Разработка средств и способов терапии и профилактики респираторных болезней телят

66

Разработка средств и способов терапии и профилактики респираторных болезней телят

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени идоктора ветеринарных наук

Введение

Актуальность темы. Респираторные болезни молодняка крупного рогатого скота (КРС) распространены во всех странах мира и наносят огромный экономический ущерб животноводству, обусловленный потерей живой массы животных, снижением продуктивности, нарушением воспроизводства и высокой гибелью молодняка.

Ведущее место в этиологии респираторных болезней у телят принадлежит возбудителям вирусной, бактериальной и хламидийно-микоплазмен-ной природы (Н.Н. Крюков и соавт., 1984; И.А. Бакулов, 1998; В.А. Мищенко и соавт., 2000; К.П. Юров и соавт., 2003; В.Н. Сюрин, А.Я. Самуйленко, 2006; Г.Р. Реджепова и соавт., 2006; Т.И. Глотова, 2006; Ю.Н. Зайцев, 2007; Deregt et al., 1995; A.L.E. Linberg, 2003). Среди вирусных агентов особая роль в возникновении острых респираторных болезней телят отводится вирусам парагриппа_3 (ПГ_3), инфекционного ринотрахеита (ИРТ) и вирусной диареи - болезни слизистых (ВД-БС), так как инфицированные ими животные становятся восприимчивыми к развитию бактериальной микрофлоры наряду с грибами и простейшими (Н.Н. Крюков и соавт., 1984; Е.В. Андреев, 1984; С.А. Жидков, 1996; И.А. Масимов, 2003; А.Г. Шахов и соавт., 2006; П.А. Красочко, 2009; Ю.Н. Масьянов и соавт., 2009; L.A. Babiuk et al., 1991; R.W. Fulton et al., 2004).

В системе мер борьбы с респираторными болезнями широкое применение получили вакцинопрофилактика и различные химиотерапевтические средства (О.Г. Новиков, 2002; Н.П. Тулева, Ю.В. Тулев, 2004; А.Г. Глотов и соавт., 2005; О.Г. Петрова и соавт., 2005; Е.В. Батищева, 2008).

Однако вакцинация коров-матерей и телят, проводимая на фоне пониженного иммунологического статуса животных, не всегда дает желаемый результат. Кроме того, эффективности формирования активного поствакцинального иммунитета у телят в ранний постнатальный период препятствуют колостральные антитела.

Применение антибактериальных средств сдерживается зачастую появлением к ним резистентных штаммов микроорганизмов (В.Ф. Ковалев и соавт., 1988; Г.К. Коромыслов, Ю.Н. Федоров, 1988; В.В. Субботин, М.А. Сидоров, 1966; С.М. Сулейманов и др., 1997; Д.М. Никулин, 2000; В.А. Мищенко с соавт., 2001; П.Н. Сисягин и соавт., 2005; А.Г. Шахов и соавт., 2006; Е.В. Батищева, 2008). Поэтому в настоящее время наиболее эффективным и оправданным способом повышения эффективности химиотерапевтических средств является изыскание комплексных антибактериальных препаратов, обладающих по сравнению с монопрепаратами широким спектром антимикробного действия и замедляющих развитие к ним резистентности у микроорганизмов (В.Д. Соколов, 1990; И.М. Карпуть с соавт., 1994; В.А. Антипов, 1995; Г.Р. Реджепова с соавт., 2003; С.В. Втюрин, 2006).

Актуальной остается и проблема поиска новых, высокоэффективных средств и способов повышения антигенной активности вакцинных препаратов, позволяющих увеличить продолжительность и напряженность поствакцинального иммунитета у телят. С этой целью применяются различные иммуностимуляторы, однако они имеют ограниченное применение из-за недостаточной изученности механизма действия некоторых из них и отсутствия научно обоснованных рекомендаций по их применению.

Всё вышеизложенное и послужило основанием для проведения исследований по разработке средств и способов повышения лечебно-профилактической защиты телят при респираторных болезнях телят с применением иммуномодулирующих, антибактериальных и биологических препаратов.

Цель исследований: разработать новые средства и способы лечебно-профилактической защиты телят при острых респираторных болезнях с применением иммуномодулирующих, антибактериальных и биологических средств.

Основные задачи исследований:

Ш определить этиологию респираторных болезней телят;

Ш определить состояние иммунологического статуса у клинически здоровых и больных телят;

Ш разработать способы коррекции вторичных иммунодефицитов с применением различных биологических препаратов и фармакологических средств и дать им сравнительную оценку;

Ш разработать новые средства и способы повышения эффективности специфической профилактики вирусных респираторных болезней телят с применением различных вакцинных препаратов и средств, обладающих иммуномодулирующей активностью, и дать им сравнительную оценку;

Ш разработать новые средства и способы лечебно-профилактической защиты телят при вирусных респираторных болезнях с применением различных иммуномодулирующих, антибактериальных и биологических средств и дать им сравнительную оценку;

Ш разработать новые, экологически безопасные лекарственные средства на основе сырья растительного происхождения, обладающие иммуностимулирующей и лечебно-профилактической активностью и доступные для широкого применения в ветеринарной практике;

Ш разработать новые способы профилактики респираторных болезней телят с применением аэрозолей лекарственных средств, полученных из сырья растительного происхождения;

Ш разработать и утвердить соответствующую научную и нормативно-техническую документацию на средства и способы лечебно-профилактической защиты телят при вирусных респираторных болезнях.

Научная новизна. Разработаны новые способы коррекции иммунодефицитных состояний у телят с применением зоолана, гликопина, кватерина и его производных - квациклина и изокватерина. Разработаны новые фитопрепараты - фитасол, фитастим, фитадез, обладающие иммуномодулирующей и лечебно-профилактической активностью при респираторных болезнях телят. Разработаны способы повышения напряженности поствакцинального противовирусного иммунитета у телят и повышения их сохранности с применением средств, обладающих иммуномодулирующей активностью. Разработаны новые, эффективные средства и способы лечения и профилактики респираторных болезней телят, включающие применение иммуномодулирующих (зоолана, гликопина, кватерина), антибактериальных (сульфатетрина_М, биозина_М), биологических средств (вакцин, гипериммунной сыворотки, фитастима, фитасола, фитадеза). Разработаны новые, эффективные и экологически безопасные способы аэрозольпрофилактики респираторных болезней телят с применением средств, полученных из сырья растительного происхождения.

