Експресія імунологічних показників у хворих на хронічну мієлоїдну лейкемію з різним прогностичним індексом Socal при лікуванні інгібіторами тирозинкінази

Размещено на http://allbest.ru

ДУ «Інститут гематології та трансфузіології НАМН України»

Експресія імунологічних показників у хворих на хронічну мієлоїдну лейкемію з різним прогностичним індексом Socal при лікуванні інгібіторами тирозинкінази

Т.П. Перехрестенко

Київ

Резюме

Мета - визначити особливості експресії Pgp-170, Ki-67, CD 34 у периферичній крові (ПК) та кістковому мозку (КМ) пацієнтів з хронічною мієлоїдною лейкемією (ХМЛ) із різним прогностичним індексом Socal, які отримують лікування інгібіторами тирозинкінази (ІТК).

Матеріали та методи. Обстежено 96 хворих на ХМЛ у хронічній фазі віком від 19 до 65 років, які отримували лікування інгібіторами тирозинкінази іматинібом та нілотинібом не менше 12 місяців. Прогностичний індекс Socal визначали в дебюті захворювання. Особливості експресії гемопоетичними клітинами ПК та КМ мембранних антигенів CD33, CD34, білка Pgp-170 та внутрішньоядерного протеїну Кі-67 вивчалися шляхом проведення цитофлюориметричних дослідженнь на проточному лазерному цитометрі FACScan (Becton Dickinson, USA).

Результати та обговорення. Показано, що у групі хворих низького прогностичного ризику відмічалося статистично значиме зниження експресії Pgp-170, Ki-67, CD 34 порівняно з групами проміжного та високого ризику, а в групі високого ризику - збільшення значень експресій порівняно з двома іншими групами, за винятком маркера проліферації Кі-67. Експресія останнього не відрізнялася між групами проміжного та високого ризику. Проведення цитофлуориметричних досліджень допоможе оцінити особливості експресії імунологічних маркерів і встановити прогностичну значимість отриманих результатів, особливо у випадках з невідомим індексом Socal, що сприятиме коректному плануванню подальшого діагностичного та лікувального процесу.

Висновки. Результати досліджень продемонстрували залежність експресії показників Pgp-170, Ki-67, CD34 від прогностичної групи ризику Socal. Встановлено, що в групі хворих низького прогностичного ризику відмічалося статистично значиме зниження експресії практично всіх імунологічних показників порівняно з групами проміжного та високого ризику, а в групі високого ризику - збільшення значень експресії порівняно з групами низького та проміжного ризику.

Ключові слова: хронічна мієлоїдна лейкемія, інгібітори тирозинкінази,індекс Socal, Pgp-170, Ki-67, CD34.

Резюме

Экспрессия иммунологических показателей у больных хронической миелоидной лейкемией с различным прогностическим индексом Socal при лечении ингибиторами тирозинкиназы

Цель - определить особенности экспрессии Pgp-170, Ki-67, CD34 в периферической крови (ПК) и костном мозге (КМ) пациентов с хронической миелоидной лейкемией (ХМЛ) с разным прогностическим индексом Socal, получающих лечение ингибиторами тирозинкиназы (ИТК).

Материалы и методы. Обследовано 96 больных ХМЛ в хронической фазе в возрасте от 19 до 65 лет, которые получали лечение ингибиторами тирозинкиназы иматинибом и нилотинибом не менее 12 мес. Прогностический индекс Socal определяли в дебюте заболевания. Особенности экспрессии гемопоэтическими клетками ПК и КМ мембранных антигенов CD33, CD34, гликопротеина Pgp-170 и внутриядерного белка Кі-67 изучались путем проведения цитофлюориметриче- ских исследований на проточном лазерном цитометре FACScan (Becton Dickinson, USA).

Результаты и обсуждение. Показано, что в группе больных низкого прогностического риска отмечалось статистически значимое снижение экспрессии Pgp-170, Ki-67, CD34 по сравнению с группами промежуточного и высокого риска, а в группе высокого риска - увеличение значений экспрессии по сравнению с двумя другими группами, за исключением маркера пролиферации Ki-67.

