Влияние содержания белка в диете, кальция и магния в питьевой воде на сердечно-сосудистую систему крыс с экспериментальной уремией

Размещено на http://www.allbest.ru/

НИИ нефрологии Санкт-Петербургского государственного медицинского университета им. акад. И.П. Павлова

На правах рукописи

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Влияние содержания белка в диете, кальция и магния в питьевой воде на сердечно-сосудистую систему крыс с экспериментальной уремией

Специальность: 03.00.13 - Физиология

Парастаева Марина Магрезовна

Санкт-Петербург 2006

Работа выполнена в Лаборатории клинической физиологии почек НИИ нефрологии Санкт-Петербургского государственного медицинского университета им. акад. И.П. Павлова

Научный руководитель: доктор медицинских наук Кучер Анатолий Григорьевич

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук Рыбакина Елена Георгиевна

доктор медицинских наук, профессор Шишкин Александр Николаевич

Ведущая организация: Санкт-Петербургская государственная педиатрическая академия

Защита диссертации состоится «28» декабря 2006 г. в 11 часов на заседании Диссертационного совета Д 001.022.03 при ГУ Научно-исследовательский Институт экспериментальной медицины РАМН по адресу: 197376, Санкт-Петербург, Каменноостровский пр., 69/71 (конференц-зал)

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ГУ Научно-исследовательский Институт экспериментальной медицины РАМН по адресу: 197376, Санкт-Петербург, ул. акад. И.П. Павлова, 12

Автореферат разослан «23» ноября 2006 г.

Ученый секретарь Диссертационного совета Д 001.022.03 доктор биологических наук, профессор Л.В. Пучкова.

Характеристика работы

Актуальность проблемы.

Почки выполняют в организме млекопитающих многочисленные функции. При уменьшении количества функционирующих нефронов и возникновении хронической почечной недостаточности (ХПН) изменяется деятельность не только самих почек, но и сердца, печени, кишечника, желез внутренней секреции (Шутов А.М. и др., 2005; Белов В.В., Ильичева О. Е., 2006; Leavey S.F., Weitzel W.F., 2002; Leskinen I. et al., 2002).

Различные факторы способствуют повреждению сосудов и миокарда при уремии: гипертензия, анемия, гиперлипидемия, атеросклероз, уремические токсины, гипергомоцистеинемия (Смирнов А. В. и др., 2005; London G.M., 2001). Широко обсуждается роль изменения фосфорно-кальциевого метаболизма в формировании сердечно-сосудистых осложнений (Thomas L., Fadda G.Z., 1998; Amann K. et al., 2003; McCullaugh P.A. et al., 2004).

Изучению деятельности сердца и сосудов при уремии и артериальной гипертензии (АГ) посвящены многие работы, но ясности в механизмах развития патологических процессов до настоящего времени нет (Шутов А.М. и др., 2001). Несмотря на успехи в лечении людей с изменением функции почек, проблема возникновения сердечно-сосудистых осложнений и АГ остается актуальной (Семидоцкая Ж.Д. и др., 2003; Смирнов А.В., 2003; Шишкин А.Н., 2003; Ljutic D., Kes P., 2003), а возможности патогенетического подхода к их коррекции далеко не исчерпаны. В этой связи наиболее перспективными являются экспериментальные исследования, дающие возможность более детально подойти к решению этих вопросов.

При нарушении функции почек большое значение придается лечебному питанию. Широкое распространение получило использование малобелковой диеты (МБД), применение эссенциальных аминокислот и их смеси с кетоаналогами (Bernhard J. et al., 2001; Druml W., 2001; Passey C. et al., 2003; Prakash S. et al., 2004). Однако при этом не всегда удается предотвратить развитие белково-энергетической недостаточности (БЭН). Увеличение же содержания белка животного происхождения в пищевом рационе приводит к поступлению в организм человека избыточного количества фосфатов, нарастанию выраженности уремии и вторичного гиперпаратиреоза (Kasiske B.L., Lakatua J.D.A., 1997; Lafage - Proust M.H. et al., 1999; Mitch W.E., 2000).

Остается много неясного и в представлениях о влиянии различного количества белка в диете на функцию не только почек, но и других органов, в частности сердца и сосудов. Очевидно, что попытка разрешения этих вопросов в условиях эксперимента может иметь значение как для выбора наиболее адекватных вариантов лечебного питания, так и для уточнения механизмов прогрессирования уремии.

Кроме того, специалисты отмечают необходимость использования новых белковых пищевых добавок. Особое внимание привлекают протеины сои, обладающие высокой биологической ценностью и оказывающие благоприятное действие на почки (Maddox D.A. et al., 2002; Fair D.E. et al., 2004; Pedraza - Chaverri J. et al., 2004; Trujillo. et al., 2005). Однако, несмотря на возрастающий интерес к применению соевых протеинов, длительные исследования, в которых прослеживалась бы динамика функционального состояния сердечно-сосудистой системы как у пациентов с почечной недостаточностью, так и у экспериментальных животных, отсутствуют.

Как уже отмечалось, очень часто при хронических изменениях функции почек у людей развивается АГ (Мосина Н.В., Есаян А.М., 2004; Кузьмин О.Б. и др., 2005; Brenner B.M., 2003). Она является одним из наиболее распространенных нарушений сосудистой системы у человека, связанных с состоянием кальциевого обмена (Wu X. et al., 1998; Bro S., 2003). Особую актуальность эта проблема приобретает в регионах, где питьевая вода содержит критически низкое количество важных для организма двухвалентных катионов - кальция и магния (Северо-Запад России, в том числе и Санкт-Петербург, Скандинавские страны, Канада).

Кальций играет важную роль в регуляции синтеза и секреции гормонов, процессов сокращения и расслабления миоцитов сосудов и миокарда, влияет на величину артериального давления (АД) ( Inaba M. et al., 1992; Martinez I. et al., 1997; Yokayama K., 2002). Эпидемиологические наблюдения выявили прямую зависимость уровня заболеваемости АГ от содержания Ca²⁺ и Mg²⁺ в питьевой воде.

В последнее время широко изучается распространенность увеличения массы левого желудочка сердца (ЛЖС) при АГ, тогда как при уремии данному вопросу все же уделено недостаточное внимание, что делает актуальным проведение дополнительных экспериментальных исследований в этом направлении.

Цель и задачи исследования.

Целью настоящей работы являлось исследование влияния различного содержания белка в диете, кальция и магния в питьевой воде на сократительную активность воротной вены, среднее артериальное давление и массу левого желудочка сердца крыс с экспериментальной уремией.

В работе были поставлены следующие задачи:

1. Исследовать особенности сократительной активности гладкомышечных клеток воротной вены, среднего артериального давления и массы ЛЖС крыс при формировании экспериментальной уремии.

2. Исследовать сократительную активность воротной вены, среднее артериальное давление, массу ЛЖС у крыс, содержащихся на диете с добавлением соевого изолята SUPRO 760.

