Изучение антибактериального эффекта покрытия для имплантируемых медицинских изделий из титана и изменения гематологических и биохимических показателей крови крыс на разных сроках после имплантации

Размещено на http://www.allbest.ru/

Изучение антибактериального эффекта покрытия для имплантируемых медицинских изделий из титана и изменения гематологических и биохимических показателей крови крыс на разных сроках после имплантации

В.Э. Иванова, Е.С. Андреева, А.Д. Кручинина, С.С. Гамзин

Аннотация

Актуальность и цели. Несмотря на ежегодный рост числа операций с использованием изделий из титановых сплавов, проблема развития перипротезных инфекционных осложнений остается нерешенной. Перспективным направлением в травматологии и ортопедии является создание имплантатов, препятствующих образованию биопленки на поверхности медицинского изделия. Было предложено наносить на поверхность имплантата антибактериальное покрытие, включающее ванкомицин в качестве активного компонента и полимер полилактид-когликолид в качестве носителя. Цель исследования - изучение антибактериального эффекта покрытия титановых блоков in vitro и анализ динамики изменения уровня основных гематологических и биохимических показателей на разных сроках после имплантации крысам.

Материалы и методы. В эксперименте in vitro диско-диффузионный метод использовали для оценки антибактериального эффекта покрытия на культурах Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Enterococcus faecalis. В эксперименте in vivo имплантировали подкожно образцы с антибактериальным покрытием, в динамике изучали изменение гематологических и биохимических показателей крови крыс. Статистическую обработку данных проводили с помощью метода Тьюки, критерия Шапиро - Уилка, критерия Краскела - Уоллиса, U-критерия Манна Уитни.

Результаты. В экспериментах in vitro было подтверждено наличие антибактериального эффекта покрытия титановых блоков, содержащего ванкомицин, на культурах Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Enterococcus faecalis. Результаты экспериментов in vivo свидетельствуют о том, что гематологические и биохимические параметры крови крыс до операции, через 2 и 4 недели после имплантации титановых блоков находятся в пределах физиологической нормы. Статистически значимые отличия между значениями контрольной и опытной групп не выявлены. Установленные сдвиги значений отражают ответную реакцию организма на наркоз и оперативное вмешательство.

Выводы. Антибактериальное покрытие для имплантируемых медицинских изделий из титана, содержащее ванкомицин и полилактид-когликолид (50:50), обладает антибактериальным эффектом по отношению к культурам Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Enterococcus faecalis. Результаты исследования гематологических и биохимических параметров контрольной и опытной групп свидетельствуют об отсутствии токсического влияния антибактериального покрытия титановых блоков на организм.

Ключевые слова: имплантируемые медицинские изделия, титановые сплавы, перипротезная инфекция, антибактериальное покрытие.

Abstract

THE STUDY OF ANTIBACTERIAL COATING EFFECT FOR IMPLANTABLE MEDICAL DEVICES MADE OF TITANIUM AND CHANGES IN HEMATOLOGICAL AND BIOCHEMICAL PARAMETERS OF RAT BLOOD AT DIFFERENT PERIODS AFTER IMPLANTATION

V.E. Ivanova, E.S. Andreeva, A.D. Kruchinina, S.S. Gamzin

Background. Despite the annual increase in the number of operations using titanium alloy products, the problem of developing periprosthetic infectious complications remains unresolved. The promising direction in traumatology and orthopedics is the creation of implants that prevent the formation of biofilm on the surface of the medical device. It was proposed to apply an antibacterial coating to the implant surface, including vancomycin as the active component and the polymer polylactide- co-glycolide as the carrier. The aim of the research was to study the antibacterial effect of the coating titanium blocks in vitro and analyze the dynamics of changes in the level of basic hematological and biochemical parameters at different periods after implantation in rats.

