Фармакология и применение новых производных пиримидина

ФАРМАКОЛОГИЯ И ПРИМЕНЕНИЕ НОВЫХ ПРОИЗВОДНЫХ ПИРИМИДИНА

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание учёной степени доктора ветеринарных наук

1. Общая характеристика работы

Актуальность темы. Коррекция следствий воздействия на организм человека, животных и птиц ксенобиотиков с токсическими свойствами является одной из ведущих проблем современной фармакологии и токсикологии. Основными группами ксенобиотиков, оказывающими негативное влияние на организм, являются экотоксиканты и лекарственные препараты. Лечебная эффективность при отравлении в последние 10 лет составляет от 57 до 84%. Сокращение числа отравлений в последние годы связано не с улучшением профилактики токсикозов, а с уменьшением числа животных и количества применяемых пестицидов (Шабунин С.В., 1999; Байматов В.Н., Волкова Е.С., 2001, 2002; Папуниди К.Х, 2001; Рабинович М.И., 2001; Софронов В.Г., 2001; Тремасов М.Я., 2001; Антипов В.А., 2002; Бузлама В.С., 1972, 2003; Дорожкин В.И., 2003; Шахов А.Г., Аргунов М.Н., 2003; Беркович А.М., 2003).

Интенсификация производства продукции растениеводства предполагает широкое применение химических средств защиты растений. В связи с этим возрастает опасность загрязнения сельскохозяйственной продукции и окружающей среды.

Внесение минеральных удобрений повышает урожайность сельскохозяйственных культур в 4-5 раза, причём одним из основных элементов питания, которые формируют урожай, является азот. Избыточное накопление нитратного азота вследствие нарушения агротехнических норм при дозировании удобрений, а также в кормах и пищевых растительных продуктах из-за влияния многочисленных неблагоприятных факторов, тормозящих биосинтез азотосодержащих органических соединений, создаёт условия для развития нитрато-нитритной интоксикации в организме животных и человека (Крайнев Н.М., 1969; Волкова Н.В., 1974; Буц Б.М., Моисеенко И.Я., 1980; Уголев А.М., 1988; Васильев М.Ф., Ковалёв С.П., Шумаков О.Ф., 1990).

В настоящее время вопрос о механизме действия нитратов остаётся открытым, а их содержание служит показателем загрязнения не только кормов, но и среды обитания растений, животных и человека. Широкое распространение нитрато-нитритных токсикозов приводит к тому, что в организме человека и животных происходит трансформация нитратов и это ведёт к отрицательным последствиям. В отдельных работах доказано, что нитратная интоксикация сопровождается нарушением функций многих органов и систем, и в первую очередь - пищеварительной. У животных нарушается прирост живой массы, уменьшается молочная продуктивность, изменяются процессы обмена веществ, наблюдается падёж (Менькин В.К., Буряков Н.П., 1982; Акулич А.И., Рябцев П.С., 1989; Leonard-Kluz I., Bielak F., Barabasz I., 1979; Carrigan M.I., Gardner I.A., Zilkova I., 1982).

Повышенное содержание нитратов в пище и воде приводит, в конечном итоге, у людей, к необратимым заболеваниям желудочно-кишечного тракта и, в частности, к раку, от образующихся нитрозаминов. При этом увеличивается риск заболеваний печени и даже образования злокачественных опухолей. В литературе описываются случаи поражения тканей головного мозга у людей при воздействии нитратов, содержащихся в питьевой воде. При ежедневном поступлении нитратов в организм у людей снижается умственная и физическая работоспособность, наблюдается нарушение кровообразования, иммунологической и генеративной функций (Дискаленко А.Л., Трофименко Ю.Н., Добрянская Е.В., 1977; Минеев В.Г., Грачёва Н.К., Тришина Т.А., 1986; Уголев А.М., 1988; Roch M., 1987).

Настоящая работа проведена в соответствии с заданием 01 ГНТП России «Создание новых лекарственных средств методами химического и биологического синтеза», а также 0.1.90.00011555 и 0.1.90.40.009075 Российской академии наук «Синтез веществ, обладающих практически важной биологической активностью» и в соответствии с тематикой научных исследований университета (01.86.0-07.68.78).

Цель и задачи исследования: Обоснование применения новых производных пиримидина и его комплексных соединений для коррекции иммуно- и антитоксических эффектов при нитратной интоксикации. Для достижения поставленной цели сформулированы задачи по исследованию биологически активных соединений - новых производных пиримидинов.

На основе скрининга и сравнительного анализа на первичный иммунный ответ и антитоксический эффект среди производных пиримидина выбраны наиболее активный препарат ДППОМУ (дипиперидинодиоксипропилметилурацил) и комплексное соединение ДППОМУ+ левомицетин.

В связи с этим необходимо:

- определить острую токсичность и изучить влияние препарата на организм животных при длительном применении;

- раскрыть некоторые механизмы влияния на иммунитет;

- изучить влияние на резистентность организма к возбудителям инфекции;

- изучить противовоспалительную, антиульцерогенную активность;

- изучить эмбриотоксический и тератогенный эффекты;

- изучить влияние препарата на организм кур (гематологические, биохимические показатели, иммунную систему и процессы перекисного окисления липидов; качественные показатели яиц и инкубации);

- изучить клинико-биохимические показатели у гусей;

- изучить и разработать схему лечения при острой нитратной интоксикации (гематологические и биохимические показатели крови, химический состав мяса, яиц и жирной печени);

- провести гистологические и электронно-микроскопические исследования печени и двенадцатиперстной кишки.

Научная новизна Проведён скрининг шести вновь синтезированных производных пиримидина. Изучена зависимость иммунотропной и антитоксической активности от химического строения. Впервые раскрыт механизм иммунотропного и антитоксического действия ДППОМУ и его комплексных соединений. Установлен характер влияния ДППОМУ на гуморальный и клеточный иммунитет, резистентность к инфекции. Изучена острая и хроническая токсичность, эмбриотоксический и тератогенный эффекты, противовоспалительная и антиульцерогенная активность. Впервые изучено влияние ДППОМУ на продуктивность, сохранность, естественную резистентность организма кур. Впервые исследованы показатели обмена веществ у гусей в условиях Республики Башкортостан. Показаны морфофункциональные изменения в организме гусей при острой нитратной интоксикации и коррекция её с помощью ДППОМУ, а также выявлены основные механизмы нарушения обмена веществ, показатели крови, качества мяса и яиц. Впервые проведены гистологические, гистохимические и электронно-микроскопические исследования внутренних органов гусей.

Новизна прикладных разработок подтверждена решением о выдаче патента РФ от 20 марта 2008 г. «1,3 - Ди (3_пиперидино_2_гидроксипропил) - 6_метилурацил (ДППОМУ) для повышения сохранности и продуктивности птиц».

