Токсикологическая характеристика диацетофенонилселенида

Размещено на http://www.allbest.ru

Размещено на http://www.allbest.ru

Введение

Актуальность темы. Исследованиями последних лет установлено, что в жизни животных и человека громадную роль играют микроэлементы. При их недостатке вследствие нарушений физиологических процессов могут развиваться патологические процессы (Я.А. Бабин, 1973; А.П. Авцын, 1991; Г.М. Абдирахманов, А.В.Зайцев, 2004).

Одним из наиболее дефицитных микроэлементов, играющих в организме животных и человека весьма важную биологическую роль, является селен. Селенодефицит отмечается в кормах многих регионов России, что вызывает у сельскохозяйственных животных хронический гипоселеноз, сопровождающийся исхуданием, анемией, нарушением сердечной деятельности, состояния иммунной системы, функций печени, почек, яичников, экссудативным диатезом, снижением активности глутатионпероксидазы в эритроцитах и гранулоцитах, гемолизом эритроцитов (Н.А. Голубкина, А.В. Скальный, Я.А. Соколов, 2002; Т.Н. Родионова, А.Ю. Кутепов, М.Н. Панфилова, 2007).

Для восполнения дефицита селена в ранее животноводстве широко используется селенит натрия. Однако, его токсичность достаточно высокая, что может оказать негативное влияние на организм животных. По этой причине продолжается разработка новых селенсодержащих препаратов, которые должны удовлетворять требования ветеринарных специалистов и сельскохозяйственного производства (А.П. Кудрявцев, 1979; Т.А. Трошина, И.С. Иванов, 2005).

В последнее время создано много новых селенсодержащих препаратов. Одним из них является ДАФС-25 или диацетофенонилселенид, содержащий в своем составе 25 % органически связанного селена. ДАФС-25 синтезирован в НИИ химии СГУ им. Н. Г. Чернышевского. Однако многие стороны его токсического действия на организм животных не изучены. В связи с этим всестороннее изучение токсичности препарата является актуальной и своевременной задачей ветеринарной токсикологии.

Цель и задачи исследований. Целью настоящей работы явилось проведение токсикологической оценки диацетофенонилселенида при разных путях и продолжительности введения животным, а также изучение реакции антиоксидантной системы организма животных в зависимости от применяемой дозы. Для достижения поставленной цели нами были поставлены следующие задачи:

1. Определить острую, хроническую токсичность и кумулятивные свойства селенорганического препарата диацетофенонилселенида при подкожном и внутрижелудочном введении.

2. Оценить влияние диацетофенонилселенида в различных дозах и путях введения на содержание эритроцитов, лейкоцитов периферической крови животных и вывести лейкоцитарную формулу.

3. Определить фармакодинамику селена содержащегося в составе диацетофенонилселенида при различных дозах и способах введения в органах и тканях лабораторных животных.

4. Установить патоморфологические изменения в тканях организма животных при острой и хронической интоксикации селенорганическим препаратом диацетофенонилселенидом.

5. Изучить реакцию антиоксидантной системы защиты организма на введение диацетофенонилселенида в различных дозах и путях

Научная новизна. Впервые проведена токсикологическая характеристика селенорганического препарата ДАФС-25. Установлено, что препарат в дозах 0,05; 0,1 и 0,2 мг/кг массы тела обладает стимулирующим действием на гемопоэз, а в дозах 100 и 200 мг/кг массы тела - ингибирует антиоксидантную систему защиты организма. Впервые выявлены патоморфологические нарушения под действием ДАФС-25 во внутренних органах, которые характеризуются зернистой дистрофией печени, полнокровием легких, отмечено расширение и полнокровие сосудов в почках, увеличением просвета капилляров клубочков, набуханием проксимальных и дистальных канальцев, зернистостью цитоплазмы, кровоизлияниями и зернистой дистрофией миокарда.

Практическая значимость работы. Экспериментально установлено, что токсикологическая характеристика ДАФС-25 позволит избежать отрицательных эффектов при его применении в животноводстве и ветеринарии. По материалам диссертации подготовлены методические рекомендации «Ветеринарная токсикология», которые используются в учебном процессе на факультете ветеринарной медицины Саратовского государственного аграрного университета имени Н.И. Вавилова.