Materials and methods. The disc-diffusion test was used to evaluate the antibacterial effect of the coating on Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, and Enterococcus faecalis cultures. Samples with the antibacterial coating were implanted subcutaneously, and changes in the hematological and biochemical parameters of rat blood were studied in dynamics. Statistical data processing was performed using Tukey's test, the Shapiro-Wilk test, the Kruskal-Wallis test, and the Mann- Whitney U-test.

Results. In vitro experiments confirmed the presence of an antibacterial effect of the titanium blocks vancomycin-containing coating on cultures of Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, and Enterococcus faecalis. The results in vivo experiments indicate that the hematological and biochemical parameters of rat blood before surgery, 2 and 4 weeks after implantation of titanium blocks are within the physiological norm. There were no statistically significant differences between the values of the control and experimental groups. The established value shifts reflect the body's response to anesthesia and surgery.

Conclusions. Antibacterial coating for implantable medical devices made of titanium, which contain vancomycin, and polylactide-co-glycolide (50:50) has an antibacterial effect against Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, and Enterococcus faecalis cultures. The results of the study of hematological and biochemical parameters of the control and experimental groups indicate that there is no toxic effect of the antibacterial coating of titanium blocks on the body.

Keywords: implantable medical devices, titanium alloys, periprosthetic infection, antibacterial coating.

Введение

Сплавы на основе титана являются широко используемыми в медицинской практике материалами. Они обладают высокой прочностью, пластичностью, коррозионной стойкостью в условиях внутренней среды организма. Биологическая совместимость и гипоаллергенность данных материалов обусловлена формированием на поверхности стабильной инертной оксидной пленки, препятствующей развитию патологических процессов на границе изделия и тканей организма [1]. Сплавы на основе титана применяются для изготовления хирургических инструментов и имплантируемых медицинских изделий: нитей, сеток, крепежей, зубных протезов, протезов суставов и т.д.

Несмотря на ежегодный рост числа операций с использованием изделий из титановых сплавов, остается нерешенной проблема развития перипротезных инфекционных осложнений. Перипротезные инфекции относятся к частным случаям инфекций области хирургического вмешательства (ИОХВ), развивающимся в течение года с момента имплантации медицинского изделия, и сопровождаются развитием локального и системного воспалительного процесса [2].

Согласно литературным данным частота развития перипротезных инфекционных осложнений в ортопедии при эндопротезировании крупных суставов составляет от 0,5 до 3,0 % после первичного протезирования и от 3 до 6 % после ревизионного [2]. При этом осложнение может возникать в ранний послеоперационный период или быть отсроченным. Наиболее частыми возбудителями осложнений в порядке убывания являются коагулазнонегативный Staphylococcus, Staphylococcus aureus, Enterobacter cloacae, Pseudomonas, Enterococcus, Staphylococcus Epidermidis [2].

Предполагается, что взаимодействие поверхности изделия, бактериальных клеток и прилежащих к имплантату тканей обусловлено свойствами поверхностей (в первую очередь химическими и электромагнитными) и раздражением рецепторов клеток. Материалы, применяемые в хирургии, обладают различной восприимчивостью к бактериальной колонизации. Оценка адгезии Staphylococcus на поверхности различных материалов in vitro показала высокую степень бактериальной колонизации костного цемента для коагулазнонегативного Staphylococcus, металлов и композитных полимеров для Staphylococcus aureus. Шершавость поверхности усиливала адгезию обоих микроорганизмов [3].

Хирургическое вмешательство ассоциировано с бактериальной контаминацией. После адгезии на поверхности имплантата вокруг микроорганизма формируется гидратированная биопленка из белковых и углеводных компонентов, при этом бактерия становится резистентной к действию антибактериальных препаратов [4]. Со стороны организма реципиента появляется иммунная реакция на чужеродный материал, вокруг имплантата развивается иммуноинкомпетентная фиброинфламмационная зона, и имеющиеся повреждения тканей приводят к повышенной восприимчивости к инфекции [4].

