Методы диагностики болезней животных

Для определения катехоламинов используют биологические, хроматографические, флюориметрические и радиоизотопные методы исследования. Хотя радиоэнзиматические методы отличаются высокой чувствительностью, однако из-за ряда техничесих трудностей и дефицита некоторых реагентов, в клинико-биохимических исследованиях наиболее часто используются флюориметрические методы.

При сборе материала следует принять меры для стабилизации катехоламинов (кровь - охладить, мочу - подкислить). Для выделения и очистки катехоламинов используют хроматографию с последующим превращением элюированных катехоламинов в флюоресцирующие продукты.

Помимо самих катехоламинов в диагностических целях проводят определения в моче продуктов их метаболизма - ванилинминдальную кислоту (ВМК), гомованилиновую кислоту (ГВК). Для фракционирования и определения этих метаболитов широко используется высоковольтный электрофорез и тонкослойная хроматография.

Увеличение адреналина, норадреналина, дофамина в крови и моче и ванилинминдальной и гомованилиновой кислот в моче происходит при опухолях мозгового вещества надпочечников, в острый период инфаркта миокарда, гепатитах и циррозах печени, обострении язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки, нарушении экскреторной функции почек.

Уровень содержания катехоламинов в крови и моче снижается при остропротекающих инфекциях, остром лейкозе, коллагенозе, гипофункции надпочечников.

Наибольшее клиническое значение имеет определение катехоламинов при катехолсекретирующих опухолях хромаффинной ткани (феохромацитомах, параганглиомах, нейробластомах), при которых их содержание в крови и моче резко увеличено.

Гормоны щитовидной железы. Основными гормонами щитовидной железы являются тироксин (тетрайодтиранин,Т4 и трийодтиранин,Тз). Секретируемые в плазму гормоны связываются с тироксинсвязывающим глобулином (ТСГ), который по электрофоретической подвижности относится к а- глобулинам, а также с тироксинсвязывающим преальбумином (ТСПА). Необходимо иметь в виду, что при нарушении синтеза этих белков или их транспортной функции определение Тз и Т4, не будут давать представление о функциональной активности щитовидной железы.

Тиреоглобулин, находящийся в фолликулах щитовидной железы не является гормоном, так как в обычных условиях он не секретируется в кровь. Однако, при тиреоидитах, онкологических заболеваниях щитовидной железы он может попадать в кровь и вызывать образование соответствующих антител.

Б настоящее время клинико-биохимическая диагностика патологии щитовидной железы основывается на использовании радиоиммунологических и иммуноферментных методов определения Тз,Т4, тиреоглобулина, антител к нему, а также тиреотропного гормона (ТТГ).

Тиреоглобулин - гликопротеин с молекулярной массой около 650000 в нормальной сыворотке крови, обычно не определяется. Увеличение тиреоглобулина наблюдается при тиреодите, диффузном токсическом зобе, раке щитовидной железы. Б клинической практике определение тиреоглобулина используется в основном в качестве маркера новообразований в тканях щитовидной железы. Помимо тиреоглобулина при тех же показаниях определяют антитела к нему.

Тироксинсвязывающий глобулин (ТСГ) - специфический белок сыворотки крови, связывающий и транспортирующий гормоны щитовидной железы. Одна молекула ТСГ связывает одну молекулу Тз и одну молекулу Т4. Концентрация ТСГ в крови прямо связана с продукцией тиреоидных гормонов. Так как метаболически активными являются только свободные гормоны, то для оценки функции щитовидной железы необходимо определять и концентрацию ТСГ.

Ориентировочное содержание ТСГ в крови - 15 - 45 мг/л.

Обычно ТСГ определяют одновременно с Т4 и рассчитывают коэффициент Т4/ТСГ. При гипотиреозе этот коэффициент уменьшается, при гипертиреозе - увеличивается.

Повышение содержания ТСГ в крови происходит при беременности, инфекционном гепатите, наследственно детермированном повышении биосинтеза этого белка. Уменьшение содержания ТСГ в крови наблюдается при нефротическом синдроме, циррозе печени, наследственно обусловленном дефиците, акромегалии.

Гистамин - биогенный амин, участвующий в нейрогуморальной регуляции тонуса кровеносных сосудов и органов с гладкой мускулатурой, повышает проницаемость капилляров, усиливает секрецию пищеварительных желез.

Методы определения гистамина включают его экстракцию с последующим количественным определением. Химические методы определения основаны на взаимодействии некоторых его функциональных группировок с определенными реагентами. Наиболее часто в клинико-биохимических исследованиях используются флюориметрические методы. Б последнее время для определения гистамина используются методы ИФА. Содержание гистамина в цельной крови составляет от 0,2 до 0,9 мкмоль/л.

Увеличение гистамина в крови наблюдается при аллергических процессах, гипоксии, травмах, переохлаждении и перегревании, хроническом миелоидном лейкозе, язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки, рентгеновском облучении, проникающей радиации. Повышение уровня гистамина в крови имеет место при гепатитах, циррозе печени, что, возможно, обуславливает аллергические проявления при этих заболеваниях.

Исследование минеральных веществ. Нарушение обмена минеральных веществ ведет к разнообразным патологическим состояниям. Это обусловлено множественностью функций, которые макро- и микроэлементы выполняют в организме. Полноценное минеральное питание в соответствии с разработанными нормами - необходимое условие нормального функционирования всех органов и систем организма животных.

Поэтому необходим оперативный контроль за состоянием минерального обмена, направленный на обнаружение несоответствия поступления минеральных веществ в организм, его физиологическим потребностям и выявлению самых ранних предклинических стадий нарушения минерального обмена. При этом необходимо иметь в виду, что объективно оценивать состояние минерального обмена чаще всего можно лишь при комплексном изучении большого числа элементов, так как их обмен тесно связан между собой. Наиболее часто для этих целей исследуют содержание минеральных веществ в сыворотке крови.

Исследование минеральных компонентов крови ведется либо химически методами, либо методами пламенной фотометрии.

Однако, химические методы более трудоемкие и в тех случаях, когда приходится определять одновременно несколько макро- и микроэлементов, требуют больших затрат времени. Поэтому все чаще используются методы пламенной фотометрии.

