Зміна маси тіла та фізіологічного стану сім’яників під впливом Бісфенолу А

Размещено на http://www.allbest.ru/

Зміна маси тіла та фізіологічного стану сім'яників під впливом Бісфенолу А

Ярошенко Денис Сергійович аспірант кафедри патологічної анатомії, судової медицини та патологічної фізіології, Дніпровський державний медичний університет, м. Дніпро

Анотація

Дія бісфенолу А (ВРА) на сім'яники може викликати комплекс патологічних змін органів статевої системи; не виключено, що бісфенол А запускає каскад патологічних змін в сім'яниках, які негативно впливають на репродуктивну здатність чоловіків. Однією з основних ознак рівня токсичного ураження організму є суттєва зміна маси тіла. Метою дослідження був аналіз динаміки змін маси тіла та фізіологічного стану сім'яників під впливом бісфенолу А. Протягом експерименту у щурів експериментальних груп маса тіла зростала, в залежності від рівня токсичного впливу BPA. Тварини груп F0-3 і F0-4 набирали масу на 23,6 і 28,9% більшу, порівняно з щурами контрольної групи. Протягом експерименту у щурів, які зазнали впливу ВРА дозою 250 мг/кг/доба спостерігались сповільнення приросту маси сім'яників щурів та зниження гонадо-соматичного індексу, порівняно з сім'яниками щурів контрольної групи. У середині 27 % звивистих сім'яних трубочок, які зазнали важких пошкоджень сперматогенного епітелію, утворювалась порожнина з порушенням процесів сперматогенезу. Показник індексу сперматогенезу в кінці експерименту зменшився з 4,02±0,25 до 2,89±0,31 і 2,36±0,28 або на 28,11 і 41,29 %, відповідно в групах F0-3 і F0-4 (р> 0,005).

Порушення сперматогенезу проявлялися також зменшенням частки статевих клітин відносно стабільної до впливів токсикантів популяції клітин Сертолі. Так, протягом експерименту індекс релаксації (напруженості сперматогенезу) знизився з 19,20±1,54 до 17,07±0,39 і 16,07± 1,83 або на 11,19 і 16,30 % відповідно в групах F0-3 і F0-4, порівняно з тваринами контрольної групи щурів F0-1 (р<0,005), що вказує на зниження функціональної здатності сім'яників щурів, які зазнали патологічного впливу ВРА. В цілому дані фізичного розвитку дослідних тварин демонстрували зміни функціонального стану організму і були вагомим маркером оцінки стану здоров'я. Отримані експериментальні данні показують, що ВРА викликав патологічні зміни структурних елементів сім'яників, сприяв зменшенню маси і розміру сім'яників щурів груп F0-3 і F0-4, порівняно з аналогічними показниками щурів групи F0-1 .

Ключові слова: бісфенол А, сім'яники, маса, індексу сперматогенезу, клітини Сертолі

Abstract

Yaroshenko Denys Serhiiovych postgraduate student of the Department of Pathological Anatomy, Forensic Medicine and Pathological Physiology, Dnipro State Medical University, Dnipro

CHANGES IN BODY WEIGHT AND PHYSIOLOGICAL CHARACTERISTICS TESTICULAR CONDITIONS UNDER THE INFLUENCE OF BISPHENOL A

The effect of bisphenol A (BPA) on the testes can cause a complex of pathological changes in the reproductive system; it is possible that bisphenol A triggers a cascade of pathological changes in the testes that negatively affect the reproductive ability of men. One of the main signs of the level of toxic damage to the body is a significant change in body weight. The aim of the study was to analyze the dynamics of changes in body weight and the physiological state of the testes under the influence of bisphenol A. during the experiment, in rats of experimental groups, body weight increased depending on the level of toxic exposure to BPA. Animals in groups F0-3 and F0-4 gained 23.6 and 28.9% more weight than rats in the control group. During the experiment, rats exposed to BPA at a dose of 250 mg/kg/day experienced a slowdown in rat testicular weight gain and a decrease in the gonado-somatic index compared to the testes of the control rats. In the middle of 27% of the convoluted seminal tubes that suffered severe damage to the spermatogenic epithelium, a cavity was formed with a violation of spermatogenesis processes. The spermatogenesis index at the end of the experiment decreased from 4.02±0.25 to 2.89±0.31 and 2.36±0.28, or by 28.11 and 41.29%, respectively, in groups F0-3 and F0-4 (p> 0.005).