Экспрессия последнего не отличалась между группами промежуточного и высокого риска. Проведение цитофлуориметрических исследований поможет оценить особенности экспрессии иммунологических маркеров и установить прогностическую значимость полученных результатов, особенно в случаях с неизвестным индексом Socal, что будет способствовать корректному планированию дальнейшего диагностического и лечебного процесса.

Выводы. Результаты исследований показали зависимость экспрессии Pgp- 170, Ki-67, CD34 от прогностической группы риска Socal. Установлено, что в группе больных низкого прогностического риска отмечалось статистически значимое снижение экспрессии практически всех иммунологических показателей по сравнению с группами промежуточного и высокого риска, а в группе высокого риска - увеличение значений экспрессии по сравнению с группами низкого и промежуточного риска.

Ключевые слова: хроническая миелоидная лейкемия, ингибиторы тирозинкиназы, индекс Socal, Pgp-170, Ki-67, CD34.

Summary

Expression of immunological parameters in patients with chronic myeloid leukemia with different Socal score treated with tyrosine kinase inhibitors

Aim - to determine of expression of Pgp-170, Ki-67, CD 34 by peripheral blood (PC) and bone marrow (BM) cells of CML patients with different Socal score treated with tyrosine kinase inhibitors TKI).

Materials and methods. The study involved 96 patients with CML in chronic phase at the age of 19 to 65 years who were treated with tyrosine kinase inhibitors such as imatinib and nilotinib at least 12 months. Prognostic Socal score was determined in the disease onset. Expression features the membrane antigen CD33, CD34, glycoprotein Pgp-170 and intranuclear protein Ki-67 were studied by conducting cytofluometric studies using laser flow cytometry FACScan (Becton Dickinson, USA).

Results and discussion. It is shown that in the group of patients with low prognostic risk a statistically significant decrease in the expression of Pgp-170, Ki-67, CD34 was determined compared with groups of intermediate and high-risk group. In the high-risk group we found increased expression of these indicators compared to the other two groups, with the except for the proliferation marker Ki-67. Expression Ki-67 did not differ between the intermediate and high risk. The study will evaluate the expression patterns of immunological markers and establish predictive value of the results, particularly in cases with unknown index Socal, which will facilitate the correct planning of further diagnostic and therapeutic process.

Conclusions. The results showed the dependence of expression of Pgp-170, Ki-67, CD34 on the predictive risk Socal. It was found that in the group of patients with low prognostic risk a statistically significant decrease in the expression of all immunological parameters in comparison with the groups of intermediate and high-risk was shown and in the high-risk group the increasing of Pgp-170, Ki-67, CD34 expression was detected as compared to the lower and intermediate risk.

Keywords: chronic myeloid leukemia, tyrosine kinase inhibitors, Socal score, Pgp- 170, Ki-67, CD34.

Вступ

На сьогоднішній день до вивчення механізмів формування незадовільної відповіді на терапію інгібіторами тирозинкінази (ІТК) у хворих на хронічну мієлоїдну лейкемію (ХМЛ) прикута увага науковців усього світу, оскільки резистентність до препаратів патогенетично спрямованої дії залишається невирішеною проблемою сучасної гематології. Виникнення стійкості лейкемічних клітин до ІТК фактично нівелює шанси пацієнта досягти повної цитогенетичної та великої молекулярної відповіді. Науковцями багатьох країн світу проводяться дослідження з визначення причин, що впливають на ефективність терапії ІТК, в результаті чого стає можливим прогнозування відповіді та своєчасна корекція тактики лікування [3, 6]. У попередніх роботах нами продемонстровано залежність формування відповіді на лікування ІТК від експресії Pgp-170, Ki-67, CD34, а також прогностичних груп ризику Socal, що спонукало нас провести подальший аналіз результатів експресії зазначених маркерів залежно від прогностичних груп Socal [1, 2, 4-6].

Метою роботи було визначити особливості експресії Pgp-170, Ki-67, CD 34 у периферичній крові (ПК) та кістковому мозку (КМ) пацієнтів з ХМЛ із різним прогностичним індексом Socal, які отримують лікування ІТК.

