L-клетки. Популяция L-клеток представлена как клетками, имеющими неповрежденную ультраструктуру, так и клетками с выраженными морфологическими повреждениями. Отмечается увеличение площади поверхности ядра и отслоение наружной ядерной мембраны. Как и в других эндокринных клетках, в L-клетках обнаруживаются отечные митохондрии с признаками деструкции. В клетках с выраженными повреждениями часто наблюдаются нарушения лимитирующей клеточной мембраны. В цитоплазме L-клеток присутствует разное количество секреторных гранул различного размера и электронной плотности. Наблюдается частичная дегрануляция отдельных L-клеток.

D1-клетки. После действия пролонгированного облучения D1-клетки имеют разные признаки нарушения ультраструктурной организации, сочетание которых в разных клетках выражено неодинаково. В цитоплазме D1-клеток присутствуют лизосомы, идентифицируется большое количество рибосом и полисом. Хорошо сохранившиеся митохондрии распределены между поврежденными, которые имеют разрушенные кристы. В отдельных D1-клетках наблюдается вакуолизация цитоплазмы, являющаяся следствием отслоения наружной ядерной мембраны, расширения профилей эндоплазматической сети и пластинчатого комплекса и разрушения митохондрий. Цитоплазма D1-клеток содержит разное количество секреторных гранул, при этом в клетках с выраженными ультраструктурными повреждениями количество секреторных гранул заметно снижено в результате дегрануляции.

Р-клетки. После воздействия пролонгированного облучения Р-клетки преимущественно имеют хорошую ультраструктурную организацию. Внутриклеточные органеллы просматриваются слабо. Изредка идентифицируются отдельные профили эндоплазматической сети и пластинчатого комплекса. В цитоплазме эндокринных клеток данного типа присутствует большое количество рибосом. На месте отдельных разрушенных митохондрий встречаются вакуоли. В цитоплазме Р-клеток выявляются секреторные гранулы разной электронной плотности, присутствующие в цитоплазме в умеренном количестве. Наблюдается дегрануляция Р-клеток.

S-клетки. После воздействия пролонгированного облучения в цитоплазме S-клеток обнаруживается большое количество митохондрий небольшого размера, в некоторых из них наблюдается небольшая дезорганизация крист. Ультраструктура S-клеток отличается хорошей организацией без существенных повреждений, вакуолизация не отмечается. В S-клетках содержится много рибосом и полисом, отчетливо просматриваются профили эндоплазматической сети. Большое количество секреторных гранул высокой электронной плотности равномерно распределено по цитоплазме. В отдельных S-клетках наблюдается снижение электронной плотности секреторных гранул. Дегрануляция выражена слабо.

Проведенные ультраструктурные исследования эндокринных клеток, локализованных в слизистой оболочке двенадцатиперстной кишки, после воздействия пролонгированного облучения показали, что среди одних типов апудоцитов (ЕС-, G-, D-, L- и D1-клетки) выявляются как клетки, имеющие хорошую ультраструктурную организацию без существенных повреждений и близкую к контролю, так и клетки с выраженными нарушениями. Причем в D-и L-клетках повреждения ультраструктуры значительно более выражены, чем в апудоцитах, продуцирующих другие гормоны. В других типах эндокринных клеток (ECL-, N-, К-, Р-, S-клетки) ультраструктурные нарушения практически полностью отсутствуют. Почти во всех типах апудоцитов, за исключением ECL и N-клеток, присутствуют признаки дегрануляции. Кроме того, в отдельных эндокринных клетках наблюдается экзоцитоз.

Предстательная железа. В простате у крыс при моделировании преждевременного старения хромогранин А-продуцирующие НЭ клетки встречались реже, чем в контрольной группе.

У животных подопытной группы через 7 дней после однократного облучения (модель преждевременного старения) в большинстве эпителиальных клеток обнаруживались набухшие митохондрии с просветленным матриксом. Профили шероховатого эндоплазматического ретикулума были расширены, число его структур увеличено, особенно много было везикул и вакуолей. Число свободных рибосом и полисом увеличено. Межклеточные щели расширены.

При электронно-микроскопическом исследовании НЭ клеток обращает на себя внимание увеличение количества и размеров митохондрий, изменений формы, с поврежденными кристами. В НЭ клетках выявлялось округлое или овальное крупное ядро, иногда видоизмененной формы с изрезанными контурами кариолеммы. В цитоплазме отмечалась вакуолизация, выраженная в разной степени в различных типах нейроэндокринных клеток; наблюдалось присутствие единичных лизосом и липофусциновых включений. Шероховатый и гладкий эндоплазматический ретикулум четко контурировался, часто с заметным расширением цистерн, пластинчатый комплекс был функционально активен и у некоторых типов эндокринных клеток гиперплазирован. В цитоплазме выявлялось различное количество секреторных гранул разной величины и формы.

В цитоплазме хромогранин А-продуцирующих НЭ клеток отмечалось функциональное напряжение органелл. Митохондрии были набухшие, с дезорганизацией крист, иногда причудливой формы. Пластинчатый комплекс был гиперплазирован и имел признаки различной функциональной активности, в нем идентифицировались везикулярные компоненты. В цитоплазме встречалось много свободных рибосом и полисом, ядра клеток имели неровные контуры. Нередко наблюдалось отслоение наружного листка кариолеммы. Цитоплазма была вакуолизирована за счет расширения канальцев шероховатого эндоплазматического ретикулума и разрушения митохондрий.

