Исследование роли GSTP1, MDR1 и MRP1 в предрасположенности к хроническим лимфопролиферативным заболеваниям и в формировании устойчивости к химиотерапии

Размещено на http://www.allbest.ru/

Размещено на http://www.allbest.ru/

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

кандидата биологических наук

Исследование роли GSTP1, MDR1 и MRP1 в предрасположенности к хроническим лимфопролиферативным заболеваниям и в формировании устойчивости к химиотерапии

03.00.04 - биохимия

Горева Ольга Борисовна

Новосибирск - 2007

Работа выполнена в ГУ Научно-исследовательском институте молекулярной биологии и биофизики СО РАМН (Новосибирск, Россия)

Научный руководитель:

кандидат биологических наук, доцент Гришанова А.Ю.

Научный консультант:

академик РАМН, доктор биологических наук, профессор Ляхович В.В.

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Поспелова Т.И.

доктор медицинских наук, Душкин М.И.

Ведущая организация:

ГУ Научно-исследовательский институт цитологии и генетики СО РАН (Новосибирск)

Актуальность темы

В последние десятилетия проблема онкологических заболеваний становится все более актуальной. В структуре смертности населения Земного шара смертность от злокачественных новообразований занимает 2-4-ое место, в высокоразвитых странах этот показатель выходит на 1-2-ое место (Якубовская, 2000), а по данным Госкомстата за 2005 год в России - 2-ое место, уступая только заболеваниям системы кровообращения (http://www.gks.ru/free_doc/2006/b06_13/04-27.htm) Число людей с впервые выявленными злокачественными новообразованиями неуклонно растет (Чиссов и соавт., 1995; Заридзе и соавт, 1998). Новосибирская область и г. Новосибирск входят в число административных территорий, неблагоприятных по заболеваемости злокачественными новообразованиями, в том числе опухолями клеток крови (http://www.sibstat.gcom.ru/Sitr/press21.html, 2006). Опережая по темпам общую онкологическую заболеваемость, заболеваемость опухолями клеток крови с 1987 года по 2005 год увеличивалась примерно в 4,5 раза (с 3,2 до 14,2 на 100 тысяч населения), преимущественно за счет лейкозов и лимфом. (Ковынев и соавт., 2006).

Такой рост связывают с всевозрастающим загрязнением окружающей среды чужеродными для организма веществами (ксенобиотиками), и, как следствие, увеличением их поступления в организм человека (Карпенко, 1999; Гуляева и соавт., 2000). Исследование причин повышения заболеваемостью опухолями клеток крови показало, что оно обусловлено неблагоприятной экологической ситуацией в г. Новосибирске и Сибирском федеральном округе в целом и совпадает с пиками промышленных выбросов с отсрочкой эффекта на 7-10 лет (Ковынев и соавт., 2006).

Разная предрасположенность к заболеванию может быть обусловлена генетическими факторами, в том числе межиндивидуальными различиями в биоактивации проканцерогенов и выведении канцерогенных веществ из организма. Установление взаимосвязи между определенным генотипом и формой заболевания может приблизить к пониманию механизмов развития различных форм рака, а с учетом предрасполагающих факторов (курение, загрязнители окружающей среды) позволит выявить группы риска, обладающие повышенной чувствительностью к данным заболеваниям.

Рост случаев онкологических заболеваний выводит на передний план проблему их лечения. Основным методом лечения онкогематологических заболеваний является интенсивная полихимиотерапия. Однако, несмотря на высокий процент ремиссий (до 80%) после начальной терапии, рецидив бывает очень часто, и только 20% пациентов достигают долгосрочного выживания (Поддубная, 2001; Thomas, 2003). Кроме того, интенсивная химиотерапия является причиной тяжёлых побочных эффектов, особенно у пожилых пациентов (Robak, 2004). То есть недолгосрочная эффективность химиотерапии и токсичность лечения являются главными проблемами, которые необходимо решать. Одним из препятствий для успешной химиотерапии опухолей является множественная лекарственная устойчивость (МЛУ) - невосприимчивость популяции клеток опухоли одновременно к целому ряду химиотерапевтических препаратов разного химического строения и с разным механизмом действия на клетку. Феномен МЛУ может быть обусловлен различными механизмами, в частности, снижением накопления лекарственного препарата в клетке, связанным с функционированием Р-гликопротеина, белка множественной лекарственной устойчивости и обезвреживанием препаратов в клетке, обусловленным функционированием систем ферментов метаболизма ксенобиотиков, в частности фермента глутатион-S-трансферазы (Ставровская, 2000).

Основными механизмами в метаболизме и распределении ксенобиотиков является функционирование ферментов первой и второй фазы биотрансформации ксенобиотиков, а также АТФ-зависимых транспортных. Фермент второй фазы глутатион S-трансфераза класса Р участвует в процессах детоксикации широкого спектра электрофильных соединений, включая мутагены и канцерогены окружающей среды (Salinas, 1999, Tsuchida, 1992). Многие цитостатики, такие как алкилирующие агенты, антрациклины, препараты платины, стероидные гормоны также являются субстратами глутатион S-трансфераз (Сlandinin, 1994; Pemble, 1994; Ставровская, 2000; Hayes, 2000). Ген GSTP1 является полиморфным: в кодирующем регионе обнаружено две мутации. Известно, что различные полиморфные варианты гена GSTP1 могут обладать различной субстрат-специфичной каталитической активностью (Coles et al., 2000, Allan et al., 2001). Полиморфизм в 5 экзоне гена GSTP1 приводит к замене аминокислоты в активном участке Н-сайта, который отвечает за субстратную специфичность фермента. В связи с этим, межиндивидуальные различия в ферментативной активности GST, опосредуемые полиморфными вариантами генами, могут лежать в основе различной предрасположенности к онкологическим заболеваниям, связанным с влиянием окружающей среды. Нет данных, связан ли полиморфизм гена GSTP1 с предрасположенностью к хроническим лимфопролиферативным заболеваниям и устойчивостью к химиопрепаратам.

АТФ-зависимые транспортные белки Р-гликопротеин и MRP1 (белок ассоциированный с множественной лекарственной устойчивостью) -продукты генов MDR1 и MRP1 осуществляют транспорт веществ из клетки. Их физиологическая роль заключается в защите клеток от токсических соединений. Гены MDR1 и MRP1 являются высокополиморфными, но несмотря на то, что Р-гликопротеин и MRP широко изучаются, пока непонятна функциональная и клиническая значимость открываемых вариантов полиморфизмов этих генов для биодоступности и распределения лекарств в организме человека и, как следствие, формирования лекарственной устойчивости опухолей. Функциональная активность MRP изучена мало и нет сведений о его активности у больных онкологическими заболеваниями.

Целью настоящей работы было исследование полиморфных вариантов генов GSTP1, MDR1, MRP1 и анализа взаимосвязи полиморфизмов этих генов с предрасположенностью к хроническим лимфопролиферативным заболеваниям и устойчивостью к химиотерапии у больных с такими заболеваниями, а также исследование связи полиморфизмов генов MDR1 и MRP1 с функциональной активностью кодируемых ими белков P-гликопротеина и MRP.