Обеспечено промышленное производство 1,3 - Ди (3_пиперидино_2_гидроксипропил) - 6_метилурацил (ДППОМУ) в ООО «Поливит» (г. Уфа).

Практическая ценность результатов исследований определяется тем, что ДППОМУ и комплексное соединение ДППОМУ+левомицетин эффективно стимулируют специфические и неспецифические факторы иммунитета, повышают резистентность к инфекции. Это позволяет предложить их в качестве иммуномодулирующего средства. Благодаря своим свойствам стимулировать регенерацию и противовоспалительную активность препарат может широко применяться в хирургии. На основании комплексного изучения токсического действия нитратов на организм сельскохозяйственных птиц научно обоснована и экспериментально доказана важность использования в рационах нового производного пиримидина ДППОМУ как эффективного детоксиканта нитрата натрия, снижающего негативные эффекты и положительно влияющего на структуру печени. Практическое значение имеют данные о морфофункциональном изменении печени и двенадцатиперстной кишки при острой интоксикации нитратами. Низкая токсичность, доступность и растворимость в воде делают препарат удобным в применении.

По результатам НИР разработана научная документация:

- Методические рекомендации по применению нового производного пиримидина в птицеводстве (одобрены научно-техническим советом ГНУ МНТЦ «Племптица» Россельхозакадемии 13 декабря 2007 г., протокол №7);

- Методические рекомендации по применению нового производного пиримидина в птицеводстве (утверждены Академиком-секретарём РАСХН А.М. Смирновым 8 июня 2008 г., протокол №4 от 4 июня 2008 г.)

- Методические рекомендации по применению нового производного пиримидина в гусеводстве Госветнадзором Республики Башкортостан 2008 г. (утверждены начальником управления ветеринарии при Министерстве сельского хозяйства Республики Башкортостан Бургановым Х.Р. 2 сентября 2008 г., протокол №3 от 5 марта 2008 г.);

- Инструкция по применению дипиперидинодиоксипропилметилурацила (утверждена управлением ветеринарии МСХ и П Республики Башкортостан от 25 августа 2008 г.)

Внедрение. Опытно-производственные испытания, проведённые на птицефабрике «Уфимская», «Башкирская», «Туймазинская», СПК «Усень» Туймазинского района Республики Башкортостан, подтвердили иммуностимулирующий и антитоксический эффекты препарата ДППОМУ и комплексных соединений.

Основные положение работы используются в учебном процессе на кафедре внутренних незаразных болезней, клинической диагностики и фармакологии Башкирского государственного аграрного университета; в Казанской государственной академии ветеринарной медицины, в Оренбургском государственном аграрном университете, в Ульяновской сельскохозяйственной академией, в Уральской государственной академии ветеринарной медицины.

Апробация работы. Результаты диссертационной работы доложены, обсуждены и одобрены на заседаниях Учёного совета, отчётных научно-практических конференциях Башкирского государственного аграрного университета (1993-2008 гг.); на региональных, Всероссийских и международных научно-практических конференциях (Москва, 1999, 2000, 2001, 2002, 2003, 2005, 2007; Воронеж, 1993, 1999, 2000, 2007; Санкт-Петербург, 1993, 1999, 2003, 2005; Чебоксары, 1994; Барнаул, 1995; Пенза, 1999; Троицк, 2002; 2007).

Публикации результатов исследований. Основные положения диссертации изложены в 61 печатной работе, в том числе в двух монографиях и решении о выдаче патента.

Структура и объём диссертации. Диссертация изложена на 296 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований (экспериментальная часть включает 19 разделов), обсуждения полученных результатов, выводов, предложений производству, библиографического списка и приложений. Работа включает 44 таблицы, 14 рисунков, 51 фотографию, 399 источника литературы, в том числе 51 зарубежных авторов. Приложение диссертации содержит документацию, подтверждающую диссертационный материал.

Основные положения, выносимые на защиту:

- взаимосвязь и зависимость химического строения и иммуномодулирующей активности новых производных пиримидина;

- фармакологический спектр и механизм иммуномодулирующего и антитоксического действия ДППОМУ;

- влияние на резистентность организма к возбудителям инфекции;

- степень безвредности нового иммуномодулятора ДППОМУ;

- особенность метаболизма у гусей при интоксикации нитратами;

- морфофункциональные изменения в организме гусей в результате действия ксенобиотиков;

- возможность использования ДППОМУ и комплексного соединения ДППОМУ+левомицетин для улучшения здоровья и продуктивности птиц.

2. Материал и методы исследований

Исследования токсико-фармакологических свойств новых производных пиримидина проводились на кафедре внутренних незаразных болезней, клинической диагностики и фармакологии Башкирского государственного аграрного университета, в Башкирской научно-производственной ветеринарной лаборатории г. Уфы, а также в условиях производства птицефабриках «Уфимская», «Башкирская», «Туймазинская», СПК «Усень» Туймазинского района Республики Башкортостан.

Новые производные пиримидина синтезированы в Институте органической химии Уфимского научного центра РАН под руководством академика РАН Толстикова Г.А.

Все исследуемые производные пиримидина вводились подопытным животным согласно выбранным дозам и схемам в зависимости от цели исследования.

Всего в опытах использовано: белых мышей - 1692; белых крыс - 2073; морских свинок - 24; собак - 15; кур - 9200; гусей - 1520; яиц сельскохозяйственных птиц - 2152.

Острую токсичность новых производных пиримидина проводили общепринятыми методами (Елизарова О.Н., 1971, Саноцкий И.В., 1970).

Для изучения влияния ДППОМУ на резистентность к инфекции моделировали инфекцию у белых неинбредных мышей. В каждой серии опытов суточные культуры патогенных микроорганизмов (золотистый стафилококк, кишечная палочка, протей, синегнойная палочка) вводили внутрибрюшинно мышам, изучаемые соединения вводили животным в последующие 3 дня после заражения. Эффективность исследуемых соединений оценивали по выживаемости и продолжительности жизни лабораторных животных.

Противовоспалительная активность комплекса была изучена на моделях формалинового, каррагенинового, лидокаинового, белкового воспалений по общепринятой методике (Тринус Ф.П., 1976).

Изучение противоязвенного действия ДППОМУ осуществляли на моделях аспириновых и индометациновых язв (Аничков С.В., Заводская И.С., 1965).

При изучении гепатопротекторного действия ДППОМУ, исследуемое соединение вводили энтерально белым мышам в дозе 50 мг/кг. Затем в желчный проток вставляли канюлю и осуществляли сбор желчи через 1, 2, 3 часа. Количество собранной желчи выражали в мг/мин.