В базальной части клеток выявлялось разное количество полиморфных (округлых, почковидных, гантелеобразных, ракетообразных и бобовидных) секреторных гранул высокой электронной плотности, часто окруженных узким светлым ободком и тонкой мембраной. Многие клетки содержали умеренное число гранул, среди которых встречаются вакуоли. Ультраструктурные особенности позволили связать наличие секреторных гранул в клетках с экспрессией хромогранина А. Популяция нейроэндокринных клеток в предстательной железе у опытных крыс через 7 дней после однократного облучения сохраняла общую структуру, выявленную у животных контрольной группы. Однако имело место снижение числа хромогранин А-продуцирующих НЭ клеток по сравнению с контрольной группой.

Влияние синтетических пептидов на культуры тканей животных различного возраста

С целью оптимизации изучения серотонина и мелатонина в качестве возможных геропротекторов по отношению к эпителиоцитам желудка и предстательной железы было проведено пилотное исследование эффектов двух пептидов - эпиталона и простамакса на органотипические культуры различных тканей. Выбор указанных пептидов определялся возможной близостью эпиталона к эффектам мелатонина и серотонина, поскольку и эпиталон и биогенные амины имеют выраженное сродство к пинеальной железе, а простамакс был выбран для сравнения в качестве контрольного препарата.

Молодые животные. При культивировании фрагментов коры головного мозга молодых 1-дневных животных в зоне роста отмечалось появление мигрирующих нейронов с крупными центрально расположенныи ядрами, а также глиальных клеток и фибробластоподобных элементов. Из синтетических пептидов на эксплантаты коры молодых крыс стимулирующим образом действовал только эпиталон (рис. 5), ИП повышался на 28±7% (n = 32, р<0,05), по сравнению с контрольными эксплантатами (n = 24). Простамакс был неэффективен в отношении эксплантатов коры головного мозга.

Рис. 5. Влияние эпиталона и простамакса на эксплантаты коры головного мозга крысы

При культивировании фрагментов подкорковых структур головного мозга, в которых зона роста состояла из клеточных элементов, аналогичных выявляемым в зоне роста эксплантатов коры, у молодых животных выраженная стимуляция развития эксплантатов происходила под влиянием только эпиталона (рис. 6), ИП повышался на 36±5% (n = 28, р<0,05) по сравнению с контролем (n = 34).

В отношении эксплантатов печени стимулирующим действием обладал также только эпиталон в дозировке 20 нг/мл, при этом ИП повышался на 18±3% (n = 24, p<0,05) по сравнению с ИП контрольных эксплантатов (n = 21).

Рис. 6. Влияние эпиталона и простамакса на эксплантаты подкорковых структур головного мозга крысы

При культивировании ткани тимуса зона роста образовывалась за счет мигрирующих и пролиферирующих лимфобластов и некоторого количества фибробластов. При действии эпиталона в культуре ткани вилочковой железы молодых крысят зона роста уменьшалась на 35±5% (n = 31, p<0,05), по сравнению с ИП контрольных эксплантатов (n = 25). По-видимому, это связано с процессами апоптоза и селекции Т-клеток в тимусе в период неонатального развития, усиливающимися под действием эпиталона, так как уже у 3-недельных крыс эпиталон начинает стимулировать зону роста эксплантатов тимуса (рис. 7).

Рис. 7. Влияние эпиталона и простамакса на эксплантаты тимуса крысы

нейроэндокринный предстательный пожилой опухоль

Зрелые животные. При культивировании фрагментов коры головного мозга у этих животных зона роста также состояла из мигрирующих нейронов с крупными центрально расположенныи ядрами, глиальных клеток и фибробластоподобных элементов. Из синтетических пептидов на эксплантаты коры стимулирующим образом действовал эпиталон, при этом ИП повышался на 40±4% (n = 39, р< 0,05) по сравнению с контрольными эксплантатами (n = 28).

В эксплантатах подкорковых структур головного мозга, в которых зона роста состояла из клеточных элементов, аналогичных выявляемым в зоне роста эксплантатов 1-дневных животных, выраженная стимуляция развития эксплантатов происходила также под влиянием эпиталона, при этом ИП повышался на 27±3% (n = 30, р<0,05), по сравнению с контролем (n = 34). Простамакс не вызывал изменений ИП.

При культивировании ткани печени выявлено, что эпиталон в культуре ткани 21-дневных крысят усиливал развитие зоны роста на 21%±3 (n = 20, p<0,05) по сравнению с ИП контрольных эксплантатов (n = 25). Простамакс не оказывал влияния на развитие органотипической культуры печени.

При культивировании ткани тимуса выявлено, что эпиталон в культуре ткани вилочковой железы 21-дневных крысят усиливал развитие зоны роста на 15%±1 (n = 30, p<0,05), по сравнению с ИП контрольных эксплантатов (n = 25). Простамакс не оказывал влияния на развитие органотипической культуры вилочковой железы.

Старые животные. При культивировании коры головного мозга было обнаружено, что синтетические пептиды оказывали на кору головного мозга старых животных более сильное воздействие, чем это наблюдалось у молодых животных. Это выражалось в том, что эпиталон вызывал статистически достоверное увеличение ИП, который становился на 38±4% (n = 30, р< 0,05) выше по сравнению с контрольными эксплантатами (n = 24).

В культурах подкорковых структур головного мозга от старых животных эпиталон вызывал также статистически достоверное увеличение ИП, который становился на 20±2% (n = 32, р< 0,05) выше по сравнению с контролем (n = 25).

При культивировании ткани печени найдено, что эпиталон усиливал развитие зоны роста на 18%±1 (n = 25, p<0,05) по сравнению с ИП контрольных эксплантатов (n = 24).

