Изучение экспрессии рецептора ростового фактора и структуры гена трансформирующего фактора роста при сердечной недостаточности

Размещено на http://www.allbest.ru/

Изучение экспрессии рецептора ростового фактора и структуры гена трансформирующего фактора роста при сердечной недостаточности

Проведены иммуногистохимическое исследование аутопсийной ткани миокарда у больных ХСН с выраженной гипертрофией левого желудочка (ЛЖ) и дилатацией полостей сердца с использованием моноклональных мышиных анти-человеческих антител, афинносвязывающихся с рецепторами к трансформирующему фактору роста бета (TGFвR1) и анализ 9 экзонов гена рецептора трансформирующего фактора роста бета (TGFВR1) у больных с хронической сердечной недостаточностью (ХСН) с различными типами ремоделирования. Обнаружено достоверное увеличение экспрессии TGFв-R1 у больных гипертонической болезнью с выраженной ГЛЖ и обнаружена положительная корреляция между экспрессией TGFвR1 и гипертрофией кардиомиоцитов. Выявлены две миссенс-мутации, одна из которых обнаружена впервые, две синонимичные замены и полиморфный вариант сайта сплайсинга.

Трансформирующий фактор роста бета (TGF-в) - представитель семейства многофункциональных цитокинов, регулирующих разнообразные клеточные функции, такие как рост, адгезию, миграцию, апоптоз, пролиферацию и дифференциацию [1]. Нарушения TGF-в сигнального пути обнаружены при многих заболеваниях человека: онкологических, сердечно-сосудистых, наследственных заболеваниях соединительной ткани. Мутации, затрагивающие TGF-сигнальные пути были выявлены у пациентов с артериальными аневризмами, пороками сердца, кардиомиопатиями, наследственными геморрагическими телеангиэктазиями и т.д. [2, 3, 4, 5]. В экспериментах invitro с использованием культивированных тканей сердца показана важность этого сигнального пути для создания мезенхимальных клеток, которые, в конечном счете, способствуют развитию клапанов и перегородок зрелого сердца [6]. У млекопитающих были выявлены три изоформы TGF-в (TGF-в1, TGF-в2 и TGF-в3), TGFв1 является основным фактором ремоделирования сердца за счет активации разрастания волокнистой соединительной ткани (фиброза) и гипертрофии кардиомиоцитов. Показано, что уровень TGFв1 коррелирует со степенью фиброза [7,8]. Несколько исследований выявили вовлеченность TGFв1 в патологическое развитие фиброза [8,9,10]. В патогенезе хронической сердечной недостаточности (ХСН) важное место занимает процесс фиброза, приводящее к нарушению функции миокарда и ремоделирования сердца. У пациентов с гипертрофической и дилатационной кардиомиопатиями обнаружен повышенный уровень TGFв1 в миокарде [10, 11, 12].

Учитывая неперекрывающийся [13] и многофункциональный характер TGFв сигнальных путей (десятки фенотипов среди TGFв нокаутированных мышей) [14], существуют многочисленные потенциальные механизмы, которые могут участвовать в развитии сердечно-сосудистых заболеваний [15]. Рецептор TGFB первого типа (TGFВR1) является ключевым звеном TGFв сигнального пути, контролирующего морфогенез тканей. Ген TGFВR1 локализован на хромосоме 9q22, составляет приблизительно 31 тысяч пар оснований в длину и состоит из девяти экзонов [16].

За последние 25 лет произошел значительный прогресс в понимании молекулярного патогенеза, генетических причин сердечно-сосудистых заболеваний, а также в разработке более эффективных способов лечения. Эти достижения привели к снижению смертности от болезней сердца, особенно, в промышленно развитых странах. Несмотря на это, распространенность и заболеваемость сердечной недостаточностью остаются поразительно высокими, что подтверждает актуальность поиска новых молекулярно-генетических маркеров диагностики, профилактики и лечения заболеваний сердечно-сосудистой системы. Целью исследования является изучение экспрессии рецептора TGF в первого типа (TGFвR1) и анализ нуклеотидной последовательности гена TGFBR1 у больных с хронической сердечной недостаточностью (ХСН), поиск связи идентифицированных изменений с различными типами ремоделирования сердца.

