Опыты проводили на 20 половозрелых белых беспородных крысах-самцах с массой тела 220-250 г. Животные были разбиты на 4 группы по 5 крыс в каждой: I группа - интактные животные (контроль); II группа - животные, которые получали препарат Se-спирулина (Россия, Биотика) в дозе 100 мкг Se/кг перорально в течение 10 дней; III группа - животные, которые получали 8 мг/кг НДМА перорально в течение 10 дней; IV группа - животные, которые получали препарат Se-спирулина и НДМА в той же дозировке и в течение того же времени. При этом препарат Se-спирулина вводили с помощью зонда за час до введения НДМА.

Для определения состояния и функции печени у животных всех экспериментальных групп при жизни из хвостовой вены забирали кровь и определяли активность аспартатаминотрансферазы (АсАТ), аланинаминотрансферазы (АлАТ), содержание мочевины и общего белка /13/.

Образцы крови центрифугировали при 1000 об. в течение 15-30 минут и в полученной сыворотке определяли АлАТ и АсАТ с помощью динитрофенилгидразинового метода по Райтману - Френкелю, концентрацию общего белка по биуретовой реакции, а мочевину по цветной реакции с диацетилмонооксимом /14/.

Статистический анализ проводили общепринятым методом с использованием критерия Стьюдента.

Результаты и обсуждение

Результаты биохимического определения активности АлАТ в сыворотке контрольных и подопытных животных представлены на рисунке 1. Видно, что активность АлАТ у интактных крыс и животных, получавших препарат, была сравнимой, что свидетельствует об отсутствии какого либо токсического действия препарата на основе селенобогащенной спирулины. Напротив, у животных подвергавшихся воздействию НДМА активность АлАТ была повышена в 1,9 раза по сравнению с контролем (2,56 ± 0,35 против 1,32 ± 0,16; Р? 0,05). Данное увеличение активности фермента в сыворотке связано с выходом молекул АлАТ локализованных в гепатоцитах, при их повреждении или гибели /15/. При сочетанном воздействии ксенобиотика и препарата Se-спирулина активность АлАТ снижалась в 1,75 раза по сравнению с III группой и достоверно не отличалась от контроля (2, 56 ± 0,35 против 1,46 ± 0,24; Р? 0,05). Это может свидетельствовать об отсутствии выхода молекул АлАТ в сыворотку, по-видимому, связанное со снижением некротических процессов в печени при совместном воздействии НДМА и препарата Se-спирулина.

Результаты биохимического определения активности АсАТ в сыворотке контрольных и подопытных животных представлены на рисунке 2. Достоверно значимых отклонений от контроля во II группе не было обнаружено.

По оси абсцисс - условия опыта (группы животных): I - интактные животные (контроль); II - животные, получавшие Se-спирулину; III - животные, получавшие НДМА; IV - животные, получавшие Se-спирулину и НДМА; По оси ординат - активность АлАТ в ммоль/ч*л.

По оси абсцисс - условия опыта (группы животных): I - интактные животные (контроль); II - животные, получавшие Se-спирулину; III - животные, получавшие НДМА; IV - животные, получавшие Se-спирулину и НДМА; По оси ординат - активность АсАТ в ммоль/ч*л.

Однако у животных получавших НДМА, активность АсАТ была повышена в 1,4 раза (3,39 ± 0,21 против 2,42 ± 0,38; Р? 0,05), что может свидетельствовать о выходе фермента АсАТ в кровь в результате гибели гепатоцитов /13/. Совместное воздействие НДМА и препарата Se-спирулина приводило к снижению активности АсАТ в крови животных в 1,26 раза (3,39 ± 0,21 против 2,68 ± 0,3; Р? 0,05). Что так же подтверждает снижение некротических процессов в печени индуцированных НДМА при сочетанном воздействии с препаратом Se-спирулина.

Результаты биохимического определения концентрации мочевины в сыворотке контрольных и подопытных животных представлены на рисунке 3. В сыворотке крови животных второй группы получавших препарат селена изменений содержания мочевины по сравнению с контролем выявлено не было. У животных получавших НДМА, по сравнению с контролем, уровень мочевины в крови снижен в 1,21 раза (6,14 ± 0,25 против 5,05 ± 0,24; Р? 0,05). Это вероятно связано с гибелью гепатоцитов, и в результате, нарушением синтеза мочевины /13/. А у животных получавших селеновый препарат совместно с НДМА данное нарушение, по-видимому, не происходило, так как содержание мочевины в сыворотке крови было на уровне контроля, и превышало в 1,23 раза данный показатель у животных III группы (6,21 ± 0,26 против 5,05 ± 0,24; Р? 0,05).

Результаты биохимического определения содержания общего белка в сыворотке контрольных и подопытных животных представлены на рисунке 4. В сыворотке плазмы крови животных получавших препарат Se-спирулина содержание белка не отличалось от контроля. Напротив, у животных подвергавшихся воздействию НДМА данный показатель достоверно снижался в 1,12 раза по сравнению с контролем (75,8 ± 2,4 против 67,5 ± 2,6; Р? 0,05)). Известно, что белки плазмы синтезируются на полирибосомах эндоплазматической сети гепатоцитов, и как было показано в ряде работ, НДМА связывается с рибосомами, нарушая их функции, и тем самым подавляет синтез белков /16,17/.

