Патогенетическое обоснование антиатеросклеротической терапии в эксперименте

5,68

25

Итого

100

440

Некоторые из известных средств повышения ЛВП (статины, фибраты, ниацин, реконструированные ЛВП, пептиды-миметики apoA-I, ингибиторы CETP, агонисты X рецептора печени) имеют механизм действия, легче поддающийся интерпретации в рамках концепции лекарство-мишень. Однако они вызывают ряд критических замечаний, тогда как предлагаемый нами препарат на основе натурального продукта не только позволяет избежать многих из перечисленных сложностей, но и дает эффект повышения уровня ОТХ, соизмеримый с эффективностью указанных выше лекарств.

Роль иммунокомпетентных клеток в атерогенезе и поиск эффективных иммунокоррегирующих ППП

Согласно предварительным данным, триггером воспаления при атеросклерозе могут быть провоспалительные цитокины, индуцируемые накоплением липидов в клетках сосудистой стенки. В этой связи мы предприняли попытку подтвердить, что накопление внутриклеточных липидов способно привести к экспрессии молекул, связанных с представлением антигенов. Для этого требовалось провести морфологические исследования cвязи между накоплением липидов в клетках артериальной интимы и антигенпрезентирующей активностью этих клеток.

В частности, мы сочли целесообразным изучить степень корреляции между отложением липидов, содержанием иммуно-воспалительных клеток и экспрессией молекул HLA-DR главного комплекса гистосовместимости класса II в диффузном утолщении интимы (ДУИ). Наряду с анализом корреляции между отложением липидов, содержанием иммуно-воспалительных клеток и экспрессией HLA-DR в ДУИ, мы также изучили корреляцию между отложением липидов и содержанием иммуно-воспалительных клеток при сравнении прилюминальных и примедиальных субслоев интимы.

Мы установили, что между общим количеством липидов, обнаруженных с помощью окрашивания, и количеством эфиров холестерина, свободным холестерином и фосфолипидами существует положительная корреляция (0,72-0,95). Положительная корреляция существовала и между вне- и внутриклеточными липидами и количеством свободного холестерина, эфиров холестерина и фосфолипидами (0,68-0,95). Не обнаружено значимой корреляции между количеством триглицеридов, идентифицированных химическим способом, и количеством липидов, определенных морфометрически после окрашивания.

Последовательные криостатные срезы тканей ДУИ были подвергнуты дальнейшему анализу для поиска корреляции между липидами, окрашенными масляным красным O, и содержанием иммуно-воспалительных клеток, идентифицированных иммуногистохимически с помощью смеси антител анти-CD14 и анти-CD45. Общее отложение липидов достоверно коррелирует с суммарным количеством иммуно-воспалительных клеток (0,59).

Корреляция между общим отложением липидов и числом иммуно-воспалительных клеток была выше в прилюминальном субслое, чем в примедиальном субслое интимы (0,69 и 0,28 соответственно). Число как внеклеточных, так и внутриклеточных липидов, идентифицированных окрашиванием, положительно коррелировало с общим числом иммуно-воспалительных клеток в интиме (0,58 и 0,51 соответственно). Коэффициенты корреляции между количеством иммуно-воспалительных клеток и вне- и внутриклеточными отложениями липидов в примедиальном субслое (0,28 и 0,18 соответственно) были заметно ниже, чем аналогичные параметры в прилюминальном субслое (0,70 и 0,48 соответственно). Не было обнаружено значимой корреляции между количеством иммуно-воспалительных клеток и внутриклеточным отложением липидов в примедиальном субслое (0,18). Напротив, в прилюминальном субслое коэффициент корреляции между внутриклеточным содержанием липидов и числом иммуно-воспалительных клеток был значительно выше (0,48), чем это значение для примедиального субслоя.

Корреляция между содержанием липидов разных классов и количеством иммуно-воспалительных клеток в ДУИ была значимой с эфирами холестерина, свободным холестерином и фосфолипидами (0,82-0,97), но не с триглицеридами (таблица 6). Было также обнаружено, что экспрессия HLA-DR положительно коррелирует в образцах ткани ДУИ как с количеством иммуно-воспалительных клеток, так и с суммарными липидными отложениями (0,66 и 0,79 соответственно) (таблица 7).

