Размещено на http://www.allbest.ru/

МІНІСТЕРСТВО ОХОРОНИ ЗДОРОВ'Я УКРАЇНИ

НАЦІОНАЛЬНИЙ ФАРМАЦЕВТИЧНИЙ УНІВЕРСИТЕТ

АВТОРЕФЕРАТ дисертації на здобуття наукового ступеня доктора фармацевтичних наук

ТЕОРЕТИЧНЕ ОБҐРУНТУВАННЯ ТА РОЗРОБКА ЛІПОСОМАЛЬНИХ ЛІКАРСЬКИХ ПРЕПАРАТІВ У ФОРМІ ІН'ЄКЦІЙНОГО РОЗЧИНУ ТА СПРЕЮ НА ОСНОВІ НАНОБІОТЕХНОЛОГІЇ

БОРЩЕВСЬКИЙ ГЕННАДІЙ ІЛЛІЧ

15.00.01 - технологія ліків, організація фармацевтичної справи

та судова фармація

Харків - 2016

Дисертацією є рукопис.

Робота виконана на кафедрі технології ліків Національного фармацевтичного університету МОЗ України, м. Харків і ПАТ «Фармак», м. Київ.

Науковий консультант:доктор фармацевтичних наук, професор, заслужений діяч науки і техніки України, лауреат Державної премії України

ЯРНИХ ТЕТЯНА ГРИГОРІВНА, Національний фармацевтичний університет, м. Харків, завідувач кафедри технології ліків.

Офіційні опоненти:заслужений працівник охорони здоров'я України, доктор фармацевтичних наук, професор

ГУДЗЕНКО ОЛЕКСАНДР ПАВЛОВИЧ, ДЗ «Луганський державний медичний університет» МОЗ України, м. Рубіжне, декан фармацевтичного факультету, професор кафедри технології ліків, організації та економіки фармації; доктор фармацевтичних наук, професор

ДАВТЯН ЛЕНА ЛЕВОНІВНА, Національна медична академія післядипломної освіти імені П. Л. Шупика, м. Київ; завідувач кафедри фармацевтичної технології і біофармації; доктор фармацевтичних наук, професор

КУЧЕРЕНКО ЛЮДМИЛА ІВАНІВНА, Запорізький державний медичний університет МОЗ України, завідувач кафедри фармацевтичної хімії.

Захист відбудеться «20» травня 2016 р. о 10⁰⁰ годині на засіданні спеціалізованої вченої ради Д 64.605.02 при Національному фармацевтичному університеті за адресою: 61002, м. Харків, вул. Пушкінська, 53.

З дисертацією можна ознайомитись у бібліотеці Національного фармацевтичного університету (61168, м. Харків, вул. Валентинівська, 4).

Автореферат розісланий «19» квітня 2016 р.

В.о. вченого секретаря спеціалізованої вченої ради

доктор фармацевтичних наук, професор Л. І. Вишневська

АНОТАЦІЯ

Дисертація присвячена теоретичному обґрунтуванню і розробці ЛП у формі ін'єкційного розчину на основі ессенціальних фосфоліпідів для лікування захворювань печінки та у формі спрею на основі концентрату депротеїнізованого дермального шару шкіри свиней і фосфатидилхоліну для лікування ран, що довго не загоюються.

Запропоновано методологію створення ЛП на основі нанобіотехнології і методів фізики поверхні. Вперше розроблено субстанцію «Концентрат депротеїнізованого дермального шару шкіри свиней» (КДДШШС) і спрей на її основі під умовною назвою «Ефіаль», який знаходиться на третій фазі клінічних досліджень (лист № 26/7891 від 18.09.2015 р.).

На підставі фізичних, фізико-хімічних, технологічних і фармакологічних досліджень розроблено технологію ін'єкційного розчину «Л'есфаль», який дозволено до медичного застосування (реєстр. № UA/123117/01/01 зі змінами від 05.12.2014 р. № 939). Доведена можливість використання методів фізики поверхні у постадійному контролі технології ЛП, уперше запропоновано експрес-метод визначення етанолу в парентеральних розчинах, який упроваджено у підрозділах ПАТ «Фармак» (акт впровадження від 08.03. 2014 р.).

Розроблено кількісне визначення пептидів, які входять до складу спрею «Ефіаль», методом тонкошарової хроматографії дот-перенесених на нітроцелюлозну мембрану зразків препарату з подальшою фотометричною денситометрією. Визначено показники якості препаратів, вивчено умови їх зберігання і терміни придатності. Узагальнено, поглиблено і сформульовано вимоги до виробництва і контролю якості ліпосом, на підставі яких уперше в Україні розроблено загальну фармакопейну статтю «Ліпосомальні лікарські засоби», яку внесено до ДФУ 2.0. Новизна досліджень захищена 4 патентами України. Ключові слова: дермальний шар шкіри свиней, ліпоїд S100, фосфоліпіди, ліпосоми, нанобіотехнологія, фільтрація, ін'єкційний розчин.

АННОТАЦИЯ

Диссертация посвящена теоретическому обоснованию и разработке ЛП в форме инъекционного раствора на основе эссенциальных фосфолипидов для лечения заболеваний печени и в форме спрея на основе концентрата депротеинизированного дермального слоя кожи свиней и фосфатидилхолина для лечения долго не заживающих ран различного происхождения.

Впервые разработана субстанция «Концентрат депротеинизированного дермального слоя кожи свиней» (КДДСКС) на основе сырья животного происхождения (патент № 66570 от 10.01.2012 г.) и проведена его стандартизация. Разработана спектрофотометрическая методика и процедура валидации количественного определения углеводов суммарного биопрепарата.

На основе физических, физико-химических, технологических и фармакологических исследований впервые теоретически и экспериментально обоснован состав и технология липосомального ЛП в форме спрея на основе КДДСКС и фосфатидилхолина из соевых бобов под условным названием «Эфиаль» (патент Украины № 101235 от 11.03.2013 г.).

Экспериментально обоснован рациональный способ получения препарата «Эфиаль» - метод высокого давления. Доказана его стабильность в диапазоне рН 4,0-6,5. Изоэлектрическая точка находится в пределах 2,9-3,05. Значение дзета-потенциала составляет более -30 мВ, что позволяет прогнозировать стабильность препарата. Проведено масштабирование процесса фильтрации спрея «Эфиаль». Установлены параметры фильтрации: фильтр SARTOPORE 2 (0,45 ± 0,2) micron с двухслойной мембраной, постоянным давлением 1 мБар, температурой (20,0 ± 2,0) °С.

Разработана технология фосфолипидной наносистемы эмульгированных мицелл и липосом с размером частиц 30-50 нм в лекарственной форме - инъекционный раствор «Л'есфаль» (патент Украины № 97742 от 12.03.2012 г.).

Установлено, что критическим параметром контроля процесса получения липидной пленки является содержание примесей лизофосфатидилхолина и спирта этилового. Определены факторы, препятствующие образованию примесей: время (45 мин.), температура (43 °С), величина вакуума (не менее 14 гПа), скорость вращения колбы (50 об/мин.), количество циклов азота (4).