Основные положения, выносимые на защиту:

· ДАФС-25 согласно ГОСТ 12.1.007.76. относится при внутрижелудочном и подкожном введениях относится к третьему классу опасности химических веществ. Средние смертельные дозы (LD50) составили: для белых крыс при подкожном введении - 151,17 мг/кг; при внутрижелудочном введении - 44,85мг/кг живой массы. Основными клиническими признаками острого отравления ДАФС-25 являются - гиподинамия, отказ от корма и питьевой воды, учащение дыхания, коматозное состояние; хронического - отказ от корма и питьевой воды, угнетение, активизация функций потовых желез;

· По величине накопления селена органы животных располагаются в следующем порядке: поджелудочная железа > головной мозг > печень> почки > тонкий кишечник > легкие > желудок > толстый кишечник > скелетные мышцы;

· ДАФС-25 в дозах 25-200 мг/кг массы тела при однократном введении вызывает увеличение уровня гемоглобина на 18,4%, эритроцитов - на 22 % и лейкоцитов - на 18,5% по сравнению с исходным уровнем

· однократное поступление в организм ДАФС-25 в дозе 150 мг/кг при внутрижелудочном введении и 200 мг/кг при подкожном введении система антиоксидантной защиты отвечает увеличением уровня диеновых коньюгатов в плазме крови в 1,8 раза и малонового деальдегида в 1,4 - 2,8 раза по сравнению с исходным уровнем;

· патоморфологические изменения в органах и тканях лабораторных животных при воздействии различных доз ДАФС-25 характеризуются острым катаральным гастритом, отеком легких, при микроскопии тканей паренхиматозных органов - зернистая дистрофия, в почках - гломерулонефрит, при хроническом - в сердечной мышце наблюдались кровоизлияния, а в печени - зернистая дистрофия, лимфоидные инфильтраты из лимфоидных клеток, микронекрозы, в почках - зернистая дистрофия, геморрагический гломерулит.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены, обсуждены и одобрены на международной научной конференции «Токсикозы животных и актуальные проблемы болезней молодняка» (Казань, 2006); Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарной, патологии, физиологии, биотехнологии и селекции животных» (Саратов, 2007); 7 Всероссийской научно-практической конференции «Ветеринарная медицина. Современные проблемы и перспективы развития» (Саратов, 2007); «16-ой Всероссийской научно-методической конференции по патологической анатомии» (Ставрополь, 2007); 8 Всероссийской научно-практической конференции «Ветеринарная медицина. Современные проблемы и перспективы развития» (Саратов, 2008); международной научной конференции «Актуальные проблемы повышения эффективности АПК» (Курск, 2008); 9 Всероссийской научно-практической конференции «Ветеринарная медицина. Современные проблемы и перспективы развития» (Саратов, 2009).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 9 печатных работ, одна - в журнале, рекомендованном ВАК РФ.

1. Материалы и методы исследований

диацетофенонилселенид селен хронический интоксикация

Исследования по теме диссертации проводились в период 2006-2008 г.г. на кафедре физиологии и фармакологии и кафедре патологической анатомии и патологической физиологии ФГОУ ВПО Саратовского государственного аграрного университета имени Н.И. Вавилова.

В опытах по определению токсикологических свойств ДАФС-25 использовано 18 кроликов и 161 белая крыса.

Острую токсичность и кумулятивные свойства ДАФС-25 при подкожном и внутрижелудочном введении изучали на самцах белых крыс живой массой 180-200 г. Препарат растворяли в подсолнечном масле. Контрольным животным в эквивалентных объемах вводили подсолнечное масло.

Наблюдение за животными ввели в течение 14 дней.

Средняя смертельная доза (LD50) рассчитывалась по методу Кербера (1931). Полученные величины LD50 классифицировали по 4 классам токсичности химических веществ по ГОСТ 12.1.007.76.

При изучении кумулятивных свойств использовали метод «субхронической токсичности», предложенный Лиммом (1961).

Для исследования хронической токсичности были использованы клинически здоровые белые крысы и кролики живой массой 2,5-2,7 кг. Животных в группы подбирали по принципу аналогов.

Патоморфологические изменения были изучены на белых крысах и кроликах при острой и хронической интоксикации препаратом ДАФС-25; при этом проводили гистологическое и гистохимическое исследования по общепринятым методикам.

