Исследование популяционного состава клеток, выделенных из биоптатов кожи человека и тканей ожоговой раны
Анализ особенностей термической травмы, которая занимает ведущее место по летальности среди других видов травм. Характеристика гипотезы о том, что в процессе заживления немаловажное значение имеет оценка состояния раневой поверхности ожоговой раны.
Рубрика | Медицина |
Вид | статья |
Язык | русский |
Дата добавления | 15.07.2020 |
Размер файла | 15,7 K |
Отправить свою хорошую работу в базу знаний просто. Используйте форму, расположенную ниже
Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.
Размещено на http://www.allbest.ru/
ИССЛЕДОВАНИЕ ПОПУЛЯЦИОННОГО СОСТАВА КЛЕТОК, ВЫДЕЛЕННЫХ ИЗ БИОПТАТОВ КОЖИ ЧЕЛОВЕКА И ТКАНЕЙ ОЖОГОВОЙ РАНЫ
травма термический ожоговый заживление
А. Н. Харламова, О. В. Петракова И. Е. Гурманчук
Белорусский государственный медицинский университет,
г. Минск, РБ, www.nastya.kharlamova@ki.se
Термическая травма занимает ведущее место по летальности среди других видов травм. С учетом того, что состояние раны во многом определяется уровнем активности иммунной системы, нами была выдвинута гипотеза о том, что в процессе заживления немаловажное значение имеет оценка состояния раневой поверхности ожоговой раны, а также определение критических факторов сопряженных с эффективной и качественной репарацией.
Материалы и методы исследований. Для выделения лимфоцитов из интактных участков кожи, участков грануляции и гипергрануляции применяли классический способ, который подразумевает использование ферментов, а именно колагеназы, гиалуронидазы и ДНКазы. Материал (фрагмент кожи весом 0,5 грамм) погружали на 2 часа в раствор Хенкса, содержащий 2% эмбриональной телячьей сыворотки. Затем разрезали на мелкие фрагменты и помещали в раствор комплекса ферментов (коллагеназы, гиалуронидазы, ДНКазы I) в RPMI-1640 c 10% эмбриональной телячьей сыворотки и 2 мМ L-глутамина. После 18 часовой (10 часовой, в случае выделения клеток из участков грануляции/гипергрануляуии) инкубации, суспензию клеток отбирали и отмывали дважды в растворе Хенкса, содержащем 2% эмбриональной телячьей сыворотки. На заключительном этапе полученную суспензию клеток центрифугировали на градиенте Ficoll-Paque, полученные клетки отмывали, оценивали их количество, состав и жизнеспособность (с помощью 0,2% трипанового синего).
Исследование экспрессии поверхностных маркеров на выделенных клетках проводили на проточном цитометре Becton Dickinson FACSCalibur с использованием моноклональных антител меченых флюорохромом. Определяли следующие субпопуляции клеток: CD3бв, CD3д, CD4, CD8, HLA-DR, CD14, CD45.
Результаты исследований. Возможно как минимум три исхода заживления раны: нормальное, вялотекущее и с образованием гипертрофических рубцов. Участие иммунных факторов сопровождает все варианты заживления. При сбалансированном соотношении регенерации и воспаления происходит оптимальное заживление раны и образование грануляционной ткани. Исследование фенотипических характеристик полученных клеток показало (табл.1), что из участков грануляции на долю лейкоцитов (CD45) приходится около 83% от всех выделяемых клеток. Что касается субпопуляций Т-лимфоцитов, то на долю CD3бв приходится 36%, а на долю CD3д - 6%, цитотоксические лимфоциты составляют 3% от общей популяции лейкоцитов. При этом на долю CD14 приходится около 10%, а на клетки, экспрессирующие на своей поверхности HLA-DR лишь 2% от общей популяции лейкоцитов.
Таблица1. Популяционный состав клеток раневой поверхности и интактной кожи человека
Популяци-онныйсостав клеток, % |
Материал |
|||
Интакт-ная кожа |
Участки грануляция |
Участки гипергрануля-ции |
||
CD45 |
14,0±0,08* |
82,5±0,6** |
74,8±1,67*** |
|
CD3бв |
12,3±0,99* |
35,3±2,06 |
40,0±2,04*** |
|
CD3д? |
10,1±0,78* |
7,3±0,75** |
2,6±0,22*** |
|
CD8 |
12,1±0,86* |
2,9±0,5** |
20,0±0,41*** |
|
CD14 |
8,5±3,28 |
11±1,68 |
8,5±3,23 |
|
HLA-DR |
2,2±0,27 |
1,5±0,46** |
20,4±0,14*** |
|
CD4 |
0,0±0,03 |
0,2±0,1 |
0,0±0,02 |
* - отличия достоверны между интактной кожей и грануляцией, р<0,05
** - отличия достоверны между грануляцией и гипергрануляцией, р<0,05
*** - отличия достоверны между интактной кожей и гипергрануляцией, р<0,05
Одним из вариантов патологического течения репаративного процесса является разрастание соединительной ткани и образование т.н. участков гипергрануляции, которая выдавливается на уровне окружающей кожи и фактически блокирует реэпителизацию. Гипергрануляция характеризуется высокой степенью содержания клеточных элементов и нарушением механизма апоптоза клеток. В ходе работы из участков с гипергрануляцией удалось обнаружить около 75,5% лейкоцитов (CD45) от общего количества всех выделенных клеток, из которых CD3бв составляли 40%, CD3д - 2,6%, на долю CD8 лимфоцитов приходится 20%, а на клетки, несущие на своей поверхности HLA-DR - 20,7%. Популяций лимфоцитов, экспрессирующих на своей поверхности CD4 молекулу не в участках грануляций не в участках гипергрануляций найдено не было (табл.1).