Для достижения данной цели были поставлены следующие задачи:

1. Исследовать распределение полиморфных вариантов гена GSTP1 в 5 (A313G) и 6 (C341T) экзонах у здоровых европеоидов Западной Сибири и больных хроническими лимфопролиферативными заболеваниями.

2. Исследовать распределение полиморфных вариантов гена MDR1 в 6 интроне (Ex6+139C/T), 12 (C1236T), 21 (G2677T), 26 (C3435T) экзонах у здоровых европеоидов Западной Сибири и больных хроническими лимфопролиферативными заболеваниями.

3. Исследовать распределение полимофрных вариантов гена MRP1 в 13 экзоне (T1684C), 9 (A1218+8G), 18 (C2461-30G) интронах у здоровых европеоидов Западной Сибири и больных хроническими лимфопролиферативными заболеваниями.

4. Проанализировать взаимосвязь полиморфизмов исследуемых генов с предрасположенностью к хроническим лимфопролиферативным заболеваниям у европеоидов западной Сибири в исследованиях «случай-контроль».

5. Провести анализ взаимосвязи полиморфизмов исследуемых генов с риском развития лекарственной устойчивости у больных хроническими лимфопролиферативными заболеваниями.

6. Определить функциональную активность Р-гликопротеина и MRP в лимфоцитах здоровых европеоидов Западной Сибири и больных хроническими лимфопролиферативными заболеваниями и оценить связь с результатами химиотерапии.

7. Исследовать роль полиморфизмов генов MDR1 и MRP1 в функциональной активности P-гликопротеина и MRP соответственно.

Научная новизна

Впервые охарактеризована частота встречаемости полиморфизмов A313G и C341T гена GSTP1, С6+139T, C1236T, G2677T, C3435T гена MDR1, T1684C, A1218+8G и C2461-30G гена MRP1 в популяции европеоидов Западной Сибири. Показано, что распределение частот генотипов и аллелей полиморфных вариантов генов GSTP1, MDR1 и MRP1 у европеоидов Западной Сибири соответствуют частотам в других европеоидных популяциях.

Впервые показано, что полиморфные варианты 341СС гена GSTP1 и 3435ТТ гена MDR1 ассоциированы с устойчивостью к хроническим лимфопролиферативным заболеваниям, а 341СТ и 3435СС генотипы - с предрасположенностью.

Впервые показано, что полиморфные варианты 313AG гена GSTP1 и 2677ТТ, 3435ТТ гена MDR1 ассоциированы с устойчивостью, а генотипы 313АА, 3435СТ - с чувствительностью к химиотерапии у больных хроническими лимфопролиферативными заболеваниями. Комбинация генотипов 2677ТТ/3435ТТ в 21 и 26 экзонах гена MDR1 у больных хроническими лимфопролиферативными заболеваниями увеличивает в 17 раз риск возникновения лекарственной устойчивости к проводимой химиотерапии в сравнении с больными, имеющими другие генотипы.

При исследовании полиморфизмов T1684C, A1218+8G и C2461-30G гена MRP1 не выявлено достоверно значимых ассоциаций полиморфных вариантов гена с риском возникновения лимфопролиферативных заболеваний и развитием устойчивости к химиотерапии у больных с этими заболеваниями.

Впервые показано, что функциональная активность Р-гликопротеина у больных неходжкинскими лимфомами ассоциирована со степенью злокачественности опухоли: достоверно более высокий уровень активности показан для больных с высокой степенью злокачественности. Показано также, что уровень функциональной активности Р-гликопротеина в лимфоцитах периферической крови не зависит от применяемых химиопрепаратов и не является показателем для прогноза устойчивости к химиотерапии у больных неходжкинскими лимфомами.

Показано, что уровни функциональной активности Р-гликопротеина и MRP1 не связаны с полиморфизмами С6+139T, С1236T, G2677T, C3435T гена MDR1 и T1684C, A1218+8G, C2461-30G гена MRP1 ни у здоровых европеоидов Западной Сибири, ни у больных хроническими лимфопролиферативными заболеваниями.

Научная и практическая значимость работы

Настоящая работа вносит вклад в развитие фундаментальных знаний о роли полиморфизмов генов MDR1, MRP1, GSTP1 и функциональной активности транспортных белков Р-гликопротеина и MRP1 в предрасположенности к хроническим лимфопролиферативным заболеваниям и в формировании лекарственной устойчивости у больных с такими заболеваниями.

Полученные данные могут быть использованы для оценки как индивидуального, так и популяционного риска развития онкогематологических заболеваний, а так же разработки дифференцированных программ их первичной профилактики.

Выявление полиморфных вариантов генов, ассоциированных с устойчивостью к химиотерапии позволит выработать рекомендации по оптимизации химиотерапии

Основные положения выносимые на защиту

полиморфный ген лимфопролиферативный

1. С предрасположенностью к хроническим лимфопролиферативным заболеваниям связаны полиморфизмы C341T в 6 экзоне гена GSTP1 и C3435T в 26 экзоне гена MDR1.

2. С формированием устойчивости к химиотерапии у больных хроническими лимфопролиферативными заболеваниями связаны полиморфизмы A313G в 5 экзоне гена GSTP1, G2677T в 21 экзоне и C3435T 26 экзонах гена MDR1.

3. Уровень функциональной активности Р-гликопротеина в лимфоцитах периферической крови у больных неходжкинскими лимфомами связан со степенью злокачественности опухоли.

4. Эффективность химиотерапии у больных лимфопролиферативными заболеваниями не зависит от уровня функциональной активности Р-гликопротеина.

5. Уровни функциональной активности P-гликопротеина и MRP1 у здоровых европеоидов Западной Сибири и у больных хроническими лимфопролиферативными заболеваниями не связаны с полиморфными вариантами генов MDR1 (С6+139T, C1236T, G2677T и C3435T) и MRP1 (T1684C, A1218+8G и C2461-30G) соответственно.

Апробация работы

Результаты работы были представлены на следующих конференциях: 17^th Meeting of Europe Association for Cancer Research, Granada, Spain, 2002; 1 Международный симпозиум «Стресс и экстремальные состояния», Феодосия, Украина, 2002; 18^th International Cancer Congress, Oslo, Norway, 2002; European Scientific Conference: Understanding the Genome: Scientific Progress and Microarray Technology, Genova, Italy, 2002; 37^thAnnual Scientific Meeting: European society for clinical investigation. The pathophysiology of diseases: from bench to bedside, Verona, Italy, 2003; 8^th Congress of the European Hematology Association, Lyon, France, 2003; Российско-Норвежская конференция по вопросам гематологии, Санкт-Петербург, 2003; III Конференция молодых ученых России с международным участием «Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины», Москва, 2004; 8-ая Международная Пущинская школа-конференция молодых ученых «Биология - наука XXI века», Пущино, 2004; 9^th Congress of the European Hematology Association, Geneva, Switzerland, 2004; 15^th European Students' Conference for future doctors and young scientists, Berlin, Germany, 2004; XII Международной научной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Ломоносов», Москва, 2005; Региональная конференция молодых ученых-окологов «Актуальные вопросы экспериментальной и клинической онкологии», Томск, 2006; 13^th International Student Congress of Medical Sciences, Groningen, the Netherlands, 2006; Совместная российско-американская конференция по проблемам гематологии и трансплантации костного мозга, 2006.

