Методи діагностики інфекції Helicobacter pylori порожнини рота у стоматологічній практиці

Размещено на http://www.allbest.ru/

Методи діагностики інфекції Helicobacter pylori порожнини рота у стоматологічній практиці

О.Л. Золотухіна, Ю.В. Єрьомін, канд. мед. наук, Л.С. Кравченко, канд. біол. наук, О.А. Бас, канд. мед. наук, доц.; Одеський національний медичний університет

Наведені дані щодо сучасних методів діагностики Helicobacter pylori -- інфекції слизової оболонки шлунка і порожнини рота як потенційного резервуара для гастральної інфекції та реінфекції. Проведено дослідження щодо наявності інфекції Helicobacter pylori у порожнині рота шляхом полімеразної ланцюгової реакції і швидкого уреазного тесту як високочутливих діагностичних методів. Також проведений аналіз результатів дослідження з матеріалом із порожнини рота.

За допомогою ШУТ з біоптатом шлунка та матеріалом з порожнини рота була проведена діагностика персистенції інфекції Helicobacter pylori за уреазною активністю, а також у ході проведення дослідження було виявлено взаємовідношення між позитивною реакцією ШУТ і ПЛР-діагностикою з матеріалом з порожнини рота.

Ключові слова: хронічний гастрит, швидкий уреазний тест, полімеразна ланцюгова реакція, Helicobacter pylori.

The methods for diagnostics of helicobacter pylori infection in oral cavity indental practice

O.L. Zolotukhina, Yu.V. Yeryomin, L.S. Kravchenko, O.A. Bas; The Odessa National Medical University

This article provides data on the modern methods of Helicobacter pylori diagnostics, an infection of the gastric mucosa and oral mucosa as a potential reservoir of gastric infection and reinfection. A study of determining the presence and Helicobacter pylori degree of the oral cavity by polymerase chain reaction and rapid urease test (RUT) as highly sensitive diagnostic methods has been made. The results of PCR and RUT with oral material were also analyzed.

The persistence of Helicobacter pylori infection was diagnosed by RUT of a gastric biopsy and oral materialby ureaseactivity, and the relationship between the positive reaction of RUT and PCR diagnostics with oral material was revealed.

Key words: chronicgastritis, rapidureasetest, polymerase chain reaction, Helicobacter pylori.

Вступ

Австралійські вчені B. Marshall і I. Warren ще у 1983 році встановили взаємозв'язок між інфекцією Helicobacter pylori (Н. pylori, Нр) та етіопатогенезом захворювань шлунка і дванадцятипалої кишки. Також вони поділяли думку присутності даної інфекції у порожнині рота [1-3]. Helicobacter pylori є найпоширенішою інфекцію у світі. Сьогодні не заперечується значення персистенції Нр в етіології хронічного гастриту та виразкової хвороби шлунка й дванадцятипалої кишки [4-6].

Ротова порожнина -- це початковий відділ шлунково-кишкового тракту (ШКТ), що протягом ембріонального періоду зароджується з первинної кишкової трубки як і усі органи травної системи та має спільність нейрогуморальної регуляції з тканинами травного тракту [7-9]. Багато авторів поділяють думку вчених B. Marshall і І. Warren та розглядають ротову порожнину як потенційний резервуар і додаткове джерело реінфікування Н. pylori слизової оболонки шлунка [10-12].

Відомо, що хронічний генералізований пародонтит може супроводжуватися фоновими і супровідними соматичними захворюваннями, зокрема хворобами ШКТ [13-14]. Багатьма дослідженнями доведено, що тяжкість перебігу захворювань органів травного тракту визначає тяжкість перебігу запалення тканин пародонта [15]. Механізми участі інфекції H. pylori у патогенезі захворювань тканин пародонта широко обговорюються у науковій літературі протягом останніх років.

Джерела літератури свідчать про те, що у хворих на захворювання шлунка, асоційовані з Нр-інфекцією, у вмісті пародонтальних кишень і зубному нальоті виявляються бактерії Нр [16-18].

Уже не вперше встановлено присутність Н. pylori у біотопах ротової порожнини, а саме у дентальній біоплівці, слині, вмісті пародонтальних кишень, на спинці язика, поверхнях ортопедичних конструкцій [19].

Helicobacter pylori -- грамнегативний, мікроаерофільний, ацидофільний, умовно-патогенний мікроорганізм, S- або спіралеподібної форми, вкритий гладкою оболонкою. На одному з полюсів має від 2 до 6 мономерних джгутиків, за допомогою яких адгезується до слизової оболонки та рухається в шарі слизу впродовж градієнта рН. Це є фактором вірулентності [20]. Helicobacter pylori має широкий комплекс факторів патогенності, незважаючи на колонізацію в екстремальних умовах кислого середовища, а саме: ферменти уреазу, каталазу, лужну фосфатазу, протеазу, муциназу, фосфоліпазу, у-глутаміл-трансферазу, оксидазу, гемолізин, білок-інгібітор соляної кислоти, адгезини, цитотоксини. Зубні біоплівки можуть забезпечувати уреазопродукуючі бактерії сечовиною, такі як H. pylori, що, у свою чергу, може поліпшити умови життєдіяльності останніх у пародонтальних кишенях [21]. Уреаза -- це внутрішньоклітинний фермент, який зв'язується з зовнішньою мембраною інших бактерій при лізисі.

