При определении химического состава мяса было установлено, что у обоих видов рыб (сазанов и белых толстолобиков) и при двух формах поражения снижалось содержание всех видов компонентов (белка, жира и золы) при повышении содержания влаги. Калорийность мышечной ткани у сазанов при доброкачественной форме снижалась на 12,7%, а при злокачественной - на 17,7%; у белых толстолобиков аналогичные показатели соответственно равнялись 14,6% и 20,2% в сравнении со здоровыми теми же видами рыб.

У рыб, пораженных цитробактериозом, выявлялись значительные различия количества аминокислот, в сравнении со здоровыми того же вида рыбами, и в первую очередь в содержании незаменимых аминокислот. У сазанов при злокачественной форме количество их снижалось на 9,9% и доброкачественной - 5,2%, а у белых толстолобиков соответственно на 9,4% и 4,3%. Особенно резко в мышечной ткани при злокачественной форме поражения у сазанов из числа незаменимых аминокислот снижалось содержание лизина, изолейцина и лейцина, а у белых толстолобиков при той же форме болезни количество метионина, изолейцина и фенилаланина, в сравнении со здоровыми рыбами. Помимо снижения количества незаменимых аминокислот в мышечной ткани больных рыб отмечалось и уменьшение заменимых аминокислот.

Цитробактерии, обнаруживаемые в различных видах пищевых продуктов представляют серьезную опасность для здоровья человека, вызывая у него, по материалам В.П. Рагинской (1973), С.А. Шевелева (2004) с соавторами, пищевые токсикоинфекции, поражение желче- и мочевыводящих путей, отиты, остеомиелиты и воспаление оболочек головного мозга. Между тем, рыба, пораженная цитробактериозом, до настоящего времени в необеззараженном виде продолжает поступать для пищевых целей. Следует отметить и то, что при неблагоприятных условиях хранения рыбной продукции в торговой сети при температуре +5^оС +6^оС по истечении 1 суток количество клеток С. freundii увеличивается на 1-2 порядка.

Были проведены эксперименты по выяснению устойчивости патогенных культур С. freundii при различных способах технологической обработки рыбных продуктов применяемых в рыбной промышленности. К этим способам относятся тепловая (варка, жарение, горячее и холодное копчение, стерилизация рыбных консервов), холодильная (замораживание, подмораживание и охлаждение) обработки, посол (слабый - 3-5% соли, средний - 10-12% соли, сильный - 16-17% соли) (табл.3).

Таблица 3

Сроки инактивации C. freundii в рыбных продуктах

Как видно из данных таблицы 3, при тепловой обработке рыбных продуктов использовали варку, консервирование, горячее и холодное копчение. При варке кусков рыбы массой 150-160 г и толщиной 3-4 см, при закладке в кипящую воду инактивация цитробактерий наступала через 20-25 минут и жарении кусков рыбы в 130 г толщиной 3-4 см - 20 минут. При горячем копчении мелкой рыбы массой 150-200 г, проводимом при температуре +100^оС цитробактерии, теряли свою жизнеспособность по истечении 1 часа, а при холодном, осуществляемом при +36^оС +38^оС - оставались жизнеспособными в течение 2 суток. В рыбных консервах они инактивировались по истечении установленного режима стерилизации при температуре +120^оС через 1 час. При холодильной обработке использовали охлаждение, подмораживание и замораживание, соответственно проводимые при температурах 0^оС -2^оС в течение 10 суток, -2^оС -4^оС в течение 1 месяца, -25^оС - в течение 24 часов. При всех используемых низких температурных режимах цитробактерии не инактивировались. В кусках соленой рыбы, массой в 100 г и толщиной 3-4 см, при слабом 5%-ном содержании соли, и температуре +2^оС +4^оС, цитробактерии сохранялись в течение 3 месяцев, среднем - 10%-ном - 2 месяцев и крепком - 16-17%-ном - погибали уже через 14 суток.

Следовательно, холодное копчение и замораживание не освобождают продукт от цитробактерий, а тепловая обработка (варка, жарение, горячее копчение и изготовление консервов) способствуют их быстрой гибели.

4.1 Кандидамикоз рыб. Эпизоотологическая ситуация в рыбохозяйственных водоемах

Впервые на наличие кандидамикоза у холодноводных, в частности у речных раков, указывал Х.С. Горегляд (1965). В последующие годы кандидамикоз у холодноводных был отмечен и в водоемах России - в дельте реки Волги и в водоемах Северного Кавказа. В условиях Ставрополья кандидамикоз у карпов был впервые выявлен Бахтияровой З.Г. в 1975 году в прудовом хозяйстве «Ставропольское», протекавшее на фоне интенсивного кормления придонных рыб кормами с дрожжевыми добавками. В связи с изложенным нами в период с 1986 по 2006 годы проводилось изучение степени распространения кандидамикоза в 3 прудовых хозяйствах Ставропольского края - Благодатненском (колхоз «Зеркальные пруды»), Новомарьевском (СХП «Волна») и Невинномысском (СПК «Невинномысский) и 2 естественных водоемах (Новомарьевский лиман и Сенгилеевском водохранилище), также интенсивно протекавшего на фоне кормления рыб кормами с дрожжевыми добавками. В результате предварительного эпизоотического исследования было установлено, что во всех указанных хозяйствах в течение ряда лет преимущественно в летний период года ежегодно отмечались вспышки неизвестного заболевания, протекавшего с признаками некротического поражения глаз, жабр, брюшной водянки, которые в отдельные годы обусловливали гибель преимущественно карпов и сазанов. Микологическое исследование больных рыб показало наличие в их органах и тканях дрожжеподобного гриба С. аlbicans, оказавшегося патогенным для подопытных карпов. При этом также было установлено, что первые случаи проявления этого заболевания обычно отмечались в конце апреля - начале мая, когда температура воды повышается до +18^оС и своего пика достигает в июне - июле месяцах. При этом в первую очередь заболевали карпы, а затем сазаны и гораздо реже растительноядные рыбы, в основном пестрые толстолобики. Вспышки заболевания увязывались с началом кормления рыб искусственными кормами, содержащими дрожжевые добавки, а также сточными водами, сбрасываемыми с ближайших птицефабрик, неблагополучных по кандидамикозу, с обитанием на прудах домашних и диких водоплавающих птиц, нередко являющиеся носителями возбудителей кандидамикоза.

