Исследование возможностей использования индикатора лакмоида в качестве экспресс-диагностикума при выявлении изменений рН влагалищных выделений

Размещено на http://www.allbest.ru/

Исследование возможностей использования индикатора лакмоида в качестве экспресс-диагностикума при выявлении изменений рН влагалищных выделений

Актуальность проблемы

кислотный щелочной влагалище лакмоид

Влагалищный рН - это показатель кислотно-щелочного баланса среды влагалища женщины детородного возраста, выраженный в условных единицах измерения. Нормальный рН влагалища - величина стабильная, колеблется от 3.8 до 4.6, составляя в среднем 4.0-4.2. Кислотно-щелочной баланс зависит от влагалищной микрофлоры. Нормальная микробиота представлена преимущественно лактобациллами в высокой концентрации (10⁷ и выше),выделяющими молочную кислоту и создающими кислую среду. В небольшом количестве обнаруживаются стрептококки, бактероиды, энтеробактрии, грибы. В очень маленьких количествах (меньше 10⁴) обнаруживаются условно-патогенные микроорганизмы - микоплазмы, уреаплазмы, грибы рода кандида, гарднереллы [3].

Если преобладают патологические бактерии, показатель кислотно-щелочного баланса либо снижается, либо повышается, вплоть до развития щелочной среды. Эта особенность была отмечена в 80-годы 20 века, когда рН влагалищной среды стали использовать для диагностики вначале бактериального вагиноза, а потом и других заболеваний влагалища [3].

В настоящее время измерение рН влагалищных выделений является одним из основных диагностических критериев состояния влагалищной микробиоты. Изменение кислотности влагалищного содержимого - маркер целого ряда гинекологических заболеваний, таких как анаэробный вагиноз, аэробный вагинит, кандидоз, трихомониаз. Характерно, что кислотность влагалищный выделений меняется значительно раньше, чем появляются другие симптомы заболевания. Также достаточно часто изменение кислотности - единственное клиническое проявление болезни. Таким образом, раннее выявление изменения кислотности приведет к ранней диагностике, а значит, и своевременному началу лечения, что важно, как для медицинской (сохранение репродуктивного здоровья), так и для социальной (снижение стоимости лечения) стороны проблемы [1, 2].

Наиболее частой причиной нарушения кислотно-щелочного равновесия во влагалище является бактериальный (или анаэробный) вагиноз. Он встречается, по разным данным, от 10 до 70% женщин репродуктивного возраста [1,2,3] Это инфекционное невоспалительное заболевание, характеризующееся резким снижением или отсутствием лактофлоры и её заменой на полимикробные ассоциации анаэробов. Превалируют в этой ассоциации гарднереллы (отсюда старое название заболевания - гарднерелез), концентрация которых достигает 10⁹--10¹¹ КОЕ/мл ГЭ/мл [1] вагинального отделяемого. Многообразие различных микроорганизмов, участвующих в возникновении бактериального вагиноза, объясняет термин «бактериальный», а в связи с отсутствием в отделяемом влагалища лейкоцитов -- клеток, ответственных за развитие воспалительной реакции, произошло изменение термина «вагинит» на термин «вагиноз». Несмотря на целый ряд серьезных акушерских и гинекологических осложнений (вплоть до бесплодия и развития рака шейки матки), это заболевание, чаще всего, протекает почти (или совсем) бессимптомно. В некоторых случаях пациентку беспокоит лишь неприятный запах из влагалища, чаще всего проявлений заболевания не наблюдается. Клиническая диагностика заболевания, в принципе, несложна, она основывается на обнаружении при бактериоскопическом исследовании так называемых «ключевых клеток» и выявлении повышения рН влагалищных выделений, которое непременно всегда сопровождает баквагиноз.

pH-метрию можно проводить непосредственно во влагалище, с выделениями, взятыми на поверхность влагалищного зеркала или в вагинальный тампон, на предметном стекле. Хочется особо подчеркнуть, что при некоторых, вполне физиологических условиях рН слизи может меняется. Чаще всего это связано:

