Гельминтозы крупного рогатого скота в республике Татарстан (эпизоотология, диагностика и терапия)

На правах рукописи

ЛАТЫПОВ

ДАЛИС ГАРИПОВИЧ

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

доктора ветеринарных наук

ГЕЛЬМИНТОЗЫ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

В РЕСПУБЛИКЕ ТАТАРСТАН

(эпизоотология, диагностика и терапия)

Специальность: 03.00.11. - паразитология

Москва - 2010

Работа выполнена на кафедре паразитологии и радиобиологии ФГОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана», в районных станциях по борьбе с болезнями животных, ветеринарных лабораториях, мясокомбинатах и хозяйствах Республики Татарстан

Научный консультант: заслуженный деятель науки РТ

доктор ветеринарных наук, профессор

Лутфуллин Минсагит Хайруллович

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор

Сафиуллин Ринат Туктарович

доктор ветеринарных наук, профессор

Кротенков Владимир Павлович

доктор ветеринарных наук, профессор

Васильева Валентина Алексеевна

Ведущая организация - ФГОУ ВПО « Ивановская государственная сельскохозяйственная академия имени Д.К. Беляева»

Защита диссертации состоится «16» июня 2010 г. в «11:00» часов на заседании Совета по защите докторских и кандидатских диссертаций Д 006.011.01 при ГНУ «Всероссийский научно-иследовательский институт гельминтологии им. Скрябина» (ВИГИС).

Адрес: 117218, Москва, Б. Черемушкинская ул., д. 28

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГНУ ВИГИС

Автореферат разослан « » мая 2010г.

Ученый секретарь совета по защите

докторских и кандидатских диссертаций,

доктор биологических наук, профессор В.К. Бережко

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы. В последние годы в Российской Федерации достигнуты значительные успехи в терапии и профилактике инвазионных болезней. Однако ущерб, наносимый животноводству паразитозами, продолжает оставаться значительным. (Ю.Ф. Петров, 1997; И.А. Архипов, 1999, 2004; А.Х. Волков, 2001; Р.Т. Сафиуллин 2002, 2004, Р.Т. Сафиуллин, А.М. Сазонов, К.А. Хромов, М. А. Мусатов, 2006).

Высокая концентрация животных на ограниченных площадях, использование пастбищ на низменных, болотистых участках создают оптимальные условия для интенсивного заражения крупного рогатого скота различными гельминтами - стронгилятами пищеварительного тракта, фасциолами, личинками эхинококков и др. Нередко они вызывают в организме животных ассоциативные инвазионные болезни (В.В. Горохов, 1986; Ю.Ф. Петров, 1988; А.Ю. Гудкова, 1999; А.Х. Волков, 2000; Е.Е. Коляда, 2004; Э.Х. Даугалиева, 2007; Ю.Ф. Петров, Х.С. Абдуллаев, В.М. Кузнецов и др., 2006, 2007; М.В. Арисов, 2007, 2008; М.Ш. Акбаев, 2008; И.А. Архипов 2008, А.Б. Муромцев, 2008).

Установлено, что эффективная борьба с гельминтозами животных наиболее результативна при знании их эпизоотологии в каждой климато-географической зоне с составлением эпизоотических карт (Н.Н. Дарченко, 1999; В.В. Горохов, 2001, 2003 и др.).

Основой терапии и профилактики инвазионных болезней является дегельминтизация животных, целесообразность проведения которой определяется в основном результатами копроскопических исследований (В.В. Горохов, 1983; Г.А. Котельников, 1984; Н.В. Демидов, 1987; М.В. Хренов, 1997; Р.Т. Сафиуллин, 2001 и др.). Однако традиционные методы копроскопической диагностики требуют больших затрат времени и недостаточно эффективны.

В последние годы настойчиво предпринимаются попытки диагностики гельминтозов на ранней, личиночной стадии развития возбудителя, с применением различных иммунологических тестов (Т.С. Золоткова, М.Д. Новак, 2000, 2001; F. Ilarra et al., 1998; A. Picardo-Moriena et al., 2002 и др.). Однако иммунологические методы диагностики при гельминтозах недостаточно изучены, и они требуют дальнейшего усовершенствования.

Для диагностики эхинококкоза наиболее широкое применение нашла внутрикожная аллергическая реакция Кацони (Р.Г. Исмагилова, 1959; А.К. Журавец, 2004; T. Casoni, 1912; A.L. Jezck et al., 1973 и др.). Однако, по мнению многих исследователей (В.Т. Рамазанов, 1968; В.А. Боровский, И.Р. Бикташев, 1968; Н.М. Матчанов, 1977; I.G. Kagan, 1976) реакция Кацони не специфична и она может дать позитивные показания и у здоровых животных.

Поэтому совершенствование существующих и разработка новых, более эффективных копроскопических и иммунологических методов диагностики гельминтозов остается актуальной проблемой.

В настоящее время продолжаются интенсивные поиски высокоэффективных и наиболее доступных химиотерапевтических препаратов при многих гельминтозах. Обнадеживающие результаты показали ряд новых отечественных антигельминтиков (И.А. Архипов 1997, 2001, 2004, 2009; А.Ю. Гудкова, 1999; Р.Т. Сафиуллин, 1991, 2004, 2005; Р.Т. Сафиуллин и соавторы, 1999, 2002, 2006; Ю.Ф. Петров и соавторы, 2005; М.В. Арисов, 2008; А.Б. Муромцев, 2008 и др.). Вместе с тем, дальнейшие изыскания наиболее эффективных средств терапии гельминтозов у животных остается актуальной задачей. В перспективе заслуживают внимание такие препараты широкого спектра действия как фенбендазол, празиквантел, оксиклозанид и эприномектин для лактирующих коров (И.А. Архипов, 2003, 2009).

Для дегельминтизации животных в Российской Федерации с 2006 года широко применяется новый препарат - фебтал гранулят, содержащий в своем составе 22% фенбендазола. В лаборатории ВИГИС с целью повышения антигельминтной активности и снижения терапевтической дозы фенбендазола была получена растворимая ее форма - фезол (П.П. Диденко, Д.В. Зуев, 2006). В Казанском институте органической и физической химии был синтезирован новый антгельминтик - фосфорная соль пиперазина (патент на изобретение № 2211835, от 2003г.). Учитывая вышеизложенное, требовалось производственное испытание фебтала гранулята, фезола и фосфорной соли пиперазина при гельминтозах и микстинвазиях крупного рогатого скота в условиях Республики Татарстан.

Цель и задачи исследований. Целью нашей работы явилось изучение распространения и особенностей эпизоотологии гельминтозов крупного рогатого скота в районах Республики Татарстан (РТ), усовершенствование их диагностики и терапии.

