбург, 2003); I и II Международных научно-практических конференциях «Биоэлементы» (Оренбург, 2004; 2007); Международной научно-практической конференции «Научное наследие П.Н. Кулешова и современное развитие зоотехнической науки и практики животноводства» (Москва, 2004); III Международном симпозиуме "Современные проблемы ветеринарной диетологии и нутрициологии" (Санкт-Петербург, 2005); Российской научно-практической конференции, посвященной 50-летию освоения целинных земель (Оренбург, 2004); региональной конференции молодых ученых и специалистов Оренбуржья (Оренбург, 2005); региональной конференции «Наука - Технологии - Производство - Рынок» (Оренбург, 2007); Российской научно-практической конференции, посвященной 75-летию основания Оренбургского государственного аграрного университета (Оренбург, 2005); I и II Российских научно-практических конференциях «Проблемы устойчивости биоресурсов: теория и практика» (Оренбург, 2004; 2007); III Всероссийской научно-практической конференции «Проблемы экологии Южного Урала» (Оренбург, 2007); Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины и биотехнологии» (Оренбург, 2006); заседании Ученого совета ГНУ ВНИИФБиП с.-х. животных (Боровск, 2007).

А также на: конкурсе на соискание премии научно-исследовательских работ молодых ученых и специалистов Оренбуржья (Оренбург, 2005); конкурсе на соискание звания «Лауреат премии Губернатора Оренбургской области в сфере науки и техники» (Оренбург, 2006); конкурсе на соискание премии Правительства Оренбургской области в сфере науки и техники (Оренбург, 2007); VI и VII Московском международном салоне инноваций и инвестиций (Москва 2006; 2007); Ярмарке бизнес-ангелов и инноваторов (Саранск, 2006); Российском экономическом форуме «Россия Единая» (Нижний Новгород, 2007); Российской выставке «Золотая осень» (Москва, 2007).

Публикация результатов работы. По материалам исследований опубликовано 56 работ.

пробиотик репродуктивный гусь резистентность

2. Материалы и методика исследований

Экспериментальная часть работы выполнялась в птицеводческих хозяйствах Оренбургской области, базовым являлось ОАО птицефабрика «Спутник» Соль-Илецкого района Оренбургской области. Лабораторные физиолого-биохимические исследования проводились в ФГОУ ВПО Оренбургский ГАУ, ГНУ ВНИИФБиП сельскохозяйственных животных и ГНУ ВНИИМС. Объектом исследований являлись гуси итальянской белой породы. Всего было проведено одиннадцать опытов на молодняке гусей, на гусынях-несушках первого года использования и на гусиных яйцах. Общая логическая схема диссертационного исследования представлена на рисунке 1.

Целью первого и второго опытов было определение оптимальных доз лактоамиловорина, микроцикола и лактомикроцикола при выращивании гусей в промышленных условиях, обеспечивающих максимальную биологическую и хозяйственную эффективность. В первом опыте изучался лактоамиловорин, а исследования по определению наиболее эффективных доз микроцикола и лактомикроцикола проводили параллельно, и контрольная группа в данном случае была одна (опыт 2).

Третий и четвертый опыты выполнялись с целью определения физиолого-биохимических особенностей организма гусей, получавших лактоамиловорин, лактомикроцикол и микроцикол в эффективных дозах, установленных в первом и втором опытах. В этот период были проведены эксперименты по определению переваримости и усвоения, основных питательных веществ корма в возрасте 30 и 60 дней (3 и 4 опыты). Кровь для изучения динамики обменных процессов брали в возрасте 1, 10, 20, 30, 40, 60, 120, 150 и 180 дней.

Цель пятого опыта заключалась в определении влияния лактоамиловорина, лактомикроцикола и микроцикола на состояние антиоксидантных параметров организма гусей (опыт 5).