Разработаны технологические инструкции / протоколы приготовления серий, производственная рецептура, инструкции по упаковке, методики контроля качества на ЛП. Технологии разработанных лекарственных препаратов апробированы (спрей «Эфиаль») и внедрены («Л'есфаль») в промышленное производство ПАО «Фармак» (письмо № 26/7891 от 18.09.2015 г.). Раствор для инъекций «Л'есфаль» разрешен к медицинскому применению (рег. № UA/123117/01/01 с изменениями от 05.12.2014 г. № 939). Спрей «Эфиаль» находится на третьей фазе клинических исследований.

Показана возможность использования методов физики поверхности (динамическое светорассеивание, электрофоретическое светорассеивание, ДСК, ИК-Фурье спектроскопия, осмоляльность) в постадийном контроле технологии ЛП. Впервые предложен экспресс-метод определения этанола в парентеральных растворах (патент Украины № 75076 от 26.11.2012 г.). Методика определения концентрации спирта этилового в парентеральных растворах внедрена в подразделениях ПАО «Фармак» (акт внедрения от 08.03. 2014 г.).

Проведен теоретический анализ механизмов блокировки пор мембранных фильтров и масштабирование процесса фильтрации разработанных препаратов. Установлена доминирующая модель фильтрации в предложенных препаратах - модель полной блокировки пор.

Доказана возможность использования метода ДСК для определения качества фильтрации, а именно установлены причини потерь (до 15 %) основных и вспомогательных веществ во время фильтрации препарата «Л'есфаль» (отличия в теплофизических характеристиках новых фильтров). Установлены основные параметры фильтрации, которые уменьшают потери до 2 %.

Впервые разработано количественное определение пептидов, которые входят в состав спрея «Эфиаль» методом тонкослойной хроматографии дот-перенесенных на нитроцеллюлозную мембрану образцов препарата с последующей фотометрической денситометрией. С помощью выполнения параллельных экспериментальных исследований двумя разными методами (SDS-электрофорез пептидов в капилляре и адсорбционная хроматография на мембранах) оптимизирована методика определения и контроля содержания пептидов в препарате.

Разработаны и валидированы методики количественного определения компонентов препаратов «Эфиаль» и «Л'есфаль» методом жидкостной хроматографии.

Определены условия хранения (температура (5,0 ± 3,0) °С) и сроки годности (2 года) разработанных ЛП, которые обеспечивают их стабильность в течение хранения и использования.

Обобщены и сформулированы требования к производству и контролю качества липосом, впервые в Украине разработана общая фармакопейная статья «Липосомальные лекарственные средства», которая включена в ГФУ 2.0 (письмо ФЦ МЗ Украины № 11/977-5 от 24.06.2015 г.).

Разработаны, утверждены ПК «Фармация» МЗ и НАМН Украины (протокол № 93 от 28.10.2015 г.) и изданы методические рекомендации «Використання методів фізики поверхні для експрес-контролю технологічного процесу і стандартизації якості ліпосомальних препаратів», которые внедрены на ПАО «Фармак» (акт внедрения от 30.11.2015 г.).

Обобщены биологические исследования, которыми установлена гепатопротекторная активность раствора для инъекций «Л'есфаль», регенеративное и ранозаживляющее действие спрея под условным названием «Эфиаль».

Фрагменты научных исследований внедрены в учебный процесс фармацевтических вузов и факультетов Украины.

Ключевые слова: дермальный слой кожи свиней, липоид S100, фосфолипиды, липосомы, нанобиотехнология, фильтрация, спрей, раствор для инъекций.

SUMMARY

The thesis is devoted to theoretical substantiation and development of liposomal drugs in the form of solution for injections on the basis of essential phospholipids for the treatment of liver diseases and in the form of a spray based on deproteiniated dermal layer of skin to treat fever lasted wounds. The first time the methodology of drugs creation based on nanotechnology methods and surface physics was suggested. Developed substance «Concentrate dermal layer of the skin of pigs» and spray on its basis codenamed «Efial», which is on the third phase of clinical trials (letter from 09.18.2015 № 26/7891).

The technology of injection solution «L'esfal», which allowed for medical use (Reg. № UA 123117/01/01, amended on 05.12.2014 № 939). The possibility of using methods of surface physics in stepwise control of drugs technologies was shown, first proposed rapid method for determining ethanol in parenteral solutions, which put into production.

Developed quantification of peptides, which are part of spray “Efial”. Defined quality indicators of the drugs and their storage terms and shelf life. Overview, depth and formulated requirements for production and quality control of liposomes, based on which for the first time in Ukraine developed general pharmacopoeia article "Liposomal drugs", which harmonized with Eu. Ph.

Key words: dermal layer of the skin of pigs, lipoid S100, phospholipids, liposomes, nanobiotechnology, filtration, spray, solution for injections.

ПЕРЕЛІК УМОВНИХ СКОРОЧЕНЬ

ААС	-	атомно-абсорбційна спектрофотометрія
АФІ	-	активний фармацевтичний інгредієнт
ВЕРХ	-	високоефективна рідинна хроматографія
ГХ	-	газова хроматографія
ДСК	-	диференційна сканувальна калориметрія
ДФУ	-	Державна фармакопея України
ЄФ	-	Європейська фармакопея
КДДШШС	-	концентрат депротеїнізованого дермального шару шкіри свиней
ЛП	-	ліпосомальні препарати
МКЯ	-	методи контролю якості
НД	-	нормативна документація
ПААГ	-	поліакриламідний гель
ТР	-	технологічний регламент
ТШХ	-	тонкошарова хроматографія
ФР	-	фармацевтична розробка
ФЦ	-	фармакопейний центр

ЗАГАЛЬНА ХАРАКТЕРИСТИКА РОБОТИ

Актуальність теми. Важливою проблемою сучасної медицини є розвиток ран, які довго не загоюються. Такі рани найчастіше виникають у хворих із порушеннями трофіки та іннервації шкіри, обумовленими різними патологічними процесами: хронічним венозним застоєм у хворих із виразковою хворобою, порушенням мікроциркуляції при цукровому діабеті, а також при глибоких пошкодженнях шкіри. Враховуючи це, створення препаратів на основі біологічно активних речовин тваринного походження - низькомолекулярних пептидів у дозованій формі, зручній для пацієнта, виділених зі шкіри свиней, що інкорпоровані в ліпосоми і мають специфічну ранозагоювальну активність при лікуванні глибоких ран, є актуальним напрямком сучасної нанобіотехнології.

Ліпосомальні препарати (ЛП) знайшли широке розповсюдження у фармації, а Україна входить до вузького кола країн, що виробляють ЛП. Однак відсутність фармакопейного стандарту якості ускладнює їх стандартизацію. У зв'язку з цим доцільною і своєчасною є розробка загальної фармакопейної статті «Ліпосомальні лікарські засоби» з метою включення її до ДФУ.

Слід зазначити, що кількісне визначення ліпосомальних сумарних біопрепаратів має низку особливостей, які не дозволяють застосовувати до них загальноприйняті підходи стосовно розробки і валідації аналітичних методик, що викликає необхідність проведення досліджень і у цьому напрямку.

Не менш важливим завданням є створення ін'єкційного препарату гепатопротекторної дії на основі есенціальних фосфоліпідів, які є найбільш поширеним типом гепатопротекторів («Ессенціалє® Н», розчин для ін'єкцій) і не мають вітчизняних аналогів на фармацевтичному ринку. Значне розповсюдження захворювань печінки, а також існування в Україні проблеми імпортозаміщення лікарських препаратів обумовлюють актуальність розробки генеричного препарату цієї фармакологічної групи.