Материал и методы исследования

Материалом для исследования послужили образцы ДНК 207 больных ХСН на фоне ИБС, дилатационной кардиомиопатии, артериальной гипертонии (II -III стадии согласно Российским рекомендациям, 2004), гипертрофической кардиомиопатии без признаков обструкции выносящего тракта ЛЖ и их сочетания; четкие клинические признаки II - IV ФК ХСН (NYHA, 1994) моложе 60 лет. Критериями исключения из исследования были: стеноз клапанных отверстий, врожденные пороки сердца, в период острой левожелудочковой недостаточности, острый коронарный синдром, сахарный диабет, дефекты опорно-двигательного аппарата. В зависимости от типа ремоделирования ЛЖ группа больных была разделена на 2 группы: 1 группа - 84 больных с признаками эксцентрической гипертрофии ЛЖ (ОТС менее 0.45, увеличение ИММЛЖ, дилатация ЛЖ, фракция выброса 20-45% по Simpson); 2 группа - 123 больных с признаками концентрической гипертрофии ЛЖ (ОТС более 0.45 и увеличение ИММЛЖ, выраженная гипертрофия стенок ЛЖ более 1.5 см). Эхокардиографические измерения проводились в двухмерном режиме на аппарате Vingmed 5 (Норвегия). Толщина стенок ЛЖ и размеры полости определялись из парастернальной позиции длинной оси левого желудочка. Масса миокарда ЛЖ (ММЛЖ) вычислялась на основании показателей его длины и толщины по короткой оси из парастернального доступа по формуле R.Devereux и N.Reicheck. Индекс массы миокарда ЛЖ (ИММЛЖ) рассчитывали как отношение массы миокарда к площади поверхности тела. За нормальные значения ИММЛЖ принимались цифры менее 134 г/м² для мужчин и 110 г/м² для женщин [2]. ММЛЖ считалась нормальной при значениях менее 215г. Относительная толщина стенок ЛЖ определялась следующим способом: ОТС=(ТМЖП+ТЗСЛЖ)/КДРЛЖ, где ТМЖП - толщина межжелудочковой перегородки ЛЖ, ТЗСЛЖ - толщина задней стенки ЛЖ, КДРЛЖ - конечный диастолический размер ЛЖ. За повышение ОТС принимались значения 0,45 и более.

В качестве контрольной группы использованы 188 индивидов без признаков заболеваний сердечно-сосудистой системы (ССС). Все участники исследования подписали информированное согласие, работа получила одобрение биоэтического комитета ИБГ УНЦ РАН и БГМУ.

Геномную ДНК выделяли методом фенольно-хлороформной экстракции из лейкоцитов венозной крови [17]. Амплификацию экзонов гена TGFBR1 проводили с помощью праймеров, описанных ранее, а также сконструированных самостоятельно в программе PrimerSelect (DNASTAR, США) (табл.1).

Поиск изменений нуклеотидной последовательности в гене TGFBR1проводили методом анализа конформационного полиморфизма однонитевой ДНК (SSCP) по методике, предложенной Орита М. с соавт. с щелочной и температурной денатурацией [18]. После денатурации образцы наносили на 8% полиакриламидный гель (ПААГ). Электрофорез геля длиной 20 см, толщиной 1 мм проходил при комнатной температуре при напряжении 100В в течение 20 - 40 часов. Окраска геля проводилась в течение 25 минут 0,09% раствором азотнокислого серебра (AgNO₃). Анализ образцов проводился по критерию присутствия или отсутствия дополнительных полос по сравнению с контрольной ДНК (норма). Определение последовательности нуклеотидов у образцов с измененной подвижностью однонитевой ДНК проводили с помощью автоматического секвенатора ABIPRISM модель 310 («AppliedBiosystems») с использованием набора для флюорисцентного мечения DYEnamic^TMET, согласно протоколу фирмы производителя («AmershamPharmaciaBiotech» DYEnamic^TMETTerminatorCycleSequencingKit). Для «прочтения» последовательности нуклеотидов использовали приложение BioEditv.5.0.9. (1997- 2001), а для анализа полученных сиквенсов - MegAlign из пакета программ DNAStarInc (1993-2002).

