Изменение клеточной реакции слизистой ротовой полости при моделировании ревматоидного артрита

Abstract. The work is devoted to investigation of the effect of the use of immunomodulators and drugs that improve microcirculation on the oral mucosa in modeling rheumatoid arthritis. We studied material from experimental animals with modeling rheumatoid arthritis and visual assessment of the severity of induced paw arthritis and the surrounding area. The comparison group was formed from animals with simulated rheumatoid arthritis but without receiving any treatment. 3 study groups were formed: group which received applications which improve microcirculation (Quertigial which includes quercetin and hyaluronic acid), group which received applications which immunomodulators (Imudon) and group which received applications of their combination (Quertigial and Imudon). A group of intact animals was also further investigated. Tissues of the oral cavity were obtained with performing histological research. Systemic changes had been detected in the oral cavity withaccumulation of cell infiltrate, disturbance of the microvasculature, changes of the condition of the connective tissue with sclerosis. Cellular reaction was characterized by appearance of mainly lymphocytic foci, an increase in the relative volume of plasmocytes (8.42 times more) and lymphocytes (4.79 times more).

The application of the proposed treatment regimen allows improving microcirculation processes, decreasing the relative volume of fibrous connective tissue, decreasing the composition of cellular infiltrate by 4.21 times, normalizing the qualitative ratio of cellular elements, that can be considered as a manifestation of remission of the rheumatic process. Our data could be background to consider our combination of drugs as one of the possible pathogenetic way for correction the condition of the oral mucosa in rheumatoid arthritis.

Key words: rheumatoid arthritis, histology, experiment, oral cavity, mucosa.

Ревматоидный артрит (РА) является хроническим воспалительным аутоиммунным заболеванием, которое часто сочетается с развитием генерализованного пародонтита [3, 20, 24]. В тоже время имеются литературные данные свидетельствующие, что РА чаще встречается у больных пародонтитом. Следует сказать, что патогенез указанной взаимосвязи остается не выясненным [15, 17,]. Аутоиммунные процессы, по всей видимости, характеризуясь системностью поражения тканей организма, ведут к повреждению и тканей ротовой полости [3, 16,18]. При этом в морфогенезе повреждения тканей ротовой полости существенными процессами являются синовиальная гиперплазия и разрушение хряща и кости, пролиферация синовиоцитов, повышенная экспрессия внеклеточного матрикса, инфильтрация иммунных клеток и неоваскуляризация [13,14].

Исходя из вышесказанного, для профилактики и коррекции повреждений при РА видится целесообразным применение иммуномодуляторов и препаратов улучшающих микроциркуляцию тканей, в том числе ротовой полости [2, 11]. Можно констатировать, что такая комбинация, учитывая взаимосвязь между пародонтитом и ревматоидным артритом требует подбора сочетающихся препаратов, оправданность которых требует проводить экспериментальное изучение влияния предложенной терапии для создания механизмов первичной профилактики и патогенетически обоснованного лечения пациентов с РА, включая их клинические проявления в полости рта [10].

В связи с этим, мы посчитали возможным обратить внимание на кверцетин, биоактивный флавоноид с противовоспалительными, иммунодепрессивными и защитными свойствами, который является потенциальным агентом для лечения РА [6] и который может быть использован для предупреждения развития повреждения тканей ротовой полости. Кверцетин все чаще используется из-за неблагоприятного воздействия широко распространенного метотрексата на нервную, желудочно-кишечную, репродуктивную, дыхательную, мочевую, сердечно-сосудистую и иммунную системы [25].

В качестве иммуномодулятора нами выбран имудон, один из топических бактериальных лизатов [23], который представляет собой поливалентный антигенный комплекс -- смесь лизатов 13 штаммов бактерий и грибов, состав которого соответствует возбудителям, наиболее часто вызывающим воспалительные процессы в полости рта [23].

Учитывая все вышеизложенное, целью нашего исследования стало морфологическое изучение клеточной реакции слизистой ротовой полости при приведении иммуномодуляции ревматоидного артрита.