Одним із етапів фармацевтичної розробки (ФР) є масштабування лабораторної технології у промислове виробництво з мінімізацією можливих ризиків, при цьому важливо і доречно проводити автоматизований контроль технологічних процесів та їх швидке регулювання. У цьому аспекті розробка методології використання методів фізики поверхні у постадійному контролі, зокрема ЛП у формі ін'єкційного розчину на основі есенціальних фосфоліпідів і спрею на основі концентрату депротеїнізованого дермального шару шкіри свиней (КДДШШС), становить науковий і практичний інтерес.

Отже, перспективи створення ЛП на основі нанобіотехнології, проблеми їх стандартизації, переваги методів фізики поверхні як експрес-методик оцінки якості проміжних і готових продуктів фармацевтичного виробництва визначили тему і мету нашого дослідження.

Зв'язок роботи з науковими програмами, планами, темами. Дисертаційна робота виконана згідно з планом інноваційного розвитку ПАТ «Фармак» і науково-дослідних робіт НФаУ («Технологія одержання оригінальних та комбінованих фармацевтичних засобів у різних лікарських формах», № держреєстрації 0108U009174, перереєстровано у 2014 р. «Розробка складу, технології та біофармацевтичні дослідження лікарських засобів на основі природної та синтетичної сировини» за № 0114U000945) і Проблемної комісії «Фармація» МОЗ і НАМН України (пр. № 80 від 2013 р.).

Мета дослідження. Метою роботи є теоретичне обґрунтування, розробка та впровадження у виробництво ліпосомальних лікарських препаратів у формі розчину для ін'єкцій та спрею на основі нанобіотехнології.

Завдання дослідження:

· проаналізувати сучасний стан розвитку нанобіотехнології, вивчити перспективну сировину тваринного походження для створення ЛП, методи досліджень і способи отримання ліпосом, нормативні документи інших країн щодо їх стандартизації;

· з'ясувати можливості застосування методів фізики поверхні при розробці і контролі якості ліпосомальних лікарських препаратів;

· обґрунтувати загальну концепцію та методи досліджень, визначити методологію створення ліпосомальних препаратів (ЛП) на основі сировини тваринного походження (шкіри свиней) у формі спрею та розчину для ін'єкцій на основі есенціальних фосфоліпідів;

· проаналізувати аспекти якості ЛП та розробити загальну фармакопейну статтю до ДФУ «Ліпосомальні лікарські засоби»;

· розробити технологію субстанції - концентрату депротеїнізованого дермального шару шкіри свиней (КДДШШС) та провести її стандартизацію;

· теоретично та експериментально обґрунтувати склад багатокомпонентного ЛП у формі спрею на основі КДДШШС і фосфатидилхоліну із соєвих бобів під умовною назвою «Ефіаль» та ін'єкційного розчину есенціальних фосфоліпідів «Л'есфаль»;

· обґрунтувати спосіб отримання ліпосом, дослідити процес фільтрації та визначити критичні параметри технології розроблених препаратів;

· розробити промислову технологію ЛП у формі спрею «Ефіаль» та ін'єкційного розчину «Л'есфаль» і на підставі методів фізики поверхні запропонувати експрес-методики постадійного контролю технологічного процесу їх отримання;

· провести фізико-хімічні дослідження препаратів, розробити методики контролю якості (МКЯ) їх основних показників і вмісту діючих речовин та провести їх валідацію;

· визначити фактори, що впливають на стабільність розроблених ЛП у формі ін'єкційного розчину і спрею, й установити терміни їх придатності;

· розробити технологічні інструкції (протоколи виготовлення серій, інструкції з пакування, виробничу рецептуру, МКЯ) та провести роботу з апробації й упровадження розроблених ЛП у промислове виробництво ПАТ «Фармак»;

· узагальнити дані біологічних досліджень препаратів.

Об'єкт дослідження. Активні фармацевтичні інгредієнти (АФІ) - ліпоїд S 100, дермальний шар шкіри свиней заморожений, КДДШШС, допоміжні речовини, лабораторні та дослідно-промислові зразки ін'єкційного розчину «Л'есфаль» та спрею «Концентрат депротеїнізованого дермального шару шкіри свиней та фосфатидилхоліну із соєвих бобів» під умовною назвою «Ефіаль».

Предмет дослідження. Наукове обґрунтування складів і технології ін'єкційного розчину «Л'есфаль» і спрею «Ефіаль». Визначення способу отримання ліпосом, концентрації діючих і допоміжних речовин, дослідження фармакотехнологічних, фізико-хімічних властивостей, розробка методик постадійного контролю технології, стандартизації і вивчення стабільності препаратів. Розробка фармакопейної статті «Ліпосомальні лікарські засоби».

Методи дослідження. При розробці та вивченні властивостей лікарських засобів використано методи, які широко застосовуються у фармацевтичній практиці: органолептичні (опис, колір, запах); технологічні; фізичні та фізико-хімічні (потенціометричне визначення рН, диференційна сканувальна калориметрія (ДСК) тощо); біохімічні, мікробіологічні та біологічні (обґрунтування концентрації діючих речовин, визначення специфічної активності). Якісний і кількісний аналіз діючих речовин здійснювали за допомогою методів ТШХ, ГХ, ВЕРХ і екстракційної спектрофотометрії.

При розробці проекту загальної фармакопейної статті до ДФУ «Ліпосомальні лікарські засоби» застосовано методи системного і порівняльного аналізу (вивчення фармакопей різних країн, наказів МОЗ України, методичних рекомендацій, підручників тощо).

Обробка експериментальних даних проведена за допомогою методів математичної статистики.

Наукова новизна. Запропоновано методологію створення ліпосомальних препаратів у формі ін'єкційного розчину і спрею на основі нанобіотехнології і методів фізики поверхні.

Уперше розроблено субстанцію «Концентрат депротеїнізованого дермального шару шкіри свиней» (КДДШШС) на основі сировини тваринного походження (патент України № 66570 від 10.01.2012 р., Бюл. № 1).

На підставі фізичних, фізико-хімічних, технологічних і фармакологічних досліджень уперше теоретично й експериментально обґрунтовано склад і технологію ЛП у формі спрею на основі КДДШШС і фосфатидилхоліну із соєвих бобів під умовною назвою «Ефіаль» (патент України на винахід № 101235 від 11.03.2013 р., Бюл. № 5).

Розроблено технологію фосфоліпідної наносистеми емульгованих міцел і ліпосом із розміром часток 30-50 нм у лікарській формі - ін'єкційний розчин «Л'есфаль» (патент України на винахід № 97742 від 12.03.2012 р., Бюл. № 5).

Показана можливість використання методів фізики поверхні (динамічне розсіювання світла, електрофоретичне розсіювання світла, ДСК, ІЧ-Фур'є спектроскопія, осмоляльність) у постадійному контролі технології ЛП, уперше запропоновано експрес-метод визначення етанолу в парентеральних розчинах (патент України № 75076 від 26.11.2012 р., Бюл. № 22).

Проведено теоретичний аналіз механізмів блокування пор мембранних фільтрів і масштабування процесу фільтрації розроблених препаратів. Встановлено домінуючу модель фільтрації для запропонованих препаратів - модель повного блокування пор. Доведено можливість використання методу ДСК для визначення якості фільтрації.

