Противодиабетическая активность гимнемовых кислот

2

Размещено на http://www.allbest.ru/

1

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

ПРОТИВОДИАБЕТИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ ГИМНЕМОВЫХ КИСЛОТ

ВОРОНКОВА МАРИЯ ПАВЛОВНА

14.00.25 - фармакология, клиническая фармакология

Волгоград 2009

Работа выполнена в ГОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития РФ и Российском НИИ Здоровья (г. Москва)

Научный консультант:

Член-корреспондент РАМН,

заслуженный деятель науки РФ,

доктор медицинских наук,

профессор Спасов Александр Алексеевич

Официальные оппоненты:

1. доктор биологических наук, профессор Гарибова Таисия Леонидовна

2. доктор биологических наук, профессор Сергеева Светлана Александровна

3. доктор медицинских наук Черников Максим Валентинович

Ведущая организация:

Московский государственный медико-стоматологический университет

Защита состоится « 10 » июня 2009 г. в ____ ч. на заседании Диссертационного Совета Д 208.008.02 ГОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития РФ (400131, г. Волгоград, пл. Павших борцов,1)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития РФ

Автореферат разослан «____»_________________ 2009 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета,

доктор медицинских наук,

профессор А.Р. Бабаева

Общая характеристика работы

Актуальность проблемы. Сахарный диабет (СД) зарегистрирован более чем у 150 млн. человек в мире (И.И. Дедов и др., 2008; А.С. Аметов, 2008). При этом прогнозируется удвоение числа заболевших СД каждые 12-15 лет. Из этого числа 90-95% - больные инсулиннезависимым СД в возрасте 35-49 лет. Фактическая распространенность СД в 3-4 раза превосходит регистрируемую, что свидетельствует о пандемии СД среди взрослого населения (И.И.єБалаболкин и др., 2008). Достаточно большой объем знаний в области патофизиологии диабета и наличие широкого спектра терапевтических возможностей лечения не привели к улучшению метаболического контроля заболевания от стадии глюкозотолерантности до развернутой клиники СД (И.И.єДедов, Г.А.єМельниченко, 2006). Лечение усложняется, тем, что гипергликемия сочетается с ожирением, артериальной гипертензией, дислипидемией, гиперкоагуляцией и окислительным стрессом. Так как длительно протекающая декомпенсация усугубляет инсулинорезистентность и способствует развитию вторичной резистентности к пероральным сахароснижающим средствам, составляющим основную фармакотерапевтическую группу для лечения СД II типа, потребность в новых эффективных и безопасных сахароснижающих лекарственных средствах очевидна (И.И. Балаболкин и др., 2005). В связи с этим идет интенсивный поиск как синтетических, так и растительных секретогенов, влияющих на физиологические механизмы секреции инсулина (М.Б.єАнциферов, 2007).

В исследованиях последних лет убедительно доказано, что нарушение секреции инсулина в ответ на естественный стимулятор (углеводы) может обусловливаться нарушением секреции некоторых интестинальных гормонов (GIP и GLP-1), оказывающих глюкозостимулирующее влияние на секрецию инсулина (J. Hou et al, 2007; T.R. Vahi et al, 2007). Поскольку большая часть этих гормонов инактивируется еще в кишечнике, не достигая системного кровотока, то экзогенное применение инкретинов представляется технически сложным (S.C.єMcєDonagh, 2007). Поэтому используются ингибиторы расщепляющих инкретины энзимов, либо вещества, проявляющие прямое или косвенное инкретиномиметическое действие (K.A. Scott, 2007). В то же время гипогликемическую активность растительного экстракта Гимнемы лесной (ветвистой лианы из семейства ластовневых) связывают с увеличением инкретиномиметичекого действия, повышением секреторной активности и восстановлением морфологической структуры в-эндокриноцитов (T. Fushiki, 1992; GymnemaєLawrence Rev. 1993). Исходя из этого различные экстракты Гимнемы лесной могут являться основой для создания антидиабетических лекарственных и нелекарственных препаратов.

Диссертационная работа выполнена в рамках Федеральной целевой научно-технической программы «Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития науки и техники гражданского назначения». Тема утверждена на заседании Ученого Совета ВолГМУ (протокол № 1 от 10 февраля 2006 г.) и включена в план НИР.

Целью настоящего исследования является экспериментальное обоснование создания на основе экстракта Гимнемы лесной, проявляющего инкретиномиметическое действие, лекарственного и нелекарственного антидиабетических препаратов.

Основные задачи исследования:

1) изучение метаболических (гипогликемических, антиоксидантных, гемореологических) и антидиабетических свойств экстрактов Гимнемы лесной в зависимости от дозы и степени очистки;

2) исследование антиоксидантных и гемореологических свойств оптимизированной экстрактами девясила и гребней винограда Гимнемы-25 - наиболее активной фракции Гимнемы лесной;

3) углубленное доклиническое изучение антидиабетической Композиции на основе Гимнемы лесной с целью обоснования перспективы создания нового лекарственного препарата;

4) исследование панкреотропных механизмов антидиабетического действия Композиции;

5) изучение механизма экстрапанкреатических эффектов препарата;

6) исследование влияния препарата на процессы регенерации и апоптоза инсулинпродуцирующих клеток;

7) исследование фармакологических свойств биологически активной добавки к пище на основе Гимнемы лесной;

8) изучение токсикологических свойств Композиции и биологически активной добавки, созданных на основе Гимнемы лесной.

Научная новизна. Впервые проведено комплексное исследование влияния различных экстрактов Гимнемы лесной на функциональную активность и регенерацию эндокринных клеток поджелудочной железы, а также изучены механизмы секреции инсулина при экспериментальном сахарном диабете различной этиологии.

Впервые изучено влияние Гимнемы-25 на реологические свойства и тромбогенный потенциал крови. Впервые проведен анализ уровня гипогликемической активности различных экстрактов Гимнемы лесной в зависимости от их дозы и степени очистки.

Выполнены доклинические исследования фармакодинамических свойств лекарственной Композиции на основе Гимнемы-25, проявившей выраженные антидиабетические свойства. Обоснована возможность создания антидиабетического препарата с инкретиномиметическим и экстрапанкреатическим механизмом действия.

Впервые проведена оценка пролиферативной активности вэндокриноцитов при применении лекарственной Композиции и выявлена степень её антиапоптогенной активности.

Впервые изучены гипогликемические свойства биологически активной добавки к пище на основе Гимнемы-25 при моделировании метаболических расстройств (синдрома преддиабет), а также изучены её антиоксидантные свойства и влияние на реологические свойства крови.

Практическая значимость. Результаты изучения уровня гипогликемической активности различных экстрактов Гимнемы лесной на интактных животных и на животных с экспериментальным стрептозотоцин-индуцированным сахарным диабетом позволили выявить наиболее активную фракцию Гимнемы лесной - Гимнемаєє25, содержащую гимнемовые кислоты.