С целью уточнения возможного механизма воздействия пробиотиков лактоамиловорина и лактомикроцикола через естественные иммуномодуляторы - пептидогликаны, вероятно находящиеся в клеточной стенке штамма Lactobacillus amylovorus БТ-24/88, входящего в вышеназванные препараты, был проведен шестой эксперимент (опыт 6). Инактивацию штамма осуществляли следующим образом: пробиотический препарат лактоамиловорин, содержащий 4,26Ч10¹⁰ жизнеспособных клеток в 1 г препарата, кипятили в стерильной колбе в течение 3-х часов на медленном огне, после чего прокипяченный препарат высушивали до постоянной массы в сушильном шкафу при t = 120^о С. Инактивированный препарат смешивали с кормом и растворяли в питьевой воде непосредственно перед кормлением. Опытная птица в течение первого месяца жизни получала инактивированный штамм Lactobacillus amylovorus БТ-24/88 в дозе 7 г/100 кг комбикорма, кроме этого аналогично опытам с обычными пробиотиками инактивированный препарат дополнительно выпаивался с водой в течение первых трех дней жизни в дозе 0,7 г/л при неограниченном её потреблении.

В седьмом опыте изучалось влияние пробиотиков на репродуктивные качества гусынь. Первая группа являлась контрольной и получала основной рацион, соответствующий нормам ВНИТИП для гусей в данном продуктивном периоде. Вторая группа дополнительно получала лактоамиловорин в дозе 7 г/100 кг комбикорма в течение всего периода исследований. Третья группа в составе рациона получала пробиотик микроцикол в количестве 10 г/100 кг комбикорма. Четвертая группа птицы дополнительно получала лактомикроцикол в дозе 11 г/100 кг корма. Все пробиотики скармливали в течение всего периода исследований, который длился с 250-дневного возраста до 370 дней. Гусаки содержались совместно с гусынями в соотношении 1:3.

В восьмом эксперименте определялось воздействие обработки инкубационных гусиных яиц лактоамиловорином, микроциколом и лактомикроциколом на их инкубационные качества, выводимость и жизнеспособность молодняка. Для эксперимента, выполняемого методом групп-аналогов, было сформировано 4 группы гусиных яиц. Перед закладкой яйца подвергали всем плановым ветеринарным мероприятиям. Первая группа служила контролем, вторую группу яиц предварительно перед закладкой в инкубатор погружали на 1 минуту в водный раствор лактоамиловорина с концентрацией 7 г/л, а перед переносом яиц в выводной шкаф процедуру повторяли. Третью и четвертую группы яиц перед закладкой в инкубатор погружали на 1 минуту в водные растворы лактомикроцикола и микроцикола с концентрацией пробиотиков 11 г/л и 10 г/л соответственно. Для приготовления растворов использовали дистиллированную воду, а в момент погружения яиц в раствор с пробиотиками поддерживали его температуру в пределах 35-37о С. В данном эксперименте учитывались только зоотехнические показатели.

С целью определения влияния микробно-ферментного инокулята взрослой птицы на физиолого-биохимические и хозяйственные показатели молодняка гусей был проведен девятый эксперимент. В этом опыте гусятам опытной группы в течение первых трех суток жизни дополнительно задавали измельченную кишечную массу взрослых клинически здоровых гусаков в дозе 500 г/10 кг комбикорма. Для получения кишечной массы забивали взрослых клинически здоровых гусаков, проводили анатомическую разделку и отрезали кишечник от мышечного желудка до клоаки. После чего измельчали весь кишечник с содержимым с помощью бытовой мясорубки и тут же смешивали кишечную массу с комбикормом в вышеуказанной пропорции. Скармливание приготовленной смеси гусятам производили немедленно. Кровь для исследований брали в возрасте 30 и 60 дней.

Производственные опыты проведены на большом поголовье гусей. Испытания с лактоамиловорином выполняли отдельно (опыт 10), а с микроциколом и лактомикроциколом осуществлены параллельно, и контрольная группа была одна (опыт 11). В данных опытах дозы и схемы использования препаратов были аналогичны установленным в первом и втором опытах.