Пламенная фотометрия основана на излучении (эмиссионный метод) или поглощении (абсорбционный метод) света атомами веществ, испаряемых в пламени. Сущность метода заключается в том, что раствор анализируемого вещества в распыленном виде подается в пламя газовой горелки, где происходит его испарение. Атомы анализируемого вещества поглощают свет стандартного источника или сами испускают его. Количество испускаемого или поглощенного света при определенных условиях пропорционально числу возбужденных атомов.

Пламенная фотометрия в виде эмиссионного метода при анализе крови чаще всего используется для определения содержания натрия, калия, кальция, лития. Для определения интенсивности излучения используют пламенные фотометры различных марок, работа с которыми проводится в соответствии с прилагаемой инструкцией.

При работе с биологическим материалом, озоление необходимо проводить очень осторожно, чтобы не потерять и определяемые элементы. Поэтому сжигание проводят при возможно более низких температурах, используя, как правило, мокрое озоление с применением перекиси водорода, серной кислоты и других окислителей. Вследствие нестабильности пламени газовой горелки каждое исследование повторяют не менее 2-3 раз. Для количественного расчета используют метод калибровочных графиков, которые строят по серии стандартных смесей.

Широкое распространение получил абсорбционный метод фотометрии. Б этом варианте атомы исследуемого металла, находящегося в виде атомного пара, поглощают свет определенной длины волны. Интенсивность света, прошедшего через пламя регистрируется фотодетектором. Использование современных атомно-абсорбционных спектрофотометров позволяет определять большое количество различных элементов с относительной ошибкой 2-4%.

Натрий. При недостатке натрия у скота наблюдается ряд патологических симптомов (огрубение шерстного покрова, извращение аппетита, нерегулярная охота, бесплодие). Снижается продуктивность, ухудшается использование протеина корма, нарушаются процессы рубцового метаболизма. Недостаточность натрия может быть связана с избытком калия в рационе, так как при этом резко возрастает выведение натрия с мочой. Увеличение содержания натрия в крови (гипернатриемия) наблюдается при повышенном диурезе, гиперфункции коры надпочечников, чрезмерном поступлении хлорида натрия с кормом. Уменьшение содержания натрия в крови (гипонатриемия) может иметь место при недостаточном его поступлении, чрезмерном выведении с почками при поносах.

Калий. Дефицита калия в рационах сельскохозяйственных животных практически не бывает. При содержании животных на синтетической диете с недостатком калия наблюдается замедленный рост, атаксия, атония кишечника, нарушение сердечной деятельности. Избыточное поступление калия с травой рассматривается как один из этиологических факторов пастбищной тетании. Увеличение содержания калия в крови (гиперкалиемия) установлена при повышенном поступлении калия с кормом, распаде клеток и тканей (гемолитическая анемия, некрозы), почечной недостаточности, гиперфункции коры надпочечников. Причиной гипокалиемии (уменьшение содержания калия в крови) может быть недостаточное поступление калия с кормом, усиленное выведение его с мочой, при поносах, метаболическом алкалозе и ацидозе, парентеральном введении хлорида натрия и глюкозы.

Кальций. Основной физиологической формой кальция в организме является ионизированная форма. Количество ионизированного кальция зависит от рН крови. При повышении рН усиливается связывание кальция с белками и содержание ионизированного кальция уменьшается. Поэтому при алкалозах может развиться тетания даже при достаточном содержании общего кальция в крови. При хронических ацидозах повышается растворимость солей костной ткани, и кальций теряется организмом. Поэтому даже при нормальном содержании солей кальция в рационе и функционировании паращитовидных желез может развиваться остеомаляция. Недостаток кальция в рационах сельскохозяйственных животных ведет к разнообразной патологии (рахит, остеомаляция, остеопороз, родильный парез). При этих заболеваниях наблюдается уменьшение содержания общего кальция в сыворотке крови (гипокальциемия). Снижение содержания кальция в крови наблюдается также при тетании, хронических заболеваниях почек, лейкозе, бронхопневмонии, контагиозной плевропневмонии. Увеличение содержания кальция в крови (гиперкальциемия) может быть алиментарного происхождения, после приема кормов с большим содержанием кальция, а также наблюдается при ряде патологических состояний - гипервитаминозе Дг, деформирующем артрите, гиперфункции паращитовидных желез, перитоните, желтухе. Повышение содержания кальция в крови наблюдается иногда при острых панкреатитах, нарушении эндокринной регуляции минерального обмена.

Магний. При недостатке магния в рационах жвачных наблюдается тяжелое заболевание - гипомагниемия или травяная (пастбищная) тетания. Хотя это заболевание может быть предупреждено или излечено введением солей магния, считают, что оно вызывается не только недостатком магния, но и дисбалансом других элементов (в частности калия). Увеличение содержания магния в сыворотке крови наблюдается при введении животным повышенных доз препаратов, содержащих магний, при отравлении щавелевой кислотой и ее солями, болезнях печени, почечной недостаточности. Снижение содержания магния в крови может быть при пастбищной тетании у жвачных, клонико- тонических судорогах у поросят, поносах, белково-минеральном голодании, фтористой интоксикации, а также при избыточном поступлении в организм азота с концентрированными кормами.

Фосфор. Недостаток фосфора у молодых животных ведет к возникновению рахита. Дефицит фосфора в корме является одной из основных причин алиментарной дистрофии, которая наблюдается у всех видов сельскохозяйственных животных. Обмен фосфора в организме тесно связан с обменом кальция. Эти элементы взаимодействуют в пищеварительном тракте, в системе кость - кровь, в мягких тканях и регулируются по сути дела одними и теми же механизмами. Увеличение содержания фосфора в крови (гиперфосфатемия) наблюдается при высококонцентратном типе кормления, гипервитаминозе Дг, почечной недостаточности, желтой атрофии печени, при интенсивной мышечной работе, в период заживления костных переломов. Гиперфосфатемия при нефритах и нефрозах указывает на неблагоприятное течение болезни. Гипофосфатемия (понижение содержания неорганического фосфора в крови) наблюдается при рахите, остеомаляции, при нарушении всасывания фосфатов в кишечнике, избытке кальция в рационе, гиповитаминозе Д.