Для реализации указанной цели были поставлены следующие задачи:

- провести длительный мониторинг эпизоотической ситуации по наиболее распространенным гельминтозам крупного рогатого скота в РТ;

- составить эпизоотические карты РТ по основным гельминтозам крупного рогатого скота с определением условных зон инвазированности животных и дать прогноз развития эпизоотической ситуации;

- изучить гельминтофауну крупного рогатого скота в районах Республики Татарстан;

- усовершенствовать копроскопическую диагностику, разрабатывать более эффективные гельминтоовоскопические методы седиментации, флотации и их комбинации. Разработать способ групповой экспресс - диагностики гельминтозов крупного рогатого скота;

- усовершенствовать серологическую диагностику фасциолеза крупного рогатого скота, разработать наиболее эффективный метод изготовления специфичного антигена для РСК и ИФА;

- усовершенствовать аллергическую диагностику эхинококкоза, разработать способ получения специфичного аллергена для реакции Кацони;

- определить оптимальные терапевтические дозы фебтала гранулята и фезола при ассоциативных инвазиях крупного рогатого скота и изучить их влияние на гематологические и иммунологические показатели организма животных;

- установить терапевтические дозы фезола и фосфорной соли пиперазина при неоаскариозе телят.

Научная новизна. На основании результатов полных и неполных гельминтологических вскрытий туш и отдельных органов животных, изучена гельминтофауна крупного рогатого скота в районах Республики Татарстан. Из обнаруженных нами 35 видов гельминтов 3 вида (Paramphistomum ichikawai, Bunostomum trigonocephalum и Capillaria bovis) были зарегистрированы в республике впервые.

Впервые на основании результатов длительного мониторинга составлены эпизоотические карты, с определением условных зон экстенсинвазированности (ЭИ) животных и дан прогноз развития эпизоотической ситуации в районах Республики Татарстан по основным гельминтозам крупного рогатого скота.

Разработаны наиболее эффективные копроскопические методы гельминтоовоскопии (одобрены секцией «Инвазионные болезни животных» Отделения ветеринарной медицины РАСХН 25 мая 2007г).

Впервые разработан способ экспресс-диагностики гельминтозов крупного рогатого скота (одобрен секцией «Инвазионные болезни животных» Отделения ветеринарной медицины РАСХН 25 мая 2007г). На новый способ получен патент на изобретение (№ 2302207 от 10 июля 2007г.);

Предложен новый метод изготовления антигена фасциол для РСК и ИФА. Доказана диагностическая эффективность серологических реакций при остром течении фасциолеза.

Модернизирована методика получения аллергена для реакции Кацони. Изучена специфичность и эффективность полученного диагностикума при эхинококкозе крупного рогатого скота.

Определены оптимальные терапевтические дозы фебтала гранулята и фезола при ассоциативных инвазиях крупного рогатого скота, изучено их влияние на гематологические и иммунологические показатели животных;

Разработан новый препарат - новая фосфорная соль пиперазина и определена ее оптимальная терапевтическая доза при неоаскариозе телят. На препарат получен патент на изобретение (№ 221835 от 10 сентября 2003).

Практическая ценность. Эпизоотические карты Республики Татарстан, составленные на основании длительного мониторинга, с определением условных зон ЭИ животных являются важным звеном при составлении прогноза развития эпизоотической ситуации по основным гельминтозам крупного рогатого скота.

Модифицированные гельминтоовоскопические методы и способ групповой экспресс-диагностики могут быть применены для повышения эффективности копроскопической диагностики, а также для изучения эпизоотической ситуации по ассоциативным инвазиям крупного рогатого скота;

Серологическая диагностика фасциолеза эффективна при остром течении инвазии. Разработанный способ изготовления антигена фасциол позволяет получить специфичный диагностикум для РСК и ИФА;

Реакция Кацони с усовершенствованным эхинококковым аллергеном может быть применена для объективной оценки и прогноза эпизоотической ситуации по эхинококкозу;

При ассоциативных инвазиях крупного рогатого скота более эффективным является фебтал гранулят в дозе 90 мг/кг (20 мг/кг по ДВ). Оптимальная терапевтическая доза фезола при микстинвазиях - 20 мг/кг (14 мг/кг по ДВ);

При неоаскариозе телят эффективными являются фезол в дозе 5 мг/кг (3,5 мг/кг по ДВ) и фосфорная соли пиперазина (0,3 г/кг).

Внедрение исследований. Результаты исследований в 1999 - 2009 гг. под авторским надзором с положительным эффектом внедрены в хозяйствах, ветеринарных лабораториях и госветучреждениях Республики Татарстан.

Прогноз развития эпизоотической ситуации по гельминтозам крупного рогатого скота был обсужден в ГУВ КМ РТ (2009). Эпизоотические карты по основным гельминтозам крупного рогатого скота используются в районных станциях по борьбе с болезнями животных при составлении плана противоэпизоотических мероприятий.

Полученные результаты использованы при разработке следующих нормативно-технических документов:

- Рекомендации по борьбе с гельминтозами крупного рогатого скота в районах Республики Татарстан (Утв. ГУВ КМ РТ от 20.10. 2009г.).

- Инструкция по применению фебтала гранулята для дегельминтизации сельскохозяйственных животных, пушных зверей и птиц. (Утв. Россельхознадзором. ПВР - 2 - 1.9/ 00108 от 30.12.2005г.).

- Инструкция по применению фезола для дегельминтизации сельскохозяйственных животных. (Утв. Ученым советом ВИГИС от 27.09.2008г).

- Модифицированный копроскопический метод диагностики ассоциативных инвазий крупного рогатого скота (одобрен Секцией «Инвазионные болезни животных» Отделения ветеринарной медицины РАСХН от 25.05. 2007г).

- Метод групповой экспресс-диагностики гельминтозов крупного рогатого скота (одобрен Секцией «Инвазионные болезни животных» Отделения ветеринарной медицины РАСХН от 25.05. 2007г).

- Методические рекомендации по копроскопической диагностике гельминтозов сельскохозяйственных животных» (Утв. ГУВ КМ РТ 18.11. 2007г.);

- Временная инструкция по изготовлению и контролю антигена фасциол для РСК (Утв. ГУВ КМ РТ от 10.09. 2001г.);

- Временное наставление по постановке и учету РСК с антигеном фасциол (Утв. ГУВ КМ РТ от 10.09. 2001г.);

- Технические условия (ТУ) на изготовление, контроль и применение экспериментальных серий антигена фасциол (Утв. ГУВ КМ РТ от 10.09. 2001г.);

- Временная инструкция по изготовлению эхинококкозного аллергена для реакции Кацони (Утв. ГУВ КМ РТ от 22.12. 2003г.).