Морфологические исследования крови проводили по общепринятым методикам. Биохимические исследования крови проводили согласно следующим методикам: общий белок - рефрактометрическим медом Рейсса; общий кальций - комплексно-метрическим методом Е.В. Вичева и А.Т. Каракашева в модификации В.В. Митюшина; неорганический фосфор - по методу Бригса в модификации Ивановского С.А.; каротин определяли модифицированным методом Рачевского; витамин Е определяли колориметрическим методом по Биери (в модификации ВНИИНБЖ) (А.А. Кудрявцев, Кудрявцева В.А., 1975; Андросов с соавт., 1981; И.П. Кондрахин с соавт., 1985).

Число АОК определяли по методу локального гемолиза в жидкой фазе (Jeme N.K., Nordin A.A., 1963, в модификации Сunninqham, 1965).

Влияние соединений на функциональную способность Т-эффекторов изучали, создавая реакцию гиперчувствительности замедленного типа (РГЗТ) к динитрофторбензолу (ДНФБ) (J. Knop et al., 1982).

Идентификацию Т - и В-лимфоцитов проводили методом постановки реакции розеткообразования. Учёт розеткообразующих клеток проводили под иммерсионной системой микроскопа. Учитывали все клетки, присоединившие три и более эритроцитов. Определяли их процент к общему числу лимфоцитов и содержание абсолютного числа в 1 мм³ (мкл) крови.

Оценку фагоцитарной активности псевдоэозинофилов проводили по методике Л. 3. Клечикова (1967), при этом определяли фагоцитарное число (ФЧ) и фагоцитарный индекс (ФИ).

Лизоцимную активность крови определяли фотоэлектроколориметрическим методом по гемолизирующей активности суточной культуры Мiсrococcus Lysodecticus (П.А. Храбустовскпй, 1974). Уровень пропердина в крови определяли по методу, основанному на его свойстве образовывать комплекс с зимозаном при 15⁰С, который при 37⁰С инактивирует гемолитическую активность комплемента сыворотки крови морской свинки.

Тест спонтанного и индуцированного латексом восстановления нитросинего тетразолия ставили в объёме 0,2 мл в центрифужных пробирках. К 0,2 мл крови, помещённой в центрифужные пробирки добавляли: в первую - 0,2 мл фосфатносолевого буферного раствора (ФСБ) и 0,04 мл НСТ; во вторую - 0,2 мл подготовленной взвеси латекса и 0,04 мл НСТ. Смеси в пробирках инкубировали 30 минут при температуре 37⁰С, регулярно встряхивая. Затем центрифугировали при 1000 об/мин 5 минут. Надосадочную жидкость сливали, суспензировали в 0,1 мл ФСБ и готовили мазки. Анализ спонтанного (в первой пробирке) и индуцированного латексом (во второй пробирке) восстановления НСТ проводили под иммерсионной системой микроскопа путём подсчёта числа активированных, содержащих тёмно-фиолетовые зёрна формазана, псевдоэозинофилов в процентах (R.F. Shopf, J. Mattar et al., 1984).

Активность комплемента устанавливали по общепринятой методике (Э.А. Имельбаева, В.В. Сперанский с соавт., 1991).

Изучение влияния ДППОМУ на рост и сохранность цыплят, развитие внутренних органов осуществляли путем сопоставления данных по динамике изменения живой массы. Для изучения формы, размеров, массы и топографии органов использовали анатомо-морфологический метод.

Определение толщины и относительной массы скорлупы, индекса белка и желтка определяли согласно общепринятым в птицеводстве методам.

Содержание витамина А в желтке определяли путем реакции с насыщенным хлороформенным раствором трёххлористой сурьмы с уксусным ангидридом с последующей колориметрией. Содержание рибофлавина в белке и желтке - по флуоресценции измеренной на флюорометре.

У крыс и гусей интоксикацию нитратами воспроизводили путем введения через зонд в желудок водного раствора натрия нитрата из расчета 500 мг/кг, ежедневно дополнительно давали ДППОМУ в дозах, соответственно, 50 и 100 мг/кг один раз в сутки в течение 7 и 14 дней.

Для гистологических и гистохимических исследований кусочки органов фиксировали в 10%-ном водном растворе нейтрального формалина, обезвоживали в серии спиртов возрастающей концентрации, заливали в парафин по общепринятой методике. Срезы после депарафинации окрашивали гематоксилином Майера и эозином по Романовскому-Гимза, Ван Гизону по общепринятым методам. Срезы, полученные на замораживающем микротоме, окрашивали Суданом III или Суданом чёрным В для выявления липидов (Меркулов Г.А., 1969). Для гистохимических исследований кусочки тканей фиксировали в жидкости Корнуа в модификации Лилли (абсолютный этанол - 57 мл, ледяная уксусная кислота - 25 мл). Проводили ШИК-реакцию на гликоген по Мак-Манусу (Луппа Х., 1980) (контроль - амилаза слюны). Белок выявляли расвором амидочёрного 10В (Кононский А.И., 1976). Микроскопические исследования проводились с использованием светового микроскопа JENAVAL фирмы «CARL ZEISS» (Германия).

Для исследования под электронным микроскопом образцы фиксировали 4% параформальдегидом в буфере Миллонига с последующей дофиксацией 2% глютаровым альдегидом и четырёхокисью осмия, трёхкратно промывали в фосфатном буфере, обезвоживали в спиртах восходящей концентрации и ацетоне и заливали в смесь аралдитовых смол (Уикли Б., 1975). Срезы готовили на ультратоме LKB и просматривали под электронным микроскопом «Тесла» - BS 500 и JEM_100S.

Статистическую обработку цифровых данных проводили на РС Рentium IV с использованием прикладной программы Мiсгоsoft Ехсel, включая подсчёт средних величин (М), средней ошибки (m), среднеквадротических отклонений выборки (б), определение значения достоверности Стьюдента (Р.Б. Стрелков, 1996).

3. Результаты собственных исследований

Синтез новых производных пиримидина в зависимости от химической структуры

Допускаются два механизма действия пиримидинов - прямой, при их непосредственном влиянии на клетки и опосредованный - через активацию эндокринной системы, путём повышения продукции эндогенных кортикостероидов. Последний механизм, по-видимому, обуславливает противовоспалительное и антиаллергическое действие пентоксила и метилурацила (Земсков А.М., 1984).

Доказано, что ткани используют свободные пиримидиновые основания и их производные для синтеза нуклеиновых кислот. При этом в большинстве тканей присутствуют ферменты как катаболизма, так и анаболизма этих оснований. Как физиологические, так и синтетические пиримидиновые основания могут оказывать определённое влияние на активность ферментных систем, ответственных за синтез или распад нуклеиновых кислот или в сторону анаболизма или в сторону катаболизма. Направленность реакции, по-видимому, существенно зависит от структуры вводимого соединения.