Публикации. По материалам диссертации имеется 18 печатных работ (из них 3 в рецензируемой печати).

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на 157 страницах машинописного текста с полуторным интервалом, содержит 22 таблицы и 28 рисунков и состоит из шести разделов: введения, обзора литературы, материалов и методов, результатов собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, а также списка цитируемой литературы, включающего 206 ссылок.

Материалы и методы исследования

Описание клинического материала. Работа выполнена на образцах периферической крови пациентов, которые наблюдались в гематологическом кабинете Новосибирской областной консультативной поликлиники и проходили лечение в отделении гематологии Государственной Новосибирской областной клинической больницы с 1998 по 2006 гг. Исследовано 240 больных, из них 79 хроническим лимфолейкозом (ХЛЛ), 161 больной неходжкинскими лимфомами (НХЛ). Группа больных включала 135 мужчин (56,0%) и 105 женщин (44,0%) в возрасте от 17 до 86 лет (средний возраст 56,64) Лечение больных проводилось по протоколам, которые включали следующие препараты: циклофосфамид, лейкеран, адриамицин, онковин, винкристин, преднизолон. Эффективность химиотерапии оценивалась врачами ГНОКБ через 6 месяцев после установления диагноза и начала лечения. Наличие ответа на лечение определялось при полной или частичной клинико-гематологической ремиссии у больных НХЛ и ХЛЛ и в случае стабилизации у больных ХЛЛ. Отсутствие ответа на лечение определялось при прогрессировании заболевания или в случае смерти больного.

Контрольную группу составили пациенты травматологического отделения 3-й Муниципальной клинической больницы скорой помощи в период проведения контрольных анализов перед выпиской. Она включала 100 человек, из них 54 мужчины (54,0%) и 46 женщин (46,0%) в возрасте от 17 до 86 лет (средний возраст 53,47). Основным критерием отбора в контрольную группу было отсутствие каких бы то ни было онкологических заболеваний.

Методы исследования. Выделение ДНК из цельной крови проводили с помощью стандартного набора производства ООО «Лаборатория Медиген» (г. Новосибирск). Анализ полиморфных вариантов специфических участков генома проводился с использованием методов полимеразной цепной реакции и анализа полиморфизма длин рестрикционных фрагментов, используя структуру праймеров и соответствующие ферменты рестрикции, которые были описаны в литературе (Harries et al.., 1997; Harris et al., 1998; Cascorbi et al., 2001; Ito et al., 2001). Подбор эндонуклеаз рестрикции для гена MRP1 проводился с спользованием программы Vector NTI 8.0. Для обнаружения полиморфных вариантов MRP1 использовали следующие эндонуклеазы рестрикции: T1684C - AspS9I, A1218+8G - AspLEI, C2461-30G - BtrI («СибЭнзим», Россия). Продукты ферментативного гидролиза разделяли разделяли вертикальным электрофорезом в 7% полиакриламидном геле в трис-боратном буфере. Визуализацию бандов и сканирование геля проводили в проходящем УФ свете с помощью видеосистемы «DNA Analyzer» (Москва).

Функциональная активность Р-гликопротеина была определена на проточном цитофлюориметре FACS Calibur фирмы «Becton Dickinson» с использованием субстрата родамина 123 и ингибитора верапамила в лимфоцитах в контрольной группе, которая включала здоровых европеоидов (n=49), и у больных НХЛ (n=76). Активность Р-гликопротеина (E _{Rh123, отн.ед.}) оценивали по выбросу родамина 123, определяемому как отношение геометрических средних флюоресценции родамина 123 в присутствии верапамила и без него (Huet et al., 1998). Исследование функциональной активности MRP проводилось у здоровых (n=29) и больных НХЛ (n=31) с использованием 5(6)-диацетат карбоксифлюоресцеина в присутствии ингибитора циклоспорина А (Dogan et al., 2003). Активность MRP1 (E_CFDA, отн.ед_.) оценивали по выбросу карбоксифлуоресцеина, определяемому как отношение геометрических средних флюоресценции карбоксифлуоресцеина в присутствии циклоспорина А и без него.

Статистическую обработку данных проводили с использованием пакета прикладных статистических программ «Statistica v.6» (StatSoft Inc., 1995) и программы EpiInfo 6 (1993). Распределение генотипов исследованных полиморфных локусов проверяли на соответствие равновесию Харди-Вайнберга с помощью точного теста Фишера (Вейр, 1995). Об ассоциации аллелей, генотипов и комбинаций генотипов с лимфопролиферативными заболеваниями и устойчивостью к лечению судили по величине отношения шансов (ОШ) (Флетчер и др., 1998). Достоверность различий в частотах встречаемости изучаемых признаков между анализируемыми группами оценивали по критерию ч2 с поправкой Йетса на непрерывность или двухстороннему точному критерию Фишера, когда в группе сравнения было менее 5 наблюдений.

Для оценки достоверности различий между выборками с различными физиологическими и клиническими параметрами по уровню, функциональной активности P-гликопротеина и MRP использовались непараметрический критерии Манна-Уитни. В случае сравнения более чем двух групп, для оценки использовали критерий Крускалля-Уоллиса с последующим попарным сравнением по критерию Манна-Уитни, в случае, если уровень значимости различий р?0,05. Корреляцию между возрастом и уровнем функциональной активности оценивали по критерию Спирмена.

Результаты исследования и их обсуждение

Распределение частот генотипов и аллелей генов GSTP1, MDR1 и MRP1 у здоровых европеоидов Западной Сибири и у больных хроническими лимфопролиферативными заболеваниями

Полиморфизм A313G в 5 экзоне гена GSTP1, приводящий к замене Ile105Val, был исследован в контрольной группе (n=57) и у больных ХЛПЗ (n=163). Анализ распределения частот полиморфных вариантов гена и аллелей GSTP1 в 5 экзоне в группе контроля и у больных хроническими лимфопролиферативными заболеваниями показал отсутствие статистически значимых различий. В группе без онкопатологии частота мутантного аллеля (0,30) была сопоставима с описанными частотами для других европеоидов 0,28-0,36 (Harries et al., 1997; Landi, 1998), ниже, чем у афроамериканцев 0,42-0,45, но выше, чем у африканцев (ч²=8,89, р=0,003), азиатов 0,14-0,27 (Harries et al., 1997).

