Дальнейшие исследования по установлению состава пленочных матриц проведены на основании оценки следующих функциональных свойств: толщина, время растворения, влажность, рН водного раствора, паропроницаемость, деформационно-прочностные и адгезионные характеристики (таблица 14).

Таблица 14. Физико-химические свойства пленочных матриц

Основа, %	Толщина, мм	Время растворения мин	Влажность %	рН водн. р-ра	Паропроницаемость, г/м 2*час	Мех. проч. на разрыв кг/м 2	Относит. удлинение, %	Модуль упругости, кг/см 2	Напряжение отслаивания, г/см 2
Na КМЦ 3 Глицерин 2	0,24 + 0,01	5,6 + 0,1	7,5 + 0,1	6,55 + 0,3	98,74 + 0,2	8,7 + 0,2	306,0 + 8,4	3,50 + 0,12	0,022 + 0,013
Na альгинат 3 Глицерин 2	0,26 + 0,01	5,2 + 0,2	8,4 + 0,1	6,50 + 0,07	86,00 + 0,3	4,7 + 0,2	300,0 + 7,2	3,57 + 0,08	0,020 + 0,011
Бланозе 7МF 3 Глицерин 2	0,14 + 0,07	6,2 + 0,3	7,2 + 0,2	5,90 + 0,07	97,14 + 0,2	9,2 + 0,1	273,0 + 8,1	3,22 + 0,23	0,014 + 0,009
Бланозе 7М 8SF 3 Глицерин 2	0,14 + 0,01	15,3 + 0,4	9,3 + 0,4	6,30 + 0,5	117,20 + 0,3	9,8 + 0,3	364,0 + 6,5	3,90 + 0,11	0,030 + 0,014

Установленные экспериментальные значения показателей свидетельствуют об удовлетворительном качестве выбранных матриц, но ввиду экономической доступности предпочтение на данном этапе отдано Na КМЦ и натрия альгинату.

Кинетические параметры пленок (степень набухания, время растворения) свидетельствуют об их принадлежности к неограниченно набухающим системам матричного типа, обеспечивающим диффузионный пролонгированный релиз ЛВ.

Получение пленок осуществлялось методом полива пленочной массы на гидрофобную подложку с последующей сушкой в сушильном шкафу при экспериментально установленной температуре 40-50 ⁰С, в течение 17-19 часов.

Выбор терапевтической концентрации действующих веществ в пленках, осуществляли на основании фармакологических исследований специфической противовоспалительной и антимикробной активности. На основании результатов определения биологической доступности методом диализа через полупроницаемую мембрану с регистрацией количества суммы флавоноидов спектрофотометрическим методом, установлено, что наибольшая степень высвобождения для исследуемых составов достигается из пленок на основе Na КМЦ, использованных для дальнейших исследований (табл. 15).

С целью оптимизации процесса изучения кинетики высвобождения лекарственных веществ из ПЛ диализным методом, нами исследована возможность применения для контроля релиза кондуктометрического метода, основанного на измерении электропроводимости БАВ, которая, находится, в прямолинейной зависимости от концентрации в растворе ионизированного вещества. Возможность использования кондуктометрии обусловлена способностью биологически активных веществ фиалки экстракта сухого и НЭС диссоциировать в водной среде с образованием ионов.

Таблица 15. Результаты высвобождения флавоноидов из ПЛ методом диализа

Время, мин	ПЛ на основе Na-КМЦ	ПЛ на основе Na-КМЦ и Na альгината
	Содержание флавоноидов, %	Степень высвобождения, %	Содержание флавоноидов, %	Степень высвобождения, %
60	0,522	58	0,174	19,3
90	0,600	66,6	0,358	39,7
120	0,667	74,1	0,532	60,2
180	0,740	82,2	0,667	74,1
240	0,804	89,3	0,741	82,3
300	0,854	94,8	0,756	84,0

Методом кондуктометрии установлено, что высвобождение БАВ их пленок относится к реакции первого порядка, рассчитанные константы скорости релиза для ПЛ на основе Na альгината больше в 1,6 раза, чем на основе Na КМЦ, т.е. они обеспечивают более пролонгированное высвобождение ЛВ; небольшие значения энергии активации, характеризуют способность систем к самопроизвольному релизу (табл. 16).

Полученные данные, а также исследование влияния внешних факторов на процесс высвобождения ЛВ из пленок (концентрация действующих веществ, температура и рН среды), гидродинамических факторов (перемешивание, величина межфазной поверхности) при отсутствии диализной мембраны, позволили установить, что исследуемые ПЛ относятся к пролонгированным матричным системам диффузионного типа, скорость высвобождения БАВ из которых определяется составом полимерной матрицы и изученными факторами, влияющими как на биодеструкцию полимера, так и на диффузию ЛВ.

Таблица 16. Результаты определения константы релиза БАВ из пленок лекарственных

Основа	ПЛ "Фиадент"	ПЛ "Нормофит"
Основа 1 Основа 2	k1 =8,71*10-4, с-1; k2=5,50*10-4, с-1;	k1=--6,3--*--1_-4--с-1; k2=--4,_--*--1_-4--с-1;

Определяя степень набухания пленок через определенные промежутки времени, получили кривые, характеризующие кинетику набухания (Рис. 7).

Рисунок 7. Кинетические кривые набухания ПЛ на различных основах

Для изученных нами композиций они имеют вид кривых неограниченного набухания и проходят через максимум. О предельной величине набухания говорить нельзя, так как одновременно с процессом набухания идет процесс растворения ПЛ.

Таким образом, изучены кинетические закономерности высвобождения фенольных соединений из ПЛ различного композиционного состава. Установлено, что скорость их высвобождения является функцией химической и физической природы полимера, концентрации активного начала в матрице, температуры, рН среды.