Матеріали і методи. Обстежено 96 хворих на ХМЛ у хронічній фазі віком від 19 до 65 років, які отримували лікування ІТК іматинібом та ні- лотинібом. Тривалість лікування становила не менше 12 міс. Прогностичний індекс Socal визначали в дебюті захворювання з використанням чотирьох клінічних показників: віку пацієнтів, розмірів селезінки, відсотка бластів та кількості тромбоцитів у ПК. Розрахунок проводили за відповідною формулою, після чого хворих розподіляли на три групи. При індексі 0,8 та менше група ризику вважалася низькою, при індексі 0,8-1,2 - проміжною, при індексі >1,2 - високою. У хворих на ХМЛ вивчали особливості експресії гемопоетичними клітинами ПК та КМ мембранних антигенів CD33, CD34, білка Pgp-170 та внутрішньоядерного протеїну Кі-67. Для цього використовували відповідні моноклональні антитіла. Усі цитофлюориметричні дослідження проводили на проточному лазерному цитометрі FACScan (Becton Dickinson, USA) з аргоновим лазером при довжині хвилі 488 нм.

Оцінку статистично значимих відмінностей середніх значень кількісних ознак, що підлягали нормальному закону розподілу, у незалежних групах визначали за допомогою t-критерія Стьюдента.

Результати та обговорення

При оцінці показників коекспресії Pgp- 170/CD33 ПК визначено статистично значиму різницю між групою низького ризику за Socal та всіма іншими групами порівняння (рис. 1).

Рис. 1. Порівняння результатів коекспресії Pgp-170/CD33 залежно від груп ризику Socal.

Так, у групі високого ризику експресія зазначеного показника була практично в 5 разів більшою порівняно з групою низького ризику (р < 0,05), а в групі проміжного - в 2,8 рази (р < 0,05). Також відмічалася статистично значимо менша експресія у групі проміжного ризику порівняно з групою високого ризику (в 1,7 рази). Такі дані чітко демонструють залежність експресії Pgp- 170 на CD33+ клітинах ПК від прогностичних груп ризику. Найменша кількість клітин, що несуть глікопротеїн Pgp- 170, відмічалася у групі низького прогностичного ризику, найбільша - у групі високого ризку.

Схожі результати отримано при визначенні коекспресії Pgp-170/CD33 КМ. Найменший показник експресії відмічався в групі низького ризику, найбільший - високої. Також статистично значимо меншим показник експресії Pgp-170 був на CD33 мієлоїдних клітинах у групі проміжного ризику порівняно з групою високого ризику (рис. 1). Досліджуючи коекспресію Pgp-170/CD34 ПК, виявлено, що у групі високого ризику за Socal даний показник був у 4 рази більше ніж у групі низького ризику (р < 0,05), в групі проміжного ризику - в 2,6 рази більше (р < 0,05) (рис. 2).

Рис. 2. Порівняння результатів коекспресії Pgp-170/CD34 залежно від груп ризику Socal.

У пацієнтів групи високого ризику спостерігалася збільшена в 1,5 рази експресія Pgp-170 на CD34 клітинах ПК порівняно з хворими, що належали до проміжної групи ризику (р < 0,05). Аналіз даних ци- тофлуориметричних досліджень показав, що у КМ пацієнтів з групи низького прогностичного ризику відмічалася майже у 3,5 рази менша експресія досліджуваного маркера на CD34+ клітинах-попередниках КМ ніж у групі високого ризику (р<0,05). Кількість Pgp-170/CD34 клітин КМ у групі проміжного ризику перевищувала у 2,3 рази чисельність аналогічних клітин у КМ групи низького ризику (р < 0,05). При порівнянні коекспресії Pgp- 170/CD34 КМ між групами проміжного та високого ризику відмічалася статистично значима різниця - у прогностичній групі високого ризику кількість досліджуваних клітин була у 1,5 рази більша (р < 0,05).