Новизна научных исследований подтверждена получением 13 патентов Российской Федерации на изобретения: «Способ профилактики острых респираторных болезней телят» №2150279 от 10.06.2000 г.; «Способ лечения респираторных болезней телят» №2150281 от 10.06.2000 г.; «Способ повышения резистентности у новорожденных телят» №2150289 от 10.06.2000 г.; «Лечебно-профилактическое средство для молодняка крупного рогатого скота» №2169558 от 27.06.2001 г.; «Лечебно-профилактическое средство для молодняка сельскохозяйственных животных и способ профилактики и лечения респираторных болезней телят с его применением» №2303992 от 10.08.2007 г.; «Биологически активный стимулятор и способ повышения общей неспецифической резистентности с его применением» №2305551 от 10.09.2007 г.; «Лечебно-профилактическое средство для молодняка сельскохозяйственных животных и способ профилактики и лечения респираторных болезней телят с его применением» №2311190 от 27.11.2007 г.; «Биологически активный стимулятор и способ коррекции вторичных иммунодефицитов у телят с его применением» №2311189 от 27.11.2007 г.; «Способ профилактики респираторных болезней телят» №2309762 от 10.11.2007 г.; «Биологически активный стимулятор и способ повышения неспецифической резистентности с его применением» №2317091 от 20.02.2008 г.; «Биологически активный стимулятор и способ коррекции вторичных иммунодефицитов с его применением» №2318530 от 10.03.2008 г.; «Лекарственное средство для профилактики респираторных болезней телят и способ аэрозольпрофилактики с его применением» №2328299 от 10.07.2008 г.; «Способ лечения респираторных болезней телят» №2364407 от 20.08.2009 г.

Практическая значимость. Определены этиология респираторных болезней и состояние иммунологического статуса у клинически здоровых и больных телят. Отработаны доза, кратность и продолжительность применения иммуномодулирующих средств зоолана, гликопина, кватерина и его производных для повышения резистентности и иммунологической реактивности у телят при вторичном иммунодефиците и дана им сравнительная оценка. Отработаны доза и кратность применения иммуномодулирующих средств для повышения эффективности специфической профилактики вирусных респираторных болезней. В производственных условиях показана их выраженная иммуномодулирующая активность и относительно высокая лечебно-профилактическая эффективность в комплексе с антибактериальными и биологическими средствами при респираторных болезнях телят. Определена иммуномодулирующая и лечебно-профилактическая эффективность новых фитопрепаратов - фитасола, фитастима и фитадеза и отработаны режимы их применения при респираторных болезнях телят. Разработаны и в установленном порядке утверждены научная и нормативно-техническая документация по изготовлению, контролю качества и применению сульфатетрина_М, биозина_М в ветеринарной практике, зоолана, фитасола, фитастима, фитадеза в порядке широкого производственного испытания. Материалы исследований вошли: в «Научно обоснованную систему эпизоотологического надзора профилактических и лечебно-реабилитационных мероприятий при болезнях телят в раннем постнатальном периоде», одобренную Департаментом ветеринарии Министерства сельского хозяйства и продовольствия Российской Федерации 27.01.2000 г.; в «Методические рекомендации по коррекции системных иммунодефицитов для профилактики и терапии массовых желудочно-кишечных и респираторных болезней телят», одобренные секцией ветеринарной медицины Северо-Восточного научно-методического центра Россельхозакадемии в 2005 г.; в рекомендации «Технология лечебно-профилактической защиты от массовых желудочно-кишечных и респираторных болезней телят», одобренные НТС МСХ и производственных ресурсов Нижегородской области в 2009 г. и другую научно-техническую документацию.

Федеральным агентством по науке и инновациям Российской Федерации в 2008-2009 гг. проведена процедура учета и государственной регистрации разработанных средств и способов, на основании которой выдано 11 регистрационных свидетельств на объекты учета научно-технической деятельности с правом Российской Федерации на безвозмездное их использование для федеральных государственных нужд.

На защиту выносятся следующие основные положения:

Ш респираторные болезни телят имеют сложную этиологическую структуру и протекают на фоне иммунодефицитного состояния, усугубляющегося в процессе развития болезни;

Ш разработанные средства и способы коррекции вторичных иммунодефицитов с применением зоолана и гликопина, кватерина и его производных, фитопрепаратов оказывают выраженное нормализующее воздействие на исходно сниженные показатели клеточного и гуморального иммунитета у телят;

Ш разработанные способы повышения эффективности специфической профилактики с применением иммуномодулирующих средств способствуют усилению формирования противовирусного поствакцинального иммунитета у телят и повышают их сохранность;

Ш разработанные средства и способы лечебно-профилактической защиты телят при респираторных болезнях с применением иммуномодулирующих, антибактериальных и биологических средств являются доступными и эффективными;

Ш разработанные новые средства растительного происхождения - фитасол, фитастим и фитадез обладают экологической чистотой, безвредностью, иммуномодулирующей и лечебно-профилактической эффективностью при респираторных болезнях телят.