Результаты исследований показали, что скорость высвобождения БАВ из различных основ не одинакова. Более быстрое высвобождение флавоноидов обеспечивает основа Na-КМЦ, она же обладает большей способностью к набуханию и быстрее растворяется. Регулируя факторы, влияющие на процесс набухания и растворения пленок, можно создавать матричные системы с различной скоростью высвобождения БАВ.

На основании результатов исследований доказана рациональность использования кондуктометрического метода анализа для определения относительной БД и изучения кинетических закономерностей процесса релиза БАВ из пленок, как более эффективного, менее длительного и более информативного в сравнении с диализным методом.

В результате проведенных исследований разработана технологическая схема получения ПЛ "Фиадент" и "Нормофит" (рис. 8).

Стандартизацию пленок проводили исходя из сформулированных нами показателей, включенных в проект ОФС "Пленки лекарственные": описание, подлинность, толщина, средняя масса, потеря в массе при высушивании, время растворения, рН водного раствора, количественное определение.

Результаты стандартизации, представленные в таблице 17, указывают на то, что пленки характеризуются оптимальным значением рН и медленной растворимостью, свидетельствующих об их способности при нанесении на очаг поражения набухать, превращаясь в гель, растворяться за определенный промежуток времени и пролонгировать действие БАВ, не вызывая раздражения.

Таблица 17. Результаты стандартизации ПЛ "Фиадент" и "Нормофит"

№ серии	Внешний вид	Содержание суммы флавоноидов, %	Ср. масса, г	Толщина, мм	Время раств., мин	рН водн. р-ра.	Потеря в массе при высуш., %
1	2	3	4	5	6	7	8
Пленки "Фиадент" на Na КМЦ
01	Эластичные пластины коричневого цвета со специфическим запахом и вкусом, без механических включений и пузырьков воздуха	1,01+ 0,04	0,0569+ 0,0001	0,19±0,07	12,0 ± 0,5	6,8± 0,05	7,6±1,1
02	---"---	0,96 + 0,02	0,0565 + 0,0002	0,23 + 0,03	14,0 + 0,3	6,9+ 0,05	7,8 + 1,1
03	---"---	0,98 + 0,01	0,0573 + 0,0002	0,22 + 0,05	12,0 + 0,6	6,8+ 0,08	7,4 + 1,3
04	---"---	1,07 + 0,02	0,0564 + 0,0002	0,20 + 0,04	15,0 + 0,4	6,9+ 0,04	7,7 + 1,2
05	---"---	0,99 + 0,02	0,0546 + 0,0003	0,18 + 0,03	15,0 + 0,2	6,8+0,07	7,5 +10,4
Пленки "Фиадент" на Na альгинате
01	Эластичные пластины коричневого цвета со специфическим запахом и вкусом, без механических включений и пузырьков воздуха	0,87 + 0,02	0,0501 + 0,0004	0,24±0,08	26,10 ± 2,1	6,7±0,05	6,9±2,2
02	---"---	0,81 + 0,02	0,0511 + 0,0002	0,24 + 0,02	23,0 + 0,6	7,0+0,02	7,0 + 0,2
03	---"---	0,91 + 0,02	0,0507 + 0,0002	0,21 + 0,02	20,0 + 0,4	6,9 +0,05	6,7 + 0,3
04	---"---	0,86 + 0,02	0,0488 + 0,0004	0,21 + 0,01	21,0 + 0,2	7,0 +0,01	6,8 + 0,1
05	---"---	0,93 + 0,02	0,0505 + 0,0005	0,24 + 0,02	22,0 + 0,3	6,8 +0,07	7,1 + 0,4
Пленки "Нормофит" на Na КМЦ
01	Эластичные пластины коричневого цвета со специфическим запахом и вкусом, без механических включений и пузырьков воздуха	1,03+0,01	0,0396 + 0,0001	0,18+0,02	16,0 + 0,1	6,8 + 0,01	9,08+0,03
02	---"---	0,98+0,01	0,0414 + 0,0002	0,17+0,02	17,0 + 0,3	6,7 + 0,05	9,10+0,01
03	---"---	0,94+0,02	0,0399 + 0,0002	0,20+0,01	16,0 + 0,1	6,8 + 0,08	9,20+0,01
04	---"---	0,97+0,04	0,0409 + 0,0002	0,18+0,05	15,0 + 0,4	6,8 + 0,07	9,10+0,02
05	---"---	0,95+0,01	0,0382 + 0,0003	0,18+0,01	18,0 + 0,2	6,6 + 0,06	9,10+0,02
Пленки "Нормофит" на Na альгинате
01	Эластичные пластины коричневого цвета со специфическим запахом и вкусом, без механических включений и пузырьков воздуха	0,85+0,01	0,0395+ 0,0001	0,16+0,04	18,0+0,5	6,5+0,02	7,8+0,01
02	---"---	0,93+0,03	0,0409+ 0,0002	0,17+0,02	19,0+0,3	6,1+0,05	7,7+0,01
03	---"---	0,92+0,02	0,0373+ 0,0002	0,17+0,03	17,0+0,4	6,3+0,08	7,9+0,02
04	---"---	0,95+0,02	0,0382+ 0,0003	0,16+0,01	20,0+0,2	6,0+0,03	7,8+0,01
05	---"---	0,99+0,01	0,0379+ 0,0002	0,18+0,01	20,0+0,3	6,2+0,06	7,9+0,03



Рисунок 8. Технологическая схема получения ПЛ "Фиадент" и "Нормофит"

Примечание: Кт, Кх, Км - контроль технологический, химический, микробиологический, соответственно.

В условиях естественного хранения установлена стабильность основных показателей пленок "Фиадент" и "Нормофит" в течение не менее 3 лет при температуре 15-25 ⁰С, влажности 60+5 %, в пакетах из полиэтилена или цефлена (ГОСТ 10-354-82), упакованных термосвариванием.

Разработка ПЛ с пиявитом.