Количество лейкоцитов и эритроцитов определяли по общепринятым методикам с помощью камеры Горяева. Уровень гемоглобина определяли с помощью гемометра типа ГС-3 (А.А. Кудрявцев, Л.А. Кудрявцева, Т.И. Привольев, 1969).

Содержание селена в тканях определяли флуорометрическим методом (И.И. Назаренко, В.В. Ермаков, Т.М.Гусейнов, 1975).

Влияние ДАФС-25 на перекисное окисление липидов организма определяли по уровню содержания малонового диальдегида в плазме крови тиобарбитуровым методом (А.И. Коробейникова, 1989), содержанию диеновых коньюгатов в плазме крови и спектрометрическим методом. (Л.А. Романова Д.В. Стальная, 1977).

Антиоксидантную обеспеченность организма оценивали по активности фермента каталазы в плазме крови и гомогенате тканей (М.А.Королюк, 1988).

Цифровой материал обработали статистически с вычислением критерия Стьюдента на персональном компьютере с использованием стандартной программы вариационной статистики Microsoft Excel.

2. Результаты исследований

Определение острой токсичности и кумулятивных свойств ДАФС-25

Острая токсичность ДАФС-25 была изучена на белых крысах при подкожном и внутрижелудочном введениях.

Клиника токсического действия ДАФС-25 у белых крыс, независимо от пути введения, сопровождалась следующими симптомами. Животные, получавшие ДАФС-25 в дозах от 25 до 225 мг/кг при подкожном и 10-125 мг/кг при внутрижелудочном введении, течение первых двух часов по пищевому и питьевому поведению мало отличались от крыс контрольной группы (получавшие стерильное подсолнечное масло в соответствующем объеме и способе введения). Через 4-5 часов животные становились угнетенными, малоподвижными, на 6-7 час после введения препарата отказывались от корма и питьевой воды. Дыхание становилось учащенным, активно функционировали потовые железы, и наступало коматозное состояние и смерть. Состояние выживших животных начинало улучшаться на 3-4 сутки наблюдения. Животные оставались малоподвижны в течение 3-4 суток. Пищевая и питьевая активность у белых крыс восстановилась на 5 сутки наблюдения. Адекватная реакция на внешние раздражители проявлялись на 5-6 сутки после введения препарата.

ДАФС-25 вводился в интервале доз 25-225 мг/кг подкожно и 10-125 мг/кг внутрижелудочно. Средние смертельные дозы (LD50) составили: для белых крыс при подкожном введении - 151,17 мг/кг; при внутрижелудочном введении - 44,85 мг/кг живой массы.

Полученные результаты позволяют сделать вывод, о том, что препарат ДАФС-25 можно отнести к третьей группе опасности химических веществ (ГОСТ 12.1.007.76. «Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности»).

Различия в смертельных дозах (LD50) при подкожном и внутрижелудочном введениях можно объяснить тем, что при внутрижелудочном введении высокие концентрации вещества поступают непосредственно в печень, которая является мишенью его токсического действия. При подкожном введении препарата динамика поступления яда в печень несколько иная.

Нами была исследована хроническая токсичность ДАФС-25 на кроликах и белых крысах при различных путях введения.

Белым крысам препарат вводился подкожно в дозах 0,05; 0,1 и 0,2 мг/кг массы тела в течение 3 и 10 суток. Контрольным животным в эквивалентных объемах, вводили стерильное подсолнечное масло. На 4 и 11 сутки проводилась эвтаназия животных.

После введения ДАФС-25 в дозах 0,05; 0,1 и 0,2 мг/кг, подопытные животные в течение 3 и 10 суток наблюдения активно передвигались по клеткам, принимали корм и воду. На внешние раздражители шумы и постукивания реакция крыс и кроликов была на уровне контроля. Шерсть животных была гладкой, блестящей.

В ходе проведения эксперимента было определено кумулятивное действие ДАФС-25 для белых крыс при различных путях введения. Животным вводили препарат подкожно и внутрижелудочно в дозах 1/10 от LD50 и через 4 дня дозу увеличивали в полтора раза.

Средние смертельные дозы (LD50) ДАФС-25 при многократном применении составили при подкожном введении 414,5 мг/кг, а при внутрижелудочном введении 73,03 мг/кг живой массы.

Коэффициент кумуляции составил 2,7 - при подкожном введении и 1,6 - при внутрижелудочном введении. Таким образом, ДАФС-25 обладает кумулятивным действием.