3. Провести сравнительный анализ действия диет с различным содержанием белка на функциональную активность воротной вены, величину среднего артериального давления, массу ЛЖС крыс с экспериментальной уремией.

4. Исследовать влияние содержания кальция и магния в питьевой воде на функциональную активность воротной вены, среднего артериальное давление, массу ЛЖС ложнооперированных крыс и животных, подвергнутых нефрэктомии.

Научная новизна исследования.

1. Впервые показано, что использование не только малобелковой, но и высокобелковой соевой диеты, содержащей SUPRO 760, оказывает нефропротективное действие у крыс с экспериментальной уремией.

2. Впервые исследовано влияние применения диет с различным содержанием белка на функциональную активность воротной вены крыс. Обнаружено протективное действие селективной белковой диеты, содержащей соевый изолят SUPRO 760, на сердечно-сосудистую систему, обусловленное нормализацией авторитмической сократительной активности воротной вены, среднего артериального давления, снижением массы ЛЖС крыс с экспериментальной уремией.

3. Впервые показано, что обогащение кальцием и магнием питьевой воды предотвращает уменьшение сократительной активности воротной вены и снижает среднее артериальное давление у крыс, подвергнутых нефрэктомии.

4. Впервые показано, что использование малобелковой соевой диеты в сочетании с питьевой водой, обогащенной кальцием и магнием, оказывает нефропротективное действие, нормализует среднее артериальное давление и предотвращает снижение сократительной активности воротной вены у крыс с уремией.

Научно-практическая значимость работы.

Установленные в эксперименте кардио- и нефропротективные свойства селективной белковой диеты с добавлением соевого изолята SUPRO 670 позволяют рекомендовать данную пищевую добавку к использованию в медицинской практике для коррекции хронических заболеваний почек и гипертензии.

Полученные данные о благоприятном влиянии питьевой воды, обогащенной кальцием и магнием, на функциональную активность воротной вены и артериальное давление позволяют рекомендовать ее применение с целью уменьшения риска сердечно-сосудистых осложнений и нарушения кальциевого метаболизма у людей с ХПН.

Результаты исследования углубляют представление о роли ионов кальция в регуляции авторитмической сократительной активности сосудов при уремии.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Изменение авторитмической сократительной активности воротной вены отмечается на раннем этапе экспериментальной уремии.

2. Применение селективной белковой диеты замедляет скорость прогрессирования уремии у крыс с нефрэктомией.

3. Селективная высокобелковая диета, содержащая соевый изолят

SUPRO 760, у животных с нефрэктомией оказывает положительный эффект на сердечно-сосудистую систему, проявляющийся в нормализа-

ции среднего артериального давления, сократительной активности воротной вены, уменьшении массы ЛЖС.

4.Обогащение питьевой воды кальцием и магнием способствует норма-лизации среднего артериального давления и авторитмической сократительной активности воротной вены у крыс с экспериментальной уремией.

Личный вклад автора.

Весь экспериментальный материал получен автором лично. Диссертантом освоена методика моделирования почечной недостаточности у крыс (5/6 нефрэктомии) и прооперировано 250 животных, осуществлен подбор экспериментальных групп для обследования, выполнены измерение уровня среднего АД и регистрация параметров авторитмической сократительной активности воротной вены (in vitro) у всех животных. Автором лично собран материал для лабораторного обследования сыворотки крови крыс на автоанализаторе и осуществлена статистическая обработка всех полученных результатов.

Апробация работы.

Результаты исследования были представлены на IX Всероссийской конференции по физиологии и патологии почек и водно-солевого обмена (Санкт-Петербург, 2001), на научно-практической конференции «Профилактика и лечение сердечно-сосудистых заболеваний» (Санкт-Петербург, 2002), на Всероссийской научно-практической конференции «Нефрология и диализ» (Санкт-Петербург, 2003), на международной нефрологической конференции «Белые ночи» XI ежегодного Санкт-Петербургского нефрологического семинара и V Балтийской нефрологической конференции (Санкт-Петербург, 2003), на Всероссийском конгрессе «Нефрология и диализ сегодня» (Новосибирск, 2003), на Всероссийской научно-практической конференции «Болезни почек: эпидемиология, диагностика, лечение» (г. Кызыл, 2004), на VI- ой Межрегиональной научно-практической конференции Искусственное питание и инфузионная терапия больных в медицине критических состояний (Санкт-Петербург, 2006).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 25 печатных работ.

Структура и объем диссертации.

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, трех глав с изложением результатов экспериментов, обсуждения, выводов и списка цитируемой литературы. Работа изложена на 191 странице машинописного текста, иллюстрирована 31 рисунком и 15 таблицами. Список литературы включает 38 отечественных и 255 иностранных источников.

Материалы и методы исследования.

В работе использовано 250 самцов крыс линии Wistar массой 190-220г. Эксперименты выполнены на фрагментах воротной вены, которые являются удобной моделью для исследования состояния внутриклеточного кальция ГМК сосудов, ранее разработанной в лаборатории НИИ нефрологии (Барабанова В.В. и др. 1991, 1993).

Исследованы следующие группы животных: 1) контрольные (ложнооперированные) крысы, получавшие стандартную диету (20% животного белка) и петербургскую водопроводную воду (8 мг/л Ca²⁺ , 3 мг/л Mg²⁺); 2) крысы с нефрэктомией (НЭ), получавшие стандартную диету; 3) крысы с НЭ, получавшие 10% кетостерила («Fresenius Kabi», Германия) в диете и 90% растительной пищи; 4) крысы с НЭ, получавшие 50% яичного белка и 50% растительной пищи; 5) ложнооперированные животные и крысы с НЭ, получавшие малобелковую (10% SUPRO 760, 90% растительной пищи) или высокобелковую (50% SUPRO 760, 50% растительной пищи) соевую диету; 6) ложнооперированные животные и крысы с НЭ, получавшие 10% SUPRO 760 в диете и воду, обогащенную Ca²⁺ (120 мг/л Ca²⁺, 3 мг/л Mg²⁺) или Ca²⁺ (120 мг/л) и Mg²⁺ (45 мг/л); 7) ложнооперированные животные и крысы с НЭ, получавшие стандартную диету и воду, обогащенную Ca²⁺ или Ca²⁺ и Mg²⁺.

Операцию 5/6 НЭ проводили в два этапа (с интервалом в 1 неделю) по методике Harris C. (1986). На первом этапе удаляли 2/3 массы левой почки. На втором - всю правую почку. С целью сохранения надпочечников, перед резекцией, почки декапсулировали. Контрольные крысы были подвергнуты «ложной» операции (почки извлекали из операционной раны и без повреждения помещали обратно). Забой животных осуществляли через 1 и 2 месяца после операции.