Для получения пленок с пиявитом (Регистрационный № 000363/02 2001, ФСП № 420177-054400) использовали матрицы на основе Na КМЦ и Na альгината, выбранные на начальном этапе исследований. При этом установлено, что вторая основа не обеспечивает равномерного распределения препарата, однородности и эластичности пленок, вследствие чего мы остановили свой выбор на первой основе.

Таблица 18. Результаты определения показателей качества ПЛ с пиявитом

Наименование показателей	Требования проекта ФСП	Фактические данные
Описание	Упругие гибкие пластины зеленовато-серого цвета со специфическим запахом и вкусом без механических включений и пузырьков воздуха	Соответствует
Подлинность	1. Качественная реакция с раствором сульфата меди (сине-фиолетовое окрашивание); 2. Качественная реакция с 0,25 % раствором нингидрина (сине-фиолетовое окрашивание)	Соответствует Соответствует
Содержание азота, %, не менее	0,40	0,53+0,05
Потеря в массе при высушивании, %, не более	9,0	6,5+0,3
Средняя масса, г, не более	0,055	0,042+0,001
Толщина пленок, мм, не менее	0,10	0,13+0,01
рН водного раствора, не более	8	6,56+0,05
Время растворения, мин, не менее	10	13,3+1,03
Время высвобождения, %, не менее, за 4-5 часов	80	87,7
Микробиологическая чистота	Категория 2	Соответствует
Упаковка	В пакетах из полиэтилена или цефлена (ГОСТ 10-354-82), упакованных термосвариванием
Маркировка	В соответствии с ФСП В сухом защищенном от света месте при температуре 15-25 °С. 3 года
Хранение
Срок годности

Из таблицы 18 следует, что отклонения в массе отдельных пленок находятся в допустимых пределах (+ 10 %). Толщина пленок составляет 0,1-0,3 мм, что отвечает требованиям для трансдермальных и трансмукоидных пленок. Значение рН водного раствора соответствует рН ротовой полости и раневой поверхности и свидетельствует о комфортности применения ПЛ. Пленки растворяются за определенный период времени, позволяющий пролонгировать действие биологически активных веществ препарата пиявки. Отмечено небольшое содержание влаги в пленках, которое позволяет прогнозировать их стабильность при хранении.

Для определения подлинности нами предложены цветные реакции с сульфатом меди и нингидрином, указывающие на наличие аминогруппы в дестабилазном комплексе. Содержание азота определяли по методу Кьельдаля согласно НД на пиявит, по методике, модифицированной нами относительно ПЛ.

Пленки характеризуются высокой паропроницаемостью (113,1+12,4 %), достаточной для аэрации пораженных тканей, не оказывающей раздражающего действия на нижележащие ткани, и достаточно высокой прочностью (8,79*10⁵+0,33).

Микробиологическими исследованиями установлено, что ПЛ соответствуют требованиям по микробиологической чистоте и не обладают антимикробной активностью в отношении St. аureus и E. сoli.

Разработка технологии и показателей качества гранул ФЭС.

При разработке состава и технологии гранул фиалки экстракта сухого в результате предварительных исследований в качестве наполнителей выбраны лактоза и сахароза, в качестве связующего вещества по результатам исследования выбран 5 % раствор метилцеллюлозы (МЦ). Предложена влажная грануляция с дробным добавлением экстракта рассчитанными порциями в два приема: до увлажнения 20 % и 80 % во влажные гранулы. Лактозу, сахарозу и ФЭС просеивали через сито с размером отверстий 0,2 мм. Затем рассчитанное количество ингредиентов загружали в лопастной смеситель и вели перемешивание в течение 10+2 минут до комкования массы. Влажную массу гранулировали на вертикальном грануляторе с отверстиями 3 мм, раскладывали на лоток и сушили в сушильном шкафу при температуре 50⁰+5С при периодическом перемешивании до остаточной влажности 2-3 %. Высушенный гранулят вновь протирали через сито с размером отверстий 3 мм. Для уменьшения количества мелкой фракции гранулы просеивали через сито с отверстиями 0,2 мм и оценивали их качество. Далее гранулы расфасовывали в пакеты из цефлена герметично укупоренные термосвариванием.

По органолептическим, физико-химическим и микробиологическим показателям гранулы фиалки экстракта сухого соответствуют данным, указанным в таблице 19.

Исследование растворения действующих веществ из гранул проводили в опытах in vitro на приборе "Вращающаяся корзинка". Установлено, что гранулы растворяются в течение 250-340 сек, при этом в раствор переходит не менее 99, 62 % действующих веществ.

Содержание суммы флавоноидов определяли по разработанной нами методике спектрофотометрическим методом. Установлено, что гранулы содержат 0,15-0,18 % суммы флавоноидов в пересчете на рутин.

Таблица 19. Стандартизация гранул ФЭС

Наименование показателей	Характеристика и норма
Внешний вид	Крупинки круглой, цилиндрической или неправильной формы от светло-коричневого до коричневато-зеленого цвета со специфическим запахом
Потеря в массе при высушивании, %, не более	3
Гранулометрический состав, гранул размером 0,2-3,0 мм, %, не менее	95
Распадаемость, мин, не более	15
Качественная реакция с 2 % раствором алюминия хлорида	зеленовато-желтое окрашивание
Содержание суммы флавоноидов (в пересчете на рутин), %, не менее	0,10
Микробиологическая чистота, не более в 1,0 г	1*104
Отклонение от средней массы, %	10

Размер гранул соответствует требованиям ГФ XI, вып.. 2, С. 139 (табл. 20).