Пути реализации. Результаты исследований могут быть использованы при разработке научно обоснованных систем по диагностике и мерам борьбы с респираторными болезнями телят в различных регионах России, а также в организации учебно-педагогического процесса при подготовке ветеринарных специалистов.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены на ученых советах НИВИ НЗ РФ (2000-2010 гг.), научно-производственных конференциях НИВИ НЗ РФ (2001, 2002, 2004, 2006, 2008 гг.), заседаниях методической комиссии и межкафедральном совещании профессорско-преподавательского состава ФГОУ ВПО «НГСХА» (2001-2002; 2008-2010 гг.), заседаниях экспертной комиссии и секции ветеринарной медицины Северо-Восточного научно-методического центра Россельхозакадемии (2001, 2006, 2008 гг.), Международной научно-практической конференции в г. Дубровицы, 2003 г., научно-практической конференции в г. Костроме, 2005 г., Международной научно-производственной конференции, посвященной 80_летию Самарской НИВС, 2009 г., Всероссийской научно-практической конференции в г. Новочеркасске, 2009 г.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 49 работ, в том числе 13 в рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК РФ: Ветеринарная патология - 4, Ветеринарная практика - 3, Ветеринарный врач - 2, Ветеринарный консультант - 1, Российский ветеринарный журнал - 1, Вестник РАСХН - 1, Ветеринария и кормление - 1, и 13 изобретений, защищенных патентами Российской Федерации, опубликованных в специальных бюллетенях.

Внедрение. Результаты научных исследований под авторским надзором и с положительным эффектом внедрены в 2005-2009 гг. в хозяйствах Нижегородской области, в учебном процессе ФГОУ ВПО НГСХА при подготовке ветеринарных специалистов.

Федеральным агентством по науке и инновациям зарегистрированы права Российской Федерации на использование в народном хозяйстве следующих объектов научно-технической деятельности, которые составляют основу материалов докторской диссертации:

>№15070.3666026906.06.8.001.2/007. Способ профилактики респираторных болезней телят.

>№15070.3666026906.06.8.001.2/008. Препарат для профилактики респираторных болезней телят.

>№15070.3666026906.06.8.001.2/009. Лечебно-профилактическое средство для молодняка сельскохозяйственных животных и способ профилактики и лечения респираторных болезней телят с его применением.

>№15070.3666026906.06.8.001.2/010. Лечебно-профилактическое средство для молодняка сельскохозяйственных животных и способ профилактики и лечения желудочно-кишечных болезней телят с его применением.

>№15070.3666026906.06.8.001.2/013. Лечебно-профилактическое средство для молодняка сельскохозяйственных животных и способ профилактики и лечения вирусных респираторных болезней телят с его применением.

>№15070.3666026906.06.8.001.2/014. Лекарственное средство для профилактики респираторных болезней телят и способ аэрозольпрофилактики с его применением.

>№15070.3666026906.06.8.001.2/015. Биологически активный стимулятор и способ коррекции вторичных иммунодефицитов у телят с его применением.

>№15070.3666026906.06.8.001.2/016. Биологически активный стимулятор и способ повышения неспецифической резистентности с его применением.

>№15070.3666026906.06.8.001.2/017. Биологически активный стимулятор и способ коррекции вторичных иммунодефицитов у телят с его применением.

>№15070.3666026906.06.8.001.2/018. Лечебно-профилактическое средство для молодняка сельскохозяйственных животных и способ профилактики и лечения вирусных желудочно-кишечных болезней телят с его применением.

>№15070.3666026906.06.8.001.2/020. Способ профилактики респираторных болезней телят с применением аэрозоля фитастима.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 317 стр. компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследований, собственных исследований, заключения, выводов, практических предложений, списка литературы и приложения. Материалы диссертации иллюстрированы 35 таблицами и 31 рисунком. Список литературы включает 462 источника, в том числе 161 иностранных авторов. В приложении диссертации представлены документы, подтверждающие результаты отдельных этапов работы, их научную и практическую ценность.

Собственные исследования

Материалы и методы

Настоящая работа выполнена в 1999-2010 гг. в рамках федеральной программы фундаментальных и приоритетных прикладных исследований по научному обеспечению развития АПК Российской Федерации (№ госрегистрации 01.200.1 13882 и 01.2.006.07186) на базе лаборатории физиологии и патологии размножения и болезней молодняка крупного рогатого скота Государственного научного учреждения - Научно-исследовательского ветеринарного института Нечерноземной зоны РФ Российской академии сельскохозяйственных наук, кафедры эпизоотологии и инфекционных болезней ФГОУ ВПО «Нижегородская государственная сельскохозяйственная академия», ОАО «Каменское», СПК «Нижегородец», колхоза «Искра» и племсовхоза «Богородский», племхозяйства «Пушкинское», СЗАО «Березниковское» и СФГУП «Румянцевское» Нижегородской области.

Исследования по разработке способов повышения естественной резистентности и иммунологической реактивности у телят, новых способов профилактики и лечения респираторных болезней телят с применением зоолана и гликопина проводили в содружестве с ООО «Исследовательский центр Комкон» (г. Санкт-Петербург), Всероссийским научно-исследовательским институтом экспериментальной ветеринарии (г. Москва). Участие соисполнителей от данных и других учреждений отражено в списке опубликованных научных работ.

В проведении ряда исследований принимали также участие сотрудники института: Г.Р. Реджепова, П.Н. Сисягин, И.В. Убитина, Г.В. Зоткин, З.Я. Косорлукова, Ю.Б. Юлдашов, В.В. Сочнев, В.С. Втюрин, которым автор выражает искреннюю признательность и благодарность за оказанную помощь в работе.

В работе использован комплексный эпизоотологический подход, включающий методы эпизоотологического обследования, эпизоотологической статистики, бактериологический, вирусологический, серологический, иммунологический и экспериментальные исследования.

Под клиническим наблюдением и в исследованиях использованы клинически здоровые и больные телята в возрасте от 1 до 180 дней, количество которых отражено в соответствующих разделах.

