Clostridium difficile, ассоциированные колиты у животных

Размещено на http://www.allbest.ru/

Размещено на http://www.allbest.ru/

Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н. Вышелесского, Национальная АН Беларуси

Clostridium difficile, ассоциированные колиты у животных

А.Ю. Финогенов

Клостридиозы - это токсикоинфекции, фактором патогенности которых являются выделяемые токсины. Характерной особенностью возбудителей клостридиозов является их полипатогенность. Они поражают как людей, так и сельскохозяйственных, домашних и диких животных. Особую опасность представляют ботулизм, столбняк, газовая гангрена, анаэробная энтеротоксимия.

Среди множества микрорганизмов рода Clostridium (более 100 видов) болезнетворные виды составляют относительно немногочисленную группу. Клостридиозы, своеобразные по своему патогенезу, клиническому проявлению, морфологическим изменениям, протекают тяжело и часто приводят к летальному исходу.

Сравнительно недавно появились сообщения о выделении токсигенных штаммов CI. difficile (далее - Cd), вызывающих патологию у людей и животных. В настоящее время заболеванию присвоена самостоятельная нозологическая единица - CDAD (CI. difficile ассоциированная диарея).

Впервые Cd выделили в 1935 году Hall и OToole, исследовавшие заселение микроорганизмами желудочно-кишечного тракта новорожденных детей. Они установили способность микроорганизмом выделять термолабильный токсин, обладающий летальными свойствами для кроликов.

Вплоть до 90-х годов прошлого века роль этого микроорганизма была слабо изучена. Однако массовое применение антибиотиков и развитие на этом фоне антибиотико-ассоциированных диарей вновь привлекло к нему широкое внимание исследователей.

Впервые о выделении Cd от животных сообщил D. Hunter в 1981 году. Для лечения козы с абсцессом в области нижней челюсти они применяли стрептомицин ежедневно в течение 5 дней. Однако улучшения состояния животного не наблюдалось. Наоборот, отмечали анорексию, подавленное состояние, разлитое воспаление. После дренирования абсцесса и лечения антибиотиками улучшения не наблюдалось, животное погибло. Микробиологические исследования на присутствие Actinomyces оказались отрицательными, но были обнаружены многочисленные грамположительные палочки, среди которых выявлялась Cd.

В 1983 г. J.L. Orchard et. al. описали лечение абсцесса у белого медведя 7 лет, массой 534 кг. После обработки и дренажа абсцесса они вводили канамицин в дозе 1,5 г дважды в день (7 дней), затем тетрациклин (3 г, 3 раза в день). Вначале отмечалось улучшение общего состояния животного, но на восьмой день появилась кровавая диарея с жидкими фекалиями. После отмены антибиотикотерапии диарея прекратилась через одну неделю. В фекалиях была обнаружена Cd и ее токсины.

R.J. Carman и R.H. Evans в 1984 году описали спонтанную энтеропатию с сильной диареей и смертностью около 50% у молодых зайчат в питомнике. При микробиологическом исследовании они выделили Cd. Экспериментальное заражение показало идентичную патологию. Диарея наблюдалась между 10 и 25 днями после заражения со смертельным исходом на 2-3 день после начала диареи. Аналогичную патологию они отметили у кролика, которого лечили от ринита, вызванного Pasterella multocida, в течение 7 дней смесью пенициллин-прокаин в дозе 120000 ME, затем амоксициллином (8 мг/кг вдень). Респираторные симптомы исчезли, но через 6 дней появилась диарея с последующей гибелью животного на третий день. В фекалиях присутствовали Cd и ее токсины.

Случаи хронической диареи у собак описали в 1986 году А.Р. Berry и P.N. Levett. У кобеля коккер-спаниеля в возрасте 4 года и 7 месяцев в течение двух лет была хроническая диарея, других отклонений в состоянии животного не отмечалось, гематологические и физиологические показатели были в пределах физиологической нормы, панкреатическая функция не нарушена, гельминтологические исследования были отрицательными. Образцы подвергли бактериологическому исследованию, при котором Salmonella spp., Shigella spp. и Campylobacter spp. найдены не были. В цитотоксическом тесте in vitro обнаружен токсин Cd. Аналогичные случаи отмечались у золотистого ретривера возрастом 2 года и шотландского терьера (2 месяца). Патогенные аэробы при бактериологическом исследовании не выделены, но обнаружен цитотоксин Cd.

