Провоспалительные цитокины и маркеры апоптоза при язвенном колите: влияние биологической терапии

Размещено на http://www.allbest.ru/

ПРОВОСПАЛИТЕЛЬНЫЕ ЦИТОКИНЫ И МАРКЕРЫ АПОПТОЗА ПРИ ЯЗВЕННОМ КОЛИТЕ: ВЛИЯНИЕ БИОЛОГИЧЕСКОЙ ТЕРАПИИ

Павленко В.В.,

Катаганова Г.А.,

Александрова С.Б.,

Кораблина Н.В.,

Павленко А.И.

В настоящее время язвенный колит (ЯК) является одной из наиболее серьёзных проблем гастроэнтерологии, что в значительной мере предопределено неизвестной этиологией, сложностью патогенеза, рецидивирующим характером течения, опасными для жизни осложнениями и малоэффективным лечением [1, 2]. Существует значительное число исследований, свидетельствующих о том, что в патогенезе ЯК участвует множество факторов: генетические, факторы окружающей среды, компоненты кишечной микрофлоры, иммунная система [4, 9]. Выполненные к настоящему времени исследования раскрывают лишь отдельные стороны регуляции иммуновоспалительной реакции в слизистой оболочке кишечника при данной патологии. Персистенция иммуновоспалительного процесса в толстой кишке при ЯК может быть связана с избыточной продукцией провоспалительных цитокинов иммунными клетками (ИЛ-1, ИЛ-8, ФНО-б и др.) в результате нарушений в механизмах апоптоза. Реализация апоптоза происходит через специфические рецепторы, относящиеся к семейству ФНО - (Fas) и семейству Bcl-2-генов [3, 5].

Более глубокое понимание патогенеза ЯК привело к появлению новых терапевтических стратегий. Одна из них состоит в целенаправленном воздействии биологическими препаратами на провоспалительные цитокины (ФНО-б), некоторые молекулы, регулирующие взаимодействие между лейкоцитами и эндотелиальными клетками в зоне воспаления (преимущественно лейкоцитарные интегрины и эндотелиальные молекулы клеточной адгезии суперсемейства иммуноглобулинов) [2, 7].

Цель исследования: изучить влияние инфликсимаба на синтез провоспалительных цитокинов (ИЛ-1в, ФНО-б) и уровень апоптоза (CD-95-L, Bcl-2) у больных с тяжелым ЯК.

Материал и методы исследования: обследовано 55 пациентов с тяжелым течением и высокой степенью клинической активности ЯК (индекс Рахмилевича 16-30 баллов). Инфликсимаб (Ремикейд) назначали по индукционной схеме (3 введения) в дозе 5 мг/кг массы тела на фоне предшествующей иммуносупрессивной терапии (азатиоприн, преднизолон). Все пациенты были респондерами на эту терапию.

Экспрессию маркеров апоптоза CD-95-L и Bcl-2 лимфоцитами периферической крови исследовали на проточном цитометре Facs Callibur (USA). Результат выражали в % клеток, экспрессирующих изучаемый маркер. Контрольную группу составили 20 практически здоровых лиц, сопоставимых по полу и возрасту. Количество лимфоцитов, экспрессирующих CD-95-L в контрольной группе составило 11, 05±0, 7%, Bcl-2 - 55, 87±4, 9%. Содержание цитокинов - ИЛ-1в и ФНО-б в супернатантах клеток в спонтанных и индуцированных ЛПС условиях определяли методом ИФА с помощью стандартных тест-систем фирмы «Цитокин» (Россия). Результаты выражали в нг/2х10⁶клеток. МНК выделяли из крови, стандартизировали, определяли спонтанную и ЛПС-стимулированную продукцию цитокина. Продукция ФНО-б МНК в контрольной группе составила: спонтанная - 1, 54±0, 9 и ЛПС-стимулированная - 2, 81±0, 21 нг/2х10⁶; продукция ИЛ-1в - спонтанная - 0, 9±0, 1нг/2х10⁶ и ЛПС-стимулированная - 1, 25±0, 1нг/2х10^6.

Статистическую обработку полученных данных проводили с использованием персонального компьютера на базе процессора “Pentium III”, с помощью пакета программ “Excel”, “Biostat”, “Statistica 6” используя непараметрический критерий Манна-Уитни и парный t критерий Стьюдента для выборок с односторонним распределением и неравными дисперсиями, точный критерий Фишера. Статистически достоверными считали различия при Р <0, 05.