Полиморфизм C341T в 6 экзоне гена GSTP1, приводящий к замене Ala114Val, был исследован у 60 индивидуумов контрольной группы и 146 больных ХЛПЗ. Анализ распределения частот полиморфных вариантов гена GSTP1 в 6 экзоне в контрольной группе и у больных ХЛПЗ показал статистически значимые различия: ч²=6,79, р=0,03 для ХЛПЗ, ч²=6,00, р=0,05 для НХЛ и ч²=6,40, р=0,04 для ХЛЛ (рис. 1). Частота встречаемости Т341T генотипа не отличалась у больных ХЛПЗ и НХЛ от контрольной группы, а в группе больных ХЛЛ этот генотип отсутствовал.

Рис. 1. Распределение генотипов и частот аллелей полиморфного варианта C341T гена GSTP1 у больных ХЛПЗ и в контрольной группе.

Частота встречаемости мутантного T аллеля была выше в общей группе больных ХЛПЗ по сравнению с группой контроля (р=0,055) и статистически достоверно выше у больных НХЛ (р=0,049). В группе ХЛЛ также наблюдалось более высокая частота валинового аллеля, но эти различия не являлись статистически достоверными (рис. 1).

Сравнение частот генотипов C341T гена GSTP1 в нашей контрольной выборке с описанными в различных популяциях и этнических группах не выявило достоверных отличий от австралийских европеоидов и индийской популяции (Harris et al., 1998). Частота мутантного аллеля в контрольной группе (0,11) была сопоставима с таковой у австралийских европеоидов (0,07) и индийцев (0,05), но достоверно выше, чем у других среди азиатов (0,0-0,01) (Ishii et al., 1999; Harris et al., 1998).

К настоящему времени открыты и охарактеризованы более 50 однонуклеотидных замен в гене MDR1, большинство из которых является молчащими мутациями или расположены в интронных областях (Mickley et al., 1998; Ito et al., 2001; Kerb et al., 2001; Saito et al., 2002; Marzolini, 2004). Мы исследовали наиболее часто встречающиеся полиморфизмы в гене MDR1: в 6 интроне (Ex06+139C/T), 12 (C1236T), 21 (G2677T) и 26 (C3435T) экзонах. Полиморфизм G2677T приводит к замене Ala893Ser, а мутации C1236T и C3435T, являются синонимичными.

Анализ распределения полиморфных вариантов гена MDR1 в 6 интроне, 12 и 21 экзонах в группе контроля и у больных ХЛПЗ не выявил статистически достоверных различий в частотах встречаемости генотипов и аллелей. В группе без онкопатологии частоты мутантных аллелей в 6 интроне (0,44), 12 экзоне (0,47) и 21 экзоне (0,43) значимо не отличались от описанных в литературе для европеоидов Германии и России (Cascorbi et al. 2001; Hoffmeyer et al., 2000; Siegmund et al., 2002; Gaikovitch et al 2003).

Анализ распределения полиморфных вариантов гена MDR1 в 26 экзоне показал, что частоты распределения генотипов статистически значимо отличаются от контрольных в группе ХЛПЗ (ч²=7,15, р=0,03) и ХЛЛ (ч²=5,93, р=0,05), в группе ХНЛ эти отличия не достигают значимого уровня (рис. 2). Частота встречаемости мутантного аллеля в группах больных ниже по сравнению со здоровыми, причем эти различия являются статистически достоверными для всех групп (p=0,02 для ХЛЛ и НХЛ и р=0,006 для ХЛПЗ).

Частоты встречаемости мутантного аллеля в группе без онкопатологии (0,65) в 26 экзоне близки к частотам генотипов в популяции России (0.54) (Gaikovitch et al., 2003), европеоидов Англии (0.52), Португалии (0,57) (Ameyaw et al., 2001), но значительно превышают частоты мутантного аллеля у европеоидов Польши (0.38) (Jamroziak et al., 2002), Германии (0.48) (Hoffmeyer et al., 2000).



Рис. 2. Распределение генотипов и частот аллелей полиморфного варианта C3435T гена MDR1 у больных ХЛПЗ и в контрольной группе.

При исследовании частот генотипов и аллелей MRP1 в 13 экзоне (T1684C), а также в 9 (A1218+8G) и 18 (C2461-30G) интронах в контрольной группе и у больных ХЛПЗ не было выявлено статистически значимых отличий. Частота встречаемости мутантного аллеля 1684С в 13 экзоне в группе без онкопатологии (0,83) была достоверно выше частоты этого аллеля в японской популяции 0.19 (Ito S. et al., 2001) и незначительно выше частоты 1684С аллеля европеоидов Германии 0.80 (Oselin K. Et al., 2003). Частоты встречаемости мутантного аллеля в группе без онкопатологии в 9 интроне (0,33) совпали с частотой данного аллеля в японской популяции (0.34) (Ito S. et al., 2001) и европеоидов Германии (0.35) (Oselin K. et al., 2003). Частота встречаемости мутантного аллеля в контрольной группе в 18 интроне (0,78) была достоверно выше частоты данного аллеля в японской популяции 0.30 (Ito S. et al., 2001).

Роль полиморфизмов генов GSTP1, MDR1 и MRP1 в предрасположенности к хроническим лимфопролиферативным заболеваниям

При анализе полиморфизма A313G гена GSTP1 у здоровых и больных ХЛПЗ не выявлено статистически значимых ассоциаций различных генотипов с риском развития ХЛПЗ (табл. 1). Это свидетельствует о том, что ни один из генотипов A313G не является фактором предрасположенности к ХЛПЗ. Наши данные согласуются с опубликованными ранее исследованиями больных с НХЛ и ХЛЛ, где не было выявлено ассоциаций полиморфных вариантов A313G гена GSTP1 с риском развития заболеваний (Sarmanova et al., 2001).

При анализе ассоциации разных генотипов C341T GSTP1 с риском развития ХЛПЗ выявлено, что носители «дикого» генотипа 341СС 2,44 раза более устойчивы к возникновению ХЛПЗ (ОШ=0,41, р=0,02), в частности к НХЛ носители данного генотипа будут устойчивее других индивидуумов в 2,5 раза (ОШ=2,5, р=0,03) (табл. 1). Для ХЛЛ также показана ассоциация дикого генотипа с вероятностью устойчивости к заболеванию в 2,38 раза, однако необходимая статистическая достоверность не показана (р=0,09). Это можно объяснить малой выборкой исследованных больных с ХЛЛ. Генотип 341CT ассоциирован с предрасположенностью к лимфопролиферативным заболеваниям: риск заболеть ХЛПЗ у носителей этого генотипа по сравнению с остальными индивидуумами повышен в 2,78 раза (р=0,014), риск заболеть НХЛ - в 2,68 раза (р=0,026), а ХЛЛ - в 3,05 раза (р=0,037) (табл. 1). Это свидетельствует о том, что генотип 341СТ является фактором предрасположенности к хроническим лимфопролиферативным заболеваниям, а «дикий» генотип - фактором устойчивости к ХЛПЗ, в частности к НХЛ.