Железо. При недостатке железа в организме развивается анемия. Наиболее часто железодефицитная анемия наблюдается у поросят, особенно в подсосный период, так как запасы железа у них практически отсутствуют, а молоко свиноматок бедно железом. Анемии, связанные с недостатком железа, отмечаются и у других видов животных - телят, ягнят и у кур в период высокой яйценоскости. О состоянии обмена железа и его запасах в организме судят по содержанию его в крови и по степени насыщенности трансферрина железом. Уменьшение содержания железа в сыворотке крови наблюдается при гнойных септических инфекциях. Содержание железа в сыворотке крови - важный показатель, характеризующий эффективность лечения животных с железодефицитной анемией. Высокое содержание железа в сыворотке возможно при избытке его в кормах, при нарушении механизма его использования (например, нарушение образования ферритина при некоторых заболеваниях печени), а также при анемиях, связанных с нарушением эритропоэза.

Медь. Медь участвует в процессах кроветворения. Мобилизация внутриклеточных резервов железа и его поступление в плазму регулируется медьсодержащим белком церулоплазмином. Медь способствует включению железа в структуру гема и способствует созреванию эритроцитов на ранних стадиях развития. При недостатке меди в рационе в зависимости от вида и возраста животных в организме развиваются разнообразные нарушения. Наиболее характерными являются анемия, нарушение роста и развития, остеопороз. Могут наблюдаться поносы, истощение, огрубение и депигментация волосяного покрова, демиэлинизация головного и спинного мозга, двигательные расстройства и спастические параличи. Диагностическую ценность при гипокупрозах имеет исследование меди и церулоплазмина в крови, содержание которых снижается.

Цинк. При дефиците цинка в рационе или нарушении его всасывания в кишечнике могут наблюдаться явления цинковой недостаточности. У свиней при недостатке цинка возникает заболевание паракератоз, характеризующееся сморщиванием и утолщением кожи, появлением сыпи, струпьев, укорочением и утолщением костей. У свиноматок удлиняются сроки супоросности, чаще наблюдаются патологические роды и послеродовые осложнения, у хряков наблюдается дистрофия семенников. У коров при дефиците цинка наблюдается увеличение эмбриональной смертности, угнетение половой охоты, течки. При этом отмечено снижение пролактина и простагландина PGF2. При диагностике недостаточности цинка учитывается количество его в органах и тканях. Снижение содержания в сыворотке крови указывает на недостаток его в организме. Для прижизненной диагностики недостаточности цинка предложен также ферментативный тест. Увеличение активности щелочной фосфатазы в сыворотке крови более чем в 2 раза после внутривенного введения цинка в дозе 2-3 мг/кг живой массы свидетельствует о недостаточной обеспеченности организма цинком.

Кобальт. Наиболее чувствительны к недостатку кобальта крупный рогатый скот и овцы. При недостатке кобальта в почвах и растениях у них возникает характерное заболевание, известное под названием гипокобальтоз, энзоотический маразм, сухотка, солевая болезнь. Заболевание отмечают в биогеохимических провинциях, где содержание кобальта в траве ниже 0,2 мг/кг. Снижение содержания кобальта в крови и витамина В12 в крови и печени указывает на кобальтовую недостаточность. Если количество кобальта в содержимом рубца падает ниже 20 мкг/л, то синтез витамина В12 бактериями ингибируется.

Иод. Биогеохимические провинции с недостатком йода встречаются довольно часто, что обуславливает широкое распространение такого заболевания, как эндемический зоб. Наиболее чувствительным является молодняк животных, что может быть следствием дефицита йода в рационах беременных маток. Основным показателем обеспеченности животных йодом является концентрация гормонов щитовидной железы в крови или белково-связанного йода. Дефицит йода может быть вторичным при скармливании животным соевых бобов, гороха, белого клевера, капусты. В них содержится большое количество так называемых зобогенных, йоддепрессивных веществ, которые препятствуют связыванию свободного йода в щитовидной железе.

Селен. У животных установлено два вида заболеваний, связанных с недостатком селена. Экссудативный диатез у цыплят, излечиваемый как селеном, так и витамином Е и беломышечная болезнь овец и крупного рогатого скота, излечиваемая только селеном. Установлено, что органические соединения селена, обладают свойствами антиоксидантов. Он входит в состав фермента глутатионпероксидазы, функция которого заключается в разрушении гидроперекисей жирных, нуклеиновых кислот и стероидов и превращении их в малотоксичные продукты. При недостатке селена наблюдается снижение в плазме крови активности фермента глутатионпероксидазы. По изменению активности этого фермента диагностируют дефицит селена в организме.

Исследование липидов. В клинико-биохимических исследованиях из показателей липидного обмена обычно исследуются холестерин и его фракции, триглицериды, фосфолипиды, свободные жирные кислоты и кетоновые тела.

Холестерин - важная составная часть клеточных мембран и липопротеинов. Б организме имеется два типа холестерина - свободный, входящий в состав мембран, и этерифицированный, входящий в состав липопротеинов. Нарушение обмена холестерина приводит к отложению его в клетках органов и тканей и патологии. Отложение холестерина в плазматических мембранах клеток приводит к атеросклерозу. Увеличение содержания общего холестерина в крови наблюдается при алиментарном бесплодии у коров, гепатите, циррозе печени, хронической почечной недостаточности, гипофункции щитовидной железы, хроническом панкреатите, ожирении, авитаминозах группы Б. Уменьшение общего холестерина в сыворотке крови наблюдается при голодании, синдроме жирной печени у крупного рогатого скота, туберкулезе легких, гипертиреозе, анемии, лихорадочных состояниях, обширных ожогах, гнойно-воспалительных процессах. Снижение этерифицированной фракции холестерина указывает на тяжелое поражение печени.

Холестерин ЛПВП (ХС - ЛПВП) - холестерин, входящий в состав липопротеинов высокой плотности (ЛПВП), транспортируется из клеток сосудистой стенки в печень, т.е. содержание этого холестерина коррелирует с антиатерогенной функцией ЛПВП. Снижение концентрации ХС - ЛПВП наблюдается при атеросклерозе, острых инфекциях, туберкулезе легких, неспецифических бронхолегочных заболеваниях.