Установлена связь химического строения и активности производных пиримидина. Наиболее активные соединения имеют при С₄ группу - СН₃ или - NН₂ и - ОН или - СН₃ при С₅, активны также и 6_оксипиримидины (Лазарева Д.Н., Волкова С.С., Исмагилова А.Ф. и др., 1995). Эффективность препаратов возрастает также при замене оксигруппы при С₂ или С₆ на аминогруппу (Кривоногов В.П., Толстиков Г.А., Исмагилова А.Ф., 1993).

Анализ зависимости «структура-активность» нового химического соединения ДППОМУ проведён методом вариационной статистики с использованием критерия t_Стьюдента; кроме того, сопоставление «структура-активность» в ряду производных пиримидина проводили методом распознавания образцов с использованием фрагментарного кодирования структуры, химических соединений и системы автоматического конструирования химических структур с заданными свойствами.

Пиримидиновые ациклонуклеозиды получены взаимодействием 1,3 - бис (2_гидрокси_3_хлорпропил) урацила или 1,3 - бис (2_гидрокси_3_хлорпропил) - 6_метилурацила с левомицетином или пиперидином.

Чистота и строение полученных соединений доказаны ИК-, УФ-, ЯМР 'Н и ¹³С спектрами, а также элементным анализом.

Нами изучена сравнительная биологическая активность новых производных пиримидина на моделях антимикробной, противовоспалительной и противоязвенной активности. Для дальнейших исследований выбрано соединение - дипиперидинодиоксипропилметилурацил (ДППОМУ).

Токсикологическая оценка ДППОМУ

Производные пиримидина относят к малотоксичным соединениям. По данным Лазарева Н.В. и Фелистович Г.И (1964), мыши переносят метилурацил в дозе 10 г./кг без изменений в массе и поведении. Пентоксил при подкожном введении лишь в дозе 5 г/кг вызывал гибель мыши через сутки. Острая токсичность новых производных пиримидина определялась на белых беспородных мышах обоего пола, массой 18-20 г. при введении в желудок определённой дозы.

Параметры острой токсичности вычислялись по методу Кербера.

Острая токсичность изучаемых соединений колебалась от 840,0 до 5500,0 мг/кг.

При изучении острой токсичности новых производных пиримидина (таблица 1) выявлено, что LD₅₀ 1,3 - бис (2_гидрокси_3_левомицетинпропил) - 6_метилурацила (ДППОМУ+левомицетин) при введении внутрь для мышей составляет 5500,0± 300,0 мг/кг, для 1,3 - бис (2_гидрокси_3_пиперидинопропил) - 6_метилурацил+левомицетин (ДППОМУ и левомицетин) она составила 4800,0± 200,0 мг/кг., а для 1,3 - Ди (3_пиперидино_2_гидроксипропил) - 6_метилурацил (ДППОМУ) - 4450,0 ±491,0 мг/кг.

Таблица 1 Острая токсичность новых производных пиримидина

№ п/п	Лабораторный шифр	Химическая формула	Название соединения	LD50 мг/кг
1	53-98		1,3 - бис (2_гидрокси_3_левомицетинпропил) - 6_метилурацил (ДППОМУ+ левомицетин)	5500,0± ±300,0
2	55-98		1,3 - бис (2_гидрокси_3_пиперидинопропил) - 6_метилурацил + левомицетин (ДППОМУ и левомицетин)	4800,0± ±200,0
3	22-97		1,3 - бис (2_гидрокси_3_диметиламинопропил) - 6_метилурацил	1050,0± ±200,0
4	23-97		1,3 - бис (3_диэтиламино_2_гидроксипропил) - 6_метилурацил	840,0± ±90,0
5	29-98		1,3 - бис (2_гидрокси_3_пиперидинопропил) - 6_метилурацил+ампиокс (ДППОМУ и ампиокс)	2810,0± ±200,0
6	21-30		1,3 - Ди (3_пиперидино_2_гидроксипропил) - 6_метилурацил (ДППОМУ)	4450,0± ±491,0

Примечание: Р<0,05

При сравнительном изучении токсичности шести производных пиримидина (ДППОМУ + левомицетин, ДППОМУ и левомицетин, 1,3 - бис (2_гидрокси_3_диметиламинопропил) - 6_метилурацил, 1,3 - бис (3_диэтиламино_2_гидроксипропил) - 6_метилурацил, ДППОМУ и ампиокс и ДППОМУ показано, что наибольшей токсичностью обладает 1,3 - бис (3_диэтиламино_2_гидроксипропил) - 6_метилурацил (840,0±90,0 мг/кг), а минимальной - ДППОМУ+левомицетин (5500,0±300,0 мг/кг). Остальные пиримидиновые производные по параметру LD₅₀ находились в этом интервале.

Таким образом, показано, что соединение ДППОМУ, согласно ГОСТ 12.1.00.7-76, относится к 4 классу опасности. Коэффициент кумуляции составил 2.

Хроническая токсичность ДППОМУ была изучена на 15 собаках (по 5 животных в каждой группе). ДППОМУ животные 1_ой и 2_ой опытных групп получали в двух дозах - 50 и 100 мг/кг, соответственно, в течение шести месяцев.

Колебания СОЭ, количества лейкоцитов, эритроцитов у опытных и контрольных животных были одинаковыми. Повышение эритроцитов у контрольных животных и снижение их числа у опытных было недостоверным по отношению к исходным данным. Через 6 месяцев появилось достоверное различие в содержании эритроцитов и гемоглобина (Р < 0,05). Однако эти показатели находились в пределах физиологической нормы для этого вида животных. Так, уровень эритроцитов составлял в начале опыта 6,11±0,57 х 10¹²/л (опытная группа) и 5,68±0,56 х 10¹²/л (через 6 месяцев), тогда как в контрольной группе он составлял 6,83±0,32 х 10¹²/л (начало опыта) и 7,40±0,30 х 10¹²/л (в конце опыта).

Уровень сахара, общего белка, общего холестерина и билирубина в сыворотке крови в опытной и контрольной группах не изменялся во все сроки исследования.

Для изучения эмбриотоксического действия определяли предимплантационную гибель плодов (разность между числом жёлтых тел в яичниках и количеством мест имплантации в матке, в процентах от общего числа жёлтых тел), постимплантационную гибель эмбрионов (разность между количеством мест имплантации и числом живых плодов в матке, в процентах) и общую эмбриональную смертность (разность между числом жёлтых тел беременности и живыми плодами, в процентах). При введении ДППОМУ в дозах 50, 100 и 150 мг/кг внутрь один раз в сутки в течении 20 дней нами установлено, что предимплатационная гибель плодов в опытных группах составила, соответственно, 5,700,59%; 5,800,57% и 6,100,59%, а в контрольной составила 6,800,60%. Постимплантационная гибель в 1_й, 2_й и 3_й группах составила 6,800,59%, 6,850,59%, 6,920,62%, соответственно, в контроле - 9,200,75%. Масса эмбрионов составила в 1_й группе - 3700,06,90 мг; во 2_й группе - 3700,07,20 мг; в 3_й группе 3700,06,90 мг и в контрольной группе - 3600,02,90 мг.