Результаты доклинических исследований позволили обосновать создание Композиции на основе Гимнемы-25 в виде лекарственного препарата (с добавлением экстрактов гребней винограда и девясила) с антиоксидантными и гемореологическими свойствами для применения в комплексной сахароснижающей терапии СД II типа и профилактики его отдаленных последствий.

Результаты доклинических исследований позволили обосновать создание БАД на основе Композиции (с введением микронутриенов необходимых для стабилизации углеводного обмена: ванадия сульфата, цинка сульфата, хрома пиколината, магния сульфата, пиридоксина гидрохлорида), проявляющей антиоксидантные и гемореологические свойства для профилактики развития метаболических расстройств и поздних осложнений СД. На основании результатов клинических исследований БАД можно полагать об её эффективности при использовании в составе комплексной терапии у больных СД II типа.

Изучены показатели острой, хронической и специфических видов токсичности.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Экстракты Гимнемы лесной - перспективные вещества для создания противодиабетических препаратов, сочетающих гипогликемическую активность с антиоксидантными и гемореологическими свойствами.

2. Антидиабетическое действие Композиции на основе Гимнемы-25 (с добавлением экстрактов гребней винограда и цветков девясила) связано с её сахароснижающим действием при экспериментальном стрептозотоцин, аллоксан-индуцированном, иммунозависимой форме СД, при латентной форме СД, инсулинорезистентности.

3. Композиция тормозит развитие апоптоза и способствует регенерации в-эндокриноцитов при токсическом воздействии цитотоксинов на ткань поджелудочной железы.

4. Композиция на основе Гимнемы-25 нетоксична, оказывает комплексное антидиабетическое, антиоксидантное, гемореологическое действие и может использоваться в составе сахароснижающей терапии для лечения и профилактики отдаленных последствий сахарного диабета.

5. БАД на основе Композиции оказывает гипогликемическое действие при экспериментальном метаболическом синдроме (преддиабет) и ожирении за счет глюкозостимулированного влияния на секрецию инсулина и потенцирования его действия, улучшения утилизации глюкозы периферическими тканями, снижения всасывания глюкозы и жирных кислот в кишечнике.

6. БАД в составе комплексной сахароснижающей терапии способствует улучшению состояния углеводного и липидного обменов, снижению инсулиновой резистентности и повышению активности антиоксидантной системы у больных СД II типа.

Реализация результатов исследования.

Система методических подходов к изучению и анализу антидиабетической активности экстрактов растений применяется при проведении исследований в лаборатории экспериментальной фармакологии ВНЦ РАМН и АВО, НИИ фармакологии ВолГМУ и кафедры фармакологии ВолГМУ. Биологически активная добавка к пище «Диабета» выпускается ООО «Экко Плюс» (Россия).

Результаты работы включены в лекционные курсы на кафедрах фармакологии, фармакогнозии и ботаники, фармацевтической и токсикологической химии, фармакологии и биофармации ФУВ ВолГМУ, на кафедрах фармакологии Кубанского, Саратовского и Ростовского государственных медицинских университетов.

Публикации и апробация работы. По теме диссертации опубликовано 39 печатных работ. Материалы диссертации докладывались и обсуждались в материалах научно-практической конференции «Состояние здоровья населения Волгоградской области и современные медицинские технологии его коррекции», Волгоград, 2005; 4-ой Международной конференция «Биологические основы индивидуальной чувствительности к психотропным средствам», «Подмосковье», 2006; XI Международном конгрессе по реабилитации в медицине и иммунореабилитации, Москва, 2006; XII и XIV Российских национальных конгрессах «Человек и лекарство», Москва, 2006, 2007, 2008; I Международного съезда фитотерапевтов «Современные проблемы фитотерапии», Москва, 2006; II Всероссийской конференции с международным участием «Клинико-морфологические аспекты эндокринопатий», Москва, 2006; V международного научно-практического конгресса «Человек в экстремальных условиях: Здоровье, надежность и реабилитации», Москва, 2006; `The next line of defense' International conference on diabetes. Synergy and strategy, Анталия, Турция, 2007; III Съезде Фармакологов России «Фармакология - практическому здравоохранению», Санкт-Петербург, 2007; II Международной научной конференции "Химия, технология и медицинские аспекты природных соединений", Алматы, Казахстан, 2007; Международной научной конференции «Лекарственные средства и биологически активные соединения», Гродно, Беларусь, 2007; 63-й конференции по фармации, Пятигорская фармацевтическая академия, Пятигорск 2008; IV Всероссийском конгрессе диабетологов, Москва, 2008; симпозиуме «Результаты фундаментальных и прикладных исследований для создания новых лекарственных средств» Москва, 2008.

Содержание работы

противодиабетический гимнемовый кислота

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 338 страницах машинописного текста, иллюстрирована 61 таблицами, 97 рисунками, состоит из введения, обзора литературы (глава I), экспериментальной части (главы II-V), обсуждения результатов (глава VI), выводов и приложения. Список литературы включает 117 отечественных и 166 иностранных источника.

Материалы и методы исследования. Проведено изучение фармакологической активности экстракта ГЛ (сырье поступало из КНР в виде высушенных листьев и сырого экстракта (№ сертификата анализа GYM-030706 от 1.06.03, КНР). В зависимости от разной степени очистки экстракта (выполненного в Российском НИИ здоровья по оригинальной методике) исследования проводились в 25%, 50%, 75% гравиметрических процентных концентрациях (далее Гимнема-25, Гимнема-50, Гимнема-75).

Изучены фармакологические свойства антидиабетической растительной Композиции созданной на основе наиболее активной фракции Гимнемы-25 оптимизированной, в ранее не патентованных комбинациях, отечественными источниками биофлавоноидов - экстрактами гребней Винограда и Девясила высокого (патент РФ № 2289419 от 20.12.2004), позиционируемой, как потенциальный антидиабетический лекарственный препарат с антиоксидантными и гемореологическими свойствами (табл. 1); и биологической добавке к пище (БАД), оказывающей влияние на углеводный обмен (табл. 2).

Примечание: биологически активные компоненты, которой включены в состав БАД в дозах, рекомендуемых СанПин РФ 2.3.2.1290-03 2003 г. для потребления в составе продуктов диетического питания (лечебно-профилактического) питания и БАД к пище (Методические рекомендации 2.3.1.1915-04) (В.И. Петров, А.А. Спасов и др., 2007).