При культивировании лимфоидной ткани вилочковой железы и селезенки старых крыс найдено, что у старых крыс простамакс угнетал зону роста эксплантатов тимуса на 25±3% (n = 23, p<0,05) по сравнению с ИП контрольных эксплантатов тимуса крыс (n = 22), что может быть связано с инволюционными процессами в вилочковой железе.

Полученные данные свидетельствуют о том, что эпиталон обладает стимулирующим действием в отношении различных тканей как молодых, так и старых животных и может рассматриваться в качестве геропротекторного средства.

Следующим этапом исследований явилась оценка возможного модулирующего и геропротекторного действия пептидов в культуре тканей.

Экспрессия сигнальных факторов дифференцировки при старении культур эпителиальных клеток желудка и предстательной железы

Ядерные белки

Культура эпителиоцитов желудка

Контроль. В эпителиоцитах желудка контрольной группы при инкубации в течение 10 мин среднее число гранул на ядро составляло 21,87±0,44 (табл. 6). При инкубации препаратов в течение 15 мин реакция в эпителиоцитах желудка была более интенсивная и гранулы серебра в ядрах эпителиальных клеток сливались в отдельные глыбки.

Действие серотонина. При всех концентрациях серотонина в эпителиоцитах желудка наблюдалось повышение содержания гранул серебра. Наибольшие изменения отмечались при концентрации серотонина 20 нг/мл и 200 нг/мл.

При концентрации серотонина 2 нг/мл среднее число гранул серебра на ядро эпителиоцита желудка составляло 25,2±0,43, что достоверно превышало контрольные значения на 9,5% (р<0,01).

При концентрации серотонина 20 нг/мл среднее число гранул серебра на ядро составляло 27,7±0,89, а при концентрации 200 нг/мл - 28,6±0,61 гранул на ядро. Эти показатели достоверно превышали контрольные значения, соответственно, на 22% (р< 0,001) и 26% (р<0,001) (табл. 6).

Таблица 6

Содержание гранул серебра в ядрах эпителиоцитов желудка при действии разных концентраций серотонина

Контроль	Концентрация серотонина (нг/мл)
	2	20	200
М1±m1 (n = 100)	M2±m2 (n = 100)	M2>M1 (%)	р	М3±m3 (n = 100)	M3>M1 (%)	р	М4±m4 (n = 100)	M4>M1 (%)	р
21,87±0,44	25,2±0,43	9,5	<0,01	27,7±0,89	22	<0,001	28,6±0,61	26	<0,001

Действие мелатонина. В эпителиоцитах желудка наблюдалось снижение содержания гранул серебра. Оно было сходным при всех концентрациях мелатонина.

При концентрации мелатонина 2 нг/мл среднее число гранул серебра на ядро эпителиоцита составляло 20,5+0,51, что достоверно было ниже контрольных значений на 10% (р<0,001). При концентрации мелатонина 20 нг/мл среднее число гранул серебра на ядро эпителиальной клетки составляло 20,7+0,51, а при концентрации 200 нг/мл - 20,9+0,56, что было достоверно ниже контрольных значений, соответственно, на 9,6% и 8,6% (р<0,01 и р<0,02, соответственно).

Регистрируемые различия в содержании гранул серебра в ядрах клеток в зависимости от дозы мелатонина недостоверны (р<0,5).

Культура эпителиоцитов предстательной железы

Контроль. В контроле эпителиальные клетки простаты представляли однородную популяцию клеток, характеризующихся небольшими размерами и содержащие ядра с плотной структурой хроматина. В среднем число гранул на ядро составляло 3,15±0,08 (табл. 7). При инкубации в течение 10 мин реакция в тимоцитах практически отсутствовала.

Действие серотонина. При введении в культуральную среду серотонина в концентрации 2 нг/мл существенных изменений в клеточном составе эпителиальных клеток простаты зарегистрировано не было. В эпителиальных клетках простаты отмечалось лишь незначительное повышение числа гранул серебра по сравнению с контрольными значениями. Среднее число гранул серебра на ядро в этих условиях составляло 3,2+0,11, что недостоверно превышало контрольные значения на 4% (р<0,5) (табл. 7).

Увеличение в культуральной среде концентрации серотонина до 20 нг/мл и 200 нг/мл приводило к заметному повышению числа гранул серебра в эпителиальных клетках простаты. При концентрации серотонина 20 нг/мл количество гранул серебра составляло в среднем 3,76+0,12 на ядро; при концентрации 200 нг/мл - 3,89+0,10. Эти показатели достоверно превышали контрольные значения, соответственно, на 18% и 24% (р<0,001) (табл. 7). В то же время, существенных различий в содержании гранул серебра при концентрации серотонина 20 нг/мл и 200 нг/мл не выявлено (р<0,1) (табл. 7).

Таблица 7

Содержание гранул серебра в ядрах эпителиальных клеток простаты при действии разных концентраций серотонина

Контроль	Концентрация серотонина (нг/мл)
	2	20	200
М1±m1 (n = 100)	M2±m2 (n = 100)	M2>M1 (в %)	P	М3±m3 (n = 100)	M3>M1 (в %)	P	М4±m4 (n = 100)	M4>M1 (в %)	P
3,15±0,08	3,2±0,11	4	<0,5	3,76±0,12	18	<0,001	3,89±0,10	24	<0,001

При концентрациях серотонина 20 нг/мл и 200 нг/мл отмечалась заметная морфологическая гетерогенность популяции эпителиальных клеток простаты. Среди эпителиальных клеток простаты обычных размеров и строения наблюдалось большое число крупных клеток с нежной структурой хроматина ядер. В таких клетках отмечалось более высокое содержание гранул серебра, чем в эпителиальных клетках простаты. В отдельных клетках число гранул серебра достигало 5-7 и более.

