Кристаллограммы культур, выделенных из кожи и кишечника новорожденных детей

Размещено на http://www.allbest.ru/

Южно-Казахстанская Государственная Фармацевтическая академия

Кристаллограммы культур, выделенных из кожи и кишечника новорожденных детей

Б.Т. Сейтханова

г. Шымкент

Известно, что мир микроорганизмов чрезвычайно широк. Они оказывают прямое и разнообразное влияние на окружающую человека среду и на него самого. Поэтому, чтобы успешно защищаться от патогенных микробов и эффективно использовать полезные для человека свойства микроорганизмов, необходимо быстро и точно их дифференцировать и идентифицировать. В настоящее время досконально изучены и широко используются в таксономии микроорганизмов их физиологические, биохимические и иммуногенные свойства. Однако, часто этого бывает недостаточно, в таких случаях могут потребоваться дополнительные весьма сложные аналитические процедуры, такие как электрофорез клеточных белков в полиакриламидном геле, анализ состава липидов, гибридизация нуклеиновых кислот, метод генетических зондов и другие. Вместе с тем достоверная идентификация многих родов и видов микроорганизмов, в том числе и патогенных (учитывая наличие у них многочисленных мутаций), не может быть основана на постановке только одного теста, а основывается, как правило, на целом их комплексе. Все это свидетельствует о том, что, несмотря на многолетнее изучение различных способов идентификации микроорганизмов, перечисленные выше методы, не могут, полностью удовлетворить микробиологов. Отсюда возникает потребность в выявлении существенно новых свойств микроорганизмов, определение которых характеризовалось бы простотой, стабильностью и специфичностью, достаточной для достоверной их идентификации .

Проведя поисковые исследования в этом направлении, проф. Л.Г. Баженов (1994) установил, что культуры микроорганизмов при определённых условиях их высушивания образуют комплексы кристаллов - кристаллограммы (их фото- и компьютерные изображения называют кристаллическими образами), имеющие особенности, характерные для определённых родов и видов микроорганизмов (Баженов Л.Г., Патент № 1231 РУз).

Кристаллографический метод является принципиально новым методом идентификации микроорганизмов, отличающимся доступностью и высокой воспроизводимостью. Ранее работами автора метода профессора Л.Г. Баженова установлено наличие специфических особенностей у кристаллограмм Serratia marcescens, Pseudomonas aeruginosa, Streptococcus pneumoniae, Candida spp., Bacillus subtillis, Helicobacter pylori и других микроорганизмов. Использование данного метода позволяет практически с помощью одного только теста достоверно идентифицировать перечисленные микроорганизмы, тогда как при традиционной идентификации необходима постановка от 5 до 20 и более тестов.

Цель: Нами предпринята попытка использования данного метода для идентификации микроорганизмов, выделенных из разных биотопов детей. Материалом для исследований послужили культуры, изолированные из кишечника и кожи новорожденных детей. При их выделении и предварительной идентификации использовали традиционные методы, а также описанный выше кристаллографический метод идентификации микроорганизмов.

Методы исследования. Изучение кристаллогенных свойств исследуемых культур выполняли следующим образом: из суточной культуры, выращенной на скошенном мясо-пептонном агаре, готовили густую микробную взвесь в стерильном физиологическом растворе (10-25 млрд. микробных тел/мл). Затем на дно пластиковой чашки Петри помещали каплю микробной взвеси и равномерно распределяли ее кончиком пипетки в виде овала размером примерно 1,5х1,0 см. Чашку помещали в эксикатор с силикагелем, закрывали эксикатор и инкубировали его в термостате при 37 0С в течение 18-24 часов до полного высыхания капель и образования на их месте кристаллического налета (кристаллограмма). Полученные кристаллограммы изучали визуально и с помощью стереоскопического микроскопа, затем фотографировали и переносили в банк кристаллограмм в компьютере. Все исследования повторяли с разными концентрациями микробной взвеси в трех сериях. Для контроля использовали кристаллограммы условно патогенных микроорганизмов (E. coli R, Ps. aeruginosa 68, C. albicans 723).

Полученные результаты. Рисунке- представлены кристаллограммы культур, выделенных из кишечника с кожи новорожденных детей.

При этом изучены кристаллограммы штаммов Enterobacter agglomerans, Candida tropicalis, Staphylococcus aureus и S. epidermidis.

Enterobacter aglomerans 18 Candida tropicalis 15

Staphylococcus aureus 16 Staphylococcus epidermidis 19

Рис. 1.1. Кристаллограммы культур, выделенных из кишечника новорожденных детей

Кристаллограмма E. agglomerans 18 представляла собой центры кристаллизации в виде очень мелких кристаллов, от углов которых отходили длинные лучи, а от них в свою очередь отделялись тонкие параллельные дендриты.