Таблица 1

Содержание компонентов в составе лекарственного препарата (композиции)

Название компонента	Спецификация	Масса, мг
Гимнема-25	GYM-030706 РНИИ «Здоровья»	160
Сухой экстракт Девясила	ООО «Биохиммаш»	85
Сухой экстракт гребней Винограда	R6BSE-030822	35
Всего: 280

Таблица 2

Содержание компонентов в составе нелекарственного препарата БАД «Диабета»

Название компонента	Спецификация	Масса, мг
Гимнема-25	GYM-030706 РНИИ «Здоровья»	80
Сухой экстракт Девясила	ООО «Биохиммаш»	100
Сухой экстракт корня Солодки	GKE 030602	16
Сухой экстракт гребней Винограда	R6BSE-030822	40
Пиридоксина гидрохлорид (витамин В6)	EAN 4601808000603	1,6
Магния сульфат	CAS 7487-88-9	20
Цинка сульфат	ГОСТ 4174-69	8
Хрома пиколинат	ТУ-9318-001-45370421	0,08
Ванадия сульфат	CAS 123334-20-3	0,04
Всего (из расчета на 1 кг массы животного): 265,72

• Исследования были выполнены на 3410 половозрелый нелинейных белых крысах обоего пола массой 210-330 гр., 20 белых беспородных крысах возрастом свыше 36 мес.; 160 белых беспородных крысах (до 3-х месячного возраста), массой 90 гр.; 100 белых неимбредных мышах обоего пола, массой 50 гр., 79 мышах гибридах F1 (СВАC57BL/6), массой 15-20 г.; 12 кроликах породы «Шиншилла» массой 4-4,5 кг; 15 собаках массой 8-12 кг и 60 морских свинках альбиносах, массой 250-300 гр, которые содержались в условиях вивария єВолГМУ с естественным световым режимом, на стандартной диете лабораторных животных (ГОСТР 50258-92), с соблюдением рекомендаций Европейской конвенции по защите позвоночных животных, а также правил проведения доклинических исследований в РФ (ГОСТ З51000.3-96 и 51000.4-96). Эксперименты были одобрены комитетом по этической экспертизе доклинических исследованийєВолГМУ (протокол № 1-2006 от 10.02.06).

В работе использовали: полный адъювант Фрейнда (Grand Island Biological Compani, USA), стрептозотоцин (Sigma, USA), аллоксан (Merck, США), глюкозу (ЧДА, Реахим, Россия), олеиновую кислоту (Chemapol, Чехия), натрия таурохолат (Chemapol, Чехия), раствор Рингера (Хемофарм, Югославия), тиобарбитуровую кислоту (ТБК) (ICN Biomedicals, США), фосфорную кислоту (Реахим, Россия), люминол (Serva, Германия), сульфат железа (ЧДА, Украина), аскорбиновую кислоту (Chemapol, Чехия), 2,2-дифенил-l-пикрилгидразил (ДФПГ) (Sigma, США), стрептозотоцин (Sigma, США), цитрат натрия (ЧДА, Реахим, Россия), фильтры SMWPO 5 мкм (Millipore, Франция), динатриевую соль аденозин-5-дифосфорной кислоты (АДФ) («Ренам», Венгрия), адреналин гидрохлорид (“Sigma”, США), коллаген (“Sigma”, США). В качестве препаратов сравнения использовали диабетон («Сервье», Франция), танакан (Beaufour Int., Франция), Pro-в («PharmaTerra», США), инсулин «Актрапид НМ» («Ново-Нордиск», Дания); мальтоза (ЗАО «Вектон, Россия), акарбоза («Bayer AG», Германия),

Уровень глюкозы в крови определяли глюкозооксидазным методом («Глюкоза ФКД», Россия); гликозилированный гемоглобин методом катионно-обменной хроматографии низкого давления («Фосфосорб», Россия); концентрацию инсулина в плазме крови иммуноферментативным способом (DRG, Австрия).

Изучение эффективности Композиции на толерантность к сахарной нагрузке проводили на моделях перорального (глюкоза в дозе 3 г/кг) (З.И. Цюхно и соавт., 1981; В.Г. Баранов, 1983) и внутривенного (глюкоза в дозе 1 г/кг) глюкозотолерантных тестах (Masiello et al. 1998; Т.П. Бондарь, Г.И. Козинец, 2003) с оценкой результатов по А.В. Древаль (2005).

Гиперинсулинемию моделировали двукратным ежедневным подкожным введением инсулина «Актрапид МС» по О.Е. Гордиенко, (1973). Для оценки состояния углеводного обмена использовали пероральный глюкозотолерантный тест, пробу Химсворда (З.И. Цюхно и соавт., 1981). Латентную форму стрептозотоцинового диабета моделировали преддиабетогенными дозами стрептозотоцина - 35 мг/кг, в/брюшинно (Ю.М. Колесник, 1992; J. Duhault et al., 1998). Ожирение моделировали с использованием диеты (содержание жиров и углеводов более 80% от общей калорийности рациона) в течение месяца по И.А. Волчегорскому (2000).

Экспериментальные формы сахарного диабета (СД) моделировали: аллоксан-индуцированный СД - аллоксаном, 120 мг/кг, в/брюшинно (K. Srinivasan, P. Ramarao, 2007); стрептозотоцин-индуцированный СД - стрептозотоцином 45 мг/кг, в/в (K. Srinivasan, P. Ramarao, 2007); иммуннозависимый СД - полным адъювантом Фрейнда 0,2 мл однократно, п/к, и стрептозотоцином 25 мг/кг, в/в, ежедневно в течение 5 дней (B. Ziegler et al., 1990). Изучение влияния препаратов, на эффекты экзогенно введенного инсулина у панкреатэктомированных собак проводили по схеме B.A. Houssay (1960).

Морфологическое исследование Исследования выполнены на базе кафедры патологической анатомии ВолГМУ. Выражаем искреннюю благодарность член-корр. РАМН, проф. В.Б.Писареву и доценту, к.м.н. Снигуру Г.Л. за помощь в проведении исследований. поджелудочной железы крыс проводили по общепринятым гистологическим методикам с оценкой размеров ядер в-клеток и площади, занимаемой б- в-клетками, размеров и объемной доли островка Лангенгарса (ОЛ) по отношению к экзокринной части органа. Пролиферативную активность в-клеток ОЛ оценивали по количеству митозов с помощью моноклональных антител к ядерному антигену пролиферирующих клеток (PCNA, Lab Vision, США) и Ki-67 (Lab Vision, США). Для выявления процессов апоптоза использовали поликлональные антитела к Bax (BD Biosciences Pharmingen) и к каспазе-3 (Lab Vision, США); и моноклональные антитела к P53 (Lab Vision, США) и к Bcl-2 (Santa Cruz Biotechnology, США). Визуализировали непрямым иммунопероксидазным методом с высокотемпературной и ферментной демаскировкой антигенов. Анализ морфологических показателей проводили с использованием фотокамеры«Canon», Japan, 5.0 мегапикселей на базе микроскопа «Axiostar plus», Германия (объектив х40, х100 и окуляр х10), при этом оценивали количество иммунопозитивных клеток к общему количеству клеток ОЛ.