Действие мелатонина. Мелатонин подавлял экспрессию аргирофильных белков в эпителиальных клетках простаты. При этом действие препарата не зависело от его концентрации. Так, в эпителиальных клетках простаты количество гранул серебра при концентрации мелатонина 2 нг/мл составляло в среднем на ядро 2,42+0,09, что было достоверно ниже контрольных значений на 30% (р<0,001) (табл. 8).

Таблица 8

Содержание гранул серебра в ядрах эпителиальных клеток простаты при действии разных концентраций мелатонина

Контроль	Концентрация мелатонина (нг/мл)
	2	20	200
М1±m1 (n = 100)	M2±m2 (n = 100)	M2>M1 (%)	P	М3±m3 (n = 100)	M3>M1 (%)	P	М4±m4 (n = 100)	M4>M1 (%)	P
3,15±0,08	2,42±0,09	30	<0,001	2,52±0,09	25	<0,01	2,47±0,13	27	<0,001

Практически сходные изменения в содержании гранул серебра в эпителиальных клетках простаты были зарегистрированы при концентрациях мелатонина 20 нг/мл и 200 нг/мл. При концентрации мелатонина 20 нг/мл количество гранул серебра составляло в среднем 2,52+0,09 на ядро; при концентрации 200 нг/мл - 2,47+0,13. Эти показатели были достоверно ниже, чем в контроле, соответственно на 25% и 27% (р<0,001). Регистрируемые различия в содержании гранул серебра в эпителиальных клетках простаты в зависимости от концентрации мелатонина недостоверны (р<0,5) (табл. 8).

Цитоплазматические белки

Для изучения влияния серотонина и мелатонина на экспрессию сигнальных факторов дифференцировки эпителиоцитов желудка (протеина CDX1) и простаты (протеина RUNX3) при старении культур показало, что исследуемые гормоны обладают способностью активно усиливать экспрессию вышеуказанных маркеров, синтез которых достоверно снижается в стареющих культурах клеток (табл. 9).

Показатели экспрессии указанных факторов в старых культурах клеток (прошедших 7 пассажей) под действием гормонов значительно превышали соответствующие контрольные показатели как для старых, так и для молодых культур. При этом наибольшей активностью среди изученных гормонов обладает мелатонин (табл. 10).

Таблица 9

Морфометрические показатели экспрессии факторов дифференцировки эпителиоцитов желудка при действии пептидов в стареющих культурах клеток

Количество пассажей ТЭК (монокультура)	CDX1 (площадь экспрессии)	RUNX3 (площадь экспрессии)
	КТР	СЕР	МЕЛ	КТР	СЕР	МЕЛ
1 пассаж (молодые культуры)	2,31±0,08	2,46±0,06	2,71±0,05*	1,75±0,06	1,95±0,20	2,63±0,09*
4 пассажа (зрелые культуры)	1,18±0,04	5,59±1,05*	9,21±1,72*	0,76±0,03	3,18±0,32*	5,73±0,16*
7 пассажей (старые культуры)	0,72±0,01	2,71±0,09*	2,78±0,20*	0,33±0,01	4,56±0,31*	5,28±0,21*

КТР - контроль, СЕР- серотонин, МЕЛ-мелатонин

*- p<0,05 по сравнению с аналогичным показателем в контрольной культуре клеток.

Параллельно с усилением экспрессии сигнальных факторов дифференцировки, серотонин и мелатонин усиливают пролиферативную активность эпителиоцитов желудка и предстательной железы в монокультурах при их старении. Об этом свидетельствуют показатели количества эпителиальных клеток желудка и простаты в старых культурах (прошедших 7 пассажей), которые превышают контрольные показатели во всех исследуемых группах. Наибольшей активностью в этом отношении также обладает мелатонин (табл. 11).

Таблица 10

Количество эпителиоцитов желудка в культурах клеток при действии гормонов

Количество пассажей	Контроль	Серотонин	Мелатонин
1 пассаж (молодые культуры)	23263±1275	27501±1321*	29065±1427*
4 пассажа (зрелые культуры	18673±1175	28467±1228*	31988±1527*
7 пассажей (старые культуры	14248±924	23985±1254*	30325±1471*

*- p<0,05 по сравнению с аналогичным показателем в контрольной культуре клеток.

Таблица 11

Количество эпителиоцитов предстательной железы в культурах клеток при действии гормонов

Количество пассажей	Контроль	Серотонин	Мелатонин
1 пассаж (молодые культуры)	19471±934	24538±1006*	27683±1182*
4 пассажа (зрелые культуры	16325±875	22349±873*	29037±1056*
7 пассажей (старые культуры	10567±566	18793±822*	29659±1173*

*- p<0,05 по сравнению с аналогичным показателем в контрольной культуре клеток.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Одной из основополагающих в современной биологии и медицине является концепция о существовании в организме диффузной эндокринной системы клеток, которые продуцируют биогенные амины и пептидные гормоны (APUD-система). При этом на современном уровне развития биологических и медицинских знаний термин APUD-система следует рассматривать как синоним термина «диффузная эндокринная система».

Методологией диссертационного исследования стал системный подход. Избрана совокупность клинических, биохимических, морфологических, иммунологических, инструментальных и математико-статистических методов, позволяющая оценить нейроиммуноэндокринный статус пациентов пожилого возраста с патологией желудочно-кишечного тракта и мочеполовой системы в период старения.