Таблица 20. Гранулометрический состав гранул ФЭС

№ п/п	Гранулометрический состав, %
	> 3 мм	3-2 мм	2-1 мм	1-0,5 мм	0,5-0,2 мм	<0,2 мм
1.	0,35	51,45	44,35	1,65	1,45	0,75
2.	0,25	46,90	47,85	2,10	1,95	0,95
3.	0,75	44,40	49,85	1,95	2,10	0,95
4.	0,35	44,85	47,85	2,25	3,85	0,85
5.	0,25	58,20	35,55	2,30	2,80	0,90

Результаты исследования срока годности гранул ФЭС, упакованных в пакеты из пленки с металлизированным покрытием, при температуре 15-25⁰С и влажности не более 60+5 %, позволили установить стабильность показателей качества в течение 3 лет.

Изучение фармакологических свойств субстанций и лекарственных форм на их основе.

Исследование острой токсичности. Определение острой токсичности ФЭС и НЭС проводили на беспородных неполовозрелых белых крысах самцах по методу В.В. Прозоровского с соавт. (1978). Результаты однократного внутрибрюшинного и перорального введения экстракта свидетельствует о его низкой токсичности. Вычислить LD₅₀ не удалось, т.к. в течение первых суток эксперимента и в последующих двух недель гибели животных не наблюдалось. В ходе оценки хронической токсичности специфических ее видов не выявлено аллергенности, мутагенности и местнораздражающего действия экстракта.

Антимутагенное действие сухих водных экстрактов изучаемых растений и НЭС исследовали на модели индуцируемых хромосомных аберраций (ХА) в клетках костного мозга мышей линии СВА. Выбор индуктора производили среди мутагенов с известным механизмом ДНК - повреждающего действия (циклофосфамид - непрямой алкилирующий мутаген, диоксидин - прямой мутаген прооксидантного действия), а также на модели радиационного индуцированного мутагенеза. Экстракты вводили животным в дозах 1, 5 и 20 мг/кг внутрижелудочно в течение 7 дней до мутагенного воздействия.

Из данных, представленных в таблице 21, следует, что исследуемые препараты обладали достаточно выраженным антимутагенным действием. ФЭС и НЭС снижает число хромосомных мутаций при использовании непрямого мутагена циклофосфамида. Экстракт цветков ноготков, ФЭС и НЭС снижали количество радиационно - индуцированных хромосомных аберраций в клетках костного мозга мышей лини и СВА. Максимальной активностью на этой модели обладал экстракт цветков ноготков, более чем в 2 раза снижавший уровень радиационного повреждения клеток костного мозга.

Это хорошо согласуется с многочисленными литературными данными об антиоксидантных свойствах флавоноидов, которые в большей или меньшей степени присутствуют у большей части веществ этой группы.

Иммуномодулирующее действие. В наших исследованиях изучено влияние водного НЭС и экстрактов отдельных растений, входящих в его состав, на спонтанную пролиферацию лимфоцитов, выделенных из селезенки мышей и их способность стимулировать пролиферативный ответ этих клеток на Т- и В- клеточные митогены.

Таблица 21. Мутаген-индуцированные хромосомные аберрации клетках костного мозга мышей линии СВА при курсовом введении экстрактов цветков ноготков, ФЭС и НЭС

Группа животных	% спонтанных хромосомных аберраций	% хромосомных аберраций при введении циклофосфамида	% хромосомных аберраций при введении диоксидина	% хромосомных аберраций при радиационном облучении
Экстракт цветков ноготков	Контроль	2,50,42	32,52,2	18,32,1	26,09±3,6
	1 мг/кг	1,10,29	28,83,0	18,21,4	17,342,87*
	5 мг/кг	1,30,50	27,13,7*	16,61,1	13,111,97**
	20 мг/кг	0,90,31	23,32,6**	15,31,1*	10,932,76**
ФЭС	Контроль	1,90,55	36,14,0	19,62,1	19,93±2,07
	1 мг/кг	1,80,13	29,89 %3,1	17,10,9	14,442,01*
	5 мг/кг	0,80.16	25,852,6*	16,72,0	10,130,42**
	20 мг/кг	0,40.23	21,662,1**	14,62,9*	8,440,39**
НЭС	Контроль	2,10,37	36,83,3	18,40,9	19,560,26
	1 мг/кг	1,10,29	24,12,2*	16,61,4	11,111,97**
	5 мг/кг	1,30,27	23,41,3**	15,50,9*	7,441,04**
	20 мг/кг	0,80,18	19,61,4**	13,11,4**	9,001,7**
*Р<0,05, **P<0,01

В качестве Т- клеточного митогена нами использовался фитогемагглютинин (ФГА), в качестве В- клеточного митогена - бактериальный липополисахарид.

Экстракты отдельных растений и НЭС спонтанную пролиферацию лимфоидных клеток селезенки мышей, пролиферативный ответ на Т-клеточный митоген фитогемагглютинин. Экстракт цветков ромашки обладает умеренным стимулирующим действием на супрессорный Т-клеточный митоген конканавалин-А, а также обладает выраженным стимулирующим влиянием на индукцию пролиферативного ответа спленоцитов В-клеточным митогеном липополисахаридом (табл.22).

Таблица 22. Влияние курсового введения экстрактов цветков ромашки, травы очанки, ФЭС и НЭС на спонтанную и митоген-индуцированную пролиферацию Т-лимфоцитов

Группа животных	Без митогена	ФГА	Кон - А	ЛПС
Экстракт цветков ромашки	Контроль	70080±958	55473±6583	63720±9441	25029±3610
	1 мг/кг	16949±268**	56484±7671	75476±7140	373942087*
	5 мг/кг	16659±916**	57307±6622*	81234±9734**	450201907**
	20 мг/кг	21721±998*	55143±6204**	840536110*	412932760**
ФЭС	Контроль	7090±536	61246±7185	696436311	19993±2907
	1 мг/кг	17080±958**	695893119	71719998	141442801
	5 мг/кг	16124±348**	657852640*	64676203	171434210
	20 мг/кг	17054±429**	611662110**	6546312928	185643900
Экстракт травы очанки	Контроль	7062±645	73444±8196	59013±6830	21129±3940
	1 мг/кг	6640±725	88976±9113	67121±4569	19078±4012
	5 мг/кг	6141±705	96588±8950*	62011±7111	24144±2920
	20 мг/кг	6907±603	137449±9423**	63189±7010	23025±1090
НЭС	Контроль	8261±790	66223±8301	684209035	195062656
	1 мг/кг	16995±692**	71927±9727	830164040	219111970
	5 мг/кг	17204±695**	74927±9727	895509125**	243444040*
	20 мг/кг	17810±801**	101809±9706**	9810114101**	293403171**
*Р<0,05, **P<0,01

Таким образом, включение в состав сбора растений действующих на отдельные звенья иммунной системы приводит к его сбалансированному стимулирующему влиянию на все звенья иммунной системы.

