² НИИ фармакологии ТНЦ СО РАМН, г. Томск

Поветьева Т.Н.2, Новожеева Т.П.2, Коршунова Н.Е.2

Материалом для изучения послужили листья лопуха войлочного, которые были заготовлены в окрестностях г. Томска на заброшенных сельскохозяйственных полях в период цветения в июле 1998 и 1999 гг.

Фармакологические исследования проводили на белых беспородных мышах массой 20--25 г (по 6 животных в каждой группе), полученных из коллекционного фонда отдела экспериментальных биологических моделей ТНЦ СО РАМН (г. Томск) (животные сертифицированы).

С целью изучения ранозаживляющих свойств мышам под эфирным наркозом наносили кожное повреждение в виде лоскутной раны (средний диаметр раны -- 10 мм). Для моделирования длительного заживления струпы периодически снимали. Острое асептическое воспаление вызывали субплантарным введением мышам 1%-го раствора каррагенина в дозе 0,05 мл. Обезболивающее действие изучали на модели уксусных корчей, индуцированных внутрибрюшинным введением мышам 0,75%-го раствора уксусной кислоты [6].

Содержание животных осуществлялось в соответствии с правилами, принятыми Европейской конвенцией по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и научных целей (г. Страсбург, 1986).

Результаты исследований обрабатывались методами непараметрической и параметрической статистики. Различия считались достоверно значимыми при р_u < 0,05 и p_t < 0,05 для количественных характеристик (метод Вилкоксона--Манна--Уитни и метод Стьюдента соответственно) [2].

Нормативные показатели экстрактов определяли по требованиям Государственной фармакопеи СССР (1989). Экстракт листьев жидкий (1 : 1) получали методом противоточного многоступенчатого экстрагирования, используя в качестве растворителя 25-, 40- и 70%-й этанол. Жидкие экстракты стандартизовали по сухому остатку, содержанию этанола, плотности, наличию примесей тяжелых металлов [1]. Для получения сухого экстракта растворитель удаляли под вакуумом и сушили при температуре 60 С до остаточной влажности, не превышающей 5%. Стандартизацию проводили по содержанию влаги, тяжелых металлов согласно требованиям нормативной документации [1]. Для обоснования состава и технологии изготовления таблеток из сухого экстракта на 70%-м этаноле были изучены технологические свойства порошка: пористость, насыпная масса, фракционный состав, сыпучесть, угол естественного откоса. Для изготовления таблеток использовали метод влажной грануляции. При разработке прописи таблеток применяли такие вспомогательные вещества, как аэросил, молочный сахар, магния стеарат.

Результаты и обсуждение

При фармакологических испытаниях в первой серии экспериментов исследовали ранозаживляющую активность. Беспородные мыши-самки, используемые в эксперименте, получали сухой экстракт листьев 70 (экстракция 70%-м этанолом), сухой экстракт листьев 40 (экстракция 40%-м этанолом), сухой экстракт листьев 25 (экстракция 25%-м этанолом). Для сопоставления фармакологической активности все препараты вводились в одной дозе -- 50 мг на 1 кг массы тела в лечебном режиме: через 1 ч после нанесения кожного повреждения, затем ежедневно однократно до момента заживления. Растительные средства вводились внутрижелудочно. Измерение раны проводили сразу же после снятия струпа, длительность наблюдения -- 20 дней. У контрольных животных (n = 10) полное заживление ран наблюдали на 20-е сут. Существенную активацию регенерации вызвал сухой экстракт листьев 25 -- уже с 5-х сут раны в 1,2 раза были меньше контрольных, а на 15-е сут отмечалось их полное заживление у всех животных, т.е. сроки регенерации сокращались на 28,6% (рис. 1).

Рис. 1. Влияние сухих экстрактов листьев Arctium tomentosum Mill. на заживление лоскутной раны: * -- различия статистически досто-верны в сравнении с контролем при p_u < 0,05, p_t < 0,05

На модели острого асептического воспаления, вызванного каррагенином, сравнивали противовоспалительное действие сухого экстракта листьев 70, сухого экстракта листьев 40, сухого экстракта листьев 25. Растительные средства вводились в превентивном режиме курсом в течение 5 дней, в последний день через 1 ч после фитопрепарата вводился каррагенин. Существенное противоотечное действие на этой модели оказал сухой экстракт листьев 40, так как все три дозы препарата были эффективными, наибольший противоэкссудативный эффект при введении его в дозе 50 мг на 1 кг массы тела -- 37% торможения прироста веса лапки в сравнении с контрольными животными (табл. 1). Волнообразный характер противовоспалительных эффектов наблюдался у сухого экстракта листьев 25: на 29% снижался отек под действием препарата в дозах 100 и 10 мг на 1 кг; отсутствие эффекта в дозах 50 и 1 мг на 1 кг массы тела. Сухой экстракт листьев 70 в дозе 50 мг на 1 кг массы тела на 26,8% снижал экссудативное действие флогогена.

При изучении обезболивающей активности установлено, что под влиянием сухого экстракта листьев 70 в дозе 50 мг на 1 кг массы тела на 32,5% сокращалось количество корчей у мышей (рис. 2). Наиболее выраженный анальгетический эффект на этой модели выявлен у особей, которым вводили сухой экстракт листьев 25 в дозе 50 мг на 1 кг массы тела -- до 34,5%, т.е. количество корчей сокращалось в 12 раз.