ДППОМУ в дозе 50, 100 и 150 мг/кг при применении в течение 20 дней не обладает эмбриотоксическим и тератогенным действием, а также не оказывает влияние на физическое развитие, на двигательную и ориентировочную активность потомства.

О детоксикационной функции почек судили по пробе Квика-Пытыля (модификация Степановой, 1962). По содержанию гиппуровой кислоты в суточной моче достоверной разницы между опытной и контрольной группами не отмечалось.

Изучаемый препарат, нанесённый на поверхность кожи животных, не вызывал местного раздражающего действия и общей реакции организма.

Фармакология производных пиримидина

В эксперименте in vivo применение комплекса ДППОМУ + левомицетин оказывало модулирующее влияние на характер и интенсивность иммунного ответа животных на эритроциты барана (ЭБ).

Введение соединения ДППОМУ в течение 7 дней на фоне иммунизации оптимальной иммуногенной дозой ЭБ показало, что его применение достоверно увеличивало количество антителообразующих клеток (в 2,35 раза больше, по сравнению с контрольным значением) в селезёнке. Использование препарата сравнения - оксиметилурацила в дозе 1/10 от LD₅₀ - выявило его большую эффективность в отношении стимуляции антителогенеза на 17,3% по-сравнению с контролем и в 2,0 раза (на 100,6%) меньше по-сравнению с ДППОМУ. Другой препарат сравнения - левомицетин - напротив, оказывал тормозящее влияние на эти процессы (на 11,93% ниже контрольных цифр).

При оценке влияния ДППОМУ+ левомицетин на формирование гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) к динитрофтробензолу (ДНФБ) выявлено, что применяемый комплекс в дозе 50 мг/кг достоверно не изменяет реакцию ГЗТ.

Известно, что воспалительный компонент в действии ДНФБ на ткани играет существенную роль. По нашему мнению, в данном случае проявился противовоспалительный эффект, присущий пиримидинам. Это доказывает то, что производные пиримидина ослабляют гиперчувствительность замедленного типа к ДНФБ и не влияют на ГЗТ к эритроцитам барана (ЭБ) (Богданова А.Ш., Лазарева Д.Н., 1984,1985; Рябчинская Л.А., Лазарева Д.Н., 1983; Бакирова З.А., 1990).

Применяемый в качестве препарата сравнения оксиметилурацил достоверно увеличивал интенсивность реакции ГЗТ на 52,3%, а левомицетин обладал противоположным вектором действия - уменьшая ГЗТ на 48,4%. Изучаемый комплекс, состоящий из пиримидинового производного сшитого с левомицетином, достоверно отличался от препаратов сравнения по действию на ГЗТ, и их разнонаправленность векторов данного комплекса взаимно ингибировалась.

Таким образом, изучаемое соединение ДППОМУ обладает иммунотропными свойствами, основной вектор иммунотропного эффекта заключается в иммуностимулирующем действии. Из этого можно сделать вывод, что ДППОМУ является иммуностимулятором первичного звена иммунитета, максимальный иммунотропный эффект которого проявляется в дозе 50 мг/кг. Дальнейшее увеличение дозы указанного препарата не приводит к усилению стимуляции иммунного ответа.

На основании вышесказанного можно полагать, что стимуляция иммунной системы под влиянием соединений ДППОМУ осуществляется с участием различных механизмов, в реализации которых задействовано положительное воздействие пиримидинов на лейко- и иммунопоэз, а также функциональную активность иммуноцитов, скорректированную лёгким тормозящим (ограничивающим) действием, что доказывается положительной реакцией ГЗТ к ДНФБ.

При моделировании сепсиса, вызванного золотистым стафилококком у белых неинбредных мышей, показано, что все пиримидиновые производные достоверно увеличивают время жизни животных при этой инфекции. По эффективности влияния на этот показатель они распределились в следующем порядке по возрастанию резистентности мышей: оксиметилурацил, ДППОМУ и ампиокс, ДППОМУ и ДППОМУ+левомицетин (на 52,38%, 61,91%, 71,43% и 133,34%, соответственно) по сравнению с контрольной группой (рис. 1).

Эффективность лечения комплексом ДППОМУ+левомицетин, также как и у левомицетина, при этом составила 80%, а у остальных пиримидиновых производных 60%, 50% и 50% (соответственно, ДППОМУ, ДППОМУ и ампиокс, оксиметилурацил). Таким образом, изучаемый комплекс ДППОМУ+левомицетин является наиболее эффективным по сравнению с другими изучаемыми пиримидиновыми производными.

Препарат сравнения - левомицетин по эффективности сопоставим с ДППОМУ, но менее эффективен по отношению к его комплексу с ДППОМУ (на 20,40%). Таким образом, среди всех исследованных препаратов, комплекс ДППОМУ+левомицетин обладал максимальным защитным эффектом по отношению к стафилококковому сепсису, что, по-видимому, связано с взаимным потенцирующим действием обеих составляющих этого комплекса.

При моделировании сепсиса, вызванного кишечной палочкой у белых мышей, показано, что, как и в случае с золотистым стафилококком, все пиримидиновые производные достоверно увеличивают время жизни животных при этой инфекции. По эффективности их влияния на этот показатель оксиметилурацил и ДППОМУ оказывали одинаковое воздействие в защите от экспериментальной инфекции (продолжительность жизни мышей была на 86,11% выше по сравнению с контрольной группой).

Необходимо отметить, что комплекс ДППОМУ+левомицетин значительно превосходил и остальные изученные пиримидиновые производные (ДППОМУ и ОМУ на 28,36%, а ДППОМУ и ампиокс на 115%). Выживаемость мышей, получавших комплекс, на 138,89% превышала этот показатель животных контрольной группы.

Эффективность лечения комплексом ДППОМУ+левомицетин, также как и у левомицетина, при этом составила 70%, а у остальных пиримидиновых производных - 40%, 50%, 20% (соответственно ДППОМУ, ОМУ, ДППОМУ и ампиокс). Таким образом, изучаемый комплекс ДППОМУ+левомицетин является наиболее эффективным в отношении к кишечной палочке по сравнению с другими изучаемыми пиримидиновыми производными.

Препарат сравнения - левомицетин по эффективности достоверно не отличается от защитного эффекта ДППОМУ и оксиметилурацила, но он оказывал меньший эффект по отношению к комплексу ДППОМУ+левомицетин (на 17,44%). Таким образом, среди всех исследованных препаратов, комплекс ДППОМУ+левомицетин обладал максимальным защитным эффектом в отношении к сепсису, вызванному E. Coli.