Перед забоем у крыс регистрировали среднее АД манжеточным методом и подсчитывали частоту сердечных сокращений (ЧСС).

После забоя у животных выделяли фрагменты воротной вены (ВВ), которые использовали для исследования авторитмической сократительной активности в изометрическом режиме с помощью механоэлектрического преобразователя 6Мх1С. Препараты находились в растворе Кребса при t=34-35^оС, pH=7,4. Одновременно с записью на диаграмной ленте самописца H-327-1 осуществляли регистрацию и последующую обработку сократительной активности ВВ на компьютере. Сократительную активность оценивали по частоте сокращений -f , общей амплитуде сокращений (А общ.), максимальной амплитуде (А мак) сокращений и выполняемой веной работе (Work) - площади под кривой сокращений.

Биохимическое исследование крови проводили на автоанализаторе «Cobas E Mira» в клинико-диагностической лаборатории 89 поликлиники г. Пушкина унифицированными методами. Степень уремии оценивали по уровню мочевины в сыворотке. При этом исходили из общепринятой классификации экспериментальной уремии у крыс (Smogorzevski M., 1995; McMahon A.C. et all., 2002), согласно которой к 1 степени относили случаи с концентрацией мочевины сыворотки крови в пределах от 6,68 до 13,36 ммоль/л, ко 2 степени - от 13,37 до 33,4 ммоль/л, к 3 степени - свыше 33,4 ммоль/л. Для оценки выраженности гипертрофии органов (ЛЖС, печень, легкие, селезенка) использовали формулу индекса гипертрофии, равную отношению массы органа к массе тела животного (Okoshi K. et al., 2004).

Результаты обработаны с помощью критериев Стьюдента и Вилкоксона-Манна-Уитни с использованием программного пакета «Statistica».

Результаты исследования

1. Влияние содержания белка в диете на среднее артериальное давление, массу левого желудочка сердца и функциональную активность воротной вены крыс

1.1 Биохимические показатели сыворотки крови крыс, получавших диеты с различным содержанием белка

Результаты биохимических исследований сыворотки крови экспериментальных животных представлены в таблицах 1 и 2. У крыс с уремией, получавших стандартную диету, выявлено увеличение мочевины и фосфора. К 2-м месяцам наблюдения отмечены гипокальциемия и гиперхолестеринемия. У крыс, получавших диету с 50% содержанием яичного белка, уровень мочевины крови существенно возрастал уже через 1 месяц после НЭ. К 2-м месяцам наблюдались более выраженные гипокальциемия (p<0,05) и фосфатемия (p<0,001), чем у животных с уремией на стандартной диете.

Диета, включающая 10% кетостерила, замедляла развитие уремии у крыс с НЭ. У данной экспериментальной группы уровень мочевины был почти в 2 раза ниже, чем у животных, получавших стандартный пищевой рацион после уменьшения почечной массы. Общий кальций от нормы не отличался. Содержание фосфора в сыворотке крови было ниже по сравнению с уремическими крысами, потреблявшими стандартную диету (p<0,005).

Таблица 1. Биохимические показатели сыворотки крови крыс, получавших диеты с различным содержанием белка (Мm).

Группы крыс	n	Мочевина ммоль/л	Ca общ. ммоль/л	Фосфор ммоль/л	Общий белок г/л	Альбумин г/л	Холестерин ммоль/л
Ложнооп. (станд. диета)	18	4,88± 0,64	2,35± 0,15	1,72± 0,10	56,7± 2,5	26,44± 1,18	1,34± 0,08
НЭ, 1 мес. (станд. диета)	10	13, 30 0,72*	2,56± 0,15	2,76 0,12**	61,6± 3,6	30,16± 2,76	1,33± 0,06
НЭ, 2 мес. (станд. диета)	13	16,20± 0,36**	1,92± 0,09***	2,59± 0.09**	56,5± 1,3	23,29± 0,74***	1,60± 0,12***
НЭ,1 мес. 50% жив. белка	9	16,16± 0,35**	1,68± 0,08*	3,00± 0,11**	54,3± 2,4	26,52± 0,71	1,30± 0,17
НЭ, 2 мес. 50% жив. белка	7	16,72± 0,73**	1,80± 0.09*	3,10± 0,06**	61,5± 1,9(*)	26,53± 0,92	1,63± 0,12***
НЭ, 2 мес. (10% кетостерил)	9	7,53± 0,75***	2,39± 0,15	2,09± 0,07*	63,6± 2,3(*)	29,30± 1,59	1,44± 0,17

*- различия достоверны относительно контроля (ложнооперированные крысы, стандартная диета), p<0,001; ** - p<0,0001; *** - p<0,01; ⁽*⁾ - p<0,05; n - количество животных.

Введение в пищевой рацион крыс с НЭ 10% или 50% соевого изолята SUPRO 760 давало отчетливый положительный результат в плане улучшения биохимических показателей сыворотки крови (табл. 2). Об эффективности его использования свидетельствуют снижение уровней мочевины, холестерина, фосфора. Кроме того, высокобелковая соевая диета не только предотвращала развитие гиперхолестеринемии у крыс с уремией, но и снижала содержание холестерина у ложнооперированных животных.

Таблица 2. Биохимические показатели сыворотки крови крыс, получавших SUPRO 760 (М±m).

Группы крыс	n	Мочевина ммоль/л	Ca общ. ммоль/л	Фосфор ммоль/л	Общий белок г/л	Альбумин г/л	Холестерин ммоль/л
Ложнооп. (станд. диета)	18	4,88± 0,64	2,35± 0,15	1,72± 0,10	56,7± 2,5	26,44± 1,18	1,34± 0,08
Ложнооп. 2 мес. (10% соя)	8	4,50 0,20	2,30 0,15	1,86 0,06	56,3 3,3	25,41 1,40	1,21 0,12
НЭ 1 мес. (10% соя)	9	8,11 0,48**	2,50 0,17	2,17 0,10*	58,8 0,9	28,31 2,28	1,47 0,18
НЭ 2 мес. (10% соя)	7	11,49 0,69*	2,43 0,07	2,10 0,06*	62,3 2,1(*)	27,41 0,87	1,49 0,07
Ложнооп. 2 мес. (50% соя)	8	5,58 0,45	2,00 0,15	1,83 0,03	55,6 3,3	25,93 1,90	0,92 0,07(*)
НЭ 1 мес. (50% соя)	8	13,70 0,52*	2,36 0,06	1,90 0,17	61,4 3,1(*)	27,65 0,37	1,46 0,06
НЭ 2 мес. (50% соя)	7	10,61 0,56*	2,06 0,15	1,96 0,02**	55,1 1,7	25,09 0,76	1,11 0,08(*)

* - различия достоверны относительно контроля (ложнооперированные крысы, стандартная диета), p<0,001; ** - p<0,01; (*) - p<0,05. n - количество животных.