Помимо указанных факторов источниками заражения рыб кандидамикозом служат и остатки неиспользованных кормов, которые способствуют размножению в них кандид, а также неправильно избранная антибиотикотерапия, применяемая в ряде прудовых хозяйств и рыба, вселяемая в водоемы без соблюдения правил карантина.

Эпизоотическое обследование осуществляли преимущественно в период отлова двухлетков карповых рыб, проводившееся весной, летом и осенью. В результате чего у рыб были выявлены признаки, присущие кандидамикозу такие, как некротическое поражение глаз, жабр, потемнение кожи в передней части туловища, брюшная водянка, наличие кровоизлияний на кожных покровах. Заболевание чаще всего проявлялось у карпов, сазанов и реже всего у растительноядных рыб в основном пестрых толстолобиков. Достаточно высокая степень пораженности придонных рыб кандидамикозом объясняется высокой обсемененностью дрожжеподобными грибами рода Саndida кормов, используемых для кормления указанных видов рыб и другими факторами.

Растительноядные рыбы, в сравнении с карпами и сазанами, заболевали кандидамикозом гораздо реже, что увязывается со спецификой их питания растительной пищей, хотя пестрые толстолобики в ограниченном количестве принимают искусственные корма.

У карпов кандидамикоз проявляется в 28,9+0,55%, сазанов - 23,1+2,47%, пестрых толстолобиков - 11,5+0,23% и белых толстолобиков - 5,4+0,40%. Во всех случаях результаты были достоверными, р<0,001. Болезнь преимущественно встречается в поздне-весеннее и летнее время года и увязывается с началом кормления рыб.

4.2 Клинико-морфологическое проявление кандидамикоза

Заболевание карповых рыб кандидамикозом протекает в виде острого и хронического течения, чаще всего проявляется у карпов и сазанов. При клиническом исследовании 1481 экземпляров пораженных карпов, проведенных в 3 прудовых хозяйствах стационарно неблагополучных по кандидамикозу, симптомы острого течения болезни были выявлены в 340 случаях (23,0%), а из 1021 экземпляра исследуемых сазанов в 45 случаях (4,4%).

При изучении патоморфологических изменений во внутренних органах и тканях рыб, пораженных кандидамикозом, было использовано 102 экземпляра холодноводных, из организма которых при микологическом исследовании были выделены патогенные культуры С. аlbicans. Патоморфологические изменения, обнаруживаемые у пораженных рыб преимущественно встречались в кожных покровах, жабрах, кишечнике и почках. Результаты патоморфологических исследований пораженных рыб представлены в таблице 4.

Таблица 4

Патоморфологические изменения во внутренних органах и тканях рыб при кандидамикозе

Как видно из данных таблицы 4, при остром течении болезни было исследовано 78 экземпляров рыб, а при хроническом - 24.

Обнаруживаемые патологические изменения у этих рыб, в принципе имели одинаковую картину. На кожных покровах, чаще всего расположенных в области головы, а иногда на глазном яблоке, находили белые пятна, потемнение чешуи в передней части туловища, а также кровоизлияния и очаги геморрагического поражения. Края этих очагов различной величины и конфигурации имели резко очерченные границы или носили разлитой характер. Вследствие пропитывания геморрагическим экссудатом возникало ерошение чешуи вокруг очагов воспаления. У отдельных рыб геморрагическому поражению подвергались грудные и брюшные плавники, иногда наблюдалась брюшная водянка с экзофтальмией и кратерообразным выпячиванием ануса. Особенно неблагополучным по кандидамикозу представлялось Новомарьевское прудовое хозяйство (СХП «Волна»), в котором клинико-морфологические проявления заболевания у карповых рыб, и в особенности у карпов и сазанов, были весьма демонстративными.

Хроническое течение заболевания сопровождалось образованием на теле рыб язв или эрозий.

В коже помимо очагов геморрагического поражения, отдельных кровоизлияний и очагов некроза при гистологическом исследовании в начальный период болезни выявляли гиперсекрецию слизи и водяночную дистрофию бокаловидных клеток эпидермиса, наличие в серозном экссудате эритроцитов и лейкоцитов. В последующей стадии воспалительного процесса наблюдали инфильтрацию клеток собственного эпителия нейтрофильными лейкоцитами и присутствие в экссудате распадающихся эритроцитов и лейкоцитов. В дерме и гиподерме определялись очаги инфильтрации лимфоидных клеток и наличие дрожжеподобных клеток, выявляемых реактивом Шиффа, регистрировали и наличие очагов некроза. Довольно существенные изменения обнаруживались и в жаберном аппарате рыб. Жабры холодноводных состоят из четырех пар жаберных дужек. На каждой из них с наружной стороны располагаются жаберные лепестки, основу которых составляют жаберные лучи, формирующиеся из гиалинового хряща и прикрепляющиеся к жаберной дужке. Поперек жаберных лепестков находятся респираторные складки называемые лепесточками или вторичными пластинками, покрытые с поверхности респираторным эпителием, между которым располагаются бокаловидные клетки, продуцирующие слизь. В жабрах определяемые воспалительные изменения обычно начинались с апикальных концов жаберных лепестков, а затем распространялись до жаберной дужки. В первоначальной стадии воспаления отмечали десквамацию респираторного эпителия и скопление между пластинками экссудата и клеточного детрита. Выявлялся и тромбоз в жаберных капиллярах. В последующей стадии в области верхушек лепестков развивалась инфильтрация лимфоидными клетками и нейтрофильными гранулоцитами. Постепенно наблюдаемые патологические изменения распространялись до базальной мембраны. В толще лепестков выявлялись дрожжеподобные клетки, окрашивающиеся реактивом Шиффа в красный цвет, а в местах их локализации обнаруживали некроз респираторного эпителия, бесструктурную зернистую массу, ядра клеток. Некроз захватывал коллагеновые волокна, хрящевые лучи складок и мышечные волокна. Пораженные участки жабр приобретали серую окраску. По мере затухания воспалительного процесса развивались пролиферативные процессы или болезнь принимала хронический характер.

