Характеристика аутоиммунного процесса у больных хронической миелоидной лейкемией

Размещено на http://www.allbest.ru/

ГУ «Институт гематологи и трансфузиологии НАМН Украины»

ГУ «Крымский государственный университет им. С.И. Георгиевского»

Характеристика аутоиммунного процесса у больных хронической миелоидной лейкемией

Ал.И. Гордиенко, Ан.И. Гордиенко

Киев

Резюме

У больных хронической миелоидной лейкемией в фазе акселерации до начала лечения впервые выявлена обратная корреляционная зависимость между низким содержанием CD4+CD25+- (Treg) лимфоцитов, которые контролируют иммунологическую толерантность организма, и повышенным уровнем в сыворотке крови аутоантител к нативной двунитевой ДНК (ДзДНК).

Ключевые слова: хроническая миелоидная лейкемия, CD4+CD25+- (Treg-) лимфоциты, аутоантитела к нативной двунитевой ДНК (бзДНК).

Резюме

ХАРАКТЕРИСТИКА АВТОІМУННОГО ПРОЦЕСУ У ХВОРИХ НА ХРОНІЧНУ МІЄЛОЇДНУ ЛЕЙКЕМІЮ

Ал. І. Гордієнко, Ан. І. Гордієнко

ДУ «Інститут гематології та трансфузіології НАМН України», Київ

ДУ «Кримський державний університет ім. С.І. Георгієвського», Сімферополь

У хворих на хронічну мієлоїдну лейкемію в фазі акселерації до початку лікування вперше виявлена зворотна кореляційна залежність між низьким вмістом CD4+CD25+- (Treg) лімфоцитів, які контролюють імунологічну толерантність організму, та підвищеним рівнем усироватці крові автоантитіл до нативної двониткової ДНК (СзДНК).

Ключові слова: хронічна мієлоїдна лейкемія, CD4+CD25+- (Treg-) лімфоцити, автоантитіла до нативної двониткової ДНК (бзДНК).

Summary

THE CHARACTERISTIC AUTOIMMUNE PROCESS IN PATIENTS WITH CHRONIC MYELOID LEUKAEMIA

Al. Gordienko, An. Gordienko

In patients with chronic myeloid leukemia in a phase of an acceleration prior to the beginning of treatment for the first time reveals return correlation dependence between low maintenance CD4+CD25+-Treg) lymphocytes which supervise immunology tolerance of an organism, and the increased level in serum of blood autoantibody to native double string DNA (dsDNA).

Key words: chronic myeloid leukemia, CD4+CD25+-Treg-) lymphocytes, autoantibody to native double string DNA (dsDNA).

Введение

Хроническая миелоидная лейкемия (ХМЛ) относится к группе миелопролиферативных заболеваний и возникает в результате злокачественной трансформации полипотентной гемопоэтической стволовой клетки костного мозга (КМ) с последующей клональной пролиферацией клеток одной или нескольких линий миелопоэза, которые сохраняют способность к дифференцировке. У 95% больных опухолевые клетки КМ и периферической крови (ПК) несут Филадельфийскую хромосому (Ph-хромосома), появляющуюся в результате транслокации генетического материала между хромосомами t(9, 22) [1], что является основным пусковым механизмом заболевания. Кроме того, генный продукт BCR/ABL служит молекулярной основой в развитии ХМЛ [2].

Наряду с молекулярно-генетическими изменениями гемопоэза, ХМЛ сопровождается существенными сдвигами в иммунной системе больных [3]. Так, при данном заболевании наблюдается функциональная неполноценность клеток, контролирующих состояние противоопухолевого и противоинфекционного иммунитета. Достаточно часто у больных ХМЛ наблюдаются аутоиммунные процессы. Одной из причин, способствующих их развитию, является реакция иммунной системы на собственные (self) аутоантигены. Это происходит из-за нарушения иммунологической толерантности организма, контролируемой различными механизмами. Как известно, в єє поддержании участвуют Т-регуляторные лимфоциты (Treg) с иммунофенотипическими признаками CD4+-, коэкспрессирующие мембранный антиген CD25 (низкоаффинный рецептор к ИЛ-2, альфа- цепь) [4]. В литературе не найдено сведений относительно механизмов, которые приводят к срыву иммунологической толерантности у больных ХМЛ, вследствие чего появляются аутоантитела к собственным антигенам. Исследования в этом направлении открывают перспективы для выяснения роли аутоиммунных процессов в патогенезе ХМЛ.

Цель исследования - охарактеризовать интенсивность аутоиммунных реакций у больных ХМЛ и изучить корреляционную взаимосвязь между степенью выраженности аутоиммунных расстройств и количеством Treg-лимфоцитов.

