Оценка регенераторной способности тканей наружного слухового прохода и барабанной перепонки у пациентов с хроническим гнойным средним отитом

Размещено на http://www.allbest.ru/

ОЦЕНКА РЕГЕНЕРАТОРНОЙ СПОСОБНОСТИ ТКАНЕЙ НАРУЖНОГО СЛУХОВОГО ПРОХОДА И БАРАБАННОЙ ПЕРЕПОНКИ У ПАЦИЕНТОВ С ХРОНИЧЕСКИМ ГНОЙНЫМ СРЕДНИМ ОТИТОМ

И.И. ГОРНОСТАЙ1, Т.Э. ВЛАДИМИРСКАЯ2,

О.А. ЮДИНА3, Л.Г. ПЕТРОВА4

1 2 ГУ «РНПЦ оториноларингологии»; НИЛ БелМАПО;

3ГУ РКМЦ Управделами Президента Республики Беларусь; 4ГУО «БелМАПО»

Минск, Республика Беларусь

ОЦІНКА РЕГЕНЕРАТОРНОЇ ЗДАТНОСТІ ТКАНИН ЗОВНІШНЬОГО СЛУХОВОГО ПРОХОДУ І БАРАБАННОЇ ПЕРЕТИНКИ У ХВОРИХ НА ХРОНІЧНИЙ ГНІЙНИЙ СЕРЕДНІЙ ОТИТ

1Горностай І.І., 2Владімірская Т.Е., 3Юдіна О.А., 4Петрова Л.Г.

1ДУ «РНПЦ оториноларингологи»;2НДЛ«БелМАПО»; 3ДУ РКМЦ справами Президента Республіки Білорусь;

3ДУО «БелМАПО»; Мінськ, Республіка Білорусь

Анотація

Актуальність: Відзначено, що стан шкіри, кістки зовнішнього слухового проходу, залишків барабанної перетинки, тобто тканин, з яких трансплантат повинен спочатку отримувати живлення, багато в чому визначає результат тимпанопластики.

Метою даної роботи стало проведення оцінки регенераторної здатності тканин зовнішнього слухового проходу і барабанної перетинки у пацієнтів з хронічним гнійним середнім отитом.

Матеріали і методи: проведено дослідження міграційної здатності тканин зовнішнього слухового проходу і барабанної перетинки у 98 пацієнтів з хронічним гнійним середнім отитом. Всім пацієнтам перед операцією виконувався тест з фарбуванням барабанної перетинки і шкіри зовнішнього слухового проходу. В ході тимпанопластики у пацієнтів виконувався забір фрагментів шкіри зовнішнього слухового проходу в кістковій частині і залишків барабанної перетинки для імуногістохімічного дослідження (ІГХІ).

Кількісна оцінка експресії біомолекулярних маркерів проводилась шляхом аналізу цифрового зображення, отриманого за допомогою мікроскопа Leica DMLS з програмним забезпеченням (Німеччина) і цифровою камерою JVC (при збільшенні в 200 разів і мінімальній кількості полів зору 5 в кожному мікро- препараті), з використанням алгоритму «positive pixel count» і програми для морфометрії Aperio Image Scope.

Результати: відзначено, що у випадках, коли перфорація не закривалася, була порушена міграційна здатність тканин. Встановлено кореляцію між регенераторною здатністю епітелію шляхом визначення тканинних біомаркерів і міграційною здатністю епітелію барабанної перетинки і шкіри зовнішнього слухового проходу. При позитивному тесті з фарбуванням відзначається високий рівень EGF, що свідчить про хорошу регенераторну здатність; при негативному тесті з фарбуванням відзначається низький рівень EGF. Стан міграційної здатності епітелію зовнішнього слухового проходу і барабанної перетинки можуть опосередковано свідчити про регенераторну здатність тканин і впливати на результат тимпанопластики. Тест з фарбуванням може служити прогностичним критерієм результату тимпанопластики, так як оцінює стан регенераторної здатності епітелію зовнішнього слухового проходу і барабанної перетинки.

Ключові слова: тимпанопластика, міграційна здатність, тест з фарбуванням.

EVALUATION OF THE REGENERATIVE CAPACITY OF THE TISSUES OF THE EXTERNAL AUDITORY CANAL AND TYMPANIC MEMBRANE IN PATIENTS WITH CHRONIC OTITIS MEDIA

1Gornostay I, 2 Vladimirskaya T., 3Yudina O, 4Petrova L.