Кристаллограмма Candida tropicalis 15 имела вид крупных крестовидных кристаллов, углы которых напоминали древесные листья с изрезанными краями. Кристаллограмма Staphylococcus aureus 16 состояла из однотипных крупных четырехлистных кристаллов. Кристаллограмма Staphylococcus epidermidis 19 включала кристаллы правильной в основном прямоугольной формы с испещренной поверхность.

На рисунке 1.2 представлены кристаллограммы культур, изолированных с кожи новорожденных детей. При этом изучены кристаллограммы штаммов Klebsiella, E. coli и S. epidermidis.

Кристаллограмма Klebsiella 12 имела вид правильных четырехугольных кристаллов среднего размера, на их поверхности имелись ряды параллельных линий, идущих по периметру кристаллов. Кристаллограмма E.coli 18 состояла из крупных кристаллов с неровными краями, некоторые из них были сдвоенными. Кристаллограммы штаммов S. epidermidis 16 и 9 содержали кристаллы правильной в основном прямоугольной формы с испещренной поверхностью..

Анализ представленных результатов, показывает, что кристаллограммы штаммов разных видов микроорганизмов существенно отличались друг от друга.

Эти данные свидетельствуют о наличии специфических видовых особенностей кристаллограмм микроорганизмов, которые можно использовать при решении вопросов дифференциации и идентификации микроорганизмов. При отработке методики кристаллографического метода в рамках нашего исследования важным было изучение влияния концентрации микробной взвеси на характер образующихся кристаллограмм. Концентрация взвеси играет существенную роль. В частности, можно отметить, что при высоких концентрациях (20-25 млрд. микробных тел/мл) наблюдается преимущественно образование дендритов, а при меньших концентрациях (10-15 млрд. микробных тел/мл), наряду с дендритами, формируются и характерные центры кристаллизации, что существенно повышает информативность кристаллограмм. Кристаллограммы изученных культур, при точном соблюдении методики, отличались высокой воспроизводимостью.

Klebsiella 12 E.coli 18

S. epidermidis 16 S. epidermidis 9

Рис. 1.2. Кристаллограммы культур, изолированных с кожи новорожденных детей

Сказанное свидетельствует о том, что кристаллограммы микроорганизмов характеризуются высокой информативностью и достоверностью. На получение кристаллограмм затрачивается не более 18-24 часов.

Заключение

кристаллограмма кожа кишечник новорожденный

Таким образом, установлена принципиальная возможность использования кристаллографического метода для идентификации микроорганизмов нормальных биотопов. Выявлено, что эти микроорганизмы характеризуются специфическими кристаллогенными свойствами, что позволяет использовать кристаллографический метод для их идентификации и дифференциации. Применение кристаллографического метода дает возможность существенно ускорить и упростить идентификацию и дифференциацию микроорганизмов.

Список литературы

1. Олина А.А. Кристаллография влагалищной жидкости в дифференциальной диагностике бактериального вагиноза и вагинита / А.А. Олина, Т.И. Карпунина, Н.В. Чемурзиева // Пермский медицинский журнал. - 2008. - №5. - С. 91-94.

2. Олина, А.А. Применение метода кристаллографии для изучения влагалищной жидкости при неспецифических инфекционных заболеваниях влагалища / А.А. Олина, Т.И. Карпунина, Н.В. Чемурзиева // Актуальные проблемы клинической и экспериментальной медицины: материалы Всерос. науч.-практ. конф. - Чита, 2008. - С. 87-88.

3. Особенности становления микробиоценоза зева у детей, родившихся путём операции кесарева сечения / Р. Л. Буланов, Г. Н. Чумакова, Т. А. Бажукова, О. В. Лебедева // Бюл. СГМУ. - 2008. - № 1. - С. 99-100.

4. Zuccotti G.V., Meneghin F., Raimondi C., Dilillo D., Agostoni C., Riva E., Giovannini M. Probiotics in clinical practice: an overview. J. Int. Med. Res. 2008. - 36 Suppl 1, 1A-53A.

5. Особенности формирования микроэкологии новорожденного при абдоминальном родоразрешении / Р. Л. Буланов, Г. Н. Чумакова, Т. А. Бажукова, О. В. Лебедева //Экология человека- 2008. - № 9. - С. 37-41.

6. Pennisi E. Bacteria are picky about their homes on human skin. Science, 2008.- 320, P. 1001;

7. Abbot J. Clinical and microscopic of vaginal yeast infection: a prospective analysis / Ann. Emerg/ Med.-2005.-№25 (5).-P.587-591. Engberts М.К., Boon М.Е., van Haaften M., Heintz A.P.

Размещено на Allbest.ru