Действие препаратов на всасывание мальтозы в кишечнике оценивали по H. Luo (2001). Изучение влияния препаратов на всасывание глюкозы и олеиновой кислоты в кишечнике проводили по F. Wang et al. (1998) при постоянной перфузии тонкого кишечника крыс, определяя концентрацию олеиновой кислоты по G. Duncombe (1962).

Степень утилизации глюкозы поперечно-полосатой мышечной тканью крыс оценивали по Г.П. Дудченко (2001). Влияние изучаемых веществ на массу тела фиксировали на фоне 4-х недельного принудительного плавания животных с алиментарным ожирением по И.А. Волчегорскому (2000).

Влияние изучаемых веществ на реологические свойства крови определяли по следующим показателям: вязкость крови (Н.А. Добровольский, 1989), индекс агрегации эритроцитов (L. Dintenfass, 1989), индекс эффективности доставки кислорода (В.В. Якусевич, 1998), скорость фильтрации эритроцитарной взвеси, кислотную (И.А. Терской, 1967) и осмотическую резистентность эритроцитов (T. Osaka, 2001), заряд и вязкость мембраны эритроцитов с использованием зондов ДСМ+ и ДСП-6 (В.Г. Добрецов, 1989).

Изучение влияния веществ на агрегацию тромбоцитов проводили по методу G. Born (1962), З.А. Габбасов (1989) с использованием индуктора агрегации АДФ («Reanal», Венгрия) в конечной концентрации 5 мкM. Хронометрически на гемокоагулометре «SOLAR» определяли ПРВ, ТВ, ФГ, АПТВ с использованием стандартных наборов и классических методик (З.С. Баркаган, 1999).

Антиоксидантные свойства веществ изучали с помощью моделей: аскорбат-зависимого перекисного окисления липидов (ПОЛ) (В.З. Ланкин и соавт., 1975), взаимодействия со стабильным свободным радикалом ДФПГ (G. Glavind, 1963) и хемилюминесценции (ХЛ) в системе железо (II) индуцированого окисления люминола с генерацией активных форм кислорода (АФК) (С.Г. Семешко, Р.Р. Фархутдинова, 2002).

Концентрации ХСобщ и ТГ определяли в сыворотке крови, а ХС ЛПВП в супернатанте после преципитации ЛП, содержащих ЛПОНП и ЛПНП, с использованием ферментативного колориметрического теста GPO-PAP («Biocon», Германия), и вычисляли значение концентрации ХС ЛПНП (W.T.єFriedewald,1972) и индекс атерогенности (ИА) (А.Н. Климов, 1977). Эксперименты по изучению острой и хронической токсичности Исследования проведены совместно с сотрудниками лаборатории лекарственной токсикологии НИИ фармакологии ВолГМУ под руководством д.б.н. Л.И. Бугаевой, за что выражаем искреннюю признательность., а также специфических видов токсичности Выражаем искреннюю признательность за проведение исследований сотрудникам НИИ фармакологии РАМН под руководством д.м.н., проф. А.Д. Дурнева.: эмбрио- гонадотоксичности; иммунотоксичности, аллергенности, мутагенности проводились в соответствии с методическими рекомендациями проведения доклинических (токсикологических) исследований (Р.У. Хабриев и соавт., 2005) и правилами лабораторной практики в РФ (приказ № 267 от 19.07.2003 г).

Статистическую обработку данных проводили параметрическими и непараметрическими методами анализа (С. Гланц, 1998) с использованием пакета прикладных пакета программ Statistica 6.0 (StatSoft, США).

Результаты исследования и их обсуждение

Рис.1. Влияние Гимнемы-25, Гимнемы-50, єГимнемы-75 при пероральном введении в дозе 280 мг/кг и диабетона (10 мг/кг) на уровень глюкозы в крови интактных крыс (М m).

Примечание. Вертикальные штрихи соответствуют стандартной ошибке средней величины. * - данные достоверны по отношению к контролю, парный критерий Стьюдента, (р?0,05)

Согласно результатам проведенных исследований, экстракт Гимнемы лесной (ГЛ) оказывает сахароснижающий эффект в организме интактных животных. При этом различные фракции данного экстракта проявляют неодинаковое гипогликемическое действие. При изучении уровня гипогликемической активности экстрактов ГЛ в трех концентрациях Гимнема-25, Гимнема-50, Гимнема-75, отличающихся друг от друга содержанием ГК и гимнемосапонинов было выявлено, что сахароснижающее действие Гимнемы-25 превосходит остальные фракции изучаемого экстракта (рис. 1), уступая по величине активности диабетону. Так было выявлено, что Гимнема-25 через 30 минут после введения снижает уровень глюкозы на 21,6% по сравнению с исходными показателями, а ко второму часу наблюдений уровень гликемии уменьшается на 23,9%, р?0,05. Кроме того Гимнема-25 снижает площадь под кривой «концентрация глюкоза-время» на 26,7% (р<0,05) по отношению к контрольной группе животных при проведении глюкозотолерантных тестов.

Рис. 2. Влияние Гимнемы-25 и диабетона при пероральном введении в различных дозах на уровень глюкозы в крови интактных крыс через 2 часа после введения веществ

Примечание. Вертикальные штрихи соответствуют стандартной ошибке средней величины.

При изучении зависимости «доза-эффект» (рис. 2) у Гимнемы-25 регистрируется усиление гипогликемического эффекта в диапазоне от 70 мг/кг до 280 мг/кг. В ходе исследования для Гимнемы-25 была установлена средняя эффективная доза (280ємг/кг), при применении которой наблюдается снижение глюкозы в крови на 1/3 от исходных показателей. Таким образом, величина гипогликемического эффекта в значительной мере зависит от степени очистки экстракта, снижаясь в ряду:

Гимнема-25>Гимнема-50?Гимнема-75.

При исследовании антидиабетического действия экстрактов у животным с экспериментальным стрептозотоцин-индуцированным СД наблюдалось снижение содержания глюкозы в плазме крови во всех экспериментальных группах (табл. 3). При этом эффективность Гимнемы-25 оказалась достоверно выше таковой у Гимнемы-50 и Гимнемы-75 в 1,5 раза и в 3,4 раза, соответственно. В свою очередь величина гипогликемического эффекта Гимнемы-75 составила половину от величины Гимнемы-50 (p?0,05).

Таблица 3

Влияние гимнемы-25, гимнемы-50, гимнемы-75 (280 мг/кг) и диабетона (8 мг/кг) при однократном пероральном введении на уровень глюкозы в крови крыс с экспериментальным стрептозотоцин-индуцированным сахарным диабетом.

