Кариопатические и патоморфологические изменения под действием продуктов метаболизма паразитов и влияние на репродуктивную функцию домашних плотоядных

В белковом спектре экстракта АГ1 выявляли в агаровом геле три преципитирующих комплекса, из которых средний был представлен четкой полосой, а крайние два проявлялись в виде слабых полос.

В экстракте из анизакид АГ2 в гомологичной системе реакции установили наличие 1-2 полос преципитации, из которых одна была четко выраженной и идентичной средней полосе АГ1. Таким образом, не менее двух белковых компонентов в этом экстракте были антигеноактивными и вызывали синтез антител.

Постановка реакции с использованием сывороток кроликов, иммунизированных антигенами анизакид, и экстракта, приготовленного из токсокар, дала отрицательный результат.

Таким образом, проведенный иммунохимический анализ белкового экстракта из личинок анизакид позволил выявить наличие в его составе не менее трех антигенных компонентов, способных вызывать иммунный ответ у кроликов. Также мы можем предположить, что в составе соматического антигена A.simplex имеется как минимум два компонента, имеющих диагностическое значение в дифференциальной диагностике анизакидоза и токсокароза.

РИД с антигенами анизакид, обработанными кипячением или с помощью СВЧ, также показала положительный результат. В агаровом геле выявляли наличие как минимум одной диффузной полосы, идентичной центральным четко выраженным линиям АГ1 и АГ2. Таким образом, термическая обработка не препятствует проявлению антигенных свойств соматического экстракта А.simplex.

При проведении РИД с использованием в качестве антигена жидкости, полученной при размораживании мышечной ткани инвазированной анизакидами путассу, и гипериммунными сыворотками кроликов также выявили наличие одной четкой полосы преципитации, идентичной центральным линиям АГ1 и АГ2. Данный результат подтверждает возможность попадания соматических и экскреторно-секреторных продуктов гельминтов в мышечную ткань рыбы, особенно при многократном замораживании и оттаивании, которое, в свою очередь, может вызывать патологические изменения желудочно-кишечного тракта при продолжительном употреблении данного продукта.

Выводы

1. На территории города Перми широко распространены гельминтозы и протозоозы домашних плотоядных животных. Собаки заражены на 31,66%, кошки - на 36,47%. Наибольшее количество инвазированных животных относится к безнадзорным и содержащимся в приютах. Наименее инвазированы гельминтами и простейшими служебные собаки.

2. Антитела к антигенам Тoxoplasma gondii выявили у 23,0% служебных собак, 45,5% - собак, содержащихся в муниципальном приюте, 70,2%. - собак, принадлежащих частным лицам. У кошек антитела против токсоплазм обнаружили в 80% случаев, при этом среди животных, имеющих доступ на улицу, - 100%, не имеющих - 34,0%.

3. По результатам серологического обследования сыворотки крови собак г. Перми у 22,29% животных обнаружили антитела к антигенам Lamblia intestinalis. Установлено, что носителями лямблий в городской популяции являются 15% - служебных и 26,67% домашних собак. Выделение цист возбудителя регистрировали у 0,28% домашних собак.

4. Путассу инвазирована личинками анизакид на 99,9%. Интенсивность инвазии (ИИ) колеблется в пределах от 2 до 108 экземпляров. Средний показатель ИИ установлен в пределах 27,6 личинок.

5. Иммунохимическим анализом в белковом соматическом экстракте из личинок анизакид выявлено не менее трех антигенных компонентов, способных вызывать иммунный ответ у кроликов. В белковом спектре экстракта присутствует как минимум один термостабильный компонент, имеющий потенциальное диагностическое значение.

6. Глубокая заморозка рыбы до -18°С вызывает гибель личинок анизакид. В мышечной ткани рыбы с ИИ более 50 личинок Anisakis simplex установлены антигенные компоненты паразита. При обработке рыбы воздействием низких температур соматические продукты гельминтов сохраняются и вызывают реакцию в виде острого аллергического энтерита и развития умеренной эозинофилии.

7. Установлено, что соматические антигены замороженных личинок A.simplex повышают митотический индекс клеток красного костного мозга, угнетают мейоз в семенниках лабораторных мышей, вызывают патологию клеточного деления, влияя на митотический (мейотический) аппарат.