Disorders of spermatogenesis were also manifested by a decrease in the proportion of germ cells of the Sertoli cell population that was relatively stable to toxicant exposure. Thus, during the experiment, the relaxation index (spermatogenesis intensity) decreased from 19.20±1.54 to 17.07±0.39 and 16.07± 1.83 or by 11.19 and 16.30 %, respectively, in groups F0-3 and F0-4, compared with animals of the control group of rats F0-1 (p<0.005), which indicates a decrease in the functional ability of the testes of rats exposed to the pathological influence of BPA. In general, the data of physical development of experimental animals showed changes in the functional state of the body and were a significant marker for assessing the state of Health. the experimental data obtained show that BPA caused pathological changes in the structural elements of the testes, contributed to a decrease in the mass and size of the testes of rats of the F0-3 and F0-4 groups, compared with similar indicators of rats of the F0-1 group.

Keywords: bisphenol A, testes, weight, spermatogenesis index, Sertoli cells

Постановка проблеми

Чоловіче безпліддя є поширеною проблемою, на яку може впливати широкий спектр факторів ризику, таких як спосіб життя, якість харчування, негативний вплив хімічних речовин, що потрапляють до організму через забруднене навколишнє середовище. Європейська Комісія та Агентство охорони навколишнього середовища США (EPA) визначили хімічні сполуки, що можуть втручатися в гормональну систему, негативно впливати на сперматогенез, порушувати процеси розвитку та розмноження людини, як ендокринні руйнівники - EDCs (Endocrine-disrupting chemicals). [1, 2, 3].

Дослідження патологічної дії ендокринних руйнівників доводять, що EDCs є серйозною проблемою репродуктивної функції чоловіків. Механізми впливу EDCs на організм вирізняються широкою різноманітністю напрямків дії, включаючи: естрогенні, антиандрогенні, тиреоїдні, шляхом патологічного впливу на стероїдні ферменти системи нейромедіаторів і багато інших напрямків [4]. Клінічні спостереження доводять, що ендокринно-активна речовина Бісфенол А (ВРА) є серйозною проблемою для громадського здоров'я.

Аналіз останніх досліджень і публікацій.

В світовій промисловості найбільшого поширення, із групи ендокринних руйнівників, набув Бісфенол А [5]. На теперішній час проведено ряд досліджень по виявленню патологічного впливу речовин з ендокринними властивостями на складні механізми сперматогенезу [6]. Дослідним шляхом доведено, що вплив високих доз ВРА викликав у чоловіків апоптоз клітин Лейдіга та ряд гістопатологічних змін в сім'яниках, включаючи редиціювання шарів сперматогенного епітелію, збільшення маси тіла, зменшення маси сім'яників та дисфункцію сперматогенезу, яка проявлялась значно пізніше після періоду впливу ВРА [7]. Щури самців, які піддавалися дії BPA в період пренатального та постнатального розвитку, мали низьку масу сім'яників та низький рівень тестостерону у дорослому віці [8]. Загалом, складність репродуктивної функції робить її вразливою до негативного впливу найбільш поширеного з групи ендокринних дизрапторів - бісфенолу А, зумовлює актуальність вивчення цієї медичної та соціальної проблеми, а розробка заходів прогнозування наслідків впливу, профілактики та лікування порушень репродуктивного здоров'я набуває особливої соціальної цінності при розробці моделі надання медичної допомоги чоловікам, які страждають на безпліддя [6].

Мета статті - аналіз динаміки змін маси тіла та фізіологічного стану сім'яників під впливом бісфенолу А.

Виклад основного матеріалу

Тварини утримувались у стандартних умовах віварію, які відповідають вимогам Європейської конвенції про захист хребетних тварин, що використовуються для дослідних та інших наукових цілей (Страсбург, 18 березня 1986 року). Усі дослідні процедури проведено відповідно до міжнародних вимог і норм гуманного відношення до тварин. Директиви № 2010/63/ЄС про захист тварин, що використовуються з науковою метою (2010 р.), Закону України 3447-ІУ від 21.02.2006 р., та висновку комісії з питань біомедичної етики Дніпровського державного медичного університету (протокол № 8 від 17.12. 2019 р.).