Таблица 6

Корреляция между разными классами липидов и иммунокомпетентными клетками в ДУИ аорты

Иммуногистохими-ческий анализ	Классы липидов
	Триглицериды	Эфиры холестерина	Свободный холестерин	Фосфолипиды
Содержание иммунокомпетентных клеток	0,20	0,82	0,82	0,97
	NS	p = 0,024	p = 0,024	p < 0,001

Таблица 7

Корреляции между экспрессией HLA-DR, содержанием иммунокомпетентных клеток и накоплением липидов в ДУИ

ИФА	Содержание иммунокомпетентных клеток	Общие липиды
Антиген HLA-DR	0,66	0,79
	p < 0,001	p < 0,001

Таким образом, на ранних стадиях атеросклероза вклад внутреннего прилюминального субслоя в иммунные процессы является более выраженным, чем вклад внешнего примедиального мышечно-эластичного субслоя, однако и вклад примедиального субслоя в ранние стадии атеросклероза также может быть достаточно важен.

Для того, чтобы убедиться, что HLA-DR+ клетки интимы могут содержать апо-B (апо-В представляет собой характерный белок ЛНП, которые являются ключевыми элементами в инициации и прогрессировании атеросклероза), мы использовали конфокальную микроскопию, которая показала, что, хотя подавляющее большинство экспрессирующих HLA-DR интимных клеток не содержало апо-B, встречались некоторые редкие клетки, содержащие апо-B. В последних клетках апо-B был локализован преимущественно в перинуклеарной цитоплазме (рисунок 4).

Рисунок 4 Apo-B (красный, показано стрелками) в перинуклеарной цитоплазме HLA-DR + клеток, идентифицированный с помощью иммунофлуоресцентного анализа, в сочетании с конфокальной микроскопией

Примечания 1 - Антиген HLA-DR был окрашен FITC, а апо-B был визуализирован с использованием антител к апо-B, конъюгированными с Alexa 633; ядро окрашивали использованием бромистого этидия. 2 - Шкала = 10 мкм

Морфологические исследования, результаты которых приведены выше, выявили связь между накоплением липидов в клетках артериальной интимы и антигенпрезентирующей активностью клеток. Мы предположили, что именно накопление внутриклеточных липидов стимулирует представление антигенов.

Для проверки этого предположения из непораженных участков интимы аорты человека были выделены жизнеспособные клетки путем ферментативного диспергирования внеклеточного матрикса.

Клетки были посажены в культуру и через 5 дней культивирования в первичную культуру интимальных клеток были добавлены нативные и множественно модифицированные липопротеиды низкой плотности. Нативные (немодифицированные) ЛНП не вызывали накопления внутриклеточных липидов, не влияли на экспрессию HLA-DR и не влияли на уровень экспрессии провоспалительных цитокинов TNF-б и IL-1, которые наряду с презентацией антигенов играют ключевую роль в клеточном иммунитете.

Множественно модифицированные атерогенные ЛВП, циркулирующие в крови больных с подтвержденным атеросклерозом, вызывали существенное накопление липидов в культивируемых интимальных клетках аорты человека. Известно, что именно модифицированные ЛНП, но не нативные ЛНП обладают атерогенными свойствами, вызывая накопление липидов в клетках артериальной стенки, являясь, тем самым, триггером атерогенеза. Накопление внутриклеточных липидов, вызванное атерогенными модифицированными ЛНП, значимо увеличивало экспрессию HLA-DR (таблица 8). Параллельно увеличивалась экспрессия провоспалительных цитокинов TNF-б и IL-1.

Таблица 8

Влияние множественно модифицированных ЛНП на накопление внутриклеточных липидов и экспрессию иммунокомпетентных молекул

	Накопление внутриклеточных липидов, % от контроля	Экспрессия, % от контроля
		HLA-DR	TNF-б	IL-1
Контроль	100±3	100±12	100±2	100±12
Mодифициро-ванные ЛПНП	201±27*	167±6*	142±4*	156±4*

* - достоверное увеличение показателей по сравнению с контролем, p<0,05

Мы обнаружили положительную корреляцию с высокой степенью статистической значимости между накоплением внутриклеточных липидов и экспрессией HLA-DR, TNF-б и IL-1. Таким образом, экспериментами на первичной культуре интимальных клеток аорты мы установили, что именно накопление липидов в клетках артериальной стенки стимулирует представление антигенов и, возможно, активизирует другие механизмы клеточного иммунитета.

Обнаруженная связь между инициирующими событиями атерогенеза и вовлечением в атерогенез воспаления и клеточного иммунитета является научным заделом, позволяющим рассматривать антицитокиновые средства как потенциальные антиатеросклеротические лекарственные препараты.