Таким образом, обобщая все выше приведенные данные, можно заключить, что селенорганический препарат ДАФС-25 можно отнести к 3 классу опасности, в дозах 0,05; 0,1 и 0,2 мг/кг препарат вызывает изменения в тканях паренхиматозных органов.

Изучение накопления селена в тканях и органах животных.

Нами было изучено накопление селена в крови и тканях внутренних органов.

Результаты исследований приведены на рисунке 1 и 2.

Рисунок 1. Накопление селена (мкг/г) в тканях внутренних органов павших белых крыс на 1-е сутки после подкожного введения ДАФС-25

Анализируя данные рисунков 1 и 2, представляется возможным отметить следующее: у контрольных животных наибольшее количество селена содержится в печени. Наименьшая концентрация селена была зафиксирована в тканях головного мозга. В остальных органах концентрация селена находилась в пределах 0,029-0,042 мкг/г. Эти данные согласуются с результатами, полученными R.F.Burk et al. (1972).

После подкожного и внутрижелудочного введения селенорганического препарата ДАФС-25, во все сроки наблюдения, в исследованных тканях концентрация селена достоверно повышается. Так, высокая концентрация селена отмечена в тканях головного мозга, где его содержание увеличивалось в 7,5; 8,9 и 5,2 раз при подкожном введении ДАФС-25 в дозах 125; 175 и 200 мг/кг соответственно. При внутрижелудочном введении содержание селена увеличилось в 3,5; 5,7; 7,5 раз при использовании ДАФС-25 в дозах 25; 50 и 125 мг/кг живой массы. Эти данные согласуются с результатами исследований R.F.Burk et al. (1973).

Рисунок 2. Накопление селена (мкг/г) в тканях внутренних органов павших белых крыс на 1-е сутки после внутрижелудочного введения ДАФС-25

Обращает на себя внимание высокое содержание селена в легких. Это можно объяснить процессами выведения излишних количеств селена в виде диметилселенида.

Самая низкая концентрация селена к первым суткам была зафиксирована в скелетной мускулатуре. Это, по-видимому, связанно с тем что селен не успел накопиться в скелетной мускулатуре за малый промежуток времени в связи с гибелью опытных животных.

После внутрижелудочного введения ДАФС-25 высокое содержание селена зафиксировано в стенках желудка, тонкого и толстого отделов кишечника, где концентрация микроэлемента увеличилась в 3,2...7,9 раз по сравнению с исходным уровнем - 0,042 мкг/г.

После подкожного и внутрижелудочного введения ДАФС-25 концентрация микроэлемента увеличилась в 1,5-2 раза и 3,8-5,8 раз соответственно.

Средняя концентрация селена в организме крыс при введении ДАФС-25 увеличивается. Это увеличение носит дозозависимый характер.

На 14 сутки после внутрижелудочного введения препарата по средней величине селена органы и ткани можно расположить в следующей последовательности: скелетная мускулатура > поджелудочная железа > тонкий отдела кишечника > мышца сердца > головной мозг > легкие > толстый кишечник > почки > печень > желудок > кровь.

Накопление и распределение селена в органах и тканях кроликов при введении ДАФС-25 в дозе 0,2 мг/кг представлено на рисунке 3.

Рисунок 3. Накопление селена (мкг/г) в крови и тканях внутренних органов кроликов при введении ДАФС-25 в дозе 0,2 мг/кг

Анализируя данные, представленные на рисунке 3, можно констатировать следующее. У контрольных животных наибольшее количество селена определяется в ткани легкого, а наименьшее - в стенках желудка. Остальные органы и ткани можно расположить в следующем порядке (по убыванию): печень > толстый кишечник > скелетные мышцы > тонкий кишечник > почки > головной мозг > мышца сердца.

Наибольшее накопление селена произошло в ткани желудка. Так, при подкожном введении ДАФС-25 концентрация микроэлемента увеличилась в 5,6 раз (0,175±0,005 мкг/г), а при добавлении препарата в рацион содержание селена возросло в 6,6 раз (0,205± 0,005 мкг/г) по сравнению с контролем. В скелетной мускулатуре концентрация микроэлемента выросла в 4,3 раза при подкожном введении и в 3,1 раза при добавлении ДАФС-25 в корм.

Установлено, что более высокое накопление селена в органах и тканях кроликов происходит при подкожном введении ДАФС-25, чем при введении его вместе с кормом.