Также были исследованы 101 образцов аутопсийного материала, 81 мужчина и 20 женщин в возрасте от 32 до 60 лет, средний возраст (48,3±1,8). Больные ИБС с развитием сердечной недостаточности ФК III-IV составили 1-ую группу 33 человека, во 2-ую группу из 27 человек вошли больные гипертонической болезнью и выраженной гипертрофией ЛЖ (более 20мм), 3-ю группу составили 25 больных дилатационной кардиомиопатией и сердечной недостаточностью ФК III-IV, 4-ая - контрольная группа (16 человек) без признаков поражения сердца, сопоставимые по возрасту и полу с группами сравнения. Из каждого секционного препарата (миокарда левого желудочка) вырезали 4-8 кусочков длиной и шириной до 1 см, толщиной до 0,5 см. Биоптаты не брали в зонах крупноочагового кардиосклероза. Кусочки фиксировали в 10% нейтральном формалине 14-16 часов. После проводки спирт-ксилол заливали в парафин торговой марки Histomixplus. Изготавливали парафиновые срезы толщиной 3-5 мкм. В качестве обзорных гистологических окрасок использовали гематоксилин и эозин, пикрофуксин.

Для иммуногистохимического исследования были использованы моноклональные мышиные анти-человеческие антитела, производимые корпорацией NovoCastra, афинносвязывающиеся с рецепторами к трансформирующему фактору роста (TGFв-R1).

В качестве системы детекции применялась полимеризованная система EnVision+ System-HRP (DAB), для использования с мышиными первичными антителами.

Для полуколичественного анализа результатов реакций был использован визуально-синкретический метод оценки экспрессии по интенсивности проявления DAB-метки: светло-коричневый - 1 балл, коричневый - 2 балла, темно-коричневый - 3 балла. Обработку результатов исследования проводили с помощью пакета программы статистического анализа “SPSSv.13” [SPSSInc., Chicago, Illinois].

Результаты

При изучении экспрессии TGFв-R1 нами выявлено достоверное увеличение экспрессии TGFв-R1 у больных гипертонической болезнью с выраженной ГЛЖ в сравнении с группой контроля (р<0,00275), кроме того отмечена отчетливая тенденция по преобладанию экспрессии TGFв-R1 при гипертонической болезни в сравнении с ИБС, хотя различия не достигают достоверных значений (р<0.064) (рис. 6). Корреляционный анализ выявил достоверную положительную корреляцию между экспрессией TGFвR1 и гипертрофией кардиомиоцитов у больных гипертонической болезнью и выраженной ГЛЖ, такая же корреляционная зависимость определялась у больных дилатационной кардиомиопатией, а в группе больных ИБС экспрессия TGFвR1 достоверно коррелировала с толщиной миокарда ЛЖ, следует отметить, что для лиц с неизмененным сердцем таких корреляционных зависимостей для TGFвR1 мы не обнаружили. Учитывая явную вовлеченность рецептора данного ростового фактора в процесс гипертрофии миокарда ЛЖ и фиброзирования миокарда, нам показалось необходимым изучить структурные особенности гена TGFBR1 у больных ХСН.

Проведен анализ нуклеотидной последовательности девяти экзонов и фланкирующих интронных областей гена рецептора трансформирующего фактора роста в первого типа (TGFBR1) в группах больных с ХСН с разными типами ремоделирования ЛЖ. Изменения подвижности однонитевой ДНК обнаружены в 3, 6 и 8 из 9 экзонов исследуемого гена. В экзонах 1, 2, 4, 5, 9 гена TGFBR1не выявлено изменений подвижности при SSCP анализе. Последующее секвенирование образцов с измененной подвижностью одноцепочечной ДНК позволило идентифицировать 5 типов изменения нуклеотидной последовательности (табл. 2, 3).

В 3-ом экзоне обнаружены два типа изменения подвижности одноцепочечной ДНК у двух больных ХСН. Идентифицирована замена гуанина на аденин в 457 положении кодирующей области гена (с.457G>А) в гетерозиготном состоянии у больного с эксцентрическим типом ремоделирования ЛЖ. Мутация подтверждена ПДРФ анализом с помощью рестриктазы HpHI, подбор которого проведен с использованием пакета компьютерных программ Lasergene 5.05 (1989-2002, “DNASTARInc.”, USA) (рис.1).