Рис. 1 - Общая схема исследований

В опытах № 1, 2, 3, 4, 5, 6, 9, 10 и 11 группы формировались методом групп-аналогов, при соотношении самцов и самок 1:1. Гусят выращивали с суточного до 30-дневного возраста в помещении, а затем перевели на пастбище. Во время проведения опыта соблюдались рекомендуемые специалистами птицефабрики зоотехнические параметры, такие, как плотность посадки на 1 м² пола 8 голов; температура в первые три дня поддерживалась на уровне 29⁰ С, и к концу первой декады её снижали до 24⁰ С, а затем до 20⁰ С; относительная влажность воздуха находилась в пределах 65-75 %; освещение птичника в первые пять дней круглосуточное, при интенсивности 20-25 люкс/м² пола, затем его сократили до 16 часов в сутки. Птица имела постоянный свободный доступ к корму и воде. В процессе опыта проводились также плановые ветеринарные мероприятия.

Взвешивания проводили на электрических весах Kenwood, сохранность учитывали по количеству павшей птицы ежедневно. Анатомическую разделку тушек проводили по методике ВНИТИП (2001). Количественный выход перо-пухового сырья определялся как с одной головы, так и в целом по группе. Кровь брали до утреннего кормления из крыловой вены (до возраста 1 месяца тотально) от 5 особей из каждой группы (3> + 2+), а в опыте № 7 (5+), в качестве антикоагулянта использовали гепарин, или если того требовала методика - ЭДТА. Для определения усвоения питательных веществ корма у гусей при использовании пробиотиков (опыты № 3 и 4) были проведены физиологические (балансовые) опыты в возрасте 30 и 60 дней. Было отобрано по 6 гусаков от опытной и контрольной групп однородных по живой массе, отражающей среднюю по группе.

В опытах использовали препараты с титром колониеобразующих единиц (КОЕ) Lactobacillus amylovorus БТ 24/88 в пределах 0,243-4,26Ч10¹⁰ и Escherichia coli S 5/98 - 1,64Ч10⁹ в 1 г препаратов, которые готовили в лаборатории биотехнологии микроорганизмов ГНУ ВНИИФБиП сельскохозяйственных животных, согласно патентам RU № 2054478, № 2268297 и № 2268925.

Производственные испытания пробиотиков проведены в ОАО птицефабрика «Спутник», ЗАО «Птицефабрика Оренбургская» и СПК «Птицефабрика «Гайская».

В крови определяли: эритроциты, лейкоциты и гематокрит (Болотников В.А., Соловьёв Ю.В., 1980); концентрацию гемоглобина в гемометре Сали (Предтеченский В.Е., 1964); общий кальций и холестерол (Колб В.Г., Камышников В.С., 1976); содержание железа, цинка и меди в сыворотке крови методом атомно-абсорбционной спектроскопии, активность церулоплазмина (Кузнецов С.Г., 1997); фосфор в сыворотке крови по Бригсу в модификации Лебедева П.Т. и Усовича А.Г. (1965); общий белок в сыворотке крови рефрактометрическим методом (Меньшиков В.В., 1973); разделение и количественное определение соотношения отдельных фракций белков сыворотки крови электрофорезом на бумаге, общие липиды в сыворотке крови по цветной реакции с сульфофосфованилиновым реактивом (Колб В.Г., Камышников В.С., 1982); кислотную ёмкость крови по методу Неводова А.П.; глюкозу в крови глюкозооксидазным методом (Материкин А.М. с соавт., 1997).

Показатели неспецифической резистентности: бактерицидную активность сыворотки крови по методу Смирновой О.В. и Кузьминой Т.А., титр лизоцима по методу Ермольевой З.В. и Буяновской И.С., активность бета-лизина ускоренным методом Бухарина О.В. (Маслянко Р.П., 1984).

Показатели антиоксидантного статуса: активность супероксиддисмутазы (Дубинина Е. Е. с соавт., 1983); активность глутатионпероксидазы (Моин В.М., 1986); активность каталазы (Королюк М.А. с соавт., 1988); малоновый диальдегид (Андреева Л.И. с соавт., 1988); антиокислительную активность плазмы крови (Клебанов Г.И. с соавт., 1988).

В кормах определяли: азот по Къельдалю, клетчатку по методу Геннеберга-Штомана, жир методом Рушковского, минеральные вещества путем сухого озоления, кальций и фосфор общепринятыми методами (Маслиева О.В., 1970), расчет БЭВ проведен по методу ВНИТИП (2001), крахмал методом Максакова (Материкин А.М. с соавт., 1997)

В помете определяли: те же вещества теми же методами, что и в кормах, протеин после отгонки мочевой кислоты и её солей по методу Дьякова М.И. (Маслиева О.И., 1970).