Иммуногистохимические и электронно-микроскопические исследования позволили обнаружить присутствие высокоактивных регуляторных веществ как в эндокринных клетках (апудоцитах) различных органов пищеварительного тракта, так и в структурных элементах предстательной железы.

Оксидативный стресс является важным патогенетическим фактором развития и прогрессирования патологии различных органов и систем в пожилом возрасте. В этой связи в нашем исследовании направлением научного поиска стало установление характера взаимоотношений между про- и антиоксидантными системами у пожилых больных в сравнении с пациентами молодого и среднего возраста, характера активации этих компонентов оксидативного гомеостаза в зависимости от нейроиммуноэндокринной регуляции.

Изучение выраженности оксидативного стресса проведено с учетом концентрации промежуточных продуктов перекисного окисления, в частности, малонового диальдегида, поскольку эти соединения отражают долговременные процессы протекания оксидативных процессов, что предоставит более объективные данные об их характере. Степень антиоксидантной защиты изучена при помощи биохимических реакций с тиобарбитуровой кислотой.

Выявлено, что уровень TNF-б в сыворотке крови при обострении язвенной болезни в пожилом возрасте достоверно повышается как у пациентов с НР-ассоциированной язвенной болезнью, так и при язвенной болезни без НР-инфекции. Причем повышение этого провоспалительного цитокина более значимо при НР-инфекции. Нормализация показателя при отсутствии обсемененности НР происходит уже к стадии клинико-эндокопической ремиссии, а при наличии НР-инфекции - только к периоду истинной ремиссии. Уровень других провоспалительных цитокинов в сыворотке крови, в частности, IL-1, IL-6, также повышен. Вместе с тем, уровни молекул адгезии sICAM-1 и sVCAM-1 при язвенной болезни вне зависимости от ее стадии и наличия/отсутствия НР-инфекции меняются незначительно и достоверно не отличаются от таковых у здоровых пациентов.

Выявлено, что при язвенной болезни у пожилых пациентов (как с НР-инфекцией, так и без нее) имеются признаки депрессии иммунитета. Наблюдается снижение количества Ig G с достоверным снижением уровня специфических антигеликобактерных антител класса G у пациентов с НР-инфекцией. У этих же пациентов при наличии НР-инфекции наблюдается нарушение баланса противомикробных субклассов IgG1/IgG2. Депрессия специфического противоинфекционного IgG-зависимого иммунитета сопутствует язвенной болезни и создает предпосылки для выживания и персистенции HР с одновременным снижением возможностей контроля со стороны иммунной системы.

Восстановление уровня большинства сигнальных молекул нейроиммуноэдокринной системы происходит только к периоду истинной ремиссии, но не на стадии клинико-эндоскопической ремиссии. Это свидетельствует о напряженности нейроиммуноэндокринных взаимодействий как на стадии обострения, так и на стадии клинико-эндоскопической ремиссии, а также о провоспалительном нейрогормональном профиле у лиц пожилого возраста.

Оксидативный гомеостаз у здоровых лиц пожилого возраста характеризуется большей выраженностью прооксидантных процессов и ослаблением антиоксидантной защиты по сравнению с испытуемыми среднего возраста. Еще в большей степени происходит усиление про- и ослабление антиоксидантных систем при наличии клинически значимого заболевания.

На модели ускоренного старения показано достоверное снижение экспрессии хромогранина А и соматостатина в НЭ клетках предстательной железы.

В раковых опухолях предстательной железы содержатся опухолевые НЭ клетки, ответственные за синтез хромогранина А и соматостатина. В регуляции роста опухолей простаты активно участвуют хромогранин А, соматостатин и, по-видимому, другие гормоны, продуцируемые НЭ клетками через паракринные и аутокринные секреторные механизмы. При этом как при ДГПЖ, так и при аденокарциноме отмечается снижение продукции хромогранина А и соматостатина.

Выводы

1. Пожилой возраст характеризуется морфологическими изменениями клеток диффузной нейроиммуноэндокринной системы - гетерохромностью ядер; уменьшением количества рибосом; увеличением количества лизосом; нарушением структуры цитоплазматических филаментов; изменением строения митохондрий, набуханием и разрушением отдельных органелл, что в совокупности приводит к снижению белково-синтетической и энергетической функций клеток.

2. Основными тенденциями ускоренного старения диффузной нейроиммуноэндокринной системы являются дистрофические изменения клеток с истощением их гормональной функции с прогрессированием продукции провоспалительных цитокинов.

3. Оксидативные реакции у здоровых лиц пожилого возраста характеризуются большей выраженностью прооксидантных процессов и ослаблением антиоксидантной защиты по сравнению со здоровыми лицами среднего возраста. особенно при наличии клинически значимого заболевания.

4. Установлено, что при ремиссии язвенной болезни двенадцатиперстной кишки наблюдается снижение синтеза провоспалительных цитокинов и фактора некроза опухолей.

5. Уровень TNF-б в сыворотке крови при обострении язвенной болезни в пожилом возрасте достоверно повышается как у пациентов с НР-ассоциированной язвенной болезнью, так и при язвенной болезни без НР-инфекции. Причем повышение этого провоспалительного цитокина более значимо при НР-инфекции. Нормализация показателя при отсутствии обсемененности НР происходит уже к стадии клинико-эндокопической ремиссии, а при наличии НР-инфекции - только к периоду истинной ремиссии.