С учетом вышесказанного перспективным направлением в травматологии и ортопедии является создание имплантатов, препятствующих образованию биопленки на поверхности изделия. Нанесение антибактериального препарата на имплантат является методом адресной доставки действующего вещества в область предполагаемой инфекции. Наиболее эффективным антибиотиком по показателю минимальной бактерицидной концентрации является ципрофлоксацин, за ним в порядке убывания эффективности следуют цефамандол, ванкомицин, цефотаксим, гентамицин и эритромицин [3]. Применение полимера в качестве носителя для действующего вещества позволяет обеспечить его задержку на поверхности изделия и длительное постепенное высвобождение в окружающие ткани. Процесс высвобождения антибиотика из покрытия достаточно сложен, происходит за счет диффузии препарата из матрицы, а также вследствие постепенного разрушения полимерного покрытия в организме [5]. Вид антибиотика, его концентрация, тип матрицы-носителя напрямую влияют на скорость деградации покрытия.

Поскольку идея нанесения препарата с антибактериальной активностью в составе покрытия на поверхность изделия, контактирующего с тканями и физиологическими жидкостями реципиента, предполагает его длительное высвобождение в организм, необходимым является исследование местной и системной токсичности подобных покрытий. Если говорить про изделия для ортопедии, наиболее актуальным является изучение влияния низких доз антибактериальных препаратов на остеобласты и остеоциты. Согласно исследованиям in vitro снижение активности щелочной фосфатазы (маркера активности остеобластов) наблюдалось в средах, содержащих более 100 мкг/мл гентамицина, разрушение ДНК при более 700 мкг/мл гентамицина. При концентрации тобрамицина 400 мкг/мл отмечено снижение репликации, при 10000 мкг/мл - гибель клеток. Установлено, что ванкомицин в концентрации менее 1000 мкг/мл не влияет или влияет незначительно на репликацию и вызывает гибель клеток при 10000 мкг/мл. Цефазолин в концентрации 100 мкг/мл не влияет на репликацию, 200 мкг/мл - снижает репликацию, 10000 мкг/мл - вызывает гибель клеток [3]. Таким образом, согласно результатам исследований in vitro ванкомицин является менее токсичным по отношению остеобластам в сравнении с цефазолином и аминогликозидами.

Цель исследования: изучить антибактериальный эффект покрытия титановых блоков in vitro и проанализировать динамику изменения уровня основных гематологических и биохимических показателей на разных сроках после имплантации крысам.

1. Материалы и методы исследования

антибактериальный покрытие имплант медицинский

Для удобства изучения свойств антибактериального покрытия для имплантируемых медицинских изделий из титана были изготовлены титановые блоки диаметром 6 мм и высотой 1 мм. Нанесение антибактериального покрытия проводилось путем ультразвукового напыления раствора, содержащего ванкомицин и биоразлагаемый полимер полилактид-когликолид с соотношением сополимеров 50:50, на поверхность блока с последующей сушкой и аэрацией при комнатной температуре в течение 48 ч и стерилизацией окисью этилена. Итоговое содержание антибактериального препарата на титановом блоке составило 30 ± 5 мкг на 1 мм2 поверхности.

Оценка антибактериального эффекта покрытия для имплантируемых медицинских изделий из титана по отношению к грамположительным микроорганизмам Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Enterococcus faecalis проводилась по стандартной методике диско-диффузионным методом [6]. Выбор штаммов обусловлен частотой их встречаемости в качестве возбудителей перипротезных инфекционных осложнений. О наличии антибактериального эффекта судили по диаметру зоны ингибиции роста >15 мм [6].