Результаты и обсуждение. Установлено, что в период выраженной активности ЯК исходное количество лимфоцитов, экспрессирующих Bcl-2 (71, 8±1, 9%, Р<0, 05 с контролем) повышено, а экспрессия CD-95-L (5, 9±1, 9%, Р<0, 05 с контролем), наоборот, снижена. Исходный спонтанный и стимулированный синтез ФНО-б и ИЛ-1в мононуклеарами (МНК) больных активным ЯК был значительно выше контрольных значений (спонтанная - 5, 9±0, 8 и 1, 85±0, 04, стимулированная - 8, 2±0, 9 и 6, 3±0, 45 нг/2х10⁶ клеток, соответственно, Р<0, 05 с контролем). После трехкратного внутривенного введения Ремикейда отмечалось нормализация синтеза ИЛ-1в МНК и снижение количества лимфоцитов, экспрессирующих Bcl-2 (64, 37±4, 9%, Р<0, 05 с контролем и до лечения), при этом экспрессия CD-95-L повысилось (9, 6±1, 7%, Р<0, 05 с контролем и до лечения ), что знаменовало нарастание апоптотической готовности иммуноцитов и начало формирования клинической ремиссии ЯК.

В этот же срок синтез цитокина ФНО-б в МНК (спонтанный и стимулированный) снизился, но не до контрольных значений (2, 1±0, 23 и 3, 1±0, 07 нг/2х10⁶ клеток соответственно, Р<0, 05 с контролем и до лечения).

Полученные результаты свидетельствуют о том, что развитие иммунопатологического процесса при ЯК сопровождается нарастанием продукции провоспалительных медиаторов, в частности, ФНО-б и ИЛ-1в, и нарушением процесса апопотоза иммунокомпетентных клеток.

В настоящее время активно изучаются механизмы, посредством которых ингибиторы ФНО-б подавляют продукцию провоспалительных факторов, в частности провоспалительных нейропептидов и цитокинов. Инфликсимаб, обладая высокой аффинностью к ФНО-б, быстро связывается и образует устойчивое соединение с обеими его формами (растворимой и трансмембранной), снижает его функциональную активность и подавляет воспалительную реакцию в кишечнике [2, 6, 8].

Считаем, что позитивное влияние инфликсимаба при ЯК связано с нейтрализацией растворимого ФНО-б, восстановлением баланса цитокинов с различной биологической направленностью, частичной нормализацией эндотелиальная дисфункция и преодолением резистентности иммуноцитов к факторам апоптоза. Возможно, нейтрализация растворимого ФНО-б, стимулирующего активизацию фактора транскрипции - белка семейства NFkB, приводит к редукции антиапоптотического механизма в иммуноцитах и клетки подвергаются апоптозу посредством взаимодействия рецепторов Fas/Fas-L.

Следовательно, целевое воздействие на базовые молекулярные патогенетические механизмы (таргетная терапия) представляется одной из наиболее перспективных методов лечения ЯК.

провоспалительный цитокин язвенный колит

Выводы

1. Высокой степени клинической активности ЯК соответствует повышенная экспрессия Bcl-2 лимфоцитами крови и низкая CD-95-L.

2. При тяжелом течении ЯК спонтанный и стимулированный синтез ФНО-б и ИЛ-1в МНК повышен.

3. Индукционный курс инфликсимабом способствует нарастанию апоптотической готовности лимфоцитов, нормализации продукции ИЛ-1в, снижению синтеза ФНО-б МНК, что сочетается с позитивной динамикой заболевания.

Литература

1. Воробьев Г.И., Халиф И.Л. Неспецифические воспалительные заболевания кишечника / М.: Миклош, 2008. - 400 с.

2. Павленко В.В., Александрова С.Б., Кораблина Н.В. Влияние инфликсимаба на некоторые показатели провоспалительных цитокинов и нейропептидов при язвенном колите/ 2015 - №4 - С.66-69

3. Павленко В.В., Катаганова Г.А. Некоторые показатели воспаления при язвенном колите как маркеры клинического ответа на биологическую терапию.//Международный научный институт «Educato». -2015 - №3- Т.10- С.121-124

4. Шалыгин Ю.А. Колопроктология. М. ГЭОТАР: Медицина - 2015. - С. 363-395

5. Baumgart D.C., Carding S.R. Inflammatory bowel disease: cause and immunobiology/ Lancet -2007 - V/369- P.1627-1640.

6. Danese S. New therapies for inflammatory bowel disease: from the bench to the bedside/ Gut - 2012 - V.61 - P. 918-932.

7. Engel, M.A. Neurath M.F. New pathophysiological insights and modern treatment of IBD/ J Gastroenterol - 2010 - V. 45 - P.571-583

8. Oussalah A., Evesque L., Laharie D, et al. A multicenter experience with infliximab for ulcerative colitis: outcomes and predictors of response, optimization, colectomy, and hospitalization/ Am J Gastroenterol - 2010 - V. 105 - P.2617-2625

9. Xu XR, Liu CQ, Feng BS, et al. Dysregulation of mucosal immune response in pathogenesis of inflammatory bowel disease./ World J. Gastroenterol. - 2014- V.20 -P. 3255-3264.

Размещено на Allbest.ru