Содержание селена в крови и тканях органов после многократного поступления ДАФС-25 в токсических дозах представлено на рисунках 4 и 5. Вводимее дозы составили 151,2; 287,2 и 797 мг/кг при подкожном и 85,2 и 146 мг/кг живой массы при внутрижелудочном введениях.

Рисунок 4. Содержание селена (мкг/г) в тканях внутренних органов белых крыс при многократном подкожном введении ДАФС-25

Рисунок 5. Накопление селена (мкг/г) в тканях внутренних органов белых крыс при многократном внутрижелудочном введении ДАФС-25

Установлено, что содержание селена в печени увеличивается в 1,9; 2,9;4,8 раз после подкожного и 4,4; 5,2 - после внутрижелудочного введения.

Анализируя данные, по содержанию селена в сердечной мышце, можно констатировать следующее. При подкожном и внутрижелудочном многократных введениях токсических доз ДАФС-25 концентрация селена повысилась в 3,4; 4,3; 6,8 и 5,0;7,8 раз относительно контроля.

Концентрация микроэлемента в мышцах увеличилась в 3,2…7,3 раза.

Таким образом, содержание селена в крови и тканях контрольных животных находится в пределах физиологического уровня. При многократном поступлении ДАФС-25 концентрация селена в крови, тканях внутренних органов повышается. Динамика накопления селена зависит от вводимой дозы препарата.

При введении препарата выявляется количественная закономерность накопления селена в тканях внутренних органов и сыворотке крови от дозы препарата.

Влияние ДАФС-25 на уровень гемоглобина, содержание эритроцитов, лейкоцитов и антиоксидантную систему.

Картина крови является симптоматическим отражением патологических процессов, протекающих у животных. Нами было изучено влияние различных доз ДАФС-25 на показатели периферической крови.

Подкожное введение ДАФС-25 в дозах 0,05 и 0,1 мг/кг, в течение трех дней вызвало увеличение содержания эритроцитов в периферической крови на 9,9% (6,07±0,1 1012/л) и 5,6 % (6,36±0,2 1012/л) соответственно по сравнению с контролем (6,02 ± 2,2 1012/л). При введении ДАФС-25 в дозе 0,2 мг/кг уровень эритроцитов снизился на 0,3 % (6,00±0,09 1012/л). Содержание гемоглобина повысилось на 9,8% (112,75±3,37 г/л); 9,6% (112,63±6,37 г/л) и 5,5% (108,4±3,58г/л) при введении ДАФС-25 в дозах 0,05 мг/кг; 0,1 мг/кг и 0,2 мг/кг соответственно, относительно контроля (102,75±2,29 г/л). Количество лейкоцитов при введении препарата в дозах 0,05; 0,1; и 0,2 мг/кг увеличилось на 11,7% (11,4±0,3 109/л); 18,7% (12,11±0,3 109/л); и 8,3 % (11,05±0,6 109/л) против 10,2±0,2 109/л в контроле.

В лейкоцитарной формуле при подкожном введении ДАФС-25 в малых дозах увеличивается содержание базофилов до 3-х раз, эозинофилов в 1,5-2 раза, палочкоядерных нейтрофилов - в 2-3 раза, моноцитов - в 2-4 раза, а количество сегментоядерных нейтрофилов снижалось на 27,5-32%.

В целом полученные результаты свидетельствуют о стимулирующем действии малых доз ДАФС-25 на гемопоэз.

При подкожном введении ДАФС-25 в дозах от 25 до 200 мг/кг наблюдается ингибирующее действие препарата на процессы кроветворения. Количество лейкоцитов оставалось примерно на одном уровне. Однако при введении препарата в дозах 50 и 150 мг/кг происходит повышение количества лейкоцитов примерно на 4% по сравнению с контролем. После внутрижелудочного введения ДАФС-25 количество белых клеток повышается на 11%, а гемоглобина - на 18% по сравнению контрольными животными. Это обусловлено сгущением крови, что согласуется с результатами исследований В.А. Тарабрина (1971).

Для уточнения некоторых механизмов токсического действия ДАФС-25 нами исследованы интенсивность процессов свободнорадикального окисления, активность антиокислительной системы в плазме крови, различных тканях и органах белых крыс.

