Микробиологическая диагностика и специфическая профилактика кишечных инфекций

Размещено на http://www.allbest.ru/

МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА КИШЕЧНЫХ ИНФЕКЦИЙ

1. Холерные вибрионы, биологические свойства (морфологические, культуральные, ферментативные, антигенные).

Холерный вибрион -грамотрицательная палочка в форме запятой. Спор и капсул не образует. Чрезвычайно подвижен за счет монотриха.

Культуральные св-ва:

· температура 37

· рН= 8. 5-9

· требует наличия всреде 0, 5% хлорида натрия.

Факультативный анаэроб. Нопредпочитает аэробные условия роста. На жидкой пит. Среде образует пленку.

Среда накопления - 1% щелочная пептонная вода, на которой в течение 6-8 ч. Образует пленку.

Элективные среды - тиосульфат- цитратный, сахарозо - желчесодержащий агар. На них обр. колонии желтого цвета.

Б/х св-ва:

Обладает протеолитическими исахаролитическими св-вами:

· продуцируют индол

· лизиндекарбоксилазу

· разжижает вворонковидной форме желатин

· сероводород непродуцирует.

Ферментирует: глюкозу, сахарозу, маннозу, крахмал, лактозу.

Не сбраживает: рамнозу, арабинозу, инозит, инулин.

Чувствительность к фагу: классический вибрион - к бактериофагам IV группы, а эль-тор к фагу V группы.

Эль-тор вибрион гемолизируетэритроциты барана, аглютинирует куриные эритроциты.

Антигенные св-ва:

Микробиологическая диагностика эшерихиозов (экспресс-диагностика с помощью прямой РИФ, ингредиенты, положительный и отрицательный результаты)

Ингредиенты:

1) ВЧК из материала отбольного

2) Иммунная сыворотка с АТ, меченными флюорохромом.

Исследуемый материал помещаютна стекло и фиксируют, чаще всего ацетоном, высушивают, в течение 20 мин. Притемпературе 37. Наносят иммунную сыворотку с АТ, меченными флюорохромом. Врезультате взаимодействия АГ и АТ обр. иммунные комплексы. Затем АТ, непрореагировавшие с АГ эшерихий, смывают. Образовавшиеся иммунные комплексыдают зеленое свечение в УФ- лучах люминесцентного микроскопа. Это положительнаяреакция. При отрицательной реакции, т. е. если не обр. иммунные комплексы, свечения не наблюдается.

Сальмонеллы - возбудители госпитальныхинфекций, их свойства.

Сальмонеллы - короткиеграмотрицательные палочки с закруглёнными концами, в большинстве случаевподвижные (перитрихи), спор и капсул не имеют.

Культуральные св-ва:

· Хорошо растут напростых питательных средах и желчесодержащих.

· Температура 37

· рН= 7, 2 - 7, 4

На жидких средах обр. помутнение, а на плотных колонии в R и S формах.

S-колонии: средних размеров, гладкие, блестящие, полупрозрачные с голубоватым оттенком. Некоторые виды приросте на плотных средах обр. слизистые валики.

· Налактозосодержащих средах обр. бесцветные колонии

· на висмут-сульфитном агаре обр. черные колонии

· на среде BGA -розового цвета.

Б/х св-ва:

· ферментацияглюкозы, маннита и мальтозы до кислоты игаза

· не ферментируетлактозу и сахарозу

· продукциясероводорода

· декарбоксилированиелизина

· отсутствие обр. индола и расщепления мочевины.

Антигенные св-ва:

· соматическийО-антиген

· жгутиковыйН-антиген

· К-антиген унекоторых

· Vi- антиген (у S. Thyphi)

Санитарно-показательноезначение кишечной палочки. Определение коли-титра воды

микробиологическая диагностика

Кишечная палочка - самыймногочисленный и постоянный обитатель толстого отдела кишечника человека и всехтеплокровных животных. Она выделяется» во внешнюю среду с фекальнымимассами, поэтому используется как индикатор фекального загрязнения внешнейсреды и косвенный показатель наличия в воде болезнетворных микробов - возбудителейкишечных инфекций человека, выделяемых с фекалиями в воду и другие объекты.

Таким образом, кишечнаяпалочка служит санитарно-показательным микроорганизмом воды. Поскольку она необразует спор и гибнет при относительно щадящих методах обеззараживания, ееприсутствие в консервированных продуктах или воде указывает на нарушение режимаконсервирования и на недостаточность обработки воды. Так как если кишечная палочка сохранилажизнеспособность, значит, могли выжить и другие неспорообразующие бактерии, такие, как дизентерийная шигелла, брюшнотифозная сальмонелла и другие патогенныебактерии - возбудители.

Коли-титр - наименьшееколичество жидкости (выраженное в миллилитрах), в котором обнаруживаютсякишечные палочки.

Коли-титр определяютбродильным методом, заключающимся в посеве определенных объемов исследуемогосубстрата на среды накопления. Глюкозопептонную или лактозопептонную синдикатором и поплавком и другие подобные среды, которые выдерживают t° 37°. Большие объемы засевают на концентрированную среду, малые объемы - в пробирки со средой нормальной концентрации. Из всехпомутневших пробирок вне зависимости от образования кислоты и газа делаютвысевы на среду Эндо с последующей идентификацией выросших колоний (красныеили розовые колонии с металлическим блеском).

Ориентировочно за коли-титрпринимают тот наименьший объем, при посеве которого на среды накоплениявыявлены кишечные палочки.

Монофагидиагностические холерные жидкие, состав, назначение

Диагностические жидкиехолерные монофаги представляют собой МБП, предназначенные для дифференцировкиклассического холерного вибриона от эльтор. Данный МБП содержит холерный фаг С, который активен только в отношении классического холерного вибриона, илихолерный фаг Эль - Тор, который активен только в отношении холерного вибрионаэльтор.

Для постановки реакции вчашки разливают щелочной агар. После застывания агара и подсушивания его втечение 30 мин при температуре 37 °С дно чашек делят на квадраты по количествуобразцов фагов и 10-кратных разведений фага. В пробирку с 5 мл 0, 5 - 0, 7% -го

питательного агара, расплавленного и охлажденного до 45 °С, добавляют 0, 1 - 0, 2 мл бульоннойкультуры, тщательно смешивают и выливают на поверхность агара.

Чашки оставляют при комнатнойтемпературе с приоткрытыми крышками на 30 мин. В центр квадратов наносятпастеровской пипеткой по капле монофагов в соответствующих разведениях. Послеподсыхания

капель чашки переворачиваютвверх дном и помещают в термостат при температуре 37, 0. Результаты учитываютчерез 3 - 4 и 18 - 20 ч. Наличие лизиса в виде одного «стерильного» пятна илигруппы мелких негативных колоний оценивается какположительный результат.