В результате данной транзиции происходит замена аминокислоты валин на изолейцин в 153 положении белка TGFвR1. Мутация V153I локализована в цитоплазматическом домене белка рецептора TGFв первого типа, близко к трансмембранному домену и, предположительно, может влиять на конформационное расположение рецептора в клеточной мембране. При этом обе аминокислоты среднего размера, имеют схожие физико-химические свойства, являются гидрофобными, что предполагает нейтральный характер изменения. По данным проекта «1000 геномов» изменение с.457G>А (р.V153I, rs56014374) выявлена у 2 из 1090 изученных индивидов в гетерозиготном состоянии, что составило <0,001% (http://www.1000genomes.org). Оба носителя были европейского происхождения, в популяциях Африки, Азии и Америки изменение с.457G>А в гене TGFвR1 не обнаружен. Замена V153I также была обнаружена в опухолевых клетках одного больного раком молочной железы, функциональная роль данного изменения в канцерогенезе не была определена [19].

В третьем экзоне гена TGFBR1 выявлена ранее неописанная замена аденина на гуанин в 516 положении ДНК, не приводящая к изменению аминокислотной последовательности рецептора TGFв первого типа (S172S) у больной с выраженной концентрической гипертрофией стенок левого желудочка (рис. 4). В доступной литературе и в базе данных по мутациям случаев выявления мутации с.464А>G (р.H155R) в гене TGFBR1 не обнаружено (http://www.hgmd.cf.ac.uk/ac/gene.php?gene=TGFвR1).

Обнаружена синонимичная замена аденина на цитозин в 1125 положении гена, не приводящая к замене кодируемой аминокислоты (p.Y377Y). В нашем исследовании обнаружен только один случай гетерозиготного носительства с.1125А>Су больного с концентрической формой ГЛЖ умершего в 46 лет от остановки сердечной деятельности. Сердце увеличено в размерах, толщина стенок левого желудочка 2,0 см, дистрофия кардиомиоцитов. При иммуногистохимическом исследовании выявлена повышенная экспрессия TGFвR1, равная 3 баллам.

Ранее данное изменение было выявлено у больных с заболеваниями соединительной ткани из Европы и идентифицировано как полиморфный вариант гена TGFBR1, не влияющий на его функцию [20].В рамках проекта «1000 геномов» полиморфный вариант с.1125А>С (rs7861780) гена TGFBR1 выявлен у европейцев и в смешанной популяции американцев с частотой менее 1% и не обнаружен в популяциях Африки и Азии. При этом выявлены случаи как гетерозиготного носительства (АС), так и гомозиготные индивиды (АА и СС) (http://www.1000genomes.org).

В нашем исследовании в восьмом экзоне гена TGFBR1 выявлена ранее неописанная миссенс-мутация с.1285А>С, приводящая к замене тирозина на серин в 229 позиции белка (Y229S) (рис. 2). Мутация расположена в киназном домене белкаTGFвR1. Изменение затрагивает эволюционно консервативный участок и может привести к нарушениям проводимости сигнала и функции рецептора TGFв1. Больной умер от острого инфаркта в возрасте 61 года, сердце увеличено в размерах, толщина стенок левого желудочка 2,0 см., миокард вне зоны инфаркта с прослойками соединительной ткани, выявлена дистрофия кардиомиоцитов. Экспрессия TGFв-R1 составила 2,5 балла. Необходимы дальнейшие исследования для подтверждения функциональной роли мутации Y229S в развитии сердечно-сосудистых заболеваний.

Нами также обнаружена ранее описанная в литературе трансверсия G на А в +24 позиции донорного сайта сплайсинга, расположенного в 7 интроне генаTGFB-R1 (c.1024+24G>A, rs334354) (рис. 5). Функциональная роль данного полиморфизма до конца не выяснена, имеются публикации об ассоциации гомозиготного генотипа *А*А с повышенным риском развития рака молочной железы и прямой кишки [21]. Учитывая высокую частоту данного полиморфизма у больных ХСН и для выяснения его функциональной значимости мы провели анализ полиморфного варианта c.1024+24G>A генаTGFB-R1в группе здоровых индивидов. Выявлено схожее распределение частот аллелей и генотипов исследуемого локуса в общей выборке больных и контроля (табл. 3).