Результати досліджень свідчать про залежність коекспресій Pgp- 170/CD33, Pgp-170/CD34 від індексу Socal. Пацієнти групи низького ризику мали достовірно меншу експресію вищезгаданого маркера порівняно з групами проміжного та високого ризику, також клітини хворих проміжної групи ризику експресували глікопротеїн у достовірно меншій кількості порівняно з групою високого ризику. Аналізуючи дані цитофлуориметричного дослідження з визначення експресії внутрішньоядерного протеїну Кі-67 в ПК, показано статистично значиму різницю між групами низького ризику за Socal та двома іншими групами порівняння. Кількість гемопоетичних клітин з проліферативним маркером Кі-67 у пацієнтів групи високого прогностичного ризику була в 5 разів більшою порівняно з групою низького ризику (р < 0,05) (рис. 3). Відсоток клітин, мічених Кі-67, у хворих проміжного ризику був у 4 рази більшим порівняно з пацієнтами групи низького ризику.

Рис. 3. Порівняння експресії Кі-67 гемопоетичними клітинами хворих на ХМЛ залежно від групи ризику Socal.

Вивчення експресії Кі-67 у КМ хворих залежно від індексу Socal демонструють високий відсоток експресії даного показника у групах проміжного та високого ризику, який був практично однаковим та складав у середньому 23%. У групі низького ризику даний показник дорівнював у середньому майже 8% и був у 2,9 рази меншим порівняно з двома іншими групами (р < 0,05) (рис. 3). Оскільки експресія даного показника вказує на проліферативний потенціал клітин, можна стверджувати, що готовність клітин розпочати активний поділ демонструється в групах хворих із проміжним та високим ризиком. Такі результати є передвісником підвищеного ризику переходу захворювання у прогресуючу фазу, тому рекомендується проведення частого моніторингу показника експресії даного маркера. Оскільки ідентифікація клітин, що експресують антиген CD34 у хворих на ХМЛ, є необхідною не тільки для встановлення природи клітин пухлинного клону, але й для прогнозування перебігу захворювання та оцінки ефективності терапії, ми дослідили його експресію також залежно від прогностичних груп ризику Socal (рис. 4).

Результати досліджень показали значущу різницю в експресії даного показника у різних прогностичних групах (рис. 4).

Рис. 4. Порівняння експресії CD34+ гемопоетичних клітин-попередників хворих на ХМЛ залежно від групи ризику Socal.

Кількість CD34+ клітин у ПК пацієнтів групи високого ризику виявилася у багато разів більшою порівняно з хворими двох інших груп та складала в середньому 21%. Експресія CD34+ була в 11 разів вищою порівняно з пацієнтами групи низького ризику та у 2 рази порівняно з групою проміжного ризику (р < 0,05). Порівнюючи результати досліджень групи низького та проміжного ризику, визначено у 5,7 разів збільшена експресія CD34+ у ПК пацієнтів проміжної групи ризику (р < 0,05).

Аналізуючи показник екпресії CD34+ клітин-попередників КМ, показана статистично значима різниця між групою низького ризику та двома іншими групами прогнозу за Socal (рис. 4). У пацієнтів групи низького ризику експресія антигену була у 6,5 разів меншою порівняно з групою високого ризику та в 3,9 разів меншою порівняно з групою проміжного ризику (р < 0,05). Статистично значимої різниці між групами високого та проміжного ризику виявлено не було, хоча показник експресії був вищим у пацієнтів з високим індексом Socal (24,14% проти 14,54%). Такі результати демонструють збільшення CD34+ гемопоетичних клітин-попередників у пацієнтів з проміжним та високим індексом Socal. Причому експресія даного антигену в групі з низьким індексом як в ПК, так і в КМ виявилася низькою та складала в середньому 1,87% та 3,69% відповідно. У той же час CD34+ клітини у хворих з високим індексом складали більше 20% у ПК та КМ. Отримані дані свідчать про розширення пулу ранніх клітин-попередників у пацієнтів групи високого та проміжного ризику, що є характерним для незадовільної відповіді на лікування ІТК.