Материалы и методы. Иммунологические исследования были проведены 56 больным ХМЛ. Определение фаз заболевания в данной группе больных основывалось на общепринятых клиникогематологических критериях. Материалом для исследований являлись клетки ПК больных ХМЛ в фазе акселерации (ФА, n=21) до начала лечения, после терапии гидроксимочевиной в хронической фазе (ХФ¹, n=20) и иматинибом (ХФ², n=15). Контрольную группу составили практически здоровые лица (n=50).

Для определения относительного содержания в ПК Treg-лимфоцитов образцы окрашивали в прямом двухцветном иммуно- флюоресцентном тесте анти- CD25+- и анти-СП4+ моноклональными антителами (МКА) фирмы Becton Dickinson (USA), мечеными соответственно флуоресцеинизотиоцианатом (FITC) и фикоэритрином (PE). Для контроля уровня неспецифического связывания конъюгатов МКА образцы окрашивали мышиными МКА против гемоцианина фиссуреллы (Keyhole limpet) субклассов IgG1 и 1дО2а, мечеными соответственно FITC и PE. Цитофлюориметрические исследования осуществляли на проточном лазерном цитофлюориметре FACScan Becton Dickinson с использованием для сбора и обработки результатов программы LYSYS-II Ver.1.1. (Becton Dickinson, USA); WinMDI 2,8 (Joseph Trotter, Scripps Institute, La Jolla, CA) и Microsoft Exsel 2000 из пакета Microsoft Office 2000. Оценку экспрессии изучаемых маркеров осуществляли в регионе лимфоцитов, который выделяли с учетом параметров бокового (SSC) и переднего (FSC) светорассеяния (линейное усиление сигналов), а также показателям флюоресценции по двум каналам (FL1, FL2, логарифмическое усиление сигналов). Показатели флюоресценции учитывались при использовании анти-CD45⁺/CD14⁺ МКА, меченых двумя разными флюорохромами (FITC и PE).

Содержание в сыворотке крови аутоантител классов М и G к нативной двунитевой ДНК (анти-і-ДІ ІК-IgM, анти-і-ДІ ІК-IgG) у больных лейкемией и лиц контрольной группы (n=30) изучали на основании протоколов, разработанных в лаборатории клинической иммунологии ЦІИЛ Крымского государственного медицинского университета им. С.И. Георгиевского, Симферополь [5]. Оптическую плотность конечного продукта ферментативной реакции определяли с помощью иммуноферментного анализатора АКИЦО1 (Россия) при длине волны 492 нм. Уровень аутоантител к ДНК выражали в условных единицах оптической плотности (усл. ед. опт. плотн.) конечного продукта ферментативной реакции для разведения тестируемой сыворотки 1:100.

Для статистической обработки данных использовали пакет программ StatSoft Statistica v. 6.0. Оценку достоверности различий проводили с помощью непараметрического U-критерия Манна-Уитни. Для определения наличия корреляции между отдельными показателями использовали непараметрический критерий Спирмана.

Результаты исследований и их обсуждение

Для выяснения роли Treg клеток (CD4⁺CD25⁺-лимфоциты) в механизмах, контролирующих иммунологическую толерантность организма у больных ХМЛ были проведены сочетанные исследования, направленные на изучение количественного представительства в ПК Treg-лимфоцитов и содержания в сыворотке крови аутоантител к self-антигенам (в данном исследовании - к нативной двунитевой ДНК - dsДНК).

В группах больных ХМЛ анализировали количество в ПК Treg- лимфоцитов, а также уровень аутоантител классов M и G к dsДНК; данные сравнивали с аналогичными контрольными показателями. Полученные результаты в виде средних значений (M±m) представлены в таблице.

Таблица Содержание Treg-лимфоцитов и уровень аутоантител к нативной двунитевой ДНК (ds,(IП<) классов Mи G у больных ХМЛ (M±m)

Примечания:

¹ - доноры (в ПК определяли количество CD4⁺, CD4+CD25+ лимфоцитов).

² - доноры (в сыворотке крови определяли аутоантитела к dsДНК классов M и G).

* - p<0,05 по сравнению с контролем.

# - p<0,01 по сравнению с контролем.

Отмечено, что у больных ХМЛ-ФА содержание в ПК CD4+CD25+- лимфоцитов достоверно снижено (в 6,1 раза). Как следует из данных таблицы, у этих пациентов уровень аутоантител к бзДНК достоверно значимо отличался от контрольных значений в сторону повышения аутоантител к бзДНК класса M в 3,5 раза и класса G - в 5,3 раза.