6. Уровень IL-1, IL-6 в сыворотке крови при обострении язвенной болезни достоверно повышается как у пациентов с НР-ассоциированной язвенной болезнью, так и при язвенной болезни без НР-инфекции. Нормализация содержания IL-1 в сыворотке крови при отсутствии обсемененности НР происходит уже к стадии клинико-эндокопической ремиссии, а при наличии НР-инфекции - только к периоду истинной ремиссии. Уровень IL-6 нормализуется к стадии клинико-эндоскопической ремиссии.

7. При доброкачественной гиперплазии предстательной железы у лиц пожилого возраста отмечаются провоспалительные нейроиммуноэндокринные изменения, которые характеризуются увеличением концентрации провоспалительных интерлейкинов, TNF-б при отсутствии динамики содержания молекул адгезии.

8. Доброкачественная гиперплазия и рак предстательной железы могут быть расценены как первичные апудопатии, а паранеопластические реакции простаты - как вторичная апудопатия, что сопровождается инверсией синтеза ряда сигнальных молекул, и в частности хромогранина А, соматостатина, гистамина, катехоламина и прочих, при этом в пожилом возрасте продукция этих сигнальных молекул имеет тенденцию к снижению.

9. Пептидные факторы, выделенные из различных тканей и созданные на их основе синтетические пептиды обладают выраженной тканеспецифичностью в отношении тканей органов как молодых, так и старых животных. Полученные в экспериментах данные о влияния эпиталона на культуры различных тканей, подтверждают его модулирующие функции.

10. Серотонин и мелатонин обладают цитогеропротекторными свойствами по отношению к эпителиальным клеткам желудка и предстательной железы. Установлено их участие в защите эпителиоцитов от апоптоза, обусловленное снижением экспрессии аргирофильных белков областей ядрышковых организаторов под их действием. Разработка конкретных рекомендаций по их применению требует продолжения детального изучения механизма действия различных доз данного гормона.

11. Серотонин и мелатонин обладают способностью активно усиливать экспрессию сигнальных факторов дифференцировки эпителиоцитов желудка (протеина CDX1) и простаты (протеина RUNX3), синтез которых достоверно снижается в стареющих культурах. Параллельно с усилением экспрессии сигнальных факторов дифференцировки эпителиоцитов желудка и предстательной железы в монокультурах при их старении, серотонин и мелатонин значительно усиливают пролиферативную активность эпителиоцитов в монокультуре и поднимают ее практически до уровня, свойственного молодым культивируемым клеткам.

12. Проведенные исследования позволяют считать, что нейроэндокринные клетки, локализуясь в составе висцеральных органов в качестве основных компонентов диффузной нейроиммуноэндокринной системы, продуцируя жизненно важные сигнальные молекулы, играют ключевую роль в поддержании гомеостаза, а возрастные нарушения экспрессии гормонов являются важными звеньями патогенеза возраст-ассоциированной патологии.

Практические рекомендации

1. Динамика уровня TNF-б, IL-1, IL-6 может служить критерием успешности терапии язвенной болезни у лиц пожилого возраста и прогноза ее эффективности.

2. Увеличение концентрации провоспалительных интерлейкинов и TNF-б может служить показателем тяжести ДГПЖ в пожилом возрасте.

3. Изучение показателей оксидативного равновесия у пожилых пациентов с ДГПЖ может служить для оценки тяжести патологического процесса в геронтологической практике.

4. Определение количества иммунопозитивных нейроэндокринных клеток в слизистой оболочке двенадцатиперстной кишки может использоваться для оценки тяжести и стадии язвенной болезни у пациентов пожилого возраста.

5. Инверсия синтеза хромогранина А и соматостатина при ДГПЖ и раке предстательной железы может служить признаком неблагоприятного течения возраст-ассоциированной патологии предстательной железы.

6. Выявленные органо-геропротекторные свойства серотонина и мелатонина по отношению к желудку и предстательной железе свидетельствуют о целесообразности дальнейших исследований механизмов воздействия этих гормонов.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Статьи в журналах, включенных в Перечень ВАК Министерства образования и науки Российской Федерации:

1. Возрастные особенности экспрессии сигнальных факторов дифференцировки эпителиальных клеток тимуса человека/В.О. Полякова, И.М. Кветной, С.С. Коновалов, П.Н. Зезюлин, И.В Князькин//Бюлл. экспер. биол. медицины - 2007 - Т. 144. - №8. - С. 202-205.

2. Изменения эндотелия при сердечно-сосудистой патологии у пожилых.1. Сигнальные молекулы и функции эндотелия / К.И. Прощаев, А.Н. Ильницкий, И.М. Кветной, И.В. Князькин, П.Н. Зезюлин, С.С. Коновалов, С.В. Филиппов// Клиническая медицина. - 2007. - Т. 85, №11. - С. 9-13.

3. Изменения эндотелия при сердечно-сосудистой патологии у пожилых.2. Сигнальные молекулы и патогенез атеросклероза / К.И. Прощаев, А.Н. Ильницкий, И.М. Кветной, И.В. Князькин, П.Н. Зезюлин, С.С. Коновалов, С.В. Филиппов //Клиническая медицина. - 2007. - Т. 85, №12. - С. 4-7.

4. Зезюлин П.Н. Интерлейкины при язвенной болезни в сочетании с неалкогольным с театогепатитом в пожилом возрасте / П.Н. Зезюлин // Успехи геронтологии. - 2009. - Т. 22, №3. - С. 435-438.

5. Медико-социальные проблемы геронтологии и гериатрии: осведомленность населения и медицинских работников/ К.И. Прощаев, А.Н. Ильницкий, П.Н. Зезюлин, С.В. Филиппов, А.А. Лукьянов, Н.И. Жернакова // Успехи геронтологии. - 2008. - Т.21, №1. - С. 160-164.