В опытах использовали следующие препараты:

– зоолан (биолан ветеринарный) - аминокислотно-пептидный комплекс, включающий пептид дельта-сна (триптофанил-аланил-глицил-аспартил-аланил-серил-глицил-глютаминовая кислота), и глицин (аминоуксусная кислота), разработанный в ООО «Исследовательский центр Комкон» (г. Санкт-Петербург);

– гликопин - синтетический препарат природного происхождения, действующим началом которого является N_ацетилглюкозаминил - N_ацетилмуромилаланил-Д-изоглутамин (ГМДП);

– кватерин_3 (2,2,2 триметилгидразиний) пропионат и его производные: квациклин (1,1 - диметил3_оксопиразолидин - 1_ий_4_ил-ацетат), изокватерин (2 - триметиламмоний этилкарбамат). Препараты синтезированы в институте органического синтеза Латвийской АН;

– живая лиофилизированная вакцина против парагриппа_3 и инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота - «Бивак» и поливалентная сухая ассоциированная вакцина против вирусов инфекционного ри-нотрахеита, вирусной диареи - болезни слизистых и парагриппа_3 крупного рогатого скота - «Тривак»;

– эмульсионная инактивированная вакцина против парагриппа_3, инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи крупного рогатого скота;

– комплексные антибактериальные препараты сульфатетрин_М, биозин_М и препараты растительного происхождения - фитастим, фитасол и фитадез, сконструированные в НИВИ НЗ РФ в ходе выполнения настоящей работы. Составы и способы их применения изложены в соответствующих разделах.

При изучении этиологии респираторных болезней за животными вели клинические наблюдения, проводили патологоанатомические вскрытия павших и вынужденно убитых телят. Бактериологические исследования патологического материала проводили в НИВИ НЗ РФ и Нижегородской областной ветеринарной лаборатории в соответствии с Методическими указаниями по бактериологической диагностике колибактериоза животных (1991). Выявление антител в сыворотке крови телят 1-3_месячного возраста осуществляли в реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) с использованием соответствующих диагностических наборов.

Исследование параметров микроклимата проводили в помещениях, где содержались телята в возрасте 20-120 дней и 120-180 дней. Измерение температуры воздуха осуществляли с помощью спиртового термометра, относительной влажности воздуха - психрометром, скорость движения воздуха - шаровым кататермометром, количество аммиака - универсальным газоанализатором УГ_2, общую бактериальную обсемененность воздуха - методом осаждения на чашки Петри с мясопептонным агаром. Анализ питательной ценности рационов, используемых для кормления молодняка крупного рогатого скота, проводили по данным зоотехнической отчетности.

Оценку иммунологического статуса животных проводили по показателям абсолютного количества лейкоцитов, относительного содержания лимфоцитов и их основных популяций (Т- и В-лимфоциты), функциональной активности нейтрофилов, общего белка, иммуноглобулинов G- и М-классов, бактерицидной, лизоцимной и бетализинной активности сыворотки крови.

Выделение лимфоцитов из крови животных для определения количества Т- и В-лимфоцитов проводили по методу Н.И. Блинова (1985). Определение общего белка в сыворотке крови осуществляли рефрактометрическим методом. Количественное определение уровня иммуноглобулинов отдельных изотипов проводили методом радиальной иммунодиффузии по G. Manchini et al. (1965) с использованием моноспецифических антисывороток и моноклональных антител к отдельным изотипам иммуноглобулинов крупного рогатого скота, полученных в лаборатории иммунологии и биотехнологии ВИЭВ, а также экспресс-методом с использованием сульфитно-натриевого теста. Динамику уровня гемоглобина в крови изучали по Сали; форменных элементов крови - пробирочным методом в камере Горяева, лейкоцитарной формулы - путем подсчета 200 лейкоцитов разных видов, окрашенных по Романовскому-Гимза с вычислением процентного содержания каждого вида.

Определение функциональной активности нейтрофилов крови проводили в реакции восстановления нитросинего тетразолия (А.Н. Маянский и др., 1979). Бактерицидную активность сыворотки крови определяли по методу О.В. Смирновой и Т.А. Кузьминой (1966), лизоцимную активность сыворотки крови - по методу В.Г. Дорофейчук (1968), бетализинную активность сыворотки крови - по методу О.В. Бухарина и др. (1970). Об эффективности разработанных способов лечения и профилактики судили по количеству заболевших и павших животных, продолжительности течения и наличию рецидивов болезни, по показателям иммунобиологического статуса опытной и контрольной групп телят.

Статистическую обработку результатов исследований проводили по Н.А. Плохинскому (1979) и Хитоси-Кумэ (1990).

С целью удобства восприятия полученных результатов отдельные материалы и методы исследований изложены в соответствующих разделах результатов собственных исследований.

Результаты исследований

Этиология респираторных болезней телят

Уровень кормления и условия содержания коров-матерей и телят

Исследования по изучению этиологии респираторных болезней телят выполнены в СЗАО «Березниковское», СФГУП «Румянцевское», ПХ «Пушкинское», СПК «Нижегородец», колхозе «Искра» и племсовхозе «Богородский» Нижегородской области.

С этой целью провели комплекс эпизоотологических обследований с применением статистических, клинических, патологоанатомических, бактериологических, вирусологических, биохимических и иммунологических методов. В круг изучаемых вопросов входили экономические и производственные показатели хозяйств, общее санитарное и эпизоотическое состояние, поголовье скота, продуктивность, показатели воспроизводства стада, организация кормления и содержания, подготовка коров и нетелей к отелам, организации и проведению родов, выращиванию телят в секционных профилакториях, своевременной выпойке молозива.

Избранные для проведения исследований хозяйства являются типичными для лесостепной зоны Российской Федерации, они характеризуются высокой заболеваемостью новорожденных телят, сопровождающейся высокой летальностью. Это и послужило основанием для выбора их в качестве базовых хозяйств с целью изучения этиологии респираторных болезней телят и разработки новых способов лечения и профилактики.

Исследованиями, проведенными в базовых хозяйствах, установлено, что более высокий выход телят был в СФГУП «Румянцевское», колхозе «Искра», племсовхозе «Богородский», который составлял 89,0-96,0%. Заболеваемость телят во всех хозяйствах респираторными болезнями была относительно высокой и составила 68,6-86,6%.

Анализ факторов, способствующих возникновению заболеваний, показал, что мощность родильных отделений и телятников-профилакториев не соответствует действующим нормативам. Выявлены серьезные нарушения в организации проведения отелов коров и выращивания телят в профилакто-риях в первые дни жизни: на фермах и в комплексах не оборудовано достаточного количества родовых секций (боксов), отсутствуют послеродовые секции, не соблюдаются санитарные разрывы во время работы родильного отделения и сроки заполнения секций телятника-профилактория, не соблюдаются также сроки содержания телят в профилакториях и время выпойки им первой порции молозива. Все это свидетельствует о перегрузке по площади и времени в работе родильных отделений и профилакториев и, как следствие, их низком санитарном состоянии.