В мясе определяли: количество белковых веществ, жира, минеральных веществ и воды общепринятыми методами (Маслиева О.В., 1970), количество триптофана и оксипролина в мясе по методу Белькова Г.И. с соавт. (1984). Содержание общего холестерола в мясе по методу Зака, описанному Мартюшовым В.М. с соавт., (1997).

Инкубационные качества яиц определяли: общепринятыми методами, разработанными сотрудниками ВНИТИП для установления морфологического и химического состава яиц (Агеева Л.Н. с соавт., 1981; Дядичкина Л.Ф. с соавт. 1992, 2001; Отрыганьев Г.К. с соавт., 1982; Тишенков А.Н. с соавт., 1982; Сергеева A.M., 1978).

Полученные в экспериментах цифровые данные обработаны методом вариационной статистики (Гатаулин А.М., 1992). Данные в таблицах представлены в виде M±m, где M - среднее арифметическое, m - ошибка средней арифметической. В случае нормального распределения, то есть тождественности дисперсий в сравниваемых группах и разницы между средней арифметической (М) и медианой (Ме) менее 10 %, оценку статистической значимости различий между группами проводили с помощью t-критерия Стьюдента. Если же сравниваемые показатели имели распределение, отличающееся от нормального, то сравнение проводили с помощью U-теста Манна-Уитни, то есть непараметрического аналога t-критерия Стьюдента. Обработку проводили на персональном компьютере с использованием программы Microsoft Excel 2003 и Statistica 6.0. Достоверными считали различия при р?0,05.

3. Результаты собственных исследований и их обсуждение

Результаты первого и второго опытов свидетельствуют о том, что использование лактомикроцикола, лактоамиловорина и микроцикола сопровождается повышением сохранности и живой массы молодняка гусей, а также оказывает воздействие на физиолого-биохимические показатели их организма. Оптимальные дозы пробиотиков составляют: лактомикроцикола - 11 г, лактоамиловорина - 7 г и микроцикола - 10 г/100 кг комбикорма. Все препараты задавались птице в установленных дозах с поправкой на титр КОЕ.

3.1 Воздействие пробиотиков на переваримость питательных веществ корма

Применение микроцикола, лактоамиловорина и лактомикроцикола в первую очередь оказывало влияние на процессы пищеварения, то есть на начальный этап обмена веществ, а уже затем на промежуточный и конечный этапы обмена. Применение пробиотиков приводило к повышению среднесуточного потребления корма как в 30-, так и в 60-дневном возрасте. При скармливании лактомикроцикола потребление корма увеличивается на 3,63 %, а усвоение протеина возрастает на 3,41-3,45 %, клетчатки - на 6,61 %, БЭВ на - 4,04- 10,55 %, золы - на 5,4-5,48 %, кальция на - 5,14-6,47 %, крахмала - на 3,23-5,79 %, а использование липидов снижается на 21,14-21,21 % (р?0,05). При применении лактоамиловорина возрастает потребление корма на 3,24 %, усвоение протеина повышается на 2,92 - 4,32 %, клетчатки - на 11,39 %, БЭВ - на 13,26 %, минеральных веществ - на 1,52-2,39 %, тогда как усвоение липидов снижается на 41,68-44,5 % (р?0,05). Введение в комбикорм микроцикола оказывает меньшее воздействие на процессы пищеварения в ЖКТ гусей, но тем не менее усвоение протеина корма увеличивается на 2,52 %, клетчатки - на 1,01-10,51 %, БЭВ - на 3,9 %, минеральных веществ - на 7,31 %, кальция - на 2,34 % и фосфора - на 2,49-3,63 % (р?0,05).

