Биосинтез, биотрансформация и фармацевтический анализ незаменимых аминокислот (на примере лейцина, лизина, метионина)

Характеристика и классификация аминокислот. Изучение биосинтеза органических кислот. Биохимическое значение и применение аминокислот. Обзор фармацевтического рынка лекарственных препаратов. Анализ незаменимых аминокислот: лейцина, лизина, метионина.

Рубрика Медицина
Вид курсовая работа
Язык русский
Дата добавления 09.10.2016
Размер файла 756,1 K

Отправить свою хорошую работу в базу знаний просто. Используйте форму, расположенную ниже

Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.

Размещено на http://www.allbest.ru/

Курсовая работа

Тема: Биосинтез, биотрансформация и фармацевтический анализ незаменимых аминокислот (на примере лейцина, лизина, метионина)

Николаева Саша

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА I. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА АМИНОКИСЛОТ

1.1 Характеристика Аминокислот. Общая классификация

1.2 Биосинтез аминокислот. общие принципы

1.3 Общее биохимическое значение и применение аминокислот

1.4 Фармакологическое действие аминокислот. обзор фармацевтического рынка лекарственных препаратов

ГЛАВА II. АНАЛИЗ НЕЗАМЕНИМЫХ АМИНОКИСЛОТ НА ПРИМЕРЕ ЛЕЙЦИНА (В Т.Ч. ИЗОЛЕЙЦИНА), ЛИЗИНА, МЕТИОНИНА

2.1 Физико-химические свойства незаменимых аминокислот: лейцина (изолейцина), лизина, метионина

ВВЕДЕНИЕ

Если растительное царство строится в основном из углеводов, и только в незначительной степени используются белки и жиры, то в мире животных все обстоит наоборот. За малым исключением почти все структурные тела животных включают белки и липиды (жиры). Поэтому растения синтезируют углеводы для восстановления своих структур и покрытия энергетических затрат на протекание биологических процессов, а животные синтезируют для себя белки. «Кирпичиками», из которых строятся белки, являются аминокислоты. Аминокислоты бывают заменимые, которые синтезируются в организме человека и животных, и незаменимые, которые синтезируются только в организме растений. Восемь так называемых незаменимых аминокислот - валин, лейцин, изолейцин, фенилаланин, треонин, метионин, лизин и триптофан - необходимы для животных организмов готовые, т.к. клетки животных и человека либо совсем не умеют создавать углеродный скелет незаменимых аминокислот, либо делают это слишком медленно.При нехватке хотя бы одной из этих аминокислот организму начинает недоставать жизненно необходимых белков, поэтому рост организма замедляется, начинаются болезни.

Организм усваивает аминокислоты как в индивидуальном виде, так и в составе белковых молекул. Когда белки попадают в желудочно-кишечный тракт, то под действием гидролитических ферментов- протеиназ они распадаются на составляющие их аминокислоты, которые затем всасываются стенками кишечника, попадают в кровь, затем - в печень и используются организмом для построения новых собственных белков. Это дает возможность корректировать аминокислотный состав нашего меню добавлением в пищу тех аминокислот, которых в ней недостаточно. Самая многотоннажная область применения аминокислот - пищевая промышленность; например, натриевую соль глутаминовой кислоты или глутамат натрия в мире ежегодно производят в количестве 200 тысяч тонн.

Мировое производство таких аминокислот как лизин, метионин, аспарагиновая аминокислота и других также составляет десятки тысяч тонн.

ГЛАВА I. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА АМИНОКИСЛОТ

фармацевтический лейцин аминокислота метионин

1.1 Характеристика Аминокислот. Общая классификация

Аминокислоты -- органические кислоты, молекулы которых содержат одну или несколько аминогрупп (NH2-группы). Представляют основные структурные элементы белков. Белки пищи в организме человека расщепляются до аминокислот. Определенная часть аминокислот, в свою очередь, расщепляется до органических кетокислот, из которых в организме вновь синтезируются новые аминокислоты, а затем белки. В природе обнаружено свыше 20-ти аминокислот.

Аминокислоты всасываются из желудочно-кишечного тракта и с кровью поступают во все органы и ткани, где используются для синтеза белков и подвергаются различным превращениям. В крови поддерживается постоянная концентрация аминокислот. Из организма выделяется около 1 г азота аминокислот в сутки. В мышцах, ткани головного мозга и печени содержание свободных аминокислот во много раз выше, чем в крови, и менее постоянно. Концентрация аминокислот в крови позволяет судить о функциональном состоянии печени и почек. Содержание аминокислот в крови может заметно нарастать при нарушениях функции почек, лихорадочных состояниях, заболеваниях, связанных с повышенным содержанием белка.

Общая классификация.