Холестерин ЛПНП - ЛПОНП (ХС - ЛПНП - ЛПОНП) - холестерин, входящий в состав липопротеинов низкой плотности (ЛПНП) и липопротеинов очень низкой плотности (ЛПОНП), способен откладываться в сосудах и способствовать развитию атеросклероза. Поэтому его содержание в крови хорошо коррелирует с атерогенными нарушениями в организме.

Повышение концентрации ХС - ЛПНП - ЛПОНП наблюдается при ожирении, заболеваниях печени, нефротическом синдроме, гипотиреозе.

Уменьшение концентрации этого холестерина имеет место при голодании, злокачественных новообразованиях, гиперфункции щитовидной железы, анемиях, поражении центральной нервной системы.

Многочисленные методы определения ХС - ЛПВП базируются на различных способах выделения его из сыворотки крови. Предложены диагностические наборы, в основу которых положен принцип осаждения ЛПНП и ЛПОНП различными осадителями (фосфорновольфрамовой кислотой, полиэтиленгликолем и др.) с последующим определением ХС - ЛПВП. В норме примерно 70 % холестерина плазмы крови находится в составе "атерогенных" ЛПНП и ЛПОНП и около 30% - в составе "антиатерогенных" ЛПВП.

Фосфолипиды - группа липидов, содержащих в своем составе фосфорную кислоту, спирт (чаще глицерин), остатки жирных кислот и азотистые основания. Содержание фосфолипидов в сыворотке крови увеличивается при холестазе, обтурационной желтухе, билиарном циррозе, хроническом панкреатите, нефротическом синдроме, тяжелой форме сахарного диабета, печеночной коме. Снижение фосфолипидов наблюдается при анемиях, алиментарной дистрофии, острых лихорадочных состояниях, жировой дегенерации печени, гипертиреозе, циррозе печени, абеталипопротеинемии. Определение фосфолипидов основано на определении липидного фосфора или в липидном экстракте (метод Блюра) или после осаждения трихлоруксусной кислотой (метод Зильверсмита и Дэвиса), а также энзиматическим методом. Соответствующие диагностические наборы разработаны и выпускаются различными фирмами.

Триглицериды (триацилглицерины, нейтральные жиры) - эфиры трехатомного спирта глицерина и высших жирных кислот. Увеличение концентрации нейтральных жиров идет параллельно увеличению ЛПОНП и хиломикронов. Оно имеет место при хронической почечной недостаточности, нефротическом синдроме, панкреатитах, при ожирении, билиарном циррозе печени, ишемической болезни сердца. Снижение нейтрального жира наблюдается при голодании, хронических заболеваниях легких, в терминальной стадии поражения паренхимы печени, гипертиреозе, при гипо- и абеталипопротеинемии. Для определения триглицеридов используются химические методы с колориметрическим и флюориметрическим окончанием, а также ферментные методы. Выпускаются соответствующие диагностические наборы.

Свободные жирные кислоты (СЖК). Увеличение свободных (неэтерифицированных) жирных кислот оказывает токсическое действие на мембраны клеток, инициирует перекисное окисление липидов, образование простагландинов. Увеличение концентрации СЖК в крови наблюдается при гипертиреозе, остром панкреатите, тяжелых формах сахарного диабета, стрессах, интенсивной физической нагрузке, при длительном голодании, гепатитах, когда нарушено их окисление в печени, синдроме жирной печени у крупного рогатого скота, ожирении, кетозе. При нефритах, в условиях нарастания почечной недостаточности содержание свободных жирных кислот снижается.

Кетоновые тела. К кетоновым телам относят: ацетоуксусную кислоту, бета-оксимасляную кислоту и ацетон. Кетоз может наблюдаться не только при нарушении липидного, но и других обменов. Нарушение обмена кетоновых тел приводит к резкому увеличению их в крови (кетонемия), моче (кетонурия) и молоке (кетолактия). Увеличение кетоновых тел в крови и других биологических жидкостях наблюдается при голодании, недостатке углеводов в рационе, скармливании недоброкачественных кормов, недостатке микроэлементов (кобальта, марганца, меди и др.), расстройстве гормональной регуляции, сахарном диабете. Повышение кетоновых тел в крови наблюдается у высокопродуктивных коров в период наивысшей лактации, у овец в конце суягности, при атониях преджелудков, гнойных эндом етр итах.

Исследование углеводов. В обычной клинической практике для оценки состояния углеводного обмена исследуется кровь на содержание в ней глюкозы, пировиноградной и молочной кислоты.

Глюкоза. Содержание глюкозы в крови крупного рогатого скота и овец составляет 2,5-3,5 ммоль/л, у свиней, лошадей - 3,5-5,0 ммоль/л. Физиологическая гипергликемия наблюдается при приеме большого количества углеводов с кормом или непродолжительных физических нагрузках (длительная нагрузка, наоборот приводит к гипогликемии). При патологии наиболее резко выраженная гипергликемия наблюдается при сахарном диабете. Увеличение содержания глюкозы в крови происходит также при гиперфункции щитовидной железы, мозгового слоя надпочечников и гипофизе, тяжелых поражениях печени, опухолях мозга, остром и хроническом панкреатите, стрессах, ожогах, при раздражении центральной нервной системы химическими и механическими раздражителями. Снижение уровня глюкозы в крови наблюдается при несбалансированном кормлении, недостатке углеводов в кормах, голодании (алиментарная гипогликемия), гиперфункции островков Лангерганса, недостатке в организме микроэлементов, ацидозе, гипокинезии, остеодистрофии. Гипогликемия имеет место при гипотиреозе, токсическом повреждении печени (отравлении четыреххлористым углеродом, хлороформом и др.), передозировке инсулина, при некоторых формах поражения почек, сопровождающихся снижением сахарного порога, что приводит к усиленному выведению глюкозы с мочой. Физиологическая гипогликемия может развиваться как компенсаторная реакция на выброс инсулина, вызванный большим приемом углеводов с кормом.

Для определения глюкозы в крови предложено большое число неферментных методов, наибольшее распространение из которых в клинико-биохимических исследованиях получил ортотолуидиновый метод. Б настоящее время широко используются ферментативные глюкозооксидазно-пероксидазные методы с колориметрическим окончанием, которые обладают высокой специфичностью. На их основе выпущены различные диагностические наборы. Для быстрого полуколичественного определения глюкозы в крови используют многочисленные варианты диагностических тест-полосок.