В модели in vitro изучали влияние на противовоспалительную активность 31 лекарственного растения.

В опытах на модели ex vivo принимали участие здоровые добровольцы, не имеющие признаков клинических проявлений атеросклероза или системных воспалительных заболеваний, у которых, тем не менее, при первичном обследовании была выявлена атерогенность сыворотки крови - способность сыворотки крови вызывать накопление липидов в культивируемых клетках. У добровольцев брали кровь непосредственно до приема настоя лекарственных трав, а также через соответствующие интервалы времени после приема настоя внутрь.

Сыворотка крови была использована в дальнейшем для определения влияния настоя лекарственной травы на атерогенные и провоспалительные свойства сыворотки крови.

На основе полученных данных была получена интегральная оценка противовоспалительного эффекта лекарственных трав и их комбинаций. В конечном счете, были получены данные по ингредиентному составу разрабатываемого натурального противовоспалительного препарата. Данный препарат должен содержать следующие растительные объекты: цветки календулы обыкновенной, плоды бузины черной и траву фиалки трехцветной. Противовоспалительная эффективность этой комбинации составляет 88% от эффективности диклофенака, одного из самых мощных нестероидных противовоспалительных средств, применяемых в современной медицине. Цветки календулы обыкновенной, плоды бузины черной и трава фиалки трехцветной были отобраны для создания противовоспалительных препаратов.

Для этого была разработана рецептура БАД (фитопрепарата), всостав которого вошли оптимальные количества указанных растений, а также вспомогательные средства, обеспечивающие, в том числе, пролонгированность действия БАД (фитопрепаратов). Рецептура БАД (фитопрепарата) представлена в таблице 9. Сведения о регламенте получения препарата, а также производстве экспериментальной партии и осуществлении исследовательских испытаний представлены в Приложении.

Таблица 9

Рецептура к разрабатываемой биологически активной добавке к пище (фитопрепарату) «Противовоспалительное антицитокиновое средство, обладающее прямым антиатеросклеротическим действием»

Наименование ингредиента	Содержание, %	Масса, мг
Цветки бузины черной	21,0	145
Цветки календулы	21,0	145
Фиалка трехцветная	21,0	145
Лактоза	24,0	39
Стеариновая кислота	7,8	6
Поливинилпирролидон	5,2	20
Итого	100	500

C позиции лекарство-мишень отметим, что мишенью обнаруженных нами эффективных противовоспалительных растительных объектов являются, видимо, иммуно-воспалительные клетки в целом и провоспалительные цитокины в частности. О компонентах растений, действующих, вероятно, на эти мишени, известно следующее.

Календула обыкновенная содержит каротиноиды - до 3% (3-каротин, ликопин, люткеин, виолаксантин, цитроксантин, неоликопин, хризантемаксантин, флавоксантин, рубиксантин); флавоноиды (до 4%), сапонины, фитонциды, эфирные масла, горькие и дубильные вещества, смолы (около 3,5%). Бузина черная содержит флавоноиды, фитостеролы, кислоту салициловую. Трава фиалки трехцветной содержит флавоновый гликозид виолакверцетин и антоциановые гликозиды - дельфинидин, пеонидин, виоланин (состоящий из дельфинидина, глюкозы, рамнозы и оксикоричной кислоты).

ВЫВОДЫ

1. Установлена субстратная и акцепторная специфичность транс-сиалидазы, переносящей с ЛНП сиаловую кислоту на акцепторы плазмы крови (гликопротеиды и гликолипиды).

2. Разработана ферментативная модель ex vivo на основе оценки транс-сиалидазной активности. Модель использована для создания антиатерогенного натурального препарата, подавляющего активности транс-сиалидазы, то есть препятствующего атерогенной модификации липопротеидов низкой плотности.

3. Выявлена способность эстрогена (эстрадиола) и андрогена (дигидротестостерона) подавлять накопление холестерина в моноцитах-макрофагах, то есть препятствовать развитию атерогенеза на клеточном уровне.

4. Разработана клеточная модель для оценки антиатерогенной активности натуральных продуктов, обогащенных фитоэстрогенами. Модель использована для создания антиатерогенного натурального препарата, обогащенного фитоэстрогенами, предназначенного для женщин в период пери- и постменопаузы.

5. Вклад каналов, использующих апоА-I, определен как основной в суммарном экспорте холестерина из макрофагов в сопоставлении с каналами, использующими в качестве акцептора ЛВП плазмы крови.