Препарат	Изменения гликемии, Д%
Гимнема-25	-45,27±5,40*
Гимнема-50	-26,18±7,29*
Гимнема-75	-13,52±4,47
диабетон	-52,59±9,88*

Обозначения: - данные достоверны по отношению к исходным значениям данной группы, (р<0,05), t-критерий Стьюдента. * - данные достоверны по отношению к контрольной группе крыс с экспериментальным сахарным диабетом, (р<0,05) Newman-Keuls test.

Примечание: изменения приведены в процентах относительно исходных данных через 2 часа после введения веществ.

Показатели утилизации глюкозы при применении Гимнемы-50 и Гимнемы-75 уступали показателям активности Гимнемы-25 в ходе проведения перорального глюкозотолерантного теста. Так через 30 мин после внутрижелудочного введения Гимнемы-25 регистрировалось уменьшение уровня гликемии на 11,9% по сравнению с контролем-диабет, а спустя час после введения глюкозы ее уровень в крови понизился в 2,5 раза по сравнению с контрольными значениями. При исследовании образцов крови второго часа было выявлено, что уровень глюкозы в крови крыс, получавших Гимнему-25, составил 4,60,11 ммоль/л, что существенно ниже значений полученных для группы контроль-диабет. Подобные результаты были получены и в двух других экспериментальных группах (Гимнема-50 и Гимнема-75). При этом гипогликемическая активность Гимнемы-50 превалировала над таковой Гимнемы-75, и ко второму часу наблюдения содержание глюкозы понизилось на 20,7% и на 6,2% соответственно по сравнению с группой контроль-диабет (р?0,05). Кроме того, было зарегистрировано сокращение площади под кривой концентрация «глюкоза-время» на 32,4% в группе крыс получавших Гимнему-50, и на 13,3% у животных с Гимнемой-75 по сравнению с контролем. Таким образом, показатели утилизации глюкозы при применении Гимнемы-50 и Гимнемы-75 значительно уступали показателям активности Гимнемы-25.

При проведении внутривенного глюкозотолерантного теста было установлено, что Гимнема-25 по выраженности действия на элиминацию глюкозы из периферического кровотока, превосходит Гимнему-50 и Гимнему-75. Гимнема-25 увеличивала площадь под кривой «глюкоза-время» в 2 раза по сравнению с контролем, что больше аналогичного показателя, выявленного после применения Гимнемы-50 и достоверно превышает этот же показатель в группе, получавшей Гимнему-75. Таким образом, установлено, что после применения экстрактов ГЛ происходит умеренное сдерживание показателей гликемии. Однако по величине гипогликемической активности Гимнема-50 и Гимнема-75 уступают эффективности Гимнемы-25.

2

Размещено на http://www.allbest.ru/

1

Рис. 3. Влияние Гимнемы-25 (280 мг/кг) на содержание инсулина в крови крыс с сахарным диабетом (М ± m).

Примечание. Вертикальные штрихи соответствуют стандартной ошибке средней величины. * - данные достоверны по отношению к интактной группе крыс, є - данные достоверны по отношению к группе крыс с сахарным диабетом, ANOVA, Newman-Keuls test (р<0,05).

В ходе изучения механизма антидиабетического действия Гимнемы-25 были проведены эксперименты по изучению её влияния на: секрецию инсулина; на пролиферацию в-клеток островков Лангерганса; на утилизацию глюкозы мышечной тканью крыс (изолированной диафрагмой); на транспорт глюкозы и олеиновой кислоты в кишечнике крыс. При экспериментальном стрептозотоцин-индуцированном СД у крыс регистрировалось снижение содержания инсулина в плазме крови (рис. 3), так через 3 недели эксперимента его количество достоверно уменьшилось в группе крыс с диабетом на 32,2% (р?0,05). А в группе крыс, получавших Гимнему-25, уровень инсулина понизился лишь на 18,7% по сравнению интактным контролем.

Таким образом, было установлено, что Гимнема-25 при 3-х недельном введении восстанавливает секрецию инсулина до исходных значений у интактной группы животных. Поэтому вполне вероятно полагать, что увеличение уровня инсулина в крови животных под влиянием Гимнемы-25 связано с восстановлением в-клеток поджелудочной железы крыс или с меньшей степенью их деструкции, следует отметить, что аналогичные эффекты были выявлены L. Li (L. Li et al., 2004) для спиртового экстракта Гимнемы лесной. Кроме того, выявленное нарастание количества инсулина в крови подопытных животных, сочетающееся с сахаропонижающим эффектом, вероятно может явиться прямым доказательством инсулинотропного эффекта Гимнемы-25, возможно основанного на стимулировании функционально способных -клеток островков Лангерганса.

Известно, что баланс клеточной популяции поддерживается благодаря равновесию процессов регенерации и клеточной гибели (S.E Lamhamedi-Cherradi, 2003). Гимнема-25 при приёме в течение 1 недели способствует развитию умеренно выраженной гипертрофии ядер в-клеток островкового аппарата поджелудочной железы у интактных животных (табл. 4).

Таблица 4

Влияние гимнемы-25 на изменение структуры островков лангерганса поджелудочной железы крыс с стрептозотоцин-индуцированным сахарным диабетом (м ± m).

Группы	Объемная доля островков, %	Площадь ядер в-клеток, мкм2	в-клетки, %	б-клетки, %
Дуоденальный отдел
Контроль	6,8±2,5	22,3±2,5	51,3±9,2	47,4±5,2
сахарный диабет	4,7±3,1	23,8±3,1	29,8±5,5*	50,9±4,8
сахарный диабет + Гимнема-25	7,2±5,4	21,5±4,1	47,1±4,2*	44,1±4,7
Желудочный отдел
Контроль	12,6±6,0	23,3±3,1	64,6±9,1	31,2±3,5
сахарный диабет	10,2±6,7	25,7±2,5	43,2±5,4*	42,7±4,8
сахарный диабет + Гимнема-25	13,5±9,8	24,6±4,1	62,7±5,2*	35,8±3,7
Селезеночный отдел
Контроль	13,8±17,3	25,1±2,5	78,2±6,1	20,2±3,4
сахарный диабет	11,8±10,5	29,5±2,2	47,7±8,2*	30,3±4,7
сахарный диабет + Гимнема-25	14,77±12,2	25,8±4,1	75,4±7,3*	23,5±3,7

Примечание. * - данные достоверны по отношению к интактному контролю, парный критерий Стьюдента (р?0,05)