Уперше розроблено методику кількісного визначення пептидів, які входять до складу спрею «Ефіаль», методом тонкошарової хроматографії дот-перенесених на нітроцелюлозну мембрану зразків препарату з подальшою фотометричною денситометрією. За допомогою виконання паралельних експериментальних досліджень двома різними методами (SDS - електрофорез пептидів у капілярі та адсорбційна хроматографія на мембранах) оптимізовано методику визначення вмісту пептидів у препараті.

Розроблено і валідовано методики кількісного визначення компонентів препаратів «Ефіаль» і «Л'есфаль» методом рідинної хроматографії.

Визначено умови зберігання (температура 5,0 ± 3,0 °С) і терміни придатності (2 роки) розроблених ЛП, які забезпечують їх стабільність упродовж зберігання і використання.

Узагальнено, поглиблено і сформульовано вимоги до виробництва і контролю якості ліпосом, на підставі яких уперше в Україні розроблено загальну фармакопейну статтю «Ліпосомальні лікарські засоби» (лист ФЦ МОЗ України № 11/977-5 від 24.06.2015 р.).

Практична цінність. На підставі експериментальних даних створено два нових ЛП у формі ін'єкційного розчину на основі есенціальних фосфоліпідів для лікування захворювань печінки й у формі спрею на основі концентрату депротеїнізованого дермального шару шкіри свиней і фосфатидилхоліну для лікування ран різного походження, які довго не загоюються.

Розроблено технологічні інструкції / протоколи виготовлення серій, виробничу рецептуру, інструкції з пакування до ТР 64-00481198-371-12 (на виробництво ЛП «Л'есфаль») і ТР 64-00481198-038.1-13 (на виробництво ЛП «Ефіаль»). Розроблено методики контролю якості на ЛП. Технології створених ЛП апробовано (спрей «Ефіаль») й упроваджено («Л'есфаль») у промислове виробництво ПАТ «Фармак» (лист № 26/7891 від 18.09.2015 р.). Розчин для ін'єкцій «Л'есфаль» дозволений до медичного застосування (реєстр. № UA/123117/01/01 зі змінами від 05.12.2014 р. № 939). Спрей нашкірний «Ефіаль» знаходиться на третій фазі клінічних досліджень.

Методика визначення концентрації спирту етилового у парентеральних розчинах упроваджена у підрозділах ПАТ «Фармак» (акт впровадження від 08.03.2014 р.).

За допомогою методу ДСК виявлено причини втрати (до 15 %) основних і допоміжних речовин під час фільтрації препарату «Л'есфаль» (відмінності у теплофізичних характеристиках нових фільтрів). Оптимізовано основні параметри фільтрації, які знижують втрати до 2 %.

Загальна фармакопейна стаття «Ліпосомальні лікарські засоби» включена до ДФУ 2.0 (с. 1036-1038), яку введено в дію наказом МОЗ України № 830 від 08.12.2015 р.

Розроблено, затверджено ПК «Фармація» МОЗ і НАМН України (протокол № 93 від 28.10.2015 р.) і видано методичні рекомендації «Використання методів фізики поверхні для експрес-контролю технологічного процесу і стандартизації якості ліпосомальних препаратів», які впроваджено на ПАТ «Фармак»» (акт впровадження від 25.11.2015 р.).

Фрагменти наукових досліджень упроваджені у навчальний процес технологічних кафедр фармацевтичних ВНЗ і факультетів України: Запорізького державного медичного університету (акт впровадження від 01.09.2015 р.), Вінницького національного медичного університету (акт впровадження від 04.12.2015 р.), Національної медичної академії післядипломної освіти імені П. Л. Шупика (акт впровадження від 07.12.2015 р.), Української військово-медичної академії (акт впровадження від 10.12.2015 р.), заводської технології ліків і біотехнології НФаУ (акти впровадження від 15.12.2015 р., 21.12.2015 р.).

Особистий внесок здобувача. Дисертаційна робота є самостійною завершеною науковою працею.

У комплексних дослідженнях, проведених колективом співавторів публікацій, особисто дисертантом:

– визначено мету, завдання, методологію досліджень, а також здійснено планування усіх експериментальних робіт;

– вивчено, проаналізовано й узагальнено сучасні дані наукової літератури за визначеним напрямком;

– проведено експериментальну роботу за темою дисертації і науковий аналіз отриманих результатів фізико-хімічних, фармакотехнологічних і біологічних досліджень;

– теоретично обґрунтовано і розроблено склад, технології, методики контролю якості ін'єкційного розчину «Л'есфаль» і спрею «Ефіаль»;

– розроблено методики постадійного контролю критичних параметрів технології на основі методів фізики поверхні;

– розроблено й оформлено технологічні інструкції / протоколи виготовлення серій, аналітичну документацію на запропоновані лікарські препарати;

– розроблено методичні рекомендації «Використання методів фізики поверхні для експрес-контролю технологічного процесу і стандартизації якості ліпосомальних препаратів»;

– проаналізовано сучасні вимоги і складено проект загальної фармакопейної статті ДФУ щодо стандартизації ліпосомальних лікарських засобів;

– узагальнено результати експериментальних досліджень з вивчення специфічної активності та нешкідливості розроблених препаратів.

Персональний внесок в усіх опублікованих працях зі співавторами (Ярних Т. Г., Серединською Н. М., Комаровим І. В., Кулінічем А. В., Вороніною А. К., Омельченко І. О., Скринським В. С., Шевіною В. Л., Коноваленко В. А., Гавриленко В. Л., Лісничук Н. Є., Волковим К. С., Борщевською М. І., Коваленко В. М., Чабаним В. Н., Гольцевим А. М., Волковою Н. О., Товмасян Е. К., Краснопольським Ю. М., Гризодубом О. І., Левашовою О. Л., Бігуняк В. В.) вказано за текстом дисертації, а також в авторефераті у списку фахових публікацій.

Апробація результатів дисертації. Основні положення дисертаційної роботи доповідались і обговорювались на: міжнародній науково-практичній конференції «Сучасні досягнення фармацевтичної технології» (Харків, 2011); VІІ науково-практичній конференції «Управління якістю в фармації» (Харків, 2013); 9-й міжнародній науково-практичній конференції «Новината за напреднали наука» (Софія, 2013); міжнародній науково-практичній конференції «Південна фундація медицини» (Одеса, 2014); міжнародній науково-практичній конференції «Фармацевтичні та медичні науки: актуальні питання» (Дніпропетровськ, 2014); конференції «Медична наука та практика на сучасному історичному етапі» (Київ, 2014); міжнародній конференції «Динамика научных исследований» (Польща, 2015); міжнародних конференціях «Современная европейская наука» та «Научные горизонты» (Великобританія, 2015); міжнародній конференції «Прикладные научные разработки» (Чехія, 2015); 2-й міжнародній науково-практичній інтернет-конференції «Технологічні та біофармацевтичні аспекти створення лікарських препаратів різної направленості дії» (Харків, 2015).

Публікації. За матеріалами дисертації одержано 4 патенти України, опубліковано 40 наукових робіт, зокрема 25 статей у фахових виданнях (6 за кордоном), 13 тез доповідей, 1 методичні рекомендації, 1 фармакопейна стаття.