6. Учитывая большое разнообразие факторов, влияющих на обратный транспорт холестерина, а также их возможных комбинаций, разработана и создана клеточная модель, позволяющая оценивать интегральный показатель - суммарное снижение уровня холестерина в клетке. Созданная клеточная модель была использована для разработки натурального препарата, вызывающего снижение холестерина в клетках жирового атеросклеротического поражения, то есть способствующего регрессии атеросклероза на клеточном уровне.

7. Выявлена высокая степень положительной корреляции между отложением липидов, содержанием иммуно-воспалительных клеток и экспрессией молекул HLA-DR главного комплекса гистосовместимости класса II в диффузном утолщении интимы. Обнаружено, что накопление внутриклеточных липидов, вызванное атерогенными модифицированными ЛНП, значимо увеличивает как экспрессию HLA-DR, так и экспрессию провоспалительных цитокинов TNF-б и IL-1.

8. Разработана и создана клеточная модель для оценки секреции про- и противовоспалительных молекулярных регуляторов и маркеров. Созданная модель использована для создания антиатерогенного противовоспалительного натурального препарата, способствующего подавлению воспалительных реакций, выявляемых даже при самых ранних атеросклеротических изменениях в сосудистой стенке.

9. Разработанные натуральные препараты прошли испытания по тестированию физико-химических свойств и показателей химической и микробиологической безопасности.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Рассматривать изученные в диссертации модели в качестве эффективного инструмента для поиска и создания новых препаратов природного происхождения антиатеросклеротического действия.

2. Все научно-технические разработки передать для производства ППП компании ООО «ИНАТ-Фарма».

3. Использовать данные, касающиеся изученных аспектов патогенеза атенросклероза, в учебном процессе на кафедрах медико-биологического профиля биологических и медицинских факультетов ВУЗов и Институтов усовершенствования врачей, а также в работе научно-исследовательских институтов, занимающихся проблемами сердечно-сосудистой патологии человека.

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Статьи в изданиях, рекомендованных ВАК РФ, и зарубежных научных журналах

1. Карагодин В.П., Черткоева З.А., Глазер В.М., Костромина Н.В., Полякова О.В., Котелевцев С.В. Анализ генетической безопасности биологически активных добавок, получаемых из растительного и животного сырья // Бюллетень Московского общества испытателей природы. Отдел биологический. 2007. Т. 112. № 1. С. 194-199.

2. Букринский М.И., Свиридов Д.Д., Карагодин В.П., Собенин И.А., Сазонова М.А., Коренная В.В., Орехова В.А., Иванова М.М., Мясоедова В.А., Мельниченко А.А., Савинкова И.Г., Орехов А.Н. Повреждение механизма обратного транспорта холестерина, вызванное вирусом иммунодефицита человека: роль АВСА1-зависимого пути // Бюлл. МОИП. 2009. Т. 114. С. 297-301.

3. Грачев А.Н., Карагодин В.П., Мясоедова В.А., Кириченко Т.В., Рудимов Е.Н., Орехова Е.А., Хренов М.О., Авхачева Н.В., Мубаракшина Э.К., Кжышковская Ю.Г., Орехов А.Н. Выделение моноцитов из крови человека с помощью магнитной сепарации для последующего использования в клеточной тест-системе // Бюлл. МОИП. 2010. Т. 115. С. 117-119.

4. Бобрышев Ю.В., Карагодин В.П., Ковалевская Ж.И., Мясоедова В.А., Шапырина Е.В., Салямов В.И., Каргаполова Ю.М., Галактионова Д.Ю., Мельниченко А.А., Орехов А.Н. Численность клеток и клеточная пролиферация в интиме различных артерий человека // Цитология. 2011. №53(10). С. 59-69.

5. Букринский М.И., Карагодин В.П., Свиридов Д.Д., Орехов А.Н. Вирусная инфекция и метаболизм холестерина в макрофагах // Сибирский медицинский журнал. Т. 26. 2011. №1. С. 9-14.

6. Мясоедова В.А., Кириченко T.В., Меркулова Д.М., Собенин И.А., Меркулов Ю.А., Мухамедова Н.М., Мартиросян Д.М., Карагодин В.П., Орехов А.Н. Новый биомаркер в ранней диагностике цереброваскулярной патологии: диффузное интимо-медиальное утолщение сонных артерий // Биомедицинский журнал Медлайн.ру. 2011. №11. Т. 12. С.998-1007.