Так увеличение ядер в-эндокриноцитов по сравнению с группой контроля отмечалось в 1,4 раза в дуоденальном отделе, в 1,3 раза в желудочном отделе, и в селезеночном отделе. У животных с СД получавших Гимнему-25 объемная доля островков была в 1,5 раза выше аналогичного показателя в группе крыс с СД. При этом площадь ядер в-клеток не отличалась от того показателя в группе интактных крыс и в группе животных с диабетом, однако количество в-клеток на 36,7% выше аналогичного показателя в группе животных с сахарным диабетом (р<0,05). Вероятно это можно объяснить возможной гиперфункцией в-клеток за счет повышения уровня эндогенного инсулина и за счет регенерации в-клеток поджелудочной железы. Подтверждением этому является увеличение уровня экспрессии маркера пролиферации PCNA при иммунозависимом СД у крыс, что, скорее всего, является свидетельством наличия репаративных процессов в ткани поджелудочной железы, который косвенно подтверждается умеренной экспрессией Ki-67. Кроме того, в группе животных с иммунозависимым диабетом получавших Гимнему-25, отсутствовали морфологические признаки апоптоза, о чем свидетельствует выявленный низкий уровень экспрессии р53 (ключевой фермент каскадного цикла участвующий в протеолизе белков цитоплазмы и ядра клетки) и каспазы 3 (маркер активации «апоптоза изнутри»). Возможно, что Гимнема-25 способствует регенерации эндокриноцитов поджелудочной железы, за счет стимуляции клеток гастроэнтеропанкреатической системы, вырабатывающих GLP-1 и GIP. Полученные результаты вполне согласуются с литературными данными о способности инкретинов не только увеличивать уровень секреции инсулина, но и снижать скорость апоптоза в-эндокриноцитов, а также стимулировать их пролиферацию (Fushiki et al., 1992).

Действие Гимнемы-25 на утилизацию глюкозы изолированной диафрагмой у животных с экспериментальным стрептозотоцин-индуцированным СД изучалось при курсовом пероральном применении изучаемого экстракта в дозе 280 мг/кг в течение месяца. В группе крыс с стрептозотоцин-индуцированным СД получавших Гимнему-25, способность мышечной ткани к поглощению глюкозы в 1,9 раза превышает аналогичный показатель у животных группы контроля (рис. 4) и соответствует снижению ее количества в пробе на 16,2% (р0,05). В присутствии инсулина остаточная глюкоза определяется в количестве 6,9 ммоль/л, что соответст вует достоверному снижению ее уровня на 32,1% по отношению к контрольной пробе (буфер + инсулин).



Рис. 4. Влияние Гимнемы-25 (280 мг/кг) при пероральном введении на поглощение глюкозы изолированной диафрагмой крыс со стрептозотоциновым диабетом (М ± m)

Обозначения. Б+И=буфер+инсулин; Б+Д=буфер+диафрагма; Б+Д+И=буфер+диафрагма+инсулин

Примечание. Вертикальные штрихи соответствуют стандартной ошибке средней величины. *- данные достоверны по отношению к контрольной группе крыс, Newman-Keuls test (р<0,05).

Таким образом, экспериментально установлено, что Гимнема-25 в дозе 280 мг/кг при применении в течение 30 дней увеличивает коэффициент поглощение глюкозы изолированной диафрагмой крыс. При этом эффективность Гимнемы-25 в среде без инсулина может свидетельствовать о прямом воздействии экстракта на транспортную систему утилизации глюкозы.

При исследовании влияния Гимнемы-25 на транспорт глюкозы и олеиновой кислоты при перфузии кишечника крыс было выявлено, что Гимнема-25 в дозе 280 мг/кг достоверно ингибирует всасывание глюкозы в 1,7 раза через 15 мин, и в 4,7 раза (p0,05) через 30 минут после начала перфузии (рис. 5А).



Рис. 5. Влияние гимнемы-25 (280 мг/кг) при 7 дневном пероральном введении на всасывание глюкозы (а) и олеиновой кислоты (б) при перфузии кишечника интактных крыс (м ± m).

Обозначения. *- данные достоверны по отношению к контролю, парный критерий Стьюдента (р?0,05)

Примечание. Вертикальные штрихи соответствуют стандартной ошибке средней величины.

Вероятно, что в данном случае замедление скорости всасывания глюкозы обусловлено специфическим воздействием ГЛ на скорость диффузии глюкозы через слизистую оболочку кишечника и может быть инициировано супрессией Na+ зависимого транспорта глюкозы. Так S. Yoshioka (S.єYoshioka et al., 1986) указывает на то, что это способствует поддержанию более низкой внутриклеточной концентрации Na+, которая является движущей силой для углеводов, поступающих в клетки из полости кишечника.

Процесс абсорбции олеиновой кислоты (рис.є5Б) был несколько медленнее чем аналогичный процесс в случае глюкозы. Уровень всасывания этой ненасыщенной жирной кислоты в группе Гимнема-25 через 15 минут перфузии достоверно превышал контрольные значения в 2 раза. Однако в течение следующего временного интервала наблюдения абсорбция этой кислоты в кишечнике несколько замедлялась, при том, что количество глюкозы в этот же интервал сократилось. Это по мнению H. Luo (H. Luo et al., 2001) может зависеть от того, что растворенная в таурохолате олеиновая кислота легко проникает через мембрану энтероцита, а также от высокой скорости абсорбции жирной кислоты на транспортёре (40-kDa белок), который, имея высокую степень сродства со многими видами длинноцепочечных жирных кислот, индифферентен к глюкозе.

В ходе работы показано, что, Гимнема-25 оказывает дозозависимое влияние (при непосредственном добавлении в перфузат) на всасывание глюкозы и олеиновой кислоты, при этом по ингибирующей активности Гимнема-25 в дозе 0,5 мг/л превалирует над таковой в дозе 0,25 мг/л.

В следующей серии экспериментов была определена продолжительность периода восстановления всасывания глюкозы и олеиновой кислоты (рис. 6).

Так, в ходе недельного применения ГЛ через 2 часа после последнего введения фиксировалось снижение уровня концентрации глюкозы (26,3±2,2 М/л на 30 см кишечника), а после шестичасовой отмены - её количество возросло практически в 3 раза, восстанавливаясь до значений контроля (рис. 6А). Концентрация олеиновой кислоты через 2 часа после введения экстракта ГЛ составила 9,40,4 М/л на 30 см кишечника, а после шестичасовой отмены - ее концентрация была на уровне 11,40,1 М/л на 30 см кишечника (рис. 6Б). Таким образом, 6-ти часовой период является необходимым для достижения полного восстановления всасывания глюкозы и олеиновой кислоты. На основании проведенных исследований можно сделать вывод о том, что Гимнема-25 в дозе 280 мг/кг при курсовом 7-ми дневном введении ингибирует всасывание в кишечнике крыс глюкозы и олеиновой кислоты, при этом способность к их утилизации полностью восстанавливается через 6 ч после отмены препарата.

