Количественное определение суммы дитерпеновых гликозидов в сырье стевии

Размещено на http://www.allbest.ru/

Е.Е. Курдюков

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ СУММЫ ДИТЕРПЕНОВЫХ ГЛИКОЗИДОВ В СЫРЬЕ СТЕВИИ

Введение

Сахарный диабет является острейшей медико-социальной проблемой практически во всех странах мира, катастрофический рост числа заболевших принимает характер неинфекционной эпидемии. Трудно переоценить значимость поиска обоснованных подходов к профилактике сахарного диабета, так как, несмотря на довольно обширный арсенал противодиабетических препаратов и большой опыт их применения, проблема профилактики и лечения заболевания не решена.

Листья стевии, экстракты из листьев применяют как для профилактики сахарного диабета, так и в комплексной терапии заболевания. Во всех надземных органах стевии обнаружены сладкие дитерпеновые гликозиды: стевиозид, ребаудиозиды А, В, С, D и Е, обладающие способностью усиливать секрецию инсулина, усиливать эффект инсулина на клеточные мембраны, стабилизировать секрецию глюкагона и уровня сахара в крови. Однако фармакогностические аспекты недостаточно изучены. В связи с этим актуально проведение фитохимического анализа растительного сырья стевии [1-3].

Основной группой биологически активных соединений в сырье стевии являются дитерпеновые гликозиды [4, 5]. На сегодня разработан метод идентификации комплекса гликозидов в листьях стевии методом тонкослойной хроматографии (ТСХ) и высокоэффективной жидкостной хроматографии [6-8].

1. Материалы и методы

Материалом для исследования служили образцы измельченного сырья из высушенных листьев сорта Рамонская сластена, выращенного в условиях Пензенской и Тверской областей, Краснодарского края, Республики Крым.

Идентификацию дитерпеновых гликозидов в сырье стевии проводили методом ТСХ [6]. Использовали хроматографическую пластинку «Силуфол УФ-254». Пластинки для ТСХ-анализа предварительно выдерживали в сушильном шкафу при температуре 100-105 °C в течение 1 ч с целью их активирования. Хроматографировали восходящим способом в камере с системой растворителей: хлороформ - метанол - вода (60:30:6). После того как фронт растворителей пройдет 13 см, пластинку вынимали из камеры и высушивали на воздухе в течение 30 мин, затем пластинку опрыскивали 50 % раствором серной кислоты. После выдерживания пластинки в сушильном шкафу при температуре 100°С в течение 15 мин на хроматограмме идентифицировали пятна черного цвета с различными значениями Rf.

Количественное определение суммы дитерпеновых гликозидов в извлечениях из листьев стевии проводили методом прямой спектрофотометрии. Эксперимент проводили на спектрофотометре СФ104 в кварцевых кюветах с толщиной слоя 10 мм в диапазоне длин волн 190-300 нм. Извлечение дитерпеновых гликозидов из листьев стевии с соотношением сырье-экстрагент 1:100 проводили путем однократной экстракции 95 % этанолом при нагревании на кипящей водяной бане в течение 45 мин.

2. Результаты и обсуждение

Важным показателем подлинности экстракта стевии является содержание в нем стевиозида. Для качественного определения стевиозида была применена методика ТСХ, характерной зоной являлось пятно с Rf 0,39, соответствующее стевиозиду.

Для скринингового анализа содержания комплекса гликозидов в листьях стевии была применена прямая спектрофотометрия. В качестве раствора сравнения использовался сироп стевии с известным содержанием стевиозида, доказана линейность поглощения при 203 ± 2 нм от концентрации. При использовании концентрации 40 и 70 % спирта не было ярко выраженного максимума. На рис. 1 представлен общий вид спектра спиртовых извлечений из листьев стевии, полученного в ходе количественной оценки содержания суммы дитерпеновых гликозидов методом прямой спектрофотометрии.

Для извлечений из листьев стевии отмечается присутствие характерного максимума при длине волны 203 ± 2 нм. Следует отметить, что при использовании сырья стевии различного происхождения характер спектра не менялся у всех образцов. Аналитическая длина волны может быть использована для идентификации дитерпеновых гликозидов.

При разработке количественного определения дитерпеновых гликозидов в листьях стевии были изучены ультрафиолетовые спектры стевиозида. Для количественного спектрофотометрического анализа необходим стандарт или величина удельного показателя поглощения дитерпеновых гликозидов, ^/ст = 57,3. Был проведен сравнительный анализ лекарственного растительного сырья стевии, выращенной в разных климатических условиях (табл. 1). Было установлено, что содержание суммы дитерпеновых гликозидов в листьях стевии варьирует от 14 до 22 %.