Исходная концентрация диеновых коньюгатов в сыворотке крови составила 8,73±0,70 нмоль/мл. После введения ДАФС-25 в дозе 200 мг/кг живой массы подкожно и 125 мг/кг живой массы внутрижелудочно через 2 дня содержание в сыворотке крови диеновых коньюгатов увеличилось в 1,8 (15,72±1,25 нмоль/мл) и 1,84 (15,93±0,97 нмоль/мл) раз по сравнению с контролем. Это является неблагоприятным прогностическим признаком, так как распад диеновых коньюгатов приводит к образованию вторичных продуктов перекисного окисления липидов, тем самым, вызывая дальнейшую стимуляцию процессов свободно-радикального окисления.

Содержание малонового диальдегида в сыворотке крови и тканях внутренних органов представлено на рисунке 6.

После введения ДАФС-25 дозах 125 мг/кг внутрижелудочно и 200 мг/кг подкожно уровень малонового диальдегида (МДА) во всех биотканях повысился по сравнению с контролем. Уровень МДА в плазме крови увеличился в 3,23 раза; при введении препарата в дозе 200 мг/кг подкожно и в 4,29 раз - при введении ДАФС-25 в дозе 125 мг/кг внутрижелудочно. Высокий уровень продуктов перекисного окисления липидов в плазме крови свидетельствует об активности патологического процесса и рассматривается как компенсаторная реакция организма.

Рисунок 6. Содержание малонового диальдегида (нмоль/г) в плазме крови и органах белых крыс при смертельном отравлении ДАФС-25

Содержание МДА в ткани печени при подкожном введении ДАФС-25 составило 36,94±3,13 нмоль/г, что в 2,84 раза выше контрольного значения. Внутрижелудочное введение ДАФС-25 в дозе 125 мг/кг вызвало увеличение содержание МДА в 2,01 раза.

Достоверное повышение содержания МДА было отмечено также в тканях почек. Так, концентрация МДА при введении смертельных доз выросла в 1,41 раз при подкожном введении и в 1,44 раза - при внутрижелудочном введении препарата.

Повышению уровня МДА в головном мозге способствует высокое содержание в нем легко окисляемых субстратов, таких, как полиненасыщенные жирные кислоты и катехоламины.

Повышение уровня МДА в сердечной мышце, по-видимому, связано с нарушением структуры мышечных волокон, в результате чего возникает сбой в работе антиоксидантной системы.

Система антиперекисной защиты состоит из ферментативного и неферментативного звеньев.

Нами изучено влияние ДАФС-25 в дозах 125 мг/кг внутрижелудочно и 200 мг/кг подкожно на активность каталазы в плазме крови и тканях внутренних органов белых крыс. На рисунке 7 приведены результаты, характеризующие активность каталазы в тканях и органах белых крыс.

Рисунок 7. Активность каталазы (ммоль/л) в плазме крови и органах белых крыс при смертельном отравлении ДАФС-25

Из результатов, представленных на рисунке 7 видно, что после введения смертельных доз ДАФС-25 активность каталазы повышается.

У контрольных животных наибольшая активность каталазы отмечена в тканях печени, почек и легких. В тканях сердца, желудка, толстого и тонкого кишечника, скелетных мышцах активность каталазы колеблется в интервале 17,00-30,29 ммоль/л. Наименьшая активность фермента зафиксирована в поджелудочной железе. Эти данные согласуются с результатами исследований Ж.И. Абрамова, Г.И. Оксенгендлер (1985); B. Halliwel, J.M.C. Gutteridge (1989); R. Stocker, B. Frei (1991).

После введения ДАФС-25 в дозах 200 и 125 мг/кг живой массы, происходит увеличение активности каталазы в плазме крови концентрация фермента увеличивается в 2,9 и 2,8 раз соответственно. Это является неблагоприятным признаком, свидетельствует о развитии патологического процесса и рассматривается как компенсаторная реакция организма, направленная на ферментативное окисление биогенных аминов и других медиаторов (В.К. Казимирко, В.И. Мальцев, В.Ю. Бутылин, Н.И. Горобец, 2004).

В ткани печени, почек и легких после введения ДАФС-25 в дозах 125 мг/кг внутрижелудочно и 200 мг/кг подкожно активность каталазы достоверно повышается. Увеличение активности каталазы в этих органах, по-видимому, связанно с повышением концентрации вторичных продуктов перекисного окисления липидов.