- Временное наставление по применению эхинококкозного аллергена в реакции Кацони (Утв. ГУВ КМ РТ от 22.12. 2003г.);

Материалы диссертационной работы используются в учебном процессе ФГОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины», они вошли в учебные пособия для студентов факультета ветеринарной медицины «Ветеринарная гельминтология» (Казань, 2007. - 232с.), «Эхинококкоз крупного рогатого скота» (Казань, 2008. - 103с.) и в монографию «Эпизоотология, диагностика и терапия дикроцелиоза крупного рогатого скота» (Казань, 2009. - 130с.)

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены: на Республиканских научно-производственных конференциях (Казань, 1999-2001, 2004-2005); Всероссийских научно-производственных конференциях (Казань, 2002, 2006-2009); Международной научно-производственной конференции (Казань, 2003); Объединенных сессиях координационного совета по ветеринарной гельминтологии (Москва, ВИГИС, 2000 - 2009); третьей Международной конференции «Состояние и перспективы развития производства ветеринарных препаратов» (Алматы, 2006); заседании Отделения ветеринарной медицины РАСХН «Инвазионные болезни животных» (Москва, 2007); расширенном заседании профессорско-преподавательского состава кафедр паразитологии и радиобиологии, микробиологии, эпизоотологии, фармакологии и токсикологии, биохимии, анатомии, патологической физиологии, патологической анатомии и гистологии ФГОУ ВПО «КГАВМ» (Казань, 2009).

Основные положения, выносимые на защиту:

1.Распространение и видовой состав основных гельминтов крупного рогатого скота в Республики Татарстан;

2. Мониторинг и составление эпизоотических карт, прогнозирование развития эпизоотической ситуации по основным гельминтозам крупного рогатого скота в районах РТ;

3. Модифицированные копроскопические методы и экспресс - метод групповой гельминтоовоскопии микстинвазий крупного рогатого скота;

4. Новый способ изготовления специфичного антигена фасциол для РСК и ИФА;

5. Реакция Кацони с усовершенствованным эхинококковым аллергеном для объективной оценки и прогнозирования эпизоотической ситуации по эхинококкозу;

6. Результаты испытания фебтала гранулята и фезола при фасциолезе, стронгилятозах пищеварительного тракта, а также при других ассоциативных инвазиях;

7. Эффективность новой фосфорной соли пиперазина и фезола при неоаскариозе телят.

Публикации. По материалам диссертации опубликованы 48 научных работ, в том числе издано 3 учебных пособия. В изданиях, регламентированных ВАК для докторских диссертаций, опубликованы 23 работ, в которых изложены основные положения и выводы по изучаемой проблеме.

Личный вклад соискателя. Представленная диссертационная работа является результатом многолетних научных исследований автора. Исследования по изучению гельминтофауны, мониторинга и прогноза эпизоотической ситуации по гельминтозам крупного рогатого скота в Республике Татарстан соискателем выполнены лично. Испытания антигельминтных препаратов - фебтала гранулята, фезола и фосфорной соли пиперазина на крупном рогатом скоте выполнены соискателем лично. В совместно опубликованных работах с Р.Р. Тимербаевой по испытанию антигена фасциол, Г.Г. Горшковой, Л.А. Гайсиной по копроскопической диагностике гельминтозов, А.М. Идрисовым по диагностике эхинококкоза, Д.А. Долбиным по диагностике неоаскариоза телят основная часть работ выполнена соискателем Латыповым Д.Г. Указанные авторы не возражают использования результатов совместных исследований диссертантом Д.Г. Латыповым (справки представлены в Совет по защите докторских и кандидатских диссертаций).

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 336 страницах машинописного текста и включает введение, обзор литературы, материалы и методы исследования, результаты собственных исследований и их обсуждение, выводы, практические предложения и приложения. Работа иллюстрирована 42 таблицами и 24 рисунками. Список литературы включает 698 источников, из них 103 зарубежных авторов. Приложение на 50 страницах.

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Представлен анализ отечественной и иностранной литературы по эпизоотологии, диагностике, терапии и профилактике гельминтозов и ассоциативных инвазий крупного рогатого скота.

2 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Материалы и методы

Работа выполнялась с 1999 по 2009 гг. на кафедре паразитологии и радиобиологии ФГОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана», в районных станциях по борьбе с болезнями животных, ветеринарных лабораториях, мясокомбинатах и животноводческих хозяйствах Республики Татарстан.

Объем проведенных исследований представлен в таблице.

В ходе проведения мониторинга эпизоотической ситуации по гельминтозам животных, нами были обобщены результаты копроскопических исследований 38 ветеринарных лабораторий, от животных 1047 ферм из 43 районов республики, ежегодным охватом от 50 до 74 тыс. крупного рогатого скота. Были анализированы и ежегодные сведения службы Государственного ветеринарного контроля по послеубойному осмотру от 23 до 38 тыс. туш и внутренних органов крупного рогатого скота от 10 крупных мясокомбинатах республики.

Обобщались также материалы собственных исследований. Анализу подвергали результаты изучения эпизоотической ситуации в хозяйствах, клинических наблюдений, гельминтокопроскопических, серологических, аллергических, специальных и патологоанатомических исследований животных в 73 неблагополучных хозяйствах 18 районов республики.

Таблица 1

Объем проведенных исследований

Вид исследований	Объект, объем и время исследований
1. Мониторинг эпизоотической ситуации по гельминтозам крупного рогатого скота в РТ по исследованиям ветеринарных лабораторий 2. Мониторинг эпизоотической ситуации по гельминтозам крупного рогатого скота в РТ по данным ветеринарно-санитарной экспертизы туш и внутренних органов 3. Изучение эпизоотологии гельминтозов, ассоциативных инвазий крупного рогатого скота в хозяйствах РТ 4. Изучение эпизоотологии гельминтозов, микстинвазий и гельминтофауны крупного рогатого скота 5. Изучение сезонной динамики фасциолеза крупного рогатого скота в РТ 6. Изучение сроков паразитирования фасциол в организме коров 7. Контроль эффективности существующих и новых способов гельминтоовоскопии 8. Изучение эффективности фасциоловых антигенов в РСК и ИФА 9. Изучение эффективности разных аллергенов при эхинококкозе крупного рогатого скота 10.Контроль эффективности фебтала гранулята в сочетании с неспецифическими иммуномодуляторами 11. Титрация оптимальных терапевтических доз фезола и фосфорной соли пиперазина при неоаскариозе телят 12. Контроль эффективности разных доз фебтала и фезола при ассоциативных инвазиях крупного рогатого скота 13. Изучение влияния фебтала гранулята и фезола	Анализ исследований 38 лабораторий более 720 тыс. проб фекалий из 1047 ферм крупного рогатого скота за 1996-2007 гг. Анализ более 350 тыс. экспертиз в 10 крупных мясокомбинатах республики за 1996-2007 гг. Копроскопия 22455 проб фекалий крупного рогатого скота в 73 хозяйствах 18 районов республики (1999-2008 гг.) Вскрытие 1334 головы животных на Казанском и Нурлатском мясокомбинатах и в хозяйствах республики (1999-2008 гг.) Опыты на 45 телятах 6-8 мес. возраста (2001-2002 гг.) Опыты на 200 коровах (1999-2002 гг.) Копроскопия 35356 проб фекалий в экспериментах и производственных условиях (1999-2008 гг.) Серологические исследования 1812 проб крови крупного рогатого скота из 16 хозяйств РТ (2000-2002 гг.) Аллергические исследования 1565 животных. Вскрытие 760 головы крупного рогатого скота (2002-2007гг.) 2 опыта на 20 телках 18- 20 мес. возраста и 15 коровах (2004г.) 2 опыта на 55 головах телят 2-3 месячного возраста (2006г.) Опыты на 215 дойных коровах (2008-2009г.) Опыты на 25 коровах (2008г.)