Влияние на рост опухолевых клеток. В качестве модели опухолевого роста мы использовали перевиваемые клеточные линии цервикальной карциномы (HeLa), колоректального рака (CaCo-2) и карциномы яичника (CaOv). В исходной культуре подсчитывали число клеток и преинкубировали в течение суток, затем добавляли к ним изучаемые растительные экстракты (фильтрационно стерилизованные) в дозе 0.1, 1.0, 10.0 мкг/мл. Исследуемые препараты добавляли в культуру клеток вместе с с радиоактивно (Н) меченным тимидином.

Большая часть исследуемых экстрактов не оказывала ни положительного, ни отрицательного эффекта на пролиферацию опухолевых клеток (рисунок 9).

Однако установлено, что экстракт листьев земляники тормозит рост низкодифференцированной линии опухолевых клеток СаОv на модели IN VITRO. В литературных данных мы нашли косвенное подтверждение этого факта, т.к. экстракт этого растения может индуцировать запрограммированную гибель клетки (апоптоз). В то же время, мы считаем более вероятным влияние компонентов экстракта на усиление дифференцировочных процессов и связанное с этим подавление митотической активности.

Безусловно, экстракт земляники или НЭС нельзя рассматривать как возможные противоопухолевые агенты. В то же время, их применение, возможно, будет полезно в целях профилактики развития опухолевого процесса, когда число образовавшихся опухолевых клеток невелико, и некоторое торможение их развития будет достаточным для полноценной активации иммунного процесса способного элиминировать злокачественный рост.

Рисунок 9. Влияние растительных экстрактов на уровень включения тимидина в ДНК опухолевых клеток линии CaOv

Влияние на репарационные процессы. В работе использовали эпителиальные клеточные линии WI-38, а также фибробласты, полученные из аорты крыс линии WISTAR. В опытные серии добавляли изучаемые экстракты в дозах 0,1; 1,0; 10,0 мкг/кг. После 72 часов инкубации клетки отделяли с помощью трипсина и подсчитывали количество живых клеток.

Результаты, представленные на рисунке 10 свидетельствуют, что ни один из изучаемых экстрактов не подавлял рост эпителиальных клеток или фибробластов в культуре. Экстракт травы манжетки, экстракт цветков ромашки и НЭС повышают пролиферацию нормальных эпителиальных клеток линии WI-38 до 110-130 % от контрольного уровня. Эти же экстракты умеренно (до 20 %) стимулируют пролиферацию нормальных фибробластов аорты крыс линии WISTAR (рис. 11).

В обоих случаях не было отмечено какого-либо влияния на морфологию клеток. Количество погибших клеток во всех опытных сериях и контроле было одинаковым. Это свидетельствует об отсутствии цитотоксических свойств у исследуемых экстрактов.

Ранее предполагалось, что возможное их ранозаживляющее действие связано с торможением процессов перекисного окисления возникающим в ране и препятствующим ее заживлению или предотвращением ферментативной деградации здоровых клеток в ране.

Теперь, можно утверждать, что вещества, содержащиеся в исследуемых растениях и их экстрактах, могут оказывать и прямое стимулирующее действие на пролиферативные процессы в ране, что способствует ее быстрому заживлению.



Рисунок 10. Влияние экстрактов растений и НЭС на пролиферативную активность эпителиальных клеток WI-38

Рисунок 11. Влияние экстрактов растений и НЭС на пролиферативную активность фибробластов аорты крыс

Методом линейных ран на белых беспородных крысах обоего пола установлено ранозаживляющее действие ПЛ "Фиадент".

Противовоспалительное действие. Антиэкссудативные свойства ФЭС изучены на моделях адреналинового отека у мышей и формалинового отека лапы крыс. Установлено, что он проявляет активность сопоставимую с ортофеном. На модели острого каррагенинового отека установлено антиэкссудативное действие ПЛ "Фиадент".

Антипролиферативные свойства ФЭС оценивали на модели "ватной гранулемы". Экстракт оказывал выраженное влияние на фазу пролиферации, сопоставимое с действием фенилбутазона.

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. Разработана методология создания лекарственных средств на основе сырья природного происхождения.

2. На основании литературных данных и собственных исследований разработан сбор "Нормофит", определены его товароведческие показатели, установлены нормы содержания основных групп БАВ: флавоноидов, полисахаридов, а также аминокислот, макро- и микроэлементов. Предложен унифицированный подход к стандартизации сырья, экстрактов, лекарственных форм на их основе.

3. На основании изучения основных факторов, влияющих на процесс извлечения БАВ разработаны технологии получения ФЭС и НЭС.

4. Сформулированы медико-фармацевтические требования к пленочным системам трансмукоидного назначения, обеспечивающие их функциональную пригодность при аппликационной терапии. Теоретически и экспериментально обоснованы составы и технология полимерной матрицы - носителя на основе биодеградирующих полимеров природного происхождения (Na КМЦ, Na альгинат).

5. С учетом сформулированных требований созданы новые лекарственные формы - ПЛ "Фиадент", ПЛ "Нормофит", ПЛ с пиявитом. Предложена оптимизация проведения биофармацевтических исследований по изучению БД и кинетики высвобождения лекарственных веществ из лекарственных форм методом кондуктометрии. Изучен механизм релиза БАВ, позволяющий охарактеризовать пленки как матричные системы диффузионного типа.