Обращает на себя внимание повышение активности фермента в желудочно-кишечном тракте. Это, по-видимому, связанно с процессами обезвреживания вторичных продуктов перекисного окисления липидов - малонового диальдегида.

Таким образом, повышение активности фермента каталазы при воздействии смертельных доз ДАФС-25 следует, рассматривать как компенсаторную реакцию организма в условиях повышения (насыщения) организма продуктами ПОЛ.

Полученные нами результаты свидетельствуют о дисбалансе процессов свободнорадикального окисления и антиоксидантной защиты в организме белых крыс при применении селенорганического препарата ДАФС-25.

Патоморфологические изменения в органах и тканях при отравлении ДАФС-25.

Нами были изучены патоморфологические изменения при введении ДАФС-25 в дозах 125 мг/кг подкожно и 200 мг/кг внутрижелудочно.

Нами были установлены следующие изменения. Сердце было увеличено в объеме. Мышца сердца дряблая, неравномерно окрашена, с точечными кровоизлияниями. Легкие ярко-розового цвета. При осмотре печени были обнаружены серые очаги некрозов размером с просяное зернышко. Желудок катарально воспален, на стенках имеются точечные кровоизлияния. Почки увеличены в размере, с кровоизлияниями. При осмотре головного мозга отмечали гиперемию мягкой мозговой оболочки, кровоизлияния.

При микроскопии гистологических препаратов обнаружилось: в миокарде - кровоизлияния, зернистая дистрофия. В почках - сосуды были расширены и полнокровны. Капилляры клубочков расширены. Эпителий канальцев набухший, цитоплазма зернистая. В легких - полнокровие в венах и межальвеолярных капиллярах. В печени - зернистая дистрофия, кровоизлияния.

При введении ДАФС-25 в дозе 0,2 мг/кг подкожно в течение 3 суток и при добавлении в корм в течение 10 суток было установлено: в почках - зернистая дистрофия, геморрагический гломерулит, в просвете канальцев десквамированный эпителий. В сердце - кровоизлияния. В печени обнаружена зернистая дистрофия, лимфоидные инфильтраты из лимфоидных клеток, микронекрозы.

Таким образом, установлено, что при внутрижелудочном введении препарата ДАФС-25 развивается острый катаральный гастрит. В органах грудной и брюшной полостей отмечаются нарушения кровообращения. В паренхиматозных органах дистрофия, в почках гломерулонефрит.

Заключение

Выводы

1. Среднесмертельная доза ДАФС-25 для белых крыс при однократном подкожном введении составляет 151,17 мг/кг; LD16 - 70,76 мг/кг; LD84 - 231,58 мг/кг массы тела, при пероральном - 44,85 мг/кг; LD16 -5,99 мг/кг; LD84 - 83,70 мг/кг живой массы. В соответствии с ГОСТ12.1.007.76 по степени опасности ДАФС-25 относится к 3 классу опасности химических веществ. Его коэффициент кумуляции составляет - 2,7 при подкожном и 1,6 - при внутрижелудочном введении.

2. Токсикодинамика селена содержащегося в составе ДАФС-25, в тканях внутренних органов зависит от пути введения, кратности и дозы препарата. По величине содержания селена в тканях и органах располагаются в следующем порядке: поджелудочная железа > головной мозг > печень> почки > тонкий кишечник > легкие > желудок > толстый кишечник > скелетные мышцы.

3. ДАФС-25 в дозе 50 мг/кг живой массы вызывает увеличение количества эритроцитов на 6%, а при введении доз 100 и 150 мг/кг подкожно происходит снижение количества эритроцитов на 5,7 и 5,3%, количество лейкоцитов увеличилось примерно на 4%. Уровень гемоглобина повысился на 3 - 3,2%. Установлено, что ДАФС-25 в малых дозах обладает стимулирующим действием на систему крови животных. При этом содержание гемоглобина повышается на 18,4%, эритроцитов - на 22 % и лейкоцитов - на 18,5% по сравнению с исходным уровнем; происходят изменения в лейкоцитарной формуле: из периферической крови исчезают базофилы, увеличивается количество палочкоядерных нейтрофилов примерно в 2 раза; снижается число сегментоядерных нейтрофилов на 5,6-17%; появляются миелоциты.