Анализ уровня кормления сухостойных коров (по данным лабораторных исследований) показал, что большинство кормов являются недоброкачественными. Так, в силосе наличие масляной кислоты превышало в 1,2-2,6 раза допустимую норму. Сено было тоже низкого качества, буровато-зеленого цвета, иногда с затхлым запахом и содержанием пыли, по ботаническому составу неоднородно: злаковое, бобовое, из разнотравья естественных сенокосов. Рационы сухостойных коров по питательности не отвечают существующим требованиям, так как они не сбалансированы по переваримому протеину, углеводам, каротину, фосфору и кальцию, поэтому у большинства исследованных коров во всех базовых хозяйствах, по данным лабораторных исследований крови, отмечены нарушения белкового, углеводного, минерального и, в большей степени, витаминного (по каротину) обменов.

Выявлены нарушения технологии содержания сухостойных коров. В зимний период они не пользуются активным моционом, а в выгульные дворы выпускают нерегулярно. У 30-35% коров отмечен укороченный сухостойный период, составляющий 30-45 дней.

При изучении параметров микроклимата установили, что в помещениях для содержания животных параметры микроклимата имели существенные отклонения от зоогигиенических норм: отмечалось превышение относительной влажности воздуха, содержание окиси углерода, микробной загрязненности помещений, которая была обусловлена не только высокой концентрацией животных в помещениях, но и несовершенством приточно-вытяжной вентиляции.

Микробная загрязненность воздуха в родильном отделении превышала предельно допустимую норму в 2,0-2,3 раза, телятниках-профилакториях - в 3,2-3,6 раза. По данным ветеринарной отчетности, хозяйства длительное время являются неблагополучными по острым респираторным болезням телят.

На основании полученных результатов исследований можно заключить, что возникновению респираторных болезней телят в базовых хозяйствах способствовали такие факторы, как несбалансированность рационов коров-матерей по основным питательным веществам, отсутствие прогулок и инсоляций животных, нарушение санитарно-гигиенического режима при подготовке, проведении родов и выращивании молодняка, нарушение сроков выпойки молозива новорожденным телятам и режима их кормления в последующие дни, резкие колебания температуры воздуха в родильных отделениях, телятниках-профилакториях и помещениях для молодняка крупного рогатого скота, пониженный воздухообмен, сквозняки, повышенная влажность, загазованность и высокая микробная загрязненность воздуха в помещениях. Неполноценное кормление сухостойных коров и нарушение условий их содержания сопровождалось нарушением обмена веществ и снижением резистентности организма как у беременных животных, так и у их приплода.

Роль микроорганизмов в возникновении респираторных болезней телят

С целью изучения роли бактериальной микрофлоры в этиологии респираторных болезней телят в трех хозяйствах Нижегородской области провели исследования 84 проб носовой слизи и 126 проб патологического материала (кусочки носовых раковин, трахеи, легких, средостенных лимфатических узлов и селезенки) от 68 больных, павших и вынужденно убитых животных.

При проведении бактериологических исследований из носовой слизи больных и органов павших и вынужденно убитых телят выделены 181 культура микроорганизмов. По морфологическим и тинкториальным свойствам 54 (29,8%) из них идентифицированы как St. aureus, 41 (22,7%) - Str. pneumoniae, 32 (17,7%) - E. Coli, 42 (23,2%) - Proteus vulgaris и 12 (6,6%) - P. haemolytica.

Все выделенные культуры микроорганизмов были патогенны для белых мышей. Наиболее высокая патогенность была отмечена у смешанных культур микроорганизмов. Большинство подопытных мышей погибали через 6-12 часов после заражения. Это указывает на усиление патогенных свойств микроорганизмов в ассоциации.

При серологическом обследовании 2368 животных в возрасте 20-30 дней из данных хозяйств выявили антитела к вирусам ИРТ, ПГ_3 и ВД-БС крупного рогатого скота в 35,8% случаев, к вирусу ПГ_3 и ИРТ одновременно в 50,7% случаев. В ряде случаев вирусные респираторные болезни протекали как моноинфекции.

Наибольшая выявляемость антител к вирусам отмечалась в обследованных хозяйствах ОАО «Каменское», СЗАО «Березниковское», СФГУП «Румянцевское», колхозе «Искра». Среди животных племхозяйств «Пушкинское» и «Богородский» серопозитивность была наименьшей и составляла к вирусу ИРТ соответственно 12,5-20,6%; ВД-БС - 16,7-19,4%; ПГ_3 - 8,4-16,6%.

Исследования парных сывороток крови показали, что титр вируснейтрализующих антител у 20 переболевших телят увеличивался к вирусу ПГ_3 в 4,6 раза, ИРТ - в 5,4 и ВД-БС - в 4,1 раза, что свидетельствует о ведущей роли данных вирусов в возникновении болезни.

Иммунологический статус у клинически здоровых и больных телят

С целью изучения данного вопроса были сформированы 2 группы телят: 1_я группа опытная - клинически здоровые телята (10 голов), 2_я группа опытная - телята с выраженными признаками острых респираторных заболеваний (10 голов).

Установлено, что у больных респираторной патологией телят наблюдается угнетение иммунного статуса, сопровождающееся снижением абсолютного содержания лимфоцитов на 17%, относительного и абсолютного содержания Т-лимфоцитов на 43 и 50%, В-лимфоцитов на 37 и 33% соответственно, угнетением функциональной активности нейтрофилов крови в спонтанном и индуцированном тестах соответственно на 19 и 52% в сравнении с клинически здоровыми телятами. Полученные результаты исследований свидетельствуют, что как у клинически здоровых, так и в большей степени у больных респираторными болезнями телят имеется выраженное иммунодефицитное состояние, которое оказывает определяющее влияние на возникновение и развитие болезни. В связи с этим в совершенствовании мер борьбы с указанными болезнями важное значение приобретает разработка высокоэффективных и доступных для применения в ветеринарной практике средств и способов иммунокоррекции.