В дослідженні використано 120 статевозрілих білих щурів-самців лінії Wistar. Відібрані щури були рандомізовано розділені на чотири групи: F0-1 - контрольна група (n=30) - тварини, які знаходились на звичайному харчуванні і додатково отримували кукурудзяну олію; F0-2 - інтактна група (порівняння) (n=30) тварини, які знаходились на звичайному харчуванні; F0-3 - експериментальна група (n=30) - піддослідні тварини, яким крім звичайного харчування протягом 120 діб перорально вводили бісфенол А (Sigma-Aldrich, USA), розчинений в кукурудзяній олії, дозою - 50 мг/кг/добу; F0-4 - експериментальна група (n=30) - тварини, яким протягом 120 діб, крім звичайного харчування, вводили бісфенол А, розчинений в кукурудзяній олії дозою - 250 мг/кг/добу.

В дослідженні застосовували стандартний морфологічний метод для виготовлення гістологічних препаратів, біоматеріал заливали у парафін. Гістологічні препарати сім'яників забарвлювались гематоксиліном і еозіном [9]. Під час проведення морфометричних спостережень досліджували звивисті сім'яні канальці сім'яників [10].

Визначали індекс сперматогенезу, індекс релаксації (напруги сперматогенезу) та гонадо-соматичний індекс [11, 12, 13]. Масу тіла щурів та сім'яників вимірювали лабораторними електронними вагами (FEH-600, Україна).

Статистичну обробку результатів дослідження проводили за допомогою пакету програм STATISTICA (StatSoft, США), для оформлення результатів дослідження застосовували програмне забезпечення Microsoft Office (Microsoft, США).

Перевірку розподілу даних на нормальність проводили за допомогою тесту Шапіро-Вілка. Для оцінки відмінностей між експеримен-- тальними групами використовувався критерій Краскела-Уолліса. Критичний рівень значимості нульової статистичної гіпотези приймали < 0,05 [14].

Результати дослідження та їх обговорення

Однією з основних ознак рівня токсичного ураження організму є суттєва зміна маси тіла. Протягом 120 діб експерименту у щурів всіх експериментальних груп відбувалось поступове зростання маси тіла, однак приріст маси тіла по групах тварин суттєво відрізнявся. Так, у тварин контрольної групи F0-1 і інтактної F0-2 спостерігалось збільшення маси на 116,3 і 115,5 %, (р<0,005).

Разом з тим, у групах F0-3 і F0-4 - моделювання BPA індукованої токсичності репродуктивної системи, показник маси тіла збільшився на 139,9 і 145,2 % (р<0,005), порівняно з масою на початок експерименту (рис 1).

Рис. 1 Зміни маси тіла щурів протягом експерименту, в середньому по групах, г

Примітка: вірогідна різниця між експериментальними групами і контролем (р<0,005).

Отже, контроль маси тіла експериментальних щурів, протягом дослідження, продемонстрував позитивну динаміку змін маси в залежності від рівня токсичного впливу BPA. Статистично значущих відмінностей маси тіла щурів у групах F0-1 і F0-2 не відзначалось. Разом з тим, тварини груп F0-3 і F0-4 протягом 120 діб експерименту набирали масу на 23,6 і 28,9 % більшу, порівняно з щурами контрольної групи F0-1 і інтактної групи F0-2 .

Експериментальним шляхом виявлено токсичний вплив ВРА на морфометричні показники сім'яників щурів та динаміку змін маси органу. Протягом експерименту не відзначалось статистично значущої різниці між масовими коефіцієнтами сім'яників у групах F0-1 F0-2. У щурів груп F0-3 і F0-4 відзначалось дозозалежне зменшення маси сім'яників та зменшення гонадо-соматичного індексу, порівняно з тваринами контрольної групи. Разом з тим істотних змін питомої маси сім'яників у щурів групи F0-3, які зазнали тривалого впливу ВРА дозою 50 мг/кг/доба не спостерігалось, натомість застосування ВРА дозою 250 мг/кг/доба викликало суттєві патологічні зміни біометричних параметрів сім'яників. Відзначалось сповільнення приросту маси сім'яників щурів та зниження гонадо-соматичного індексу, порівняно з сім'яниками щурів контрольної і інтактної груп F0-1 і F0-2, відповідно (рис 2).

Рис. 2 Зміна гонадо-соматичного індексу сім 'яників щурів в умовах тривалого впливу ВРА впродовж 120 діб експерименту

Визначення індексу сперматогенезу в перші 60 діб експерименту показало, що відмінності між експериментальними групами були в межах стандартної похибки. Однак, починаючи з 80 доби дослідження індексу сперматогенезу продемонструвало зниження показника з 4,03±0,28 до 3,72±0,42 і 3,47±0,31 або на 7,69 і 13,90 % відповідно в групах F0-3 і F0-4, порівняно з щурами контрольної групи F0-1 (р> 0,005).

