Гепатопротекторное действие модифицированного фитобактериального средства при остром токсическом гепатите

Размещено на http://www.allbest.ru

Размещено на http://www.allbest.ru

Гепатопротекторное действие модифицированного фитобактериального средства при остром токсическом гепатите

Максарова Дарима Дамбаевна

Максарова Дарима Дамбаевна доктор биологических наук, доцент, Бурятский государственный университет Россия, 670000, г. Улан-Удэ, ул. Смолина, 24а

В работе приводятся данные по экспериментальному исследованию гепатопротекторного действия модифицированного фитобактериального средства при остром токсическом гепатите в опытах на белых крысах. Обоснованы особенности механизма действия исследуемого средства при острых токсических повреждениях печени. Значительный терапевтический эффект модифицированного фитобактериального средства и нормализация морфофункционального состояния печени характеризуется торможением перекисного окисления липидов в биологических мембранах гепатоцитов, снижением проявлений синдромов воспаления печени, благодаря чему предотвращалась грубая деструкция клеточных и субклеточных образований в органах и тканях, достигалось ускорение митоза клеток и внутриклеточной регенерации.

Ключевые слова: белые крысы, заболевания печени, бифидобактерии, штаммы, фитотерапия.

HEPATOPROTECTIVE EFFECT OF A MODIFIED PHYTOBACTERIOLOGY AGENT FOR ACUTE TOXIC HEPATITIS. Maksarova Darima DSc in Biology, A/Professor, Buryat State University 24a Smolirn st., Ulan-Ude 670000, Russia

The paper presents data on the experimental study of the hepatoprotective effect of a modified phytobacterial agent in acute toxic hepatitis in experiments on white rats. The features of the mechanism of action of the analized agent for acute toxic liver damage are substantiated. A significant therapeutic effect of the modified phytobacterial agent was noted.

Keywords: white rats, liver diseases, bifidobacteria, strains, phytotherapy.

Введение

Гепатопротекторное действие модифицированного фитобактериального средства (МФС) исследовано на общепринятых экспериментальных моделях в условиях острого токсического поражения печени белых крыс тетрахлорметаном CCU.

По данным ВОЗ, заболевания печени также занимают существенное место в мире среди причин нетрудоспособности и смертности населения. Так, гепатит В является самой распространенной вирусной инфекцией, в мире около 2000 млн. инфицированных и 350 млн хронических носителей. Многообразными стали токсические и аллергические повреждения органов гепатобилиарной системы, как результат попадания с пищей и водой различных ксенобиотиков, включая фармакологические препараты. Это обусловливает большое социальное и медицинское значение создания и применения новых лекарственных средств для профилактики и лечения заболеваний органов гепатобилиарной системы, среди которых особого внимания заслуживают лекарственные средства природного происхождения [6].

Печень -- самый крупный и сложный в метаболическом отношении орган, выполняющий разнообразные функции по синтезу и детоксикации различных веществ. Заболевания печени -- острые и хронические воспалительные заболевания (гепатиты), лекарственные и алкогольные поражения печени, синдром почечной недостаточности, цирроз печени требуют осторожного назначения синтетических лекарственных средств, альтернативой которым является фитотерапия [1].

Комплексное МФС представляет собой сочетанное действие трех компонентов природного происхождения: минерального, растительного происхождения и пробиотика. В современном мире, в условиях усугубляющейся экологической ситуации, все больше внимания уделяется изысканию новых лекарственных средств природного происхождения [2].

Материал и методы исследования

МФС готовили на стерильном обезжиренном коровьем молоке с использованием активизированной чистой культуры бифидобактерий шт. B. longum B 379 M, сухого экстракта плодов шиповника Rosa (ГФ XI, ст. 38) (в экстракте из плодов шиповника аскорбиновой кислоты не менее 0,2%) и природный цеолит (ПЦ) Холинского месторождения (клиноптилолит) фракцией 0,1--1,0 мм (ТУ 2163-002-12763074-97). Содержание клеток бифидобактерий в готовом средстве 8-9 lg КОЕ/см3.

При исследовании возможности культивирования бифидобактерий на молочной основе с экстрактом плодов шиповника и ПЦ выявлено ускорение роста бифидобактерий с повышением их кислотообразующей способности [3].

Морфология клеток бифидобактерий в МФС сохраняла характерную для них бифуркацию, свойственную при культивировании бифидобактерий на среде Блаурокк (рис. 1).