При применении лактоамиловорина и лактомикроцикола повышение потребления кормов наиболее выражено. Вероятно, это сопряжено со снижением усвоения липидов корма, которые, как известно, имеют максимальную энергетическую ценность по сравнению с белками и углеводами. Аналогичная зависимость при повышении калорийности рационов и обратный эффект при понижении калорийности отмечена многими исследователями (Никулин В.Н., Тараканов Б.В., Синюкова Т.В., 2007; Романов М.П., 1962; Baldini J.T. et al., 1955, 1957; Bolton W., 1963; Dobson D.S. et al., 1964; Donaldson W.E. et al., 1955; Mc Daniel A.H. et al., 1957; Sandr M.L., 1956; Schwartz H.G. et al., 1958; Spring S.L. et al., 1957), при этом объяснение данного явления состоит в том, что энергетические потребности являются наиболее существенным стимулятором потребления корма, и если эти потребности удовлетворены, то прием корма прекращается. Это приводит к ограничению приема других нутриентов, в том числе протеина и минералов. Причиной снижения усвоения липидов корма у гусей, получавших лактоамиловорин и лактомикроцикол, является свойство, установленное Gilliland S.E. (1990), различных видов лактобацилл, обитающих в пищеварительном тракте, деконъюгировать таурохолиевую и гликохолиевую желчные кислоты, а поскольку деконъюгированные желчные кислоты обеспечивают меньшее всасывание липидов из кишечного тракта, определенное количество липидов корма проходит через желудочно-кишечный тракт транзитом.

Причиной незначительного повышения среднесуточного потребления корма гусями под воздействием микроцикола может быть активный рост лактобактерий под воздействием штамма Escherichia coli S 5/98, однако это предположение не находит подтверждения в опытах по переваримости отдельных питательных веществ корма, поскольку в этой группе наблюдалось некоторое повышение степени усвоения липидов корма. Возможно, под влиянием микроцикола усиливалась перистальтика кишечника и компоненты корма быстрее эвакуировались из кишечника, заставляя птицу более активно потреблять новые порции. Впрочем, по данным Bengmark S. (2000), на жизнедеятельность микрофлоры кишечника макроорганизма в среднем расходуется до 10% поступившей энергии и 20% объема принятой пищи, а поскольку под воздействием пробиотиков количество микроорганизмов, колонизирующих кишечник гусей, возрастало, то закономерно увеличивалась и потребность их в питательных веществах, что и послужило причиной повышения среднесуточного потребления кормов.

3.2 Влияние пробиотиков на морфофизиологические показатели крови

По-разному пробиотики оказывали воздействие на гематологические показатели (табл. 1). Общим было то, что лактоамиловорин, микроцикол и лактомикроцикол повышали уровень гемоглобина, количество эритроцитов и величину гематокрита, но при этом под воздействием лактоамиловорина и лактомикроцикола количество лейкоцитов несколько снижалось, а под воздействием микроцикола повышалось. Применение лактомикроцикола сопровождалось повышением количества гемоглобина на 1,57-12,88 %, величины гематокрита на 2,21-3,56 %, количества эритроцитов на 5,28 % и снижает количество лейкоцитов на 1,42-2,44 % (р?0,05). Использование лактоамиловорина увеличивало уровень гемоглобина на 1,8 - 17,65%, величину гематокрита - на 2,21 - 7,41%, тогда как число лейкоцитов снижалось на 2,3 - 5,35% (р?0,05), а скармливание микроцикола повышает количество гемоглобина на 2,62-6,39 %, лейкоцитов - на 0,33-0,88 % и величины гематокрита - на 1,72-1,82 % (р?0,05).

Все вышеперечисленные изменения не оказывали видимого отрицательного воздействия на организм гусей и не выходили за пределы физиологических норм.

Таблица 1 - Воздействие пробиотиков на гематологические показатели гусей

Примечание: здесь и далее в таблицах 2 - 7 и 10 - 14 1-я опытная - группа, где использовали лактомикроцикол, 2-я опытная - лактоамиловорин, 3-я опытная - микроцикол; *- различия между опытной и контрольной группами достоверны при р?0,05; здесь и в таблицах 2, 3, 4 и 5 в случае статистически значимых различий между опытной группой и контролем в числителе приведены абсолютные значения показателя, а в знаменателе - в процентах к контролю.