1.2 Среднее артериальное давление и изменение массы органов крыс, получавших диеты с различным содержанием белка

Результаты исследования изменения среднего АД и ЧСС у крыс получавших диеты с различным содержанием белка представлены в таблице 3.

Таблица 3. Среднее артериальное давление и частота сердечных сокращений крыс, получавших диеты с различным содержанием белка (Mm).

Показа- тель	Ложнооп. (станд. диета)	НЭ 1 мес. (станд. диета)	НЭ 2 мес. (станд. диета)	НЭ 2мес. (50% жив. белка)	НЭ 2мес. (10% кетостерил)	НЭ 2 мес. (10% соя)	НЭ 2 мес. (50% соя)
АД (мм pт.ст.)	122,0 1,6	136,0 2,0**	152,5 2,5***	160,0 2,0***	124,0 1,5	135,0 2,0**	126,0 2,0
ЧСС (уд/мин)	360,0 9,0	387,0 20,0	407,0 17,0*	415,0 15,0*	369,0 10,0	398,0 13,0*	354,0 14,0
n	18	10	13	7	9	7	7

p<0,05, ** - p<0,001, *** - p<0,0001, различия достоверны относительно контроля ( ложнооперированные крысы, стандартная диета); n - количество животных.

Выявлено увеличение среднего АД и ЧСС у крыс с уремией, получавших стандартную диету по сравнению с контролем. Диета с 50% содержанием яичного белка приводила к более выраженному росту среднего АД и ЧСС у крыс через 2 месяца после НЭ (p< 0,0001 и p<0,05, соответственно). Диета, включающая 10% кетостерила, предотвращала увеличение среднего АД и ЧСС у животных с уремией. Через 2 месяца после НЭ у животных, получавших 10% соевую диету, АД было существенно ниже, чем у крыс с уремией на стандартном пищевом рационе (p <0,001). Однако ЧСС повышалась по сравнению с контролем. У крыс с уремией, получавших 50% SUPRO 760, через 2 месяца после НЭ не только АД, но и ЧСС значимо от контроля не отличались.

У всех животных с НЭ на стандартной диете отмечалась отчетливая гипертрофия ЛЖС. К 2-м месяцам она в среднем на 24,4% превышала показатель контрольной группы. Через 2 месяца после НЭ у крыс наблюдалось увеличение массы селезенки. У животных, потреблявших 50% яичного белка, гипертрофия ЛЖС была выражена в большей степени (p<0,05), чем у крыс с уремией на стандартной диете. У них также выявлены гипертрофии печени и селезенки. Диета, включающая 10% сои, не предотвращала в полной мере увеличение массы миокарда по сравнению с контролем. Однако степень развития гипертрофии была достоверно меньше, чем у животных с уремией на стандартном пищевом рационе (p<0,005). Причем, и это особенно примечательно, уменьшение гипертрофии сердца через 2 месяца после НЭ было наиболее выражено при использовании диеты с 50% содержанием SUPRO 760. артериальный уремия вена

1.3 Авторитмическая сократительная активность воротной вены крыс, получавших диеты с различным содержанием белка

Функциональная активность ВВ у крыс с уремией, получавших стандартную диету, менялась дважды. Через 1 месяц после НЭ регистрировалось повышение сократительной активности, проявляющееся в увеличении общей (в среднем на 55,5± 1,8%, p<0,001) и максимальной (на 43,4±2,6%, p<0,001) амплитуд сокращений, площади под кривой сокращений за 1 минуту (на 37,7±1,4%, p<0,01) по сравнению с контролем. Частота сокращений возрастала на 20,1±8,3% (p<0,05). Через 2 месяца после НЭ сократительная активность ВВ снижалась. Общая амплитуда сокращений уменьшалась на 29,8±5,4% (p<0,01), максимальная амплитуда - на 33,1±5,7% (p<0,01), площадь под кривой сокращений - на 37,4±4,2% (p<0,0001). Частота сокращений возрастала на 34,9±9,4% (p<0,01) относительно контроля.

У крыс с уремией, получавших диету с 50% содержанием яичного белка, наблюдалось более резкое изменение сократительной активности ВВ. Через 1 месяц после НЭ общая и максимальная амплитуды сокращений почти в 2 раза, а площадь под кривой сокращений в 1,5 раза превышали показатели контрольной группы. Через 2 месяца общая амплитуда сокращений уменьшалась по сравнению с контролем на 38,0±5,6% (p<0,001), максимальная амплитуда - на 42,3±6,0% (p< 0,0001), площадь под кривой сокращений - на 43,0±6,4% (p<0,0001). У крыс, получавших кетостерил, через 2 месяца после НЭ снижения функциональной активности ВВ не отмечалось.

У ложнооперированных животных потребление 10% или 50% соевой диеты существенно не изменяло сократительную активность ВВ по сравнению с контролем. В то же время, использование SUPRO 760 (10% или 50%) предотвращало как повышение функциональной активности ВВ у крыс через 1 месяц после НЭ, так и последующее ее снижение через 2 месяца. Таким образом, не только малобелковая (10%), но и высокобелковая (50%) соевая диета замедляла развитие изменений сократительной активности ВВ у животных с уремией.

2. Влияние диеты, включающей SUPRO 760, и воды, обогащенной Ca²⁺ и Mg²⁺ на среднее артериальное давление, массу левого желудочка сердца и функциональную активность воротной вены

2.1 Биохимические показатели сыворотки крови крыс, получавших SUPRO 760 и воду с различным содержанием Ca²⁺ и Mg²⁺

Использование диеты, содержащей 10% SUPRO 760 и питьевой воды, обогащенной Ca²⁺ (120 мг/л Ca²⁺, 3 мг/л Mg²⁺) или Ca²⁺ (120 мг/л) и Mg²⁺ (45мг/л), оказывало нефропротективный эффект у крыс с НЭ. У животных развивалась уремия только 1 степени (табл. 4). Кроме того, у крыс с НЭ, получавших стандартную диету, отмечалась гиперфосфатемия уже на ранних сроках формирования почечной недостаточности (табл. 1). Потребление соевого изолята и питьевой воды, обогащенной Ca²⁺ или Ca²⁺ и Mg²⁺, существенно снижало фосфатемию у крыс с уремией по сравнению с животными, получавшими 2 месяца после НЭ стандартную диету (p<0,005, p<0,01, соответственно). Наиболее благоприятный эффект наблюдался в группе, потреблявшей SUPRO 760 и воду, содержащую 120 мг/л Ca²⁺ и 3 мг/л Mg²⁺. Общий кальций, альбумин и холестерин, общий белок значимо от контроля не отличались.

Таблица 4. Биохимические показатели крови крыс, получавших SUPRO 760 и воду, с различным содержанием Ca²⁺ и Mg²⁺ (M±m).