7. Орехов А.Н., Собенин И.А., Орехова В.А., Мельниченко А.А., Мясоедова В.А., Мухамедова Н.М., Свиридов Д.Д., Карагодин В.П. Клеточные модели для поиска веществ, способствующих обратному транспорту холестерина // Биомедицинский журнал Медлайн.ру. 2011. №10. Т.1. С. 1134-1146.

8. Собенин И.А., Карагодин В.П., Мельниченко А.А., Орехов А.Н. Иммунный холестерин в крови - прогностическая ценность // Биомедицинский журнал Медлайн.ру. 2011. №10. Т.12. С. 1147-1155.

9. Собенин И.А., Сурнин С.А., Карагодин В.П., Мясоедова В.А., Кириченко Т.В., Чупракова О.В., Кожевникова Ю.А., Ковалевская Л.О., Орехов А.Н. Вариабельность показателя толщины интимо-медиального слоя общих сонных артерий в московской городской популяции среди лиц без клинических проявлений атеросклероза // Терапевтический архив. 2011. Т. 83. № 12. С.58-62.

10. Собенин И.А., Сурнин С.А., Карагодин В.П., Прянишников В.В., Орехов А.Н. Опыт применения пребиотика пролонгированного действия Алликор // Здравоохранение Российской Федерации. 2011. № 3. С.28-31.

11. Феоктистов А.С., Орехова Е.А., Мясоедова В.А., Смутова В.А., Собенин И.А., Карагодин В.П., Пшежецкий А.В., Орехов А.Н. Роль сиаловой кислоты в проявлении атерогенных свойств липопротеидами низкой плотности // Биомедицинский журнал Медлайн.ру. 2011. №11. Т. 12. С.1098-1117.

12. Feoktistov Alexander S., Karagodin Vasiliy P., Sobenin Igor A., Suprun Igor V., Alexandra A. Melnichenko, and Alexander N. Orekhov. The Interaction of Plasma Sialylated and Desialylated Lipoproteins with Collagen from the Intima and Media of Uninvolved and Atherosclerotic Human Aorta // Journal of Lipids.. 2011. Vol.9. Р.8.

13. Собенин И.А., Карагодин В.П., Мельниченко А.А., Орехов А.Н. Холестерин циркулирующих иммунных комплексов как индикатор атеросклероза // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. 2012. №3. С. 99-103.

14. Бобрышев Ю.В., Карагодин В.П., Мойсенович М.М., Гаврилин М.А., Мельниченко А.А., Орехова В.А., Бородачёв Е.Н., Собенин И.А., Орехов А.Н. Клеточные сети интимы аорты и гомеостаз кровеносных сосудов // Биомедицинский журнал Medline.ru. 2012.- Т. 13. С. 408-432.

15. Бобрышев Ю.В., Карагодин В.П., Орехов А.Н. Дендритные клетки и их роль в иммунных процессах атерогенеза // Цитология. 2012. №54 (11). С. 3-15.

16. Жуковский Н.С., Собенин И.А., Карагодин В.П., Ковалев Л.И., Мясоедова В.А., Банфи К., Шишкин С.С., Орехов А.Н. Изменения протеомного профиля интимы и медии аорты человека при атеросклерозе // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. 2012.0 №12 (4). С.82-87.

17. Мясоедова В.А., Кириченко Т.В., Орехова В.А., Собенин И.А., Мухамедова Н.М., Мартиросян Д.М., Карагодин В.П., Орехов А.Н. Изучение толщины интимо-медиального слоя сонных артерий (ТИМ) как показателя естественного течения атеросклероза в московской популяции // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. 2012. № 3. С.43-50.

18. Орехов А.Н., Собенин И.А., Орехова В.А., Мельниченко А.А., Мясоедова В.А., Мухамедова Н.М., Мартиросян Д.М., Пшежецкий А.В., Карагодин В.П. Клеточные тест-системы для выявления антиатеросклеротической активности фармакологических веществ и изучения механизмов их действия // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. 2012. № 1. С. 33-39.

19. Bobryshev Yu.V., Karagodin V.P., Kovalevskaya Zh.I., Myasoedova V.A., Shapyrina E.V., Salyamov V.I., Kargapolova Yu.M., Galaktionova D.Yu., Melnichenko A.A., and Orekhov A.N. The Number of Cells and the Cell Proliferation in Intima of Various Human Arteries // Cell and Tissue Biology. 2012. Vol. 6. №1, Р. 29-39.