Молочная кислота (лактат) - является конечным продуктом гликолиза и гликогенолиза. Содержание ее в крови крупного рогатого скота составляет 0,6-2,2 ммоль/л, лошадей, свиней, овец - 0,9-1,3 ммоль/л. Увеличение молочной кислоты в крови происходит при интенсивной мышечной работе. Поэтому при патологических состояниях сопровождающихся усиленными мышечными сокращениями (тетания, столбняк) наблюдается повышение молочной кислоты в крови. Содержание молочной кислоты увеличивается при гипоксиях, связанных с сердечной и легочной недостаточностью, злокачественных новообразованиях, при острых гепатитах, терминальной стадии цирроза печени, анемиях, геморрагическом шоке, острых отравлениях, кетозах, миоглобинурии. Как правило, повышение концентрации молочной кислоты в крови, сопровождается уменьшением щелочных резервов и увеличением количества аммиака в крови, что наблюдается при поедании кормов с высоким содержанием углеводов. Определяют молочную кислоту колориметрическим методом по реакции с пара-оксидифенилом.

Пировиноградная кислота (пируват). Содержание пировиноградной кислоты в крови крупного рогатого скота 90-190 мкмоль/л, свиней 60-170 мкмоль/л. Наиболее резкое повышение пировиноградной кислоты наблюдается при усиленной мышечной работе иБ1 - витаминной недостаточности. Кроме того, повышение содержания пировиноградной кислоты в крови отмечается при паренхиматозных заболеваниях печени, сахарном диабете, сердечной декомпенсации, токсикозах, кетозе, гиперфункции гипофизарноадреналиновой системы, после введения некоторых лекарственных препаратов - камфоры, стрихнина, адреналина. Количественное определение пировиноградной кислоты проводится колориметрическим методом на основе реакции с 2,4 - динитрофенилгидрозином.

Исследование витаминов. К витаминам относят низкомолекулярные органические соединения разнообразной химической структуры, выделенных в отдельный класс биологически активных веществ по признаку строгой необходимости для питания животных и человека. По сравнению с основными питательными веществами витамины необходимы животному организму в ничтожно малых количествах. Отсутствие или недостаток в рационе витаминов приводит к нарушениям обмена веществ и в итоге, к заболеваниям, получившим название авитаминозов или гиповитаминозов.

У животных наиболее часто встречаются скрытые формы витаминной недостаточности - гиповитаминозы, которые проявляются в менее выраженной форме, чем авитаминозы, без характерной клиники и появления специфических признаков. Они проявляются, главным образом, замедлением роста, нарушением воспроизводства, снижением продуктивности. Для диагностики гиповитаминозов проводят исследование содержания витаминов в крови, молозиве и печени. Для определения витаминов используют колориметрические, спектрофотометрические, флюориметрические, хроматографические методы. Выход содержания витамина за граничные значения указывает на недостаток его в организме и угрозу гиповитаминоза или авитаминоза. Необходимо иметь ввиду, что существует витаминрезистентные формы авитаминозов, когда заболевание развивается на фоне достаточного содержания витаминов в кормах и обусловлено нарушением всасывания витаминов в кишечнике и их транспортировки или нарушением метаболизма витаминов в организме, в результате чего из них не образуются биологически активные формы. Необходимо также учитывать, что потребность в витаминах увеличивается при заболеваниях, скармливании недоброкачественных кормов, стрессах, использовании лекарственных препаратов.

Витамин А. Дл я определения обеспеченности сельскохозяйственных животных витамином А и каротином анализируют корма на их содержание с последующим расчетом количества и сопоставлением полученных данных с нормами. Критерием обеспеченности является содержание витамина А в сыворотке крови и печени. Однако довольно часто нормальное содержание витамина А в плазме крови может поддерживаться за счет резервов, содержащихся в печени вплоть до их истощения. Поэтому более надежный показатель обеспеченности витамином - содержание его в печени. Критерием А-витаминной недостаточности у птицы может служить содержание его в печени и яйце, а также повышенное содержание мочевой кислоты в крови. Если у здоровых цыплят концентрация ее в крови составляла 0,16 ммоль/л, то у гиповитаминозных - 0,41-0,71 ммоль/л. Необходимо иметь ввиду, что во многих случаях А- авитаминоза у телят, цыплят, норок и других животных содержание витамина А в печени даже превышало его нормальное содержание. У таких животных был нарушен механизм утилизации витамина А, вследствие повреждения транспортной функции ретинолсвязывающего белка (РСБ) или нарушения его синтеза. Определение витамина А и каротина проводят обычно по методу Бессея, основанном на величине светопоглащения растворами витамина А и каротина, экстрагированными из плазмы крови.

Витамин D. Наиболее точным методом диагностики D- авитаминоза является определение в сыворотке крови метаболитов витамина D - 1,25 дигидроксихолекальциферола или 24,25 - дигидроксихолекальциферола. Можно проводить определение и витамина D, однако в том случае, если нарушен его метаболизм, то содержание его в сыворотке крови не коррелирует с развитием D-авитаминозного состояния. Однако чаще на практике определяют косвенные показатели - активность щелочной фосфатазы, содержание общего кальция и неорганического фосфора в крови. При а- и гиповитаминозе D наблюдается резкое увеличение активности щелочной фосфатазы и нарушение соотношения кальция и фосфора в крови.

С целью диагностики витамина D предложено определять также содержание лимонной кислоты в крови, содержание которой при а- и гиповитаминозе D резко снижается.

Витамин Е. Критерием обеспеченности организма витамином Е является содержание его в плазме. Хорошим показателем при экспресс - диагностике Е-витаминной недостаточности является тест резистентности эритроцитов к гемолизу. При Е-авитаминозе происходит нарушение мембран эритроцитов, в результате чего их устойчивость к гемолизу снижается. Так, гемолиз выше 10 % оценивается у птицы как признак Е-витаминной недостаточности.

У птицы критерием обеспеченности может быть содержание витамина Е в яйце. Нормальным содержанием витамина Е в желтке кур и уток считается 28-40 мкг/г, гусей - 55-60 мкг/г. Определение витамина Е проводят химическим методом, основанном на окислении токоферолов хлорным железом и спектрофотометрическом определении окрашенного комплекса, образовавшегосяпосле взаимодействия с а, а - дипиридилом.