Republican scientific and practical centre of otorhinolaryngology;

2 Scientific and Research Laboratory of BelMAPE 3Republican Clinical Medical Center of the Office of the President of the Republic of Belarus;

4Belarusian Medical Academy of Postgraduate Education Minsk, Republic of Belarus

Abstract

Relevance: It is noted that the condition of the skin, the external auditory canal bone, the eardrum residues, that is, the tissues, from which the graft must first receive nutrition, largely determine the myringoplasty result.

Purpose: to assess the regenerative ability of the external auditory canal and tympanic membrane tissues in patients with chronic otitis media.

Materials and Methods: The migration ability of the external auditory canal and tympanic membrane tissues study was carried out in 98 patients with acute tympanic membrane perforation using a tissue staining test. In patients with chronic otitis media the staining test was performed before the operation. The external auditory canal skin in the bone part and the tympanic membrane residues were taken in patients of all groups in myringoplasty for immunohistochemistry.

The quantitative assessment of the biomolecular markers expression was performed by the digital image analyzing. It was obtained by a Leica DMLS microscope with software (Germany) and a JVC digital camera (the magnification of 200 times and a minimum number of view fields 5 in each microslide) using «positive pixel count» and morphometry software Aperio Image Scope.

Results: It was noted that in cases where the perforation was not closed, the migration ability of the tissues was impaired. A correlation was established between the regenerative ability of the epithelium by determining tissue biomarkers and migration ability. A high EGF level indicates a good regenerative ability and a positive test with staining. A low EGF level is noted in a negative test with staining. The state of the migratory ability of the external auditory canal epithelium and the tympanic membrane epithelium may indirectly indicate the regenerative ability of tissues and affect the tympanoplasty result. The staining test can serve as a prognostic criterion for the myringoplasty result, because it evaluates the regenerative ability state of the external auditory canal epithelium and eardrum epithelium.

Keywords: myringoplasty, migration ability, staining test.

В литературе описано множество причин неудачных исходов тимпанопластики. [3, 4, 6, 7, 10, 18]. По данным ряда авторов, неудовлетворительные результаты составляют от 10 до 30% [1, 5, 11, 12, 15, 17]. Отмечено, что состояние кожи, кости наружного слухового прохода, остатков барабанной перепонки - тканей, из которых трансплантат должен изначально получать питание, во многом определяет результат тимпанопластики. Под состоянием тканей следует понимать развитость сосудистого русла, способность к регенерации. Нами было высказано предположение, что состояние миграционной способности эпителия наружного слухового прохода и барабанной перепонки могут косвенно свидетельствовать о регенераторной способности тканей и влиять на результат тимпанопластики [2]. Для определения миграционной способности нами был проведен тест с окрашиванием наружного слухового прохода [2]. Для доказательства связи миграции эпителия и его регенераторной способности проведено исследование тканевыхмолекулярно биологических маркеров.

Клеточные или тканевые молекулярно-биологические маркеры определяются непосредственно в ткани. Большинство из них характеризуют определенные биологические особенности ткани, специфику ее регуляции, могут быть использованы для дифференциальной диагностики заболеваний, также могут помочь в прогнозировании исхода заболевания и в индивидуализации лекарственного лечения. Одним из аспектов практического использования результатов изучения молекулярнобиологических маркеров может быть разработка новых препаратов, направленно воздействующих на эти молекулы и блокирующих регулируемые ими процессы. Этот подход особенно актуален тогда, когда исследуемый маркер имеет непосредственное отношение к регуляции пролиферации клеток или их восстановления при повреждении.

Механизмы регуляции восстановительных процессов в эпидермисе осуществляются под контролем цитокинов, относящихся к группе ростовых факторов. Ростовые факторы представляют собой эндогенные сигнальные молекулы, которые регулируют клеточные реакции на процесс заживления ран. Как только факторы роста секретируются, они действуют через ау- токринные, паракринные или эндокринные механизмы, связываясь с мембранными или цитоплазматическими рецепторами [20]. Связывание с рецепторами приводит к каскаду событий, которые активируют клеточный механизм для облегчения заживления ран. Даже при низких концентрациях факторы роста могут оказывать заметное влияние на микроокружение раны, приводя к быстрому увеличению клеточной миграции, пролиферации и дифференцировки [14]. В исследованиях, посвященных анализу незаживающих острых и хронических ран, была продемонстрирована дерегуляция нескольких факторов роста (например, фактора роста тромбоцитов (PDGF), фактора роста эндотелия сосудов (VEGF), фактора роста фибробластов (FGF), эпидермального фактора роста (EGF)) [9, 14, 16, 19]. Семейство факторов роста EGF способствует реэпителизации путем стимуляции пролиферации и миграции кератино- цитов, отвечает за повышение прочности на растяжение новой кожи [8, 20]. Белки EGF секретируются фибробластами, тромбоцитами и макрофагами и локализуются по всему эпидермису, особенно в его базальном слое [13]. Совсем недавно было обнаружено, что в хронических ранах наблюдается снижение уровня EGF [20], что, вероятно, связано с повышением уровня матриксных металлопротеиназ в местах хронического воспаления. Эти протеиназы препятствуют заживлению ран, осуществляя быстрый протеолиз факторов роста. Таким образом, снижение уровня EGF в ткани является признаком угнетения регенерационной способности тканей эпидермиса и одной из причин хронизации воспалительного процесса.