6. Развитие органотипической культуры селезенки крыс под действием аминокислот и антител к рецепторам фактора роста нервов / Н.И. Чалисова, А.Н. Закуцкий, А.И. Анискина, С.В. Филиппов, П.Н Зезюлин // Морфология. - 2007. - Т.131, № 2. - С.71-74.

7. Тканеспецифический эффект синтетических пептидов - биорегуляторов на органотипическую культуру молодых и старых крыс / А.Н. Закуцкий, Н.И. Чалисова, Г.А. Рыжак, А.И. Анискина, С.В. Филиппов, П.Н. Зезюлин // Успехи геронтологии. - 2006. - Т.19, № 1. - С. 93-96.

8. Эффект аминокислот и антител к рецепторам факторой роста нервов на развитие органотипической культуры лимфоидной ткани / Н.И. Чалисова, А.Н. Закуцкий, А.И. Анискина, С.В. Филиппов, П.Н Зезюлин // Бюлл. экспер. биол. мед. - 2007. - Т. 143, №2. - С. 255-258.

9. Эффект аминокислот на клеточную пролиферацию и апоптоз в органотипической культуре молодых и старых крыс / А.И. Анискина, Н.И. Чалисова, А.Н. Закуцкий, А.В. Комашня, С.В. Филиппов, П.Н. Зезюлин // Успехи геронтологии. - 2006. - Т.19, №1. - С.55-59.

10. Эффект аргинина и его метаболитов на миокард крыс в органотипической культуре ткани / Н.И. Чалисова, А.Н. Закуцкий, А.И. Анискина А.И., С.В. Филиппов, П.Н., П.Н. Зезюлин, А.Д. Ноздрачев // Докл. РАН. Биол. науки. - 2007. - Т. 415. - С. 257-260.

Монографии

11. Нейроиммуноэндокринология мужской половой системы, плаценты и эндометрия / И.В. Князькин, И.М. Кветной, П.Н. Зезюлин, С.В. Филиппов - СПб.: Деан, 2007. - 191 с.

Главы в учебниках и руководствах

12. Нейроиммуноэндокринология предстательной железы и яичек / М.А.Пальцев, И.М. Кветной, И.В. Князькин, В.Х. Хейфец, А.Т. Супиев, П.Н. Зезюлин, С.В. Филиппов//В кн. Руководство по нейроиммуноэндокринологии. - М.: Медицина, 2006. - С. 286-299.

13. Нейроиммуноэндокринология почек/М.А. Пальцев, И.М. Кветной, В.Х. Хейфец, В.О. Полякова, П.Н. Зезюлин, С.В. Филиппов // В кн. Руководство по нейроиммуноэндокринологии. - М.: Медицина, 2006. - С. 367-373.

14. Нейроиммуноэндокринология предстательной железы и яичек/М.А. Пальцев, И.М. Кветной, В.Х. Хейфец, В.О. Полякова, П.Н. Зезюлин, С.В. Филиппов // В кн. Руководство по нейроиммуноэндокринологии. - 2 изд. - М.: Медицина, 2008. - С. 346-359.

15. Нейроиммуноэндокринология почек/ М.А. Пальцев, И.М. Кветной, В.Х. Хейфец, И.В. Князькин, В.О. Полякова, П.Н. Зезюлин, С.В. Филиппов // В кн. Руководство по нейроиммуноэндокринологии. - 2 изд. - М.: Медицина, 2008. - С. 483-489.

16. Предстательная железа и старение: роль локальной нейроэндокринной регуляции/ В.Х. Хавинсон, С.С. Коновалов, А.Т. Супиев, С.В. Филиппов, И.В. Князькин, П.Н.. Зезюлин//В кн.: Избранные лекции по геронтологии. - СПб.: Прайм-Еврознак, 2009. - С. 267-289.

Статьи в других изданиях

17. Доброкачественная гиперплазия простаты - новые аспекты терапии/ А.А. Сморчков, И.В. Князькин, П.Н. Зезюлин, Г.И. Гурко // Эффективная фармакотерапия в урологии. - 2008. - №2. - С. 30-32.

Тезисы

18. Возрастная динамика экспрессии гормонов в тимусе человека / Е.В. Чернышова, В.О. Полякова, А.Ю. Чебракова, Е.С. Федорова, П.Н. Зезюлин // Матер. конф. «Перспективы фундаментальной геронтологии». - Санкт-Петербург, 2006. - С. 157-158.

19. Возрастная динамика экспрессии NO-синтазы и CD35 в тучных и дендритных клетках тимуса человека/ В.О. Полякова, Е.С. Федорова, Е.В. Чернышова, А.Ю. Чебракова, И.В. Князькин, П.Н Зезюлин // Матер. II научно-практической конференции с международным участием, посвященная памяти Э.С. Пушковой. - Санкт-Петербург, 2006. - С. 180-181.

20. Возрастные изменения экспрессии вазоактивных гормонов и факторов апоптоза в тимусе человека / В.О. Полякова, Е.В. Чернышова, А.Ю. Чебракова, П.Н. Зезюлин, Е.С. Федорова // Медицинская иммунология. - Т. 8, №2-3. - 2006. - С. 380-381.

21. Геропротекторное действие мелатонина на клетки тимуса / В.О. Полякова, И.В. Князькин, П.Н. Зезюлин, Ю.А Тафеев // Тез докл. III Всероссийской научно- практической конференции «Общество, государство и медицина для пожилых». - Москва, 2006. - С. 75-76.