Анализ ассоциаций генетических вариантов MDR1 с предрасположенностью к лимфопролиферативным заболеваниям показал, что в 6 интроне, 12 и 21 экзонах статистически значимых ассоциаций наличия мутантного аллеля с риском развития ХЛПЗ не выявлено, т.е. полиморфизмы C6+139T, C1236T и G2677T в 6 интроне не являются предрасполагающими факторами к развитию этих заболеваний (табл. 1).

При анализе ассоциаций полиморфных вариантов гена MDR1 с риском развития ХЛПЗ для мутации в 26 экзоне С3435T было установлено, что индивидуумы с 2 аллелями «дикого» типа в 26 экзоне в 2,26 раза более чувствительны к ХЛПЗ (р=0,035), а носители 2 мутантных аллелей более устойчивы к развитию ХЛПЗ по сравнению с другими индивидами (р=0,04), а по сравнению с гомозиготами дикого типа в 2,86 раза (р=0,01). Для НХЛ и ХЛЛ прослеживается аналогичная связь (табл. 1). Гомозиготные по «дикому» аллелю индивиды в 2,24 раза более чувствительны к НХЛ (р=0,046) и в 3,36 раза - к ХЛЛ по сравнению с другими индивидами. Однако для ХЛЛ этот риск не является достоверным (р=0,13), вероятнее всего это обусловлено маленькой выборкой. Статистическая достоверность ассоциации мутантного генотипа с НХЛ достигается только по сравнению с «дикими» гомозиготами (ОШ=0,38, р=0,03). Для ХЛЛ устойчивость к заболеванию в 3,23 раза выше у индивидов с мутантным генотипом по сравнению с остальными (р=0,04) и в 4,55 раза выше по сравнению с индивидами с диким генотипом (р=0,03). Таким образом, полиморфизм С3435Т гена MDR1 является значимым фактором, предрасполагающим к лимфопролиферативным заболеваниям.

При анализе ассоциаций разных генотипов MRP1 в 13 экзоне, 9 и 18 интронах с риском развития ХЛПЗ было показано отсутствие статистически значимых ассоциаций. Следовательно, полиморфизмы T1684C, A1218+8G и C2461-30G гена MRP1 не являются факторами предрасположенности к развитию этих заболеваний (табл. 1).

Таблица 1

Ассоциация полиморфных вариантов GSTP1, MDR1 и MRP1

с предрасположенностью к ХЛПЗ

Гено- тип	К	Общая группа ХЛПЗ	НХЛ	ХЛЛ
	n	n	ОШ	p	n	ОШ	p	n	ОШ	p
A313G (экзон 5 гена GSTP1)
AA	26	77	1,07	0,95	59	1,07	0,97	18	1,07	0,97
AG	28	71	0,8	0,57	52	0,56	0,16	19	1,04	0,89
GG	3	15	1,82	0,41	14	2,27	0,32	1	0,49	0,65
C341T (экзон 6 GSTP1)
CC	49	94	0,41	0,02	68	0,4	0,03	26	0,42	0,09
CT	9	48	2,78	0,014	34	2,68	0,026	14	3,05	0,037
TT	2	4	0,2	0,21	4	1,14	1	0	0,73	0,73
C6+139T (интрон 6 MDR1)
CC	28	47	1,15	0,74	33	0,95	0,98	14	2,35	0,09
CT	43	71	1,17	0,66	62	1,41	0,29	9	0,53	0,25
TT	18	18	0,6	0,23	14	0,58	0,23	4	0,69	0,73
С1236T (экзон 12 MDR1)
CC	23	35	1,05	0,99	25	0,9	0,87	10	1,79	0,31
CT	49	76	1,13	0,77	64	1,27	0,49	12	0,7	0,56
TT	17	20	0,76	0,57	16	0,76	0,6	4	0,77	0,78
G2677T (экзон 21 MDR1)
GG	28	42	0,88	0,77	32	0,82	0,63	10	1,15	0,94
GT	45	82	1,25	0,48	67	1,31	0,41	15	1,05	0,92
ТТ	16	22	0,81	0,69	18	0,83	0,76	4	0,73	0,78
C3435T (экзон 26 MDR1)
CC	12	36	2,26	0,035	29	2,24	0,046	7	3,36	0,13
CT	38	61	1,06	0,93	47	0,97	0,97	14	1,15	0,93
TT	39	41	0,54	0,04	36	0,61	0,12	5	0,31	0,04
TT/CC	0,35	0,01		0,38	0,03		0,22	0,03
A1218+8G (интрон 9 MRP1)
AA	39	43	0,63	0,14	34	0,6	0,13	9	0,77	0,77
AG	37	68	1,58	0,14	56	1,61	0,14	12	1,44	0,58
GG	10	14	0,96	0,9	12	1,01	0,84	2	0,72	1
T1684C (экзон 13 MRP1)
TT	0	0			0			0
TC	30	38	0,75	0,4	30	0,81	0,61	8	0,57	0,35
CC	56	95	1,34	0,4	69	1,23	0,61	26	1,74	0,32
C2461-30G (интрон 18 MRP1)
CC	2	0	0,34*	0,56	0*	0,39	0,58	0*	2,47	0,98
CG	34	49	0,99	0,92	44	1,05	0,98	5	0,64	0,62
GG	50	76	1,12	0,81	64	1,05	0,99	12	1,73	0,49

К - контрольная группа, n - число наблюдений, *- ОШ при допущении единицы в ячейке «дикой» гомозиготы

Роль полиморфизмов генов GSTP1, MDR1, MRP1 в формировании устойчивости к химиотерапии у больных хроническими лимфопролиферативными заболеваниями

Об ассоциации разных генотипов с устойчивостью к химиотерапии судили по величине отношения шансов, показывающей во сколько раз выше вероятность быть устойчивым к химиотерапии (ОШ>1), чем чувствительным (ОШ<1) для индивида с данным генотипом. Данные по ассоциации различных генотипов GSTP1, MDR1 и MRP1 с устойчивостью к химиотерапии представлены в таблице 2.

При анализе взаимосвязи между полиморфным вариантом гена GSTP1 в 5 экзоне и эффектом от лечения в общей группе больных ХЛПЗ было выявлено, что дикий генотип 313АА ассоциирован с чувствительностью к проводимому лечению. Вероятность не иметь эффекта от лечения у больных с этим генотипом ниже по сравнению с другими больными (ОШ=0.43, р=0,04) (табл. 2). Для генотипа 313AG выявлена обратная ассоциация: наличие данного генотипа приводит к увеличению шанса в 2,39 раза не отвечать на химиотерапию (р=0,04) (табл. 2). Поэтому A313G генотип можно считать фактором устойчивости к лечению.

Для полиморфизма в 6 экзоне гена GSTP1 не было выявлено достоверных ассоциаций различных полиморфных вариантов с устойчивостью к химиотерапии (таблица 2).