Для получения лекарственных форм использовали измельченное сырье -- порошок листьев, проходивший сквозь сито с диаметром отверстий 7 мм. Были получены следующие нормативные показатели порошка листьев: влажность -- (8,8 0,3)%; зола: общая -- (12,9 1,6)%, нерастворимая в хлороводородной кислоте -- (4,2 0,3)%; экстрактивные вещества, извлекаемые водой, -- (13,4 0,1)%; 25%-м этанолом -- (9,3 0,2)%, 40%-м этанолом -- (12,3 0,1)%; 70%-м этанолом -- (10,7 0,2)%.

Таблица 1. Влияние сухих экстрактов из листьев Arctium tomentosum Mill. на острое каррагениновое воспаление (X m)

* Различия статистически достоверны в сравнении с контролем при p_u < 0,05, p_t < 0,05.

Рис. 2. Анальгетическая активность сухих экстрактов листьев Arctium tomentosum Mill. на модели уксусных корчей: 1 -- контроль; 2 -- сухой экстракт 70; 3 -- сухой экстракт 40; 4 -- сухой экстракт 25; *-- различия статистически достоверны в сравнении с контролем при p_u < 0,05, p_t < 0,05

При стандартизации жидких экстрактов (табл. 2) установлено, что наибольшее содержание экстрактивных веществ обнаружено при экстрагировании 40%-м этанолом -- (11,5 0,4)%, далее следует 70%-й -- (8,7 0,6)% и наименьший выход получен при экстрагировании 25%-м этанолом -- (5,3 0,3)%. Плотность колебалась от (0,94 0,02) г/см³ в случае применения 70%-го этанола до (0,97 0,01) и (0,98 0,02) г/см³ -- в случае 25- и 40%-го соответственно. По содержанию этанола жидкие экстракты удовлетворяли требованиям на экстракты экстрагентами аналогичной концентрации [1], содержание тяжелых металлов не превышало 0,01%.

Таблица 2. Стандартизация жидкого и сухого экстрактов из листьев A. tomentosum (экстрагент -- этанол)

Сухие экстракты после измельчения представляли собой сыпучие порошки светло-коричневого (25-й и 40%-й этанол) и темно-коричневого (70%-й этанол) цвета. Влажность составляла (2,2 0,2), (3,8 0,3), (4,7 0,2)% для 70-, 40- и 25%-го этанола соответственно. По содержанию влаги и тяжелых металлов сухие экстракты удовлетворяли требованиям нормативной документации [1] (табл. 2).

При исследовании технологических свойств порошка сухого экстракта на 70%-м этаноле (табл. 3) установлено, что порошок полидисперсный и содержит фракции от 0,25 до 1 мм в количестве (85,0 1,3)%, пылевидной фракции не более 15%, что оказывает существенное влияние на сыпучесть таблетируемого материала, точность дозирования и возможность использования метода прямого прессования для таблетирования массы.

Сыпучесть порошка характеризуется как отличная, насыпная масса как среднетяжелая, пористость составляет не более (40,0 0,4)%.

Полученный порошок использовали при изготовлении таблеток. Из семи исследованных прописей таблеток

Таблица 3. Технологические показатели порошка сухого экстракта (экстрагент -- 70%-й этанол) листьев A. tomentosum

Примечание. «-» -- сухой экстракт прошел через данный размер сита; «+» -- сухой экстракт остался на сите.

требованиям нормативной документации [1] (по внешнему виду, распадаемости, отклонению от средней массы, прочности на истирание) удовлетворяли только две, состав и оценка качества которых представлены в табл. 4, 5.

Таблица 4. Оптимальный состав таблеток с сухим экстрактом (экстрагент -- 70%-й этанол) листьев A. tomentosum

Таблица 5. Оценка качества таблеток с сухим экстрактом листьев A. tomentosum (экстрагент -- 70%-й этанол)

Примечание. ГФ Х -- Государственная фармакопея. 11-е издание.

Заключение

Результаты исследований свидетельствуют о наличии фармакологической активности у сухих экстрактов, полученных из листьев лопуха войлочного. В экспериментах на животных выявлен противовоспалительный эффект сухих экстрактов на 70-, 40- и 25%-м этаноле, анальгетическое действие сухих экстрактов на 70- и 25%-м этаноле, ранозаживляющая активность сухого экстракта на 25%-м этаноле. Проведена стандартизация жидких и сухих экстрактов из листьев лопуха войлочного и таблетированных лекарственных форм на основе сухого экстракта.

Литература

1. Государственная фармакопея СССР. 11-е изд. М., 1989. Вып. 1, 2. 400 с.

2. Гублер Е.В. Вычислительные методы анализа и распознавания патологических процессов. М.: Медицина, 1978. 293 с.

3. Копытько Х.Ф., Кирьянов А.А., Стихин Ю.В. и др. Состав летучих веществ и жидких кислот сока листьев лопуха войлочного // Хим.-фарм. журн. 2003. № 6. С. 46--47.

4. Поветьева Т.Н., Пашинский В.Г., Дудко В.В. и др. Противовоспалительные свойства сухих экстрактов из корней и листьев Arctium tomentosum Mill. // Раст. ресурсы. 2001. Т. 37. Вып. 2. С. 80--85.

5. Растительные ресурсы СССР: Цветковые растения, их химический состав, использование. Семейство Asteraceae. СПб.: Наука, 1993. 352 с.

6. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. М.: Медицина, 2000. 398 с.

Поступила в редакцию 27.06.2005 г.

Размещено на Allbest.ru