Прогностическое значение количественной оценки в-лимфоцитов в перитуморозной зоне рака почки

Вступление

Микроокружение опухолевых клеток интересует исследователей на протяжении последних десятилетий, изучение касается: тучных клеток [1-3]; макрофагов [4-6]; ангиогенеза[7, 8]и др.

В мировой литературе прогностическому значению В-лимфоцитов в перитуморозной зоне (ПЗ) злокачественных новообразований посвящены единичные исследования. Короткое выживание пациентов после оперативного лечения было ассоциировано с увеличением числа перитуморозных СБ20+ В-лимфоцитов при саркомах мягких тканей. При проведении многофакторного анализа высокое содержание СБ20+ лимфоцитов в ПЗ сарком мягких тканей явилось независимым фактором неблагоприятного прогноза [9].

Для распространенного плоскоклеточного рака легкого с метастазами было характерно возрастание числа СБ20+ лимфоцитов в ПЗ опухоли [10].

По данным М.А. Сенчуковой и соавт. (2015), ранние стадии рака желудка характеризовала невысокая очаговая плотность распределения СБ20+ В-лимфоцитов в ПЗ, которая не была связана с отдаленными результатами оперативного лечения, а наличие в ПЗ выраженных инфильтратов с множественными лимфоидными фолликулами из СБ20+ клеток ассоциировалось с диффузным типом рака желудка и плохим прогнозом [11]. Инфильтрация ПЗ В-лимфоцитами была взаимосвязана с распространенностью и размером опухолей. Так, О.Н. Томчук (2016) показала, что при раке желудка выраженные СБ20+ В-лимфоцитарные инфильтраты отмечали в ПЗ крупных карцином (>5 см) и при множественных метастазах [12].

При раке молочной железы высокой степени злокачественности численность СБ20+ В- лимфоцитов в ПЗ увеличивалась, при этом отмечали тенденцию к образованию фолликулоподобных структур без герминативных центров [13].

В ПЗ рака гортани плотность воспалительного инфильтрата была наибольшей в карциномах высокой степени злокачественности, при этом инфильтрат характеризовался большим количеством СБ20+ В-лимфоцитов с наличием фолликулоподобных образований [14].

Таким образом, работы, где было изучено прогностическое значение количественного содержания В-лимфоцитов в ПЗ злокачественных новообразований, немногочисленны, а исследований, посвященных количественному анализу В-лимфоцитов в ПЗ почечно клеточного рака (ПКР), в доступной литературе нами не обнаружено.

Целями исследования являлись проведение количественного анализа популяций В- лимфоцитов в ПЗ ПКР и выявление взаимосвязей с клинико-анатомическими факторами прогноза и 5-летней послеоперационной выживаемостью пациентов.

Материалы и методы исследования

Всего был изучен послеоперационный материал 53 больных ПКР. Мужчин было 28 (52,8%), женщин - 25 (47,2%). Возраст пациентов в среднем составил 56,7±1,2 года. Классификацию ПКР осуществляли в соответствии с классификацией ВОЗ 2016 г. [15]. Светлоклеточный рак был в 28 (52,8%) случаях, папиллярный рак - в 10 (18,9%) случаях, хромофобный рак - в 10 (18,9%) случаях и неклассифицируемый рак - в 5 (9,4%) случаях.

Пациентов с I клинической стадией (T1N0M0) в исследовании было 30 (56,6%); со стадией II (T2N0M0) - 6 (11,3%); со стадией III (T1N1M0, T2N1M0, T3N0M0, T3N1M0) - 10 (18,9%) и с IV стадией (T4N0M0, T4N1M0, ТлюбаяШМ1, ТлюбаяШюбаяМ1) - 7 (13,2%). Степень анаплазии по Фурману GI была в 21 опухоли (39,6%), GII - в 10 (18,9%) опухолях, GIII - в 11 (20,75%) опухолях и GIV - в 10 (20,75%) новообразованиях.

Опухолей без метастазов было 40 (75,5%), с метастазами - 13 (24,5%).