В кишечнике, помимо катарально-десквамативного поражения, наблюдали наличие отдельных кровоизлияний в слизистой оболочке восходящего отдела, а позже некротическое поражение. В очагах некроза, распространявшихся в отдельных участках и на нижележащем слое, находили наличие дрожжеподобных клеток, окруженных с периферии лимфоидными элементами. В подслизистом слое в воспалительных очагах определялось наличие лимфоцитов и нейтрофильных лейкоцитов, мышечном - кровоизлияния и набухание волокон, гиперемию кровеносных сосудов. В слизистой нисходящего отдела кишечника наблюдали нарастание количества бокаловидных клеток, инфильтрацию лимфоцитами и гистиоцитами, очажки некроза и присутствие в некротической массе дрожжеподобных клеток. В почках определялась гиперемия гемопоэтической ткани с наличием в ней очагов некроза и дрожжеподобных клеток. В селезенке находили гиперемию застойного характера; в отдельных местах стенки кровеносных сосудов были инфильтрованы лимфоидными элементами, а эндотелий представлялся набухшим. В паренхиме печени выявлялись отдельные очаги с жировой и зернистой дистрофией, а также гранулемы, в центре которых отмечалось наличие дрожжеподобных клеток, окруженных с периферии зоной лимфоидных клеток.

Патоморфологические изменения, обнаруживаемые во внутренних органах и тканях рыб, пораженных кандидамикозом, встречались гораздо чаще у карпов и сазанов и значительно реже у планктофагов.

Хроническое течение болезни у товарных двухлетков карповых рыб преимущественно встречалось осенью в конце вегетационного периода и характеризовалось образованием в кожных покровах у карпов, сазанов язв и эрозий у толстолобиков. У карпов заболевание выявлялось в 7,2%, сазанов - 2,1%, пестрых толстолобиков - 1,6% и белых толстолобиков - 4,0%. При образовании язв у придонных рыб в патологический процесс вовлекались не только кожа, но и мышечная ткань. Дно и бока язв приобретали красный цвет, а края были отечными и иногда некротизированными. В сравнении с цитробактериозом язвы были менее глубокими. Локализация язв чаще всего увязывалась с боками и реже они выявлялись в области груди и брюшка. У растительноядных рыб вместо язв выявлялись эрозии, поражавшие только кожу. При благоприятных условиях к концу осени вместо язв и эрозий развивалась рубцовая ткань, и происходило заживление. При гистологическом исследовании вначале образования язв находили полное разрушение эпидермиса, дермы, гиподермы, а также прилегающей мышечной ткани. Вблизи язв отмечали инфильтрацию лимфоидными элементами и развитие покровного эпителия. Выявлялись и некротические процессы. В некротизированной ткани обнаруживались отдельные дрожжеподобные клетки. В период заживления в препаратах, приготовленных из краевых поверхностных участков, обнаруживали пролиферацию клеток эпителия и постепенное утолщение дермы. На границе с мышечной тканью также наблюдали интенсивную пролиферацию фибробластических элементов, гистиоцитов и коллагеновых волокон. Пролиферация фибробластов была заметна и между мышечными волокнами. При исследовании кожи также встречались отдельные участки регенерируемого эпидермиса. В жабрах, как и в кожных покровах к концу осеннего периода развивались процессы регенерации, но у отдельных рыб, чаще всего по ходу жабр все еще сохранялись небольшие некротические очажки, которые постепенно заменялись тонким слоем респираторного эпителия или соединительнотканными элементами.

В кишечнике в отдельных участках восходящего отдела отмечался хронический десквамативный катар. Покровный эпителий слизистой оболочки находился в состоянии слущивания. Слизистые и подслизистые оболочки в ряде участков были утолщены и уплотнены, в связи с разрастанием соединительной ткани. Встречались и очаги некроза в верхушечной части ворсинок. В некротизированных очажках ворсинок наблюдали наличие дрожжеподобных клеток и элементов псевдомицелия. В извитых канальцах почек обнаруживали дистрофию цилиндрического эпителия, наличие в канальцах остатков клеток дегенерированного эпителия, лейкоцитов, лимфоцитов и отдельные элементы псевдомицелия, окрашивающиеся реактивом Шиффа в красный цвет. В гемопоэтической ткани почек находили отдельные гранулемы, в центре которых выявлялась некротическая масса и нити псевдомицелия, а по периферии - лимфоидные элементы. В печени наблюдали отдельные очажки жировой и зернистой дистрофии вблизи адвентициальных клеток, кровеносных сосудов; а также отдельные гранулемы с лимфоидной структурой. У растительноядных рыб обнаруживались аналогичные изменения, такие же, как у карпов и сазанов, но в отличие от них они были менее выраженными; вместо язв у толстолобиков развивались лишь эрозии, находившиеся в различной стадии заживления. В жабрах, в участках, ранее подвергавшиеся воспалительным процессам, происходила регенерация респираторного эпителия, а в отдельных участках на месте слущенного эпителия развивались соединительнотканные элементы. При завершении воспаления процессы регенерации развивались в других тканях и внутренних органах толстолобиков.

4.3 Биологические свойства грибов рода Candida

В процессе проведения микологического исследования рыб было использовано 334 экземпляра карпов, сазанов и толстолобиков, выловленных в стационарно неблагополучных по кандидамикозу рыбоводных хозяйствах и имеющие специфические клинические и морфологические показатели, свойственные указанному заболеванию.

В результате проведенного исследования в 284 случаях были выделены грибы рода Candida основная часть которых по этиологической структуре (97,9%) относилась к грибу С. аlbicans и гораздо реже (2,1%) к С. guilliermondii. Пораженность рыб кандидамикозом преимущественно наблюдалась в весенне-летнее время года. Изучение степени обсемененности тушек и внутренних органов пораженных карпов показало, что основным биотопом являлись кишечник (100%) и почки (88,9%). По морфологии клетки гриба С. аlbicans в двухсуточной культуре, выращенной на агаре Сабуро преимущественно имели округлую форму величиной в 3,6х3,6 мкм. Внутри клеток обнаруживались ядра и вакуоли. При сравнительном изучении различных способов окраски кандид было установлено, что наилучшие результаты были получены при окраске мазков 1%-ными водными растворами генцианвиолета и основного фуксина. При выращивании грибов на агаре Сабуро при температуре +25^оС +26^оС через 3 суток выросшие колонии в 102 случаях (35,9%) относились к гладкому S-типу, а в 182 случаях (64,1%) - шероховатому - R-типу (табл.5).