В эксперименте in vitro релиз ванкомицина в модельный раствор, имитирующий биологическую жидкость, осуществлялся в течение трех недель. В связи с этим срок четыре недели был выбран для оценки токсических эффектов на организм реципиента в эксперименте in vivo. Исследование проводилось на 20 особях белых беспородных крысах массой 250-300 г в возрасте 12 недель. Перед операцией животные прошли карантин и акклиматизацию в условиях вивария в течение 14 дней. Содержание животных и условия проведения экспериментов in vivo соответствовали ГОСТ Р ИСО 10993-2 «Требования к обращению с животными» [7]. Для исследования были сформированы две группы: опытная и контрольная (10 особей в каждой группе: 5 самцов и 5 самок). Оперативное вмешательство проводилось в стерильных условиях по стандартной методике [8]. Во время операции животных наркотизировали растворами тилетамина гидрохлорида, золазепама гидрохлорида (6 мг/кг, золетил 100, Virbac Sante Animale, Франция) и ксилазина гидрохлорида (10 мг/кг, рометар, Bioveta, Чешская республика). Контрольной группе в сформированные карманы подкожно имплантировали блоки без антибактериального покрытия, опытной группе - блоки с покрытием. Исследование гематологических и биохимических показателей проводили с целью оценки системного токсического эффекта антибактериального покрытия. Забор крови для исследования осуществляли в пробирки с антикоагулянтом ЭДТА до проведения операции, через 2 и 4 недели после имплантации путем пункции хвостовой вены. Гематологическое исследование проводили с использованием анализатора BC-2800 Vet Auto Hematology Analyzer (Mindray, Китай). Плазму получали центрифугированием крови в течение 15 мин при 3000 об/мин в медицинской лабораторной центрифуге ОПН-8 («Аналит-Нева», Россия). Для оценки функционального состояния печени и почек определяли следующие показатели, рекомендованные к анализу ГОСТ Р ИСО 10993-11: альбумин; билирубин; активность аминотрансфераз (АСТ и АЛТ), щелочной фосфатазы (ЩФ); креатинин, мочевина [9] с помощью клинических наборов («Ольвекс Диагностикум», Россия) фотометрическим методом на КФК-3 (Загорский оптико-механический завод, Россия). Статистическую обработку полученных данных проводили в программе Statistica.10 с применением метода Тьюки для оценки статистических выбросов, критерия Шапиро - Уилка для определения вида распределения, критерия Краскела - Уоллиса для сравнения различных групп и ^-критерия Манна Уитни для последующего апо-стериорного сравнения. Уровень статистической значимостир < 0,05.

2. Результаты и их обсуждение

Исследование свойств покрытия титановых блоков диско-диффузионным методом подтвердило наличие антибактериального эффекта. Были получены следующие диаметры зон задержки роста: 30, 32 и 26 мм для Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Enterococcus faecalis соответственно.

Ванкомицин является представителем группы гликопептидов, бактерицидное действие оказывает за счет ингибирования биосинтеза клеточной стенки. Недостатком его системного применения является ограничение проникновения в ткани и биологические жидкости. Препарат выводится из организма в неизмененном виде преимущественно почками [10]. Местное применение обеспечивает повышение его концентрации в зоне предполагаемого инфекционного осложнения, снижает риск развития резистентности микроорганизмов. Однако существует риск развития токсического влияния на кровь, печень и почки [10]. Для определения степени возможного токсического влияния местного применения ванкомицина в качестве действующего вещества антибактериального покрытия имплантируемых медицинских изделий из титана провели ретроспективный анализ динамики уровня основных гематологических показателей, для оценки функции печени - альбумина, билирубина, активности аминотрансфераз (АСТ и АЛТ), щелочной фосфатазы; для оценки функции почек - креатинина, мочевины.

В ходе исследования были изучены гематологические показатели крыс до имплантации и через 2, 4 недели после имплантации титановых блоков с антибактериальным покрытием (табл. 1).

Таблица 1 Гематологические показатели белых беспородных крыс до и после подкожной имплантации титановых блоков с антибактериальным покрытием (M ± т)

В ходе исследования статистически значимые отличия между значени-ями гематологических показателей самцов и самок не выявлены. Гематологи-ческие параметры до имплантации, через 2 и 4 недели после имплантации титановых блоков с антибактериальным покрытием находятся в пределах физиологической нормы [11]. Результаты исследования, представленные в табл. 1, свидетельствуют об отсутствии достоверных различий между опыт-ной и контрольной группами через 2 и 4 недели после имплантации образцов.