Материалы и методы

Проведен анализ историй болезней 98 пациентов с хроническим туботимпанальным средним отитом (2007-2017 гг.), которым предстояла тимпанопластика 1 -го типа. Возраст пациентов составлял от 25 до 35 лет. Сопутствующая соматическая патология и стрессовые факторы у данной группы отсутствовали. Хронических заболеваний других ЛОР-органов не отмечалось. Слуховая труба проходима. Методом исследования проходимости евстахиевой трубы являлся опыт Вальсальвы, функция среднего уха определялась на аппарате Interacoustics АТ235. Со стороны полости носа и носоглотки патологических изменений не визуализировалось. Носовое дыхание свободное. Общие анализы крови и мочи - в пределах нормы. Длительность заболевания составляла от 1 года до 20 лет, обострений отита не было минимум 2 года. Определялась смешанная тугоухость 2-й степени. При отоскопии визуализировалась центральная субтотальная перфорация, патологического отделяемого не отмечалось.

Операция выполнялась одним хирургом. В качестве трансплантата использовался раздавленный хрящ толщиной 0,5 мм. Всем пациентам перед операцией выполнялся тест с окрашиванием. Для окрашивания использовался ушной зонд с навивкой. На зонд накручивалась вата, затем он смачивался раствором бриллиантового зеленого. Краситель равномерно, до полного окрашивания, наносили на остатки барабанной перепонки и костные стенки наружного слухового прохода. Всем пациентам проводилась отомикроскопия (увеличение 1,6) на 10; 20-21; 26-27; 31-40-е сутки. Ранее такой же тест с окрашиванием проводился пациентам с закрывшимися и не закрывшимися посттравматическими перфорациями барабанной перепонки. Сроки очищения красителя у этих групп пациентов отличались. Сроки очищения от красителя у пациентов с закрывшейся перфорацией были приняты за норму [2]. Они представлены в табл. 1. В том случае, если сроки очищения от красителя укладывались в показатели «нормы», результат теста считался положительным, если нет - отрицательным.

Сроки наблюдения в динамике и характер очищения от красителя барабанной перепонки и кожи наружного слухового прохода у пациентов с хроническим тубо- тимпанальным средним отитом представлены в табл. 2 и 3.

У 68 пациентов тест с окрашиванием был положительный, у 30 - отрицательный. Все пациенты после тимпанопластики были осмотрены через 6 мес. У группы пациентов с положительным результатом теста перфорация отсутствовала у 65 человек (95,58%), в группе с отрицательным тестом - у человек (6,66%). У 28 пациентов с отрицательным тестом перед операцией и наличием перфорации в барабанной перепонки после операции выполнялся повторный тест с окрашиванием. У всех пациентов данной группы результат теста с окрашиванием был отрицательным. Пациентам данной группы проводилось лечение, направленное на улучшение регенераторной способности эпителия барабанной перепонки и кожи наружного слухового прохода. После лечения проводилась повторная тимпанопластика. В ходе тимпанопластики у пациентов с хроническим ту- ботимпанальным средним отитом производили забор фрагментов кожи наружного слухового прохода в костной части и остатков барабанной перепонки для иммуногистохимического исследования (ИГХИ).

Характеристика использованного в исследовании первичного антитела представлена в табл. 4.