Витамин К. В целях определения обеспеченности животных витамином К исследуют его содержание в крови и печени. Предложен также метод определения К-витаминной недостаточности по протромбиновой активности крови. Тест основан на существовании коррелятивной зависимости между содержанием протромбина в крови и витамина К в организме. У птиц, например, увеличение протромбинового времени более 60 секунд указывает на дефицит витамина К.

Витамины группы В. Признаки недостаточности, развивающиеся у животных при недостатке витаминов группы, во многом сходны. Это связано с тем, что продукты богатые или бедные одним из витаминов этой группы оказываются такими же и в отношении других витаминов. Основными лабораторными методами обнаружения недостаточности витамина В1 является определение общего тиамина в печени и пировиноградной кислоты в крови. При а- и гиповитаминозе В1 количество тиамина снижается, а содержание пировиноградной кислоты возрастает. Лабораторная диагностика В2-витаминной недостаточности основывается на определении общего рибофлавина в печени с использованием флюориметрических методов. С целью контроля обеспеченности организма никотиновой кислотой проводят определение содержания ее в крови или содержания продуктов ее метаболизма в моче.

Исследование кислотно-основного состояния. Кислотно-основное состояние крови необходимо оценивать по меньшей мере по трем показателям: водородному показателю (рН) крови, парциальному давлению углекислого газа в крови (рС02) и сдвигу буферных оснований (СБО). рН - водородный показатель, характеризующий концентрацию ионов в биологической жидкости. Определяется он с высокой степенью точности с помощью различных рН-метров.

Показатель рС02 характеризует давление СО2 над кровью, определяя тем самым количество растворенного углекислого газа. Так как равновесие обратимой реакции в крови СО2 + Н2О D Н2СО3 D Н+ + НСО3^- сдвинуто влево и концентрация Н2СО3 в 800 раз меньше концентрации растворенного СО2, то при оценке кислотно-основного состояния она может на учитываться. Этот показатель можно определить манометрическим методом Ван- Слайка или Шоландера или с помощью различных номограмм.

Показатель сдвига буферных оснований или избыток оснований (СБО или BE), характеризует изменение содержания оснований или кислот крови по отношению к нормальным значениям, принятым за 0. Значение, равное 0 принимается для крови с рН=7,4, при рС02=40 мм рт.ст. Положительные значения этого показателя свидетельствуют об абсолютном или относительном избытке оснований, отрицательные - соответствующем избытке кислот. Определяется обычно по номограммам.

В некоторых случаях для более полного описания кислотно- основного состояния используются показатели: буферные основания (БО или ВВ), стандартный бикарбонат (СБ или SB) и истинный бикарбонат (ИБ или АВ). Показатель "буферные основания" характеризует в основном бикарбонатную и белковую системы крови. Он относится к крови, полностью насыщенной кислородом, цельной крови или плазме (без спецификации относится к цельной крови). Рассчитывается по номограммам.

Показатель "стандартный бикарбонат" характеризует концентрацию бикарбонатов в плазме крови, уравновешенной при рС02 40 мм рт. ст., температуре 38°С и полном насыщении гемоглобина кислородом. Рассчитывается по номограммам. Показатель "истинный бикарбонат" характеризует концентрацию бикарбоната в анаэробно взятой крови, при фактическом рН и рС02 крови.

Параметры кислотно-основного равновесия определяются с помощью эквилибрационного метода по Аструпу или с рС02 - электродом по Северингаузу. Однако в обоих случаях пользуются номограммами Зиггаард - Андерсена, базирующихся на эквилибрационных измерениях по методу Аструпа.

Нарушения кислотно-основного состояния проявляются в виде ацидоза (увеличение в крови кислот) и алкалоза (увеличение в крови оснований). Ацидозы и алкалозы, протекающие без изменений рН крови, называются компенсированными. Декомпенсированные ацидоз и алкалоз сопровождаются изменением рН крови. Б зависимости от механизма нарушений кислотно-основного состояния различают метаболический ацидоз или алкалоз и респираторный (газовый).

При респираторных нарушениях первичными являются изменения концентрации СО2. При метаболических прежде всего изменяется содержание НСОз^-, а изменения СО2 являются вторичными.

Метаболический ацидоз может возникнуть при избыточном накоплении органических кислот, как следствие нарушения обмена веществ. Он может наблюдаться при голодании, лихорадке, хроническом нефрите, остеодистрофии, микроэлементозах, нарушении функции печени, отравлении, введении растворов кислых солей.

При метаболическом ацидозе наиболее информативными являются такие показатели как рН крови, сдвиг буферных оснований (БЕ), буферные основания (ВВ), стандартный бикарбонат (SB).

Компенсированный ацидоз наблюдается у коров при избыточном содержании в рационах кислых, недоброкачественных кормов (жом, барда, силос) и концентратов, при недостаточном поступлении в организм таких элементов как натрий, калий, кальций, магний.

При возникновении метаболического ацидоза всегда наблюдается дефицит анионов НСОз^-. На первых стадиях развития накопление ионов Н⁺ компенсируется уменьшением щелочного резерва крови, легочная вентиляция усиливается, кислотность мочи возрастает.

Респираторный ацидоз может иметь место при поражении дыхательного центра, заболеваниях легких (эмфиземе, бронхэктазах, асфиксии, механического происхождения и др.) при расстройствах сердечной деятельности, нахождении животных в среде с высокой концентрацией СО2. Б этих случаях наблюдается гиповентиляция легких, увеличение СО2 в артериальной крови, содержание НСО3^- возрастает, увеличивается выведение с мочой свободных и связанных в форме аммонийных солей кислот.

При дыхательном ацидозе, как правило, происходит задержание Na+. Это происходит из-за того, что почки усиленно выводят ионы Н+ в виде NH4+. Для выведения катиона аммония требуется адекватное количество анионов, в силу чего их не хватает для выведения ионов Na+. Увеличение концентрации Na+ в организме в силу закона изоосмолярности приводит к задержке воды, развитию отеков, в том числе и в легочной ткани, что, в свою очередь, усиливает дыхательный ацидоз. Обычно этот порочный круг разрывают с помощью диуретиков.