В ходе исследования были выявлены некоторые сдвиги значений ге-матологических показателей на разных сроках после оперативного вмеша-тельства (рис. 1). Через 2 недели после имплантации титановых блоков с антибактериальным покрытием отмечено повышение уровня лейкоцитов на 80 %, уровня нейтрофилов на 56 % и снижение уровня лимфоцитов на 18 % по сравнению со значениями до операции. Через 4 недели значения показателей возвращались к первоначальным. Колебания уровней тромбо-цитов, эритроцитов, эозинофилов, базофилов и моноцитов были незначи-тельными.

Рис. 1. Динамика изменения гематологических показателей после подкожной имплантации титановых блоков с антибактериальным покрытием крысам

Умеренный лейкоцитоз за счет увеличения количества нейтрофилов говорит о реакции нейтрофильного звена фагоцитоза и развитии воспали-тельного ответа после имплантации образцов. Снижение уровня лимфоци-тов также может быть признаком воспалительного процесса в организме. Возвращение уровней лейкоцитов, нейтрофилов и лимфоцитов к дооперационным значениям к четвертой неделе после операции свидетельствует о снижении интенсивности воспалительной реакции и может говорить о за-вершении регенеративных процессов после оперативного вмешательства.

В ходе исследования были изучены биохимические показатели крови крыс до имплантации и через 2, 4 недели после имплантации титановых бло-ков с антибактериальным покрытием (табл. 2).

Таблица 2

Биохимические показатели крови белых беспородных крыс до и после подкожной имплантации титановых блоков с антибактериальным покрытием (M ± т)

В ходе исследования статистически значимые отличия между значени-ями биохимических показателей крови самцов и самок не выявлены. Биохи-мические параметры крови крыс до имплантации, через 2 и 4 недели после имплантации титановых блоков с антибактериальным покрытием находят-ся в пределах физиологической нормы [12]. Результаты исследования, пред-ставленные в табл. 2, свидетельствуют об отсутствии достоверных различий между опытной и контрольной группами через 2 и 4 недели после импланта-ции образцов.

В ходе исследования были выявлены изменения активности аланинами-нотрансферазы на разных сроках после оперативного вмешательства (рис. 2).

Рис. 2. Динамика изменения активности аланинаминотрансферазы после подкожной имплантации титановых блоков с антибактериальным покрытием крысам

Так, через 2 недели после операции было отмечено умеренное повышение активности АЛТ на 62 % по сравнению с результатами до имплантации, а через 4 недели значение показателя возвращается к дооперационному уровню. Достоверные отличия в концентрациях альбумина, билирубина, креатинина, мочевины, активностях аспартатминотрансферазы и щелочной фосфатазы не установлены.

Таким образом, изменения гематологических и биохимических показателей после имплантации титановых блоков с антибактериальным покрытием носят адаптационный характер в рамках ответной реакции организма на оперативное вмешательство.

Заключение

Антибактериальное покрытие для имплантируемых медицинских изделий из титана, содержащее ванкомицин и полилактид-ко-гликолид (50:50), обладает антибактериальным эффектом по отношению к культурам Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Enterococcus faecalis.

Умеренный лейкоцитоз за счет увеличения количества нейтрофилов, снижение уровня лимфоцитов через 2 недели после имплантации и возращение уровней лейкоцитов, нейтрофилов и лимфоцитов к дооперационным значениям к четвертой неделе свидетельствуют о развитии воспалительной реакции в ранний послеоперационный период и завершении восстановительных процессов через месяц после операции.

На всех этапах эксперимента значения гематологических и биохимических параметров находятся в пределах физиологической нормы. Изменение некоторых показателей через 2 недели после имплантации является следствием оперативного вмешательства.