Разработка новых средств и способов коррекции вторичных иммунодефицитов с применением различных биологических препаратов и фармакологических средств и их сравнительная оценка

Иммуномодулирующая активность зоолана и гликопина

С целью определения иммуномодулирующей активности зоолана по результатам исследований крови по принципу аналогов сформированы две группы клинически здоровых новорожденных (суточных) телят с выраженным приобретенным иммунодефицитом: опытная - 14 и контрольная - 16 животных.

Влияние зоолана на иммунобиологические показатели животных изучали после введения его телятам опытной группы внутримышечно в виде 0,3%-ного раствора в дозе 1,6 мл трехкратно с интервалом 5 дней. Контрольной группе животных зоолан не применяли. Исследование крови животных (по 5 голов из каждой группы) проводили в динамике: до введения зоолана, перед каждым последующим введением и через 5 дней после последнего применения препарата.

Результаты исследований показали, что применение зоолана способствовало достоверному увеличению относительного содержания лимфоцитов, Т- и В-лимфоцитов, IgG и IgM, повышению функциональной активности нейтрофилов, бактерицидной, лизоцимной и бетализинной активности. Особенно выраженное влияние препарат оказал на показатели В-лимфоцитов. Так, содержание их в крови опытной группы телят к концу опыта составило 9,2 ± 0,8% по сравнению с 4,1 ± 0,4% в контроле, что соответствовало их физиологическому уровню для данного возрастного периода животных. Таким образом, содержание В-лимфоцитов у опытной группы телят увеличилось на 196,7% по сравнению с исходными показателями, или на 168,6% больше по сравнению с телятами контрольной группы.

Содержание Т-лимфоцитов у телят опытной группы в течение опыта существенно не отличалось от контрольной, и лишь к 6 дню жизни оно было наиболее высоким, и данные изменения были статистически достоверными. Содержание Т-лимфоцитов превосходило исходные показатели телят опытной группы на 19,0% и на 16,4% ? телят контрольной группы. Дальнейшие изменения данного показателя как у телят опытной, так и контрольной групп животных были незначительны, существенно не отличались и находились в пределах 22,2 ± 1,6 ? 22,4 ± 0,6%. Аналогичные изменения были отмечены и в содержании общего белка.

Наибольшее его увеличение в сыворотке крови телят опытной группы наблюдалось к 6 и 11 дням жизни животных, в то время как к 16 дню жизни животных его содержание значительно снизилось, выявленные различия по сравнению с исходными показателями телят обеих групп были статистически недостоверными. Динамика IgG и IgM в сыворотке крови опытной группы была наиболее характерной и изменения были статистически достоверными (Р<0,05). Наиболее выраженные изменения данных показателей в сторону их существенного увеличения были отмечены уже к 6 и к 11 дням жизни, в то время как у телят контрольной группы данные изменения были незначительны и недостоверны (Р>0,05). Увеличение содержания IgG и IgM к 6 дню составило 24,6 и 28,6%, к 11 дню - 19,2 и 28,6%. К 16 дню жизни концентрация иммуноглобулинов G и M незначительно снизилась, однако по сравнению с исходными показателями она была выше на 15,6 и 14,3% соответственно. Снижение уровня иммуноглобулинов в сыворотке крови телят опытной и контрольной групп к 16 дню жизни, по-видимому, следует объяснить тем, что к данному возрастному периоду происходит снижение уровня колострального иммунитета.

Показатели бактерицидной, лизоцимной и бетализинной активности сыворотки крови у опытных телят в течение всего периода исследований имели выраженную динамику к их стабильному увеличению. Особенно выраженное влияние зоолан оказал на лизоцимную и бетализинную активность, которые к концу опыта увеличились по сравнению с исходными показателями соответственно на 166,6 и 86,9%, в то время как бактерицидная активность возросла на 43,1%. У телят контрольной группы изменения этих показателей были менее значительны и их увеличение по сравнению с исходными соответственно составило 57,8; 20,9 и 6,3%. Выявленные различия в динамике бактерицидной и бетализинной активности у телят контрольной группы были статистически недостоверными (Р>0,05).

У телят опытной группы установлено повышение функциональной активности нейтрофилов (по реакции восстановления нитросинего тетразолия). Число активированных нейтрофилов (индуцированный тест) к концу опыта увеличилось до 14,9 ± 1,1%, что на 136,5% выше по сравнению с исходными показателями и на 100,1% ? по сравнению с животными контрольной группы. Изменения спонтанного теста у телят опытной группы также были статистически достоверны и его увеличение к 16_му дню жизни составило 79,5% по сравнению с 36,4% в контроле (Р>0,05).

Влияние гликопина на иммунологические показатели изучали на 20 телятах в возрасте 1-16 дней: 1 группа опытная - 9 животных и 1 контрольная - 11 животных. Опытной группе животных применяли 0,2% раствор гликопина трехкратно с интервалом 5 дней в дозе 2,0 мл подкожно. Контрольной группе животных гликопин не применяли.

Исследования показали, что у животных опытной группы относительное содержание лимфоцитов увеличилось по сравнению с исходными показателями на 49,4%, В-лимфоцитов - на 130,0%, IgG - на 14,9%, в то время как увеличение иммуноглобулинов у животных контрольной группы было недостоверным (Р>0,05).

Увеличение функциональной активности нейтрофилов у животных опытной группы по сравнению с контролем по спонтанному тесту составило 42,9%, индуцированному - 81,6%, бактерицидной активности - 28,2%, лизоцимной активности - 99,4%, бетализинной активности сыворотки крови - 44,3%. Повышение спонтанного НСТ-теста при применении зоолана и гликопина свидетельствует о том, что в организме активизируются энергетические процессы, обеспечивающие внутриклеточное переваривание, т.е. возрастает способность клетки к завершенному фагоцитозу. Повышение индуцированного НСТ-теста подтверждает резервную функцию фагоцитоза и позволяет судить о повышении функциональной активности нейтрофилов.