Рис. 6. Продолжительность периода восстановления всасывания глюкозы (А) и олеиновой кислоты (Б) после отмены семидневного курса введения Гимнемыє25

При изучении фармакологических свойств Гимнемы-25, необходимых для профилактики отдаленных последствий сахарного диабета были изучены антиоксидантные свойства Гимнемы-25, а также её влияние на реологические свойства и тромбогенный потенциал крови. Так было выявлено, что єГимнема-25 снижает образование ТБК-реактивных продуктов на 82,53% (p0,001) у животных с СД. При сравнении активности веществ по величине константы ингибирования ИК50 на модели аскорбат-индуцируемого ПОЛ выявлено, что Гимнема-25 оказывает 50% эффект в значительно меньших дозах по сравнению с танаканом. Также было выявлено, что Гимнема-25 при курсовом введении достоверно снижает количество КД в красных клетках крови, при этом несколько уступая по эффективности препарату сравнения танакану. Установлено, что после применения Гимнемы-25 особенно низкий уровень МДА (на 12,2%, р?0,05, по сравнению с контролем-диабет) отмечается в эритроцитах. Полученные результаты свидетельствуют о том, что Гимнема-25 проявляет антиоксидантные свойства, влияя на образование как начальных, так и конечных продуктов перекисного окисления и несколько увеличивая активность антиоксидантных ферментов в плазме крови крыс с экспериментальным СД, уступая по эффективности танакану.

Гимнема-25 оказывает влияние на реологические свойства крови. Так было установлено, что Гимнема-25 снижает вязкость крови во всём диапазоне скоростей сдвига, однако наибольшая эффективность экстракта была выявлена на низких скоростях сдвига (в 1,5 раза меньше по сравнению с контролем). Кроме того Гимнема-25 оказывала влияние на деформабельность эритроцитарной мембраны (достоверно увеличивала скорость фильтрации взвеси эритроцитарной суспензии на 37,9% и повышала индекс доставки кислорода в ткани на 21,3%), а также повышала интенсивность флуоресценции зонда ДСМ+ в эритроцитарной взвеси в 1,4 раза по сравнению с контролем. Таким образом по полученным результатам можно заключить, что Гимнема-25 улучшает реологические свойства крови, которые, как известно, оказывают влияние на процессы микроциркуляции за счёт снижения процесса внутрисосудистой агрегации красных клеток крови, их травматизации и разрушения в процессе гемоциркуляции (В.В Зинчук, 2001). О снижении выраженности основных проявлений гиперагрегации тромбоцитов, после курсового введения Гимнемы-25, свидетельствует уменьшение величины ИАТ в 2 раза (по сравнению с контролем) превосходящей по эффективности танакан, при этом не отмечено существенного влияния Гимнемы-25 на показатели коагуляционного гемостаза. Снижение уровня агрегации тромбоцитов, может свидетельствовать об уменьшении их функциональной активности, что, в конечном счете, препятствует развитию сосудистых поражений при СД (М.И. Балаболкин и др., 2005).

По результатам проведенных исследований можно констатировать, что Гимнема-25 эффективно снижает уровень глюкозы в крови, и сопоставима по величине эффекта с «Pro-b» и другими экстрактами, полученными с помощью различных запатентованных методов водно-спиртовой экстракции, описанными в литературе (K. Baskaran et al., 1990; E.R. Shanmugasundaram et al., 1997; J.F.єGent et al., 1999). Кроме того, Гимнема-25 восстанавливает структурную целостность инсулин-продуцирующих клеток поджелудочной железы, повышает утилизацию глюкозы мышечной тканью крыс, задерживает всасывание углеводов и олеиновой кислоты в кишечнике, при экспериментальных формах СД снижает уровень глюкозы в крови, улучшает реологические свойства крови и уменьшает выраженность процессов пероксидации.

Учитывая то, что Гимнема-25, оказывая умеренную антиоксидантную активность, предотвращает увеличение ПОЛ преимущественно в эритроцитах, проявляет умеренное влияние на реологические свойства крови на следующем этапе работы было сочтено возможным оптимизировать Гимнему-25 в ранее не патентованных комбинациях отечественными источниками биофлавоноидов - экстрактами гребней винограда и девясила высокого с целью создания растительной Композиции (патент РФ№ 2289419 от 20.12.2004 г), позиционируемой как потенциальный антидиабетический лекарственный препарат с антиоксидантными и гемореологическими свойствами. В ходе работы было изучено более 20 различных комбинаций перечисленных компонентов в различных сочетаниях и дозах (отчёт СКС «Альянс» от 2.08.2005), наиболее эффективная из них Композиция была выбрана для дальнейшего исследования (табл. 1).

В настоящее время недостаточно средств, с помощью которых возможно произвести направленную блокаду механизмов деструкции в-клеток, приводящих к развитию СД. Выбор экстракта Девясила высокого был обусловлен тем, что в основе его механизма действия лежит усиление продукции регуляторных цитокинов при аутоиммунном диабете, снижается уровень -интерферона, и соответственно, повреждающее его действие на клетки поджелудочной железы, уменьшается деструкция клеток, нормализуется уровень инсулина в крови (Kobayashi T., 2002). Сухой экстракт девясила способствует, в комплексном лечении, устранению нарушения толерантности к глюкозе и оптимизации ее метаболизма, обладает превентивным действием на деструктивный процесс в поджелудочной железе (Vanurikhina, E., et al 1997; De Roos, et al. 2000). Сухой экстракт гребней Винограда, включенный в состав Композиции, призван корректировать течение сахарного диабета, предупреждать необратимые метаболические изменения за счет действия растительных биофлавоноидов. Полифенолы винограда выступают в роли активных антиоксидантов, которые способны «гасить» цепные свободно-радикальные реакции, снижать активность оксидативных ферментов и уменьшать концентрацию пероксидных липидов в плазме крови (Y. Nishikawa et al. 1976), что по сути, является одним из главных механизмов лечебно-профилактического действия полифенолов винограда.



Рис. 7. Влияние композиции и диабетона при однократном пероральном введении в различных дозах на уровень глюкозы в крови интактных крыс

Примечание. * - данные достоверны по отношению к исходным значениям до введения препарата, ANOVA (Newman-Keuls test) (р<0,05).

В ходе работы гипогликемический эффект Композиции был обнаружен на интактных животных разных видов (крысы, собаки). По результатам проведенных экспериментальных исследований Композицию можно отнести к средствам, оказывающим гипогликемическое действие при этом по величине эффекта она практически не уступала препарату диабетон (рис. 7).

В свою очередь антидиабетический эффект Композиции был изучен на животных с экспериментальным стрептозотоцин-, аллоксан-индуцированным СД и иммунозависимой формой сахарного диабета. При исследовании продолжительности действия Композиции у крыс со стрептозотоцин-индуцированным СД было выявлено, что эффект наступает через 30 минут после введения препарата и его действие прослеживается на протяжение 20 часов, что соответствует длительности гипогликемического действия, оказываемого производными сульфанилмочевины (рис. 8).