Таблица 5

Результаты микологического исследования на наличие гриба C. albicans, С. guilliermondii

По морфологии колонии S-типа при росте на агаре Сабуро приобретали белое, реже кремовое окрашивание, выпуклую, блестящую поверхность, сметанообразную консистенцию, с ровными краями и нередко врастали в толщу среды. Колонии R-типа имели ясно выраженную шероховатость. На жидкой среде Сабуро гриб проявлял глубинный рост, помутнение и образовывал белого цвета осадок. Все культуры гриба S-типа ферментировали глюкозу и мальтозу с образованием кислоты и газа, а в отдельных случаях сахарозу и галактозу, но не ферментировали лактозу, проявляли специфический рост на агаре Литмана, Пагано-Левина-Трейо и Никерсона. При росте на кровяном агаре вызывали гемолиз, все культуры гриба С. аlbicans, в том числе и росшие в виде шероховатых колоний на кукурузном агаре при температуре +25^оС+37^оС образовывали хламидоспоры, псевдомицелий, а по типу филаментации относились к Mycocandida.

Гриб С. guilliermondii, в сравнении с грибом С. аlbicans, по морфологии в двухсуточной культуре состоял из овальных или полиморфных клеток, величиной в 2,2х2,6 мкм и 1,8х3,1 мкм. При микроскопии в мазках, приготовленных из односуточных культур, обнаруживали вакуоли и небольшое ядрышко. В момент первичного выделения из организма больных рыб на агаре Сабуро через 3 суток при температуре +25^оС гриб рос в виде белых округлых, плоских, с матовой или блестящей поверхностью колоний и иногда с радиальной исчерченностью, тягучей консистенцией, с ровными или волнистыми краями и короткими отростками нитей псевдомицелия. Врастания колоний в толщу питательных сред не обнаруживалось. В жидкой среде Сабуро уже по истечении 1-2 суток выращивания и несколько позже происходило образование помутнения, серого цвета осадка на дне пробирки и пленки на ее поверхности. При изучении ферментативной активности гриба на тех же 5 видах углеводов, что и при изучении предыдущего вида гриба было выяснено, что испытуемые культуры ферментировали только 2 вида углеводов (глюкозу и сахарозу) и лишь с образованием кислоты, а 3 другие вида (мальтозу, лактозу и галактозу) не изменяли. Проявляли специфический рост на агаре Литмана, средах Пагано-Левина-Трейо и Никерсона. Две испытуемые культуры из 6 относились к гладким колониям. По типу роста, изучаемом при температуре инкубации +25^оС +36^оС, были отнесены к Mycotorulae. На кукурузном агаре образовывали слабо выраженный псевдомицелий по истечении 5 суток, но не отмечалось образование хламидоспор.

При экспериментальном заражении было использовано 199 экземпляров подопытных годовиков карповых рыб суспензиями высоковирулентных культур грибов С. аlbicans, в результате чего погибло 70 экземпляров (35,2%), заболело 67 (33,7%) и не заболело 62 (31,2%). В зависимости от вида рыб из 157 подопытных карпов погибло или заболело 101 (64,3%), из 22 сазанов - 20 (90,9%) и из 20 пестрых толстолобиков - 16 (80,0%). Основная масса подопытных рыб заболевала в течение 14 суток после заражения. Из различных симптомов специфическими для кандидамикоза можно считать развитие у них при жизни круговых движений, потемнение чешуи, кожи в передней части тела, образование белых пятен на глазном яблоке и роговице глаз, некротическое поражение жаберного аппарата, межлучевых перепонок, плавников, геморрагическое поражение кожных покровов и очаговые изъязвления кожи, обычно расположенные по бокам тела рыб. У пестрых толстолобиков, так же как у карпов и сазанов, в зависимости от способа инокуляции культуры грибов кандида определялось наличие очагов некроза по ходу жаберных лепестков, а также развитие очагового геморрагического поражения кожи. При внутримышечном, кожном и интраперитониальном способах заражения наблюдалось ерошение чешуи и очаговое геморрагическое поражение кожных покровов. В кишечнике выявлялось катаральное геморрагическое и некротическое поражение слизистой, а в почках - гиперплазия, потемнение и некротическое поражение, подтверждаемое гистологическим и микологическим способами.

Суспензии культур гриба С. guilliermondii оказались менее вирулентными для подопытных рыб в сравнении с грибом С. аlbicans. В зависимости от способа заражения суспензиями этого вида гриба подопытные рыбы чаще всего погибали или заболевали 29,2% и не заболевали 70,8% карпов.

Помимо рыб проводилось и экспериментальное заражение подопытных белых мышей. При заражении суспензиями культур гриба С. аlbicans в дозе 500 млн клеток на мл, проводимом интраперитониальным способом из 72 мышей погибло 32 экземпляра (44,4%), заболело 15 (20,8%) и не заболело 25 (34,7%). При жизни зараженные мыши плохо принимали корм, были малоактивными или наоборот возбужденными и вместе с калом у отдельных животных отмечалось выделение слизи, капелек крови и гноя. При вскрытии погибших мышей отмечали тусклый цвет почек и наличие в них небольших некротических узелков серого цвета, которые иногда обнаруживались в паренхиме печени и в области брыжейки. В кишечнике находили признаки катарального, геморрагического и гнойного поражения. В 4 случаях наличие некротических очажков наблюдалось в легочной ткани. Суспензии гриба С. guilliermondii, вводимые белым мышам оказались малопатогенными.

4.4 Устойчивость С. аlbicans к физико-химическим факторам и антибиотикам

В процессе выяснения степени устойчивости гриба С. аlbicans к физико-химическим факторам было установлено, что при воздействии высокой температуры гриб С. аlbicans при температуре +60^оС погибал через 8-10 минут, +70^оС - через 2-3 минуты и +80^оС - 1 минуту; под влиянием ультрафиолетового облучения - 30-35 минут; под воздействием 2%-ного раствора формальдегида суспензии гриба инактивировались по истечении 2 часов, а 3%-ного - 1 часа; под воздействием 1%-ного раствора хлористого йода - 1 час. В тоже время под влиянием раствора марганцевокислого калия в разведении 1:1000 гриб оставался жизнеспособным в течение 2 часов, а 10%-ного раствора свежегашеной извести - 3 часов.