Установлено отсутствие достоверных различий между значениями контрольной и опытной групп. Изменения уровней альбумина, билирубина, креатинина, мочевины, активность аспартатминотрансферазы, аланинаминотрансферазы и щелочной фосфатазы до имплантации и через 4 недели после не выявлена, что свидетельствует об отсутствии токсического влияния анти-бактериального покрытия на организм животных.

Библиографический список

1. Усольцев, И. В. Использование металлов в травматологии и ортопедии: история вопроса / И. В. Усольцев, С. Н. Леонова, С. Б. Никифоров, Б. Г. Пушкарев // Сибирский медицинский журнал. - 2013. - № 4. - С. 18-21.

2. Павлов, В. В. Современные аспекты диагностики и хирургического лечения пациентов с перипротезной инфекцией тазобедренного сустава (обзор литературы) / В. В. Павлов, М. А. Садовой, В.М. Прохоренко // Травматология и ортопедия России. - 2015. - № 1 (75). - С. 116-128.

3. Локальная антибиотикопрофилактика при эндопротезировании крупных суставов (литературный обзор) / Ю. Л. Шевченко, Ю. М. Стойко, А. А. Грицюк, П. Д. Кузьмин, И. А. Папаценко, А. П. Середа // Вестник Национального медико-хирургического центра им. Н. И. Пирогова. - 2010. - Т. 5, № 3. - С. 43-56.

4. Имплантат-ассоциированные инфекции, связанные с проблемой биопленкообра- зования / Л. С. Бузолева, А. В. Пузь, С. Л. Синебрюхов, С. В. Гнеденков, А. В. Ким, А. И. Еськова, А. Л. Пономарева // Современные проблемы науки и образования. - 2016. - № 5. - С. 333.

5. Любченко, О. Д. Кинетика деградации антипролиферативного полимерного покрытия стентов в условиях in vitro / О. Д. Любченко, А. Д. Кручинина, А. Н. Шатров // Известия высших учебных заведений. Поволжский регион. Естественные науки. - 2015. - № 2 (10). - C. 55-61.

6. МУК 4.2.1890-04. Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам : метод. указания. - Москва : Федеральный центр госсанэпиднадзора Минздрава России, 2004. - 91 с.

7. ГОСТ Р ИСО 10993-2-2011. Изделия медицинские. Оценка биологического действия медицинских изделий. Часть 2. Требования к обращению с животными. - Москва : Стандартинформ, 2011. - 12 с.

8. ГОСТ Р ИСО 10993-6-2011. Изделия медицинские. Оценка биологического действия медицинских изделий. Часть 6. Исследование местного действия после имплантации. - Москва : Стандартинформ, 2011. - 30 с.

9. ГОСТ Р ИСО 10993-11-2011. Изделия медицинские. Оценка биологического действия медицинских изделий. Часть 11. Исследования общетоксического действия. - Москва : Стандартинформ, 2011. - 41 с.

10. Шихвердиев, Н. Н. Влияние местного применения ванкомицина на функцию органов после операций на сердце / Н.Н. Шихвердиев, Г.Г. Хубулава, С. П. Марченко, В. В. Суворов // Патология кровообращения и кардиохирургия. - 2015. - Т. 19, № 4. - С. 34-37.

11. Справочник. Физиологические, биохимические и биометрические показатели нормы экспериментальных животных / В.Г. Макаров, М.Н. Макарова. - Санкт- Петербург : ЛЕМА, 2013. - 116 с.

12. Войтенко, Н. Г. Вариабельность биохимических показателей крови и установление референсных интервалов в доклинических исследованиях. Сообщение 1: крысы / Н. Г. Войтенко, М. Н. Макарова, А. А. Зуева // Лабораторные животные для научных исследований. - 2020. - № 1. - С. 47-53.