Наблюдается повышение частоты аллеля *А у больных ХСН (0,234) по сравнению с контрольной группой, при этом у мужчин сохраняется схожая тенденция, тогда как у женщин с ХСН наблюдается снижение частоты аллеля *А (0,216) по сравнению с контрольной группой (0,323), различия не достигают статистической значимости (ч²=2,79; р=0,095).

При разделении выборки больных в зависимости от типа ремоделирования ЛЖ частота аллеля *Аварьировала от 0,143 у женщин с эксцентрической формой ремоделирования ЛЖ до 0,247 у мужчин с концентрической ГЛЖ.У больных с эксцентрической ГЛЖ наблюдается увеличение частоты предкового аллеля *G по сравнению с группой больных с концентрической ГЛЖ, как в целом, так и при рассмотрении выборок больных в зависимости от пола (табл.3).

Гетерозиготный генотип *A*G чаще всего встречался у женщин из контрольной группы (0,595), самая низкая частота выявлена у женщин с эксцентрической ГЛЖ (0,286), различия не достигают статистической значимости из-за малочисленности выборки больных с эксцентрической ГЛЖ (ч²=2,5; р=0,113). Гомозиготный генотип *А*А не обнаружен у женщин с ХСН, наибольшая частота выявлена у мужчин с концентрической ГЛЖ (0,043). Статистически значимых различий в распределении частот генотипов между группами сравнения не обнаружено. Таким образом, полиморфизм c.1024+24 G>A (rs334354) в 7 интроне генаTGFв-R1 вероятно, не играет значимой роли в патогенезе ХСН с разными типами ремоделирования ЛЖ.

Обсуждение

В исследованиях китайских ученых по сравнительному изучению экспрессии матриксной металлопротеиназы 9 (ММП 9) и трансформирующего фактора роста в1 (TGFв1) и его рецептора у больных ИБС было определено, что при наличии нестабильной бляшки экспрессия ММП 9 была значительно выше, а при наличии стабильной бляшки, напротив, достоверно выше оказалась экспрессия TGFв1 и его рецептора (TGFвR1). Полученные данные позволяют предположить, что TGFв1 стимулирует продукцию экстрацеллюлярного матрикса, подавляет активность протеиназ и матриксных металлопротеиназ, включая ММП9 и усиливает синтез коллагена, выполняя роль фактора «стабилизации бляшки» [22]. Также было установлено существенное различие в уровне экспрессии TGFв1 и его рецептора TGFвR1 у пациентов с идиопатической и вторичной формами легочной артериальной гипертензии. Полученные различия в группах по соотношению экспрессия TGFв1/экспрессия TGFвR1 свидетельствуют о заинтересованности этого цитокина в патогенезе легочной артериальной гипертензии, протекающей с гипертрофией фибробластов, гладкомышечных и эндотелиальных клеток, а также с возрастанием объема экстрацеллюлярного матрикса легочных прекапиллярных артериол [23]

Экспрессия TGFвR1 активно происходит на этапе «гипертрофического ответа» миокарда при ремоделировании сердца у больных эссенциальной гипертонией. Схожая тенденция отмечена и при дилатационной кардиомиопатии.

Есть существенные доказательства предполагать, что трансформирующий фактор роста в является активным триггером фиброзных изменений в гипертрофированном сердце. Уровень экспрессии TGFв1 в миокарде больных обструктивной гипертрофической кардиомиопатией оказался в 2,5 раза выше, чем у пациентов с негипертрофированным сердцем [24]. Ранее теми же исследователями было выявлено, что аффинность TGFв1 к своему рецептору была максимальной у индивидуумов с идиопатической гипертрофической кардиомиопатией [25]. Подобные исследования способствуют не только пониманию роли ростовых факторов в ремоделировании миокарда, но и разработкеновых «таркетных» препаратов для коррекции данных процессов. У мышей с постинфарктным ремоделированием в эксперименте применяли специфический ингибитор TGFвR1 (SD 208). Этот гипотетический препарат SD 208 при применении после экспериментального инфаркта миокарда у мышей через 30 дней подтвердил прямое участие TGFв1 в ангиотензин II-индуцированной гипертрофии миокарда [26].