Материал и методы. Для морфологического изучения состояния тканей слизистой оболочки ротовой полости при РА с целью исключения влияния соматической патологии и влияния социальных факторов нами поставлен эксперимент. Экспериментальное исследование проведено на 32 животных (лабораторные белые мыши-самцы восьминедельного возраста). Моделирование РА осуществляли по методике Ikuo Kato [9] в модификации предложенной ранее [7, 26] с применением бычьего сывороточного альбумина (БСА) и пикрилхлорида. Мышей иммунизировали регулярным введением эмульсии 4 мг/мл 1:1 БСА с пикрилхлоридом. Животным вводили 0,1 мл эмульсии внутрикожно в спину и хвостовую часть. Начиная с 21 дня каждые 5 дней оценивали степень выраженности индуцированного артрита визуальной оценкой лап и прилегающей области. Отек лодыжек измеряли с помощью цифровых штангенциркулей. Каждую лапу оценивали по шкале от 0 до 4 следующим образом: 0 без видимых изменений; 1 - эритема и легкая припухлость; 2 - эритема и отек, распространяющийся на голеностопные суставы и один или два пальца ноги; 3 - эритема и отек, распространяющийся на плюсневые суставы и более двух пальцев; и 4 - анкилозирующая деформация с опуханием сустава. Баллы по каждой лапе были добавлены для получения совокупного балла от 0 до 16. Последнее (анкилозирующая деформация с опуханием сустава) не была получено ни у одного животного. Таким образом, животные со сформированным РА считались при наличии балов от 4 до 12. В дальнейшем животные были разбиты на 4 группы по 8 животных. Группа сравнения была сформирована из животных, у которых был смоделирован РА, и который не получали лечение. 3 исследуемые группы местно в течении 14 дней получали аппликации с препаратом Квертигиал (в состав которого входит кверцетин и гиалуроновая кислота), иммуностимулятором Имудон и их комбинацию. Также дополнительно была исследована группа интактных животных. Животных выводили из эксперимента методом цервикальной дислокации в соответствии с Европейской конвенцией по защите позвоночных животных (Страсбург, 18.03.1986), принципами украинского закона №3447-IV о защите животных от жестокого обращения.

После выведения мышей из эксперимента, ткани слизистой оболочки ротовой полости фиксировали в 10% формалине и после рутинной проводки изготовляли срезы, которые окрашивали гематоксилином и эозином, по ван Гизону.

Микропрепараты изучали на микроскопе “Olympus BX-41” с последующей обработкой программой “Olympus DP-soft version 3.2”, c помощью которой проводили морфометрическое исследование.

Статистическая обработка выполнена с использованием методов вариационной статистики. Соответствие распределения нормальному определяли по критерию Shapiro-Wilk's test, который показал, что выборки близки к нормальному распределению. Статистические показатели представлены в формате М±с, где M - средняя арифметическая величина, с - стандартное отклонение. Статистическая разница между исследуемыми показателями считалась достоверной при р меньше 0,05.

Результаты и их обсуждение. В доступной литературе сведения о влиянии степени тяжести РА, стадии его течения на состояние тканей ротовой полости обрывочны и противоречивы, в то время как такие знания могли бы быть существенным подспорьем в понимании необходимости разработки и создания профилактических мероприятий у лиц страдающих ревматоидным артритом. В результате проведенного эксперимента нами получено 28 животных у которых на основании визуальной оценки степени выраженности индуцированного артрита лап и прилегающей области сумма балов была от 4 до 12. Как было указано выше, у животных визуально были выявлены следующие изменения: эритема и легкая припухлость; эритема и отек, распространяющийся на голеностопные суставы и один или два пальца ноги; эритема и отек, распространяющийся на плюсневые суставы и более двух пальцев, в то время как анкилозирующей деформации с опуханием сустава нам достичь не удалось ни водном случае.

У всех отобранных животных изменения конечностей были равномерны, т.е. не было животных, у которых на одной конечности изменения соответствовали 0 балов, а на другой конечности 2 или более балов. Изменения всех четырех лап отличались не больше, чем на 1 бал. Принцип окончательного распределения животных по исследуемым группам представлен в табл. 1.

Таблица 1.

РАСПРЕДЕЛЕНИЕ ЖИВОТНЫХ ПО ИССЛЕДУЕМЫМ ГРУППАМ.

При осмотре ротовой полости группы животных с моделированным ревматоидным артритом слизистая оболочка бледная, уплотнена, очаговых изменений видимых тканей не выявлено.

При гистологическом исследовании всех групп в строении слизистой отмечается сходная микроскопическая картина. Слизистая ротовой полости покрыта многослойным плоскоклеточным неороговевающим эпителием за исключением поверхности десны. В группе животных не получавших лечение обращает на себя внимание неоднородная толщина плоскоклеточного эпителия, где наблюдаются с одной стороны участки его истончения до одного-двух рядов клеток, с другой стороны зоны неравномерного утолщения.

Во всех группах животных отмечается наличие воспалительных изменений, которые характеризуются как очаговыми, так и диффузными скоплениями клеток воспалительного ряда среди которых преобладают лимфоциты. При этом в группе животных, не получавших лечение, воспалительная инфильтрация наиболее выражена, в то время как в группе получавшей комбинацию Квертигиала и Имудон количество клеток минимально по сравнению с другими группами табл. 2). Следует сказать и о количественном изменении состава клеточного инфильтрата собственной пластинки слизистой (табл. 3).

В тех случаях, где воспалительная инфильтрация более выражена, отмечается повреждение эпителиальных клеток вплоть до появления единичных эрозивных дефектов. Клетки базального слоя с умеренно выраженными признаками гиперплазии. В собственной пластинке слизистой выявляются признаки склеротических процессов, хорошо выявляемые при окраске по ван Гизону.

Таблица 2