Размер новообразований в среднем составил 6,8±0,2 см.

Материал фиксировали в 10%-ном р-ре нейтрального формалина в течение 24 ч. B- лимфоциты выявляли иммуногистохимическим методом с помощью моноклональных мышиных антител к CD97a (клон HM47, Becton) по протоколу производителя. С помощью компьютерной морфометрической программы Image Tool. 3.0. при увеличении микроскопа х400 подсчитывали среднее количество B-лимфоцитов в 3 полях зрения в ПЗ карцином.

Статистическую обработку полученных данных проводили при помощи пакета Statistica 10.0. Если полученные цифровые данные имели нормальное распределение, то для оценки достоверности применяли t-test Стьюдента, а если данные не соответствовали нормальному распределению, то использовали U-тест Манна-Уитни или Колмогорова- Смирнова. Достоверными данные считали при р<0,05. Корреляционный анализ осуществляли расчетом коэффициента Пирсона.

Результаты исследования и их обсуждение

Результаты исследования позволили выявить, что без учета клинических и анатомических особенностей новообразований число B-лимфоцитов в ПЗ ПКР составило 55,7±6,9 в 3 полях зрения при большом увеличении микроскопа. Очаговая инфильтрация ПЗ В-лимфоцитами отмечалась в 47,2% случаев, диффузную инфильтрацию В-лимфоцитами выявляли в 13,2% случаев и диффузную инфильтрацию с образованием лимфоидных фолликулов определяли в 39,6% случаев.

При поиске корреляционных взаимосвязей выявлено, что с содержанием B- лимфоцитов в ПЗ были взаимосвязаны: стадия заболевания (r=0,62; p=0,0001); размер опухоли (r=0,58; p=0,0001); степень анаплазии по Фурману (r=0,64; p=0,0001); возникновение метастазов (r=0,30; p=0,03) и послеоперационная выживаемость пациентов (r=0,31; p=0,025). Не было обнаружено взаимосвязей с полом, возрастом больных и гистологическим вариантом опухолей (табл. 1).

Таблица 1. Корреляционные взаимосвязи содержания В-лимфоцитов в ПЗ с клинико-анатомическими особенностями карцином

Число В-лимфоцитов в ПЗ у мужчин было равно 60,4±8,3, у женщин - 50,9±11,2 (р=0,5) (табл. 2). У мужчин среднее число В-лимфоцитов в ПЗ составило 60,4±8,3, у женщин - 50,9±11,2 (р=0,5) (табл. 2). Очаговую инфильтрацию В-лимфоцитами в ПЗ у мужчин отмечали в 39,3% случаев, диффузную инфильтрацию - в 10,7% случаев, диффузную инфильтрацию с образованием лимфоидных фолликулов - в 50% случаев, а у женщин очаговую, диффузную и диффузную инфильтрацию с образованием лимфоидных фолликулов инфильтрацию отмечали в 56%, 16% и 28% случаев соответственно.

Возраст влиял на содержание В-лимфоцитов в ПЗ. Наибольшее содержание В- лимфоцитов в ПЗ отмечали в возрастной группе от 40 до 49 лет (73,7±17,5), а наименьшее - в возрасте от 30 до 39 лет (5,0±0,6) (табл. 2). При возрасте пациентов 30-39 лет в 100% случаев в ПЗ присутствовала очаговая инфильтрация В-лимфоцитами. При возрасте 40-49 лет очаговая инфильтрация В-лимфоцитами в ПЗ присутствовала в 50% случаев, диффузная инфильтрация - в 20% случаев и диффузная инфильтрация с образованием лимфоидных фолликулов - в 30% случаев.

На содержание В-лимфоцитов в ПЗ оказывал влияние гистологический тип опухоли. Наиболее высокое количество В-лимфоцитов в ПЗ было при неклассифицируемом раке (62,8±10,7), а наиболее низкое - при папиллярном раке - 5,6±0,6 (табл. 2). При неклассифицируемом раке в ПЗ в 100% случаев отмечали диффузную инфильтрацию с образованием лимфоидных фолликулов, а при папиллярном раке в 100% случаев присутствовала очаговая инфильтрация.