На фоне сепсиса у белых неинбредных мышей, вызванного протеем вульгарис, изучалась защитная эффективность комплекса ДППОМУ+левомицетин. Нами установлено, что и в этом случае все пиримидиновые производные достоверно увеличивают время жизни животных. По их эффективности влияния на этот показатель они распределились в следующем порядке: ДППОМУ и ампиокс, оксиметилурацил, ДППОМУ и ДППОМУ+левомицетин (продолжительность жизни мышей на 13,64%, 61,36%, 63,64% и 90,91% выше по сравнению с контрольной группой, соответственно). Эффективность лечения комплексом ДППОМУ+левомицетин при этом составила 80%, а у остальных пиримидиновых производных - 50%, 40% и 20%; (соответственно, ДППОМУ, оксиметилурацил, ДППОМУ и ампиокс). Таким образом, изучаемый комплекс ДППОМУ+левомицетин является наиболее эффективным в отношении кишечной палочки по сравнению с другими изучаемыми пиримидиновыми производными.

При сравнении защитного эффекта комплекса ДППОМУ+левомицетин и препаратов пиримидинового ряда: ДППОМУ, оксиметилурацила, ДППОМУ и ампиокс, выявлено, что изучаемый комплекс оказывал достоверно более значимое действие на поддержание организма от влияния протейной инфекции (на 14,3%, 15,5% и 40,5% соответственно). Однако, видимых различий между эффективностью ДППОМУ и оксиметилурацила на течение этой инфекции не обнаружено. Аналогичная картина наблюдалась при изучении сравнительной эффективности левомицетина и комплекса ДППОМУ+левомицетин. Показано, что левомицетин и комплекс ДППОМУ+левомицетин по эффективности воздействия на выживаемость между собой достоверно не отличались. Таким образом, среди всех исследованных препаратов, комплекс ДППОМУ+левомицетин, а также официнальный препарат левомицетин обладают максимальным защитным эффектом в отношении к сепсису, вызванному протеем вульгарис.

Нами изучено влияние комплекса ДППОМУ+левомицетин на продолжительность жизни животных, заражённых синегнойной палочкой. Так, изучаемый комплекс достоверно увеличивал продолжительность жизни мышей на 5,6 суток (155,56%), по сравнению с контрольным животными.

Менее значимо повышали выживаемость мышей при синегнойной инфекции левомицетин (на 125%), ДППОМУ (на 105,56%), оксиметилурацил и ДППОМУ и ампиокс (на 86,11%) по сравнению со значением выживаемости в контрольной группе. Наиболее близко к комплексу ДППОМУ+левомицетин по эффективности находится левомицетин. Этот препарат оказался менее действенным на 12%. ДППОМУ и оксиметилурацил оказались ещё более слабыми препаратами в отношении резистентности к синегнойной инфекции (на 19,6% и 27,2%, соответственно) по сравнению с комплексом ДППОМУ+левомицетин.

Таким образом, при использовании комплекса ДППОМУ+левомицетин эффект значительно выше, чем при применении отдельных пиримидинов, которые в этих условиях повышают резистентность к инфекции лишь при профилактическом применении.

Большая эффективность антибиотикотерапии при введении пиримидинов связана, видимо, не только со стимуляцией иммунитета и гемопоэза, но и с усилением антимикробного действия антибиотиков. Это, по-видимому, обусловлено с влиянием пиримидинов на угнетение роста микроорганизмов, что выражается в задержке роста кишечной палочки и стафилококка.

Исследование влияния комплекса ДППОМУ+левомицетин на воспаление, вызванное каррагенином, у белых половозрелых неинбредных мышей показало, что изучаемый комплекс обладает выраженным антифлогистическим действием (таблица 2).

Так, комплекс ДППОМУ+ левомицетин в дозе 50 мг/кг достоверно угнетал развитие отёка на 24,15% по сравнению с ортофеном. Антифлогистическое действие левомицетина в дозе 50 мг/кг оказалось на 18,12% менее эффективено, чем у ортофена. Препарат сравнения, из группы нестероидных противовоспалительных средств - ортофен, оказывал антифлогистическое действие, достоверно не отличающееся от противовоспалительного действия, оказываемого комплексом ДППОМУ+левомицетин в дозе 100 мг/кг (на 35,2% и 33,8% меньше контрольных значений). Однако, ортофен, левомицетин, а также комплекс ДППОМУ+левомицетин в дозе 100 мг/кг оказывали менее значимое антифлогистическое действие на воспалённые ткани, нежели комплекс ДППОМУ+левомицетин в дозе 50 мг/кг (на 24,53%, 46,64% и 29,29% соответственно достоверно меньше). При изучении «% уменьшения воспаления от контрольных значений» выявлено, что интенсивность уменьшения отёка по сравнению с препаратами сравнения распределилась так: комплекс ДППОМУ+левомицетин в дозе 50 мг/кг более значимо оказывал антифлогистическое действие, увеличение дозы вводимого комплекса до 100 мг/кг привело к уменьшению эффективности противовоспалительного действия (на 33,22% по отношению к левомицетину и на 29,29% по сравнению с комплексом ДППОМУ+левомицетин в дозе 50 мг/кг). Ортофен на 5,4% более эффективно увеличивал этот показатель, чем левомицетин и на 8,5% отставал от комплекса ДППОМУ+левомицетин в дозе 50 мг/кг. Таким образом, показано, что из всех изучаемых препаратов наиболее выраженным антифлогистическим действием обладает комплекс ДППОМУ+левомицетин в дозе 50 мг/кг, и дальнейшее увеличение дозы этого комплекса нецелесообразно, так как ведёт к снижению противовспалительного действия.

Таблица 2 Изучение антифлогистического действия комплекса ДППОМУ+левомицетин на модели каррагенинового воспаления

№ п/п	Группа	Доза, мг/кг	Количество животных	% увеличения отёка	% уменьшения воспаления от контроля
1	ДППОМУ	50	8	28,7±1,9	35,2±2,2
2	ДППОМУ+левомицетин	100	8	34,5 ±1,2*$	33,8 ±1,4#$
3	ДППОМУ+левомицетин	50	8	29,3 ±2,5*#	43,7 ±7,0#
4	Левомицетин	50	8	36,6 ±3,3*$	29,8± 4,4$
5	Ортофен	8	8	33,8 ±1,2*$	35,2± 2,2#$
6	Контроль	-	8	52,1± 4,5	-

Примечание:* - различия с контрольной группой статистически достоверны, (p<0,05);

# - различия с группой ДППОМУ+левомицетин статистически достоверны (p<0,05).

$ - Различия с группой получавшей ДППОМУ+левомицетин в дозе
50 мг/кг статистически достоверны (p<0,05).