При изучении степени устойчивости гриба к фунгицидным препаратам, проводимому по методу бумажных дисков было установлено, что из 3 испытуемых препаратов (нистатина, леворина и гризеофульвина) наибольшую чувствительность гриб С. аlbicans проявил к нистатину (98,0%), леворину (65,0%). Фунгистатичность нистатина составила 0,1-0,2 мкг/мл, а леворина - 0,38-0,76 мкг/мл. Фунгицидность указанных препаратов, проводимая по методу серийных разведений, соответственно составляла 0,36-0,76 мкг/мл и 0,76-12,5 мкг/мл.

В связи с весьма высокой чувствительностью кандид к нистатину лечебная и профилактическая их эффективность была испытана в лабораторных условиях на подопытных годовиках карпов с лечебной и профилактической целью. При испытании водонерастворимого нистатина подопытные рыбы содержались при температуре воды +20^оС +25^оС. При проведении экспериментов с лечебной целью рыбам ежедневно в глотку с помощью катетора вводили по 10⁵ клеток высоковирулентных суспензий культур С. аlbicans, а после появления первых симптомов болезни (геморрагического поражения кожи) в течение 10 дней вместе с кормом вводили по 30 тыс ЕД препарата. По истечении указанного срока все подопытные карпы выздоровели. При испытании водонерастворимого нистатина с профилактической целью каждой рыбе после одномоментного заражении рыб суспензиями высоковирулентных культур 10⁴ клеток вместе с кормом ежедневно вводили по 15 тыс. ЕД водонерастворимого нистатина в течение 14 суток. За этот период ни одна подопытная рыба не заболела. В тоже время контрольные рыбы, по 8 рыб в каждом опыте, не получавшие препарата заболевали или погибали. При микологическом исследовании подопытных карпов, подвергавшихся обработке с лечебной или профилактической целью наличия в их организме гриба С. аlbicans не было установлено. В тоже время у контрольных рыб, не подвергавшихся обработке, наличие гриба в их организме было выявлено.

4.5 Качественная и санитарная оценка рыбы и рыбных продуктов при кандидамикозе

К числу рыб с доброкачественной формой относили карпов и пестрых толстолобиков при наличии у них на поверхности тела единичных (1-2) очагов с геморрагическим поражением кожи или единичных воспалительных язв, эрозий, а также отдельных некротических очажков в жабрах и единичных белых пятен в области глаз. К рыбам со злокачественной формой причисляли в случае наличия у них брюшной водянки, множественных язв или эрозий, дряблости мышечной ткани или диффузного некротического поражения жабр с одновременным наличием белых пятен в области кожи головы и глаз.

Анализ морфологического состава тушек показывает, что их масса у карпов при доброкачественной форме снижалась на 82 г (15,7%), злокачественной - 122 г (23,4%), а у пестрых толстолобиков при тех же формах поражения она была соответственно ниже на 60 г (9,2%) и 120 г (18,5%) в сравнении с теми же видами здоровых рыб.

Выявленные в химическом составе мышечной ткани изменения зависели от вида рыб и формы поражения (табл. 6.).

Таблица 6

Химический состав мышечной ткани рыб при кандидамикозе n = 4

* - степень достоверности р<0,001

При анализе данных таблицы 6 видно, что калорийность мышечной ткани карпов при злокачественной форме снижалась на 26,2%, а у пестрых толстолобиков - 22,3%; при доброкачественной форме, у тех же видов рыб, соответственно равнялась 15,7% и 10,0% в сравнении со здоровыми того же вида рыбами. Эти данные показывают, что мясо рыб, пораженных кандидамикозом, становилось менее калорийным и имело более низкую пищевую ценность.

При изучении аминокислотного состава белков мышечной ткани рыб было установлено, что у карпов при злокачественной форме поражения количество незаменимых аминокислот снижалось на 16,9%, а у пестрых толстолобиков на 14,9%; аналогичные показатели при доброкачественной форме соответственно составляли 8,9% и 7,3%, в сравнении со здоровыми того же вида рыбами. Из числа незаменимых аминокислот у обоих видов рыб выявлялось резкое снижение изолейцина, метионина и лейцина. Количество заменимых аминокислот также снижалось, особенно аргинина, гистидина и глицина.

В специальной научной литературе по проблеме кандидамикоза, а также в излагаемых нами материалах к настоящему времени накоплено достаточное количество сведений, свидетельствующих об опасности грибов кандида и для человека, способных при известных обстоятельствах вызывать у него одноименное заболевание. Вместе с тем степень опасности для человека гриба С. аlbicans до сих пор остается недостаточно выясненной. К сожалению, до сих пор рыба и рыбные продукты не подвергаются ветеринарно-санитарной экспертизе и в необеззараженном виде продолжают поступать для пищевых целей, что создает угрозу для возникновения у населения массовых пищевых и иного характера заболеваний.

В связи с изложенным, нами также были проведены исследования по выяснению устойчивости гриба С. аlbicans при различных способах технологической обработки рыбных продуктов изучаемого вида гриба, представляющего большую опасность для человека (табл. 7.).

Таблица 7

Сроки инактивации гриба C. albicans в рыбных продуктах

Как видно из данных таблицы 7, при варке рыбы суспензии гриба С. аlbicans инактивировались по истечении 20-25 минут, при жарении кусков рыбы массой в 130 г и толщиной 3 см гриб С. аlbicans инактивировался по истечении 18-20 минут. При горячем копчении мелкой рыбы массой в 100-150 г, проводимом при температуре +100^оС, указанный гриб инактивировался по истечении 1 часа, а при холодном копчении, осуществляемом при температуре +36^оС +38^оС гриб С. аlbicans не инактивировался и оставался жизнеспособным в течение 2 суток. В опытных образцах рыбных консервов суспензии того же вида гриба инактивировались по истечении установленного режима стерилизации проводимом при температуре +120^оС через 1 час. При определении устойчивости гриба С. аlbicans в процессе холодильной обработки в опытных образцах рыбы установлено, что при охлаждении тушек карпов массой в 250-300 г при температуре 0^оС -2^оС суспензии гриба оставались жизнеспособными в течение 10 суток, а замораживании при температуре -25^оС - 1 суток. При испытании различных способов посола на выживаемость гриба С. аlbicans было установлено, что при слабом способе посола (3-6%-ном содержании поваренной соли) суспензии гриба С. аlbicans сохранялись в жизнеспособном состоянии на протяжении 3 месяцев, среднем посоле (10-12%-ном содержании поваренной соли) - до 2 месяцев и 16-17%-ном количестве соли - 14 суток.