Анализ ассоциаций генетических вариантов MDR1 с ответом на химиотерапию представлен в таблице 2. Для полиморфизмов в интроне 6 и экзоне 12 у больных ХЛПЗ не было выявлено достоверных ассоциаций полиморфных вариантов С6+139T и C1236T с эффектом от химиотерапии (табл. 2). Больные ХЛПЗ с генотипом 2677ТT в 21 экзоне имеют вероятность формирования устойчивости к химиотерапии в 6.8 раза выше по сравнению с больными, имеющими один или оба аллеля 2677G (р=0,008). Аналогичная связь прослеживается для больных с генотипом 3435ТT: вероятность устойчивости к химиотерапии у них в 6.3 раза выше (р=0,02), чем у больных с генотипом 3435СC и еще более высокая по сравнению с больными, имеющими один или оба аллеля 3435С в генотипе (ОШ=10,08, р=0,002). Кроме того, если больной имеет гаплотип 2677TТ/3435ТT, то риск быть устойчивым к лечению у него в 10.5 раз выше (р=0,007), чем у больных с комбинацией генотипов 2677GG/3435CC, а по отношению к больным с другими комбинациями генотипов - в 17 раз (ОШ=17,73, р=0,00045).

Известно, что полиморфизм С3435Т в 26 экзоне находится в неравновесии по сцеплению с полиморфизмами 21 экзонах, который в свою очередь приводит к аминокислотной замене (Kim et al., 2001). Поэтому выявленные различия в формировании устойчивости к химиотерапии у больных ХЛПЗ с разными генотипами в 26 экзоне могут быть результатом сцепления с полиморфизмами, приводящими к изменению структуры и функции белка.

Таблица 2

Ассоциация полиморфных вариантов GSTP1, MDR1 и MRP1 с эффектом от лечения у больных ХЛПЗ

Полимор-физм	Гено-тип	НО* на ХТ, n	ЕО* на ХТ, n	ОШ	p
A313G (экзон 5)	AA	19	36	0,43	0,04
	AG	26	19	2,39	0,04
	GG	5	6	1,02	1
C341T (экзон 6)	CC	18	32	0,88	0,95
	CT	6	11	0,92	0,88
	TT	1	0	1,79*	1
C6+139T (интрон 6)	CC	4	5	3,6	0,18
	CT	5	14	1,38	0,74
	TT	3	22	0,29	0,16
С1236T (экзон 12)	CC	4	5	3,6	0,18
	CT	5	14	1,38	0,74
	TT	3	22	0,29	0,16
G2677T (экзон 21)	GG	4	18	0,64	0,74
	GT	1	16	0,14	0,08
	ТТ	7	7	6,8	0,0084
	TT/GG			0,92	0,99
C3435T (экзон 26)	CC	4	18	0,64	0,74
	CT	1	18	0,12	0,04
	TT	7	5	10,08	0,002
	TT/CC			6,3	0,02
A1218+8G (интрон 9)	AA	5	5	2,4	0,42
	AG	5	11	0,55	0,68
	GG	0**	1	1,6	1
T1684C (экзон 13)	TT	0	0
	TC	1	6	0,26	0,37
	CC	9	14	3,86	0,37
C2461-30G (интрон 18)	CC	0	0
	CG	2	6	0,58	0,68
	GG	8	14	1,71	0,68

* НО на ХТ - нет ответа на химиотерапию, ЕО на ХТ - есть ответ на химиотерапию; **- ОШ при допущении единицы в ячейке мутантной гомозиготы в группе чувствительных к химиотерапии

Частоты исследованных аллелей гена MRP1 достоверно не отличались в группе с наличием ответа на лечение и в группе больных, устойчивых к лечению. При анализе ассоциации различных генотипов с формирование устойчивости к лечению у больных ХЛПЗ не было выявлено каких-либо достоверно значимых ассоциаций (табл.2).

На сегодняшний день существуют лишь предположения о том, каким образом однонуклеотидные замены могут влиять на развитие предрасположенности к онкологическим заболеваниям. Одной из гипотез является предположение о том, что аллель - специфические различия в укладке РНК могут влиять на экспрессию генов, участвуя, например, в транскрипции, сплайсинге или процессинге (Le Hir H., et al., 2003). Возможно, также, что некоторые однонуклеотидные замены повышают стабильность мРНК, что в последствие приводит к повышенной экспрессии белка. Но, тем не менее, молекулярные механизмы влияния однонуклеотидных замен на функцию Р-ликопротеина и MRP до сих пор остаются неизвестными.

Однако, полиморфизм в индивидуальных генах незначительно увеличивает риск развития заболевания или формирования устойчивости к химиотерапии. Комбинация вариантов аллелей, в том числе и с аллелями других генов, учавствующих в детоксификации ксенобиотиков, вероятно, увеличит эффективность оценки риска. Такой пример увеличения риска не ответить на лечение был продемонстрирован для комбинации генотипов 21 и 26 экзона гена MDR1. Кроме того, неправильно было бы рассматривать полиморфизм гена как единственный механизм формирования различной чувствительности к заболеваниям. Также нужно исследовать экспрессию генов и функциональную активность изучаемых белков, таким образом формируя системный подход к проблеме.

Функциональная активность P-гликопротеина в лимфоцитах контрольной группы и у больных неходжкинскими лимфомами и анализ ассоциации с полиморфизмом гена MDR1

Была проанализирована связь функциональной активности Р-гликопротеина с различными физиологическими и клиническими параметрами: полом, возрастом, степенью злокачественности, схемами лечения, чувствительностью к химиотерапии, а также с наиболее распространенными полиморфизмами гена MDR1.

Не было получено статистически достоверной ассоциации функциональной активности Р-гликопротеина с полом и корреляции с возрастом ни в контрольной группе (r=0.03, p=0.86), ни у больных НХЛ (r=-0.07, p=0.56).

При анализе активности Р-гликопротеина у больных НХЛ выявлена достоверно (р=0,02) более высокая активность по сравнению с группой здоровых.

Рис. 3. Функциональная активность Р-гликопротеина (Е_Rh123) в лимфоцитах в контрольной группе (n=49) и у больных хроническими лимфопролиферативными заболеваниями (n=76).

При анализе активности Р-гликопротеина у больных НХЛ с разной степенью злокачественности, определенной на основании результатов гистологического исследования биоптатов лимфоузлов, была выявлена связь повышения уровня функциональной активности с увеличением степени злокачественности опухоли (р=0,01) (рис. 4). Попарное сравнение групп показало, что в группе больных с высокой степенью злокачественности уровень активности Р-гликопротеина достоверно (р=0,009) выше, по сравнению с группой больных с низкой степенью злокачественности.

Размещено на http://www.allbest.ru/

Размещено на http://www.allbest.ru/

Рис. 4. Функциональная активность Р-гликопротеина (Е_Rh123) в лимфоцитах больных неходжкинскими лимфомами с разной степенью злокачественности опухоли.

Данные об активности Р-гликопротеина у леченых больных НХЛ были проанализированы в зависимости от схемы лечения. Была выявлена тенденция к увеличению функциональной активности Р-гликопротеина при усилении агрессивности химиотерапии (рис. 5).