В условиях Казанского и Нурлатского мясокомбинатов и хозяйствах РТ для изучения видового состава гельминтов были проведены 147 полных и 1187 неполных гельминтологических вскрытий крупного рогатого скота по методу

К.М. Скрябина (1928). Видовую принадлежность гельминтов определяли с использованием, атласов по трематодологии, цестодологии и нематодологии и по определителю паразитических нематод (К.М. Скрябин, Н.П. Шихобалова, Р.С. Шульц и др., 1952).

Гельминтоовоскопические исследования по методам последовательных промываний, Вереты, Вишняускаса, Вольфа, Дарлинга, Демидова, Калантарян, Котельникова - Вареничева, Котельникова - Хренова (две модификации), Маллори, Сафиуллина, Фюллеборна, Щербовича (три модификации) проводили согласно их наставлениям. Были испытаны также многочисленные новые модификации седиментационных, флотационных, комбинированных и экспресс-методов гельминтоовоскопии.

Для контроля диагностической эффективности методов, собранные яйца из маток гельминтов (фасциол, дикроцелий, трихоцефал и др.) закладывали по 50 или 100 экз. в стандартные пробы фекалий крупного рогатого скота равные 1 или 3г. Удельный вес приготовленных флотационных жидкостей определяли с помощью денсиметра. В каждом варианте вели подсчет яиц в 1г фекалий с использованием камеры ВИГИС.

При изыскании оптимальной технологии получения антигенов для РСК и ИФА, для выделения соматических экстрактов из фасциол использовали различные методы воздействия на гельминта: физические, химические и их комбинации. Для очистки антигена фасциол от белковых фракций применяли методы замораживания и оттаивания, ультрацентрифугирования (с помощью ультрацентрифуги L7 Вескман) и диализ.

Активность диагностикумов контролировали с сыворотками спонтанно зараженных фасциолами крупного рогатого скота. Сыворотки крови здоровых животных служили как негативные, от инвазированных дикроцелиями и личинками эхинококков - для контроля специфичности полученных антигенов.

РСК ставили по общепринятой методике. ИФА проводили методом твердофазного иммуноферментного анализа по A. Voller et al. (1976). Для обнаружения антител против фасциол использовали пероксидазные конъюгаты. Антивидовые сыворотки против глобулинов быка получали из ИЭМ им. Гамалея.

При изыскании оптимальной технологии получения аллергенов для реакции Кацони была применена цельная эхинококковая жидкость и различные ее разведения (от 1:1 до 1:100). Разбавителями жидкости служили физиологический раствор и глицерин. Эхинококковые аллергены крупному рогатому скоту вводили внутрикожно, в область средней трети шеи с помощью безыгольного инъектора БИ-7 в дозе 0,2 мл. Оценку результатов реакции Кацони проводили сопоставлением утолщения кожной складки (УКС) до и спустя 2-3 часа после введения диагностикумов.

Расчет антгельминтной эффективности разных схем применения препаратов проводили по типу «контрольный тест» согласно Руководству Всемирной Ассоциации за прогресс ветеринарной паразитологии (1995).

Количество форменных элементов, лейкограмму и иммунологические показатели крови крупного рогатого скота определяли на гематологическом анализаторе Cobas Micros Roche Ben ringer Manheim.

Статистический анализ достоверности полученных результатов проводили методом вариационной статистики с использованием t- критерия Стьюдента. Математические подсчеты проводили на компьютере с использованием программы Microsoft Excel. Построение графиков и таблиц осуществляли с помощью компьютерных программ Adobe Illustrator 10,0 и Excel/ Windows.

2.2 Результаты исследований

2.2.1 Эпизоотология гельминтозов крупного рогатого скота

в Республике Татарстан

2.2.1.1 Гельминтофауна крупного рогатого скота

При изучении гельминтофауны в 1999 по 2008 годы нами были проведены 27 полных и 1307 неполных гельминтологических вскрытий туш и отдельных органов крупного рогатого скота на Казанском и Нурлатском мясокомбинатах и в хозяйствах Республики Татарстан.

На основании результатов гельминтологических вскрытий на территории республики у крупного рогатого скота нами обнаружены 35 видов гельминтов, из них 3 вида (Paramphistomum ichikawai, Bunostomum trigonocephalum и Capillaria bovis) были зарегистрированы впервые.

Установлено, что в желудочно - кишечном тракте крупного рогатого скота паразитируют 25 видов гельминтов, в печени - 4, в легких - 2, в поджелудочной железе - 1, во внутреннем углу глаза, в конъюнктивальном мешке - 1, в полостях тела - 1, в мускулатуре - 1, в связках и сухожилиях - 1.

Класс трематод представлен 5 видами (Fasciola hepatica, Dicrocoelium lanceatum, Paramphistomum ichikawai, Paramphistomum cervi, Eurytrema pancreaticum).

Класс цестод объединяет 6 видов (Cysticercus bovis, Cysticercus tenuicollis, Echinococcus granulosus larva, Thysaniezia giardi, Moniezia expansa, Moniezia benedeni).

К классу нематод относятся 24 вида: Dictiocaylus viviparus, Trichocephalus ovis, Trichocepalus skrjabini, Capillaria bovis, Setaria labiata-papillosa, Onchocerca gutturosa, Thelazia rhodesi, Neoascaris vitulorum, Strongyloides papillosus.

Остальные 15 видов являются стронгилятами пищеварительного тракта: Haemonchus placei, Nematodirus filicollis, Nematodirus spathiger, Bunostomum phlebotomum, Bunostomum trigonocephalum, Chabertia ovina, Trichostrongylus columbriformis, Trichostrongylus axei, Ostertagia ostertagi, Marshallagia marshalli, Cooperia punctata, Cooperia oncophora, Oesophagostomum radiatum Oesophagostomum columbianum, Oesophagostomum venulosum.