Обсяг і структура дисертації. Дисертаційна робота викладена на 327 сторінках машинопису, складається зі вступу, огляду літератури (розділ 1), п'яти розділів експериментальної частини (розділи 2-6), загальних висновків, списку використаних джерел і додатків. Обсяг основного тексту - 261 сторінка. Робота ілюстрована 78 таблицями, 80 рисунками. Бібліографія містить 290 джерел літератури, з них 126 іноземних.

ОСНОВНИЙ ЗМIСТ РОБОТИ

У вступі викладено актуальність теми, мету, основні завдання досліджень, наукову новизну, практичне значення отриманих результатів, особистий внесок здобувача й апробацію результатів дисертації.

Розділ 1. Актуальні аспекти створення лікарських препаратів для лікування запальних уражень шкіри та захворювань печінки. Сучасний стан розвитку нанобіотехнології (огляд літератури).

Узагальнено фармакологічні і токсикологічні властивості складових біологічної сировини і науково обґрунтовано перспективи використання у фармації різних субстратів тваринного походження, зокрема шкіри свиней.

Проведено аналіз щодо розповсюдженості захворювань печінки і запальних уражень шкіри; розглянуто ЛП, які використовують для лікування вказаних патологій, особливу увагу приділено фосфоліпідним і біологічним препаратам, а саме пептидним комплексам.

Показано доцільність створення високоефективних і безпечних препаратів на основі ліпосом. Наведено характеристику лікарських засобів на основі наночасток і ліпідів, проаналізовано їх властивості і поведінку у водних розчинах. Розглянуто основні методи отримання, контролю ЛП і вимоги до забезпечення їх якості.

Наведено коротку характеристику методів фізики поверхні (динамічного та електрофоретичного розсіювання світла, диференційної сканувальної калориметрії, ІЧ-Фур'є спектроскопії) і показано актуальність їх використання у створенні ЛП, виробництві і виведенні на фармацевтичний ринок нанопродуктів.

Розділ 2. Обґрунтування загальної концепції досліджень. Об'єкти та методи досліджень.

У розділі наведено методологію створення ЛП на основі сировини тваринного походження у формі спрею для зовнішнього застосування і розчину для ін'єкцій на основі есенціальних фосфоліпідів.

Наведено характеристики діючих і допоміжних речовин. Визначено методи досліджень, необхідні для створення ЛП і розробки методик ідентифікації та кількісного визначення діючих і допоміжних речовин (фізичні, фізико-хімічні, біохімічні, біологічні).

Розділ 3. Нормативне обґрунтування виробництва та контролю якості ліпосомальних лікарських засобів.

Проведено теоретичний аналіз документів різних країн зі стандартизації і методів контролю ліпосом і ЛП. Розроблено національну фармакопейну статтю, в якій наводяться основні визначення, загальні вимоги з розробки, виробництва, контролю якості та маркування ліпосом. Фармакопейна стаття «Ліпосомальні лікарські засоби» включена до ДФУ 2-го видання (лист ФЦ № 11/977-5 від 24.06.2015 р.). Проведено аналіз фармакопейної процедури валідації методик атомно-абсорбційної спектрофотометрії (ААС). Розроблено метрологічно обґрунтовану стандартизовану процедуру валідації методик кількісного визначення за допомогою ААС у варіанті калібрувального графіка. Показано, що більш надійним є підхід, заснований на припущенні рівності невизначеностей калібрування і випробовуваної проби. Показано, що для досить вузьких аналітичних діапазонів (не ширше 70-130 % від номінального значення) може застосовуватися також і метод стандарту.

Розроблено стандартизовану процедуру валідації спектрофотометричної методики кількісного визначення сумарних біопрепаратів у варіанті калібрувального графіка. Процедура апробована на прикладі валідації методики визначення суми вуглеводів у субстанції «Концентрат депротеїнізованого дермального шару шкіри свиней».

Розділ 4. Теоретичне та експериментальне обґрунтування фармацевтичної розробки препарату гепатопротекторної дії на основі есенціальних фосфоліпідів.

Розділ присвячений розробці промислової технології отримання ін'єкційного розчину «Л'есфаль» як генеричного оригінальному препарату - «Ессенціалє Н / Essentialе N», розчин для внутрішньовенного введення по 5 мл в ампулах № 5, виробництва «A. Nattermann & CiE GmbH», Німеччина.

Як наноконтейнер обрано ліпосоми, що мають низку переваг: зберігають інтактність інкапсульованих у них лікарських речовин, пролонгують їх дію тощо. До недоліків цих препаратів можна віднести велику розбіжність у розмірах ліпосом (20-160 нм), що обумовлює необхідність використання більшої кількості стабілізатора, а також призводить до зниження стабільності препарату, зменшення терміну зберігання, не прогнозована якість якого може впливати на організм при застосуванні.

Отже, основні труднощі, що виникають при створенні ін'єкційного генеричного препарату на основі есенціальних фосфоліпідів, пов'язані з розробкою його технології. Тому для вирішення завдань, поставлених у дисертаційній роботі, необхідно було провести експериментальне дослідження вибору оптимальних параметрів технологічного процесу (температура, тиск, порядок завантаження компонентів тощо), які можна контролювати сучасними методами фізики поверхні, а також визначити фактори, що впливають на якість готового продукту.

При проведенні порівняльних досліджень було проаналізовано придатність фосфоліпідів сої - ліпоїду S 100 з високим вмістом ненасичених жирних кислот: пальмітинова (12-17 %), стеаринова (2-5 %), олеїнова (7-12 %), ліноленова (59-70 %), лінолієва (5-8 %). Вибір ліпоїду S 100 для препарату «Л'есфаль» обумовлено його фізико-хімічними, хімічними і технологічними характеристиками (табл. 1).

Таблиця 1 Фізико-хімічні та хімічні показники ліпоїду S 100

Показник	Значення
Неполярні ліпіди	0,8 %
DL -б-токоферол	0,2 %
Фосфор	3,8 %
Вода	0,4 %
Етанол	0,2 %
Важкі метали	< 10 ppm
Перекисне число [мЕкв/кг]	0
Йодне число	106
Кольоровість	жовтий
Бактеріальні ендотоксини	< 0,64 МО/г
Кількісне визначення
Фосфатидилхолін (на безводну речовину)	96,8 %
Лізофосфатидилхолін	0,6 %

Хімічна структура була підтверджена методами H-ЯМР-спектроскопії; Фур'є ІЧ-спектроскопії; мас-спектроскопії.

Критерієм оцінки кількісного вибору допоміжних речовин були фізико-хімічні характеристики досліджуваного препарату, що відповідали генеричному препарату. Як антимікробний консервант використовували спирт бензиловий у кількості 42,8-47,3 мг / 5 мл, яка підтримує його стабільність протягом усього терміну зберігання. Натрію хлорид уведено до складу препарату як осмотичний компонент, що створює необхідні значення осмолярності та вмісту хлоридів.

Натрію гідроксид уводили з метою утворення солі дезоксихолієвої кислоти. При заданому значенні натрію гідроксиду якісний склад і фізико-хімічні властивості (рН, осмолярність, вміст натрію і хлоридів) відповідають препарату порівняння і встановленим вимогам на препарат «Л'есфаль».