Размещено на http://www.allbest.ru/

Размещено на http://www.allbest.ru/

Рис. 5. Функциональная активность Р-гликопротеина (Е_Rh123) у больных лимфопролиферативными заболеваниями в зависимости от схемы лечения.

При анализе взаимосвязи между активностью Р-гликопротеина и эффектом от лечения больные были разделены по клиническим признакам на две группы. В группу больных, чувствительных к химиотерапии, были включены больные НХЛ, у которых наблюдалась стабилизация, частичная ремиссия или продолжительная ремиссия. В группу больных, устойчивых к химиотерапии, были включены больные НХЛ, у которых ответ не достиг уровня стабилизации (имелось прогрессирование).Больные, чувствительные к химиотерапии, имеют более низкий уровень функциональной активности Р-гликопротеина по сравнению с больными, которые устойчивы к химотерапии (рис. 6), хотя различия не были достоверными

Размещено на http://www.allbest.ru/

Размещено на http://www.allbest.ru/

Рис. 6. Функциональная активность Р-гликопротеина (Е_Rh123) у больных лимфопролиферативными заболеваниями в зависимости от эффекта от лечения (в группах чувствительных и устойчивых к химиотерапии).

При анализе связи функциональной активности Р-гликопротеина и полиморфизмов гена MDR1 не было выявлено достоверных ассоциаций ни с одним генотипом ни у больных НХЛ, ни в контрольной группе здоровых (рис. 7-10). Интересно отметить, что несмотря на отсутствие достоверных связей, все носители гетерозигот как здоровые, так и больные НХЛ имели более низкий уровень активности Р-гликопротеина.

Функциональная активность MRP в лимфоцитах контрольной группы и у больных неходжкинскими лимфомами и анализ ассоциации с полиморфизмом гена MRP1

Анализ связи функциональной активности MRP с полом не выявил ассоциации активности с возрастом, а также показал отсутствие достоверных корреляций с возрастом как в контрольной группе: так и у больных неходжкинскими лимфомами

Не было получено статистически достоверной ассоциации функциональной активности MRP1 с полом и корреляции с возрастом ни в контрольной группе: r=-0.002, p=0.99 (n=29), ни у больных НХЛ: r=0.12, p=0.51 (n=31).

Анализ функциональной активности MRP1 в контрольной группе и у больных НХЛ показал достоверно (р=0,01) более высокий уровень активности в группе больных (рис.11).

Изучить связь уровня функциональной активности MRP с эффектом от лечения и прогрессией опухоли не представлялось возможным, так как большую часть исследованых больных составляли нелеченые больные.

При анализе связи функциональной активности MRP1 и полиморфизма гена MRP1 ни с одним генотипом не было выявлено достоверных ассоциаций ни у больных, ни в контрольной группе (рис. 12-14), хотя было выявлено, что уровень функциональной активности белка снижается с увеличением количества мутантных аллелей в гене MRP1 во всех изученных полиморфизмах.

Таким образом, результаты исследования показали, что генетический полиморфизм может быть важным фактором, определяющим как предрасположенность к лимфопролиферативным заболеваниям, так и устойчивость к лекарственной терапии. Различные однонуклеотидные замены в гене могут приводить к изменению уровня экспрессии генов, структуры и функции белков, поэтому важно изучать связь полиморфизмов генов GSTP1, MDR1 и MRP1 с функциональной активностью белков, кодируемых этими генами. В нашем исследовании не было выявлено достоверной ассоциации уровня активности Р-гликопротеина и MRP с исследованными полиморфизмами их генов. Также не получено связи активности Р-гликопротеина с ответом на лечение. Известно, что в формировании лекарственной устойчивости принимают участие и другие транспортные белки. Совместное функционирование нескольких белков может приводить к увеличению выведения химиопрепаратов из клетки и, как следствие, к возникновению устойчивости к лечению. Сочетание различных механизмов лекарственной устойчивости в одних и тех же клетках, влияние индивидуального генотипа больного и разнообразие методов исследования определяют необходимость дальнейших исследований роли различных механизмов в возникновении множественной лекарственной устойчивости опухолей различной этиологии. Выделение групп риска по устойчивости к химиотерапии в соответствии с полученными данными поможет разработать индивидуализированные схемы фармакологической терапии с учетом известной устойчивости к используемым лекарственным средствам.

Выводы

1. У европеоидов Западной Сибири полиморфизмы гена GSTP1 в 6 экзоне (C341T) и гена MDR1 в 26 экзоне (C3435T) сязаны с хроническими лимфопролиферативными заболеваниями:

- с предрасположенностью к развития заболеваний ассоциированы генотипы 341СТ (ОШ=2.78, р=0.01) и 3435СС (ОШ=2.26, р=0.04);

- с устойчивостью к заболевания ассоциированы генотипы 341СС (ОШ=0.41, р=0.02) и 3435ТТ (ОШ=0.54, р=0.04).

2. Для формирования лекарственной устойчивости у больных хроническими лимфопролиферативными заболеваниями значимыми являются полиморфизмы в 5 (A313G) экзоне гена GSTP1, 21 (G2677T) и 26 (C3435T) экзонах гена MDR1: - с устойчивостью к химиотерапии ассоциированы генотипы 313АG (ОШ=2.39, р=0.04), 2677ТТ (ОШ=6.8, р=0.008) и 3435ТТ (ОШ=10.08, р=0.002), и комбинация гентипов 2677ТТ/3435ТТ (ОШ=17.73, р=0.00045);

- с чувствительностью к химиотерапии ассоциированы генотипы 313АА (ОШ=0.43, р=0.04) и 3435СТ (ОШ=0.12, р=0.04).

3. Уровни функциональной активности Р-гликопротеина и MRP в лимфоцитах периферической крови у больных неходжкинскими лимфомами выше, чем в контрольной группе, и активность Р-гликопротеина связан со степенью злокачественности опухоли: достоверно более высокий уровень активности имеют больные с высокой степенью злокачественности.

4. Уровень функциональной активности Р-гликопротеина в лимфоцитах периферической крови не является показателем для прогноза устойчивости к химиотерапии у больных лимфопролиферативными заболеваниями: результат химиотерапии не зависит от активности Р-гликопротеина.

5. Ассоциации уровней функциональной активности P-гликопротеина и MRP1 с полиморфизмами С6+139T C1236T, G2677T, C3435T гена MDR1 и T1684C, A1218+8G, C2461-30G гена MRP1 соответственно не выявлены ни в контрольной группе и ни у больных неходжкинскими лимфомами.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Воронцова Е.В., Гришанова А.Ю., Горева О.Б., Сафронова О.Г., Мухин О.В., Домникова Н.П., Ляхович В.В. Полиморфизм гена GSTP1 у больных хроническими лимфопролиферативными заболеваниями: оценка связи с экспрессией GST и лекарственной устойчивостью. // Бюлл. эксп. биол.мед. - 2002. - Прил.1. - С.65-67.