- с менструацией, причем не только непосредственно в критические дни, но и за 2-3 дня до или после них;

- с половым актом, после которого происходит депонирование спермы в сводах влагалища и кислотно-щелочной баланс резко меняется в сторону защелачивнияминимум на 2-3 суток;

- с использованием различных лекарственных препаратов в виде влагалищных суппозиториев; наиболее активно меняют рН влагалищной среды антибиотики и протовокандидозные препараты, кроме того, механизм действия некоторых лекарственных средств заключается в изменении кислотно-щелочного равновесия (препараты на основе молочной, ацетилсалициловой кислот). При наличии этих условий измерение рН влагалища не проводится во избежание ложных результатов.

Наиболее часто для этой цели используют индикаторную рН бумагу или специальные рН-метры, существуют тесты для самостоятельного проведения рН-метрии в домашних условиях.

Гигиеническая прокладка, снабженная индикатором чистоты влагалищных выделений, предназначенная для ежедневного использования явилась бы решением проблемы экспресс-диагностики целого ряда серьезных гинекологических заболеваний. Наличие в ней тест-системы, реагирующей на изменение кислотности влагалищного содержимого, будет свидетельствовать о развитии гинекологического заболевания и послужит сигналом о необходимости обратиться за медицинской помощью по поводу более углубленного обследования. В настоящее время аналогов вышеназванного изделия не имеется. Однако существует достаточно много экспресс-тестов, предназначенных для широкого использования в повседневной жизни (различные тесты на беременность, овуляцию, подтекание околоплодных вод у беременны). Главное достоинство предлагаемого исследования - совмещение ежедневного гигиенического ухода, который совершает каждая женщина, с одновременной экспресс-диагностикой.

Для предлагаемого типа диагностики необходимо нанесение на прокладку индикатора. Предполагается, что оптимальный индикатор должен быть достаточно чувствителен к минимальному изменению рН среды в диапазоне 3-6, а также безопасным (нетоксичным и гипоаллергенным).

Также, для нанесения на изделия медицинского назначения необходимым условием является растворимость индикатора в нетоксичном, гипоаллергенномсоединении, препятствующем быстрому высыханию раствора индикатора. В качестве растворителя для индикатора, обладающего описанными свойствами, нами был выбран глицерин (1,2,3-пропантриол).

В качестве индикатора нами был выбран лакмоид (C₁₂H₁₀N₂O₃). Число переходов окраски: 1. Интервал pH перехода: 4.4 - 6.4, окраска раствора изменяется от красной до синей [4]. Для определения и визуализации изменения цвета индикаторы были приготовлены буферные растворы (Таблица 1). Буферные растворы были приготовили с использованием рабочих эталонов рН 3-го разряда СТ-рН-04.3 (состав фиксаналов указан в Таблице 1), кроме раствора с pH = 5,00, который готовился по следующей методике: 10,128 г лимонной кислоты C₆H₈O₇·H₂O и 3,920 г гидроксида натрия NaOH.

Таблица 1. Состав фиксаналов для приготовления буферных растворов

В соответствии с ГОСТ 4919.1-77 «Реактивы и особо чистые вещества. Методы приготовления растворов индикаторов» был приготовлен индикатор сравнения (эталон). На просвет раствор имел фиолетовую, почти черную окраску (Рис.1).

Рис. 1. Лакмоид, приготовленный в соответствии с ГОСТ 4919.1-77 (эталон)

В соответствии с характеристиками индикатора, переход осуществляется между между рН=4 и рН=6,4 как и ожидалось, в рабочем растворе с рН=5 индикатор окрашивается в фиолетовый цвет (рис. 2).

Рис. 2. Лакмоид, приготовленный в соответствии с ГОСТ 4919.1-77 (эталон) в растворе с рН=5.