Дезоксихолієва кислота виконує функцію емульгатора есенціальних фосфоліпідів. У процесі розробки було виявлено, що при рН менше 5,0 дезоксихолієва кислота випадає в осад. Було введено дезоксихолієву кислоту в кількості, яка створює необхідні фізико-хімічні властивості (рН, осмолярність, вміст натрію і хлоридів, розмір часток). Рибофлавін виконує функцію барвника й обумовлює необхідні нормативні властивості (зовнішній вигляд, кольоровість).

Вода для ін'єкцій у кількості відповідно до генеричного препарату використовується при розчиненні і диспергуванні речовин, що входять до складу лікарської форми (табл. 2).

Таблиця 2 Склад розчину для ін'єкцій «Л'есфаль» в ампулах по 5,0 мл

№	Компонент	Кількість
1	Фосфатидилхолін із соєвих бобів	250,00 мг
2	Спирт бензиловий	45,00 мг
3	Дезоксихолієва кислота	115,00 мг
4	Натрію хлорид	12,00 мг
5	Натрію гідроксид	11,50 мг
6	Рибофлавін	0,50 мг
7	Вода для ін'єкцій	до 5,0 мл

Враховуючи, що якість ЛП знаходиться у прямій залежності від способу отримання ліпосом і подальшої технології лікарської форми, на першому етапі дослідження були спрямовані на вирішення цих питань і насамперед на отримання ліпосом (фосфоліпідних наночасток), стійких при зберіганні. Вибір способу отримання ліпосом впливає на стабільність ліпосомальних дисперсій у великих кількостях. Особливого ставлення щодо забезпечення гарантованої якості вимагають стерильні лікарські засоби. Параметрами, які можуть впливати на функціональні характеристики та якість ЛП, є: час перемішування, швидкість обертів мішалки при розчиненні ліпоїду S 100 і допоміжних речовин, рН розчинів, кількісний вміст фосфатидилхоліну, лізофосфатидилхоліну і бензилового спирту; термін і температура зберігання розчину препарату перед розливом; температурний режим на стадіях технологічного процесу; проведення процесу приготування в атмосфері азоту; стерильність первинної упаковки; проведення розливу препарату в асептичних умовах.

Технологію ін'єкційного розчину «Л'есфаль» розробляли з урахуванням властивостей складових препарату. Найбільш критичною є стадія отримання ліпідної плівки.

Головне завдання цього дослідження - отримати ліпосоми ЛП із низьким вмістом домішок лізофосфатидилхоліну (продуктів окиснення) і спирту етилового при оптимальній кількості стабілізаторів і консервантів (допоміжних речовин). Окрім цього, вміст домішок у препараті (лізофосфатидилхоліну) протягом усього терміну зберігання не повинен збільшуватись.

Тому критеріями вибору оптимальних технологічних параметрів отримання ліпідної плівки препарату «Л'есфаль» був вміст домішок (лізофосфатидилхоліну) і спирту етилового. Встановлено, що основними факторами, що впливають на утворення цих домішок, є: час, температура, величина вакууму і швидкість обертання колби. Атмосфера, в якій відбувається утворення ліпідної плівки, впливає на утворення домішок і практично не впливає на кількість спирту етилового (табл. 3-5).

Таблиця 3 Визначення оптимального часу процесу отримання ліпідної плівки

№	Температура, _С	Вакуум, гПА	Час, хв	Вміст домішок, не більше 4,00 мг/мл	Вміст етанолу, не більше 5,02 мг/мл
1	40	20	35	0,80	12,60
2	40	20	40	0,90	8,50
3	40	20	45	1,90	7,70
4	40	20	50	2,70	7,20
5	40	20	60	6,40	6,30

Таблиця 4 Визначення температури процесу отримання ліпідної плівки

№	Температура, _С	Вакуум, гПА	Час, хв	Вміст домішок, не більше 4,00 мг/мл	Вміст етанолу, не більше 5,02 мг/мл
1	40	20	45	3,60	7,70
2	41	20	45	4,00	6,70
3	43	20	45	4,00	6,50
4	45	20	45	5,80	2,00
5	50	20	45	6,50	1,10

Таблиця 5 Визначення оптимальної швидкості обертання колби

№	Температура, _С	Вакуум, гПа	Час, хв	Швидкість обертання колби, об/хв	Вміст домішок, не більше 4,00 мг/мл	Вміст етанолу, не більше 5,02 мг/мл
1	43	14	45	10	7,00	2,50
2	43	14	45	20	6,10	6,10
3	43	14	45	30	5,80	5,80
4	43	14	45	40	5,10	5,10
5	43	14	45	50	3,90	4,17

Як видно із даних, наведених у табл. 3, при часі від 35 до 45 хв вміст домішки лізофосфатидилхоліну вкладається у межі, а вміст етанолу не задовольняє вимоги. Дані табл. 4 свідчать про те, що при температурі 43 ^_С і часі - 45 хв результати найбільш наближені до оптимальних, однак вміст лізофосфатидилхоліну знаходиться на верхній межі, а вміст етанолу завищений. При цих значеннях часу і температури задовільний вміст домішок у препараті досягався при глибині вакууму 14 гПа.

Кількість завантажуваного розчину ліпоїду і дезоксихолієвої кислоти є також важливим показником. При додаванні до ліпосомальної плівки цього розчину відбувалось збільшення кількості домішки лізофосфатидилхоліну.

Можливою причиною збільшення кількості домішок є термоіндукована хімічна реакція утворення натрієвої солі дезоксихолієвої кислоти. Для доказу цього припущення нами було проведено моделювання процесу з використанням пілотної системи mini Pilot general з одночасним виміром кількості теплоти, яка виділяється або поглинається при хімічних реакціях (рис. 1).

Рис. 1. Графік виділення / поглинання теплоти під час утворення натрієвої солі дезоксихолієвої кислоти

Виявлено, що кількість теплоти, яка виділяється при утворенні натрієвої солі дезоксихолієвої кислоти є достатньою для активації ендотермічної реакції утворення лізофосфатидилхоліну. Відповідно, нами були підібрані такі умови додавання допоміжних речовин, при яких кількість виділеної теплоти була недостатньою для активації процесу утворення лізофосфатидилхоліну (табл. 6). Завантаження сировини становить 10 % від об'єму колби, кількість циклів азоту - 4.

Таблиця 6 Визначення завантаження сировини при отриманні ліпідної плівки

№	Температура, _С	Вакуум, гПа	Час, хв	Завантаження, % від об'єму колби	Вміст домішок, не більше 4,00 мг/мл	Вміст етанолу, не більше 5,02 мг/мл
1	43	14	45	5	0,50	1,20
2	43	14	45	7	1,20	3,00
3	43	14	45	10	3,30	4,15
4	43	14	45	11	3,40	5,15
5	43	14	45	12	3,50	6,30

Отже, за допомогою фізико-хімічних методів дослідження визначені оптимальні параметри: час (45 хв), температура (43 ^_С), величина вакууму (не менше 14 гПа), швидкість обертання колби (50 об/хв) для процесу отримання ліпідної плівки ліпосом препарату «Л'есфаль».