Таким образом, результаты исследований дают основание заключить, что зоолан и гликопин обладают выраженными иммуномодулирующими свойствами при вторичных иммунодефицитных состояниях у телят. Применение их нормализует соотношение Т- и В-лимфоцитов, повышает функциональную активность нейтрофилов и общую неспецифическую резистентность организма (бактерицидную, лизоцимную, бетализинную активность сыворотки крови), что дает основание рекомендовать их для применения в качестве средств, повышающих эффективность традиционных способов профилактики и лечения респираторных болезней телят.

Сравнительный анализ полученных результатов исследований показал, что в условиях данных опытов из испытанных средств более выраженной иммуномодулирующей активностью обладал зоолан.

Иммуномодулирующая активность кватерина и его производных - квациклина и изокватерина

Исследования проводили на пяти группах клинически здоровых новорожденных телят с выраженным приобретенным иммунодефицитом: 4 опытные группы по 10 голов в каждой и контрольная - 14 животных.

В качестве иммуномодулирующих средств были испытаны широко известные в ветеринарии и медицине препараты: кватерин, квациклин и изокватерин.

Кватерин_3 (2,2,2 триметилгидразиний) пропионат синтезирован в институте органического синтеза Латвийской АН и является структурным аналогом г-бутиробетаина. Препараты 1,1 - диметил3_оксопиразолидин - 1_ий_4_ил-ацетат (квациклин) и 2_триметиламмоний этилкарбамат (изокватерин) являются производными кватерина. Изучение иммуномодулирующей активности данных препаратов проведено в сравнении с зооланом, который по результатам предыдущих исследований обладал наиболее выраженной иммуномодулирующей активностью.

Влияние кватерина как иммуномодулирующего средства на иммунологические показатели изучали путем введения его телятам опытной группы внутримышечно в виде 40% раствора в дозе 4 мл два раза в сутки в течение 5 дней. Квациклин и изокватерин в виде 2% раствора вводили в дозе 4 мл внутримышечно трехкратно с интервалом 5 дней. Зоолан в виде 0,3% раствора вводили внутримышечно в дозе 1,6 мл трехкратно с интервалом 5 дней. Контрольной группе животных иммуномодулирующие средства не применяли.

Животным первой опытной группы применяли кватерин, второй - квациклин, третьей - изокватерин и четвертой - зоолан.

Исследования крови подопытных животных (по 5 проб из каждой группы) проводили в динамике: при применении кватерина - до введения препарата и через 5 дней после последнего его приема. При применении всех остальных - до введения препаратов, через 10 дней после первого введения препарата и через 5 дней после последнего их применения.

Установили, что применение кватерина и квациклина оказывало нормализующее воздействие на исходно сниженные показатели клеточного и гуморального иммунитета животных. Особенно выраженное стимулирующее действие препараты оказывали на показатели В-лимфоцитов. Так, уже к 11 дню жизни после применения кватерина количество В-лимфоцитов возросло на 152,7%, а квациклина - на 112,9% по сравнению с контролем и достигло уровня физиологических величин для данного возраста животных. В то же время не было установлено существенных различий в относительном количестве Т-лимфоцитов у телят опытных и контрольных групп.

При применении препаратов в сыворотке крови у телят обеих опытных групп наблюдалось достоверное увеличение общего белка к 11 и 16 дням жизни по сравнению с контрольной группой животных. Концентрация JgG и JgM в сыворотке крови телят в опытных и контрольной группах к 11 дню жизни существенно не изменилась, однако к 16 дню жизни у телят второй опытной и контрольной групп она заметно снизилась, но в то же время у опытной группы эти показатели были достоверно значительно выше по сравнению с контролем.

Выраженные различия наблюдались и в числе активированных нейтрофилов (индуцированный тест), этот показатель у телят опытных групп к 11 дню жизни соответственно составил 14,9 ± 2,0% и 11,4 ± 0,4%, в то время как у телят контрольной группы он составил 8,4 ± 2,1%.

Установлено, что изокватерин и зоолан обладают выраженными иммуномодулирующими свойствами при приобретенном иммунодефиците у телят. Наиболее выраженное действие отмечено у зоолана, применение которого способствовало достоверному увеличению относительного содержания лимфоцитов, Т- и В-лимфоцитов, иммуноглобулинов G и М, повышению функциональной активности нейтрофилов, бактерицидной, лизоцимной и бетализинной активности. Особенно выраженное влияние зоолан оказал на показатели В-лимфоцитов.

Так, содержание их в крови опытной группы телят к концу опыта составило 9,6 ± 0,8% по сравнению с 4,1 ± 0,2% в контроле, что соответствовало их физиологическому уровню для данного возрастного периода животных.

Содержание Т-лимфоцитов у телят опытных групп в течение опыта существенно не отличалось от контрольной, и лишь к 11 дню они были наиболее высокими и статистически достоверными. Дальнейшие изменения данного показателя как у телят опытных, так и контрольной групп животных были незначительны, существенно не отличались и находились в пределах 24,6 ± 0,4% - 25,0 ± 1,2%. Аналогичные изменения были отмечены и в содержании общего белка. Наибольшее его увеличение в сыворотке крови телят опытных и контрольной групп телят наблюдалось к 11 дню жизни, в то время как к 16 дню жизни животных его содержание заметно снизилось. Динамика иммуноглобулинов G в сыворотке крови при применении зоолана была наиболее характерна и статистически достоверной, в то время как при применении изокватерина, а также у телят контрольной группы данные изменения были незначительными. Увеличение содержания иммуноглобулинов G и М у телят опытных групп к 11 дню составило 18,5 и 28,5%. К 16 дню жизни концентрация их незначительно снизилась, однако по сравнению с исходными показателями она была выше на 15,5 и 14,2% соответственно. Снижение уровня иммуноглобулинов в сыворотке крови телят опытных и контрольной групп к 16 дню жизни, по-видимому, следует объяснить тем, что к данному возрастному периоду происходит снижение уровня колострального иммунитета.