6. Разработан состав и технология получения гранул ФЭС. Предложена влажная грануляция с добавлением экстракта дробно рассчитанными порциями.

7. Результаты исследований лекарственных форм нашли отражение в разработке нормативной документации: ФСП "Фиалки экстракт сухой", проектов ФСП "Пленки лекарственные "Фиадент", "Гранулы фиалки экстракта сухого", "Сбор "Нормофит", "Нормофит" экстракт сухой", "Пленки лекарственные "Нормофит", "Пленки лекарственные с пиявитом".

8. На основании фармакологических исследований установлено наличие противовоспалительной, регенерирующей, иммуномодулирующей активности экстрактов и их ЛФ. Результаты доклинического токсикологического исследования ФЭС свидетельствуют, что препарат обладает малой токсичностью как при однократном введении внутрь белым мышам и крысам, так и при длительном (6 мес.) введении крысам и собакам. Препарат не вызывает отдаленных отрицательных эффектов (мутагенность, эмбриотоксичность, тератогенность, аллергизирующие свойства).

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ ИЗЛОЖЕНО В СЛЕДУЮЩИХ ПУБЛИКАЦИЯХ

1. Исследование по разработке состава и технологии фитопленок /Олешко Л.Н., Олешко Г.И., … Блинова О.А. //Тез. докл. Научно - практ. конф., посв. 25-ти летию фармац. факультета Самарского ГМУ. - Самара: Сам ГМУ, 1996. - С. 58-59.

2. Биорастворимые лекарственные пленки - эффективное средство аппликационной терапии в стоматологии /Олешко Л.Н., Симановская Е.Ю., Болотова М.Ф., Блинова О.А. и др. //Материалы конференции, посвященной 35-летию ЦНИИС, М., 1998. -С. 88-92.

3. Исследования по выбору состава матрицы для биорастворимых лекарственных пленок. /Олешко Л.Н., Голованенко А.Л., Блинова О.А. и др. //Материалы юбил. межвуз. научно-практ. конф. профессорско-препод. состава, посв. 275-летию г. Перми и 80-детию фармац. образования на Урале. - Пермь, 1998. - С. 117.

4. Идентификация биологически активных соединений методами ТСХ и ВЭЖХ /Петухова Т.В., Олешко Л.Н., Блинова О.А. и др.//Актуальные проблемы медицины и фармации: Мат. 63-й итоговой научн. конф. молодых ученых и студ. - Курск, 1998. -С. 232-233.

5. Исследование фитопленок, содержащих биологически активные вещества из травы фиалки трехцветной и полевой /Олешко Л.Н., Симановская Е.Ю., Печерская Л.Г., Блинова О.А. и др. //Стоматология западного Урала: состояние, проблемы, перспективы: Мат. научно-практ. конф. Пермской ассоциации стоматологов. - Пермь, 1998. - С. 25-26.

6. Использование лекарственных пленок в комплексной терапии стоматологических заболеваний /Олешко Л.Н., Симановская Е.Ю., Болотова М.Ф., Блинова О.А. и др. //Стоматология западного Урала: состояние, проблемы, перспективы: Мат. научно-практ. конф. Пермской ассоциации стоматологов. - Пермь, 1998. -С. 23-24.

7. Изучение кинетических закономерностей биодеструкции лекарственных пленок кондуктометрическим методом /Рюмина Т.Е., Олешко Л.Н., Блинова О.А. и др. //Фармация в XXI веке: инновации и традиции: Тез докл. международ. научн. конф. - С. -Пб, 1999. - С. 246-247.

8. Опыт применения биорастворимых лекарственных пленок, содержащих Пиявит в клинике различных форм гингивита. /Блинова О.А., Гибадуллина Н.В., Гилева О.С., Олешко Л.Н. //Актуальные проблемы фармацевтической науки и образования: итоги и перспективы: Материалы юбил. межвузовской научно-практ. конф. профессорско-преподавательского состава, посвященная 40-му выпуску провизоров заочного обучения ПГФА. - Пермь, 2000. - С. 93-94.

9. Биофармацевтическое исследование лекарственных пленок /Рюмина Т.Е., Олешко Л.Н., Блинова О.А. и др. //Человек и лекарство: Тез. докл. VII Российского национального конгр. - М., 2000. -С. 531.

10. Исследования по разработке экстракционных препаратов из травы фиалки /Смирнова М.М., Олешко Г.И., Печерская Л.Г., Блинова О.А.//Актуальные проблемы фармац. науки и образования: итоги и перспективы: Материалы межвуз. научно-практ. конф., посв. 85-летию высшего образования на Урале. -Пермь: ПГФА, 2001. -С. 116.

11. Разработка состава и технологии пленок "Пиявит"/ Блинова О.А., Лещева Е.Д., Кушнирева О.Н. и др. //Актуальные проблемы фармац. науки и образования: итоги и перспективы: Материалы межвуз. научно-практ. конф., посв. 85-летию высшего образования на Урале. -Пермь: ПГФА, 2001. -С. 126.

12. Эффективность использования различных лекарственных форм препарата "Пиявит" в комплексном лечении воспалительных заболеваний пародонта /Гибадуллина Н.В., Гилева О.С., Шустов А.Д., Блинова О.А.//Актуальные проблемы фармац. науки и образования: итоги и перспективы: Материалы межвуз. научно-практ. конф., посв. 85-летию высшего образования на Урале. -Пермь: ПГФА, 2001. - С. 167.

13. Гигиеническая и врачебная косметика (рецептурный справочник) /Чижова Е.Т., Мухамеджанова Д.М., Олешко Л.Н., Блинова О.А.и др. //Методические указания для самостоятельной работы студентов, интернов и слушателей ФУП. - Пермь: ПГФА, 2001. - 80 с.