Шигеллы. Патогенез дизентерии. Роль факторов инвазии, распространение

Входные ворота - ротоваяполость, где активируются факторы неспецифической защиты (лизоцим, макрофаги, нейтрофилы)

Желудок: под действиемсоляной кислоты и ферментов честь гибнет, высвобождается эндотоксин.

Тонкая кишка: желчь частьшигелл разрушает, высвобождается эндотоксин, который обуславливает первыепризнаки заболевания - озноб и лихорадку.

Оставшиеся шигеллы проникаютв дистальные отделы толстого кишечника, происходит адгезия их к слизистойкишечника, колонизация, отторжение ворсин кишечника в местах прикрепления, развитие воспаление. С помощью белков-инвазинов проникают в энтероциты, активноразмножаются в них. Выделяютшигатоксин и шигаподобный токсины, которые нарушают обмен в-в (водно-солевой, углеводный и белковый). Разрушается эпителиальный покров кишечника, развитиекатарально-язвенного воспаления.

Микробиологическая диагностика брюшного тифа и паратифов. Серодиагностика (РИФ, РПГА)

Антитела к возбудителям брюшноготифа и паратифов обнаруживаются в сыворотке крови больных с 8-10 днязаболевания.

РИФ:

Ингредиенты:

1) Сыворотка крови больного

2) Диагностикум

3) антиглобулиновые антитела, меченные флюорохромом.

АГ помещают на стекло и фиксируют. Наносят сыворотку больного. В результатевзаимодействия АГ и АТ обр. иммунные комплексы. Затем АТ, непрореагировавшие сАГ диагностикума, смывают. Наносят антиглобулиновыеантитела, меченные флюорохромом. Они взаимодействуют с обр. иммунными комплексами. Затемнепрореагировавшие антиглобулиновые антитела, меченные флюорохромом, смывают. Образовавшиеся иммунные комплексыдают зеленое свечение в УФ- лучах люминесцентного микроскопа. Это положительнаяреакция. При отрицательной реакции, т. е. если не обр. иммунные комплексы, свечения не наблюдается.

РПГА. Ингредиенты:

1) ИХН (во все лунки)

2) сыворотка крови больного

3) антигенный эритроцитарный диагностикум.

В 5 опытных лунках титруемсыворотку больного от 1: 20 до 1: 320.

2 контрольные лунки: контрольсыворотки и контроль диагностикума.

В опытные лунки добавляемодинаковое количество антигенного эритроцитарного диагностикума. В термостат.

Учет результатов:

«+» реакция - обр. зонтиков.

«-» реакция - обр. пуговок.

Сывороткадиагностическая холерная люминесцирующая, приготовление, назначение

Сыворотка диагностическаяхолерная люминесцирующая - это МБП, содержащий АТ, дающие свечение в люминесцентноммикроскопе и предназначенные для идентификации холерного вибриона.

Изготовления холерных флуоресцирующих иммуноглобулинов включает всебя следующие этапы:

· получениеантигена,

· гипериммунизациюкроликов-продуцентов с целью получения сыворотки-полуфабриката;

· выделение изгипериммунной сыворотки серологически активной иммуноглобулиновой фракции;

· конъюгирование иммуноглобулиновой фракции с флуорохромом;

· контроль уровняспецифической активности и специфичности конъюгата;

· стабилизациюпрепарата флуоресцирующих антител.

Можно применять вэкспрес-диагностике холеры - проведение прямой РИФ.

Факторы патогенности холерного вибриона. Токсины и их характеристика

Главными факторамипатогенности явл. :

· Токсинкорегулируемые пили- обеспечивают колонизацию вибриона на микроворсинках тонкой кишки.

· Холерныйэнтеротоксин - белок, состоящий из 1субъединицы А и 5 субъединиц В. В- субъединицыответственны за связывание всей молекулы токсина с клеточным рецептором слизистой тонкойкишки.

А-субъединица проникает внутрь клетки, активируетАЦ, усиленный синтез цАМФ, это изменяет активный транспорт ионов: усиленновыделяются ионы хлора, затрудняется всасывание хлора и натрия, что составляетосмотическую основу для выделения в просвет кишечника воды.

· Нейраминидаза укрепляет связь В-субъединицы с эпителиоцитами иоблегчает проникновение энтеротоксина внутрь клеток

· Растворимаягемагглютинин/протеаза способствуетотделению вибрионов от рецепторов эпителиоцитов и их выходу из кишечника вовнешнюю среду, обеспечивая им эпидемическое распространение.

· Эндототсин - ЛПСЮ, выделяется при разрушении вибриона. Активируеткаскад арахидоновой кислоты, запускает синтез простагландинов, происходитсокращение гладкой мускулатуры и развитие тенезм.

Бактериологическоеисследование при пищевых токсикоинфекциях. Особенности.

Материалдля исследования:

- Испражнения

- Рвотные массы

- Промывные водыжелудка

- Пищевые продуктыи сырье, с которыми связывают развитие болезни

Для обнаружениябезусловно-патогенных микробов на соответствующие накопительные и селективныесреды засевают неразведенный исследуемыйматериал. Для выявления УПМ готовят серийные разведения материала в ИХН или в0, 1% пептонной воде. Плотный материал перед посевом измельчают в асептическихусловиях с добавлением ИХН.

Делают мазок, окраска поГраму.

Для выявления и идентификациибактерий используют подходящие пит. среды и тесты:

· Среда Левина илиЭндо - выявление энтеробактерий

· ЖСА -стафилококки

· МПА с фурагином -псевдомонады

· МПА - бациллы

· СредаКитта-Тароцца - клостридии.

Выделяют чистую культуру, проводят идентификацию, определяют чувствительность к антибиотикам, определяютфакторы патогенности, б/х св-ва.

Агглютинирующие сыворотки шигелл Флекснера, Зонне и др., состав, назначение

Содержание: агглютинирующие антитела к антигенам шигелл.

Получение: путем иммунизации кроликов определенными видами и сероварами шигелл дизентерии Флекснера, Зонне, Бойда.

Применение: для диагностики в бактериологическом методе: постановке реакции агглютинации.

Семейство энтеробактерий. Таксономия. Общая характеристика. Морфология, культуральные, биохимические свойства. Антигенная структура

Семейство - Еnterobacteriaceae

Роды - Proteus Providencia Klebsiella Enterobacter Escherichia Shigella Salmonella

Морфология: грамотрицательные палочки, спор не образуют (искл. Shigella и Klebsiella), подвижны за счет перитрихиально расположенных жгутиков, некоторые образуют капсулу.