Показатели бактерицидной, лизоцимной и бетализинной активности сыворотки крови у опытных групп телят в течение всего периода имели выраженную динамику к их стабильному увеличению, в то же время выявленные различия в динамике бактерицидной и бетализинной активности у телят контрольной группы были статистически недостоверными. Число активированных нейтрофилов (индуцированный тест) у телят 3_й опытной группы (при применении изокватерина) увеличилось в 2,4 раза, 4_й опытной группы (при применении зоолана) - в 3,4 раза.

Результаты исследований позволяют сделать вывод, что все испытанные препараты: кватерин, квациклин, изокватерин и зоолан - обладают выраженными иммуномодулирующими свойствами при вторичных иммунодефицитных состояниях у телят. Применение указанных средств нормализует соотношение Т- и В-лимфоцитов, повышает функциональную активность нейтрофилов и общую неспецифическую резистентность организма (бактерицидную, лизоцимную и бетализинную активность сыворотки крови). Наиболее выраженные иммуномодулирующие свойства выявлены при применении зоолана и кватерина. Полученные результаты исследований дают основание рекомендовать данные препараты в качестве средств, повышающих эффективность традиционных способов профилактики желудочно-кишечных и респираторных болезней телят.

Разработка новых способов повышения эффективности специфической профилактики вирусных респираторных болезней телят с применением вакцинных препаратов и средств, обладающих иммуномодулирующей активностью, и их сравнительная оценка

Влияние зоолана и гликопина на иммунный ответ при вакцинации телят против инфекционного ринотрахеита и парагриппа_3

С целью изучения влияния зоолана и гликопина на повышение напряженности противовирусного поствакцинального иммунитета сформированы две опытные группы (50 и 48 голов) и одна контрольная (45 голов) телят. Животных всех групп иммунизировали живой лиофилизированной вакциной «Бивак» в соответствии с наставлением по ее применению.

Животным первой опытной группы для усиления потенцирующего действия вакцины дополнительно применяли зоолан внутримышечно в виде 0,3% раствора в дозе 2 мл на голову трехкратно: первый раз за 12-18 часов до применения вакцины, а далее с интервалом 24 часа. Через 21 день после первой вакцинации проводили ревакцинацию животных с применением зоолана в тех же режимах. Животным второй опытной группы в качестве иммуномодулирующего средства применяли гликопин в том же режиме, что и зоолан, в виде 0,2% раствора в дозе 2 мл. Взятие крови у животных для исследований проводили перед вакцинацией, через 20 дней (перед ревакцинацией) и спустя 20 дней после ревакцинации по 12 проб от каждой группы.

Результаты исследований показали, что применение зоолана одновременно с вакциной «Бивак» через 20 дней после ревакцинации способствовало увеличению титров антител к вирусам ПГ_3 и инфекционного ринотрахеита на 133 и 77% соответственно в сравнении с контролем, показателей Т- и В-лимфоцитов - на 67 и 15% соответственно, функциональной активности нейтрофилов крови в спонтанном НСТ-тесте - на 73 и индуцированном - на 31%, JgG - на 44, JgM - на 68%, лизоцимной активности сыворотки крови - на 39 и бактерицидной активности - на 20%.

Аналогичное влияние на иммунологические показатели и факторы естественной резистентности телят отмечено и при совместном применении вакцины «Бивак» с иммуномодулятором гликопином.

Так, через 20 дней после ревакцинации телят титр антител к вирусам ПГ_3 и инфекционного ринотрахеита увеличился на 158 и 112% соответственно в сравнении с контролем, количество Т- и В-лимфоцитов - на 60 и 31%, функциональная активность нейтрофилов в спонтанном НСТ-тесте возросла на 70 и индуцированном - на 29%. Уровень иммуноглобулинов G и M соответственно увеличился на 37 и 36%, лизоцимная активность сыворотки крови - на 46, бактерицидная активность сыворотки крови - на 25%.

Профилактическая эффективность совместного применения вакцины «Бивак» с зооланом составила 96%, с гликопином - 97,9% по сравнению с 86,7% в контроле. Сохранность телят в опытных группах была на 8,8% выше в сравнении с контролем.

Полученные результаты исследований позволяют заключить, что применение зоолана и гликопина способствует повышению противовирусного поствакцинального иммунитета у телят и профилактической эффективности на 9,3-11,2%, что дает основание рекомендовать их в качестве средств, повышающих эффективность специфической профилактики при инфекционном ринотрахеите и парагриппе_3 и увеличение их сохранности.

Влияние кватерина и его производных - квациклина и изокватерина на иммунный ответ при вакцинации телят против инфекционного ринотрахеита и парагриппа_3 и их сравнительная оценка

Эффективность вакцинопрофилактики в комплексе с иммуно-модулирующими средствами определяли на 1972 клинически здоровых телятах 30_дневного возраста. Исследования проводили на пяти группах животных (четыре опытные и одна контрольная). Телятам всех опытных групп вводили в носовую полость вакцину «Бивак» в объеме 2 мл, по 1 мл в каждую ноздрю, на глубину 5-7 см. Дополнительно животным первой опытной группы внутримышечно вводили кватерин в виде 40% раствора в дозе 5 мл, второй - квациклин в виде 2% раствора внутримышечно в дозе 5 мл, третьей - изокватерин в виде 2% раствора внутримышечно в дозе 4 мл, четвертой - зоолан в виде 0,3% раствора внутримышечно в дозе 1,6 мл. Животным контрольной группы иммуномодулирующие средства не применяли. Через 21 день после первой вакцинации проводили ревакцинацию животных по той же схеме, что и первоначально.

Взятие крови у животных для серологического и иммунологического исследований проводили выборочно (по 12 голов из каждой группы) перед вакцинацией, через 21 день (перед ревакцинацией) и спустя 14 дней после ревакцинации.

Установлено, что применение иммуномодулирующих средств способствовало усилению формирования противовирусного поствакцинального иммунитета у телят на фоне применения вакцины «Бивак».