У середині 27 % звивистих сім'яних трубочок, які зазнали важких пошкоджень сперматогенного епітелію, утворювалась порожнина з порушенням процесів сперматогенезу. Показник індексу сперматогенезу на 100 добу експерименту, аналогічно попередньому визначенню, продовжив знижуватися з 4,00±0,32 до 3,18±0,44 і 3,01±0,35 або на 20,5 і 24,75 % відповідно в групах F0-3 і F0-4, порівняно з щурами контрольної групи F0-1, (р> 0,005). В кінці експерименту показник індексу сперматогенезу зменшився з 4,02±0,25 до 2,89±0,31 і 2,36±0,28 або на 28,11 і 41,29 % відповідно в групах F0-3 і F0-4, порівняно з щурами контрольної групи F0-1, (р> 0,005).

Порушення сперматогенезу проявлялися також зменшенням частки статевих клітин відносно стабільної і, значною мірою, резистентної до впливів токсикантів популяції клітин Сертолі. Так, індекс релаксації (напруженості спермато-генезу) протягом експерименту поступово зменшився з 19,17±1,20 до 17,66± 1,25 і 16,67± 1,72 або на 7,88 і 13,04 % відповідно в групах F0-3 і F0-4, (р<0,005). Протягом експерименту у щурів групи F0-3, які отримували по 50 мг/кг/доба BPA і, більшою мірою, у тварин групи F0-4 (250 мг/кг/доба

BPA) поступово наростали некротичні і деструктивні процеси та зросла кількість сполучнотканинних елементів інтерстиційної тканини. Форма більшості звивистих сім'яних трубочок округлилась і їх розташування стало не щільним, натомість у сім'яниках груп F0-1 і F0-2 патологічних змін не виявлялось.

В кінці експерименту індекс релаксації (напруженості сперматогенезу) знизився з 19,20±1,54 до 17,07±0,39 і 16,07±1,83 або на 11,19 і 16,30 % відповідно в групах F0-3 і F0-4, порівняно з тваринами контрольної групи F0- 1 (р<0,005), що вказує на зниження функціональної здатності сім'яників щурів, що зазнали патологічного впливу ВРА.

В цілому дані фізичного розвитку дослідних тварин демонстрували зміни функціонального стану організму і були вагомим маркером оцінки стану здоров'я. Отримані експериментальні данні показують, що ВРА викликав патологічні зміни структурних елементів сім'яників, сприяв зменшенню маси і розміру сім'яників щурів груп F0-3 і F0-4, порівняно з аналогічними показниками щурів групи F0-1.

Результати дослідження та їх обговорення.

У дослідних групах щурів F0-3 і F0-4 спостерігалось збільшення маси тіла та зменшення індексу сперматогенезу, що вказувало на погіршення генеративної функції сім'яників. До аналогічних висновків прийшли Sallmcn M. з співавторами, проаналізувавши історії хвороб 2111 подружніх пар з безпліддям і виявили значний зв'язок між індексом маси тіла партнерів і безпліддям [15]. До схожих висновків прийшов Youfa Wang зі співавторами після аналізу причини безпліддя подружніх пар США за 34 річний період дослідження, де виявили, зв'язок між ожирінням, порушенням процесів сперматогенезу та зниженням в 1,19 рази запліднюючої здатність сперми [16].

Показник маси тіла експериментальних щурів протягом дослідження, в залежності від рівня токсичного впливу BPA, поступово зростав, а гонадо- соматичного індекс зменшувався. Можна припустити, що зменшення маси і розміру сім'яників щурів груп F0-3 F0-4, порівняно з аналогічними показниками щурів групи F0-1, було пов'язане з апоптозом клітин сім'яників щурів після тривалого токсичного впливу ВРА, що викликало редуціювання шарів клітин епітеліальної тканини та зменшення гонадо-соматичного індексу.

Висновки

Отримані дані демонструють, що ВРА призводить до зміни структурних елементів сім'яників та негативно впливає на процеси сперматогенезу. Тварини експериментальних груп під впливом ВРА, протягом експерименту, набирали більшу масу тіла, крім цього у щурів під впливом ВРА відзначалось дозозалежне зменшення індексу сперматогенезу та гонадо- соматичного індексу, порівняно з тваринами контрольної групи.