Для ИГХИ окрашивания срезы депа- рафинировались в ксилоле, использовались 2 смены по 10-15 мин. в каждой. Далее срезы регидратировались в спиртах восходящей концентрации, использовались 2 смены по 10-15 мин. в каждой с последующим промыванием в дистиллированной воде. Демаскировка антигенов выполнялась в печи СВЧ в 0,01 М цитратном буфере (рН 6,0) в течение 10 мин. или на водяной бане примерно 40 мин., буфер предварительно нагревался для демаскировки. После окончания обработки препараты остывали в растворе при комнатной температуре не менее 15-20 мин. Эндогенная пероксидаза блокировалась 3% перекиси водорода в течение 20 мин. Инкубация с первичными антителами проводилась во влажной камере примерно 1 час при комнатной температуре или 24 ч при температуре 12°С. Инкубация срезов с визуализирующей системой с предварительно внесённым достаточным количеством конъюгата (HRP polymerconjugate) проводилась около 60 мин. при комнатной температуре. В качестве системы визуализации использовалась Expose Mouse and Rabbit Specific HRP/DAB Detection IHC Kit (Abcam), содержащая комплекс вторичных антител и хромоген диаминобензидин (ДАБ). Далее на срезы наносился хромоген диаминобензидин (ДАБ) в концентрации 1мг/мл с добавлением 0,02% раствора перекиси водорода. Время инкубации считали достаточным, если структуры, подлежащие окрашиванию, приобретали ярко-золотистокоричневый цвет, в то время как фоновое окрашивание отсутствовало. После каждой процедуры срезы споласкивали в нескольких сменах фосфатно-солевого буфера (PBS). Препараты помещали в ксилол на 1 мин., докрашивали гематоксилином Харриса и заключали в «канадский бальзам». Для контроля активности первичных антител (исключение ложноположительных и ложноотрицательных результатов) в каждой серии проводилось 1 отрицательное и 1 положительное контрольное окрашивание. Для получения негативного контроля срезы вместо инкубации с первичным антителом покрывались 1% раствором бычьего сывороточного альбумина. Для позитивного контроля исследовались препараты кожи.

Количественная оценка экспрессии биомолекулярных маркеров выполнялась путем анализа цифрового изображения, полученного с помощью микроскопа Leica DMLS с программным обеспечением (Германия) и цифровой камерой JVC (при увеличении в 200 раз и минимальном количестве полей зрения 5 в каждом микропрепарате), с использованием алгоритма «positive pixel count» и программы для морфометрии Aperio Image Scope. Результатом проведенного анализа являлись данные о распространенности и интенсивности коричневой окраски продуктов реакции ДАБ (красные поля - выраженная экспрессия, оранжевые - умеренно-выраженная, желтые - слабовыраженная, синяя и белая окраска - отсутствие экспрессии). В дальнейшем индекс экспрессии (ИЭ) EGF рассчитывался по формуле:

число позитивных пикселей

ИЭ =100

общее число пикселей

Статистическая обработка результатов исследования проводилась с использованием пакета статистических программ «SPSS Statistics v.22». Для проверки нормальности распределения данных использовались метод Колмогорова-Смирнова, а также показатели эксцесса и асимметрии. Различия между выборками оценивались с использованием U-теста Манна-Уитни. Представление результатов: Me (медиана) - значение, справа и слева от которого на оси значений признака располагаются равные количества значений признака данной выборки; 25; 75 процентиль. Достоверным считалось различие при уровне значимости р< 0,05.

Результаты

Экспрессия EGF была представлена окрашиванием различной степени интенсивности - от светло коричневого до темно коричневого окрашивания поверхностных слоев эпидермиса (рис. 1-4). В группе удовлетворительной миграции отмечалось преимущественно выраженное линейногранулярное окрашивание базального слоя и умеренно выраженное - блестящего и зернистого слоев эпидермиса (рис. 2). Слабо или умеренно окрашивалась цитоплазма фибробластов соединительной ткани наружного слухового прохода и барабанной перепонки всех исследуемых групп.

Выявлены статистически значимые различия в уровне экспрессии EGF между группой удовлетворительной миграции и неудовлетворительной миграции (табл. 4). При удовлетворительной миграции эпидермиса в наружном слуховом проходе экспрессия EGF увеличивается (р<0,05).

Размещено на http://www.allbest.ru/

Проведенные исследования показали, что у пациентов с удовлетворительной миграцией эпидермиса наблюдается высокий уровень экспрессии EGF и, напротив, EGF статистически значимо (р< 0,05) снижена у пациентов с низкой регенераторной активностью (неудовлетворительная миграция).

Выводы

Состояние миграционной способности эпителия наружного слухового прохода и барабанной перепонки косвенно свидетельствуют о состоянии регенераторной способности этих тканей.