По данным С. Buogo, у щенков в возрасте до 10 недель с диарейными расстройствами в 46% случаев была обнаружена Cd, причем на долю токсигенных штаммов приходилось только 61,5%. У взрослых собак Cd выделить не удалось. Наряду с Cd были выделены CI. perfringens, Campylobacter spp., Salmonella spp., но роль их в развитии диареи не была подтверждена.

При исследовании собак с диарейными расстройствами с помощью ПЦР A.L. Struble выявил Cd у 16,6% собак. При этом 71,4% штаммов от числа исследованных были токсигенными. У здоровых собак Cd обнаружена в 19,1% случаев, однако число токсигенных штаммов составляло лишь 42,9%. У собак в возрасте до двух лет названные микроорганизмы не выделялись, с 2 до 8 лет они обнаружены в 23,8% случаев, а старше 8 лет - в 27,1% случаев. Процент выделения токсигенных штаммов с возрастом также увеличивался и составлял соответственно 0%, 40% и 61,5%.

В то же время, по данным А. Weber, у собак с синдромом диареи Cd выделялась лишь в 2,7% случаев, у здоровых собак - в 9,3%, у кошек с синдромом диареи - в 6,7%, у здоровых кошек - в 9% случаев. В пробах фекалий от собак возрастом до 1 года Cd удавалось выделить чаще (7,6%), чем от собак старше 1 года (5,1%). У кошек микроорганизм в разных возрастных группах выделялся примерно поровну (8,2% и 8,6%). У животных, в лечении которых использовали антибиотики, процент выделения был выше и составил у собак 8,5%, у кошек - 12,3%. У собак и кошек, у которых антибиотикотерапию не применяли, Cd обнаружена в 6,2% и 5,7% случаев соответственно. По биохимическим свойствам штаммы Cd, выделенные от собак и кошек, не различались между собой.

Случаи острой антибиотико-ассоциированной диареи у собак наблюдал A. Kroth в 1989 году. При этом бактериологическое исследование проводили у собак здоровых и с признаками патологии ЖКТ. Частота выделения клостридии составила 2% и 9,3% соответственно. J.S. Brazier, N.A. Saif (1996) показывали более высокую частоту выделения данного микроба, на долю которого приходилось до 10%. У кошек частота выделения у здоровых и больных была 6,7% и 9% соответственно.

T.V. Riley указывает на более высокий уровень выделения Cd (40% - у собак и 38,1% - у котов). У животных, ранее леченых антибиотиками, процент выделения был еще выше и достигал 52%, у нелечившихся - 23,9%. В 15 из 20 проб почвы, взятых на территории клиники, обнаружена Cd.

В 1987 году R.L. Jones высказал предположение, что одной из возможных причин диареи у жеребят является Cd. При исследовании 47 жеребят, не получавших антибиотики, ученые изолировали 27 штаммов Cd (65%), оказывавших цитотоксическое действие на культуру клеток. При этом в пробах от 18 жеребят и 62 взрослых лошадей без диарейных расстройств микроорганизм не был обнаружен.

Заболевание протекало в двух формах - в форме легкой водянистой диареи и в форме геморрагического некротического энтероколита, заканчивавшегося смертью животного в течение 24 часов. Наиболее сильные поражения отмечались в тонком кишечнике (коагулирующий некроз слизистой оболочки с десквамацией эпителия, геморрагиями и подэпителиальным отеком). На криптах обнаруживалось большое количество грамположительных бактерий. Те же авторы в 1988 году описали четыре случая гибели жеребят от геморрагического некротического энтероколита, вызванного Cd.