Функція уреази полягає у підвищенні рН у мікросередовищі шляхом утворення аміаку з сечовини та у забезпеченні постачання азоту для продукування бактеріальних білків. Біохімічні методи діагностики хелікобактерної інфекції ґрунтуються саме на визначенні уреазної активності останньої.

Для діагностики Hp-інфекції сьогодні використовують широкий спектр різноманітних методів, які засновані на різних принципах [22]. Вони поділяються на бактеріологічні (культуральні, посів на диференційно-діагностичні середовища); цитологічні (виявлення Нр у мазках-відбитках, забарвлених за методом Гімзи); гістологічні («золотий стандарт» діагностики Нр, виготовлення препаратів та їхнє забарвлення); біохімічні (швидкий уреазний тест (ШУТ), уреазний дихальний тест з ¹³С сечовиною); серологічні (імуно-ферментний аналіз, Stool test, експрес-тести на основі реакції імунопреципітації); молекулярно-генетичні (полімеразна ланцюгова реакція -- ПЛР) [23-26].

Для діагностики орального Нр найбільш високочутливим тестом залишається ПЛР, яка має низку переваг серед інших методів діагностики Нр, а саме: високу чутливість, специфічність, швидкість виконання, вибір матеріалу для дослідження, виявлення як вегетативних, так і кокових форм мікроорганізмів. Як більш зручні способи високочутливих і специфічних тестів на виявлення Нр у порожнині рота можна використовувати ШУТ, які набагато простіше провести як клінічні дослідження у великої кількості пацієнтів для отримання більшої кількості даних, щоб знайти позитивну кореляцію між інфекцією H. pylori у порожнині рота та шлунку.

Швидкий уреазний тест -- це експрес-діагностика інфекції H. pylori за уреазною активністю біоптата, отриманого в ході ендоскопічного обстеження слизової оболонки шлунка і дванадцятипалої кишки. Зі ШУТ ідентифікація інфекції H. pylori відбувається за допомогою індикаторного диска, на який поміщають біоптат. Поява плями протягом 3 хв свідчить про високу уреазну активність біоптата. Розмір біоптата має бути не менше 2 мм. Тестування проводиться при кімнатній температурі без інкубації [27-31].

Мета даної роботи полягає у проведенні різних методів діагностики інфекції H. pylori порожнини рота, а також визначенні можливості використання даних методів у клінічній практиці.

Матеріали та методи дослідження

У своїй роботі ми проводили обстеження 125 пацієнтів віком від 25 до 50 років із діагнозом хронічний гастрит, серед яких чоловіків було 71 (56,8 %), жінок -- 54 (43,2 %). Обстеження проводили до лікування. Діагноз хронічного гастриту підтверджували за допомогою відеофіброгастроскопії (апарат “Olympus” GIF-160) та біопсії. Усім пацієнтам було проведено ШУТ біоптата шлунка (Тест-система AMA RUT 10 (ХЕЛПИЛ) ® ТОВ «Ассоциация Медицины и Аналитики», Санкт-Петербург, РФ) для виявлення наявності та ступеня вираженості інфікованості слизової оболонки шлунка бактерією Нр.

При дослідженні тест-планшет звільняли від захисної плівки та розміщували на плоскій рівній поверхні. Після отримання біоптата зі шлунка його розміщували на поверхні планшета по центру.

Результат оцінювали за зміною кольору індикатора з жовтого на синій через 3 хв. Ступінь вираженості інфікованості оцінювали за 4-бальною шкалою: 1 бал (негативна реакція «-») -- тест не змінив кольору, 2 бали (слабо виражена позитивна реакція «+») -- зміна кольору навколо біоптата завширшки до 1 мм, 3 бали (помірна позитивна реакція «++») -- зміна кольору навколо біоптата завширшки від 1 до 2 мм, 4 бали (різко виражена позитивна реакція«+++») -- зміна кольору навколо біоптата завширшки більше 2 мм.

Інфекцію H. pylori у порожнині рота діагностували за допомогою ПЛР та ШУТ з матеріалом із порожнини рота даних пацієнтів. Як матеріали для дослідження використовували ясеневу рідину та рідину пародонтальних кишень, зубний наліт з поверхонь молярів. Матеріал брали натщесерце, до проведення гігієнічних заходів, після полоскання порожнини рота звичайною чистою водою. Для ПЛР-діагностики матеріал брали за допомогою стерильних паперових ендодонтичних абсорберів -- штифтів (Paper Points Superior Absorbency, DiaDent Group Internation, Republic of Korea, розмір № 25) протягом 15 с.

Таблиця 1 Результати швидкого уреазного тесту з матеріалом зі шлунка і порожнини рота, абс. (%)