Таким образом, впервые проведен анализ гена TGFBR1 и уровня экспрессии рецептораTGFвR1 у больных с ХСН из Республики Башкортостан. Выявлено достоверное увеличение экспрессии TGFв-R1 у больных гипертонической болезнью с выраженной ГЛЖ и обнаружена положительная корреляция между экспрессией TGFвR1 и гипертрофией кардиомиоцитов.

Выявлены две миссенс-мутации в гене TGFBR1, одна из которых обнаружена впервые, две синонимичные замены, мутация сдвига рамки считывания и полиморфный вариант сайта сплайсинга. Полученные результаты указываютна непосредственное участие TGFвR1 и его генетической структуры в процессах ремоделирования миокарда при сердечной недостаточности, а также обосновывают необходимость дальнейших исследований в этом направлении.

клеточный сердечный экстракция

Таблица 1. Последовательности праймеров и характеристика продуктов амплификации

Таблица 2. Характеристика пациентов ХСН с идентифицированными изменениями в гене TGFBR1

Таблица 3. Распределение частот аллелей и генотипов полиморфизма c.1255+24G>A(rs334354) генаTGFBR1у больных ХСН и в контрольной группе

Рис. 1. Идентификация мутаций c.457G>A (V153I) и c.464А>G (H155R) в генеTGFBR1в гетерозиготном состоянии

Рис. 2. Идентификация миссенс-мутации c.1285A>C (Y229S) в генеTGFBR1в норме (верхний правый) и гетерозиготном состояниях (нижние)

Рис. 3. Выявление методом SSCP анализа, идентификация полиморфного варианта c.1125A>C (Y375Y) генаTGFBR1и подтверждение с использованием фермента рестрикции PspN4I

Рис. 4. Идентификация полиморфного варианта c.516A>G (S172S) генаTGFBR1в гетерозиготном состоянии

Рис. 5. Идентификация полиморфного варианта c.1024+24G>A(rs334354) генаTGFBR1в гетерозиготном (верхний правый) и гомозиготном состояниях (нижние)

Рисунок 6. Экспрессия рецепторов трансформирующего фактора роста (TGFb-R1) в фибробластах при гипертонической болезни (А) и при ишемической болезни сердца (Б). Интенсивность реакции 2 балла (А). Иммуногистохимический метод с пероксидазной меткой.

Литература

1. Guo Xia, Chen Shi-You. Transforming growth factor-вand smooth muscle differentiation // World J Biol Chem. V.26 (3).P.41-52.

2. Deng H.B., Jiang C.Q., Tomlinson B. et al. A polymorphism in transforming growth factor-в1 is associated with carotid plaques and increased carotid intima-media thickness in older Chinese men: the Guangzhou Biobank Cohort Study-Cardiovascular Disease Subcohort // 2011. V.214. P.391-396.

3. Rao M., Guo D., Jaber B.L.,et al. Transforming growth factor-beta 1 gene polymorphisms and cardiovascular disease in hemodialysis patients // Kidney Int. 2004. V. 66. P. 419-427.

4. Saltis J., Agrotis A., Bobik A. Regulation and interactions of transforming growth factor-beta with cardiovascular cells: implications for development and disease // Clin Exp Pharmacol Physiol. 1996. V.23. P. 193-200.

5. Holweg C.T., Baan C.C., Niesters H.G. et al. TGF-beta1 gene polymorphisms in patients with end-stage heart failure // J Heart Lung Transplant. 2001. V.20. P. 979-984.

6. Rosenkranz S. TGF-beta 1 and angiotensin networking in cardiac remodeling // Cardiovasc Res. 2004. V.63 (3). P. 423-432.

7. Hein S., Arnon E., Kostin S. et al. Progression from compensated hypertrophy to failure in the pressure-overloaded human heart: structural deterioration and compensatory mechanisms // Circulation. 2003. V. 107(7). P. 984-991.

8. Villar A.V., Cobo M., Llano M. et al. Plasma levels of transforming growth factor-beta1 reflect left ventricular remodeling in aortic stenosis // PLoS One. 2009. V. 4:e8476.