2. Горева О.Б., Гришанова А.Ю., Мухин О.В., Домникова Н.П., Ляхович В.В. Возможный прогноз эффективности химиотерапии больных лимфопролиферативными заболеваниями в зависимости от G2677T и C3435T полиморфизмов гена MDR1. // Бюлл. экспер. биол. мед. - 2003. - Т. 136. - № 8. - С. 209-212.

3. Горева О.Б., Гришанова А.Ю., Мухина О.В., Домниковой Н.П., Ляхович В.В. «Полиморфизмы C1236Т и C6+139Т гена MDR1 в Российской популяции: исследование ассоциаций с предрасположенностью к лимфопролиферативным заболеваниям и устойчивостью к химиотерапии».// Бюлл. экспер. биол. мед. -2004. - Т. 138. - № 10. - С. 454-457.

4. Grishanova A.Y., Vorontsova E.V., Goreva O., Lyakhovich V.V GSTP1 gene polymorphism and expression in patients with lymphoproliferative disease: relation to drug resistance. // International J. Cancer. - 2002. - Suppl 13. - P.403-404.

5. Воронцова Е.В., Гришанова А.Ю., Горева О.Б. Полиморфизм и экспрессия гена GSTP1 у больных лимфопролиферативными заболеваниями. // Труды 1 международного симпозиума «Стресс и экстремальные состояния», Сателлитный симпозиум «Новые технологии в медицине и биологии третьего тысячелетия» Кара-Даг, Феодосия (Крым), Украина, 5-14 июня 2002 года, С. 99-100.

6. Grishanova A.Yu., Vorontsova E.V., Goreva O.B., Lyakhovich V.V. GSTP1 gene polymorphism and expression in patients with lymphoproliferative disease: relation to drug resistance. // 18^th International Cancer Congress, 30 June-5 July 2002, Oslo, Norway, Abstr. N 854.

7. Goreva O., Grishanova A., Vorontsova E., Lyakhovich V. Gstp1 gene polymorphism and expression in patients with non-Hodgkin's lymphoma and chronic lymphocytic leukaemia: relation to drug resistance. // European Scientific Conference: Understanding the Genome: Scientific Progress and Microarray Technology, November 29 - December 1 2002, Genova, Italy, Abstr.

8. Goreva O., Grishanova A., Vorontsova E., Lyakhovich V. Genetic polymorphism of glutathione S-transferase P1 and sensitivity to chemotherapy of patient with lymphoid malignances. // 37^thAnnual Scientific Meeting: European society for clinical investigation. The pathophysiology of diseases: from bench to bedside, 2 - 5 April 2003, Verona, Italy, Abstr.

9. Goreva O.B., Grishanova A.Yu., Lyakhovich V.V. Allelic frequency of single nucleotide polymorphisms in MDR1 gene in patients with Non Hodgkin's Lymphomas. // 8^th Congress of the European Hematology Association, 2003, Lyon, France, http://eurocongres.com/eha2003/eha_scientific.html, Poster session 1: Non Hodgkin's Lymphoma, abstract nr.: 0330. 12-15 June, 2003.

10. Горева О.Б., Гришанова А.Ю., Мухин О.В., Домникова Н.П., Ляхович В.В. Полиморфизмы G2677T и C3435T гена MDR1 и устойчивость к химиотерапии больных лимфопролиферативными заболеваниями. // Российско-Норвежская конференция по вопросам гематологии, 2003, г. Санкт-Петербург, 4-7 сентября 2003 года, С. 71-72, 133-134.

11. Горева О.Б., Гришанова А.Ю., Мухин О.В., Домникова Н.П., Ляхович В.В. Генетический полиморфизм MDR1 у здорового населения Западной Сибири и у больных лимфопролиферативными заболеваниями. // III Конференция молодых ученых России с международным участием «Фундаментальные науки и пргресс клинической медицины», Москва, 20-24 января 2004, с.75.

12. Горева О.Б., Гришанова А.Ю. Анализ полиморфизма гена MRP1 у европеоидов Западной Cибири. // 8-ая Международная Пущинская школа-конференция молодых ученых «Биология - наука XXI века», Пущино, 17-21 мая 2004, с. 7.

13. Goreva, O.B., Grishanova, A.Yu., Mukhin O.V., Domnikova N.P., Lyakhovich, V.V. Association of MDR1 polymorphisms with drug resistance risk in patients with lymphoproliferative disorders. // 9^th Congress of the European Hematology Association, 2004, Geneva, Switzerland http://eurocongres.com/eha2004/eha_scientific.html, Poster session 1: Non Hodgkin's Lymphoma, abstract nr.: 517, 10-13 June, 2004.

14. Goreva, O.B., Grishanova, A.Yu., Lyakhovich, V.V. Frequency of MRP1 genetics polymorphisms in Russian population. // 15^th European Students' Conference for future doctors and young scientists, Berlin, Germany, http://esc-berlin.com, 19-23 October, 2004, p.97.

15. Шмелева А.В., Горева О.Б. Роль генетического полиморфизма GSTP1, MDR1, MRP1 в предрасположенности к острому лимфобластному лейкозу у детей. // Международный молодежный научный Форум «Ломоносов-2005», Москва, 12-15 апреля 2005, сборник тезисов XII Международной научной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Ломоносов» - Т. II. - С. 494 - 495.

16. Горева О.Б., Мельникова Е.В., Шмелева А.В. «Полиморфизм GSTP1, MDR1, MRP1 и функциональная активность Р-гликопротеина и MRP у детей с острым лимфолейкозом». // Региональная конференция молодых ученых-окологов «Актуальные вопросы экспериментальной и клинической онкологии», 20 апреля 2006, Томск, с. 14-15.

17. Goreva O.B., Grishanova, A.Y., Shmeleva A.V., Lyakhovich, V.V. Genetic polymorfhism of glutathione S-transferase P1 in childhood acute lymphoblastic leukemia. // 13^th International Student Congress of Medical Sciences, Groningen, the Netherlands, 14-17 June, 2006, p.232.

18. Goreva O.B., Grishanova A.Yu., Lyakhovich V.V Genetic polymorphism of GSTP1, MDR1, MRP1 and susceptibility to lymphoid malignancies. // Совместная российско-американская конференция по проблемам гематологии и трансплантации костного мозга, 21-23 июня 2006, рабочее совещание по проблемам клеточной терапии 24 июня, 2006, с. 92.

Список используемых сокращений

CYP - цитохром Р450

GSTP1 - ген, кодирующий глутатион-S-трансферазу P1

MDR1 - ген, кодирующий Р-гликопротеин

MRP1 - белок, ассоциированный с множественной лекарственной устойчивостью

MRP1 - ген, кодирующий белок MRP1

p - уровень значимости различий

АВС - семейство АТФ связывающих белков

АТФ - аденозинтрифосфат

МЛУ - множественная лекарственная устойчивость

НХЛ - неходжкинские лимфомы

ОШ- отношение шансов

ПАУ-полициклические ароматические углеводороды

ХЛЛ - хронический лимфобластный лейкоз

ХЛПЗ - хронические лимфопролиферативные заболевания

ХТ- химиотерапия

Размещено на Allbest.ru