Перспективи подальших досліджень. Подальші дослідження будуть спрямовані на проведення аналізу динаміки змін маси тіла та фізіологічного стану сім'яників потомства за умов тривалої дії бісфенолу А.

Література

1. Murata M., Kang J.H. Bisphenol A (BPA) and cell signaling pathways. Biotechnol. Adv. 2018. № 36 p. 311-327. Doi: 10.1016/j.biotechadv.2017.12.002.

2. European Commission Endocrine Disruptors. (accessed on 27 September 2021). Available online: https://ec.europa.eu/info/policies/endocrine-disruptors_en.

3. Environmental Protection Agency What is Endocrine Disruption? (Accessed on 27 September 2021). Available online: https://www.epa.gov/endocrine-disruption/what-endocrine-disruption.

4. Diamanti-Kandarakis E., Bourguignon J., Giudice L., Hauser R. Endocrine-Disrupting Chemicals: An Endocrine Society Scientific Statement. Endocrine Reviews. Vol. 30(4). 2009. p. 293-342. Doi: 10.1210/er.2009-0002.

5. Adoamnei E., Mendiola l., Vela-Soria F. Urinary bisphenol A concentrations are associated with reproductive parameters in young men. Environ Res. 2018 Vol. 161. Р.122-128. doi: 10.1016/j.envres.2017.11.002.

6. Teteau O., Carvalho A., Papillier P., Mandon-Pepin B., Jouneau L. Bisphenol A and bisphenol S both disrupt ovine granulosa cell steroidogenesis but through different molecular pathways. J Ovarian Res. 2023. Vol. 16(1). P.30. Doi: 10.1186/s13048-023-01114-4.

7. Li Y., Song T., Cai Y., Zhou J., Song X., Zhao X. Bisphenol a exposure induces apoptosis and upregulation of Fas/FasL and caspase-3 expression in the testes of mice. Toxicol Sci. 2009. Vol. 108. P. 427-436. Doi: 10.1093/toxsci/kfp024.

8. Akingbemi Benson T., Sottas Chantal M., Koulova Anna I., Klinefelter Gary R. Inhibition of testicular steroidogenesis by the xenoestrogen bisphenol A is associated with reduced pituitary luteinizing hormone secretion and decreased steroidogenic enzyme . gene expression in rat leydig cells. Endocrinology. 2004. Vol. 145. P. 592-603. Doi: 10.1210/en.2003-1174 .

9. Dey P. Basic and advanced laboratory techniques in histopathology and cytology 1st ed.. Singapore: Springer. 2018. 300 p. .

10. Багрій М.М., Діброва В.А. Методики морфологічних досліджень: монографія. Вінниця: Нова книга. 2016. Т. 10. № 1. С. 123-125.

11. Shetty G., Wilson G., Huhtaniemi I., Shuttlesworth G.A., Reissmann T., Meistrich M.L. Gonadotropin releasing hormone analogs and testosterone inhibits the recovery of spermatogenesis in irradiated rats. Endocrinology. 2000. Vol. 141. P. 1735-1745. Doi: 10.1210/endo.141.5.7446.

12. Thomas L. Clinical Laboratory Diagnostics: Use and Assessment of Clinical Laboratory Results. Frankfurt. Germany: TH-Books Verlagsgeselschaft. 1998. 1727 pp.

13. Monteiro J., Matta S., Predes F., Paula T. Testicular morphology of adult wistar rats treated with Rudgea viburnoides (Cham.) Benth. leaf infusion. Braz Arch Biol Technol. 2012 vol. 55(1). P. 101-105. Doi: 10.1590/S1516-89132012000100013.

14. George D., Mallery P. IBM SPSS Statistics 27 Step by Step: A Simple Guide and Reference 17th Edition. Taylor & Francis Ltd. 2022. 404 p.

15. Sallmen M., Sandler D.P., Hoppin J.A., Blair A., Baird D.D. Reduced Fertility Among Overweight and Obese Men. Epidemiology. 2006. Vol. 17(5). P. 520-523. Doi: 10.1097/01.ede. 0000229953.76862.e5.

16. Wang Y., Beydoun M.A., Liang L., Caballero B., Kumanyika S.K. Will All Americans Become Overweight or Obese? Estimating the Progression and Cost of the US Obesity Epidemic. Obesity (Silver Spring). 2008. Vol. 16(10). P. 2323-2330. Doi: 10.1038/oby.2008.351.