Наиболее вероятной причиной положительных сдвигов в составе красной крови гусей под влиянием пробиотиков является интенсификация процессов окисления и восстановления в организме птицы. Так как гусята опытных групп лучше переваривали питательные вещества корма, то и количество веществ, поступающих в кровь из желудочно-кишечного тракта, увеличивалось, а поскольку эти нутриенты могут изменять рН крови в ту или иную сторону, необходимо увеличение её буферной ёмкости. Известно, что большая часть буферной ёмкости крови приходится на гемоглобин эритроцитов, в связи с чем количество эритроцитов и гемоглобина в крови гусей опытных групп было выше, чем в контроле. Похожие данные численности эритроцитов и количества гемоглобина в крови гусей получены в исследованиях Закраевской Г. (1970), Лукичевой В.А. (1989) и Крючковой М.А. (2007), а также возрастной динамики величины гематокрита Лукичевой В.А. (1989) и Woszczyk J. et al. (1981).

За весь исследуемый возрастной период количество лейкоцитов в крови гусей опытных групп, где использовали лактоамиловорин и лактомикроцикол было несколько ниже, чем в контроле, и поскольку никаких отрицательных моментов влияния лактоамиловорина и лактомикроцикола на организм гусей не выявлено, этот факт, вероятно, может быть расценен как результат положительного влияния пробиотиков на физиолого-биохимический статус организма гусей.

Аналогичные данные были получены в экспериментах Малик Н.И. (2002) на цыплятах под воздействием пробиотика стрептобифида-форте, а также в опытах Данилевской Н.В. (2007) на крупном рогатом скоте и цыплятах-бройлерах. Однако под воздействием микроцикола количество лейкоцитов возрастало, и этот факт, по-видимому, связан с действием штамма Escherichia coli S 5/98 на макроорганизм, поскольку такой же эффект отмечен в работах Тараканова Б.В. (2005), а также Соколовой Н.А. с соавт. (1991) под воздействием других пробиотиков на основе штаммов Escherichia coli. Вероятно штаммы Escherichia coli, входящие в состав нормобиозов макроорганизмов, каким-то образом оказывают воздействие на количество лейкоцитов, т.е. регулируют их содержание, а основной эффект от введения таких пробиотиков выражается в стимуляции лейкопоэза, что также стимулирует защитные силы макроорганизма. При этом не следует исключать и возможное ответное действие макроорганизма гусей на введение микробных агентов, воспринимающихся им как патогенные или условно-патогенные.

3.3 Воздействие пробиотиков на состояние естественной резистентности организма гусей

Воздействие пробиотиков на защитные реакции организма гусей реализовывались не только за счет регуляции численности лейкоцитов, но и за счет повышения уровня сывороточного лизоцима, активности бета-лизина и, как следствие, бактерицидной активности сыворотки крови (табл. 2). При использовании лактомикроцикола БАСК увеличивается на 5,15-10,15%, количество лизоцима - на 12,25-16,58 % и активность бета-лизина - на 9,17-13,87% (р?0,05). Применение лактоамиловорина повышает бактерицидную активность сыворотки крови на 2,17-12,49%, содержание лизоцима - на 13,48-35,18% и активность бета-лизина - на 8,3-34,87% (р?0,05). Использование микроцикола увеличивает БАСК на 4,25-10,98%, количество лизоцима - на 11,16-12,0% и активность бета-лизина - на 7,47-25,63% (р?0,05).

По данным Маслянко Р.П. (1987); Иванова Ю.Б. (2005), бактерицидная активность сыворотки крови (БАСК) является интегральным фактором естественной резистентности гуморального типа, свидетельствующим о способности крови к самоочищению. Применение всех трех пробиотиков стимулировало бактерицидную активность сыворотки крови опытных гусей.

Таблица 2 - Влияние пробиотиков на неспецифическую резистентность гусей

Данные возрастной динамики бактерицидной активности сыворотки крови у гусей всех групп совпадают с данными, полученными Хаустовым В.Н. (2001) на утках и Липской В.В. (1967) на гусях. Последний автор сообщила, что уровень БАСК у гусей очень отзывчив на различные внешние факторы, например, добавление метионина в рацион значительно повышает бактерицидную активность сыворотки крови.