9. Moustakas A., Heldin C.H. The regulation of TGFbeta signal transduction // Development. 2009. V. 136. P. 3699-3714.

10. Zacchigna L., Vecchione C., Notte A. et al. Emilin1 links TGF-beta maturation to blood pressure homeostasis // Cell. 2006. V. 124. P. 929-942.

11. Li R.K., Li G., Mickle D.A. et al. Overexpression of transforming growth factor-beta1 and insulin-like growth factor-I in patients with idiopathic hypertrophic cardiomyopathy // Circulation. 1997. V. 96. P. 874-881.

12. Pauschinger M., Knopf D., Petschauer S. et al. Dilated cardiomyopathy is associated with significant changes in collagen type I/III ratio // Circulation. 1999. V.99. P. 2750-2756.

13. Sanford L.P., Kallapur S., Ormsby I., Doetschman T. Influence of genetic background on knockout mouse phenotypes // Methods Mol Biol. 2001. V. 158. P. 217-225.

14. Doetschman T. Interpretation of phenotype in genetically engineered mice // Lab Anim Sci. 1999. V. 49. P. 137-143.

15. Doetschman T., Barnett J., Runyan B. Transforming growth factor beta signaling in adult cardiovascular diseases and repair // Cell Tissue Res. 2012. V. 347(1). P. 203-223.

16. Vincent F., Vellucci and Michael Reiss. Cloning and Genomic Organization of the Human Transforming Growth Factor-b Type I Receptor Gene // GENOMICS 1997. V. P. 278-283.

17. Mathhew C.C. The isolation of high molecular weight eucariotic DNA. Methods in Molecular Biology. N.Y.: Human Press, 1984. V. 2. P. 31-34.

18. Orita M., Jmahana H., Kanazawa H. et.al. Detection of polymorphism of human DNA by gel electrophoresis as single cell conformation polymorphism // Proc. Natl. Acad. Sci. 1989. V. 86. P. 2766-2770.

19. Chen Т., Jackson C.R., Link А. et al. Int7G24A Variant of Transforming Growth Factor-B Receptor Type I Is Associated with Invasive Breast Cancer // Clin Cancer Res. 2006. V. 12(2). Р. 392-397.

20. Stheneur C., Collod-Bйroud G., Faivre L.et al.Identificationof 23 TGFBR2 and 6 TGFBR1 genemutationsandgenotype-phenotypeinvestigationsin 457 patientswithMarfansyndrometypeIandII, Loeys-Dietzsyndromeandrelateddisorders // HumMutat. 2008. V. 29(11). E284-95. doi: 10.1002/humu.20871.

21. Liu X., Shan Y., Xue B. Int7G24A polymorphism (rs334354) and cancer risk // Acrch. Med. Sci. 2013. V.9(1). P. 3-7.

22. Xin Jiang, Zeng He-song, Guo Yi et al. The expression of matrix metalloproteinases-9, transforming growth factor-b1and transforming growth factor-b receptor in human atherosclerotic plaque and their relationship with plague stability // Chinese Medical Journal. 2004. V. 117 (12). P. 1825-09.

23. Jachec W., Foremny A., Domal-Kwiatkowska D. et al. Expression of TGF-beta1 and its receptor genes (Tbeta RI, Tbeta RII, TbetaRIII-betaglycan) in peripheral blood leucocytes in patients with idiopathic pulmonary arterial hypertension and Eisenmenger^,s syndrome // Int J Mol Med. 2008. V. 21(1). P. 99-107.

24. Li G., Li R.K., Mickle D.A. et.а Elevated overpression of insulin-like growth factor and transforming growth factor in the myocardium of patient with hypertrophic Thr144-9.

25. Li G., Borger M.A., Williams W.G., Weisel R.D., et al. Regional overpression of insulin-like growth factor and transforming growth factor in the myocardium of patient with hypertrophic obstructive cardiomyopathy // J. Thorac Cardiovasc. Surg. 2002. V. 123. P.89-95.

26. Ellmers, NicolaJ. A. Scott, SatyanarayanaMedicherla, AnnaP. Pilbrow, etal. Transforming Growth Factor-в blockade down-regulates the renin-angiotensin system and modified cardiac remodeling after myocardial infarction // The Journal of Clinical Endocrinology & Metabolism. 2008. V.149. Issue 11. P.5828-34.

Размещено на Allbest.ru