При ранних стадиях (1-11 стадия заболевания) количество В-лимфоцитов в ПЗ равнялось 15,05±1,08 (табл. 2). Очаговую инфильтрацию В-лимфоцитами в ПЗ при ранних стадиях отмечали в 69,4% случаев, диффузную инфильтрацию - в 8,4% случаев и диффузную инфильтрацию с образованием лимфоидных фолликулов - в 22,2% случаев. При Ш-ГУ стадии содержание В-лимфоцитов в ПЗ возрастало в 8,5 раза и составило 128,6±14,8 (табл. 2). При этом диффузная инфильтрация возрастала в 2,8 раза (до 23,5%), диффузная инфильтрация с образованием лимфоидных фолликулов - в 3,45 раза (до 76,5%), а очаговая инфильтрация отсутствовала.

При степени анаплазии карцином по Фурману О1-О11 содержание В-лимфоцитов в ПЗ составило 14,1±1,7, а при GШ-GГV оно было больше в 8,6 раза (табл. 2) (рис. 1а, 1б). Очаговую инфильтрацию В-лимфоцитами ПЗ карцином степени анаплазии GI-GП наблюдали в 75% случаев, диффузную - в 9,4% случаев и диффузную инфильтрацию с образованием лимфоидных фолликулов - в 15,6% случаев. Очаговая инфильтрация В-лимфоцитами в ПЗ при GШ-GГV степени анаплазии уменьшалась в 15,6 раза (4,8%), диффузная инфильтрация возрастала в 2,8 раза (до 19%) и диффузная инфильтрация с образованием лимфоидных фолликулов снижалась в 4,9 раза (до 76,2%).

Таблица 2. Плотность распределения В-лимфоцитов в ПЗ в зависимости от клинико-анатомических особенностей ПКР

Рис. 1. Экспрессия В-лимфоцитов в ПЗ ПКР: а - небольшое количество В-лимфоцитов в ПЗ при I степени анаплазии по Фурману, ув. х400; б - большое количество В-лимфоцитов в ПЗ при IV степени анаплазии по Фурману, ув. х400; в - диффузная инфильтрация ПЗ В- лимфоцитами при большом размере опухолевого узла, ув. х100; г - диффузная инфильтрация В-лимфоцитами с образованием лимфоидных фолликулов в ПЗ местнораспространенных карцином, ув. х100. Иммуногистохимическая окраска на СБ97а

У пациентов с локализованными опухолями количество B-лимфоцитов в ПЗ составило 42,1±7,9, а в ПЗ карцином с метастазами оно достоверно увеличивалось в 2,3 раза (табл. 2, рис. 1г). Очаговую инфильтрацию ПЗ B-лимфоцитами локализованных карцином наблюдали в 62,5% случаев, диффузную - в 5% случаев и диффузную инфильтрацию с образованием лимфоидных фолликулов - в 32,5% случаев. В ПЗ местнораспространенных карцином диффузная инфильтрация В-лимфоцитами возрастала в 7,7 раза (38,5%), диффузная инфильтрация с образованием лимфоидных фолликулов возрастала в 1,9 раза (до 61,5%), очаговая инфильтрация отсутствовала.

При проведении анализа 5-летней послеоперационной выживаемости больных по Каплану-Майеру обнаружено, что если число B-лимфоцитов в ПЗ было <56, то через 5 лет доля выживших была равна 0,84 (84%), а если содержание B-лимфоцитов в ПЗ было >56, то доля выживших снижалась до 0,54 (54%). Применение log-rank-критерия показало, что различия между кривыми выживания были достоверны (р=0,03) (рис. 2).

Рис. 2. Доля выживших пациентов через 5 лет наблюдения в зависимости от плотности распределения В-лимфоцитов в ПЗ карцином

Заключение

Список литературы