Изучение спектров поглощения в ультрафиолетовой области спиртовых экстрактов стевии проводилось с целью выбора оптимальных условий и характеристик, позволяющих установить подлинность. Спектр 1,0 % раствора экстракта стевии в этаноле имеет один ярко выраженный максимум при длине волны 203 нм. При сопоставлении спектров со спектрами образца сравнения установлено, что он имеет аналогичные спектры с экстрактом. Изученные спектры в области от 190 до 300 нм специфичны и информативны. Для установления подлинности стевиозида предложено использовать спектр поглощения 1,0 % раствора экстракта из листьев стевии в этаноле.

Рис. 1. Ультрафиолетовый спектр поглощения дитерпеновых гликозидов спиртового извлечения из сырья стевии, спирт этиловый 95 % (а); ультрафиолетовый спектр раствора сравнения (дифференциальный спектр) (б)

Результаты количественного определения суммы дитерпеновых гликозидов в сырье стевии

Таблица 1

Заключение

Для доказательства присутствия дитерпеновых гликозидов в экстрактах из листьев стевии целесообразно использовать ТСХ-анализ, характерной зоной являлось пятно с Rf 0,39.

Определены максимумы собственного поглощения дитерпеновых гликозидов спиртовых экстрактов из листьев стевии - 203 нм. Положение максимумов не изменялось при использований сырья стевии различного происхождения. Для экстракции дитерпеновых гликозидов из листьев стевии оптимально использовать растворы этанола 95 %.

Было установлено, что содержание суммы дитерпеновых гликозидов в листьях стевии варьирует от 14,8 до 21,4 %. Показано, что по содержанию дитерпеновых гликозидов стевия, выращенная в Пензенской области, на 30 % уступает сырью стевии, полученной в условиях Республики Крым. Это дает основание полагать, что регион возделывания стевии в России может быть расширен и включать агроклиматические условия Пензенской области.

листья стевия дитерпеновые гликозиды сахарный диабет

Библиографический список

1. Lemus-Mondaca, R. Stevia rebaudiana Bertoni, source of a high-potency natural sweetener: A comprehensive review on the biochemical, nutritional and functional aspects / R. Lemus-Mondaca, A. Vega-Galvez, L. Zura-Bravo, Ah-Hen. Kong // Food Chemistry. - 2012. - Vol. 132 (3). - P. 1121-1132.

2. Stevia rebaudiana (Bert.) Bertoni A Review / Swati Madan, Sayeed Ahmad, G N Singh, Kanchan Kohli, Yatendra Kumar Raman Singh and Madhukar Garg // Indian Journal of Natural Products and Resources. - 2010. - Vol. 1 (3). - P. 267-286.

3. Курдюков, Е. Е. Макро- и микроморфологические особенности листьев стевии Ребо Stevia rebaudiana Bertoni при интродукции в Среднем Поволжье / Е. Е. Курдюков, Е. Ф. Семенова // Научные ведомости Белгородского государственного университета. Сер.: Медицина и фармация. - 2017. - № 26. - С. 137-145.

4. Федоров, С. В. Разработка метода выделения сладких дитерпеновых гдикози- дов стевии и анализ полученных экстрактов / С. В. Федоров, С. А. Кедик, Н. А. Лнуль // Биологически активные добавки к пище и проблемы оптимизации питания : материалы VI Междунар. симпозиума. - Сочи, 2002. - С. 266.

5. Кедик, С. А. Сладкие дитерпеновые гликозиды стевии / С. А. Кедик, Н. А. Януль, С. В. Фёдоров // Питание и здоровье. Биологически активные добавки. - 2002. - № 8. - С. 42-44.

6. Контроль содержания стевиозида в растительном сырье методом ВЭЖХ и ТСХ / C. А. Кедик, С. В. Федоров, Н. А. Януль, Л. В. Прохорова, Е. В. Смирнова, А. В. Панов // Химико-фармацевтический журнал. - 2003. - Т. 37, № 10. - С. 19-22.

7. Рудаков, О. Б. Контроль стевиозида в сырье методом высокоэффективной жидкостной хроматографии / О. Б. Рудаков, Н. Д. Верзилина, С. В. Федоров, К. К. Полянский // Молочная промышленность. - 2004. - № 7. - С. 54-55.

Размещено на Allbest.ru