Термическая обработка (кипячение в течение 30 минут) снижает кариопатический эффект антигенных компонентов личинок анизакид.

8. Внутрибрюшинное введение соматического экстракта из личинок анизакид мышам оказывает выраженное действие на лимфоидную и миелоидную системы, стимулирует фагоцитарную активность макрофагов гистиогенного и гематогенного происхождения с последующим увеличением числа фагоцитирующих клеток в пульпе селезенки.

9. Выявлено, что соматические и метаболические продукты Toxocara canis являются митотическими ядами, оказывающими влияние на клетки красного костного мозга и сперматогенез при внутрибрюшинном введении лабораторным мышам. Наиболее интенсивное кариопатическое действие данные продукты оказывают на клетки семенников, вызывая патологию расхождения хромосом, нарушения полюсности. Выявленные изменения приводят к неравномерному распределению хромосом в дочерних клетках, анэуплоидии и, как следствие, угнетают сперматогенез.

10. Соматические белковые продукты Hydatigera taeniaformis обладают кариопатическим действием, вызывая угнетение деления клеток красного костного мозга и снижая активность мейоза в семенниках мышей, вызывая максимум повреждений через 48-72 часа после их внутрибрюшинного введения.

11. Соматический экстракт из Diphyllobothrium latum вызывает увеличение митотического индекса клеток красного костного мозга лабораторных мышей при внутрибрюшинном введении и вызывает кариопатические изменения в иммунокомпетентных и половых клетках.

12. Выраженность нарушений деления клеток зависит от эволюционной чужеродности введенных белков паразитов. Наличие ферментов паразита на развитие патологии ядра оказывает второстепенное значение.

13. Инвазия беременных самок гельминтами и простейшими приводит к развитию хронической фето-плацентарной недостаточности.

14. На фоне гельминтозов и протозоозов происходит нарушение морфологии органов репродуктивной системы. У самок развиваются фолликулярные кисты яичников. У самцов нарушается спермогенез, происходит дистрофия сперматогенного эпителия и агглютинация спермиев.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Сивкова Т.Н. Анализ зараженности собак г. Перми кишечными гельминтозами. / Т.Н.Сивкова, Н.Г.Калинкина // Материалы Всероссийской конференции "Актуальные вопросы ветеринарной медицины мелких домашних животных". - Екатеринбург. - 2004.-С.89-90.

2. Сивкова Т.Н. Гельминтозы домашних плотоядных города Перми. / Т.Н.Сивкова // Материалы докладов международной научно-практической конференции "Вузовская наука - сельскому хозяйству". - Барнаул. - 2005. - С. 121-124.

3. Сивкова Т.Н. Сероэпизоотология токсоплазмоза кошек в Перми. / Т.Н.Сивкова // Мат. Докл. Научн. Конф. "Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями". - Вып 8. - 2007. - М. - С.330-332.

4. Сивкова Т.Н. Паразитарные заболевания служебных собак города Перми. / Т.Н.Сивкова, А.В.Согрина // Мат. Докл. Научн. Конф. "Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями". - Вып 8. - 2007. - М. - С.332-335.

5. Сивкова Т.Н. Легочные гельминтозы домашних плотоядных. / Т.Н.Сивкова // Пермский аграрный вестник. - Пермь. - 2008.- С.239-241.

6. Сивкова Т.Н. Мезоцестоидоз плотоядных - опасное инвазионное заболевание. / Т.Н.Сивкова // Пермский аграрный вестник. - Пермь. - 2008.- С. 241-243.

7. Сивкова Т.Н. Влияние продуктов личинок анизакид на выработку эозинофилов. / Т.Н.Сивкова // Пермский аграрный вестник. - Пермь. - 2008.- С.244-246.

8. Сивкова Т.Н. Патология беременности у кошек при цистоизоспорозе. / Т.Н.Сивкова // Мат. Докл. Научн. Конф. "Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями". - Вып 9. - 2008. - М. - С.440-441.