Культуральные: растут на простых питательных средах, при 37 С, факультативные анаэробы

Биохимические: оксидазоотрицательные, обладают нитратредуктазой, ферментируют глюкозу с образование кислоты, некоторые с образованием газа, роды различаются по способности ферментировать лактозу, продуцировать сероводород, индол, расщеплять мочевину и т. д.

Антигенные: обладают соматическим О-антигеном, могут иметь жгутиковый Н-антиген, поверхностный К-антиген.

Микробиологическая диагностика сальмонеллезов

Проводится бактериологическим и серологическим методом.

Бактериологический метод:

Материал для исследования: испражнения, рвотные массы, промывные воды, желчь, костные мозг, кровь, продукт питания

1. Посев в чашки с висмут-сульфитным агаром и в среды накопления (магниевая, селенитовая), из которых через 6-10 часов делают пересев на висмут-сульфитный агар. Инкубация 37С 24 ч

2. Макро- и микроскопическое изучение. Отбирают колонии черного цвета и пересевают на полиуглеводную среду Олькеницкого. Инкубация 37С 24 ч

3. Макро- и микроскопическое исследование. Пересев на «пестрый» ряд и проведение РА.

4. Учет изменений на «пестром» ряде. Не ферментируют лактозу и сахарозу, расщепляют глюкозу, манит и мальтозу с образованием кислоты и газа, не образуют индол и сероводород

Серологический метод: РНГА с сальмонеллезными поливалентными и групповыми диагностикумами

Брюшнотифозный ОН-диагностикум, получение, назначение.

Брюшнотифозный ОН - диагностикум взвесь бактерий S. Typhi, убитых обработкой формалином. Применяется для серодиагностики брюшного тифа в развернутой реакции агглютинации (РА) Видаля. Реакция основана на обнаружении в сыворотке крови больных людей антител-агглютининов, которые появляются в конце 1-й - начале 2-й недели заболевания. Позволяет оценивать динамику нарастания и длительность сохранения антител. Диагностическим титром реакции Видаля считается разведение сыворотки больного не ниже 1: 200.

Сальмонеллы. Особенности антигенной структуры по Кауфману-Уайту. Патогенность для человека и животных.

Сальмонеллы обладают соматическим О-антигеном, жгутиковым Н-антигеном, некоторые К-антигеном. Дифференциация внутри рода проводится по антигенной структуре.

В основе классификации Кауфмана-Уайта лежит подразделение сальмонелл на серологические группы по общности строения О-антигена и внутри серогруппы - на серовары в соответствии со строением Н-антигена.

О-антиген состоит из R-ядра и боковой S-цепи. К s-цепи присоединяются сахара, которые называются рецепторами и обозначаются цифрами.

H-антиген является двухфазным. Его синтез кодируется двумя независимыми генами, работа одного из которых исключает работу другого. Поэтому в каждой клетке может быть синтезирована только одна фаза. Первая фаза обозначается буквами и считается специфической, вторая - цифрами, неспецифическая.

в таблице Кауфмана-Уайта серогруппы обозначаются цифрами согласно номеру группового рецепторов. А-2, В-4, С1-С4 - 6, 7, D1 - 9. Внутри серогруппы серовары расположены в алфавитном порядке.

Сальмонеллы являются возбудителями брюшного тифа и паратифа, а также вызывают сальмонеллез

Микробиологическая диагностика дизентерии. Серодиагностика

РНГА с эритроцитарными шигеллезными диагностикумами

Материал: сыворотка крови

Компоненты: ИХН, сыворотка больного, эритроцитарный диагностикум

Реакцию ставят в планшетах. Вносят в лунки по 1 капле ИХН, разводят сыворотку, добавляют одинаковое количество эритроцитарного диагностикума. В контроль сыворотки добавляют только ИХН и сыворотку, в контроль диагностикума - ИХН и диагностикум. Помещают в термостат на 18-24 ч при 37С. Проводят макроскопический учет - положительный результат - зонтик - рыхлый садок их склеившихся эритроцитов на дне и боковых поверхностях лунок. Отрицательный - пуговка - плотный осадок их эритроцитов на дне.

Агглютинирующие ОВ коли-сыворотки поливалентные. Получение. Назначение

Содержание: агглютинирующие антитела к О- и В-антигенам кишечной палочки.

Получение: гипериммунизация кролика О- и В-антигенами кишечной палочки.

Применение: для диагностики в бактериологическом методе, постановка реакции агглютинации- для идентификации энтеропатогенных эшерихий.

Протей. Свойства. Значение протея при пищевых отравлениях

РодPtoteus

ВидыP. vulgaris/ P. mirabilis

Морфология: палочки, располагаются попарно или цепочками, не образуют капсулу, подвижны

Культуральные: растут на простых питательных средах. На плотных образуют 2 типа колоний - Н-формы (колонии роятся, образуя дочерние отростки) и О-формы (при неблагоприятных условиях, колонии крупные и ровными краями)

Биохимические: гнилостные бактерии. Продуцируют фенилаланиндезаминазу, расщепляют мочевину, продуцируют сероводород, не расщепляют лактозу, разжижают желатин

Антигенные: обладают О- и Н-антигеном

Резистентность: переносят нагревание 60С в течение 1 ч, длительно сохраняют жизнеспособность в слабых растворах фенола и другие дез. средств

Входят в состав факультативной микрофлоры толстой кишки и влагалища.

Патогенез: Вызывают гнойно-септическую инфекцию, дисбактериоз кишечника, инфекцию мочевыводящих путей, пиелонефрит. В результате расщепления мочевины повышается pH мочи, создаются условия для образования почечных камней.

Лечение: используют колипротейный бактериофаг и проводят этиотропную антибиотикотерапию

Иммунитет не формируется

Микробиологич. диагностика - бактериологическое исследование - посев на лактозосодержащие дифференциальные среды и на скошенный агар.

Пищевое отравление: Инкубационный период - 4 - 20 часов. Болезнь может иметь внезапное начало, сопровождаться схваткообразными, режущими болями в кишечнике, тошнотой и рвотой, поносом. В фекальных и рвотных массах иногда отмечают наличие крови. В тяжелых случаях наблюдают судороги, падение сердечной деятельности, побледнение слизистых. Длительность болезни до 5 дней. Смертельный исход возможен в пределах 1, 5%.

Микробиологическая диагностика дизентерии. Бактериологический метод.

Материалы: испражнения, еже - рвотные массы и промывные воды желудка и кишечника, продукты питания

Испражнения засевают на среду Плоскирева и Эндо в чашках, а также для накопления на селенитовую среду. Со среды накопления материал высеивают через 16-18 ч на те же плотные среды. Посевы в термостат на 18-24 ч 37С.