Тест с окрашиванием может служить прогностическим критерием результата тимпанопластики, так как оценивает состояние регенераторной способности эпителия наружного слухового прохода и барабанной перепонки.

Применение теста с окрашиванием экономически обосновано, так как стоимость данного теста не сопоставима с таковой при проведении иммуногистохимического исследования.

перепонка барабанный отит хронический

Литература

Борисова КЗ. Причины неудач тимпанопластики и профилактика осложнений. Материалы Российской научно-практич. конф. оториноларингологов «Проблемы и возможности микрохирургии уха». 2002: 44-6.

Горностай ИИ, Петрова ЛГ. Оценка миграции эпидермиса барабанной перепонки и наружного слухового прохода при хирургическом лечении хронических туботимпанальных средних отитов. Оторинолар. Вост. Евр. 2019;9(1):67-74.

Едрев Г. Функциональные результаты тимпанопластики с использованием аутохряща. Вестн. оториноларингологии. 1989;(5):49-51.

Патякина OK. Функциональная хирургия при хронических средних отитах. Материалы Российской научно-практич. конф. оториноларингологов. 2005:25-8.

Семенов ФВ, Волик АК. К вопросу о тактике хирургического лечения больных хроническим гнойным средним отитом при различных формах патологического процесса в среднем ухе. Вестн. оториноларингологии. 1998;(5):15-7.

Ситников ВП, Бизунков АБ, Хусам ЭР. Динамика акустических свойств двухслойного трансплантата в различные сроки после мирин- гопластики. Вестн. оториноларингологии. 1998;(3):21-2.

Ситников ВП, Кин ТИ. Мирингопластика у лиц с обширными дефектами барабанных перепонок (методические рекомендации). Моск- ва;1990. 22 с.

Brown G, Curtsinger L, White M, Mitchell R, Pietsch J, Nordquist R, et al. Acceleration of tensile strength of incisions treated with EGF and

TGF-beta. Ann Surg. 1988 Dec;208(6):788-94. doi: 10.1097/00000658-198812000-00019.

Brown L, Yeo K, Berse B, Yeo T, Senger D, Dvorak H, et al. Expression of vascular permeability factor (vascular endothelial growth factor) by epidermal keratinocytes during wound healing. J Exp Med. 1992 Nov 1;176(5):1375-9. doi: 10.1084/jem. 176.5.1375.

Chang CY, Gray LC. Pressed scar tissue for tym

panic membrane grafting in revision tympanoplasty. Otolaryngol Head Neck Surg. 2005 Jan;132(1):30-6.doi:

10.1016/j.otohns.2004.09.086.

Fayad J, Baino T, Parisier S. Preliminary results

with the use of AlloDerm in chronic otitis media. Laryngoscope. 2003Jul;113(7):1228-30. doi:

10.1097/00005537-200307000-00022.

Kotecha B, Fowler B, Topham J. Myringoplasty: a prospective audit study. Clin Otolaryngol Allied Sci. 1999 Apr;24(2):126-9.

Nanney L, Magid M, Stoscheck C, King L. Comparison of epidermal growth factor binding and receptor distribution in normal human epidermis and epidermal appendages. J Invest Dermatol. 1984 Nov;83(5):385-93.

Park J, Hwang S, Yoon I. Advanced growth factor delivery systems in wound management and skin regeneration. Molecules. 2017 Jul 27;22(8). pii: E1259. doi: 10.3390/molecules22081259.

Perkins R, Bui H. Tympanic membrane reconstruction using formaldehyde-formed autogenous temporalis fascia: twenty years experience. Otolaryngol Head Neck Surg. 1996 Mar;114(3):366-79. doi: 10.1016/S0194-59989670205-X.

Powers C, McLeskey S, Wellstein A. Fibroblast growth factors, their receptors and signaling. En- docr Relat Cancer. 2000 Sep;7(3):165-97.

Sarac S, Curse S. Use of homograft diehydrated temporal fascia in tympanoplasty. Otol Neurotol. 2002 Jul;23(4):416-21.

Tos M., Everberg G., Henrichsen J. Autologous tissue seal in myringoplasty. Laryngoscope. 1987 Mar;97(3 Pt 1):370-1.

Trengove N, Bielefeldt-Ohmann H, Stacey M. Mitogenic activity and cytokine levels in non-healing and healing chronic leg ulcers. Wound Repair Regen. 2000 Jan-Feb;8(1):13- 25.