Рис. 8. Зависимость концентрации глюкозы в крови от времени после перорального введения Композиции (280 мг/кг) крысам с экспериментальным сахарным диабетом (М m).

Примечание. Вертикальные штрихи соответствуют стандартной ошибке средней величины

Кроме того при проведении глюкозотолерантных тестов было показано, что Композиция увеличивает скорость утилизации глюкозы из периферического кровотока, что может быть, в том числе, связано и с повышением секреции инсулина. Этот факт нашел свое подтверждение в экспериментах по изучению секретогенной активности Композиции при иммунозависимой форме СД у крыс по характеру изменения (увеличения) содержания инсулина и (снижения) глюкозы в плазме крови (рис. 9). А в серии опытов при совместном введении исследуемых веществ с физиологическим стимулятором секреции гормона - глюкозой, было установлено усиление панкреотропного действия Композиции.



Рис. 9

Принимая во внимание патофизиологические особенности экспериментальных моделей ожирения, инсулинорезистентности и латентного стрептозотоцин-индуцированного диабета, на которых была проведена другая серия исследований, можно заключить, что Композиция проявляет антидиабетическое действие при преддиабетических состояниях (рис. 10).

В качестве основного критерия данной тенденции может служить снижение площади под кривой концентрация глюкоза-время в ходе проведения глюкозотолерантных тестов на 18,3% при латентной форме СД, на 26,7% при ожирении, при инсулинорезистентности на 34,9% по сравнению с контрольной группой крыс. Улучшение утилизации глюкозы в данном случае видимо, свидетельствует о восстановлении нормальной секреции инсулина, т.к. нарушенная толерантность к углеводам при использовании данных модели патологии углеводного обмена, опосредована именно дисфункцией -эндокриноцитов (Ю.Г.єЯрошевский 1979). Антигипергликемический эффект у крыс с экспериментальным синдромом инсулинорезистентности подтверждает присутствие у Композиции помимо панкреотропного действия, экстрапанкреатических эффектов.

Рис. 10. Влияние композиции (280 мг/кг) и диабетона (8 мг/кг) на уровень глюкозы в крови крыс с экспериментальным ожирением после пероральной нагрузки глюкозой (3 г/кг) (м m)

Рис. 11. Влияние композиции на концентрацию глюкозы в плазме крови крыс при аллоксан-индуцированном сахарном диабете (м m)



Рис. 12. Влияние композиции и гимнемы-25 на концентрацию глюкозы в плазме крови крыс при иммунозависимом сахарном диабете (м m)

По результатам проведенных исследований Композиция проявляла выраженное антидиабетическое действие на моделях аллоксанового (рис. 11), стрептозотоцин-индуцированного (рис. 8) и иммунозависимой форме СД (рис. 12) - уменьшая выраженность гипергликемии, полидипсии, потери массы тела, и снижая уровень HbA1 (на 3,9%) и стимулируя секрецию инсулина. Учитывая, что в эксперименте снижение содержание HbA1c регистрируется одновременно с уменьшением количества сахара в крови, и так как оба эти процесса находится в прямой зависимости друг от друга, то можно предположить, что применение Композиции способствует нормализации углеводного обмена. Уменьшение скорости гликозилирования белков при применении препарата, в конечном счете, может привести к замедлению образования продуктов конечного гликолиза. Принимая во внимание, что большое количество последних совместно с избытком свободных радикалов вызывают дисфункцию эндотелия, инициируя тем самым развитие ангиопатий, эффекты, выявленные при применении Композиции, могут способствовать снижению вероятности возникновения изменений в микроциркуляторном русле и отдаленных последствий СД. При СД II типа нарушения углеводного обмена сочетаются с выраженными изменениями липидного обмена (М.И. Балаболкин и др., 2005). Регистрируемая, при курсовом применении Композиции, нормализация липидного спектра крови животных - снижение уровня ХСобщ, ЛПНП и ЛПОНП, а также следует выделить достоверное снижение ИАТ на 47,4%, уменьшает риск изменений мор

Рис. 13. Влияние Композиции (280 мг/кг) и диабетона (8 мг/кг) на гипогликемическое действие инсулина (0,4 ЕД/кг) в опытах на панкреатэктомированных собаках (М m)

Обозначения. Вертикальные штрихи соответствуют стандартной ошибке средней величины. * - данные достоверны по отношению к группе собак, получавших только инсулин, ANOVA, Newman-Keuls test (р<0,05).

Примечание. Контрольной группе животных производилось введение только инсулина, опытной - введение инсулина и одного из препаратов.

фологической структуры сосудов и возникновения микро и макроангиопатий, способствует ингибированию липотоксичности, а значит, по всей видимости, препятствует явлениям цитотоксичности - неизбежным при нарушениях липидного обмена.



Рис. 14. Влияние Композиции (280 мг/кг) на поглощение глюкозы изолированной диафрагмой крыс (M m)

Обозначения. По оси абсцисс - буфер+инсулин, контроль; буфер+диафрагма, коэффициент поглощения глюкозы диафрагмой без присутствия инсулина; буфер+диафрагма+инсулин, коэффициент поглощения глюкозы диафрагмой в присутствии инсулина. По оси ординат - коэффициент поглощения глюкозы диафрагмой, мг глюкозы/ г диафрагмы.

Примечания. Вертикальные штрихи соответствуют стандартной ошибке средней величины. * - данные достоверны по отношению к контрольной группе крыс, Newman-Keuls test (р<0,05).

При исследовании механизмов действия многокомпонентного препарата (рис. 13), в частности его экстрапанкреатических эффектов, было установлено, что Композиция пролонгировала сахароснижающее действие экзогенного инсулина, введенного панкреатэктомированным собакам, усиливая его эффект и удлиняя время, в течение которого уровень глюкозы снижался.

При подробном рассмот-рении процессов, лежащих в основе экстрапанкреатических эффектов ГЛ, на переднем плане также фигурируют механизмы, затрагивающие всасывание глюкозы в тонком кишечнике и повышение уровня её утилизации, и абсорбцию олигосахаридов и жирных кислот в кишечнике. Одним из таких механизмов действия Композиции является улучшение утилизации глюкозы мышечной тканью - изолированной диафрагмой крыс (рис. 14). В группе крыс получавших Композицию, способность мышечной ткани к поглощению глюкозы в 1,9 раза превышает аналогичный показатель у животных группы контроля и соответствует снижению ее количества в пробе на 16,2% (р0,05). В присутствии инсулина остаточная глюкоза определяется в количестве 6,9 ммоль/л, что соответствует достоверному снижению ее уровня на 32,1% по отношению к контрольной пробе с буфером и инсулином, что, по-видимому, связано с усилением его действия.