Вспышку CDAD у взрослых лошадей в 1995 году описал B.R. Madewell. При исследовании проб фекалий у 9 из 10 лошадей с острой формой диареи в реакции латекс-агглютинации и ПЦР были выявлены токсигенные штаммы Cd. У одной лошади, кроме того, обнаружена Salmonella krefeld.

CDAD у лошадей иногда регистрируется в ассоциации с другими возбудителями (CI. perfringens, Salmonella spp).

Как правило, у взрослых лошадей болезнь протекает в более легкой форме (водянистая диарея), чем у жеребят (некро-геморрагический энтероколит).

Искусственное устранение нормальной микрофлоры с помощью антибиотиков было предпринято рядом ученых. De Somer и соавторы наблюдали, что введение per os или интраперитонеально морским свинкам пенициллина в дозе 20000-100000 ЕД вызывало геморрагический энтерит и гибель 90% животных на 3-5 день. Подобную клиническую картину у кроликов воспроизвел R. Fekety в 1977 г. с помощью линкомицина и клиндамицина. Аналогичная ситуация наблюдалась при введении ба-цитрацина и хлорамфеникола, ампициллина. J.E. Reht и S.P. Pakes в 1981 году воспроизвели антибиотико-ассоциированную диарею у морских свинок инъекциями пенициллина в дозе 50000 ЕД и линкомицина (100 мг на голову).

Al Saif и J.S. Brazier в 1996 году провели исследования по изучению распространения Cd в Великобритании. Пробы культивировали на селективной питательной среде и тестировали в ПЦР. Из 2580 исследованных проб было выделено 184 (7,1%) изолята, из них патогенными оказались 76%. Высокая частота выделения отмечалась из проб воды 4 рек (87,5%). Положительными были 50% проб воды из плавательных бассейнов, 44% проб морской воды, 46% проб озерной воды, при этом 90% изолятов вырабатывали энтеротоксин. 21% образцов почвы были положительными, однако среди них всего в 40,9% изолятов содержался энтеротоксин. Большинство штаммов из проб, отобранных на территории больниц и вокруг ветклиник, были патогенными (94,7%). Из смывов с овощей и фруктов Cd выделялась в 2,3% проб, из них 71,4% штаммов были патогенные.

Нами было исследовано на предмет выделения Cd бактериологически 151 проба фекалий от собак, 106 - от лошадей, 63 - от кошек различных половозрастных групп, от животных с клиническими признаками диареи (таблица 1).

клостридиоз диарея токсигенный животное

Таблица 1 Результаты выделения Cd от различных видов животных

Из представленной таблицы видно, что наибольшее число штаммов Cd нами было выделено от собак - 6 изолятов (4,0%). При сборе анамнеза было выявлено, что все собаки ранее лечились с применением антибиотиков. При исследовании 106 проб фекалий от лошадей Cd выделена от 3 животных в возрасте до 1 года. Два жеребенка ранее лечились антибиотиками. От кошек выделен 1 изолят (1,6%).

Одновременно с Cd были изолированы культуры Proteus vulgaris (в трех случаях), Salmonella spp. (1 случай), Е. coli (3 случая), однако эти микроорганизмы оказались непатогенными для белых мышей и, по всей видимости, не играли существенной роли в патологии.

При исследовании выделенных штаммов в ПЦР мы выявили наличие у них фрагментов tox-генов А и В. При этом размер амплифицированных продуктов для токсинов А и В Cd составил 630 и 399 пар оснований соответственно.

Для проверки степени активности токсинов мы провели ряд биологических тестов in vivo и in vitro. Токсин обладал летальными, диареагенными и цитотоксическими свойствами. В летальном тесте на белых мышах эпизоотические штаммы проявляли летальную активность 64-256 Dlm/мл и цитотоксическую активность - 103-104 ЦТЕ/мл.

Таким образом, многочисленные исследования показывают, что случаи заболевания CDAD зарегистрированы во многих странах мира у различных видов животных и в большинстве случаев связаны с применением антибиотиков.

Размещено на Allbest.ru