Рис. 1. Бифидобактерии шт. В. longum B 379 M, выращенные на среде

Характерная для бифидобактерий штамма B. longum B379M микроскопическая картина свидетельствует о том, что условия культивирования, состав питательной среды МФС отвечают требованиям нормального роста бифидобактерий в молоке.

В процессе приготовления бифидосодержащих средств на молочной основе самым важным свойством бактерий считают их быстрый рост и способность сквашивать молоко.

Известно, что бифидобактерии (облигатные анаэробы) почти не растут в молоке, в отличие от молочнокислых бактерий. Развитие бифидобактерий может зависеть от особых веществ, так называемых бифидусфакторов, которые практически отсутствуют в коровьем молоке. Химические исследования показали, что бифидус-факторы представляют собой смесь близких по составу олигосахаридов.

В настоящее время существует несколько направлений для получения олигосахаридов-промоторов (стимуляторов роста) для бифидобактерий. Одним из таких направлений является выделение олигосахаридов из растительного сырья. Стимулирующее действие олигосахаридов объясняется тем, что они играют важную роль в синтезе пептидогликана клеточных стенок бифидибактерий.

МФС вводили per os в дозе 1 мл/100 мг массы животных. В качестве препарата сравнения использовали кверцетин в изоэффективной дозе 50 мг/кг массы 1 раз в сутки. Контрольная группа животных получала дистиллированную воду в эквиобъемном количестве.

Опыты по моделированию острого токсического гепатита проводили на белых беспородных крысах введением 50%-ного масляного раствора тетрахлорметана (CCU) (ГОСТ 20288-86) в объеме 0,4 мл/100 г массы крысы ежедневно в течение четырех дней, который разводили ex tempore в стерильном оливковом масле в соотношении 1:1 [4, 6].

Экспериментальные исследования проводились в соответствии с Конвенцией по защите животных, используемых в эксперименте и других научных целях, принятой Советом Европы в 1986 г., и требованиями, регламентирующими работу с экспериментальными животными.

Результаты исследования и их обсуждение

По патогистологических исследованиях на 7-е сутки с момента введения четыреххлористого углерода в печени животных выявлены резкие структурные изменения, которые сводятся к значительным гемодинамическим нарушениям в виде полнокровия междольковых сосудов, расширения просвета центральных вен, утолщения их стенок с миграцией элементов крови в паренхиму органа, периваскулярного отека и расширения периваскулярного пространства, а также к выраженным изменениям в форме жировой дистрофии.

В ранние сроки исследования в центре и вокруг некротических очагов отмечено снижение активности сукцинатдегидрогеназы (рис. 2).

Рис. 2. Острый токсический гепатит, 7-е сутки. Печень белой крысы. Снижение активности сукцинатдегидрогеназы (А) по сравнению с интактом (В). Окраска по Нахласу. Увел. 10 х 10

В паренхиме органа наблюдается в различной степени выраженная клеточная инфильтрация. Острый процесс повреждения печени тетрахлорметаном протекает с участием пролиферативно-инфильтрационных реакций с образованием инфильтратов в портальных и перипортальных зонах по ходу кровеносных сосудов и внутри долек.

В печени животных на 7-е сутки (контрольная группа) выявлены резкие структурные изменения в виде периваскулярного отека с очагами некроза. Повреждения носят характер мелкокапельной и среднекапельной жировой дистрофии и клеточной инфильтрации. Характерны гемодинамические нарушения.

На 14-е сутки все отмеченные нарушения продолжают сохраняться. Также выявлена деструкция стенок кровеносных сосудов, краевое стояние лейкоцитов у стенки сосуда с миграцией клеточных элементов в паренхиму органа. Гепатоциты с боковым или центральным расположением ядра, увеличены в размерах. Выражена клеточная инфильтрация внутри долек по ходу сосудов (рис. 3).

Рис. 3. Острый токсический гепатит, 14-е сутки. Контрольная группа. Печень белой крысы. Выраженная клеточная инфильтрация внутри долек по ходу сосудов и желчному протоку. Окраска гематоксилином и эозином. Увел. 10 х 20

В паренхиме печени обнаруживали очаги некроза, локализованные чаще в центролобулярных зонах.

