Исследование популяционного состава клеток, выделенных из биоптатов кожи человека и тканей ожоговой раны

Анализ особенностей термической травмы, которая занимает ведущее место по летальности среди других видов травм. Характеристика гипотезы о том, что в процессе заживления немаловажное значение имеет оценка состояния раневой поверхности ожоговой раны.

Рубрика Медицина
Вид статья
Язык русский
Дата добавления 15.07.2020
Размер файла 15,7 K

Отправить свою хорошую работу в базу знаний просто. Используйте форму, расположенную ниже

Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.

Размещено на http://www.allbest.ru/

ИССЛЕДОВАНИЕ ПОПУЛЯЦИОННОГО СОСТАВА КЛЕТОК, ВЫДЕЛЕННЫХ ИЗ БИОПТАТОВ КОЖИ ЧЕЛОВЕКА И ТКАНЕЙ ОЖОГОВОЙ РАНЫ

травма термический ожоговый заживление

А. Н. Харламова, О. В. Петракова И. Е. Гурманчук

Белорусский государственный медицинский университет,

г. Минск, РБ, www.nastya.kharlamova@ki.se

Термическая травма занимает ведущее место по летальности среди других видов травм. С учетом того, что состояние раны во многом определяется уровнем активности иммунной системы, нами была выдвинута гипотеза о том, что в процессе заживления немаловажное значение имеет оценка состояния раневой поверхности ожоговой раны, а также определение критических факторов сопряженных с эффективной и качественной репарацией.

Материалы и методы исследований. Для выделения лимфоцитов из интактных участков кожи, участков грануляции и гипергрануляции применяли классический способ, который подразумевает использование ферментов, а именно колагеназы, гиалуронидазы и ДНКазы. Материал (фрагмент кожи весом 0,5 грамм) погружали на 2 часа в раствор Хенкса, содержащий 2% эмбриональной телячьей сыворотки. Затем разрезали на мелкие фрагменты и помещали в раствор комплекса ферментов (коллагеназы, гиалуронидазы, ДНКазы I) в RPMI-1640 c 10% эмбриональной телячьей сыворотки и 2 мМ L-глутамина. После 18 часовой (10 часовой, в случае выделения клеток из участков грануляции/гипергрануляуии) инкубации, суспензию клеток отбирали и отмывали дважды в растворе Хенкса, содержащем 2% эмбриональной телячьей сыворотки. На заключительном этапе полученную суспензию клеток центрифугировали на градиенте Ficoll-Paque, полученные клетки отмывали, оценивали их количество, состав и жизнеспособность (с помощью 0,2% трипанового синего).

Исследование экспрессии поверхностных маркеров на выделенных клетках проводили на проточном цитометре Becton Dickinson FACSCalibur с использованием моноклональных антител меченых флюорохромом. Определяли следующие субпопуляции клеток: CD3бв, CD3д, CD4, CD8, HLA-DR, CD14, CD45.

Результаты исследований. Возможно как минимум три исхода заживления раны: нормальное, вялотекущее и с образованием гипертрофических рубцов. Участие иммунных факторов сопровождает все варианты заживления. При сбалансированном соотношении регенерации и воспаления происходит оптимальное заживление раны и образование грануляционной ткани. Исследование фенотипических характеристик полученных клеток показало (табл.1), что из участков грануляции на долю лейкоцитов (CD45) приходится около 83% от всех выделяемых клеток. Что касается субпопуляций Т-лимфоцитов, то на долю CD3бв приходится 36%, а на долю CD3д - 6%, цитотоксические лимфоциты составляют 3% от общей популяции лейкоцитов. При этом на долю CD14 приходится около 10%, а на клетки, экспрессирующие на своей поверхности HLA-DR лишь 2% от общей популяции лейкоцитов.

Таблица1. Популяционный состав клеток раневой поверхности и интактной кожи человека

Популяци-онный

состав клеток, %

Материал

Интакт-ная кожа

Участки грануляция

Участки гипергрануля-ции

CD45

14,0±0,08

*

82,5±0,6

**

74,8±1,67

***

CD3бв

12,3±0,99

*

35,3±2,06

40,0±2,04

***

CD3д?

10,1±0,78

*

7,3±0,75

**

2,6±0,22

***

CD8

12,1±0,86

*

2,9±0,5

**

20,0±0,41

***

CD14

8,5±3,28

11±1,68

8,5±3,23

HLA-DR

2,2±0,27

1,5±0,46

**

20,4±0,14

***

CD4

0,0±0,03

0,2±0,1

0,0±0,02

* - отличия достоверны между интактной кожей и грануляцией, р<0,05

** - отличия достоверны между грануляцией и гипергрануляцией, р<0,05

*** - отличия достоверны между интактной кожей и гипергрануляцией, р<0,05

Одним из вариантов патологического течения репаративного процесса является разрастание соединительной ткани и образование т.н. участков гипергрануляции, которая выдавливается на уровне окружающей кожи и фактически блокирует реэпителизацию. Гипергрануляция характеризуется высокой степенью содержания клеточных элементов и нарушением механизма апоптоза клеток. В ходе работы из участков с гипергрануляцией удалось обнаружить около 75,5% лейкоцитов (CD45) от общего количества всех выделенных клеток, из которых CD3бв составляли 40%, CD3д - 2,6%, на долю CD8 лимфоцитов приходится 20%, а на клетки, несущие на своей поверхности HLA-DR - 20,7%. Популяций лимфоцитов, экспрессирующих на своей поверхности CD4 молекулу не в участках грануляций не в участках гипергрануляций найдено не было (табл.1).