Группы крыс	n	Моче-вина ммоль/л	Са общ. ммоль/л	Фосфор ммоль/л	Общий белок г/л	Альбумин г/л	Холестерин ммоль/л
Ложноопер. (станд. диета)	18	4,88 0,64	2,35 0,15	1,72 0,10	56,7 2,5	26,44 1,18	1,34 0,08
Ложноопер. 1 мес, (10% соя, 120 мг/л Са2+, 45 мг/л Mg2+)	7	5,03 0,53	2,40 0,04	1,84 0,04	58,7 0,7	26,51 0,92	1,35 0,08
Ложноопер. 2 мес.(10% соя,120 мг/л Са2+, 45 мг/л Mg2+	8	5,36 0,18	2,32 0,06	1,80 0,03	59,0 1,3	26,68 0,59	1,40 0,09
НЭ, 1 мес. (10% соя, 120 мг/л Cа2+ , 45 мг/л Mg2+)	7	7,71 0,57*	2,23 0,08	2,48 0,08**	54,3 1,8	24,97 1,68	1,24 0,09
НЭ, 2 мес. (10% соя, 120 мг/л Са2+, 45 мг/л Mg2+	8	8,38 0,65*	2,18 0,12	2,15 0,09*	60,7 2,8	25,98 1,10	1,48 0,09
Ложноопер. 2 мес. (10% соя, 120 мг/л Ca2+, 3 мг/л Mg2+)	9	3,78± 0,86	2,33± 0,15	1,80± 0,04	59,4± 0,5	25,89± 0,31	1,33± 0,17
НЭ, 1 мес. (10% соя, 120 мг/л Ca2+, 3 мг/л Mg2+)	7	7,40± 0,69***	2,28± 0,14	2,09± 0,04*	60,4± 3,2	30,01± 2,37	1,28± 0,08
НЭ, 2 мес. (10% соя, 120 мг/л Сa2+, 3 мг/л Mg2+)	15	6,93± 0,45(*)	2,22± 0,10	2,10± 0,08*	61,8± 2,9	26,45± 0,68	1,47± 0,10

* - различия достоверны относительно контроля (ложнооперированные крысы, стандартная диета), p<0,001; ** - p<0,0001, *** - p<0,01, (*)- p<0,05; n- количество животных.

2.2 Среднее артериальное давление и гипертрофия органов крыс, получавших SUPRO 760 и воду с различным содержанием Ca²⁺ и Mg²⁺

Длительное (6 недель) использование диеты, содержащей 10% SUPRO 760, и воды, обогащенной Ca²⁺ или Ca²⁺ и Mg²⁺, предотвращает рост среднего АД (112,0 ± 3,0 и 115,6 ± 4,0 мм рт.ст., соответственно) и нормализует ЧСС (348,0±12,0 и 336,0±13,0 уд/мин, соответственно) у крыс с уремией. У животных данных групп АД и ЧСС были меньше, чем у крыс с НЭ на стандартной диете и петербургской питьевой воде (p<0,001 и p<0,05, соответственно). Более того, среднее АД снижалось даже по сравнению с контролем (122,0±1,6 мм рт.ст.).

Потребление 10% соевой диеты и воды, обогащенной Ca²⁺ и Mg²⁺, снижает степень выраженности гипертрофии ЛЖС у крыс через 2 месяца после НЭ (ИГ:2,57±0,17 мг/г) по сравнению с животными, получавшими стандартный пищевой рацион (ИГ: 2,75±0,07 мг/г). В тоже время, применение SUPRO 760 и воды, обогащенной только Ca²⁺, предотвращает увеличение массы ЛЖС у крыс с уремией. Индексы гипертрофии сердца значимо не отличались от контроля (ИГ: 2,23±0,05 мг/г), как через 1 (ИГ: 2,20±0,05 мг/г), так и через 2 месяца (ИГ: 1,19±0,05) после НЭ. Массы печени, легких, селезенки существенно не изменялись.

2.3 Функциональная активность воротной вены крыс, получавших SUPRO 760 и воду с различным содержанием Ca²⁺ и Mg²⁺

У ложнооперированных крыс использование 10% соевой диеты и воды, обогащенной Ca²⁺ или Ca²⁺ и Mg²⁺, не изменяет значимо авторитмическую сократительную активность воротной вены по сравнению с контролем. В тоже время, потребление SUPRO 760 и питьевой воды с добавлением Ca²⁺ или Ca²⁺ и Mg²⁺ предотвращает первоначальное (через 1 месяц после НЭ) существенное повышение и последующее (через 2 месяца) снижение функциональной активности ВВ у крыс с уремией. Так, через 2 месяца после НЭ общая амплитуда сокращений и площадь под кривой сокращений за 1 минуту почти в 2 раза (p<0,001 и 0,01, соответственно), максимальная амплитуда сокращений в 2,5 раза (p<0,001) были больше, а частота сокращений (в среднем на 34,9%, p<0,001) меньше у крыс, получавших SUPRO 760 и воду, обогащенную Ca²⁺(120 мг/л) и Mg²⁺ (45 мг/л), чем у животных с уремией на стандартном пищевом рационе и петербургской питьевой воде (8 мг/л Ca²⁺, 3 мг/л Mg²⁺).

3. Влияние содержания Ca²⁺ и Mg²⁺ в питьевой воде на среднее артериальное давление, массу левого желудочка сердца и функциональную активность воротной вены крыс

3.1 Влияние содержания Ca²⁺ и Mg²⁺ в питьевой воде на биохимические показатели сыворотки крови ложнооперированных животных и крыс с нефрэктомией

Потребление питьевой воды, включающей120 мг/л Ca²⁺ и 45 мг/л Mg²⁺ или 120 мг/л Ca²⁺ и 3 мг/л Mg²⁺, не изменяет значимо биохимические показатели сыворотки крови ложнооперированных крыс по сравнению с контролем, получавшим петербургскую водопроводную воду с низким содержанием (8 мг/л) Ca²⁺ и (3мг/л) Mg²⁺ (табл.5).

Таблица 5. Биохимические показатели сыворотки крови крыс, получавших стандартную диету и воду с различным содержанием Са²⁺ и Mg²⁺ (M±m).