Макро- и микроскопическое изучение. Бесцветные лактозоотрицательные колонии для накопления ЧК пересевают на полиуглеводную среду (Ресселя) или на скошенный агар. В термостат

Учет характера роста, пересев на дифференциальные среды (среду Гисса)

Учет изменений: не ферментируют лактозу, не образуют газ из глюкозы и не декарбоксилируют лизин

Люминесцирующая брюшнотифозная сыворотка. Получение. Назначение

Получают путем гипериммунизации животных S. typhi, после получения сыворотки проводят обработку ее флюорохромом. Применяется для быстрого обнаружения в исследуемом материале возбудителя брюшного тифа в прямой РИФ.

21. Возбудители дизентерии. Биологические свойства (морфологические, культуральные, ферментативные, антигенные, токсинообразование).

Морфология: шигеллы - грамотрицательные неподвижные палочки с закругленными концами, взаимное расположение беспорядочное, жгутиков, спор и капсул не образуют, имеют фибрии общего типа

Культуральные: условия роста: 24ч, 37С, наличие кислорода, pH=6, 7-7, 2. На МПА - колонии круглые полупрозрачные (S-формы) или плоские, тусклые и шероховатой поверхностью и неровными краями (R-формы). На среде Эндо - колонии бесцветные, аналогичной формы. На МПБ - равномерное помутнение (S-формы), придонный осадок, надосадочная жидкость прозрачная (R-форсы).

Биохимические: не имеют протеолитических ферментов (желатин не разжижают, сероводород, индол не выделяют, мочевину не разлагают). Сахарозу, лактозу не ферментируют. Маннит, мальтозу, глюкозу - до кислоты.

Антигенные: имеют соматический О-антиген, S. sonnei имеет К-антиген

Факторы патогенности: 1. эндотоксин

2. S. dysenteriaeвырабатывает экзотоксин (шига-токсин). Он необратимо ингибирует синтез белков рибосомами клеток кишечного эпителия, разрушает эндотелий капилляров и вызывает ишемию в тканях кишечника. Следствием системной адсорбции этого экзотоксина может стать гемолитический уремический синдром и тромботическая микроангиопатия.

3. Шигеллы обладают инвазивностью, колициногенностью, образуют БАВ и ферменты (гиалуронидазу, фибринолизин, лецитиназу)

Микробиологическая диагностика брюшного тифа на 2-й неделе заболевания

Выбор материала и метода микробиологической диагностики брюшного тифа зависит от стадии патогенеза. На 1 неделе заболевания возбудитель выделяют из крови (гемокультура), с конца 2 недели и на 3 неделе- из мочи (уринокультура), испражнений (копрокультура), костного мозга, ликвора.

Основным методом диагностики является бактериологический, начиная со 2 недели проводят серологическое исследование.

Серологический метод исследования:

1. Для серологической диагностики брюшного тифа используют развернутую реакцию агглютинации (РА) - реакцию Видаля, основанную на обнаружении в сыворотке крови людей агглютининов (АТ), которые появляются в конце 1, начале 2 недели заболевания, и на изучении динамики нарастания и длительности сохранения антител. Реакция ставится с антигенами: О- и Н-брюшнотифозными. Боюшнотифозные монодиагностикумы применяются для установления стадии болезни: О-антитела накапливаются в разгар болезни, Н-антитела- появляются к концу заболевания и сохраняются у переболевших в течение длительного времени.

Для реакции Видаля берут 2-3 мл крови из вены.

Реакцию Видаля ставят в 4 рядах пробирок по 7 пробирок в каждом ряду (5 опытных и 2 контрольных- контроль сыворотки и контроль АГ). Сначала готовят основное разведение сыворотки. Титры: 1: 50, 1: 100, 1: 200, 1: 400, 1: 800. Затем делают серию разведений сыворотки путем последовательного переноса 1 мл из предыдущей пробирки в следующую пробирку ряда. Из последней пробирки 1 мл удаляют для сохранения объема. В контроль АГ вносят 1 мл ИХН. В каждую пробирку с разведениями сыворотки и в контрольную пробирку сыворотки вносят по 2 капли взвеси бактерий (диагностикума). Пробирки встряхивают и помещают в термостат при 37 гр на 2ч., затем сутки выдерживают при комнатной температуре. Учет РА проводят оценивая каждую пробирку, начиная с контрольных. В контрольной пробирке (без диагностикума) не должно быть хлопьев.

Контроль сыворотки- светло-желтая жидкость, контроль АГ- равномерно мутная жидкость.

Реакцию учитывают как положительную при наличии отчетливой агглютинации во 2 опытной пробирке, и её отсутствие в обеих контрольных пробирках.

Титр сыворотки- наименьшее разведение, где наблюдается положительный результат, т. е. титр реакции Видаля равен 1: 200.

2. РНГА с эритроцитарными групповыми (A, B, C, D, E) и монорецепторными диагностикумами.

3. ИФА, которые ставят с парными сыворотками в динамике заболевания.

4. Реакция пассивной Vi-гемагглютинации, с помощью которой определяют Vi-антитела в сыворотки крови больного. В качестве АГ используют эритроцитарный Vi-диагностикум. Испытуемую сыворотку разводят от 1: 10 до 1: 1280. При положительном результате эритроциты покрывают дно пробирки в виде диска с зазубренными краями, а надосадочная жидкость остается прозрачной. При отрицательном- диск с ровными краями. Диагностический титр- 1: 40 и выше.

Лактобактерин сухой. Холерная вакцина

Лактобактерин сухой.

Содержание: Лактобактерин сухой представляет собой микробную массу живых, лиофилизированных в среде культивирования лактобактерий L. plantarum или L. fermentum.

Получение: клетки выращивают в достаточном объеме, отделяют от жидкой среды центрифугированием, суспендируют осадок в стерильном криопротекторе. Суспесию заливают в ампулы, замораживают в течение часа, затем подвергают лиофильной сушке.

Применение: предназначен для лечения детей и взрослых, страдающих:

*хроническими колитами различной этиологии, в том числе неспецифическими язвенными колитами;

*соматическими заболеваниями, осложненными дисбактериозами, возникшими в результате применения антибиотиков, сульфаниламидных препаратов и других причин;

*для лиц, перенесших острые кишечные инфекции, при наличии дисфункций кишечника или выделении патогенных и условно-патогенных бактерий;

*в акушерско-гинекологической практике для санации половых путей при неспецифических воспалительных заболеваниях гениталий и предродовой подготовке беременных группы «риска» с нарушениями чистоты вагинального секрета до III-IV степени.

Холерная вакцина.