Что касается участков интактной кожи, то при фенотипировании клеток, показано, что на долю лейкоцитов (CD45) приходится около 14% от всех выделенных из биопатата кожи клеток. При этом около 12% составляют лимфоциты, несущие CD3бв. На долю же гд+ Т-лимфоцитов приходится около 10%, а на долю CD8 лимфоцитов приходится 12% от популяции лейкоцитов (табл.1).

Выводы

Таким образом, при «нормальном» процессе репарации с образованием грануляционной ткани, раневой инфильтрат характеризуется достаточно большим количеством лейкоцитов по сравнению с интактным участком кожи. Гипергрануляции характеризуются значительным увеличением количества клеток, экспрессирующих HLA-DR. В целом в составе инфильтратов участков гипергрануляций регистрировалось также большее количество цитотоксических лимфоцитов по сравнению с участками грануляционной ткани. А количество Т-лимфоцитов, имеющих TCR гд было значительно меньше чем в инфильтратах с грануляциями.

Дальнейшее изучение фенотипических и других параметров лейкоцитов, а также их соотношений в инфильтратах раны позволит прогнозировать течение репаративного процесса.

Размещено на Allbest.ru


Подобные документы

  • Обработка раны во избежание начала воспалительного процесса. Увеличение инфекционных осложнений вследствие обработки волосяного покрова опасной или безопасной бритвой. Хирургическая обработка раны. Механическая очистка раневой поверхности и дезинфекция.

    доклад [13,9 K], добавлен 18.06.2009

  • Рана – повреждение тканей и органов, которое возникает одновременно с нарушением целостности кожи и слизистых оболочек. Классические признаки и классификация ран. Принципы лечения, типы и условия заживления раны. Патофизиология раневого процесса.

    реферат [18,1 K], добавлен 16.01.2012

  • Показатели работы ожогового отделения Тольяттинской городской больницы. Причины, вызывающие ожоги у детей. Возрастная особенность ожоговой травмы. Современные перевязочные материалы, используемые при лечении пациентов. Первая помощь при ожоговой травме.

    презентация [6,1 M], добавлен 25.03.2019

  • Понятие ран как повреждения с нарушением целости кожи или слизистых оболочек. Причины ран, их классификация и виды. Осложнения, возникающие при ранениях. Этапы заживления, инфекция раны. Строение и признаки грамположительных и грамотрицательных бактерий.

    презентация [6,5 M], добавлен 03.04.2014

  • История лечения огнестрельных ран. Сквозные, пулевые раны мягких тканей. Методы предупреждения развития раневой инфекции. Раздробления костей, раны спины, груди, нанесенные мелкими осколками и пулей. Ошибки, допускаемые при хирургической обработке ран.

    реферат [30,6 K], добавлен 26.10.2014

  • Степени глубины поражения тканей при ожогах. Исследование периодов и клинических проявлений ожоговой болезни. Задачи лечебной физкультуры в периоды острой ожоговой токсемии и септикотоксемии. Клиническая картина отморожений. Методика ЛФК при отморожениях.

    презентация [1,1 M], добавлен 01.05.2016

  • Хирургическая обработка ран: виды, этапы. Неотложная помощь при ранениях. Виды раневой инфекции: классификация, местные и общие признаки, принципы лечения. Раневой процесс, его фазы и клинические проявления. Классификация и способы заживления ран.

    презентация [4,9 M], добавлен 21.04.2016

  • Классификация, клинические признаки и симптомы травм челюстно-лицевой области. Виды раны в зависимости от источника травмы и механизма. Причины детского травматизма. Ожоги лица и шеи. Признаки ушибов, ссадин и царапин у детей. Степени отморожения.

    презентация [797,2 K], добавлен 14.12.2016

  • Понятие раны. Особенности их классификации в зависимости от вида травмирующего фактора, по тяжести повреждений. Этапы развития раневой инфекции. Основы лечения современной огнестрельной раны, первичная и вторичная хирургическая обработка. Виды помощи.

    презентация [1,7 M], добавлен 19.06.2015

  • Понятие ожогов как повреждения тканей, вызванного воздействием термической, химической, электрической или лучевой энергии. Классификация ожогов по этиологии и локализации. Определение площади ожоговой поверхности. Оказание первой помощи, лечение.

    презентация [13,2 M], добавлен 28.03.2014

Работы в архивах красиво оформлены согласно требованиям ВУЗов и содержат рисунки, диаграммы, формулы и т.д.
PPT, PPTX и PDF-файлы представлены только в архивах.
Рекомендуем скачать работу.