2.2.1.2 Мониторинг эпизоотической ситуации по гельминтозам крупного рогатого скота

Анализом результатов гельминтокопроскопических исследований ветеринарных лабораторий республики за 1996 - 2007 годы установлено, что в фекалиях крупного рогатого скота наиболее часто обнаруживаются яйца фасциол, дикроцелий и стронгилят пищеварительного тракта. В отдельных районах в пробах фекалий выявляются также яйца парамфистом, мониезий, трихоцефал, капсулы тизаниезий и личинки диктиокаул.

По данным ветеринарно-санитарной экспертизы мясокомбинатов у животных при убое в основном были регистрированы фасциолы, дикроцелии, диктиокаулы, эхинококки, цистицерки (бовисный и тенуикольный) и стронгилята пищеварительного тракта.

ЭИ крупного рогатого скота фасциолами в республике постепенно снижалась. Во влажные 1996 и 1997 годы она была сравнительно высокой и составляла соответственно 5,6 и 5,3% при копроскопических исследованиях, и 5,2 и 5,1% при убое и ветеринарно-санитарной экспертизе печени. В засушливые годы (1998 - 2000 гг.) ЭИ животных фасциолами по обоим показателям заметно снижалась. Так, по копроскопическим исследованиям в 1998 году она составила 5%, 1999 - 3,8%, а в 2000 году уменьшилась до минимальных значений - 2,0%, а при убое в 1998 году равнялась 4,6%, 1999 - 3,2%, а в 2000 году она снижалась до 2,2%. В последующие годы отметили незначительные колебания инвазированности. По копроскопическим исследованиям в 2001 году ЭИ животных фасциолами выросла до 2,1%, в 2002 она несколько снизилась (2,0%), а 2003 году достигла до 2,5%. В 2004 году этот показатель равнялся 2,2%, 2005 - 2,1%, а в конце мониторинга - 2006 году достиг 2,8%, в 2007 - снова снизился до 2,2%.

ЭИ животных фасциолами по данным убоя в основном совпадала с результатами исследований лабораторий. Так, в 2001 году она составила 2,2%, в 2002 - 2,1%, а в последующие годы (2003, 2004, 2005гг.) - 2,4%. В конце мониторинга в 2006 году инвазированность животных выросла до 2,6%, а в 2007 - она снова снизилась до прежних величин (2,2%).

По результатам мониторинга эпизоотической ситуации в условиях Республики Татарстан установлены пять условных зон паразитарной системы фасциолеза крупного рогатого скота: благополучная (2 района), слабого инвазирования (ЭИ до 2% - 9 районов), умеренного инвазирования (до 5% - 12 районов), периодических вспышек (до 10% - 10 районов) и зона сильного инвазирования (от 10 до 36% - 10 районов).

По данным ветеринарных лабораторий ЭИ крупного рогатого скота дикроцелиями колебалась в значительных пределах. Так, в 1996 году она составила 5,4%, 1997 - 4,9%, а в 1998 - 4,8%. Пик ЭИ животных (6,2%) отметили в 1999 году. Затем шло постепенное снижение инвазированности, и в 2000 году она составила 4,7%, 2001 - 3,2%, в 2002 - 2,1%, в 2003 - 2,4%, а в 2004 году уменьшилась до минимума - 2,0%. В последующие годы (2005 - 2007гг.) ЭИ животных по республике оставалась на уровне 2,3%.

Результаты послеубойного осмотра мясокомбинатов кореллировали с данными гельминтоовоскопических исследований. Так, в 1996 году ЭИ животных дикроцелиями в республике составила 5%, 1997 - 4,8%, 1998 - 2,6%. Наиболее высокий уровень ЭИ крупного рогатого скота (5,4%) также был регистрирован в 1999 году. Затем шло постепенное снижение инвазированности животных, и в 2000 году она составила 5,2%, 2001 - 2,8, 2002 - 2,0 и 2003 году - 2,3%. В последующие годы ЭИ крупного рогатого скота дикроцелиями оставалась примерно на одном уровне и в 2004 году она равнялась 2,2%, 2005 - 2,1, в 2006 - 2,2%, а в 2007 году - 2,3%.

По результатам мониторинга в республике определены три условные зоны паразитарной системы дикроцелиоза крупного рогатого скота: слабого (до 5% - 16 районов), умеренного (от 5 до 15% - 16 районов) и сильного инвазирования (от 15 до 55,6% - 10 районов).

ЭИ крупного рогатого скота эхинококками в республике остается сравнительно высокой. Так, в 1998 году при ветсанэкспертизе 30313 туш было выявлено 1543 случая заражения (ЭИ 5,0%). В 1999 году при осмотре 16394 туш было обнаружено 1518 случая инвазирования (9,3%). С 2000 года отмечалось некоторое снижение заболеваемости, и при осмотре 33614 туш было выявлено 2044 пораженных животных (6,1%). В 2001 году при ветсанэкспертизе 39695 туш было обнаружено 1826 инвазированных (4,6%), а в 2002 году при осмотре 37725 туш крупного рогатого скота было выявлено 1562 случая эхинококкоза (4,1%). С 2003 года было отмечено повышение инвазирования, и при убое 37725 животных было выявлено 2002 пораженных туш (5,3%). В 2004 году при осмотре 36294 туш, эхинококкозом были поражены 2241 (6,2%), а в 2005 году из 37266 туш инвазированными оказались 2376 (6,4%). В конце мониторинга ЭИ животных снова начала снижаться, и в 2006 году при убое 25344 головы было выявлено 1292 случая заражения эхинококкозом (4,7%). В 2007 году при осмотре 22256 туш, личинками эхинококка были поражены 1024 (4,6%).

Результатами мониторинга установлены также три условные зоны паразитарной системы эхинококкоза крупного рогатого скота в РТ: слабого, умеренного и сильного инвазирования (рис).

В зону слабого инвазирования входят 11 северных районов республики, 1 район Заволжья и 1 юго-восточный район. В этой зоне сохранялась стабильная ситуация в течение всего периода мониторинга и ЭИ животных эхинококкозом колебалась в низких пределах - от 0,01 до 3%. На территории 4-х районов (Арский, Атнинский, Балтасинский и Сабинский) эхинококкоз среди крупного рогатого скота встречается спорадически. Эти районы расположены в северной части республики и граничат между собой.

Зона умеренного инвазирования включает 5 Заволжских и 5 восточных районов РТ, а также 3 центральных района и 1 южный район. В этой зоне ЭИ животных варьирует от 3 до 10%.