Содержание: взвесь убитых холерных вибрионов

Получение: готовится из вибрионов Эль-Тори классических холерных вибрионов серотипов Инаба и Огава. Получают путем выращивания на искусственных питательных средах возбудителей холеры, которые затем подвергают инактивации, разрушению, выделению антигенных комплексов, очистке, конструированию в виде сухого или лиофильно высушенного препарата. В препарат обязательно добавляют консервант, иногда- адъюванты. Проводят контроль вакцины.

Применение: для активной иммунизации против холеры.

Возбудители дизентерии Зонне. Биологические свойства (морфологические, культуральные, ферментативные, антигенные, токсинообразование)

Дизентерия Зонне- анторпонозное инфекционное заболевание с преимущественным поражением толстой кишки и общей интоксикацией, вызываемое Shigella Sonnei. Вызывает шигеллез в легкой форме, часто в виде бактерионосительства.

Возбудитель: семейство: Enterobacteriaceae, род: Shigella, вид: S. Sonnei. (1 серовар).

Морфологические свойства: неподвижные (не имеют жгутиков) грамотрицательные палочки, размером 0. 5-0. 7*2-3 мкм. Спор и капсул не образуют. Многие имеют половые пили, а также снабжены фимбриями (для адгезии).

Культуральные свойства: хорошо растут на простых питательных средах. На плотных средах образуют мелкие гладкие блестящие полупрозрачные колонии, на жидких- диффузное помутнение. Образуют два типа колоний: S-формы (1 фаза) и R-формы (2 фаза).

Ферментативные (биохимические) свойства: S. Sonnei является наиболее биохимически активным видом, по биохимической активности подразделяется на хемовары. 1. Не образуют газ при ферментации глюкозы. 2. Способен ферментировать лактозу и сахарозу медленно, в течение 72 ч. 3. Не прдуцирует сероводород и индол 4. Ферментирует маннит.

Антигенные свойства: О-антиген, также обладает антгеном фазы 1, который является К-антигеном.

Токсинообразование: S. Sonnei продуцирует шигаподобные токсины- белковые токсины, состоящие из 1 субъединицы А- энзиматическая и 5 субъединиц В- рецепторные (имеют сродство к рецептору Gb3 на эндотелии капилляров). Субъединица А, проникнув в клетку, взаимодействует с субъединицей рибосом, необратимо блокируя синтез белка. Шигаподобные токсины накапливаются в периплазматическом пространстве и выделяются в окружающую среду после гибели шигелл. Эндотоксин защищает шигеллы от действия низких значений рН и желчи.

Микробиологическая диагностика брюшного тифа на 3-й неделе заболевания

Выбор материала и метода микробиологической диагностики брюшного тифа зависит от стадии патогенеза. На 1 неделе заболевания возбудитель выделяют из крови (гемокультура), с конца 2 недели и на 3 неделе- из мочи (уринокультура), испражнений (копрокультура), костного мозга, ликвора.

Основным методом диагностики является бактериологический, начиная со 2 недели проводят серологическое исследование.

Бактериологический метод исследования: материал исследования- копрокультура.

1 этап: испражнения засевают на одну из дифференциально-диагностических сред (Эндо, Левина или Плоскирева). Для этого петлю с испражнениями вносят в пробирку с изотоническим раствором хлорида натрия и готовят суспензию; после оседания крупных комочков петлю тонкой суспензии наносят на поверхность агаровой среды-на одну половину чашки. Материал растирают шпателем по одной, затем по другой половине чашки для получения изолированных колоний. Инкубация при 37 градусах 24 часа.

2 этап: Изучение характера колоний: 1. Макроскопия: бесцветные, прозрачные, блестящие, гладкие колонии с ровными краями. 2. Микроскопия- окраска по Граму: обнаружение грамотрицательных палочек.

Пересев 2-3 бесцветных колоний на скошенный питательный агар (для выделения чистой культуры) или среду Ресселя (внизу она в виде столбика, а верхняя часть имеет скошенную поверхность) (наблюдается изменение цвета среды и разрывы столбика, что свидетельствует о газообразовании, сероводород обнаруживают по почернению среды) : исследуемую культуру засевают уголком в столбик и на поверхность среды. Инкубация при 37 градусах 24 часа.

3 этап: Изучение характера колоний (чистой культуры) : 1. Макроскопия: колонии одинаковой формы, гомогенный рост. 2. Микроскопия- окраска по Граму: обнаружение грамотрицательтных палочек- проверка чистоты культуры.

Реакция агглютинации на стекле со смесью групповых сывороток, а затем с адсорбированными монорецепторными О- и Н-сальмонеллезными сыворотками: определение О-антигена (определяет серогруппу), Н-антигена (определяет тип сальмонеллы), Vi-антиген определяется по таблице.

Посев на пёстрый ряд: на среду Гисса: кислота образуется, газ не образуется, индол не образуется, сероводород образуется.

Фаготипирование- определение чувствительности возбудителя к бактериофагу.

Выделенную культуру засевают газоном на питательный агар в чашки Петри; затем наносят на агар по 1 капле типовых фагов и инкубируют при 37 градусах 24 часа. Наличие лизиса (стерильных пятен в газоне роста) позволяет определить принадлежность выделенного штамма к определенному фаговару.

4 этап: проводится учет полученных результатов.

Бифидумбактерин сухой.

Содержание: содержит липофильно высушенную взвесь живых клеток B. Bifidum.

Получение: Биологическим агентом для получения бифидумбактерина является штамм Bifidobacterium bifidum № 1. Вначале получают культуру 1 поколения, затем 2 и 3 поколения (нативная взвесь) - выращивают чистую культуру бифидобактерий в биореакторе. По окончании процесса культивирования микробную взвесь с биореактора сливают в стерильные баллоны емкостью 16 л. Затем призводят лиофильную сушку.

Применение: лечение дизентерии и хронических кишечных инфекций невыясненной этиологии у детей. Применяется при дисбактериозах, пищевых токсикоинфекциях, синдроме мальабсорбции.

Сальмонеллы - возбудители паратифа В. Биологические свойства (морфологические, культуральные, ферментативные, антигенные). Патогенез.

Паратиф В - острая антропонозная инфекция, вызываемая S. schotmuelleri.

Возбудитель: семейство: Enterobacteriaceae, род: Salmonella, вид: S. schotmuelleri (серовар S. paratyphi B).

Морфологические свойства: типичны для рода сальмонеллы, подвижные мелкие грамотрицательные палочки размером 0. 7-1. 5* 2-5 мкм. Капсулу не образуют, окружены микрокапсулой. Подвижность обеспечивается за счет перитрихиально расположенных жгутиков.