Что касается участков интактной кожи, то при фенотипировании клеток, показано, что на долю лейкоцитов (CD45) приходится около 14% от всех выделенных из биопатата кожи клеток. При этом около 12% составляют лимфоциты, несущие CD3бв. На долю же гд+ Т-лимфоцитов приходится около 10%, а на долю CD8 лимфоцитов приходится 12% от популяции лейкоцитов (табл.1).
Выводы
Таким образом, при «нормальном» процессе репарации с образованием грануляционной ткани, раневой инфильтрат характеризуется достаточно большим количеством лейкоцитов по сравнению с интактным участком кожи. Гипергрануляции характеризуются значительным увеличением количества клеток, экспрессирующих HLA-DR. В целом в составе инфильтратов участков гипергрануляций регистрировалось также большее количество цитотоксических лимфоцитов по сравнению с участками грануляционной ткани. А количество Т-лимфоцитов, имеющих TCR гд было значительно меньше чем в инфильтратах с грануляциями.
Дальнейшее изучение фенотипических и других параметров лейкоцитов, а также их соотношений в инфильтратах раны позволит прогнозировать течение репаративного процесса.
Размещено на Allbest.ru
Подобные документы
Обработка раны во избежание начала воспалительного процесса. Увеличение инфекционных осложнений вследствие обработки волосяного покрова опасной или безопасной бритвой. Хирургическая обработка раны. Механическая очистка раневой поверхности и дезинфекция.
доклад [13,9 K], добавлен 18.06.2009Рана – повреждение тканей и органов, которое возникает одновременно с нарушением целостности кожи и слизистых оболочек. Классические признаки и классификация ран. Принципы лечения, типы и условия заживления раны. Патофизиология раневого процесса.
реферат [18,1 K], добавлен 16.01.2012Показатели работы ожогового отделения Тольяттинской городской больницы. Причины, вызывающие ожоги у детей. Возрастная особенность ожоговой травмы. Современные перевязочные материалы, используемые при лечении пациентов. Первая помощь при ожоговой травме.
презентация [6,1 M], добавлен 25.03.2019Понятие ран как повреждения с нарушением целости кожи или слизистых оболочек. Причины ран, их классификация и виды. Осложнения, возникающие при ранениях. Этапы заживления, инфекция раны. Строение и признаки грамположительных и грамотрицательных бактерий.
презентация [6,5 M], добавлен 03.04.2014История лечения огнестрельных ран. Сквозные, пулевые раны мягких тканей. Методы предупреждения развития раневой инфекции. Раздробления костей, раны спины, груди, нанесенные мелкими осколками и пулей. Ошибки, допускаемые при хирургической обработке ран.
реферат [30,6 K], добавлен 26.10.2014Степени глубины поражения тканей при ожогах. Исследование периодов и клинических проявлений ожоговой болезни. Задачи лечебной физкультуры в периоды острой ожоговой токсемии и септикотоксемии. Клиническая картина отморожений. Методика ЛФК при отморожениях.
презентация [1,1 M], добавлен 01.05.2016Хирургическая обработка ран: виды, этапы. Неотложная помощь при ранениях. Виды раневой инфекции: классификация, местные и общие признаки, принципы лечения. Раневой процесс, его фазы и клинические проявления. Классификация и способы заживления ран.
презентация [4,9 M], добавлен 21.04.2016Классификация, клинические признаки и симптомы травм челюстно-лицевой области. Виды раны в зависимости от источника травмы и механизма. Причины детского травматизма. Ожоги лица и шеи. Признаки ушибов, ссадин и царапин у детей. Степени отморожения.
презентация [797,2 K], добавлен 14.12.2016Понятие раны. Особенности их классификации в зависимости от вида травмирующего фактора, по тяжести повреждений. Этапы развития раневой инфекции. Основы лечения современной огнестрельной раны, первичная и вторичная хирургическая обработка. Виды помощи.
презентация [1,7 M], добавлен 19.06.2015Понятие ожогов как повреждения тканей, вызванного воздействием термической, химической, электрической или лучевой энергии. Классификация ожогов по этиологии и локализации. Определение площади ожоговой поверхности. Оказание первой помощи, лечение.
презентация [13,2 M], добавлен 28.03.2014