В зону сильного инвазирования относятся 13 районов Закамья, 2 района Заволжья и 1 центральный район республики. В этой зоне ЭИ крупного рогатого скота эхинококкозом в течение долгих лет остается высокой и достигает до 10 и более процентов. В ряде районов Заволжья (Аксубаевский, Новошешминский, Нурлатский, Черемшанский и Чистопольский) остается сложная ситуация по эхинококкозу и ЭИ животных колеблется в пределах от 21 до 38%, а в отдельные годы иногда достигает до 48 - 53%.

Рис. Условные зоны инвазированности крупного рогатого скота личинками эхинококков в республике Татарстан за 1998-2007 гг.

По данным ветеринарных лабораторий и ОПВК мясокомбинатов из трематодозов в 14 районах республики регистрируется также парамфистоматоз крупного рогатого скота (ЭИ 0,2 - 0,5%).

Из цестодозов в 8 районах республики у животных обнаруживается мониезиоз (0,01 - 0,4%), в 4-х - тизаниезиоз (0,1 - 0,2%), в 16 - цистицеркоз бовисный (0,04 - 0,66%) и в 13 районах - цистицеркоз тенуикольный (0,8 - 1,2%).

Из нематодозов у крупного рогатого скота наиболее часто регистрируются стронгилятозы пищеварительного тракта. ЭИ животных по данным ветеринарных лабораторий республики за период мониторинга в целом по республике варьировало в пределах от 3,4 до 6,7%. Диктиокаулез был установлен в 21 районе республики (0,3 - 1,1%), трихоцефалез - в 16 районах (0,1 - 1,2%).

Результатами собственных исследований, проведенными в 73 хозяйствах 18 районов республики, у крупного рогатого скота был установлен также эуритрематоз (ЭИ - 0,1 - 0,6%), телязиоз (1,0 - 1,2%), онхоцеркоз (0,5 - 1,2%), сетариоз (1,5 - 2,2%), капилляриоз (0,1 - 0,2%). По нашим данным в отдельных хозяйствах республики, где не проводились профилактические дегельминтизации, ЭИ крупного рогатого скота различными видами стронгилят пищеварительного тракта колеблется в пределах от 23,2 до 69,4%.

Таким образом, анализом результатов копроскопических исследований ветеринарных лабораторий и данных посмертной диагностики мясокомбинатов, а также собственными исследованиями установлено, что на территории Республики Татарстан основными гельминтозами у крупного рогатого скота являются фасциолёз, дикроцелиоз, эхинококкоз и стронгилятозы пищеварительного тракта.

Дикроцелиоз и стронгилятозы желудочно-кишечного тракта у животных регистрируются во всех районах республики. Личинками эхинококков сильно поражен крупный рогатый скот 13 районов Закамья, 2 районов Заволжья и 1 центральный район, в то время как в 11 северных районах республики эта инвазия встречается крайне редко, в спорадической форме.

Фасциолез крупного рогатого скота регистрируется в 41 районе, парамфистоматоз - в 14 районах, мониезиоз - 8, цистицеркоз бовисный - 16 , цистицеркоз тенуикольный - 13, трихоцефалез - 16 и диктиокаулез в 21 районе республики.

2.2.1.3 Ассоциативные инвазии крупного рогатого скота

Диагностику ассоциативных инвазий у крупного рогатого скота проводили комплексно - копроскопическими, специальными иммунологическими методами (в 14 хозяйствах 6 районов республики на 1164 головах), а также гельминтологическими вскрытиями на Казанском мясокомбинате 334 животных из 74 хозяйств республики в 2001 - 2008 годах.

При копроскопическом исследовании 722 коров инвазированными оказались 341 животное (47,3%). Из них одновременно несколькими видами гельминтов были поражены 109 (31,6%). У 5 голов крупного рогатого скота обнаруживались яйца гельминтов 4-х видов - фасциол, дикроцелий, стронгилят пищеварительного тракта и трихоцефал, у 6 животных 3-х видов - дикроцелий, стронгилят и трихоцефал, у 24 коров 2-х видов - фасциол и стронгилят, у 28 голов крупного рогатого скота 2-х видов - дикроцелий и стронгилят, у 27 животных - 2-х видов - трихоцефал и стронгилят, у 9 коров 2-х видов - фасциол и трихоцефал, у 8 коров 2-х видов яйца дикроцелий и трихоцефал.

Установлено, что наиболее часто встречаются ассоциации из двух сочленов: фасциолы - стронгилята и дикроцелии - стронгилята.

При исследовании 135 коров выпасавших в заливных лугах установили, что только стронгилятами пищеварительного тракта были инвазированы 66 животных (48,9%). В пробах фекалий обнаруживались одновременно яйца стронгилят и фасциол у 23 коров (17,3%). Яйца стронгилят и дикроцелий выявлялись у 22 (16,5%) животных. У 7 коров (5,2%) была положительная реакция Кацони на эхинококкоз, а в их фекалиях обнаруживались и яйца стронгилят пищеварительного тракта. У 6 животных (4,4%) выявлялись яйца фасциол и дикроцелий, они также показывали позитивные реакции с эхинококковым аллергеном. У 5 коров (3,7%) положительно реагировавших в реакции Кацони, в фекалиях были обнаружены яйца стронгилят пищеварительного тракта и дикроцелий. У 3-х коров диагностировались яйца трех видов гельминтов - стронгилят, дикроцелий и фасциол.

При исследовании 210 коров дойного гурта, которые паслись в заливных и заболоченных пастбищах, с помощью копроскопических и специальных методов были диагностированы ассоциативные инвазии (от 2 до 8 видов гельминтов). Из них 162 животных были заражены фасциолами (77,1%), 25 - парамфистомами (11,9%), 152 - дикроцелиями (72,3%), 82 - эуритремами (39%), 26 - мониезиями (12,3%), 147 - тизаниезиями (70%), 210 - стронгилятами пищеварительного тракта (100%), 56 - трихоцефалами (26,7%), 18 - капилляриями (8,6%) и 119 - неоаскарисами (56,6%).

При выращивании инвазионных личинок в пробах фекалий было установлено, что в пищеварительном тракте у коров паразитировали стронгилята 9 из родов (Haemonchus, Nematodirus, Bunostomum, Chabertia, Trichostrongylus, Ostertagia, Marshallagia, Cooperia, Oesophagostomum).

При исследовании крови у 156 коров были обнаружены личинки микросетарий (74,3%), а у 67 - микроонхоцерки (31,9%).