14. Перспективная биологически активная добавка - фитокарамель с растительными экстрактами /Блинова О.А., Бегларян Г.М., Рюмина Т.Е. и др.//Человек и лекарство: Тез. докл. IX Росс. нац. конгр. - М., 2002. -С. 583.

15. Комплексная переработка травы фиалки /Блинова О.А., Олешко Г.И., Назаренко П.В. и др. //Человек и лекарство: Тез. докл. IX Росс. нац. конгр. - М., 2002. -С. 666-667.

16. Исследование содержания флавоноидного комплекса травы фиалки в водном извлечении и лекарственных пленках /Блинова О.А., Олешко Г.И., Печерская Л.Г. и др. //Здоровье и образование в XXI веке: Тез. докл. третьей международ. науч.-практич. конф. -М., 2002. -С. 318.

17. Блинова, О.А. Исследование кинетических закономерностей высвобождения биологически активных веществ (БАВ) из биорастворимых лекарственных пленок "Пиявит" /Блинова О.А., Лещева Е. Д, Рюмина Т.Е. //Актуальные проблемы медицины и фармации: Материалы итоговой научн. конф. молодых ученых и студ. - Курск, 2002. - С. 31.

18. Исследование и стандартизация сиропа из травы фиалки /Блинова О.А., Олешко Г.И., Смирнова М.М. и др. //Актуальные проблемы создания препаратов природного происхождения: Материалы VI Международн. съезда. - СПб, 2002. - С. 265.

19. Перспективы использования травы фиалки в виде биологически активной добавки к пище /Блинова О.А., Олешко Г.И., Смирнова М.М. и др. //Актуальные проблемы создания препаратов природного происхождения: Материалы VI Международн. съезда. - СПб, 2002. -С. 585.

20. Исследование кинетики высвобождения БАВ из биорастворимых лекарственных пленок с экстрактом травы фиалки /Блинова О.А., Назаренко П.В., Рюмина Т.Е. и др.//Актуальные проблемы создания препаратов природного происхождения: Материалы VI Международн. съезда. - СПб, 2002. - С. 112.

21. Блинова, О.А. Выбор состава мази с экстрактом фиалки /Блинова О.А., Смирнова М.М. //Молодежная наука Прикамья - 2002: Материалы областн. науч. конф. молодых ученых, аспирантов и студентов. - Пермь, 2002. - С. 143.

22. Блинова, О.А. Исследования по разработке драже с экстрактом фиалки /Блинова О.А., Смирнова М.М. //Молодежная наука Прикамья - 2002: Материалы областн. науч. конф. молодых ученых, аспирантов и студентов. - Пермь, 2002. - С. 145.

23. Выбор оптимальной технологии получения экстракта фиалки сухого /Блинова О.А., Смирнова М.М., Олешко Г.И. и др.//Науки о человеке: Материалы IV Международ. конгр. молодых ученых. -Томск, 2003. -С. 221.

24. Рюмина, Т.Е. Влияние вспомогательных веществ на сорбционные и адгезионные характеристики лекарственных пленок /Рюмина Т.Е., Смирнова М.М., Блинова О.А.//Актуальные проблемы фармац. науки и образования: итоги и перспективы: Материалы межвуз. профессорско-препод. состава "Вузы и регион"(8-9 декабря 2003 г, г. Пермь). - Пермь, 2003. - С. 152-153.

25. Рюмина, Т.Е. Влияние основы и способа введения лекарственного вещества на кинетику высвобождения "Пиявита" из суппозиториев /Рюмина Т.Е., Смирнова М.М., Блинова О.А.//Актуальные проблемы фармац. науки и образования: итоги и перспективы: Материалы межвуз. профессорско-препод. состава "Вузы и регион"(8-9 декабря 2003 г, г. Пермь). -Пермь, 2003. -С 151-152.

26. Исследование противовоспалительной и ранозаживляющей активности экстракта фиалки сухого /Рудакова И.П., Смирнова М.М., Блинова О.А. и др. //Актуальные проблемы фармац. науки и образования: итоги и перспективы: Материалы межвуз. профессорско-препод. состава "Вузы и регион"(8-9 декабря 2003 г, г. Пермь). -Пермь, 2003. -С. 119.

27. Токсикологическое изучение фиалки экстракта сухого /Назаренко П.В., Бортникова В.В., Крепкова Л.В., Блинова О.А. и др. //Человек и лекарство: Тез. докл. XI Росс. нац. конгр. - М., 2004. - С. 503.

28. Исследование микроэлементного состава травы фиалки и фиалки экстракта сухого /Смирнова М.М., Блинова О.А., Олешко Г.И. и др. //Рациональное использование лекарств: Российская научно - практическая конференция. - Пермь, 2004. - С. 92.

29. Создание и анализ сухого экстракта из травы фиалки /Блинова О.А., Смирнова М.М., Печерская Л.Г. и др. //Выпускник фармвуза: в прошлом, настоящем и будущем: Материалы международн. научно-практич. конф., посв. 85-летию академии. -СПб, 2004. -С. 259-261.

30. Блинова, О.А. Разработка технологии биорастворимых лекарственных пленок с экстрактом земляники /Блинова О.А., Петухова О.В., Андреева Д.М.//Человек и лекарство: Тез. докл. XII Росс. нац. конгр. - М., 2005. -С. 124.

31. Блинова, О.А. Исследование противовоспалительной и ранозаживляющей активности пленок лекарственных с экстрактом фиалки /Блинова О.А., Рудакова И.П., Олешко Г.И.//Фундаментальная наука в интересах развития критических технологий: Тез. конф. Российского фонда фундаментальных исследований с международным участием. - Владимир, 12-14 сентября 2005. - С. 51.