Далее было взято 10 капель индикатора (эталон), в которые постепенно добавлялись растворы с рН=4,01 и рН=6,86 до изменения окраски индикатора. В Таблице 2 представлены результаты видимых изменений индикатора при добавлении определенных количеств этих растворов.

Таблица 2. Изменение цвета раствора лакмоида (эталона, приготовленного в соответствии с ГОСТ 4919.1-77) при различных значения рН

Далее было выбрано 2 способа приготовления раствора индикатора в глицерине:

1) 0,05 г лакмоида + 100 мл глицерина (ч.д.а., ГОСТ 6259-75);

2) 0,05 г лакмоида + 1 мл этилового спирта (95%) далее раствор доводят глицерином до общего объема 50 мл (глицерин - ч.д.а., ГОСТ 6259-75). Надо отметить, что лакмоид достаточно плохо растворяется в глицерине. Раствор индикатора, приготовленного 1 способом на просвет имел малиновую с красноватым отливом окраску (рис. 3).

Рис. 3. Окраска раствора лакмоида, приготовленного 1 способом.

При рН>6,4, индикатор был очень чувствительным. Даже небольшие количества воды окрашивали индикатор в яркий синий цвет. Как и в случае с эталоном, в растворе с рН=5 индикатор, приготовленный как 1, так и 2 способом, окрашивался в фиолетовый цвет. Однако, лакмоид намного хуже растворяется в глицерине (1 способ), чем в этиловом спирте (2 способ).

Далее было взято 5 капель индикатора (приготовленного 1 способом), в которые постепенно добавлялись растворы с рН=4,01 и рН=6,86 до изменения окраски индикатора. В Таблице 3 представлены результаты видимых изменений индикатора при добавлении определенных количеств этих растворов. Также проводилось сравнение окраски индикатора, приготовленного 1 способом с эталоном сравнения. Изменения окраски были идентичны.

Таблица 3. Изменение цвета раствора лакмоида, приготовленного 1 способом при различных значения рН

Раствор индикатора, приготовленного 2 способом имеет такую же окраску, как и раствор, приготовленный 1 способом, но с более темным, насыщенным оттенком.

Далее было взято 5 капель индикатора (приготовленного 2 способом), в которые постепенно добавлялись растворы с рН=4,01 и рН=6,86 до изменения окраски индикатора. В Таблице 4 представлены результаты видимых изменений индикатора при добавлении определенных количеств этих растворов.

Таблица 4. Изменение цвета раствора лакмоида, приготовленного 2 способом при различных значения рН

Выводы

1) Для поставленных задач исследования предпочтителен индикатор, чувствительный к рН<4 и рН>6,4. Лакмоид чрезвычайно чувствительны к рН>6,4, в то время как при рН<4 визуализация изменений затруднительна в виду окраски самого индикатора в глицерине (малиновая окраска).

2) Лакмоид намного хуже растворяется в глицерине (1 способ), чем в этиловом спирте (2 способ). Индикатор, приготовленный 2 способом более чувствителен к изменению рН.

3) Совокупность низкой чувствительности лакмоида в требуемом интервале рН и его низкой растворимости в глицерине не позволяет рекомендовать индикатор для дальнейших исследований. В нашей дальнейшей работе с использованием разработанной методике будут исследованы свойства других индикаторов.

Список литературы

кислотный щелочной влагалище лакмоид

1. Гинекология. Национальное руководство. Краткое издание под ред. Г.М. Савельева, Г. Т. Сухих, И. Б. Манухина. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2013. 704 с.

2. Гинекология. Руководство к практическим занятиям: учебное пособие. [Под ред. В.Е. Радзинского]. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2013. 552 с.

3. Шейка матки, влагалище, вульва: физиология, патология, кольпоскопия, эстетическая коррекция. Руководство для практических врачей. [Под редакцией С. И. Роговской, Е. В. Липовой]. М.: Медиабюро «Статус презенс», 2016. 832 с.

4. Sabnis, R.W. (2008) Handbook of Acid-Base Indicators. CRC Press, New York.

Размещено на Allbest.ru