References

1. Usol'tsev I. V., Leonova S. N., Nikiforov S. B., Pushkarev B. G. Sibirskiy meditsinskiy zhurnal [Siberian medical journal]. 2013, no. 4, pp. 18-21. [In Russian]

2. Pavlov V. V., Sadovoy M. A., Prokhorenko V. M. Travmatologiya i ortopediya Rossii [Traumatology and orthopedics in Russia]. 2015, no. 1 (75), pp. 116-128. [In Russian]

3. Shevchenko Yu. L., Stoyko Yu. M., Gritsyuk A. A., Kuz'min P. D., Papatsenko I. A., Sereda A. P. Vestnik Natsional'nogo mediko-khirurgicheskogo tsentra im. N. I. Pirogova [Bulletin of National Medical and Surgical Center named after N.I. Pirogov]. 2010, vol. 5, no. 3, pp. 43-56. [In Russian]

4. Buzoleva L. S., Puz' A. V., Sinebryukhov S. L., Gnedenkov S. V., Kim A. V., Es'kova A. I., Ponomareva A. L. Sovremennye problemy nauki i obrazovaniya [Modern issues of science and education]. 2016, no. 5, p. 333. [In Russian]

5. Lyubchenko O. D., Kruchinina A. D., Shatrov A. N. Izvestiya vysshikh uchebnykh zavedeniy. Povolzhskiy region. Estestvennye nauki [University proceedings. Volga region. Natural sciences]. 2015, no. 2 (10), pp. 55-61. [In Russian]

6. MUK 4.2.1890-04. Opredelenie chuvstvitel'nosti mikroorganizmov k antibakte- rial'nym preparatam: metod. ukazaniya [Determination of the microorganisms' sensitivity to antibacterial drugs: guidance]. Moscow: Federal'nyy tsentr gossanepidnadzora Minzdrava Rossii, 2004, 91 p. [In Russian]

7. GOST R ISO 10993-2-2011. Izdeliya meditsinskie. Otsenka biologicheskogo deystviya meditsinskikh izdeliy. Chast' 2. Trebovaniya k obrashcheniyu s zhivotnymi [Medical devices. Assessment of the biological effect of medical devices. Part 2. Requirements for handling animals]. Moscow: Standartinform, 2011, 12 p. [In Russian]

8. GOST R ISO 10993-6-2011. Izdeliya meditsinskie. Otsenka biologicheskogo deystviya meditsinskikh izdeliy. Chast' 6. Issledovanie mestnogo deystviya posle implantatsii [Medical devices. Assessment of the biological effect of medical devices. Part 6. The study of local action after implantation]. Moscow: Standartinform, 2011, 30 p. [In Russian]

9. GOST R ISO 10993-11-2011. Izdeliya meditsinskie. Otsenka biologicheskogo deystviya meditsinskikh izdeliy. Chast' 11. Issledovaniya obshchetoksicheskogo deystviya [Medical devices. Assessment of the biological effect of medical devices. Part 11. General toxicity studies]. Moscow: Standartinform, 2011, 41 p. [In Russian]

10. Shikhverdiev N. N., Khubulava G. G., Marchenko S. P., Suvorov V. V. Patologiya krovoobrashcheniya i kardiokhirurgiya [Circulatory pathology and cardiac surgery]. 2015, vol. 19, no. 4, pp. 34-37. [In Russian]

11. Makarov V. G., Makarova M. N. Spravochnik. Fiziologicheskie, biokhimicheskie i bio- metricheskie pokazateli normy eksperimental'nykh zhivotnykh [Reference book. Physiological, biochemical and biometric indicators of the norm of experimental animals]. Saint-Petersburg: LEMA, 2013, 116 p. [In Russian]

12. Voytenko N. G., Makarova M. N., Zueva A. A. Laboratornye zhivotnye dlya nauchnykh issledovaniy [Laboratory animals for scientific research]. 2020, no. 1, pp. 47-53. [In Russian]

Размещено на Allbest.ru