32. Блинова, О.А. Перспективы использования сухого экстракта шрота цветков ноготков для создания современных лекарственных форм. /Блинова О.А., Андреева Д.М., Олешко Г.И. //Фундаментальная наука в интересах развития критических технологий: Тез. конф. Российского фонда фундаментальных исследований с международным участием. - Владимир, 12-14 сентября 2005. - С. 72.

33. Блинова, О.А. Разработка состава и технологии пленок лекарственных для лечения заболеваний пародонта /Блинова О.А., Марченко С. Д.//Человек и лекарство: Тез. докл. XШ Росс. нац. конгр. - М., 2006. - С. 618.

34. Создание новых лекарственных препаратов из травы фиалки /Блинова О.А., Смирнова М.М., Олешко Г.И. и др. //Современные принципы и технологии разработки лекарственных средств: Материалы научно-практич. конф. (28 февраля-1 марта 2006 г., г. Москва). - М., 2006. - С. 22.

35. Разработка состава и фитохимическое исследование сбора противовоспалительного, ранозаживляющего и антимикробного действия /Каржавина О.О., Блинова О.А., Седова А.Б. и др. //Вестник СНО Пермской государственной фармацевтической академии. -Пермь, 2006. -№1. - С. 97.

36. Кондратьева, Н.А. Разработка технологической схемы получения экстракта из сбора противовоспалительного, ранозаживляющего и антимикробного действия /Кондратьева Н.А., Блинова О.А., Марченко С. Д.// Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. / под ред. Е.Н. Вергейчика, Н.Н. Каревой / Пятигорская ГФА, Санкт-Петербургская ГХФА. - Пятигорск, 2007. - Вып. 62. - С. 103-104.

37. Разработка технологии сухого экстракта из сбора нормофит /Лаптева Е.А., Блинова О.А., Белоногова В.Д., и др.//Вестник Пермской государственной фармацевтической академии. -2007. - №2. -С. 344-346.

38. Блинова, О.А. Разработка состава гранул фиалки сухого экстракта //Актуальные вопросы образования, науки и производства в фармации: Сб. тезисов докладов научно-практической конференции. -Ташкент (10 декабря 2008 г). -2008). -2008. - С. 76.

39. Блинова, О.А. Фармакокинетические исследования пленок лекарственных "Фиадент" /Блинова О.А., Рюмина Т.Е. // Актуальные вопросы образования, науки и производства в фармации: Сб. тезисов докладов научно-практической конференции. -Ташкент (10 декабря 2008 г). -2008. - С. 77.

40. Блинова, О.А. Фитохимический анализ сбора "Нормофит" // Актуальные вопросы образования, науки и производства в фармации: Сб. тезисов докладов научно-практической конференции. -Ташкент (10 декабря 2008 г.). - 2008. - С. 43.

41. Исследования по выбору состава стоматологических пленок анестезирующего действия (АЛП) /Олешко Л.Н., Голованенко А.Л., Кириллова Р.В., Блинова О.А. и др. //Фармация. - 2000. - № 2. - С. 30-35.

42. Блинова, О.А. Использование кондуктометрического метода анализа в фармакокинетических исследованиях биорастворимых лекарственных пленок "Крона" /Блинова О.А., Рюмина Т.Е., Олешко Л.Н. //Фармация. -2001. -№3. -С. 22-24.

43. Качественный анализ антоцианов травы фиалки /Блинова О.А., Смирнова М.М., Печерская Л.Г. и др. //Фармация. - 2002. - №4. - С. 16-18.

44. Пленки с препаратом медицинской пиявки /Блинова О.А., Олешко Г.И., Марченко С. Д. и др.//Фармация. - 2005. -№2. - С. 18-20.

45. Блинова, О.А. Фиалка трехцветная и полевая: химический состав и применение /Блинова О.А., Иванов А. И, Марченко С. Д. //Фармация. -2005. - №6. - С. 41-43.

46. Противовоспалительная активность извлечений из надземной части Viola tricolor (Violaceae) /Блинова О.А., Печерская Л.Г., Смирнова М.М. и др.//Растительные ресурсы. -2006. - Т.42. - №4. - С. 76-79.

47. Перспективы создания сухих экстрактов (обзор) /Самылина И.А., Блинова О.А., Кумышева Л.А. и др. //Фармация. - 2006. - №2. - С. 43-46.

48. Антимутагенные свойства сбора "Нормофит" /Коростелев С.А., Блинова О.А., Марченко С. Д. и др. //Фармация. - 2009. -№2. - С. 36-38.

Рационализаторское предложение:

49. Способ лечения гингивита с использованием биопленок на основе Пиявита /Гибадуллина Н.В., Гилева О.С., Кардынова Т.Н., … Блинова О.А. //Рационализаторское предложение (Удостоверение на рационализаторское предложение № 2169 от 15.02.2001. - Пермь: ПГМА, 2001.

Патенты:

50. Олешко, Г.И. Лекарственная пленка для лечения воспалительных заболеваний пародонта /Олешко Г.И., Блинова О.А., Гибадуллина Н.В.//Патент на изобретение № 2201194 от 27.03.2003.

51. Способ получения противовоспалительного, ранозаживляющего, капилляроукрепляющего и иммуностимулирующего средства Блинова О.А., Олешко Г.И., Смирнова М.М., Юсупова С.Д.//Патент РФ № 2259835 (заявл. 25.04.2003. -опубл. 10.09.2005. - Бюл. № 25).

52. Способ получения средства, обладающего диуретической и противовоспалительной активностью /Петухова О.В., Олешко Г.И., Блинова О.А. и др. //Патент № 2342945 от 02.08.07 (опубл. 10.01.09. - Бюлл. №1).

Фармакопейная статья предприятия:

53. ФСП 42-9430-08 "Фиалки экстракт сухой субстанция… для получения нестерильных лекарственных средств" //Фармакопейная статья предприятия ФГУП МБА МЦ Управления Делами Президента РФ.

Размещено на Allbest.ru