Культуральные свойства: хорошо растут на простых питательных и желчесодержащих средах. При росте на плотных средах образует слизистые валики. На плотных средах могут образовывать колонии в S- и R-формах, на жидких- диффузное помутнение. S-форма колоний: средних размеров, гладкие, блестящие, полупрозрачные с голубоватым оттенком. Жидкие среды обогащения при посеве крови: триптозосоевый бульон, бульон с сердечно- мозговой вытяжкой, желчный бульон; при посеве фекалий, желчи, мочи, пищевых продуктов: селенитовый бульон, тетратионатовый бульон. На лактозосодержащих дифференциальных средах (Эндо, Плоскирева, Мак-Конки) образуют бесцветные колонии; на висмут-сульфитном агаре- колонии черного цвета, на среде BGA- розовые колонии.

Ферметативные (биохимические) свойства: в основном типичны для рода сальмонелла. 1. ферментация глюкозы, мальтозы, арабинозы до кислоты и газа. 2. Отсутствуют: ферментация лактозы, индолообразование, расщепления мочевины. 3. Продукция сероводорода-вариабельный признак. 4. Декарбоксилирование лизина.

Антигенные свойства: 1. О-антиген (соматический) - связан с клеточной стенкой, по структуре- липополисахарид. 2. Н-антиген (жгутиковый) - входит в состав жгутиков бактерий, по структуре- белок флагеллин. Может присутствовать К-антиген. По классификации сальмонелл по антигенной структуре (по Кауфману) S. parathyfi B относится к серогруппе B, О-антиген-1, 4, 5, 12, Н- антиген: фаза 1-с, фаза 2-1, 5.

Патогенез: основные факторы патогенности: микрокапсула, белок инвазин, эндотоксин.

Патогенез: за счет микрокапсулы возбудитель прилипает к энтероцитам тонкой кишки; после адгезии происходит частичная колонизация слизистой; затем происходит инвазия (с помощью трансцитоза) слизистой кишечника через М-клетки, не повреждая слизистую; из М-клеток возбудитель транспортируется в пейеровы бляшки, где захватываются макрофагами, в которых они размножаются (вызывая воспаление с лимфаденитом), образуя первичный очаг инфекции; это приводит к нарушению барьерной функции, с последующим попаданием возбудителя в общий ток лимфы и затем в кровь, вызывая бактериемию (10-14 сутки), которая сопровождает период интенсивной лихорадки. С током крови возбудитель разносится по всему организму, оседая в ретикулоэндотелиальных элементах паренхиматозных органов: печени, селезенке, легких, костном мозге, где также размножаются в макрофагах. Также возбудитель заносится по желчным протокам, диффундируя из Купферовских клеток печени, в желчный пузырь, где интенсивно размножается, т. к. желчь для них- элективная питательная среда. Накапливаясь в желчном пузыре, сальмонеллы вызывают в нем воспалительный процесс и с током желчи реинфицируют тонкий кишечник. Повторное введение сальмонелл в сенсибилированные пейеровы бляшки, приводит гиперергическому воспалению, некрозу и изъязвлению, следовательно к кишечному кровотечению и перфорации стенки кишечника, с последующим перитонитом. При разрушении сальмонелл выделяется эндотоксин, котрый приводит к интоксикации организма. Выделяются сальмонеллы из организма с испражнениями и мочой.

Колибактерин сухой. Холероген-анатоксин.

Колибактерин сухой.

Содержание: высушенные живые клетки Е. coli штамма М17, обладающего выраженными антагонистическими свойствами в отношении ряда кишечных патогенных бактерий

Получение: биологическим агентом для получения колибактерина является E. Coli.

Клетки выращивают в достаточном объеме, отделяют от жидкой среды центрифугированием, суспендируют осадок в стерильном криопротекторе. Суспесию заливают в ампулы, замораживают в течение часа, затем подвергают лиофильной сушке.

Применение: лечение дисбактериоза и дизентерии, главным образом у детей, при диарее (острой и хронической форме).

Холероген-анатоксин:

Содержание: взвесь убитых холерных вибрионов, выращенных в жидкой питательной среде. Препарат очищен от балластных веществ, выпускается в сухом виде.

Получение: Для получения препарата этот штамм (отличается от других штаммов стабильностью образования токсина), который хранится в высушенном виде в запаянных, ампулах, вначале подготавливают - тренируют путем пересевов на жидких и плотных питательных средах и лишь после этого, убедившись в полноценности его свойств, используют для посева на 250 л жидкой питательной среды, загруженной в реактор-культиватор, снабженный мешалкой. Выращивание в реакторе осуществляется в течение 10-11 часов при 34-37°С и постоянной аэрации подогретым до 30°С стерильным воздухом. С целью интенсификации токсинообразования осуществляется подкормка культуры заданными объемами 40% раствора глюкозы и 10% раствора аммиака в строго определенные сроки. После завершения цикла выращивания в бульонную культуру добавляют формалин до 0, 6% концентрации для умерщвления вибрионов. Инактивация вибрионов наступает через 14-18 ч. Убедившись в полноте инактивации, бульонную взвесь вибрионов и их токсинов обрабатывают на суперцентрифуге со скоростью 8000 - 10 000 об/мин с последующим восполнением испарившегося формалина. Полученный формалинизированный безмикробный центрифугат собирают в бутыли и для полного обезвреживания токсина и О-антигена выдерживают при 10-12°С в течение 30-35 дней. После этого с помощью двукратного переосаждения сульфатом аммония в различных концентрациях в специальных реакторах вначале центрифугат освобождают от балластных фракций, а затем из раствора строго определенной оптической плотности высаливают необходимые антигены холерного вибриона, которые выпадают в осадок за 8-10 ч при 18-22°С. Полученный осадок отжимают на ультрацентрифуге, диализируют для освобождения от сульфата аммония и используют в качестве основы изготовления химической вакцины. Для этого взвесь антигенов разводят физиологическим раствором до концентрации белка, равной 5 мг/мл, стерилизуют фильтрованием через бактериальные свечи под вакуумом и разливают во флаконы или ампулы. Вакцину контролируют на:

физические свойства;

стерильность;

токсичность;

холерогенность;

антигенную активность;

иммуногенность;

содержание О-антигена;

реактогенность для людей.

Применение: для специфической профилактики холеры.

Сальмонеллы - возбудители паратифа А. Биологические свойства (морфологические, культуральные, ферментативные, антигенные). Патогенез.

Паратиф А - острая антропонозная инфекция, вызываемая S. Paratyphi A.

Возбудитель: семейство: Enterobacteriaceae, род: Salmonella, вид: S. Paratyphi A.