Yamakawa S, Hayashida K. Advances in surgical applications of growth factors for wound healing. Burns Trauma. 2019 Apr 5;7:10. doi: 10.1186/s41038-019-0148-1.

References

Borisova K. [Causes of tympanoplasty failure and the prevention of complications]. Russian Scientific and Practical conference of Otolaryngologists «Problems and possibilities of the ear microsurgery». 2002: 44-6. [Article in Russian].

Gornostaj I, Petrova L. [The epidermal migration assessment of the eardrum and external auditory canal in the surgical treatment of chronic tubotym- panal otitis media]. Otorinolaryngology. Eastern Europe. 2019;9(1):67-74. [Article in Russian].

Еdrev G. [Functional results of tympanoplasty with the use of autocartilage]. Vestn Otorinolarin- gol. 1989;(5):49-51. [Article in Russian].

Patyakina O. [Functional surgery of the chronic otitis media]. Russian Scientific and Practical conference of Otolaryngologists. 2005:25-8. [Article in Russian].

Semenov F, Volik A. [To the question of the surgical treatment tactics of patients with chronic suppurative otitis media in various forms of the pathological process in the middle ear]. Vestn Otori- nolaringol. 1998;(5):15-7. [Article in Russian].

Sitnikov V, Bizunkov A, Khysam E. [Dynamics of acoustic properties of double-layer graft in different terms after myringoplasty]. Vestn Otorinola- ringol. 1998;(3):21-2. [Article in Russian].

Sitnikov V., fвn T. [Large defects of the tympanic membranes myringoplasty (methodical recommendations)]. Мoscow; 1990. 22 p. [In Russian].

Brown G, Curtsinger L, White M, Mitchell R, Pietsch J, Nordquist R, et al. Acceleration of tensile strength of incisions treated with EGF and TGF-beta. Ann Surg. 1988 Dec;208(6):788-94. doi: 10.1097/00000658-198812000-00019.

Brown L, Yeo K, Berse B, Yeo T, Senger D, Dvorak H, et al. Expression of vascular permeability factor (vascular endothelial growth factor) by epidermal ke- ratinocytes during wound healing. J Exp Med. 1992;176(5):1375-9. doi: 10.1084/jem.176.5.1375.

Chang CY, Gray LC. Pressed scar tissue for tympanic membrane grafting in revision tympanoplasty. Otolaryngol Head Neck Surg. 2005;132(1):30- 6. doi: 10.1016/j.otohns.2004.09.086.

Fayad J, Baino T, Parisier S. Preliminary results

with the use of AlloDerm in chronic otitis media. Laryngoscope. 2003Jul;113(7):1228-30. doi:

10.1097/00005537-200307000-00022.

Kotecha B, Fowler B, Topham J. Myringoplasty: a prospective audit study. Clin Otolaryngol Allied Sci. 1999 Apr;24(2):126-9.

Nanney L, Magid M, Stoscheck C, King L. Comparison of epidermal growth factor binding and receptor distribution in normal human epidermis and epidermal appendages. J Invest Dermatol. 1984 Nov;83(5):385-93.

Park J, Hwang S, Yoon I. Advanced growth factor delivery systems in wound management and skin regeneration. Molecules. 2017 Jul 27;22(8). pii: E1259. doi: 10.3390/molecules22081259.

Perkins R, Bui H. Tympanic membrane reconstruction using formaldehyde-formed autogenous temporalis fascia: twenty years experience. Otolaryngol Head Neck Surg. 1996 Mar;114(3):366-79. doi: 10.1016/S0194-59989670205-X.

Powers C, McLeskey S, Wellstein A. Fibroblast growth factors, their receptors and signaling. En- docr Relat Cancer. 2000 Sep;7(3):165-97.

Sarac S, Curse S. Use of homograft diehydrated temporal fascia in tympanoplasty. Otol Neurotol. 2002 Jul;23(4):416-21.

Tos M., Everberg G., Henrichsen J. Autologous tissue seal in myringoplasty. Laryngoscope. 1987 Mar;97(3 Pt 1):370-1.

Trengove N, Bielefeldt-Ohmann H, Stacey M. Mitogenic activity and cytokine levels in nonhealing and healing chronic leg ulcers. Wound Repair Regen. 2000 Jan-Feb;8(1):13-25.

Yamakawa S, Hayashida K. Advances in surgical applications of growth factors for wound healing. Burns Trauma. 2019 Apr 5;7:10. doi: 10.1186/s41038-019-0148-1.

Размещено на Allbest.ru