На фоне введения МФС в печени слабее выражены признаки токсического гепатита, в частности, жировая и клеточная инфильтрация, гемодинамические нарушения. На 7-е сутки введения модифицированного фитобактериального средства в паренхиме органа выявлены гипертрофированные и двуядерные гепатоциты и клетки Купфера. В большинстве случаев отсутствовали выраженные альтеративные изменения, отмечалась сохранность структуры долек и балок.

У животных, получавших МФС, на 14-е сутки опытов гемодинамические нарушения и изменения в печени были выражены в гораздо меньшей степени, чем у контрольных животных. Центролобулярные очаги некроза исчезли, хотя гепатоциты, заполнившие их, еще не приближались к норме. Об активности регенераторных процессов судили по выявлению крупных темноокрашенных клеток с гипохромными ядрами, по частоте митозов и увеличению числа двуядерных гепатоцитов.

Клеточная инфильтрация внутри долек и по ходу сосудов менее выражена. В инфильтратах преобладали гистиолимфоцитарные и макрофагальные элементы.

У животных, получавших МФС, быстрее проходили гемодинамические нарушения, отечный процесс, гораздо раньше по сравнению с контролем происходило замещение некротических очагов в центре долек вновь образованными гепатоцитами и за счет гипертрофии печеночных клеток, не подвергавшихся альтеративным изменениям, быстрее исчезали клеточные инфильтраты.

Во все сроки исследования вышеописанные признаки регенерации выявляли в печени животных, получавших МФС гораздо чаще, чем у животных контрольной группы [3].

При микробиологическом исследовании содержимого толстого отдела кишечника крыс отмечали, что МФС оказывало положительное действие на состав микрофлоры толстого отдела кишечника (табл. 1).

Таблица 1. Влияние модифицированного фитобактериального средства на состав микрофлоры кишечника белых крыс при остром токсическом гепатите (M±m, n=6) lgKOE/см3

Примечание:* -- данные достоверны по сравнению с интактной группой при Р< 0,05; ** -- данные достоверны по сравнению с контрольной группой при Р< 0,05.

Так, повышался титр бифидобактерий и лактобацилл, снижалось количество энтерококков, стафилококков, клостридий, грибов рода Кандида, возрастало по сравнению с данными у животных контрольной группы количество полноценной формы кишечной палочки и, соответственно, снижалось число бактерий с ослабленными свойствами.

Положительный эффект МФС на организм проявляется через нормализацию микробной экологии кишечника за счет стимуляции роста представителей индигенной микрофлоры, в результате синтеза витаминов и других ростстимулирующих факторов, нормализации рН, нейтрализации токсинов, изменения микробного метаболизма.

МФС реализует свое положительное влияние на физиологическую функцию и биохимические реакции либо непосредственно вмешиваясь в метаболическую активность клеток соответствующих органов и тканей, либо опосредовано через регуляцию функционирования биопленок на слизистых организма.

Заключение

фитобактериальный метаболический токсический гепатит

В экспериментальных исследованиях на модели острого гепатита выявлена способность МФС подавлять процессы цитолиза, нормализовать активность ферментов и метаболизм в клетках печени. Гепатопротекторное действие МФС сочетается с гиполипидемическим эффектом, тем самым предупреждая развитие дегенеративных процессов, перерождение клеток печени и возникновение фиброза.

Курсовое назначение исследуемого средства привело к торможению свободно-радикальных реакций в биологических мембранах гепатоцитов.

Скорость накопления МДА к 7 суткам развития токсического гепатита снижалась под действием модифицированного фитобактериального средства в 2,4 раза. Регуляция интенсивности ПОЛ данным средством уменьшала проницаемость и стабилизировала клеточные мембраны гепатоцитов, о чем свидетельствовало снижение активности аланинаминотрансферазы АлАТ под действием МФС на 61%. Активность щелочной фосфатазы в сыворотке крови при введении МФС снижалась почти в 2 раза, содержание общего билирубина также в значительной степени снижалось.

К 14-м суткам развития острого токсического гепатита у крыс исследуемое средство также оказывало благоприятное воздействие. Активность щелочной фосфатазы в сыворотке крови при введении МФС снижалась на 38%. Концентрация гликогена возрастала, по сравнению с показателями в контроле, в 1,5 раза.

К 21-м суткам эксперимента при введении МФС у животных с экспериментальным гепатитом в значительной степени тормозился процесс ПОЛ: содержание МДА в печени снижалось под действием МФС в 1,8 раза. Также стимулировались процессы синтеза гликогена в ткани печени.