Результаты гельминтологических вскрытий, проведенные на 334 головах крупного рогатого скота, из разных хозяйств РТ показали, что 160 из них были поражены гельминтами (47,3%). Стронгилятами пищеварительного тракта были инвазированы 82 животных (24,6%). Смешанные инвазии - стронгилята с фасциолами были обнаружены у 17 (5,0%), стронгилята с дикроцелиями - у 26 (7,8%), стронгилята с эхинококками - у 16 (4,8%) головы крупного рогатого скота. Одновременно стронгилята пищеварительного тракта с фасциолами и эхинококками были выявлены у 8 животных (2,4%), стронгилята с дикроцелиумами и эхинококками - у 7 (2,1%) и стронгилята с дикроцелиумами и фасциолами у 4 животных (1,2%). Стронгилята пищеварительного тракта были представлены 15 видами нематод.

Таким образом, проведенными копроскопическими, специальными и иммунологическими методами, а также результатами гельминтологических вскрытий установили, что только в пищеварительном тракте у коров могут паразитировать до 26 видов гельминтов (5 из класса трематод, 3 из класса цестод и 18 из класса нематод), в том числе до 15 видов стронгилят пищеварительного тракта. В фекалиях у одного и того животного могут быть диагностированы яйца или личинки от 2 до 8 видов гельминтов. В периферической крови крупного рогатого скота могут обнаруживаться микросетарии и микроонхоцерки, в брюшной и грудной полостях сетарии, в шейной связке - онхоцерки. Установили также, что коровы являются носителями неоаскариозной инвазии. Яйца этого гельминта легко обнаруживаются в фекалиях животных методом Щербовича и модифицированным копроскопическим методом.

Резюмируя проведенные исследования можно констатировать, что в зависимости от инвазированности местности разными видами гельминтов, у выпасавшихся крупного рогатого скота, в организме нередко обнаруживаются ассоциативные инвазии, сочленами которых могут быть фасциолы, дикроцелии, парамфистомы, эуретремы, трихоцефалы, капиллярии, неоаскарисы, сетарии, онхоцерки, эхинококки и др.

2.2.1.4 Эпизоотическая ситуация по неоаскариозу телят

Для изучения распространения неоаскариоза были исследованы 276 пробы фекалий от телят 1 до 6 месячного возраста из 17 населенных пунктов 11 районов республики. При изучении эпизоотологической ситуации обращали внимание также на сбалансированность рациона и на условия содержания телят. При исследовании фекалий от животных применяли гельминтоовоскопический метод Котельникова и Хренова с аммиачной селитрой и модифицированный копроскопический метод диагностики. Подсчет яиц проводили в 1г фекалий с использованием камеры ВИГИСа.

Исследованиями установили, что неоаскариоз телят в пастбищный период встречается в 64,7% хозяйствах Республики Татарстан. Наиболее высокая ЭИ (57,1 - 71,9%) регистрируется у телят от 1 до 2-х месячного возраста. При этом яйца гельминтов в 1г фекалий в среднем составляют от 16,6 ±5,4 до 34,5±6,7 экз. С увеличением возраста телят степень инвазии постепенно снижается и телята 5 - 6 месячного возраста не выделяют яиц неоаскарисов.

2.2.1.5 Прогноз эпизоотической ситуации по основным гельминтозам крупного рогатого скота

Результаты изучения эпизоотической обстановки по основным гельминтозам крупного рогатого скота в РТ (с 1996 по 2008 гг.) показали, что на течение эпизоотического процесса влияют экологические компоненты внешней среды: климатические условия прошлых лет, особенно текущего пастбищного сезона, условия содержания и кормления животных, а также состояние пастбищ и водоемов.

Учитывая сложившуюся обстановку и результатов мониторинга, а также показателей эпизоотических карт, нами составлен прогноз развития эпизоотической ситуации в РТ по основным гельминтозам крупного рогатого скота на 2010 г:

По фасциолезу. Число зараженных фасциолезом животных в РТ будет снижаться. Резкое сокращения поголовья овец в последние годы (от 300 тыс. до 40 тыс.) оказывало заметное влияние на уменьшение численности инвазированных личинками гельминта моллюсков, тем самым значительно уменьшилась возможность заражения крупного рогатого скота фасциолезом.

Во многих районах республики животноводство переходит на промышленную основу, где в основном применяется стойловое содержание и кормление скота. Ощутимый эффект дают и проводимые ветеринарной службой республики плановые профилактические противофасциолезные мероприятия с применением высокоэффективных антгельминтиков (альбендазол, клозальбен, фебтал гранулят и др.).

Однако лето и осень 2009 года были влажными, что наиболее благоприятно влиял на рост численности промежуточного хозяина фасциолеза - популяцию малого прудовика. Учитывая вышеизложенное, ЭИ крупного рогатого скота фасциолезом в целом по РТ составит в среднем 2,6 - 2,8 %. Благополучными по фасциолезу окажутся 14 районов республики. В 12 районах ЭИ животных не будет превышать 5%. В 13 районах ЭИ фасциолезом будет колебаться от 5 до 10%, а в 3-х районах от 10 до 15%. Сложная ситуация по фасциолезу будет оставаться в Мамадышском районе (в районе много заливных лугов и болотных пастбищ), где ЭИ крупного рогатого скота может достигать до 20 и более процентов.

По дикроцелиозу: Влажное лето и осень, а также бесснежная зима 2008 - 2009 года оказывали неблагоприятное влияние на популяции промежуточных хозяев - на разные виды сухопутных моллюсков и на рыжих муравьев. Поэтому число зараженных дикроцелиозом животных уменьшится и ЭИ животных в целом по РТ будет снижаться до 1,9 - 2,1%.

Благополучными по дикроцелиозу крупного рогатого скота окажутся 8 районов республики. В 23 районах ЭИ животных составит до 5%, в 6 районах она будет варьировать от 5 до 10%, в 3-х районах - от 10 до 15%. По-прежнему сложная ситуация по дикроцелиозу будет оставаться в Мамадышском и Ютазинском районах, где ЭИ животных может достигать до 20%.

По эхинококкозу. ЭИ крупного рогатого скота ларвальным эхинококкозом в целом по РТ составит 4,6 - 4,7 %. Благополучными окажутся 7 северных районов республики, где сохраняется стабильная ситуация более 10 лет и эхинококкоз у крупного рогатого скота будет регистрироваться как спорадический случай.

В 18 районах заражение животных составит не более 10%, а в 10 районах ЭИ будет колебаться от 10 до 15%. В Аксубаевском, Чистопольском, Новошешминском, Черемшанском и Нурлатском районах республики по-прежнему будет оставаться сложная ситуация по эхинококкозу, где ЭИ крупного рогатого скота может достигать до 20 и более процентов. В указанных районах из года в год не снижаются показатели по зараженности крупного рогатого скота эхинококкозом. В неблагополучных хозяйствах этих районов много зараженных собак, поэтому почва сильно загрязнена яйцами эхинококков. При подворном убое животных, пораженные эхинококкозом органы не всегда обезвреживаются и имеются случаи скармливания их собакам.