Морфологические свойства: типичны для рода сальмонеллы, подвижные мелкие грамотрицательные палочки размером 0. 7-1. 5* 2-5 мкм. Капсулу не образуют, окружены микрокапсулой. Подвижность обеспечивается за счет перитрихиально расположенных жгутиков.

Культуральные свойства: хорошо растут на простых питательных и желчесодержащих средах. На плотных средах могут образовывать колонии в S- и R-формах, на жидких- диффузное помутнение. S-форма колоний: средних размеров, гладкие, блестящие, полупрозрачные с голубоватым оттенком. Жидкие среды обогащения при посеве крови: триптозосоевый бульон, бульон с сердечно- мозговой вытяжкой, желчный бульон; при посеве фекалий, желчи, мочи, пищевых продуктов: селенитовый бульон, тетратионатовый бульон. На лактозосодержащих дифференциальных средах (Эндо, Плоскирева, Мак-Конки) образуют бесцветные колонии; на висмут-сульфитном агаре- колонии черного цвета, на среде BGA- розовые колонии.

Ферметативные (биохимические) свойства: в основном типичны для рода сальмонелла. 1. ферментация глюкозы, мальтозы, арабинозы до кислоты и газа. 2. Отсутствуют: ферментация лактозы, индолообразование, расщепления мочевины. 3. Нет продукции сероводорода 4. Декарбоксилирование лизина не происходит.

Антигенные свойства: 1. О-антиген (соматический) - связан с клеточной стенкой, по структуре- липополисахарид. 2. Н-антиген (жгутиковый) - входит в состав жгутиков бактерий, по структуре- белок флагеллин. Может присутствовать К-антиген. По классификации сальмонелл по антигенной структуре (по Кауфману) S. parathyfi A относится к серогруппе A, О-антиген-1, 2, 12, Н- антиген: фаза 1-а, фаза 2-нет.

Патогенез: основные факторы патогенности: микрокапсула, белок инвазин, эндотоксин.

Патогенез: за счет микрокапсулы возбудитель прилипает к энтероцитам тонкой кишки; после адгезии происходит частичная колонизация слизистой; затем происходит инвазия (с помощью трансцитоза) слизистой кишечника через М-клетки, не повреждая слизистую; из М-клеток возбудитель транспортируется в пейеровы бляшки, где захватываются макрофагами, в которых они размножаются (вызывая воспаление с лимфаденитом), образуя первичный очаг инфекции; это приводит к нарушению барьерной функции, с последующим попаданием возбудителя в общий ток лимфы и затем в кровь, вызывая бактериемию (10-14 сутки), которая сопровождает период интенсивной лихорадки. С током крови возбудитель разносится по всему организму, оседая в ретикулоэндотелиальных элементах паренхиматозных органов: печени, селезенке, легких, костном мозге, где также размножаются в макрофагах. Также возбудитель заносится по желчным протокам, диффундируя из Купферовских клеток печени, в желчный пузырь, где интенсивно размножается, т. к. желчь для них- элективная питательная среда. Накапливаясь в желчном пузыре, сальмонеллы вызывают в нем воспалительный процесс и с током желчи реинфицируют тонкий кишечник. Повторное введение сальмонелл в сенсибилированные пейеровы бляшки, приводит гиперергическому воспалению, некрозу и изъязвлению, следовательно к кишечному кровотечению и перфорации стенки кишечника, с последующим перитонитом. При разрушении сальмонелл выделяется эндотоксин, котрый приводит к интоксикации организма. Выделяются сальмонеллы из организма с испражнениями и мочой.

Физиологическая роль в кишечнике человека и санитарно-показательное значение эшерихий. Коли-титр. Коли-индекс. Определение

Санитарно-показательные микроорганизмы- микробы, являющиеся представителями нормальной микрофлоры организма человека и служащие показателями санитарного неблагополучия объекта, т. е. его загрязнения выделениями человека. Непатогенные кишечные палочки вида E. coli являются санитарно-показательными бактериями. Этот вид имеет наибольшее санитарно- показательное значение, соответствует следующим требованиям СПМ: постоянно и в больших количествах присутствует в выделениях человека, не имеет других природных резервуаров и мест обитания, легко идентифицируется, поддается количественному определению.

Физиологическая роль эшерихий: способствует гидролизу лактозы, участвует в продукции витаминов, выделяет колицины, которые тормозят рост энетеропатогенных кишечных палочек (т. е. угнетает патогенные микробы), стимулирует антителообразование и оказывает мощное иммуномодулирующее действие, способствует активации гуморального и местного иммунитета.

Коли-титр- минимальный объем (в мл) или весовое количество (в г) маткриала, в котором обнаруживаются БГКП.

Коли-индекс- количество БГКП в единице объема материала (1л, 1г, 1м3).

Определение коли-титра воды:

Бродильный метод: Для исследования водопроводной воды делают посев 4 проб по 100 мл и 10 проб по 10 мл- в концентрированную среду; или 3 проб по 10 мл и 3 проб по 100 мл- в глюкозопептонную среду. Посевы инкубируют 24 ч при 37 градусах. Брожение- наличие пузырьков газа в поплавке. Из забродивших проб производят посевы на среду Эндо. Из выросших колоний делают мазки, окрашивают по Граму и ставят оксидазный тест для дифференцировки эшерихий: стеклянной палочкой снимают 2-3 изолированные колонии с поверхности среды и наносят штрихом на фильтровальную бумагу смоченную диметил-п-фенилендиамином. При отрицательном оксидазном тесте- цвет бумаги не изменится, при положительном- окрашивается в синий в течение 1 мин. Эшерихии- оксидазотрицательны. При положительном результате определяют коли-титр и коли-индекс по таблицам ГОСТ.

Бактериофаг протейный жидкий.

Содержание: содержит фаги, лизирующие наиболее распространенные серогруппы энтеропатогенных эшерихий и протей. Выпускается в жидком виде

Получение: Для выделения бактериофага исследуемый материал (воду, испражнения, гноя, почву и?др.) засевают в?жидкую питательную среду, наиболее благоприятную для развития тех микроорганизмов, против которых ищут бактериофаг. Среду оставляют в?термостате на 18-20?часов. Иногда производят предварительное обогащение среды чистой культурой соответствующего микроба, заведомо нелизогенного, т. е. не выделяющего бактериофаг. Помутневшую питательную среду пропускают через бумажный, а?затем через бактериальный фильтр, асбестовые пластины, керамические свечи. Полученный фильтрат испытывают на присутствие бактериофага путем засева совместно с?соответствующей микробной культурой на плотные (методом стекающей капли - проба Отто) или жидкие питательные среды. При наличии бактериофага после 18-часовой инкубации на поверхности агара, обнаруживается сплошной налет культуры, а?па месте растекающейся, капли, в?зависимости от содержания частиц бактериофага в?фильтрате, бактериальный рост полностью отсутствует или наблюдаются округлые «стерильные пятна» - колонии бактериофага. На жидкой питательной среде присутствие бактериофага обусловливает просветление культуры. Для выделения чистой культуры бактериофага материал из развившегося отдельного стерильного пятна переносят бактериологической иглой в?суспензию молодой микробной культуры.