22. Ильницкий А.Н. Динамика медико-социальных показателей течения язвенной болезни двенадцатиперстной кишки с дебютом в пожилом возрасте под влиянием одно- и трехэтапных немедикаментозных мероприятий/ А.Н. Ильницкий, Н.И. Жернакова, П.Н. Зезюлин // Взаимодействие медицинской науки и практики: Матер. очно-заочной конф. - Белгород - Смоленск - Новополоцк, 2007. - С. 15.

23. Компьютерный анализ микроскопических изображений и его значение в объективизации геронтологических исследований/А.В., Трофимов Ю.А. Тафеев, П.Н. Зезюлин, С.В. Филиппов // Тез. докл. Всерос. конфер. «Перспективы фундаментальной геронтологии». - Санкт-Петербург, 2006. - С. 136-137.

24. Мелатонин в иммунокомпетентных клетках: синтез, депонирование, биологическая роль / И.М. Кветной, Т.В. Кветная, В.О. Полякова, А.В., Трофимов И.В. Князькин, П.Н. Зезюлин, С.В. Филиппов // Матер. XIII Российского национального конгресса «Человек и лекарство». - Москва, 2006. - С.161.

25. Мелатонин в решении вопросов кардиопрофилактики у пожилых больных / А.Н. Ильницкий, К.И. Прощаев, П.Н. Зезюлин, С.В. Филиппов, И.В. Князькин, С.С. Коновалов//Сердечно-сосудистые заболевания: Бюлл. НЦССХ им. А.Н. Бакулева. - 2007. - Т. 8, №6, прил. (Тез. XIII съезда сердечно-сосудистых хирургов). - С. 287.

26. Мелатонин: структурно-функциональное единство пинеальной железы и тимуса в нейроиммуноэндокринной регуляции гомеостаза / И.М. Кветной, В.О. Полякова, С.С. Коновалов, И.Н. Костючек., П.Н. Зезюлин, Е.С. Сопова//XV Российский национальный конгресс «Человек и лекарство». - Москва, 2008. - С. 633.

27. Нейроиммунноэндокринные механизмы старения / И.В. Князькин, Т.В. Кветная, П.Н. Зезюлин, С.В. Филиппов // Тез. VII Междун. симпозиума "Биологические механизмы старения". - Харьков, 2006. - С. 13.

28. Особенности экспрессии гормонов в иммунокомпетентных клетках при старении in vitro / В.О. Полякова, С.С. Коновалов, И.В. Князькин, П.Н. Зезюлин, М.В. Терземан, Ю.А. Тафеев // Матер. конф. «Перспективы фундаментальной геронтологии». - Санкт-Петербург, 2006. - С. 104-105.

29. Перспективы использования экзогенного мелатонина в лечении и реабилитации пациентов с сердечной недостаточностью / А.Н. Ильницкий, К.И. Прощаев, П.Н. Зезюлин, С.В. Филиппов, С.С. Коновалов, И.В. Князькин//Сердечно-сосудистые заболевания: Бюлл. НЦССХ им. А.Н. Бакулева. - 2007. - Т. 8, №6, прил. (Тез. XIII съезда сердечно-сосудистых хирургов). - С. 287.

30. Полякова В.О. Гормоны в иммунокомпетентных клетках: иммуноцитохимическая локализация/ В.О. Полякова, Е.С. Федорова, П.Н. Зезюлин // 9-я Всероссийская медико-биологическая конференция молодых исследователей «Человек и его здоровье».- Санкт-Петербург, 2006. - С. 266.

31. Полякова В.О. Пептидергическая профилактика старения тимуса / В.О. Полякова, А. В. Трофимов, П.Н. Зезюлин // В сб. научных трудов «Актуальные вопросы внутренних болезней» - Санкт-Петербург, 2006. - С. 50-51.

32. Стимулирующее влияние биорегуляторных пептидов на различные ткани при культивировании / Н.И. Чалисова, А.Н. Закуцкий, А.И. Анискина, С.В. Филиппов, П.Н. Зезюлин // Тез. докл. Всерос. конфер. «Перспективы фундаментальной геронтологии». - Санкт-Петербург, 2006. - С. 153-154.

33. Чебракова А.Ю. Возрастные изменения экспрессии P53 и MCL-1 в структурах нелимфоидного компонента тимуса человека / А.Ю. Чебракова, П.Н. Зезюлин // 9-я Всероссийская медико-биологическая конференция молодых исследователей. - Санкт-Петербург, 2006. - С. 378-379.

34. Экстрапинеальный мелатонин: место и роль в нейроиммуноэндокринной регуляции гомеостаза/ И.М. Кветной, С.С. Коновалов, В.О. Полякова, Т.В. Кветная, И.В. Князькин, А.В. Трофимов, П.Н. Зезюлин, С.В. Филиппов, В.А. Сливкин, И.Н. Костючек, М.А. Клещев, Е.С. Сопова, Ю.А. Тафеев // Тез. докл. Всероссийской научно-практич. конф. «50 лет мелатонину: итоги и перспективы исследований». - Санкт-Петербург, 2008. - С. 22-23.

35. The amino acids effect on the apoptosis in the lymphoid tissue culture/ N. Chalisova, G. Haase, A. Zakutskii, A. Anisimova, S. Filippov, P. Zezulin //1st Workshop on “The Immune Response Against Dying Tumor Cells”. - Villejuif, France, 2006. - P. 38-39.

36. Age-related expression of serotonin and endothelin-1 in human thymus E.V. / Chernishova, I.V. Knyazkin, P.N. Zezulin // Adv. in Gerontology. - Saint-Petersburg, Russia, 2007. - Vol. 20, №3. - P.27.

Размещено на Allbest.ru