Таким образом, можно предположить, что под действием исследуемого средства происходит коррекция морфофункционального состояния печени и восстановление микрофлоры толстого отдела кишечника при остром токсическом гепатите. Обоснованы особенности механизма действия исследуемого средства при токсических повреждениях печени. Значительный терапевтический эффект МФС и нормализация морфофункционального состояния печени характеризуется торможением перекисного окисления липидов (ПОЛ) в биологических мембранах гепатоцитов, снижением проявлений синдромов воспаления печени, благодаря чему предотвращалась грубая деструкция клеточных и субклеточных образований в органах и тканях, достигалось ускорение митоза клеток и внутриклеточной регенерации. Выявлено, что встраивание бифидобактерий в каркас природного цеолита, благодаря его абсорбционным свойствам, защищает бифидобактерии от «кислотной атаки» в желудке и способствует их продвижению в толстый отдел кишечника, что, в свою очередь, приводит к нормализации нарушенной микробной экологии кишечника.

Литература

1. Насыбуллина Н. М. Фитотерапия хронических заболеваний печени // Consilium provisorum, 2007. № 5. С. 43-44.

2. Максарова Д. Д. Микроэкологические нарушения печени крыс при остром токсическом гепатите // Проблемы охраны окружающей среды и рационального природопользования Прикаспия и сопредельных регионов: материалы IX Междунар. науч.-практ. конф. Элиста, 2010. С. 133-136.

3. Максарова Д. Д.Оценка функционального состояния печени белых крыс при фармакотерапии модифицированным фитобактериальным средством в условиях острого токсического гепатита // Структура, функционирование биосистем и экологическая безопасность: материалы науч.-практ. конф., посвящ. 80-летию Бурят. гос. ун-та. Улан-Удэ, 2012. Ч. 2. С. 151-157.

4. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / под общ. ред. Р. У. Хабриева. 2-е изд., перераб. и доп. М.: Медицина, 2005. 832 с.

5. Экспериментальное моделирование токсического повреждения печени / Скуратов А. Г. [и др.] // Проблемы здоровья и экологии. 2011. № 4(30). С. 27-33.

6. Убашеев И. О., Бальхаев И. М., Плеханов А. Н. Коррекция печеночной недостаточности у белых крыс при остром ССЕ-гепатите тибетским лекарственным средством «Манушитан» // Вестник Бурятского госуниверситета. 2011. № 12. С. 41-45.

References

1. Nasybullina N. M. Fitoterapija hronicheskih zabolevanij pecheni // Consilium provisorum, 2007. N 5. Pp. 43-44.

2. Maksarova D. D. Mikrojekologicheskie narushenija pecheni krys pri ostrom toksicheskom gepatite // Problemy ohrany okruzhajushhej sredy i racional'nogo prirodopol'zovanija Prikaspija i sopredel'nyh regionov: materialy IX Mezhdunar. nauch.-prakt.konf. Jelista, 2010. Pp. 133-136.

3. Maksarova D. D.Ocenka funkcional'nogo sostojanija pecheni belyh krys pri farmakoterapii modificirovannym fitobakterial'nym sredstvom v uslovijah ostrogo toksicheskogo gepatita // Struktura, funkcionirovanie biosistem i jekologicheskaja bezopasnost': materialy nauch.-prakt. konf., posvjashh. 80-letiju Burjat. gos. un-ta. Ulan-Udje, 2012. Ch.2. Pp. 151-157.

4. Rukovodstvo po jeksperimental'nomu (doklinicheskomu) izucheniju novyh farmakologicheskih veshhestv / Pod obshh. red. chlen-korr. RAMN prof. R. U. Habrieva. 2-e izd., pererab. i dop. M.: Medicina, 2005. 832 s.

5. Skuratov A. G., Lyzikov A. N., Voropaev E. V., Achinovich S. L., Osipov B. B. Jeksperimental'noe modelirovanie toksicheskogo povrezhdenija pecheni // Problemy zdorov'ja i jekologii. 2011. № 4(30) S. 27-33.

6. Ubasheev I. O., Bal'haev I. M., Plehanov A. N. Korrekcija pechenochnoj nedostatochnosti u belyh krys pri ostrom SSl4-gepatite tibetskim lekarstvennym sredstvom «Manushitan» // Vestnik Burjatskogo gosuniversiteta. 2011. № 12. Pp. 41-45.

Размещено на Allbest.ru