Группы Крыс	n	Мочевина ммоль/л	Са общ ммоль/л	Фосфор ммоль/л	Общий Белок г/л	Альбумин г/л	Холестерин ммоль/л
Ложноопер. 1 мес. (8 мг/л Са2+ 3 мг/л Mg2+)	18	4,88 0,64	2,35 0,15	1,72 0,1	56,7 2,5	26,44 1,18	1,34 0,08
Ложнопер. 2 мес.(120 мг/л Са2+, 45 мг/л Mg2+)	20	6,04 0,46	2,40 0,08	1,86 0,06	61,0 3,4	29,28 1,91	1,28 0,02
НЭ, 2 мес. (120 мг/л Са2+,3 мг/л Mg2+)	13	12,37 0,57*	2,20 0,16	2,29 0,12**	60,8 2,1	25,42 0,73	1,63 0,17(*)
Ложноопер 2 мес.(120 мг/л Са2+ 3 мг/л Mg2+)	20	4,86 0,63	2,22 0,1	1,76 0,15	60,5 1,9	27,39 0,60	1,40 0,06
НЭ, 1 мес. (120 мг/л Са2+, 3 мг/л Mg2+)	8	7,91 0,45*	2,37 0,13	2,17 0,08**	61,2 2,9	29,17 2,09	1,64 0,20(*)
НЭ, 2 мес. (120 мг/л Са2+, 3 мг/л Mg2+)	12	8,17 0,42*	2,28 0,10	2,30 0,10**	58,8 0,9	25,00 0,89	1,49 0,15

* - различия достоверны относительно контроля (ложнооперированные крысы, 8 мг/л Са²⁺, 3 мг/л Mg²⁺) p<0,001; ** - p<0,0001; (*) - p<0,05. n - количество животных.

Через 2 мес. после НЭ у животных, получавших 120 мг/л Ca²⁺ и 3 мг/л Mg²⁺ в воде, уровень мочевины крови был существенно ниже, чем в минералодефицитной группе (16,20± 0,36 ммоль/л; p<0,001). Использование питьевой воды, обогащенной Ca²⁺ или Ca²⁺ и Mg²⁺, не предотвращало в полной мере развитие гиперфосфатемии у крыс с уремией. Однако выраженность ее была меньше, чем в группе, получавшей 2 месяца после НЭ 8 мг/л Ca²⁺ и 3 мг/ л Mg²⁺ (p<0,05). Кроме того, потребление воды, обогащенной Ca²⁺ или Ca²⁺ и Mg²⁺, предотвращало развитие гипокальциемии у крыс с уремией. Уровень общего кальция через 2 месяца после НЭ не отличался от контроля.

3.2 Среднее артериальное давление и гипертрофия органов крыс, получавших питьевую воду с различным содержанием Ca²⁺ и Mg²⁺

Использование питьевой воды, обогащенной Ca²⁺ или Ca²⁺ и Mg²⁺, не изменяло значимо среднее АД и ЧСС у ложнооперированных крыс по сравнению с контролем. В то же время, потребление воды с добавлением Ca²⁺ и Mg²⁺ уменьшало рост среднего АД (132, 7±3,5 мм рт.ст.) и ЧСС (373,0±11,5 уд/мин) у крыс через 2 месяца после НЭ. Наиболее благоприятный эффект на АД (125,0±2,0 мм рт.ст.) и ЧСС (328,0±6,5 уд/мин) у животных с уремией оказывала питьевая вода, содержащая 120 мг/л Ca²⁺ и 3 мг/л Mg²⁺.

У крыс с НЭ, получавших 6 недель воду, обогащенную Ca²⁺ или Ca²⁺ и Mg²⁺, массы селезенки и сердца увеличивались относительно контроля. Однако индекс гипертрофии ЛЖС через 2 месяца после уменьшения почечной ткани у них снижался по сравнению с животными, потреблявшими водопроводную воду с низким содержанием данных катионов. Массы печени и легких существенно не изменялись.

3.3 Функциональная активность воротной вены крыс, получавших питьевую воду с различным содержанием Ca²⁺ и Mg²⁺

У ложнооперированных крыс, получавших 120 мг/л Ca²⁺ и 3 мг/л Mg²⁺, через 2 месяца достоверно повышалась общая амплитуда сокращений (на 35,5±10,2%, p<0,001) ВВ. Частота сокращений снижалась по сравнению с контролем на 22,2±5,3% (p<0,05). Площадь под кривой сокращений существенно не изменялась. У ложнооперированных крыс, получавших 120 мг/л Ca²⁺ и 45 мг/л Mg²⁺ в питьевой воде, значимо повышалась только максимальная амплитуда сокращений (на 17,6±6,2%, p<0,05).

У крыс с уремией применение воды, обогащенной Ca²⁺ или Ca²⁺ и Mg²⁺, предотвращало снижение функциональной активности ВВ, отмеченное через 2 месяца после НЭ у животных, получавших петербургскую водопроводную воду.

Обсуждение

Показано, что течение экспериментальной уремии у крыс сопровождается изменением биохимических показателей сыворотки крови, повышением среднего АД, развитием гипертрофии ЛЖС, нарушением сократительной активности ВВ. На начальном этапе развития уремии гипертрофия может рассматриваться как компенсаторная реакция на увеличение прессорной нагрузки на сердце. Однако последствия её проявления могут быть неблагоприятными, так как известно, что гипертрофия является одной из основных причин нарушения функции сердца при почечной недостаточности (Foley R.N., Parfrey P.S., 1997). Исследования, проведенные ранее в нашей лаборатории, не выявили признаков гиперволемии у крыс после НЭ (Пенчул Н.А., 2004). Вероятнее всего, повышение среднего АД вносит существенный вклад в развитие гипертрофии миокарда у животных с уремией. Однако, учитывая важную роль АГ, следует все же отметить, что это не единственная причина увеличения массы ЛЖС при ХПН. Обсуждается роль в этом процессе анемии, электролитных нарушений, ренин-ангиотензин-альдестероновой системы, гипергомоцистеинемии, вторичного гиперпаратиреоза (Lim U., Cassano P.A., 2002; Amann K. et al., 2003). В предыдущих исследованиях нашей лаборатории также было выявлено значительное повышение уровня ПТГ в сыворотке крови крыс через 2 месяца после НЭ (Барабанова В.В., Береснева О.Н., 1998). Увеличивая содержание кальция в кардиомиоцитах или активируя протеинкиназу С, ПТГ влияет на инсулин-подобный фактор роста, стимулирует синтез контрактильных и неконтрактильных белков, которые и определяют гипертрофию (Qing D.P. et al., 1999). Таким образом, увеличение массы сердца при ХПН имеет комплексную природу.

Параллельно с ростом АД и увеличением массы сердца у крыс, подвергнутых НЭ и получавших стандартную диету, происходит изменение сократительной активности ВВ. Через 1 месяц после НЭ она возрастает, через 2 месяца - снижается. Поскольку авторитмическая сократительная активность ВВ определяется уровнем ионизированного кальция в миоцитах и зависит от скорости его высвобождения и связывания во внутриклеточных хранилищах (Flesch M. et al., 1996), можно предположить следующие патофизиологические процессы в ГМК ВВ при экспериментальной уремии. Повышение авторитмической сократительной активности ВВ у крыс на начальных сроках после уменьшения массы почек обусловлено увеличением входа ионов кальция в ГМК и включением компенсаторных механизмов его перераспределения. По мере прогрессирования уремии (к 2-м месяцам) происходит срыв компенсации и перегрузка внутриклеточных структур (СПР и митохондрий) кальцием, что приводит к снижению сократительной активности ВВ. Аналогичные результаты были получены в нашей лаборатории при исследовании сократительной функции миокарда крыс, подвергнутых НЭ (Пенчул Н.А., 2004). Существенную роль в этом процессе может играть вторичный гиперпаратиреоз. Известно, что ПТГ увеличивает уровень внутриклеточного кальция в эндотелии сосудов через активацию L - типа Са²⁺ -каналов, стимуляцию G-белков и цАМФ (Isales C.M. et al., 2000). Кроме того, при повышенных концентрациях гормон инактивирует ферменты, ответственные за удаление иона из клетки (Smogorzewski M., 1995). Высокое содержание фосфора в сыворотке крови при уремии также может стимулировать ГМК сосудов, вызывая изменения, которые предрасполагают к кальцификации (Griachelli C.M. et al., 2001).