20. Karagodin Vasily P., Sobenin Igor A., Andrianova Irina V., Ionova Victoriya GOrekhov Alexander N. Anti-Aggregatory and Fibrinolytic Effects of Time-Released Garlic Powder Tablets // Medical and Health Science Journal. 2012. Vol. 10. Р. 47-51.

21. Бобрышев Ю.В., Карагодин В.П., Мойсенович М.М., Мельниченко А.А., Орехов А.Н. Анализ воспалительных процессов в диффузном утолщении интимы аорты человека // Цитология. 2013. №55 (6). С. 394-405.

22. Карагодин В.П. Биологически активные добавки к пище - товарная группа с неясной перспективой (часть 1) // Товаровед продовольственных товаров. 2013. №3. С. 15-20.

23. Карагодин В.П. Биологически активные добавки к пище - товарная группа с неясной перспективой (часть 2) // Товаровед продовольственных товаров. 2013. №4. С. 5-13.

24. Карагодин В.П., Жукова С.С. Биологически активные добавки к пище - товарная группа с неясной перспективой (часть 3) // Товаровед продовольственных товаров. 2013. №5. С. 5-10.

25. Bobryshev Y.V., Karagodin V.P., Moisenovich M.M., Melnichenko A.A. and Orekhov A.N. Analysis of Inflammatory Processes in Diffuse Thickening of Human Aorta Intima // Cell and Tissue Biology. 2013. Vol. 7. N. 5. Р. 439-449.

26. Bobryshev Yu.V., Karagodin V.P., Orekhov A.N. Dendritic cells and their role in immune reactions of atherosclerosis // Cell and Tissue Biology. 2013. Vol.7(3). Р. 113-125.

27. Sobenin I.A., Karagodin V.P., Melnichenko A.C., Bobryshev Y.V., Orekhov A.N. Diagnostic and prognostic value of low density lipoprotein-containing circulating immune complexes in atherosclerosis // Clin. Immunol. 2013. V. 33(2). P. 489-495.

Статьи в иных рецензируемых научных журналах

28. Карагодин В.П., Черткоева З.А. Возможность использования биотестирования для предварительной оценки эффективности БАД // Рынок БАД. 2006. №5 (31). С. 34-35

29. Мельниченко А.А., Аксенов Д.В., Ярославов А.А., Карагодин В.П., Собенин И.А., Орехов А.Н. Плюроники подавляют ассоциацию липопротеидов низкой плотности // Патогенез. 2011. № 3. С.47-50.

30. Букринский М.И., Карагодин В.П., Свиридов Д.Д., Орехов А.Н. Изучение эффекта Nef-трансфекции клеток на структуру липидного рафта и обмен холестерина // Патогенез. 2011. № 4. С.46-52.

31. Собенин И.А., Феоктистов А.С., Карагодин В.П., Пшежецкий А.В., Орехов А.Н. Липопротеиды низкой плотности в атерогенезе - значение сиаловой кислоты // Патогенез. 2011. №2. С. 48-54.

32. Грачев А.Н., Карагодин В.П., Агафонова М.В., Мясоедова В.А., Кириченко Т.В., Рудимов Е.Н., Мельниченко А.А., Орехов А.Н. Использование парамагнитных наночастиц для получения чистых культур макрофагов // Патогенез. 2012. № 4. С.46-50.

33. Орехов А.Н., Мухамедова Н.М., Свиридов Д.Д., Карагодин В.П., Мельниченко А.А., Мясоедова В.А., Орехова В.А., Собенин И.А. Исследование противовоспалительного эффекта липопротеидов высокой плотности // Патогенез. 2012. № 6. С.43-48.

34. Карагодин В.П., Орехова В.А., Мельниченко А.А., Орехов А.Н. ЛВП-терапия - терапевтические подходы к коррекции дисфункций липопротеидов высокой плотности // Патогенез. 2013. № 1. С.38-45.

Тезисы докладов на конференциях

35. Karagodin V.P., Sobenin I.A., Orekhov A.N., Kubatiev A.A. Serum atherogenicity measurement as a Potential Bioindicator for the Assessment of environmental effects // Тез. докладов на ХVІІ Междун. конф. «Биоиндикаторы в окружающей среде». М., 2009.

36. Бобрышев Ю.В., Карагодин В.П., Ковалевская Ж.И., Шапырина Е.В., Каргаполова Ю.М., Галактионова Д.Ю., Салямов В.И., Орехов А.Н. Клеточные механизмы атеросклероза: врожденный иммунитет и воспаление // Фундаментальные науки и практика. 2010. №1(4). С.140-148.