Применение: лечебно-профилактическое- для лечения и профилактики энтероколитов и лечения колитов коли-протейной этиологии.

Сальмонеллы - возбудители брюшного тифа. Биологические свойства (морфологические, культуральные, ферментативные, антигенные). Патогенез.

Брюшной тиф- острое антропонозное инфекционное заболевание с фекально- оральным механизмом передачи. Характкризуется циклическим течением. Протекает в генерализованной форме с поражением лимфатического аппарата тонкого кишечника, мезентериальных лимфоузлов, паренхиматозных органов, с бактериемией. Клинически проявляется выраженной интоксикацией с лихорадкой, развитием гепатолиенального синдрома, иногда- розеолезной сыпью и энтеритом.

Возбудитель: семейство: Enterobacteriaceae, род: Salmonella, вид: S. Typhi, серовар S. typhi. Впервые обнаружен К. Эбертом (1880 г.) в срезах селезенки.

Морфологические свойства: типичны для рода сальмонеллы, подвижные мелкие грамотрицательные палочки размером 0. 7-1. 5* 2-5 мкм. Капсулу не образуют, окружены микрокапсулой. Подвижность обеспечивается за счет перитрихиально расположенных жгутиков.

Культуральные свойства: хорошо растут на простых питательных и желчесодержащих средах. На плотных средах могут образовывать колонии в S- и R-формах, на жидких- диффузное помутнение. S-форма колоний: средних размеров, гладкие, блестящие, полупрозрачные с голубоватым оттенком. Жидкие среды обогащения при посеве крови: триптозосоевый бульон, бульон с сердечно- мозговой вытяжкой, желчный бульон; при посеве фекалий, желчи, мочи, пищевых продуктов: селенитовый бульон, тетратионатовый бульон. На лактозосодержащих дифференциальных средах (Эндо, Плоскирева, Мак-Конки) образуют бесцветные колонии; на висмут-сульфитном агаре- колонии черного цвета, на среде BGA- розовые колонии.

Ферметативные (биохимические) свойства: в основном типичны для рода сальмонелла. 1. отсутствие газообразования (т. е. ферметации глюкозы то кислоты и газа), ферментации лактозы, индолообразования, расщепления мочевины. 2. Продукция сероводорода. 3. Декарбоксилирование лизина.

Антигенные свойства: 1. О-антиген (соматический) - связан с клеточной стенкой, по структуре- липополисахарид. 2. Н-антиген (жгутиковый) - входит в состав жгутиков бактерий, по структуре- белок флагеллин. 3. Vi- антиген- антиген вирулентности, по структуре- полисахарид. По классификации сальмонелл по антигенной структуре (по Кауфману) S. typhi относится к серогруппе D, О-антиген-9, 12, Н- антиген: фаза 1-d, фаза 2-нет.

Патогенез: основной фактор вирулентности- Vi-антиген (защищает от фагоцитоза и комплемента), основные факторы патогенности: микрокапсула, белок инвазин, эндотоксин.

Патогенез: за счет микрокапсулы возбудитель прилипает к энтероцитам тонкой кишки; после адгезии происходит частичная колонизация слизистой; затем происходит инвазия (с помощью трансцитоза) слизистой кишечника через М-клетки, не повреждая слизистую; из М-клеток возбудитель транспортируется в пейеровы бляшки, где захватываются макрофагами, в которых они размножаются (вызывая воспаление с лимфаденитом), образуя первичный очаг инфекции; это приводит к нарушению барьерной функции, с последующим попаданием возбудителя в общий ток лимфы и затем в кровь, вызывая бактериемию (10-14 сутки), которая сопровождает период интенсивной лихорадки. С током крови возбудитель разносится по всему организму, оседая в ретикулоэндотелиальных элементах паренхиматозных органов: печени, селезенке, легких, костном мозге, где также размножаются в макрофагах. Также возбудитель заносится по желчным протокам, диффундируя из Купферовских клеток печени, в желчный пузырь, где интенсивно размножается, т. к. желчь для них- элективная питательная среда. Накапливаясь в желчном пузыре, сальмонеллы вызывают в нем воспалительный процесс и с током желчи реинфицируют тонкий кишечник. Повторное введение сальмонелл в сенсибилированные пейеровы бляшки, приводит гиперергическому воспалению, некрозу и изъязвлению, следовательно к кишечному кровотечению и перфорации стенки кишечника, с последующим перитонитом. При разрушении сальмонелл выделяется эндотоксин, котрый приводит к интоксикации организма. Выделяются сальмонеллы из организма с испражнениями и мочой.

Микробиологическая диагностика эшерихиозов.

Осуществляется с помощью бактериологического метода исследования. Материал для исследования: фекалии, кот. берут у больного трижды в первые сутки от начала болезни с интервалом 3-4ч., промывные воды желудка и кишечника, кровь при сепсисе, от трупов- содержимое кишечника, кусочки селезенки. Посевы лучше делать у постели больного.

На первом этапе бактериологического метода исследования делаем посев материала на среду Эндо (диф-диагн. среда) и инкубируем чашки на 24ч., 37град.

На втором этапе производим: макроскопию полученных колоний -малиновые металлическим блеском, гладкие, микроскопия-при окраске по Граму выявляем отрицательные палочки. Далее проводим ОРА, т. к. эшерихии патогенных сероваров не отличаются от эшерихий, обитающих в кишечнике человека по культуральным свойствами по способности ферментировать лактозу. При этом на среде отмечают любые 10 лактозоположительных колоний и агглютинируют их на стекле со смесью ОК-сывороток в разведении 1: 10, 1: 20. Если образуются хлопья-реакция положительная, а если нет- отрицательная. Это говорит об отсутствии пат. КП. При положительном результате РА подозрительные колонии пересеваем на скошенный агар. Инкубируем пробирки в термостат на 24ч, 37 град.

На третьем этапе производим макроскопию полученных колоний-гомогенный рост, микроскопия- отриц. палочки. Это проверка чистоты культуры. Далее проводим идентификацию ЧК. Делаем посев ЧК на пестрый ряд. Проверяем биохимические свойства выделенного микроорганизма: наблюдается ферментация лактозы, глюкозы с образованием кислоты и газа, образуется индол и сероводород.