Многие изменения в организме людей, ускоряющие развитие структурно-функциональных нарушений в почках связаны с содержанием белка в диете. Наши исследования применения МБД, включающей кетостерил, показали, что помимо поддержания белкового баланса и уменьшения выраженности уремии, смесь эссенциальных АК и их кетоаналогов предотвращает рост среднего АД и снижение авторитмической сократительной активности ВВ у крыс через 2 месяца после НЭ. Существенная роль в этом процессе может принадлежать нормализации внутриклеточного метаболизма кальция.

Наиболее интересным и значимым оказалось обнаружение нефропротективного действия высокобелковой селективной соевой диеты. Так, у крыс с уремией, получавших 50% SUPRO 760 в суточном пищевом рационе, к концу срока наблюдения отмечалась уремия только I степени. У них также был выявлен более низкий уровень фосфора в сыворотке крови по сравнению с животными, потреблявшими стандартную диету после НЭ. Возможно, это обусловлено составом соевых протеинов, практически не содержащих фосфора.

Результаты исследования свидетельствуют и о положительном влиянии как малобелковой, так и высокобелковой соевой диеты на величину среднего АД, снижение массы ЛЖС и сократительную активность ВВ у животных, подвергнутых 5/6 НЭ. Так, увеличения сократительной активности ВВ на начальных сроках эксперимента и последующего значительного её снижения к 2-м месяцам после НЭ у крыс, потреблявших SUPRO 760, не наблюдалось. Общая и максимальная амплитуды сокращений, выполняемая веной работа у них практически не отличались от показателей контрольных животных. Изменение данных параметров функциональной активности ВВ зависит от содержания кальция в миоцитах. Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о сохранности внутриклеточного гомеостаза Са²⁺ в ГМК ВВ крыс, получавших после НЭ соевую диету.

Наши данные согласуются с исследованиями Zhai P. и соавт. (2001), которые отмечают нормализацию внутриклеточного содержания Са²⁺ и увеличение митохондриальной активности в кардиомиоцитах при использовании соевых белков в условиях ишемии миокарда, связывая это с действием фитоэстрогенов. Благоприятный эффект соевых белков на сократительную активность ВВ крыс может быть связан с положительным воздействием на фосфорно-кальциевый обмен и замедлением развития вторичного гиперпаратиреоза. Особенно важен факт нормализующего действия высокобелковой соевой диеты, тогда как ВБД, включающая яичный протеин (белок животного происхождения) негативно влияет не только на биохимические показатели сыворотки крови, но и усугубляет изменение функциональной активности ВВ, степень выраженности гипертрофии ЛЖС, способствует значительному росту величины среднего АД у крыс с НЭ.

Существенным моментом работы явилось установление кардиопро-тективной роли соевой диеты. У крыс с НЭ, получавших 50% SUPRO 760, увеличение массы ЛЖС проявлялось в меньшей степени, чем у животных, потреблявших стандартную диету или рацион с 50% содержанием яичного протеина. Полагают, что соевые белковые изоляты могут ингибировать факторы роста и пролиферацию клеток через механизм, опосредованный эстрогеновыми рецепторами. Не исключено их влияние на факторы роста, вовлечённые в синтез внеклеточного матрикса и фиброгенез. Кроме того, соевые протеины способны ингибировать вызванную цитокинами активацию транскрипционных факторов (Ranich T. et al., 2001).

Известно, что рост АД существенно влияет на скорость прогресси-рования ХПН. Поэтому коррекции АД у людей с изменением функции почек уделяют большое внимание. В наших экспериментах выявлено снижение среднего АД у животных с уремией, получавших SUPRO 760. Мы полагаем, что в этом задействованы выделенные из сои пептиды, проявляющие свойства ингибиторов ангиотензин-конвертирующего энзи-ма. Ряд авторов также считает, что именно они опосредуют антигипер-тензивный эффект сои у SHR (Martin D.S. et al., 2002; Wu J., Ding X., 2001).

В наших исследованиях обогащение питьевой воды Са²⁺ или Са²⁺ и Mg²⁺ не только улучшало биохимические показатели сыворотки крови, но и способствовало уменьшению уровня среднего АД, выраженности гипертрофии миокарда у крыс, получавших после НЭ как 10% SUPRO 760, так и стандартный пищевой рацион. Небольшие добавки Са²⁺, особенно в сочетании с ограничением поступления фосфора при использовании соевой диеты также предотвращают снижение авторитмической сократительной активности ВВ у животных с уремией. Мы полагаем, что увеличение концентрации Са²⁺ Mg²⁺ в водном пуле замедляет развитие вторичного гиперпаратиреоза и предотвращает перегрузку ГМК сосудов Са²⁺ у крыс после НЭ. Возможно, это связано с тем, что при уремии уменьшается образование Са²⁺-чувствительных рецепторов в клетках паращитовидных желез (Fernandez M.J.L. et al., 2003). В результате снижается их чувствительность к содержанию Са²⁺ в крови. Поэтому необходимо больше Са²⁺ для подавления секреции ПТГ. Повышение содержания Mg²⁺ в сыворотке крови также может замедлять развитие сосудистой кальцификации.

Мы полагаем, что при экспериментальной уремии коррекция минерального состава питьевой воды предупреждает или задерживает проявление патологических изменений в сердечно-сосудистой системе, нормализуя кальциевый и магниевый баланс за счет увеличения эффективности усвоения данных ионов и предотвращения нарушения распределения кальция в клетках, в том числе в ГМК сосудов.

Выводы

1.Уменьшение массы функционирующих нефронов вызывает изменение авторитмической сократительной активности воротной вены у крыс: через 1 месяц после нефрэктомии она увеличивается, через 2 месяца - снижается.

2. Сбалансированные по содержанию протеинов малобелковые диеты замедляют скорость прогрессирования экспериментальной уремии, не вызывая развития белково-энергетической недостаточности.

3. Не только малобелковая, но и селективная высокобелковая диета, содержащая соевый изолят SUPRO 760, обладает нефропротективным действием у крыс с нефрэктомией, заключающимся в замедлении темпов нарастания уремии.