37. Мухамедова Н.М., Свиридов Д.Д., Карагодин В.П., Орехова В.А., Мясоедова В.А., Мельниченко А.А., Собенин А.И., Орехов А.Н. Липопротеиды высокой плотности: терапевтические подходы (ЛВП-терапия) // Фундаментальные науки и практика. 2010. №1(4). С. 116-126.

38. Мясоедова В.А., Карагодин В.П., Нейфельд И.В., Силина Т.С, Гитинова Х. М., Тиханина О.В., Мартиросян Д.М., Курмачева Н.А., Орехов А.Н. Механизмы половых различий при атеросклерозе // Фундаментальные науки и практика. 2010. №1(4). С. 51-58.

39. Орехов А.Н., Карагодин В.П., Мельниченко А.А., Кириченко Т.В., Смутова В.А., Чернова У.В., Сафонова В.М., Калабушев С.Н., Пшежецкий А.В. Сиаломика и атеросклероз // Фундаментальные науки и практика. 2010. №1(4). С.59-65.

40. Бобрышев Ю.В., Карагодин В.П., Ковалевская Ж.И., Шапырина Е.В., Каргаполова Ю.М., Галактионова Д.Ю., Салямов В.И., Орехов А.Н. Пролиферация клеток при различных типах поражения сонных и коронарных артерий // Проблемы и перспективы современной науки. 2011. 3(1). С. 80-83.

41. Карагодин В.П., Собенин И.А., Мухамедова Н.М., Мельниченко А.А., Смутова В.А., Орехова В.А., Мясоедова В.А., Никифоров Н.Г., Сюсина М.А., Горшкова Т.Н., Бордачев Е.Н., Ромкина А.Ю., Орехов А.Н. Белок переноса фосфолипидов увеличивает отток клеточного холестерина и фосфолипидов, вызванный аполипопротеинами липопротеидов высокой плотности // Современный мир, природа и человек. 2011. №2(1). С.38-45.

42. Кжышковская Ю.Г., Грачев А.Н., Карагодин В.П., Орехова В.А., Мельниченко А.А., Орехов А.Н. Роль хемокинов в регуляции воспаления и инициации опухолей // Мат-лы VI Междун. телеконференции «Фундаментальные науки и практика». Томск, 2011. Т.7. С. 13-17.

43. Мухамедова Н.М., Свиридов Д.Д., Карагодин В.П., Мельниченко А.А., Мясоедова В.А., Орехова В.А., Собенин И.А., Орехов А.Н. Липопротеиды высокой плотности подавляют воспалительную реакцию моноцитов // Проблемы и перспективы современной науки. 2011. №3(1). С.64-68.

44. Мухамедова Н.М., Свиридов Д.Д., Карагодин В.П., Мельниченко А.А., Мясоедова В.А., Орехова В.А., Собенин И.А., Орехов А.Н. Исследование влияния белков, потенциально вовлеченных в отток холестерина, на экспорт холестерина из макрофагов // Проблемы и перспективы современной науки. 2011. 3(1). С.68-73.

45. Мясоедова В.А., Кириченко Т.В., Орехова В.А., Собенин И.А.,
Карагодин В.П., Орехов А.Н. Изучение показателя толщины интимо-медиального слоя сонных артерий (ТИМ) как показателя естественного течения атеросклероза в московской популяции // Проблемы и перспективы современной науки. 2011. 3(1). С. 96-98.

46. Орехов А.Н., Собенин И.А., Орехова В.А., Мельниченко А.А., Мясоедова В.А., Мухамедова Н.М., Свиридов Д.Д., Карагодин В.П. Клеточные модели для поиска веществ, способствующих обратному транспорту холестерина // Проблемы и перспективы современной науки. 2011. 3(1). С. 98-103.

47. Сурнин С.А., Собенин А.И., Карагодин В.П., Орехов А.Н. Индуцирующая роль вирусов острых респираторных вирусных инфекций в прогрессии атеросклеротического процесса // Проблемы и перспективы современной науки. 2011. 3(1). С.57-58.

48. Сурнин С.А., Собенин И.А., Карагодин В.П., Орехов А.Н. Массовая апробация эффективности пребиотика «Алликор» в отношении показателей заболеваемости острыми респираторными вирусными инфекциями у детей // Проблемы и перспективы современной науки: Межвузовский сборник науч. тр. участников 4-й междун. телеконф. "Фундаментальные науки и практика" / Томск. гос. ун-т, Сибир. гос. мед. ун-т. Томск, 2011. - Т. 3, № 1. С. 78-79.