Следовательно, холодильная обработка рыбных продуктов (охлаждение и замораживание), холодное копчение не обеспечивает гибель грибов кандида, а тепловая обработка их (варка, жарение, горячее копчение и изготовление рыбных консервов) способствует быстрой гибели дрожжеподобных грибов.

ВЫВОДЫ

1. В рыбохозяйственных водоемах северокавказского и других регионов ежегодно регистрируются вспышки новых краснухоподобных (жаберных) заболеваний карповых и других видов рыб, нередко сопровождающиеся их гибелью и снижением рыбопродуктивности. Основным источником вспышки указанных заболеваний рыб явились дальневосточные растительноядные рыбы, вселенные в водоемы без соблюдения правил карантина. Одной из основных причин возникновения вспышек указанных болезней являлся цитробактериоз.

2. Экстенсивность заболевания карповых рыб цитробактериозом в рыбохозяйственных водоемах Ставропольского края составляет 23,6%, в том числе у карпов - 28,2+0,31%, сазанов - 20,8+0,60%, серебряных карасей - 14,8+0,44%, пестрых толстолобиков - 15,2+0,01% и белых толстолобиков - 23,4+2,09%. Болезнь более интенсивно проявляется в весенне-летний, а иногда и в осенне-зимний периоды года, что увязывается с теплолюбивыми и холодолюбивыми свойствами ее возбудителя - С. freundii.

3. Цитробактериоз у рыб протекает остро и хронически. Острое течение болезни характеризуется проявлением септицемии, множественных кровоизлияний в коже, ерошением чешуи, иногда с экзофтальмией, некрозом жаберных лепестков. В кишечнике выявляется десквамативно-катаральное воспаление, кровоизлияния в слизистой и очаговое некротическое поражение. Наблюдается брюшная водянка и наличие в брюшной полости экссудата с розоватым или красноватым оттенком. В селезенке и почках отмечается увеличение и пролиферация гемопоэтической ткани, в печени - кровоизлияния и очаги зернистой дистрофии, плавательном пузыре - лишь атрофия задней камеры. При хроническом течении болезни отмечается наличие кровоточащих язв в кожном покрове с некротическим ободком, изъязвления в ротовой полости. В восходящем отделе кишечника выявляется некроз в апикальной части ворсинок, а в нисходящем - изъязвления в слизистой оболочке. В селезенке и печени обнаруживались островки атрофии в лимфоидной ткани, печени - некротические очажки. В мышечной ткани вдоль боковой линии - распад мышечных волокон по типу ценкеровского некроза.

4. Возбудитель цитробактериоза, выделенный от больных рыб, относится к роду Citrobacter, семейству Еnterobacteriaceae, виду freundii. По морфологии С. freundii представляет собой грамотрицательную, подвижную палочку, величиной 0,5-1,5 мкм. Он проявляет оптимальный рост на среде Симонса с цитратом натрия, на среде Эндо растет в виде розовых и красных колоний, висмут-сульфит агаре - коричневых или черных колоний с неприятным запахом, на мясопептонном бульоне образует желто-зеленое окрашивание. С. freundii ферментирует глюкозу, сахарозу, мальтозу, арабинозу, сорбит, рамнозу, но не изменяет инозит, расщепляет мукат, обладает гемолитическими свойствами.

5. Цитробактерия чувствительна к высоким температурам, химическим веществам и отдельным антибиотикам. При температуре +70^оС погибает через 5 минут, 100^оС - 1 минуту. Под влиянием ультрафиолетового облучения инактивируется через 35 минут. При воздействии 2%-ного раствора формальдегида погибает через 2 часа, 3%-ного - 1 час, 3 мг%-ного раствора хлорной извести - 60 минут; чувствительна к фуразолидону, иногда - тетрациклину.

6. При экспериментальном заражении 154 экземпляров подопытных карповых рыб культурами С. freundii при трех температурных экспозициях (+5^оС +7^оС; +15^оС +17^оС; +20^оС +25^оС) и семи различных способов инокуляции через 3-30 суток погибло 44 экземпляров рыб (28,6%), заболело 55 (35,7%) и не заболело 55 (35,7%). Подопытные рыбы чаще всего заболевали и погибали при интраперитониальном (100%), пероральном (82,1%) и жаберном (60,0%) способах заражения с проявлением у них кровоизлияний в коже, кишечнике, некротического поражения жабр, дистрофии печени. Из 72 подопытных белых мышей, зараженных суспензиями культур С. freundii, погибло 38 (52,8%), заболело с развитием геморрагического поражения кишечника, гнойников в печени и проявлением токсикоза 18 (25,0%), не заболело 16 (22,2%).

7. Тушки рыб, пораженные цитробактериозом, в товароведческом отношении имеют более низкие показатели в сравнении с теми же видами здоровых рыб. При доброкачественной форме поражения масса тушек сазанов была ниже на 20,0%, а при злокачественной - 22,9%; белых толстолобиков - ниже на 8,2% и 18,1%. В тушках пораженных рыб снижается количество съедобных частей и изменяется химический состав мышечной ткани. При злокачественной форме калорийность мышечной ткани у сазанов меньше на 17,7%, а у белых толстолобиков - на 20,2%. При доброкачественной форме те же показатели соответственно снижались у сазанов на 12,7% и у белых толстолобиков - на 14,6%. Сумма незаменимых аминокислот у сазанов при злокачественной форме уменьшалась до 9,9% и у белых толстолобиков - до 9,4%, а при доброкачественной соответственно - до 5,2% и 4,3%, в сравнении со здоровыми рыбами.