Встановлення залежності формування відповіді до ІТК від екпресії імунологічних клітинно-молекулярних маркерів, а також прогностичних груп ризику Socal, що було показано у наших попередніх роботах, мотивувало нас дослідити показники експресії Pgp-170, Ki-67, CD 34, Bcl-2 залежно від індексу Socal. Дане дослідження проводилося вперше, аналіз результатів підтвердив значимість як імунологічних маркерів, так і визначення груп за Socal для прогнозування ефективності терапії у хворих на ХМЛ.

Виявилося, що у групі хворих низького проностичного ризику відмічалося статистично значиме зниження експресії практично всіх імунологічних показників порівняно з групами проміжного та високого ризику, а в групі високого ризику - збільшення значень експресії порівняно з двома іншими групами, за винятком маркера проліферації Кі-67.

Експресія останнього не відрізнялася між групами проміжного та високого ризику. Важливість отриманих даних ще полягає і в тому, що доволі часто пацієнт звертається за наданням допомоги до медичних закладів третинного рівня, маючи певний термін тривалості захворювання, застосування препаратів інших груп, нерідко без первинної медичної документації, тож визначитися з прогностичною групою ризику в такій ситуації не представляється можливим. Проведення цитофлуориметричних досліджень допоможе оцінити особливості експресії імунологічних маркерів та встановити прогностичну значимість отриманих результатів, що сприятиме коректному плануванню подальшого діагностичного та лікувального процесу. кров лейкемія інгібітор тирозинкіназа

Висновки

Результати досліджень продемонстрували залежність експресії показників Pgp-170, Ki-67, CD 34 від прогностичної групи ризику Socal. Встановлено, що у групі хворих низького прогностичного ризику відмічалося статистично значиме зниження експресії практично всіх імунологічних показників порівняно з групами проміжного та високого ризику, а в групі високого ризику - збільшення значень експресії порівняно з групами низького та проміжного ризику. Дане дослідження підтвердило значимість визначення як імунологічних маркерів, так і груп ризику за Socal у прогнозуванні ефективності терапії ІТК у хворих на ХМЛ.

Література

1. Изучение резистентности при лечении больных ХМЛ ингибиторами тиро- зинкиназы / Т.П. Перехрестенко, А.И. Гордиенко, И.С. Дягіль, Н.Н. Третяк // Гематология и трансфузиология. - 2014 . - Т. 59, № 1. - C. 58.

2. Імунофенотипові особливості CD34 гемопоетичних клітин-попередників периферичної крові та кісткового мозку хворих на хронічну мієлоїдну лейкемію при лікуванні інгібіторами тирозинкінази / Т.П. Перехрестенко, А.І. Гордієнко, Н.М. Третяк [та ін.] // Гематологія і переливання крові : міжвідомчий збірник. - К. : Б. в., 2012. - Вип. 36. - С. 218-223.

3. Механизмы резистентности к терапии хронического миелолейкоза ингибитором тирозинкиназ иматинибом / С.И. Куцев, С.В. Морданов, А.Н. Зельцер [и др.] // Медицинский вестник юга России. - 2010. - Т. 2. - С. 10-17.

4. Перехрестенко Т.П. Вивчення відповіді на терапію інгібіторами тирозинкі- нази у хворих на хронічну мієлоїдну лейкемію залежно від індексу Socal / Т.П. Перехрестенко, І.С. Дягіль // Лікарська справа. - 2015. - № 1-2. - С. 97-102.

5. Проліферативна активність гемопоетичних клітин у хворих на хронічну мієлоїдну лейкемію при лікуванні інгібіторами тирозинкінази / Т.П. Перехрестен- ко, Є.В. Шороп, А.І. Гордієнко, Н.М. [та ін.] // Збірник наукових праць співробітників НМАПО імені П.Л. Шупика. - 2012. - Вип. 21, кн. 4. - С. 115-121.

6. Additional chromosomal abnormalities in Philadelphia-positive clone: adverse prognostic influence on frontline imatinib therapy: a GIMEMA Working Party on CML analysis / S. Luatti, F. Castagnetti, G. Marzocchi [et al.] // Blood. - 2012. - Vol. 120, № 4. - P. 761-767.

Размещено на Allbest.ru