При исследовании антифлогистической активности комплекса ДППОМУ+левомицетин на модели воспаления, вызванного адреномиметиком - лидокаином, получены аналогичные результаты. Так, комплекс ДППОМУ+левомицетин в дозе 50 мг/кг достоверно угнетал развитие отёка на 3,38% по сравнению с ортофеном. Левомицетин в дозе 50 мг/кг оказался менее эффективен по антифлогистическому действию (на 47,35% больше выраженность воспалительного отёка, чем при применении ортофена).

Препарат сравнения из группы нестероидных противовоспалительных средств - ортофен оказывал антифлогистическое действие достоверно более сильное, чем комплекс ДППОМУ+левомицетин в дозе 100 мг/кг на 8,8%. При этом отмечено, что левомицетин, а также комплекс ДППОМУ+левомицетин в дозе 100 мг/кг, оказывал значительно менее значимое антифлогистическое действие на воспалённые ткани, нежели комплекс ДППОМУ+левомицетин в дозе 50 мг/кг (на 21,0% и 10,2% соответственно достоверно меньше). При изучении «% уменьшения воспаления от контрольных значений» выявлено, что интенсивность уменьшения отёка по сравнению с препаратами сравнения распределилась так: комплекс ДППОМУ+левомицетин в дозе 50 мг/кг - на 3,38% более значимо оказывал антиульцерогенное действие, увеличение дозы вводимого комплекса до 100 мг/кг привело к уменьшению эффективности противовоспалительного действия на 10,8% по отношению к левомицетину и меньшей эффективности на 10,8% увеличился по сравнению с комплексом ДППОМУ+левомицетин в дозе 50 мг/кг. Ортофен по антифлогистическому действию по этому показателю достоверно не отличался от действия комплекса в дозе 50 мг/кг, но оказывал более мощное воздействие, чем левомицетин, на 21,0%.

Таким образом, показано, что из всех изучаемых препаратов наиболее выраженным антифлогистическим действием обладает комплекс ДППОМУ+левомицетин в дозе 50 мг/кг, и дальнейшее увеличение дозы этого комплекса нецелесообразно, так как это ведёт к снижению противовоспалительного действия.

Производные пиримидина как антифлогистики отличаются от других противовоспалительных средств, хотя в механизме их противовоспалительного действия стимуляция коры надпочечника имеет определённое значение (Грех И.Ф., 1958; Волощенко О.И., 1979).

В отличие от гормонов коры надпочечников пиримидины, ослабляя экссудацию, более значительно подавляют альтернативно-некротические изменения в тканях, стимулируют иммунитет и усиливают процессы репаративной регенерации.

Впервые Мещерская-Штейнберг К.А. показала, что метилурацил способствует более быстрому заживлению экспериментальных язв желудка. Терапевтический же эффект пиримидинов при различных заболеваниях желудочно-кишечного тракта, в том числе при язвенной болезни, подтверждён в клинике (Ланда А.Л., 1961). Для изучения наличия противоязвенной активности у изучаемого соединения ДППОМУ нами были проведены опыты на модели аспириновых язв у белых половозрелых неинбридных крыс-самцов.

При моделировании аспириновых язв у крыс показано, что комплексноесоединение ДППОМУ+левомицетин в дозе 50 мг/кг обладает выраженной антиульцерогенной активностью. Так, при его применении, индекс изъязвления уменьшался с 6,16 (в группе контроля) до 4,0, а противоязвенная активность составила 1,31.

Карбеноксолон - препарат, обладал мощным антиульцерогенным действием и имел максимальное язвозаживляющее действие. При его введении наблюдалось минимальное количество изъязвлений - 3,6, и противоязвенная активность равнялась 1,7, что в 1,3 раза больше, чем активность изучаемого комплекса.

Изучение результатов применения левомицетина в качестве ульцеропротектора выявило, что достоверных различий с группой контроля не обнаружено и изучаемое соединение значительно превосходит левомицетин по противоязвенной активности (на 16,96%).

Наблюдение за группой, получавшей ДППОМУ, показало, что он по силе антиульцерогенного действия (на 30% ниже, чем у карбеноксолона) находится между изучаемым комплексом ДППОМУ+левомицетин и левомицетином. Однако, было отмечено, что противоязвенное действие соединения более мягкое, чем у карбеноксолона.

Эффективность лечения производными пиримидина при язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки отмечают многие клиницисты (Баркаган З.С., Свистунова И.А., 1970; Гершанович М.Л., 1963), что подтверждает наш результат экспериментов. Внедрение новых высокоэффективных в отношении противоязвенной активности производных пиримидина в практику ветеринарии и медицины может дать значительный экономический рост народного хозяйства.

Пиримидины способствуют более быстрому восстановлению функции печени и её морфологической структуры при остром и хроническом отравлении гепатотропными ядами (Арзяева Е.А., 1966; Грех И.Ф., Малеева З.З., 1968; Нацюк М.В., 1970).

В основе терапевтической эффективности пиримидинов в отношении гепатопротекторного действия лежат общеизвестные механизмы регуляции биосинтеза нуклеатов по принципу обратных связей. Избыток конечных продуктов синтеза пуринов и пиримидинов ингибирует ключевые ферменты начальных этапов образования нуклеотидов «de novo» (посттранскрипционный уровень регуляции), тогда как в регуляции киназных реакций большое место занимает собственный генетический уровень (Лазарев Н.В., 1961).

Среднее количество выделенной желчи при применении ДППОМУ+левомицетин на модели гепатита, вызванного четырёххлористым углеродом, составило 35,3±2,8 мг, что на 86,77% выше по сравнению с контролем, на 25,62%, 72,20% и 48,95% по сравнению с ДППОМУ, левомицетином и оксиметилурацилом, соответственно. На модели алкогольного гепатита комплекс ДППОМУ+левомицетин обладает более выраженным желчегонным действием на 59,32% по сравнению с контролем, а также на 4,68%, 14,86% и 37,33% по сравнению с ДППОМУ, левомицетином и оксиметилурацилом, соответственно.

Разработка показаний к применению производных пиримидина в животноводстве и ветеринарии

Изучение эффективности нового производного пиримидина - ДППОМУ проведены нами при нитратной интоксикации, иммунодефицитах, в хирургии. Изучено влияние препарата на выводимость и сохранность цыплят.

Опыты проводили на половозрелых белых беспородных крысах-самцах массой тела 200-220 г., разделённых на 6 групп (1 контрольная и 5 опытных). Острую нитратную интоксикацию воспроизводили путём однократного введения через зонд в желудок водного раствора натрия нитрата из расчёта 500 мг/кг, а животным двух групп ежедневно дополнительно давали ДППОМУ в дозах, соответственно, 50 и 100 мг/кг один раз в день в течение 7 и 14 суток, крысы одной опытной группы после затравки получали только изотонический раствор натрия хлорида. Контролем служили интактные грызуны.