8. В рыбохозяйственных водоемах Ставрополья у карповых рыб также отмечается заболевание кандидамикозом. Степень поражения их в неблагополучных прудовых хозяйствах составляет 23,7%. У карпов проявляется в 28,9+0,55%, сазанов - 23,1+2,47%, пестрых толстолобиков - 11,5+0,23% и белых толстолобиков - 5,4+0,40%. Болезнь преимущественно встречается в поздне-весеннее и летнее время года, увязывается с началом кормления рыб.

9. Кандидамикоз у рыб протекает остро и хронически. Острое течение болезни характеризуется одновременным появлением кровоизлияний в кожных покровах, образованием белых пятен на роговице глаз, глазном яблоке; в жабрах выявляются признаки экссудации, геморрагий, некроза; кишечнике - катарального и некротического поражения; почках - кровоизлияний и присутствие очагов некроза. При хроническом течении болезни наблюдаются язвенно-некротические изменения в различных участках кожи, кишечнике и развитие очагов некротического характера в почках, в центре которых обнаруживаются дрожжеподобные клетки.

10. У карповых рыб, пораженных кандидамикозом, преимущественно выделяют 2 вида патогенных грибов - C. albicans и C. guilliermondii. Гриб C. albicans в односуточной культуре состоит из округленных клеток величиной 1,3х1,3 мкм; на агаре Сабуро образует выпуклые белого или кремового цвета колонии сметанообразной консистенции, с ровными или волнистыми краями; ферментирует глюкозу, сахарозу, мальтозу, иногда галактозу, не ферментирует лактозу. На кукурузном агаре образует хламидоспоры и псевдомицелий, а по типу филаментации относится к Mycotorulа. Гриб C. guilliermondii, в отличие от гриба C. albicans, по морфологии состоит из овальных и полиморфных клеток, на агаре Сабуро растет в виде плоских белого цвета колоний, не врастающих в толщу среды; ферментирует только глюкозу и мальтозу. При росте на кукурузном агаре не образует хламидоспоры, псевдомицелий слабо развит, по типу филаментации относится к Mycocandida.

11. Возбудители кандидамикоза неустойчивы к высокой температуре, химическим веществам и к ряду фунгицидных препаратов. При температуре +60^оС они погибают через 8-10 минут, +70^оС - 2-3 минуты, +80^оС - 1 минуту; сохраняются при температуре 0 -2^оС до 6 месяцев и более. Под влиянием ультрафиолетового облучения теряют свою жизнеспособность через 35 минут. Под воздействием 2%-ного раствора формальдегида погибают через 2 часа, а 3%-ного - 1 час, 1%-ного раствора хлористого йода - 60 минут, раствора хлорной извести с содержанием 3 мг%-ного активного хлора - 60 минут. Из фунгицидных препаратов наиболее высокую чувствительность проявляют к нистатину (100,0%) и леворину (85,7%). Фунгистатичность этих препаратов соответственно составляет 0,1-1,2 мкг/мл, а фунгицидность - 0,38-0,76 мкг/мл.

12. При экспериментальном заражении 199 экземпляров подопытных рыб культурами грибов C. albicans и C. guilliermondii погибло 70 особей (35,2%), заболело 67 (33,7%) и не заболело 62 (31,2%). Гриб C. albicans обладает более выраженными патогенными свойствами. В зависимости от способа заражения наиболее отчетливые результаты были получены при интраперитониальном (100%), пероральном (81,4%) и жаберном (77,4%). Заболевание протекает с признаками кровоизлияний и очагового некроза кожных покровов, кишечника, глаз, жабр и внутренних органов. При экспериментальном заражении 72 белых мышей суспензиями культур C. albicans интраперитониальным способом в 32 случаях (44,4%) была отмечена их гибель, а в 15 случаях (20,8%) заболевание с образованием в почках некротических узелков и в 25 случаях (34,7%) заболевание не было выявлено.

13. У рыб, больных кандидамикозом, в значительной степени снижается масса тела и качество рыбной продукции. При доброкачественной форме поражения у карпов масса тела уменьшается на 15,7%, у пестрых толстолобиков - 9,2%, а при злокачественной форме соответственно - 23,4% и 18,5%. В тушках пораженных рыб снижается количество съедобных частей и изменяется химический состав мышечной ткани. Калорийность мышечной ткани карпов при злокачественной форме ниже на 26,2%, у пестрых толстолобиков - 22,3% и при доброкачественной форме соответственно - 15,7% и 10,0%. Сумма незаменимых аминокислот у карпов при злокачественной форме поражения снижается на 16,9%, а у пестрых толстолобиков - на 14,9%, а при доброкачественной соответственно - 8,9% и 7,3%, в сравнении со здоровыми рыбами.

14. При доброкачественной форме кандидамикоза и цитробактериоза обеззараживание тушек рыб происходит при тепловой обработке, посоле или консервированиии. Тепловую обработку путем варки необходимо проводить не менее 20-25 минут, жарение - 20 минут, горячее копчение - 1 час, консервирование в соответствии с установленными режимами стерилизации для рыбных консервов и посол с 16-17%-ным содержанием поваренной соли - не менее 14 суток. Охлаждение, замораживание, холодное копчение не инактивируют дрожжеподобные грибы и С. freundii. При злокачественной форме заболеваний, положительном результате микологического или бактериологического исследования, пораженную рыбу желательно подвергать варке в течение 25-30 минут, а затем направлять в корм животным.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Использовать в ветеринарной практике разработанные «Методические рекомендации по диагностике, терапии и профилактике болезней рыб (цитробактериоза и кандидамикоза)», одобренные секцией «Инфекционной патологии животных» Отделения ветеринарной медицины, протокол № 3 от 27 сентября 2007 г., утвержденные в Российской академии сельскохозяйственных наук (РАСХН) 1 июля 2008 г.

2. Методические рекомендации «Диагностика цитробактериоза рыб», «Диагностика кандидамикоза рыб», одобренные секцией животноводства и ветеринарии научно-технического совета МСХ Ставропольского края.

3. С лечебной и профилактической целью при цитробактериозе карпов и других видов рыб следует использовать фуразолидон, тетрациклин, а также другие высокоэффективные антибактериальные препараты, а с кандидамикозом - водонерастворимый нистатин и леворин, обладающий высокими фунгицидными свойствами по отношению к возбудителям указанного заболевания.