4. Патоморфологическая картина отравления животных ДАФС-25 вводимого в дозах 125 мг/кг внутрижелудочно и 200мг/кг массы тела подкожно характеризуется зернистой дистрофией печени; полнокровием в легких; в почках - расширение и полнокровие сосудов, увеличение просвета капилляров клубочков, набухание проксимальных и дистальных канальцев, зернистость цитоплазмы; кровоизлияния и зернистая дистрофия миокарда.

5. ДАФС-25 в дозах 200 мг/кг при подкожном и 125 мг/кг при внутрижелудочном введении ингибирует антиоксидантную систему защиты организма. При этом, по сравнению с исходным уровнем в плазме крови повышается уровень диеновых коньюгатов в 1,8 раза, а концентрация малонового диальдегида в органах и тканях 1,4-2,8 раза.

Практические предложения

Экспериментально установлено, что токсикологическая характеристика ДАФС-25 позволит избежать отрицательных эффектов при его применении в животноводстве и ветеринарии. По материалам диссертации подготовлены методические рекомендации «Ветеринарная токсикология», которые используются в учебном процессе на факультете ветеринарной медицины Саратовского государственного аграрного университета имени Н.И. Вавилова.

Литература

1. Смирнов, М.И. Токсикология и биологические эффекты ДАФС-25 /М.И. Смирнов, Н.А. Пудовкин, Т.Ю. Поперечнева, А.Ю. Кутепов //Токсикозы животных и актуальные проблемы молодняка: Сб. мат. Международной конф. - Казань, 2006 - С. 192 - 195.

2. Пудовкин, Н.А. Токсичность ДАФС-25 и его кумулятивное действие. /Н.А. Пудовкин, М.И. Смирнов, В.А. Макаров, О.Е. Чикунова //Актуальные проблемы ветеринарной патологии, физиологии, биотехнологии, селекции животных: Сб. мат. Всероссийской конф. - Саратов, 2007. - С. 62 - 64.

3. Пудовкин, Н.А. Патоморфологические изменения при интоксикации препаратом ДАФС-25 у белых крыс /Н.А. Пудовкин, В.А. Макаров //Современные проблемы патологической анатомии, патогенеза и диагностики болезней животных: Сб. мат. 16-й Всероссийской конф. - Ставрополь, 2007. - С. 279 - 281.

4. Пудовкин, Н.А. Влияние различных доз ДАФС-25 на морфологию периферической крови животных /Н.А. Пудовкин, М.И. Смирнов, В.А. Макаров, О.Е. Чикунова //Ветеринарная медицина. Современные проблемы и перспективы развития: Мат. VII Всероссийской науч.-практ. конф. - Саратов, 2007. - С. 294 - 297.

5. Смирнов, М.И. Влияние ДАФС-25 на белковый обмен /М.И. Смирнов, Т.Ю. Поперечнева, Н.А.Пудовкин //Ветеринарный врач. - 2007 - №4 - С. 50-52.

6. Смирнов, М.И. Динамика накопления селена в крови и тканях внутренних органов кроликов при введении ДАФС-25 /М.И. Смирнов, Н.А. Пудовкин, А.Ю. Кутепов, В.А. Макаров //Актуальные проблемы повышения эффективности АПК: Сб. мат. Международной конф. - Курск, 2008 - С. 232 - 235.

7. Васильев, В.Ю. Селен в жизни животных и человека /В.Ю. Васильев, Т.Д. Искра, Н.А. Пудовкин, А.Ю. Кутепов //Ветеринарная медицина. Современные проблемы и перспективы развития: Мат. VIII Всероссийской науч.-практ. конф. - Саратов, 2008. - С. 94 -98.

8. Пудовкин, Н.А. Кумулятивное действие ДАФС-25 /Н.А. Пудовкин, М.И. Смирнов, Т.Ю. Поперечнева, В.А.Макаров //Ветеринарная медицина. Современные проблемы и перспективы развития: Мат. VIII Всероссийской науч.-практ. конф. - Саратов, 2008. - С. 331 -335.

9. Пудовкин, Н.А. Хроническая токсичность ДАФС-25 для лабораторных животных / Н.А. Пудовкин, Т.Ю. Поперечнева, А.Ю. Кутепов //Ветеринарная медицина. Современные проблемы и перспективы развития: Мат. IX Всероссийской науч.-практ. конф. - Саратов, 2009. - С. 285 -288.

Размещено на Allbest.ru