4. Селективная высокобелковая диета, содержащая соевый изолят SUPRO 760, обладает кардиопротективным эффектом у крыс с экспериментальной уремией, на что указывает нормализация артериального давления, показателей авторитмической сократительной активности воротной вены, уменьшение массы левого желудочка сердца.

5. Малобелковая диета, содержащая SUPRO 760, в сочетании с питьевой водой, обогащенной кальцием или кальцием и магнием, замедляет прогрессирование уремии, предотвращает снижение сократительной активности воротной вены, уменьшает рост среднего артериального давления и массы левого желудочка сердца у крыс после нефрэктомии.

6. Использование питьевой воды, содержащей 120 мг/ л Ca²⁺ и 3 мг/л Mg²⁺ или 120 мг/л Ca²⁺ и 45 мг/л Mg²⁺, оказывает кардиопротективное влияние на сердечно-сосудистую систему крыс с уремией: снижает артериальное давление и частоту сердечных сокращений, нормализует сократительную активность воротной вены.

7. Высокобелковая соевая диета снижает уровень холестерина в сыворотке крови как ложнооперированных животных, так и крыс с нефрэктомией.

Автор выражает искреннюю благодарность проф. И.Г. Каюкову, к.б.н. Бересневой О.Н., к.б.н. Ивановой Г.Т. за неоценимую помощь в выполнении данной работы.

Список основных работ, опубликованных по теме диссертации

1. Барабанова В.В., Замураев О.Н., Парастаева М.М., Титова В. А. Функциональная активность воротной вены крыс как отражение особенностей обмена кальция при спонтанной гипертензии и экспериментальной уремии у крыс.//Нефрология.-1997.- Т.1, N3.-С.39- 45.

2. Береснева О.Н., Парастаева М.М. Функциональная активность воротной вены крыс с экспериментальной ХПН, получавших соевый изолят SUPRO 760.// Нефрология.- 2001.- Т.5, N3.- С.92.

3. Иванова Г.Т., Береснева О.Н., Парастаева М.М., Чефу С.Г. Влияние минерального состава питьевой воды на сократительную активность воротной вены и артериальное давление крыс после нефрэктомии.// Сб. Трудов Х ежегодного нефрологического семинара.- СПб. 17-21 июня 2002 г.- С.104.

4. Парастаева М.M., Иванова Г.Т., Береснева О.Н., Чефу С.Г. Коррекция минерального состава питьевой воды предупреждает развитие артериальной гипертензии при хронической почечной недостаточности у крыс. // Вестник аритмологии. Материалы конференции и научной сессии.- 2002, N26.- С.181-182.

5. Береснева О.Н., Парастаева М.М., Иванова Г.Т., Чефу С.Г. Употребление соевого изолята SUPRO 760 замедляет развитие сосудистых нарушений при экспериментальной почечной недостаточности у крыс. // Вестник аритмологии. Материалы конференции и научной сессии.- 2002, N 26.- C. 172 - 173.

6. Парастаева М.М., Береснева О.Н., Иванова Г.Т., Кучер А.Г., Каюков И.Г. Функциональная активность воротной вены крыс с экспериментальной хронической почечной недостаточностью, получавших соевый и животный белки в диете. Сообщение 1.// Нефрология.- 2002, N2.- С.77-80.

7. Парастаева М.М. Влияние содержания животного белка в диете на развитие сосудистых нарушений у крыс после нефрэктомии.// Всероссийская научно-практическая конференция «Нефрология и диализ». Санкт- Петербург, 27-29 января 2003 г.// Нефрология.- 2003.- Приложение 1.- Т.7.- С.230-231.

8. Береснева О.Н., Парастаева М.М., Кучер А.Г.. Иванова Г.Т., Каюков И.Г., Митрофанова О.В. Влияние содержания белка в диете на прогрессирование экспериментальной хронической почечной недостаточности.// Нефрология.- 2003, N4.- C. 66-70.

9. Парастаева М.М., Береснева О.Н., Иванова Г.Т., Каюков И.Г., Кучер А.Г. Влияние диеты с различным содержанием растительного и животного белка на прогрессирование хронической почечной недостаточности у крыс.// Нефрология и диализ. - 2003.- Т. 5, N3.- C. 271-272.

10. Береснева О.Н., Парастаева М.М., Иванова Г.Т., Каюков И.Г., Кучер А.Г. Влияние содержания белка в пищевом рационе на прогрессирование экспериментальной уремии у крыс./ В сб. тр. Международной нефрологической конференции «Белые ночи» XI ежегодного СПб нефрологического семинара и V Балтийской нефрологической конференции. 17-23 июня 2003 г., СПб, Россия.- C. 28.

11. Парастаева М.М., Иванова Г.Т., Береснева О.Н. Влияние минерального состава питьевой воды на течение экспериментальной ХПН. Сб. Тр. Международной нефрологической конференции «Белые ночи» XI ежегодного СПб нефрологического семинара и V Балтийской нефр. Конференции. 17-23 июня 2003 г. СПб, Россия, C.88-89.

12. Смирнов А.В., Чурина С.К., Парастаева М.М., Иванова Г.Т., Береснева О.Н., Каюков И.Г. Влияние минерального состава питьевой воды на прогрессирование экспериментальной уремии у крыс.// Нефрология.- 2004, N1.- C.71-76.

13. Парастаева М.М., Береснева О.Н., Иванова Г.Т. Митрофанова О.В., Каюков И.Г., Кучер А.Г. Роль коррекции минерального состава питьевой воды в замедлении прогрессирования экспериментальной хронической почечной недостаточности./ Материалы IV межрегиональной научно-практической конференции «Искусственное питание и инфузионная терапия больных в медицине критических состояний».- CПб., 21-22 апреля 2004 г.- C. 14-15.

14. Кучер А.Г., Береснева О.Н., Парастаева М.М., Каюков И.Г. Влияние селективной соевой диеты на биохимические показатели сыворотки крови и артериальное давление у крыс с экспериментальной уремией./ Материалы IV международной научно - практической конференции «Искусственное питание и инфузионная терапия больных в медицине критических состояний».- СПб., 21-22 апреля 2004 г.- С. 15.

15. Береснева О.Н., Парастаева М.М., Иванова Г.Т., Кучер А.Г., Митрофанова О.В., Каюков И.Г. Влияние соевой диеты на развитие экспериментальной ХПН у крыс.// Нефрология.- 2004.- Т.8, Приложение 2.- C. 265 -266.

16. Парастаева М.М., Береснева О.Н., Иванова Г.Т., Кучер А.Г., Каюков И.Г. Влияние соевого изолята SUPRO 760 и питьевой воды, обогащенной Ca²⁺ , на сердечно-сосудистую систему крыс с уремией.// VI съезд научного общества нефрологов России.- М.: Медицина для всех, 2005.-С.179.