Нами установлено, что препарат ДППОМУ снижает отрицательное действие нитрата натрия прежде всего за счёт уменьшения последствий развившейся гипоксии. На 7_е сутки после отравления это проявлялось слабовыраженной белково-жировой дистрофией гепатоцитов и отсутствием некротических изменений. К 14_м суткам структура органов пищеварения почти полностью нормализуется, несмотря на сохранившиеся на протяжении опыта признаки венозного полнокровия и зернистой дистрофии гепатоцитов центральных зон долек.

При исследовании биохимических показателей крови нами установлено, что у животных, которым вводили ДППОМУ в дозе 50 и 100 мг/кг на протяжении опыта, содержание общего белка, неорганического фосфора, общего кальция, альбумина, альфа-, бета- и гамма-глобулинов повышалось, хотя эти показатели оставались в пределах физиологической нормы (Р < 0,05).

Работы ряда исследователей показывают, что печень и двенадцатиперстная кишка являются основными органами, которые чаще всего поражаются нитратами (Т.Д. Азарных, Е.И. Серик, 1989; П.И. Филатов, 1989; В.В. Волощенко, 1991, 1992).

Опыты проведены на клинически здоровых гусятах в возрасте от 1 до 3 месяцев. Формирование контрольной и опытной групп осуществляли по принципу аналогов. Гусятам опытной группы задавали нитрат натрия в форме раствора внутрь из расчёта 500 мг/кг живой массы. Моделирование острого нитратного отравления проводили в день эксперимента. Забой гусят проводили через 12 часов после затравки нитратом натрия. В ходе исследований изучали гематологические, биохимические показатели крови и определяли качественные показатели мяса.

Установлено, что через 12 часов после дачи нитрата натрия у опытных гусят всех возрастов содержание гемоглобина в крови уменьшается. Особенно хорошо выражена реакция на действие нитратов в возрасте 2_х и 3_х месяцев. У гусят 2 месячного возраста количество гемоглобина понижалось со 115,3 ± 2,17 г./л до 102,0 ± 1,15 г./л, а в возрасте 3 месяцев - со 118,5 ± 0,44 г./л до 110,5 ± 2,58 г./л.

Количество эритроцитов в крови опытных гусей при острой интоксикации нитратами повышалось в возрасте 1_го и 3_х месяцев. Так, в месячном возрасте их содержание составляло 2,01 ± 0,03 х 10¹²/л (контроль), а в опытной 2,11 ± 0,07 х 10¹²/л. В 3 месяца - 2,72 ± 0,01 х 10¹²/л в контроле и 2,92 ± 0,03 х 10¹²/л в опыте. В возрасте 2_х месяцев, наоборот, снижалось содержание эритроцитов в крови: с 2,53 ± 0,05 х 10¹²/л (контроль) до 2,08 ± 0,08 х 10¹²/л (опыт).

Результаты исследования содержания лейкоцитов в крови показывают, что их количество во все месяцы опыта повышалось в опытных группах по сравнению с контрольной. Так, в возрасте 1_го месяца количество лейкоциты у контрольных гусей составляло 45,18 ± 0,64 х 10⁹/л, а в опытной группе - 50,0 ± 1,12 х 10⁹/л, в 2 месяца - 52,70 ± 0,33 х 10⁹/л (контроль) и 60,03 ± 0,18 х 10⁹/л (опыт); в 3 месяца - 47,19 ± 0,47 х 10⁹/л (контроль) и 49,30 ± 0,61 х 10⁹/л (опыт).

Содержание общего белка при острой интоксикации незначительно увеличивалось. Так, в возрасте 1_го месяца его количество составляло 44,0 ± 0,69 г./л (контроль) и 50,0 ± 0,41 г./л (опыт); в 2 месяца - 39,9 ± 0,49 г./л в контроле и 42,3 ± 0,49 г./л в опыте; в 3 месяца - 48,0 ± 0,50 г./л в контроле и 48,2 ± 0,22 г./л в опыте.

Содержание витамина А в сыворотке крови при действии нитратов незначительно увеличивалось: в 1 месяц - 2,44 ± 0,0006 ммоль/л в контроле и 2,57 ± 0,007 ммоль/л в опыте; в 2 месяца - 2,60 ± 0,005 ммоль/л в контроле и 2,74 ± 0,01 ммоль/л в опыте; в 3 месяца - 3,00 ± 0,001 ммоль/л в контроле и 3,10 ± 0,006 ммоль/л в опыте.

При исследовании мяса установлено, что при острой нитратной интоксикации у гусей опытной группы снижалось содержание влаги в тушках с 84,03 ± 0,07% до 82,9 ± 0,19% (1 месяц); с 70,0 ± 0,54% до 68,9 ± 0,41% (2 месяца) и с 62,6 ± 0,16% до 61,5 ± 0,23% (3 месяца). Количество белка у гусей опытной группы, наоборот, повышается. Так, в возрасте 1 месяца его количество составляет 15,4 ± 0,03% (контроль) и 16,3 ± 0,11% (опыт); в 2 месяца - 16,3 ± 0,04% (контроль) и 17,3 ± 0,26% (опыт); в 3 месяца - 20,1 ± 0,18% (контроль) и 21,1 ± 0,14% (опыт).

У всех обследованных гусей при острой нитратной интоксикации в печени наблюдаются гемодинамические расстройства, выражающиеся в расширении по периферии центральных вен и внутридольковых капилляров.

В просветах кровеносных сосудов располагаются клеточные элементы. Многие гепатоциты и их ядра - набухшие, увеличиваются в объёме, нарушается балочное строение. В цитоплазме гепатоцитов ядра неравномерной величины. Встречаются клетки с расплывчатым контуром ядра, а границы некоторых из клеток исчезают. Происходит смещение ядер к периферии или наступает полная их деструкция.

Ультраструктурные изменения в клетках печени при остром отравлении нитратами характеризуются уменьшением количества гетерохроматина в ядрах, происходит его распределение на периферию. В отдельных клетках наблюдаются значительные нарушения структуры ядер, ядерной оболочки; в некоторых клетках заметны лишь слабые их контуры, уменьшается количество органелл. Наблюдается набухание и отслоение кариолеммы. В цитоплазме митохондрии набухшие, изменённой формы, средняя часть матрикса у них более светлая, кристы укорочены или полностью отсутствуют; имеются свободнолежащие вакуоли и рибосомы, а также наблюдается фрагментация эндоплазматической сети и появление участков, содержащих электронно-плотные включения.