9. Сивкова Т.Н. Сероэпизоотологические исследования при токсоплазмозе собак г. Перми./ Т.Н.Сивкова, Н.Н.Катаева // Российский паразитологический журнал. - 2008. - №3 - С.60-62.

10. Сивкова Т.Н. Распространение личиночного анизакидоза среди товарной рыбы. / Т.Н.Сивкова // Сборн.мат межд. Науч-практ. Конф. "Современные проблемы биологии, экологии, физиологии и ветеринарии домашних животных". - Тюмень. - 2008. - С.92-96.

11. Сивкова Т.Н. Влияние экстракта личинок анизакид на морфологию органов мышей. / Т.Н.Сивкова, Е.С.Патлусова // Проблемы и перспективы современной науки. Сборн. Научн. Трудов. - Томск. - 2008. - С.84-85.

12. Сивкова Т.Н. Эпизоотология токсоплазмоза у кошек в городе Перми / Т.Н. Сивкова, А. В.Щукина. // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. - 2008. - №3. - С.37-39.

13. Сивкова Т.Н. Кариопатическое действие соматического экстракта из личинок анизакид на клетки красного костного мозга мышей. / Т.Н.Сивкова // Труды VI Международной научно-практической конференции "Паразитарные болезни человека, животных и растений". - Витебск. - 2008, - С.220-222.

14. Сивкова Т.Н. Аллергическое воспаление тонкого кишечника при употреблении рыбы, зараженной личинками анизакид. / Т.Н.Сивкова // Ветеринарная клиника.- 2008. - №10 (77). - С.20.

15. Сивкова Т.Н. Антимитотическое действие метаболитов Toxocara canis на лабораторных животных. / Т.Н.Сивкова // Всерос. научно-практич. конференция "Инновационный потенциал аграрной науки - основа развития АПК". - Пермь. - 2008.- С.181-183.

16. Сивкова Т.Н. Кариопатическое действие белковых продуктов Hydatigera taeniaformis на соматические и половые клетки лабораторных животных. / Т.Н.Сивкова // Аграрный вестник Урала - 2008. - №11(53) - С.70-71.

17. Сивкова Т.Н. Поражение плаценты кошек при остром токсоплазмозе. / Т.Н.Сивкова // Ветеринарная медицина домашних животных. - Сборник статей. - Вып.5. - Казань. - 2008. - С.162-163.

18. Сивкова Т.Н. Кариопатическое действие экскреторно - секреторного антигена Toxocara canis на костный мозг лабораторных мышей. / Т.Н.Сивкова // Матер. Международной научно-практической конференции, посв. 95-летию Саратовского Госагроуниверситета "Вавиловские чтения". - Саратов. - 2008. - С.294-295.

19. Сивкова Т.Н. Кариопатическое действие соматического экстракта личинок анизакид на костный мозг мышей и протективное действие витаминов - антиоксидантов. / Т.Н.Сивкова // Российский паразитологический журнал. - 2008. - №4 - С.63-67.

20. Сивкова Т.Н. Содержание личинок анизакид в замороженной путассу. / Т.Н.Сивкова // Матер. Межд. Научно-практ. Конф, посв. 65-летию образования Волгоградской государственной сельскохозяйственной академии, "Использование инновационных технологий для решения проблем АПК в современных условиях" - Волгоград - 2009. - Том 2 - С.153-154.

21. Сивкова Т.Н. Аллергенное и токсическое действие замороженных личинок анизакид на лабораторных животных. / Т.Н.Сиквова // Российский паразитологический журнал - 2009. - №1 - С.58-61.

22. Сивкова Т.Н. Распространение протозоозов и их роль в развитии патологии беременности домашних плотоядных города Перми. / Т.Н.Сивкова // Сборн. Научн. Трудов "Современный мир, природа и человек". - Томск -2009. - С.39-40.

23. Сивкова Т.Н. Кишечная инвазия в генезе фолликулярной кисты яичника у кошек / Т.Н.Сивкова // Международной научно-практической конференции, посвященной 100-летию со дня рождения П.Г.Петского, "Современные научные тенденции в животноводстве", - Киров, 16-17 апреля 2009 года. - С.239-240.