References

1. Murata M., Kang J.H. (2017). Bisphenol A (BPA) and cell signaling pathways. Biotechnol. № 36, 311-327. Doi: 10.1016/j.biotechadv. 12.002.

2. European Commission Endocrine Disruptors. (accessed on 27 September 2021). Available online: https://ec.europa.eu/info/policies/endocrine-disruptors_en.

3. Environmental Protection Agency What is Endocrine Disruption? (Accessed on 27 September 2021). Available online: https://www.epa.gov/endocrine-disruption/what-endocrine-disruption.

4. Diamanti-Kandarakis E., Bourguignon J., Giudice L., Hauser R. (2009). Endocrine- Disrupting Chemicals: An Endocrine Society Scientific Statement. Endocrine Reviews. June 30(4), 293-342. doi: 10.1210/er.2009-0002.

5. Adoamnei E., Mendiola l., Vela-Soria F. (2018). Urinary bisphenol A concentrations are associated with reproductive parameters in young men. Environ Res, Vol. 161, 122-128. Doi: 10.1016/j.envres.2017.11.002.

6. Teteau O., Carvalho A., Papillier P., Mandon-Pepin B., Jouneau L. (2023). Bisphenol A and bisphenol S both disrupt ovine granulosa cell steroidogenesis but through different molecular pathways. J Ovarian Res. Vol. 16(1), P.30. Doi: 10.1186/s13048-023-01114-4.

7. Li Y., Song T., Cai Y., Zhou J., Song X., Zhao X. (2009). Bisphenol a exposure induces apoptosis and upregulation of Fas/FasL and caspase-3 expression in the testes of mice. Toxicol Sci., Vol. 108, P. 427-436. doi: 10.1093/toxsci/kfp024.

8. Akingbemi Benson T., Sottas Chantal M., Koulova Anna I., Klinefelter Gary R. (2004). Inhibition of testicular steroidogenesis by the xenoestrogen bisphenol A is associated with reduced pituitary luteinizing hormone secretion and decreased steroidogenic enzyme. gene expression in rat leydig cells. Endocrinology, Vol. 145, 592-603. Doi: 10.1210/en.2003-1174.

9. Dey P. (2018). Basic and advanced laboratory techniques in histopathology and cytology 1st ed.. Singapore: Springer. 300 p.

10. Bahrii M.M., Dibrova V.A. (2016). Metodyky morfolohichnykh doslidzhen: monohrafiia [Methods of morphological research: monograph]. Vinnytsia: Nova knyha, T. 10, № 1, 123-125. [in Ukrainian].

11. Shetty G., Wilson G., Huhtaniemi I., Shuttlesworth G.A., Reissmann T., Meistrich M.L. (2000). Gonadotropin releasing hormone analogs and testosterone inhibits the recovery of spermatogenesis in irradiated rats. Endocrinology, Vol. 141, 1735-1745. Doi: 10.1210/endo.141.5.7446.

12. Thomas L. (1998). Clinical Laboratory Diagnostics: Use and Assessment of Clinical Laboratory Results. Frankfurt. Germany: TH-Books Verlagsgeselschaft. 1727 p.

13. Monteiro J., Matta S., Predes F., Paula T. (2012). Testicular morphology of adult wistar rats treated with Rudgea viburnoides (Cham.) Benth. leaf infusion. Braz Arch Biol Technol, Vol. 55(1), 101-105. Doi: 10.1590/S1516-89132012000100013.

14. George D., Mallery P. IBM SPSS Statistics 27 Step by Step: A Simple Guide and Reference 17th Edition. Taylor & Francis Ltd. 2022. 404 p.

15. Sallmen M., Sandler D.P., Hoppin J.A., Blair A., Baird D.D. (2006). Reduced Fertility Among Overweight and Obese Men. Epidemiology, Vol. 17(5), 520-523. Doi: 10.1097/01.ede. 0000229953.76862.e5.

16. Wang Y., Beydoun M.A., Liang L., Caballero B., Kumanyika S.K. (2008). Will All Americans Become Overweight or Obese? Estimating the Progression and Cost of the US Obesity Epidemic. Obesity (Silver Spring), Vol. 16(10), 2323-2330. Doi: 10.1038/oby.2008.351.

Размещено на Allbest.ru