Лизоцим относится к одному из важнейших факторов естественной резистентности организма (Бухарин О.В. с соавт., 1977; Воронин Е.С. с соавт., 2002; Карпуть И.М., 1994; Pfulek S. et al., 1985). Применение микроцикола, лактоамиловорина и лактомикроцикола позволило увеличить содержание лизоцима в крови гусей опытных групп, тем самым оказало стимулирующее влияние на неспецифическую резистентность организма. Данные возрастной динамики содержания лизоцима в крови гусей совпадают с данными, полученными Хаустовым В.Н. (2001) на утках.

Маслянко Р.П. (1987) сообщил, что бета-лизин является одной из важных бактерицидных систем сыворотки крови животных, отличающейся термостабильностью и избирательностью в отношении грамположительных бактерий. По своей природе бета-лизин представляет катионный белок (Ivanov I.B. et al., 2005, 2006, 2007). По мнению авторов, бета-лизин имеет тромбоцитарное происхождение. Применение пробиотиков оказывало не столь выраженное стимулирующее влияние на активность бета-лизина, как, например, на бактерицидную активность сыворотки крови или содержание лизоцима. К сожалению, в доступной нам литературе не найдено данных возрастной динамики активности бета-лизина у птиц вообще и у гусей в частности. Поэтому мы можем только констатировать, что с возрастом активность бета-лизина у гусей значительно снижается, тогда как cодержание лизоцима и бактерицидная активность сыворотки крови с возрастом у гусей повышается. По-видимому, эти процессы каким-то образом связаны между собой и требуют более детального изучения. Интересным представляется и тот факт, что на активность бета-лизина из всех трех препаратов наибольшее воздействие оказал микроцикол. Это, вероятно, связано с тем, что, по данным Гриценко В.А. с соавт. (2001), Johnson J.R. (1991), Krzeska I. et al. (1992), Yamamoto S. et al. (1996), бактерии рода Escherichia обладают способностью воздействовать на активность бета-лизина и некоторых других факторов неспецифической резистентности организма по различным, еще до конца не выясненным, механизмам.

3.4 Влияние пробиотических препаратов на концентрации белка и соотношение его отдельных фракций в сыворотке крови гусей

Более высокая степень усвоения протеина корма у гусей опытных групп, по-видимому, обусловлена несколькими факторами, такими, как повышение общей протеолитической активности кишечника за счет выделяемых микроорганизмами желудочно-кишечного тракта протеаз; во-вторых, применение изучаемых пробиотических препаратов позволило создать благоприятные условия для обитания и активной жизнедеятельности бактерий, способных продуцировать ферменты, гидролизующие клетчатку. Этот факт важен не только тем, что продукты расщепления клетчатки, в частности моносахара, лучше, чем сама клетчатка, используются птицей в качестве питательных веществ, но и тем, что данные ферменты освобождают клетки растительных тканей от оболочек, состоящих из клетчатки, и делают содержимое клеток доступным воздействию пищеварительных ферментов, в том числе и протеаз.

Вышеперечисленные факты лежат в основе повышения содержания общего белка в сыворотке крови гусей опытных групп (табл. 3). Так, при использовании лактомикроцикола увеличивается количество общего белка в сыворотке крови на 5,82-17,16 %, отмечается увеличение относительной доли альбуминов на 1,22-4,25 % и г-глобулинов на 0,86-4,1 %, за счет снижения доли в-глобулинов на 1,65-8,98 % (р?0,05). Применение лактоамиловорина повышает содержание общего белка в сыворотке крови гусей на 3,49-25,33 %, увеличивает долю альбуминов на 1,44-5,47 % и г-глобулинов на 2,03 - 4,6 % за счет снижения таковой в-глобулинов на 1,72 - 8,92 % (р?0,05). Скармливание микроцикола приводит к повышению количества общего белка в сыворотке крови на 3,84-12,58 %. При этом увеличиваются доли альбуминов на 1,74-2,49 % и г-глобулинов на 0,87-1,16 %, но снижаются б- и в-глобулинов на 1,54-1,6 и 2,8-5,05 % соответственно (р?0,05).