Совместное действие НДМА и препарата Se-спирулина не приводило к снижению или повышению содержания белка в сыворотке крови по сравнению с контролем. Это может свидетельствовать о том, что препарат предотвращает подавление синтеза белка при действии ксенобиотика.

Таким образом, исследование биохимических показателей крови (АлАТ, АсАТ, мочевина, общий белок) у животных, получавших препарат на основе селенобогащенной спирулины раздельно и сочетано с НДМА, показало, что данный препарат не обладает токсическим свойством, а при сочетанном воздействии оказывает гепатопротекторное действие.

гепатопротекторный препарат селенобогащенная спирулина

Литература

1. Liteplo R. G. and MeekM. E., Windle W. N-nitrosodimethylamine, Concise International Chemical Assessment. Geneva. Document 38. - 2002.

2. Larry K. Keefer, Takako Anjo, David Wade, Tianyuan Wang, and Chung S. Yang. Concurrent generation of methylamine and Nitrite during denitrosation of N-nitrosodimethylamin by rat liver Microsomes // Cancer research. - 1987. - №47. - Р.447-45.

3. Шалахметова Т.М., Колумбаева С.Ж., Бегимбетова Д.А., Умбаев Б.А., Батырбекова С.Е. Влияние компонентов ракетного топлива и тяжелых металлов на организм животных // Материалы Междунар. науч. конф. ”Суверенный Казахстан: 15-летний путь развития космической деятельности”. Алматы. - 2006. - С.421-424.

4. Gorge J. Mineral metabolism in dimethylnitrosamine - induced hepatic fibrosis // Clinical Biochemistry. - 2006. - №39. - Р.984-991.

5. Саратников А.С., Венгеровский А.И. Новые гепатопротекторы природного происхождения // Экспериментальная и клиническая фармакология. - 1995. - № 1. - С.8-10.

6. Gregory V. Kryukov, Valentin M. Kryukov, and Vadim N. Gladyshev. New Mammalian Selenocysteine-containing Proteins Identified with an Algorithm That Searches for Selenocysteine Insertion Sequence Elements // The journal of biological chemistry. - 2003. - Vol.274. - №48. Р.1420-1428.

7. Gerhard N. Schrauzer. Selenomethionine: a review of its nutritional significance, metabolism and toxicity // J. Nutr. - 2000. - №130. - Р.1653-1656.

8. Barbara Wachowicz, Halina M. Zbikowska, Pawel Nowak. Selenium compounds in the environment their effect on human health // Cell. Biol. - 2001. - Vol 6. - №2A, Р.375-381.

9. Beilstein M. A., Whanger P. D. Chemical forms of selenium in rat tissues after administration of selenite or selenomethionine // J. Nutr. - 1986. - №116. - Р.1711-1719.

10. Julien Casses, Veronique Vacchina, Anthony Napolitano, Bertrand Caporiccio, Pierre Besancon, Ryszard Lobinski and Jean - Max Rounet. Selenium from selenium-rich spirulina is less bioavailable than selenium from sodium selenite and selenomethionine in selenium - deficient rats // J. Nutr. - 2001. - №131. - Р.2343-2350.

11. Raymond F. Burk, James M. Lane, Richard A Lawrence, Paula E. Gregory. Effect of selenium deficiency on liver and blood glutathione peroxidase activity in Guinea pigs // J. Nutr. - 1981. - №111. - Р.690-693.

12. Hidetoshi Hama, Osamu Yamanoshita, Mamoko Chiba, Iwao Takeda, Tamie Nakajima. Selenium enriched Japanese Radish sprouts influence glutathione peroxidase and glutathione s-transferase in an organ-specific manner in rats // J. Occup. Health. - 2008. - №50. - Р.147-154.

13. Шерлок Ш., Дули Дж. Заболевания печени и желчных путей. - М.: Гэотар-Мед, - 2002. - С.859.

14. Меньшикова В.В. Лабораторные методы исследования в клинике. - М.: Медицина, - 1987. - С.174-219.

15. Dawn Figlio L., Heather L. Tarpley, Kenneth S. Latimer, Perry J. Bain. A Brief Review of Alanine Aminotransferase Activity. University of Georgia. - 2004.

16. Осипенко Б.Г., Савченков М.Ф. Молекулярные механизмы гепатотоксического действия нитрозаминов // Бюллетень СО РАМН. - 2002. - №2. - C.104.

17. Yasuda M., Okabe T., Itoh J., Takekoshi S., Hasegawa H., Nagata H., Osamura R., Watanabe K. Differentiation of Necrotic Cell Death with or without lysosomal activation: application of acute liver injury models induced by carbon tetrachloride (CCL₄) and dimethylnitrosamine (DMN) // The Journal of Histochemistry & Cytochemistry. - 2000. - №48. - Р.1331-1339.

Размещено на Allbest.ru