Наступним критичним параметром технології препарату на основі ліпосом є розмір ліпосом. Їх діаметр не повинен перевищувати 200 нм для забезпечення ефективної стерильної фільтрації продукту і має відповідати такому, як в оригінальному препараті. Розмір ліпосом було виміряно за допомогою методу динамічного розсіювання світла на приладі Zetasizer nano ZSP (рис. 2). Сумарна площа піків, наведених на рис. 2, приймається за 100 %, тому на осі ординат наведено значення інтенсивності у відсотках. Усі представлені розподіли мають такі особливості: пік із центром близько 4-5 нм, пік із центром від 40 до 50 нм. Піки із центром від 40 до 50 нм вказують на розмір ліпосом у препаратах.

Розміри ліпосом, отриманих за допомогою електронної мікроскопії (рис. 3), корелюють із розмірами ліпосом, отриманими за допомогою методу динамічного розсіювання світла. Розмір ліпосом у препараті «Л'есфаль» складає 40-50 нм, що повністю задовольняє вимоги до стерильної фільтрації і збігається зі значенням діаметра ліпосом у складі препарату «Ессенціалє Н».

Рис. 2. Розмір ліпосом у препаратах «Ессенціалє Н» (червоний колір) і «Л'есфаль» (зелений колір)

Рис. 3. Електронне фото ліпосом препарату «Л'есфаль»

Основним деструктивним процесом у ліпідах є окиснення. Окисненню піддаються ненасичені жирні кислоти, причому тим швидше, чим вище ступінь ненасиченості.

Окиснення фосфатидилхоліну до значень індексу окисненості 0,6-0,9 порушує ламелярну упаковку фосфоліпіду в бішарі, створюючи спотворену гофровану поверхню. При більш високих значеннях відбувається подрібнення агрегатів фосфоліпіду. Для вивчення вільнорадикального окиснення використовували визначення перекисного індексу Кляйна (відношення оптичної щільності при 233 і 215 нм), який характеризує ступінь окиснення фосфоліпідів. Як розчин порівняння використовували 96 % спирт етиловий.

Індекс окисненості обчислювали за формулою:

,

де: D₂₃₃ - оптична густина випробовуваного розчину при довжині хвилі 233 нм;

D₂₁₅ - оптична густина випробовуваного розчину при довжині хвилі 215 нм.

Індекс окисненості в препараті «Л'есфаль» практично відповідає препарату порівняння (табл. 7). При відпрацюванні методу отримання ліпосом було встановлено, що індекс окисненості ліпосом препарату «Л'есфаль», отриманих методом (2) високого тиску (0,5166) і методом (1) ультразвукового диспергування (0,5147), відрізняється незначно. Однак кращим є метод ультразвукового диспергування, оскільки він менш витратний при промисловому виробництві.

При виробництві ін'єкційних розчинів важливе значення надається процесу фільтрації. Для його оптимізації важливо визначення домінуючої моделі блокування мембранних фільтрів, що дозволить застосовувати відповідні коригувальні дії як на етапі лабораторної розробки, так і у промисловому виробництві ЛП. Теоретичний підхід до обґрунтування параметрів процесу фільтрації дозволить знизити кількість експериментальних пілотних серій, зменшити витрати і час на створення нового ЛП і виведення його на фармацевтичний ринок. Тому дослідження на цій стадії були спрямовані на експериментальне визначення домінуючої моделі фільтрації ЛП «Л'есфаль» на підставі теоретичного аналізу механізмів блокування мембранних фільтрів і визначення факторів, які впливають на якість фільтрації розчину для ін'єкцій.

Таблиця 7 Індекс окисненості препаратів «Л'есфаль» і «Ессенціалє Н»

Назва препарату	Об'єм, мл	D215 нм	D233 нм	Io
«Ессенціалє Н»	0,25	0,9135	0,4722	0,5169
«Л'есфаль», метод 1	0,25	0,9098	0,4683	0,5147
«Л'есфаль», метод 2	0,25	0,9164	0,4735	0,5166

Ефективність фільтрації визначається характеристиками використовуваних фільтрів (їх конструкція, матеріал мембрани, поріг відсікання, асиметричність пор, початковий опір), а також оперативними параметрами процесу (об'єм разової партії фільтрату, робоча площа фільтра, конфігурація системи). При розробці препарату «Л'есфаль» використовували фільтри Kleenpak Capsule Filters компанії «Pall Corporation» (Part number: KA2DFLP1S; LOT NO: IN5441, LOT NO: IN8854 та LOT NO: IS5774) і DEMICAP PROPOR PES 0,20 micron компанії «Domnick hunter» (LOT NO: 1212538). Ступінь їх впливу на якість фільтрації вивчали за допомогою механізму блокування мембрани. Для розрахунків використовували рівняння, які наведено у табл. 8.

На підставі експериментальних даних із застосовуванням методу лінійної регресії було доведено механізм повного блокування пор при фільтрації препарату «Л'есфаль». Отримані дані дозволили зробити правильний вибір типу мембрани фільтра (поліефірсульфон), підібрати оптимальні параметри: температура (20,0 ± 2,0) °С, тиск (1 атм).

Але при масштабуванні стадії фільтрації виявились втрати консерванта до 15 %, що неприпустимо. Тому далі для з'ясування причин і ризиків сорбції бензилового спирту за допомогою методу диференційної сканувальної калориметрії (ДСК) проведено визначення якості фільтрації препарату «Л'есфаль». Для досліджень використовували методику теплового потоку. Об'єктами випробувань були нові і раніше використовувані фільтри тих же серій, що і при напрацюванні препарату.

Таблиця 8 Лінійні форми моделей механізмів блокування мембран

Модель / Режим	Постійний тиск	Постійний потік
Формування проникаючого осаду
Повного блокування пор
Поступової закупорки пор

Результати проведених теплофізичних випробувань наведені на термограмах (рис. 4, 5). Із отриманих термограм за допомогою програмного забезпечення Universal Analysis V4.7 компанії «TA Instruments» розраховували теплофізичні характеристики матеріалу фільтрів.

Рис. 4. Збільшена частина термограми зразків матеріалу фільтра LOT NO: IN8854

Результати досліджень показали, що зразки досліджуваних матеріалів фільтрів мають відмінності в теплофізичних характеристиках. Так, піки кристалізації матеріалу фільтрів LOT NO: IN8854 змінюють форму залежно від місця забору зразка, що може говорити про неоднорідність структури полімерного матеріалу за об'ємом фільтра (рис. 4). Наявність додаткових теплових ефектів цього фільтра, які відсутні у зразках матеріалу фільтра LOT NO: IN5441 (рис. 5), також є свідченням структурних неоднорідностей фільтра LOT NO: IN8854. Втрати консерванта відбувалися тільки на фільтрах, матеріал яких мав додаткові теплофізичні ефекти. Для запобігання сорбції бензилового спирту запропоновано процедуру перевірки фільтрів за теплофізичними характеристиками до початку фільтрування.

Враховуючи отримані експериментальні дані, розроблено промислову технологію препарату «Л'есфаль». Стадії і критичні параметри виробництва наведено у табл. 9.

Важливим моментом у технології виробництва препарату є повнота видалення спирту етилового з емульсії ліпосом за допомогою упарювання. Класичним методом визначення кількості етанолу є газова хроматографія, недоліком якої є тривалість аналізу (3 год), що незручно на стадії міжопераційного контролю препаратів перед їх розливом.