4. Товарную рыбу, выловленную из водоемов, неблагополучных по указанным заболеваниям, необходимо предварительно подвергать сортировке, с разделением на больную и здоровую, и ускорять ее доставку в охлажденном виде к потребителям или на рыбоперерабатывающие предприятия. Больную рыбу необходимо подвергать термической обработке.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Вылегжанин, А.Ф. О причинах вспышки эпизоотии «краснухи» рыб / А.Ф. Вылегжанин, Н.А. Ожередова // Диагностика, лечение, профилактика инвазионных и инфекционных заболеваний с.-х. животных: сб. науч. тр. / Ставроп. СХИ. - Ставрополь, 1993. - С. 75-78.

2. Ожередова, Н.А. Кандидамикоз пушно-меховых животных и рыб / Н.А. Ожередова // Актуальные проблемы ветеринарии: материалы Междунар. конф. - Барнаул, 1995. - С. 89-90.

3. Ожередова, Н.А. Микологическая диагностика кандидамикоза пушно-меховых животных и рыб / Н.А. Ожередова // Актуальные проблемы ветеринарии: материалы Междунар. конф. - Барнаул, 1995. - С. 116.

4. Ожередова, Н.А. Ветеринарно-санитарная экспертиза рыб при зоонозах / Н.А. Ожередова // Актуальные проблемы ветеринарии: материалы

Междунар. конф. - Барнаул, 1995. - С. 133.

5. Ожередова, Н.А. Цитоморфологическая характеристика гриба C. albicans / Н.А. Ожередова // Современные достижения биотехнологии: материалы Всероссийской конф. - Ставрополь, 1996. - С. 73-74.

6. Ожередова, Н.А. Кандидамикоз карпов и пушно-меховых животных / Н.А. Ожередова // Состояние и перспективы развития научных исследований по профилактике и лечению болезней с.-х. животных и птиц: материалы науч. конф., посвящ. 50-летию Краснодарской НИВС. - Краснодар, 1996. - Ч.1. - С. 84.

7. Ожередова, Н.А. Особенности эпизоотологии, клинического проявления кандидамикоза рыб и основные свойства возбудителя / Н.А. Ожередова // Диагностика, лечение, профилактика заболеваний с.-х. животных: сб. науч. тр. / Ставроп. СХИ. - Ставрополь, 1996. - С. 41-43.

8. Ожередова, Н.А. Антифугицидные препараты при кандидамикозе рыб / Н.А. Ожередова // Актуальные проблемы патологии животных и человека: материалы науч.-практ. конф. - Барнаул, 1996. - С. 105-106.

9. Ожередова, Н.А. Цитоморфологическая характеристика гриба C. albicans / Н.А. Ожередова // Актуальные проблемы патологии животных и человека: материалы науч.-практ. конф. - Барнаул, 1996. - С. 106.

10. Вылегжанин, А.Ф. Диагностика болезней ластоногих животных / А.Ф.Вылегжанин, Н.А. Ожередова // Актуальные проблемы патологии животных и человека: материалы науч.-практ. конф. - Барнаул, 1996. - С. 115.

11. Ожередова, Н.А. Кандидамикоз карпов и методы борьбы с ним / Н.А. Ожередова // Рыбоводство и рыболовство: науч.-произв. журнал. - 1997. - № 3-4. - С. 36-37.

12. Ожередова, Н.А. Морфология кожного покрова жаберного аппарата и внутренних органов в норме и при патологии / Н.А. Ожередова // Актуальные вопросы видовой и возрастной морфологии животных и пути совершенствования морфологических дисциплин: материалы Междунар. конф. вет. морфологов. - Улан-Удэ, 1998. - С. 189-191.

13. Ожередова, Н.А. Кандидамикоз карпов и меры борьбы с ним / Н.А. Ожередова // Актуальные проблемы вет. образования: материалы Междунар. конф. - Барнаул, 1998. - С. 155-156.

14. Ожередова, Н.А. Обсемененность грибом C. albicans организма карповых рыб / Н.А. Ожередова // Актуальные проблемы вет. образования: материалы Междунар. конф. - Барнаул, 1998. - С. 156-157.

15. Ожередова, Н.А. Ветеринарно-санитарная экспертиза рыбы и рыбных продуктов, обсемененных дрожжеподобными грибами / Н.А. Ожередова / Современные научные и практические проблемы животноводства, ветеринарной медицины и перспективы их решения: материалы науч.-практ. конф. - Уфа, 1999. - С.171-172.

16. Ожередова, Н.А. Морфологический и химический состав мяса рыбы, обсемененных грибами кандида / Н.А. Ожередова // Современные научные и практические проблемы животноводства, ветеринарной медицины и перспективы их решения: материалы науч.-практ. конф. - Уфа, 1999. - С. 172-173.

17. Ожередова, Н.А. Влияние экологических условий на проявление цитробактериоза у рыб и птиц / Н.А. Ожередова // Проблемы экологической безопасности Северо-Кавказского региона: материалы регинальной конф. - Ставрополь, 2000. - С. 146-147.

18. Вылегжанин, А.Ф. Анализ эпизоотической ситуации по болезням рыб в рыбохозяйственных водоемах / А.Ф. Вылегжанин, Н.А. Ожередова // Этика и профессиональное мастерство в образовании и ветеринарии: сб. науч. тр. - Барнаул, 2000. - С. 78-80.

19. Ожередова, Н.А. Ветеринарно-санитарная экспертиза рыбы и рыбных продуктов, обсемененных цитробактериями / Н.А. Ожередова // Этика и профессиональное мастерство в образовании и ветеринарии: сб. науч. тр. - Барнаул, 2000. - С. 144-145.

20. Ожередова, Н.А. Цитробактериоз карпов и его диагностика / Н.А. Ожередова // Этика и профессиональное мастерство в образовании и ветеринарии: сб. науч. тр. - Барнаул, 2000. - С. 145-14.

21. Ожередова, Н.А. Диагностика цитробактериоза карповых рыб / Н.А. Ожередова // Ветеринарная служба Ставрополья. - 2001. - №2. - С. 9-10.