Б случае дыхательной недостаточности респираторный ацидоз осложняется обычно и метаболическим, так как если затруднено выведение СО2, то нарушено и поступление О2, что приводит к развитию тканевой гипоксии. Алкалозы развиваются у животных значительно реже, чем ацидозы. Метаболический алкалоз развивается при ожогах, избыточной потере калия и хлора через желудочно-кишечный тракт, внутрисосудистом гемолизе, больших тканевых повреждениях, избыточном поступлении щелочных солей. При этом щелочной резерв крови увеличивается, легочная вентиляция замедлена, кислотность мочи снижена.

При метаболическом алкалозе наиболее значительным являются сдвиг буферных оснований и стандартного бикарбоната. Метаболические алкалозы у коров развиваются обычно тогда, когда вследствие нарушения кормления рН содержимого рубца повышается до 7,5 -8,0.

У коров с алкалозом, обусловленным кормлением или введением в рубец карбамида, отмечалось высокое рН крови (около 7,53), сдвиг буферных оснований составлял 6,5 ммоль/л, стандартный бикарбонат - 30 ммоль/л. У таких коров отмечались низкие коэффициенты использования кислорода тканями, снижение уровня кальция, фосфора.

Респираторный алкалоз наблюдается при резком увеличении дыхательной функции легких, при поражении центральной нервной системы, интоксикациях, гипоксемиях различного происхождения. Содержание СО2 в альвеолярном воздухе снижено, легочная вентиляция усилена, моча имеет пониженную кислотность.

Химическое исследование мочи, выпотных жидкостей (экссудатов и транссудатов), кала.

Лабораторный анализ мочи является обязательным при заболеваниях органов мочеотделительной системы, при поражениях других органов, сопровождающихся нарушением функции почек, при нарушениях обмена веществ у животных.

Мочу у животных получают несколькими способами: при естественном акте мочеиспускания; посредством катетеризации; при помещении мелких животных в специальные клетки. При этом посуда должна быть чистой и сухой. Лучше всего исследовать свежеполученную (не более 2 ч после взятия) мочу, но если такой возможности нет, то хранят ее в закрытой посуде в холодильнике (не более 36 часов) или консервируют. Для этого используют толуол, тимол (1-2 кристалика на 100-150 мл мочи), хлороформ (1-2 капли на такое же количество). При проведении бактериологического исследования консервированная моча непригодна.

При лабораторном исследования мочи определяют ее физические свойства (количество, цвет, прозрачность, консистенция, запах, относительная плотность), проводят химическое исследование (рН, белок, глюкоза, билирубин, уробилиноген, кетоновые тела, гемоглобин и кровь) и микроскопию осадка.

Физические свойства мочи зависят от количества и состава корма, внешней температуры, приема воды, физической нагрузки, функции потовых желез, состояния мочеотделительной, сердечнососудистой, пищеварительной и других систем организма.

Взрослые животные выделяют в среднем за сутки следующее количество мочи: крупный рогатый скот - 6-12 л, лошадь - 3-10 л, мелкий рогатый скот - 0,5-1,5 л, свинья - 2-4 л, собака 0,2-2 л. Из расстройств диуреза наиболее часто устанавливают олиго- и полиурию. Олигоурия (уменьшенное выделение мочи) наблюдается при перикардиальном, диспепсическом неонатальном, диарейном, нефротическом синдромах, при синдроме дегидратации (эксикозе), синдроме скопления жидкости в плевральной полости, при общей сердечной недостаточности. Полиурия (увеличенное выделение мочи) наблюдается при рассасывании отеков и водянок, при хронической почечной недостаточности.

Цвет мочи зависит от наличия в ней пигментов, ее концентрации и относительной плотности. У здоровых животных цвет варьирует от светло-желтого до буро-желтого (янтарного). Из его изменений наиболее значимым в диагностике является обнаружение красновато-бурой мочи в результате появления в ней крови, гемоглобина и его производных. При наличии крови (гематурия) моча становится красной, гемоглобина (гемоглобинурия) - красно-коричневой, метгемоглобина - бурой или даже черной.

У всех животных, за исключением однокопытных, моча прозрачная, без осадка. У лошадей из-за содержания в моче фосфатов и нерастворимых углекислых солей она мутная. Мутная моча у других видов животных указывает на патологические изменения в почках, мочеточниках, мочевом пузыре. При этом помутнение происходит за счет наличия различных солей (ураты, оксалаты, фосфаты), слизи, гноя, жира, эпителиальных клеток, форменных элементов крови.

Консистенция мочи у разных видов животных различная. У здоровых крупного рогатого скота, свиней, собак, она водянистая. Слизистой моча становится у них в результате воспаления слизистой оболочки почечной лоханки и мочевого пузыря. У однокопытных моча в норме вязкая и тягучая за счет примесей муцина. Жидкой она становится при увеличении диуреза (полиурии), а также при изменении рН в кислую сторону.

Определяют консистенцию посредством переливания мочи из одного сосуда в другой.

Запах мочи специфичен для каждого вида животных и его интенсивность зависит от концентрации - чем большая концентрация, тем сильнее запах. Из изменений следует отметить запах ацетона - при кетозе у коров и овец, гнилостный - при соответствующих процессах в мочевых путях. Некоторые лекарственные вещества также могут придать моче соответствующий запах, это скипидар, камфара, валериана и др.

Относительная плотность мочи зависит от количества в ней плотных веществ - прежде всего солей и белка. Плотность мочи определяется посредством специального прибора урометра, имеющего шкалу деления от 1,000 до 1,060, и выражается в г/мл или кг/л. У здоровых животных относительная плотность мочи следующая: лошадь - 1,025-1,055; крупный рогатый скот - 1,0151,045; мелкий рогатый скот - 1,015-1,050; свинья - 1,010-1,030; собака - 1,020-1,050. Повышение относительной плотности мочи или гиперстенурию наблюдают при лихорадочном синдроме, олигоурии, заболеваниях, сопровождающихся диарейным синдромом, остром диффузном нефрите. Гипостенурию (снижение относительной плотности мочи) регистрируют чаще при нефротическом и ацетонемическом синдромах, несахарном диабете, алиментарной дистрофии.