Таким образом, определено, что составление эпизоотических карт на основании мониторинга по основным гельминтозам животных, является важным звеном для составления прогноза развития эпизоотической ситуации в целом по республике, а также в каждом конкретном районе и наметить своевременные лечебные и профилактические мероприятия.

2.2.2 Совершенство прижизненных методов диагностики

гельминтозов крупного рогатого скота

2.2.2.1 Копроскопические методы диагностики гельминтозов

2.2.2.1.1 Изыскание путей повышения диагностической

эффективности метода последовательных промываний

В экспериментальных условиях метод последовательных промываний проводили в 45 различных модификациях, с искусственной закладкой яиц фасциол, дикроцелий, трихоцефал и других гельминтов в стандартные пробы (4532 пробы) фекалий крупного рогатого скота.

Диагностическую эффективность седиментационного метода испытали в зависимости от температуры воды (10 - 50єС), размеров ячеек фильтрационной сетки (0,15 - 0,5мм) и кратности фильтрации (1 - 3 раза), массы взятой пробы фекалий (1 - 3г). Для лучшего очищения осадка фекальной взвеси были использованы растворы технического мыла (0,1 - 0,4%) и едкого калия (1 - 3%). Осадок дополнительно осаждался в коническом стаканчике (50 мл) и методом центрифугирования (при 3000 об/мин), или окрашивался раствором метиленовой сини (0,1%).

Исследованиями установили, что лучшие результаты были получены при осаждении фекальной взвеси массой 1г в коническом стакане, с использованием горячей воды (45єС), двукратной фильтрации через сит размерами 0,5 х 0,5 и 0,25 х 0,25мм, с дополнительным очищением осадка 1% раствором щелочи (NaOH).

Установлено, что разрешающая способность обычного метода последовательных промываний колеблется в пределах 17,5 - 19,3% заложенных яиц гельминтов, а модифицированного седиментационного способа она достигает до 23,4 - 27,6%.

Более высокая эффективность модифицированного способа седиментации было доказано и в производственных условиях при исследовании 272 проб фекалий из 3-х неблагополучных по гельминтозам хозяйств республики.

2.2.2.1.2 Усовершенствование флотационного метода гельминтоовоскопии

В 9-ти опытах при исследовании 1964 проб фекалий крупного рогатого скота с искусственной закладкой яиц, испытали диагностическую эффективность наиболее известных флотационных методов - Вереты, Вольфа, Калантарян, две модификации Котельникова - Хренова, Маллори, Сафиуллина и Фюллеборна. Испытывались также различные варианты модифицированного нами флотационного метода.

Установили, что высокую результативность проявили методы Котельникова-Хренова (флотацинная жидкость из насыщенного раствора нитрата свинца), а также метод Сафиуллина (флотационная смесь из насыщенных солей цинка хлорида и натрия хлорида). В первом варианте было выявлено 30,8± 5,6% заложенных яиц дикроцелий 21,7±5,7 яиц фасциол и 45,7± 4,4% яиц трихоцефал, во втором - удалось обнаружить соответственно - 32,3± 1,2; 21,6±4,6 и 47,6%±2,8 яиц гельминтов.

Наиболее высокую диагностическую эффективность проявил модифицированный нами флотационный метод. При использовании данного метода удалось выявить 45,3±1,7 заложенных яиц фасциол, 54,2±1,5 яиц дикроцелий, и 52,3± 1,8 яиц трихоцефал.

При проведении модифицированного метода применяли флотационная смесь, состоящая из двух ингредиентов: 1. На 1л кипящей воды растворяется 1,5кг аммиачной селитры (NH₄ NO₃, р=1,32); 2. На 1л кипящей воды растворяется 2кг цинка хлорида (ZnCl₂, р=1,82). Перед употреблением эти растворы смешивают из расчета 3:2.

Пробу массой 1г клали в стаканчик и с помощью дозатора заливали 5 мл флотационной жидкости, полученную взвесь тщательно размешивали и добавляли остальную часть раствора порциями, доводя объем до 15 мл. Полученную суспензию фильтровали через сито (0,25 х 0,25) в другой стаканчик, а затем ее переливали в центрифужную пробирку и центрифугировали при 1000 об/мин в течение 2-х минут. После, прикасанием петли с поверхностной пленки снимали 3 капли взвеси на предметное стекло и микроскопировали.

Было установлено, что чем выше плотность флотационной жидкости, тем больше всплывают яйца гельминтов. Центрифугирование фекальной взвеси при флотировании яиц не только ускоряет их всплытие, но повышает результативность исследований. При проведении модифицированного флотационного метода требуется значительно меньшее количество флотационной жидкости (15 мл) и, следовательно, меньше химреактивов.

2.2.2.1.3 Усовершенствование комбинированного метода гельминтоовоскопии

В экспериментальных условиях в 12 опытах, при исследовании 3482 проб фекалий крупного рогатого с искусственной закладкой яиц гельминтов, изучали диагностическую эффективность комбинированных методов - Вишняускаса, Вольфа, Дарлинга, две модификации метода Котельникова-Хренова, Котельникова-Вареничева, Хренова и три модификации метода Щербовича.

Было установлено, что наиболее высокую диагностическую эффективность проявляют те методы, которые имеют более высокую плотность флотационной жидкости и в их состав входит насыщенный раствор хлорида цинка, такие как - Котельникова - Вареничева, Сафиуллина и Хренова. Поэтому в дальнейших своих исследованиях в комбинированном методе контролировали разрешающую способность различных флотационных смесей, приготовленных как из двух, так и из трех ингредиентов.

Исследования показали, что при использовании базисных растворов цинка хлорида и натрия хлорида в соотношении 2:1 (р=1,61) обнаруживаются в среднем 48,8% заложенных яиц дикроцелий и 32,4% яиц фасциол. Комбинированная флотационная смесь из этих жидкостей в соотношении 1:1 (р=1,51) дала возможность выявить 47,5% яиц дикроцелий и 31,3% яиц фасциол, а в соотношении 1:2 (р=1,40) соответственно - 30,3% и 20,2%. Флотационные жидкости с более низким удельным весом выявляли яиц дикроцелий, но уже тяжелых яиц фасциол они не смогли флотировать.

Несколько выше была диагностическая эффективность флотационных жидкостей, приготовленных из насыщенных солей хлорида цинка и аммиачной селитры. Так, при соотношении этих солей 2:1 (р = 1,65) было обнаружено в среднем 48,2% заложенных яиц дикроцелий и 44,3% яиц фасциол. При снижении удельного веса флотационных растворов этих солей диагностическая эффективность также постепенно снижалась.