Однако увеличение содержания белка в сыворотке может быть обусловлено не только этими факторами, но и тем, что применение лактоамиловорина, микроцикола и лактомикроцикола улучшает состояние микробиоценоза кишечника, и микроорганизмы, входящие в состав микробиоценоза, участвуют в синтезе аминокислот, используя в качестве источника азота аммиак, а в качестве источника углерода - углекислый газ, уксусную, пропионовую и другие органические кислоты. Известно также, что и сами бактерии в результате лизиса, под действием лизоцима и трипсина, могут быть источником белка для организма гусей (Боярский Л.Г., 1985; Мосякин В.М., 1993; Николичева Т.А., 1975; Шендеров Б.А. с соавт., 1989; Abdulrahim S.M., 1996; Gibson S.A. et al., 1989; Jan-Ho Son et al., 1995).

Сходные результаты возрастной динамики содержания общего белка в сыворотке крови гусей были получены Охрименко Е.М. и Нестерович Р.С. (1968), Лукичевой В.А. (1989), Жумабаевым М.К. (2004) и Крючковой М.А. (2007).

Таблица 3 - Содержание общего белка в сыворотке крови гусей, г/л

3.5 Содержание минеральных веществ в сыворотке крови гусей при применении пробиотиков

По мнению Шендерова Б.А. (2005), обобщившего большой фактический материал, механизмы, связанные с нормальной микрофлорой, обеспечивающие микроэлементный гомеостаз в живых организмах, состоят в превращении химических элементов в атомовиты, специфические для каждого вида живых организмов; осуществлении специфических ОВР с неорганическими и органическими соединениями, изменяющими растворимость, подвижность и усвоение химических элементов; продукции органических кислот и других веществ, изменяющих растворимость и биодоступность неорганических и органических химических соединений; образовании и выделении хелатирующих и комплексообразующих соединений, влияющих на подвижность, адсорбцию и всасывание поступающих в организм естественным путем макро- и микроэлементов; восстановлении химических элементов из соединений до элементного и/или газообразного состояния; изменении биоусвояемости и токсичности за счет повышения или снижения транслокации химических элементов через слизистую пищеварительного тракта за счет дискриминации по транспорту анионов и катионов; опосредованной регуляции количественного и качественного содержания химических элементов в просвете кишечника и в биологических жидкостях организма за счет изменения скорости продвижения пищевого комка по кишечному тракту, влияния на другие физиологические функции, биохимические реакции организма, связанные с метаболизмом химических элементов.

На этом базируется современное понимание механизма действия пробиотических препаратов на метаболизм основных минералов (Мазо В.К. с соавт., 2004; Мирошников С.А. с соавт., 2006; Сусликов В.Л., 2002; Шендеров Б.А., 2005; Bjomhag G., 1989; Elli M. et al., 2000; Khassanova L. et al., 2002; Kot E. et al., 1999; Mead G.C., 1989; Mengheri E. et al., 1999; Roediger W.E., 1986; Rojhani A. et al., 1994; Santavirta J. et al., 1991; Smith J.C. et al., 1984; Van den Berghe D, 2002; Watzke H.J., 1998).

В наших исследованиях установлено, что гуси опытных групп лучше усваивали кальций и фосфор корма, что приводило к повышению их уровня в сыворотке крови (табл. 4).

Таблица 4 - Воздействие пробиотиков на содержание макроэлементов в сыворотке крови гусей, ммоль/л

У гусей, получавших пробиотики, усвоение всех минеральных веществ корма было также выше, и с этим связано повышение содержания цинка и меди в сыворотке крови гусей, получавших лактоамиловорин и лактомикроцикол, но у них отмечено снижение уровня железа (табл. 5). Воздействие микроцикола было несколько иным, а именно: содержание цинка было также выше, а вот уровень меди снижался, тогда как количество железа возрастало. Различия во влиянии пробиотиков на содержание меди в сыворотке крови гусей, вероятно, связаны с селективным действием входящих в их состав микроорганизмов на этот микроэлемент, а также с его антагонистической активностью относительно железа в макроорганизме. Данный факт подтверждает предположение о том, что более активным микроорганизмом в пробиотике лактомикроциколе является штамм Lactobacillus amylovorus БТ-24/88, поскольку лактоамиловорин оказывает такое же воздействие на содержание изучаемых макро- и микроэлементов в сыворотке крови гусей.