Б настоящее время при химическом исследовании мочи все чаще прибегают к экспресс-тестам, которые подразумевают использование диагностических полосок. Их применение позволяет исследовать мочу непосредственно в производственных условиях. Однако следует иметь ввиду, что для анализа пригодна только не консервированная, свежеполученная (не позднее 4 ч) моча. Учет результатов проводится по изменению цвета зон индикации в сравнении с эталоном приблизительно через 60 секунд после смачивания полоски мочой.

Клиническое значение химического анализа:

рН. У здоровых тровоядных животных моча слабощелочная или нейтральная, а у плотоядных - кислая. Смещение рН в кислую сторону наблюдается при лихорадочном и уремическом (почечная недостаточность) синдромах. Щелочная реакция мочи устанавливается при воспалительных процессах в органах мочеотделения, при рассасывании экссудатов и транссудатов.

Белок. Б моче здоровых животных белок присутствует в незначительных количествах (до 0,3 г/л). Такая его концентрация не улавливается используемыми экспресс-методиками. Появление белка в моче в концентрациях, позволяющих выявить его качественными и полуколичественными пробами называется протеинурией. Пртеинурия может быть почечной и внепочечной. Почечная, в свою очередь, подразделяется на органическую и функциональную протеинурию. Органическая возникает при поражении почек в результате повышения проницаемости гломерул, при этом в моче обнаруживаются преимущественно низкомолекулярные белки - альбумины (в связи с высокой диагностической и прогностической значимостью этого теста полосками улавливается в первую очередь альбумин). Его концентрация в моче животных при заболеваниях, проявляющихся нефротическим синдромом (нефрит, пиелонефрит), может достигать 10 г/л, а при нефрозе - до 30-50 г/л и выше. Протеинурия сочетается, как правило, с отеками (отечный синдром). Функциональная почечная протеинурия связана с увеличением проницаемости мембран почечного фильтра при сильных раздражениях, замедлении тока крови в клубочках и др. (причины - большая физическая нагрузка, стресс-факторы). Она временная, не связана с заболеванием, повышение концентрации белка незначительное. При внепочечных протеинуриях белок попадает в мочу из мочевыводящих и половых путей в результате примеси воспалительного экссудата, богатого белками. Внепочечная протеинурия не превышает, как правило, 1 г/л.

Глюкоза. Б моче здоровых животных содержится минимальное количество глюкозы, которая не определяется обычными тестами. Появление же больших количеств сахара в моче называется глюкозурией, которая может быть физиологической и патологической. Физиологическая наблюдается кратковременно при скармливании большого количества углеводов, стрессе, у самок перед родами и после них. Патологическая глюкозурия чаще всего бывает диабетической (сахарный диабет), когда наряду с обнаружением сахара возрастает относительная плотность мочи и наблюдается полиурия. Кроме этого патологическая глюкозурия наблюдается при поражениях нервной системы (воспаление головного и спинного мозга, травмы, кровоизлияния), при бешенстве, чуме собак, родильном парезе, отравлении фосфором, скипидаром, хлороформом, хлоралгидратом. Регистрируется глюкозурия и при опухолях в надпочечниках, гипертиреозе, гиперфункции гипофиза.

Билирубин. Нормальная моча животных билирубина практически не содержит и его обнаружение называется билирубинурия. Его появление в моче связано с повышением концентрации прямого билирубина в крови более 34 мкмоль/л (почками выделяется только прямой билирубин) при закупорке желчных путей, т.е. механической желтухе, а также при паренхиматозной желтухе. Следует иметь ввиду, что при гемолитической желтухе билирубинемия не развивается, поскольку в крови не накапливается прямой билирубин. Т.о. по результатам определения билирубина в моче можно дифференцировать механическую и паренхиматозную желтухи (развивающиееся при желчекаменной болезни, гепатите, инфекционном энцефаломиелите у лошадей), от гемолитической желтухи, при которой в моче обнаруживают уробилиновые тела или уробилиноген.

Уробилиноген. Это производные билирубина, которые часто называются уробилиновыми телами и к которым относят уробилиноген, стеркобилиноген, альфа-уробилин.

Уробилиноген и уробилин образуются в кишечнике из билирубина под действием ферментов, которые вырабатываются микроорганизмами. Часть его в кишечнике превращается в стеркобилин, а часть всасывается в кровь и ращепляется в печени. При поражении печени уробилиноген не полностью перерабатывается гепатоцитами и с током крови переносится в почки, выделяясь с мочою. Такое состояние называется уробилиногенурией. Б лабораторной практике нет методов их раздельного определения уробилиновых тел. Она встречается при гемолитической анемии, гепатите, циррозе печени, заболеваниях кишечника (воспаление, непроходимость).

Кетоновые тела. Обнаружение в моче кетоновых тел (ацетоуксусной кислоты, ацетона, бета-оксимасляной кислоты) называется кетонурия. Ее устанавливают при заболеваниях, проявляющихся ацетонемическим синдромом (кетоз, гипогликемия, вторичная остеодистрофия). Предложенные качественные пробы (Лестраде) позволяют установить в моче концентрацию кетоновых тел от 1,7 ммоль/л. Наиболее целесообразно пользоваться диагностическими полосками, предложенными для определенного вида животного, т.к. в моче здоровых лошадей их содержится 0,06-0,66 ммоль/л, коров - 0,6-1,1 ммоль/л, овец - 0,59-1,46 ммоль/л.

Кровь и кровяные пигменты в моче здоровых животных не обнаруживаются. Наличие в моче клеток крови (эритроцитов, лейкоцитов) называется гематурия, а кровяных пигментов (гемоглобина, миоглобина, метгемоглобина) - гемоглобинурия. Дифференцируют гематурию от гемоглобинурии посредством микроскопии (обнаружение клеток крови) или центрифугирования (клетки оседают и происходит просветление мочи, пигменты же остаются во взвешенном состоянии). Гематурия - признак поражения почек и мочевыводящих путей, является ведущим симптомом мочевого синдрома. Визуально кровь в моче обнаруживается (макрогематурия), если количество эритроцитов составляет 25 и более тыс. в мкл. Гемоглобинурия наблюдается при кровепаразитарных заболеваниях, миоглобинурии, отравлении нитратами и нитритами.