Рис. 5. Термограми зразків матеріалу фільтра LOT NO: IN5441

Було доведено прямо пропорційну залежність осмоляльності розчину від концентрації етанолу в ньому. Використовуючи цей факт, для експрес-аналізу вмісту спирту етилового нами запропоновано метод визначення осмоляльності розчину з подальшим складанням таблиці порівняння і приведення. Встановлено, що при осмоляльності від 100 до 400 мосмоль/кг концентрація етанолу складає від 0,5 до 7,0 мг/мл. Розроблений експрес-метод визначення спирту етилового виконується протягом 3-5 хв, що дає можливість у режимі реального часу підбирати технологічні параметри упарювання, спираючись на об'єктивні дані.

Таблиця 9 Критичні параметри виробництва препарату «Л'есфаль»

№ з/п	Стадія	Критичний параметр
1.	Приготування спиртового розчину	Час та інтенсивність перемішування; повнота розчинення фосфатидилхоліну і дезоксихолієвої кислоти
2	Отримання ліпідної плівки	Час та інтенсивність перемішування, вакуум, температура; проведення процесу у струмі азоту для запобігання окиснення плівки киснем повітря
3	Отримання суспензії ліпосом великого розміру	Час та інтенсивність перемішування, температура; азотна подушка для запобігання окиснення субстанції киснем повітря
4	Отримання суспензії ліпосом дрібного розміру; фільтрація розчину; ампулювання	Час та інтенсивність диспергування, кількість та інтенсивність перемішування, цілість фільтра, асептичні умови процесу розливу в ампули

На підставі комплексу фізико-хімічних досліджень було розроблено методики визначення показників якості препарату «Л'есфаль», які включено до МКЯ. Кількісне визначення фосфатидилхоліну було проведено на серійному хроматографі Agilent 1100 LCMSD SL (діодно-матрична детекція), оснащеному аналітичною хроматографічною колонкою Eclipse XDB C18 (4,6 мм х150 мкм), хроматограму наведено на рис. 6.

Запропонований аналітичний метод визначення вмісту фосфатидилхоліну специфічний, лінійній, точний і правильний у діапазоні концентрацій діючої речовини 76-126 %. Вміст лізофосфатидилхоліну контролювали за методикою «Кількісне визначення фосфатидилхоліну». За результатами валідації методики межа виявлення лізофосфатидилхоліну складає 0,01167 мг/мл, межа кількісного визначення - складає 0,03534 мг/мл. Вміст бензилового спирту визначали методом ГХ.

Рис. 6. Хроматограма розчину стандартного зразка фосфатидилхоліну

Порівняльне вивчення фізико-хімічних властивостей наведено у табл. 10, з якої видно, що за показниками зовнішній вигляд, колір, прозорість, кольоровість, механічні частки, рН, відносна густина, об'єм, що витягається, препарат «Л'есфаль» відповідає вимогам НД.

Таблиця 10 Порівняльне вивчення фізико-хімічних властивостей препаратів «Л'есфаль» і «Ессенціалє Н / Essentiale N»

Показники якості	Вимоги НД	Результати досліджень
	Ессенціалє Н /Essentiale N	Л'есфаль
Зовнішній вигляд

Подобные документы

• Стабілізація розчинів для ін’єкцій. Пролонгування парентеральних лікарських форм

  При виготовленні і зберіганні лікарських препаратів нерідко спостерігаються зміни їх властивостей. Подібні зміни впливають на термін придатності (зберігання) препаратів. Методи стабілізації лікарських засобів. Консерванти і їх застосування у виробництві.
  
  курсовая работа [22,3 K], добавлен 12.05.2011
  

• Загальна фармакологія

  Шляхи проникнення лікарських засобів через біологічні мембрани. Виведення (екскреція) ліків з організму. Фармакодинаміка лікарських препаратів, принципи їх дозування. Основні види лікарської терапії. Умови, які впливають на дію лікарських засобів.
  
  курсовая работа [44,1 K], добавлен 14.11.2009
  

• Обґрунтування застосування лікарських композицій на основі нанорозмірного кремнезему в комплексному лікуванні генералізованого пародонтиту

  Розробка та дослідження в експерименті на тваринах рецептури лікарських композицій на основі силіксу для місцевого лікування запальних уражень тканин порожнини рота. Порівняльна оцінка пародонтопротекторних ефектів та клініко-лабораторні дослідження.
  
  автореферат [53,0 K], добавлен 03.04.2009
  

• Контроль за лікарськими препаратами у країнах світу

  Історія розвитку лікарського законодавства до об'єднання Європи. Єдині стандарти контролю якості лікарських препаратів. Органи ліцензування і контролю. Державна система контролю якості лікарських засобів в Україні. Фармакопея США і Національний формуляр.
  
  курсовая работа [75,7 K], добавлен 30.11.2014
  

• Виробництво лікарських препаратів, що знаходяться під тиском

  Історія створення аерозолів, їх переваги та недоліки. Пристрої та матеріали, що застосовуються при їх виготовленні. Класифікація і технологія лікарських засобів, що знаходяться під тиском, їх стандартизація та умови зберігання. Типи аерозольних систем.
  
  курсовая работа [503,1 K], добавлен 26.09.2010
  

• Взаємодія лікарських речовин

  Фізико-хімічна, фармацевтична та фармакологічна взаємодія лікарських препаратів. Комбінована дія лікарських речовин: синергізм та антагонізм. Взаємодія організму та ліків: системна протидія. Вплив навколишнього середовища на взаємодію організму і ліків.
  
  реферат [36,8 K], добавлен 21.01.2011
  

• Споживчі властивості лікарських засобів

  Поняття лікарських засобів, їх характеристика, основні представники фармацевтичного ринку. Висвітлення властивостей ліків різних товаровиробників, їх відмінні риси. Вплив сировини та технології вироблення на формування якості лікарських засобів.
  
  курсовая работа [38,1 K], добавлен 19.10.2010
  

• Протокол ефективності та безпечності застосування лікарських засобів

  Вивчення скарг, анамнезу, клінічного об’єктивного обстеження пацієнта. Особливості лікування гострого бронхіту. Загальна клініко-фармакологічна характеристика лікарських засобів, що застосовуються. Оцінка характеру можливої взаємодії лікарських засобів.
  
  история болезни [22,6 K], добавлен 01.03.2016
  

• Лікарські засоби для місцевого лікування офтальмологічних захворювань. Номенклатура, стабілізація, стерилізація, зберігання очних лікарських форм

  Історія розвитку офтальмології. Характеристика основних захворювань очей. Класифікація, технологія приготування та контроль якості очних лікарських форм (крапель, мазей, примочок, спреїв). Перспективи організації виробництва очних засобів в Україні.
  
  курсовая работа [65,9 K], добавлен 29.01.2014
  

• Виготовлення лікарських препаратів на основі амілолітичних ферментів

  Вивчення джерел одержання амілолітичних ферментів, з продуцентів – прокаріотів, дріжджеподібних і мікроскопічних грибів. Характеристика властивостей, структури та механізму дії амілолітичних ферментів. Фірми-виробники амілолітичних ферментних препаратів.
  
  курсовая работа [838,8 K], добавлен 14.06.2010
  

• главная
• рубрики
• по алфавиту
• вернуться в начало страницы
• вернуться к началу текста
• вернуться к подобным работам