49. Сурнин С.А., Собенин И.А., Карагодин В.П., Орехов А.Н. Результаты апробации пребиотика «Алликор» в условиях оздоровительной программы по профилактике респираторных и сердечнососудистых заболеваний // Проблемы и перспективы современной науки. 2011. 3(1). С.76-78.

50. Грачев А.Н., Кжышковска Ю.Г., Карагодин В.П., Эдельман Е., Гаврилин М.А., Орехов А. Н. СС-Хемокины и регуляция иммунных клеток в норме и патологии // Актуальные проблемы современной науки: Сб. науч. тр. VII Междун. телеконференции, 2012. С. 45-50.

51. Orekhov A., Karagodin V., Sobenin I., Melnichenko A., Gratchev A., Feoktistov A., Nikiforov N., Borodachev E., Orekhova V., Gavrilin M. The diagnostic and prognostic value of low density lipoprotein-containing circulating immune complexes in atherosclerosis // XVI International Symposium on Atherosclerosis. Sedney, Australia. 2012. P.74.

52. Karagodin Vasilii P., Orekhov Alexander N., Bobryshev Yuri V., Sobenin Igor A. Smooth Muscle Cells in Atherosclerosis: Possible Role of Stem cells and Osteoblasts // Cell Science & Stem Cell Research. Hilton San Antonio, 2012. Р. 29.

53. Nikiforov N., Karagodin V.P., Orekhov A.N., Melnichenko A.A., Sobenin I.A. Expression of TNFalfa and CCL18 is increased as a result of cholesterol accumulation in macrophages // Arteriosclerosis, Thrombosis and Vascular Biology Scientific Sessions. 2013. №5. Р. 122.

Патент

Патент № 2484841 от 20 июня 2013 г. «Средство для профилактики и лечения атеросклероза, подавляющее атерогенную модификацию липопротеидов».

Монографии

1. Карагодин В., Собенин И., Орехов А. Протеомика атерогенеза. Germany: LAP LAMBERT Academic Publishing, 2012. 242 с.

2. Карагодин В.П. Качество и безопасность биологически активных добавок к пище. Germany: LAP LAMBERT Academic Publishing, 2013. 152 с.

3. Карагодин В., Орехов А. Терапия атеросклероза на основе препаратов природного происхождения. Germany: PALMARIUM Academic Publishing, 2013. 318 с.

ANNOTATION

Vasily Petrovich KARAGODIN

PATHOGENETIC APPROACHES TO TREATMENT OF ATHEROSCLEROSIS BASED ON DRUGS OF NATURAL ORIGIN

Atherosclerosis and vascular disorders which result from atherosclerosis represent one of the major problems in the modern medicine and public health. Despite the enormous investments in investigation of atherosclerosis that have been made, the mechanisms that initiate the development of this disease and changes in the cells in affected arteries remain not well understood. The initial aim of the present thesis was to elucidate the structural and functional aspects of the development of atherosclerosis in humans.

This work showed that the processes taking place in early atherosclerosis stages are different in various intima sublayers. We decline to believe that the juxtalumenal layer is the «area» for initiation of immune processes whereas in juxtamedial sublayer lipids are kept inside degrading elastic fibers. Disruption of elastic fibers in intima depth may be the most early and important event in generation of fiber-free focal zones where lipid-necrotic locus will be finally formed.

Later we studied anti-atherosclerotic and anti-cytokine activity of natural substances in primary culture of blood-derived macrophages. It was shown that the dietary supplements, based on elder berries, calendula and violet flowers possessed anti-inflammatory activity compared with the effect of Diclofenac. At the same time it suppressed the intracellular cholesterol accumulation in cultured cells as well as garlic powder tablets Allicor did. Thus, performed combination possesses double mechanism of action (anti-atherosclerotic and anti-cytokine) and may be considered as the effective basis for the development of novel clinical implications for long-term atherosclerosis prevention and treatment.

Using models developed we identified natural products suitable to produce anti-atherosclerotic therapeutic action and drugs potential. We also developed formulations of the new natural drugs. The results of the analysis and developmens that are provided in the thesis give a comprehensive picture of the cellular mechanisms of therosclerosis. Natural products which have been developed by research were effective and were tested on physical and chemical properties and chemical and microbiological safety.

Размещено на Allbest.ru