На основании полученных данных впервые у этих больных установлена обратная корреляционная взаимосвязь между количеством Treg-лимфоцитов (иммунофенотипический профиль CD4+CD25+) и уровнем аутоантител к бзДНК класса M (r=-0,834, p<0,001), а также класса G (r=-0,918, p<0,001).

У больных ХМЛ после терапии в ПК определяли количество Treg- лимфоцитов и уровень в сыворотке крови аутоантител к бзДНК классов M и G. Установлено, что у больных ХМЛ-ХФ¹, ХМЛ-ХФ² количество CD4+CD25+- лимфоцитов не имело достоверных различий с контрольными цифрами. В тоже время обнаружено, что у больных ХМЛ-ХФ¹ уровень аутоантител к бзДНК класса M в сыворотке крови достоверно повышен в 1,7 раза, а класса G - в 1,5 раза. Такая же закономерность отмечена у больных ХМЛ-ХФ², у которых уровень аутоантител к бзДНК класса M достоверно превышает контроль в 1,7 раза, а G - в 1,4 раза.

С учетом данных литературы у больных лейкемией вызывает интерес определение аутоантител к нативной ДНК, поскольку считается, что их наличие отражает развитие аутоиммунного процесса [6, 7]. Следует отметить, что в наших исследованиях у больных ХМЛ аутоантитела к ДНК были обнаружены до проведения им специфической противоопухолевой терапии, т.е. в стадии прогрессии заболевания и это может быть одним из факторов, участвующих в патогенетическом процессе. Полученные результаты согласуются с имеющимися сведениями об участии Treg-лимфоцитов в поддержании иммунологической толерантности организма, поскольку их функция состоит в подавлении активности аутоспецифических Т-лимфоцитов. Подчеркивается, что снижение количества и/или функциональной активности этих клеток может вызывать развитие аутоиммунных процессов [8-10].

Таким образом, у больных ХМЛ повышение в сыворотке крови уровня аутоантител к бзДНК классов M и G сопровождалось снижением количества в ПК Treg-лимфоцитов. На основании результатов можно заключить, что Т-регуляторные лимфоциты с иммунофенотипическим профилем CD4+CD25+- обладающие супрессорной функцией, выполняют важную роль в механизмах контроля иммунологической толерантности организма у больных ХМЛ. аутоиммунный миелоидный лейкемия

Литература

1. Li S. Src-family kinases in the development and therapy of Philadelphia chromosome-positive chronic myeloid leukemia and acute lymphoblastic leukemia / S. Li // Leuk. Lymphoma. - 2008. - Vol. 49. - № 1. - P. 319-326.

2. Chuvez-Gonzulez M.A. Chronic myeloid leukemia in the 21st century: biology and treatment / M.A. Chuvez-Gonzulez, M. Ayala-Sunchez // Mayani Rev. Invest. Clin. - 2009. - Vol. 61. - № 3. - P. 221-232.

3. Keam S.J. Dasatinib: in chronic myeloid leukemia and Philadelphia chromosome-positive acute lymphoblastic leukemia / S.J. Keam // BioDrugs. - 2008. - Vol. 22. - № 1. - P. 59-69.

4. Human CD4+CD25+ thymocytes and peripheral T cells have immune suppressive activity / L.A. Stephens, C. Mottet, D. Mason [et al.] // Eur. J. Immunol. - 2001. - Vol. 31. - P. 1247-1254.

5. Взаимосвязь между уровнями антител к липополисахариду и аутоантител к ДНК у больных вульгарной пузырчаткой /А.И. Гордиенко, О.А. Притуло, В.А. Белоглазов [и др.] // Iмунологiя та алергологія. - 2002. - № 4. - С. 67-72.

6. Меньшиков И.В. Аутоиммунные реакции в патогенезе атеросклероза / И.В. Меньшиков, М.И. Макарова // Иммунология. - 2010. - Т. 31. - № 5. - С. 242-246.

7. Sakaguchi S. Naturally arising CD4+ regulatory T cells for immunologic self tolerance and negative control of immune responses / S. Sakaguchi // Annu. Rev.Immunol. - 2004. - Vol. 22. - P. 531-562.

8. Thornton A.M. Signal transduction in CD4+CD25+ regulatory T-cells: CD25 and IL-2 / A.M. Thornton // Front. Biosci. - 2006. - Vol. 11. - P. 921-927.

9. Toda A. Development and function of naturally occurring CD4+CD25+regulatory T cells / A. Toda, C.A. Piccirillo // J. Leukocyte Biol. - 2006. - Vol. - P. 458-470.

10. Thornton A.M. Supressor effector function of CD4+CD25+ immunoregulatory T-cells are antigennonspecific / A.M Thornton., E.M. Shevach // J. Immunol. - 2000. - Vol. 164. - P. 183-190.

Размещено на Allbest.ru