24. Сивкова Т.Н. Кариопатическое действие соматических продуктов гидатигеры на костный мозг лабораторных животных. / Т.Н.Сивкова // Сборник материалов Региональной конф. молодых ученых "Современные тенденции развития АПК в Северном Зауралье", - Тюмень. - 2009. - С.67-69.

25. Сивкова Т.Н. Кариопатическое действие продуктов личинок анизакид на соматические и половые клетки лабораторных крыс при пероральном введении. / Т.Н.Сивкова // Мат. Докл. Научн. Конф. "Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями". - Вып 10. - 2009. - М. - С.366-370.

26. Сивкова Т.Н. Иммунохимический анализ соматического экстракта Anisakis simplex. / Т.Н.Сивкова // Мат. Докл. Научн. Конф. "Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями". - Вып. 10. - 2009. - М. - С.370-372.

27. Сивкова Т.Н. Роль лямблиоза матери в развитии кишечного кандидоза щенков / Т.Н.Сивкова, А.В.Согрина, Е.С.Патлусова //Ветеринарная клиника - 2009. - №6. - С.24-25.

28. Сивкова Т.Н. Действие продуктов личинок анизакид на печень лабораторных животных/ Т.Н.Сивкова //Мат. Всеросс. Научно-практич. Дист. Конф. "Современные достижения ветеринарной медицины сельскохозяйственному производству" - пос. Персиановский- 2009. - С.83.

29. Сивкова Т.Н. Кариопатическое действие соматических продуктов Diphyllobothrium latum на клетки красного костного мозга/ Т.Н.Сивкова //Мат. Всеросс. Научно-практич. Дист. Конф. "Современные достижения ветеринарной медицины сельскохозяйственному производству" - пос. Персиановский- 2009. - С.85-87.

30. Сивкова Т.Н. Влияние температурной обработки на иммунные свойства белкового экстракта личинок анизакид. / Т.Н. Сивкова // Труды Кубанского государственного аграрного университета. Серия: ветеринарные науки. - Краснодар -2009. - №1(ч.2.). - С.323-324.

31. Сивкова Т.Н. Влияние термической обработки экстракта личинок анизакид на способность вызывать морфологические изменения у белых мышей / Т.Н.Сивкова // Матер. Межд. научно-практич. конф. "Высшее образование и аграрная наука - сельскому хозяйству" - Казахстан, Семей - 2009. - С.139-141.

32. Сивкова Т.Н. Распространение саркоцистоза животных./ Т.Н.Сивкова, Н.А.Никонова, Н.А.Татарникова // Матер. Межд. научно-практич. конф. "Высшее образование и аграрная наука - сельскому хозяйству" - Казахстан, Семей - 2009. - С.141-143.

33. Сивкова Т.Н. Морфологические изменения тонкого кишечника крыс под действием продуктов личинок анизакид. / Т.Н.Сивкова //Веткорм - 2009. - №5. - С.32-34.

34. Сивкова Т.Н. Саркоцистоз плотоядных / Т.Н.Сивкова // Ветеринарная клиника - 2009. - №9 (88). - С.9-10.

35. Сивкова Т.Н. Изменения в тканях личинок Anisakis simplex под действием замораживания. / Т.Н.Сивкова // "Современный мир, природа и человек". - Томск. - 2009. - т.1, №2. - С.82-83.

36. Сивкова Т.Н. Инвазия Hydatigera taeniamorfis в генезе патологий плаценты у кошек /Т.Н. Сивкова //Актуальные проблемы ветеринарной медицины. - М. - 2009. - С.216-219.

37. Сивкова Т.Н. Влияние антигенов Toxocara canis на морфологию органов мышей// "Актуальные проблемы инфекционной патологии" - Томск -2009. - С.153-154.

38. Сивкова Т.Н. Состояние ксенопаразитарного барьера при анизакидозе (Anisakis simplex) под влиянием низких температур. // Матер. международной научно-практической конференции "Вавиловские чтения". - Саратов. - 2009. - С.289-291.

39. Сивкова Т.Н. Морфология плаценты под влиянием метаболитов личинок анизакид. / Т.Н. Сивкова// Ветеринарная медицина домашних животных: сборник статей. - Выпуск 6.- Казань: Печатный двор, 2009. - С.148-151.