Аминокислоты играют большую роль в здравоохранении, животноводстве и легкой промышленности. По значению для макроорганизма аминокислоты подразделяют на заменимые и незаменимые. К незаменимым относятся те аминокислоты, которые не синтезируются в животном или человеческом организме, они должны быть привнесены с пищей или кормом для животным (табл. 1 ).

Таблица 1 Заменимые и незаменимые аминокислоты

Незаменимые

Заменимые

Аргинин

Аланин

В алии

Аспарагин

Гистидин

Апарагиновая кислота

Изолейцин

Глицин

Лейцин

Глутамин

Лизин

Глутаминовая кислота

Метионин

Пролин

Треонин

Серии

Триптофан

Тирозин

Фенилаланин

Цистеин

Заменимые синтезируются in vivo из аммиака и различных источников углерода. Микроорганизмы сами синтезируют все необходимые им аминокислоты из аммиака и нитратов, а углеродные « скелеты » - из соответствующих интермедиаторов.

Исходя из оценки аминокислот, ученые давно стремятся использовать способности микроорганизмов продуцировать заменимые и незаменимые аминокислоты в ощутимых количествах.

Потребность людей в аминокислотах достаточно велика и этим определяется уровень их производства в мире (порядка 500 тыс. тонн в год).

Большинство микроорганизмов и зеленые растения способны синтезировать de novo все двадцать аминокислот. Углеродные скелеты аминокислот образуются из промежуточных продуктов обмена.

Исходным материалом для синтеза аминокислот служат простые промежуточные продукты катаболизма (пируват, 2 - оксиглутарат, оксалоацетат и фумарат, эригрозо - 4 - фосфат, рибозо - 5 - фосфат и АТР ). При синтезе большинства аминокислот аминогруппа вводится только на последнем этапе путем трансаминирования. Некоторые аминокислоты образуются в результате ряда превращений других аминокислот, и в этих случаях трансаминирование не требуется.

Белки синтезируются на рибосомах из аминокислот по информации м - РНК, которая переписана (путем транскрипции ) с генов ДНК.

1.2 Биосинтез аминокислот. Общие принципы

Большинство микроорганизмов и зеленые растения способны синтезировать de novo все двадцать аминокислот, из которых строятся белки. Углеродные скелеты аминокислот образуются из промежуточных продуктов обмена. Аминогруппы вводятся путем прямого аминирования или трансаминирования. Перевод неорганического азота в органические соединения происходит всегда через аммиак. Нитраты, нитриты и молекулярный азот предварительно восстанавливаются до аммиака (ассимиляционная нитратредукция) и только после этого включаются в состав органических соединений (рис. 7.16, а, б, в). Лишь немногие из аминокислот образуются в результате прямого аминирования свободными ионами NH4. В первичной ассимиляции - аммиака участвуют L-глутаматдегидрогеназа (рис. 7.16, е) и L-аланиндегидрогеназа (ж), которые осуществляют восстановительное аминирование 2-оксокислот; АТФ в этом процессе не участвует. Образование глутамина из глутамата катализируется глутаминсинтетазой (г). Этот фермент имеет во много раз большее сродство к ионам аммония (меньшую константу -Км), чем названные дегидрогеназы, и поэтому активен даже при крайне низких концентрациях NH4 ; для образования глутамина необходим АТФ. С помощью глутаматсинтазы (д) амидная группа глутамина может быть перенесена на 2-оксоглутарат. Эта система включения аммонийного азота в органические соединения у многих бактерий и растений, видимо, создается и используется в тех случаях, когда концентрация ионов аммония в среде очень мала (меньше 1 мМ/л), а также при фиксации N2.

Большинство остальных аминокислот получает свою аминогруппу от одной из первичных аминокислот в результате трансаминирования. Из свободных аминокислот в цитоплазме количественно преобладает глутаминовая кислота (больше половины всего «пула» аминокислот).

У ряда микроорганизмов хорошо изучены пути синтеза всех двадцати аминокислот. Исходным материалом для синтеза служат простые промежуточные продукты обмена (пируват, 2-оксоглутарат, оксалоацетат или фумарат, эритрозо-4-фосфат, рибозо-5-фосфат и АТР). При синтезе большинства аминокислот аминогруппа вводится только на последнем этапе путем трансаминирования. Некоторые аминокислоты образуются в результате ряда превращений других аминокислот, и в этих случаях трансаминирования не требуется. Аминокислоты можно подразделить на группы, исходя из путей их синтеза (рис. 7.17). Синтез различных аминокислот включает разное число этапов, катализируемых ферментами. Примечателен тот факт, что аминокислоты, которые человек должен получать в готовом виде, синтезируются особенно длинным путем.

Относительно быстрое выяснение путей биосинтеза аминокислот и других соединений стало возможным благодаря использованию ауксотрофных мутантов грибов и особенно бактерий. Ауксотрофность многих мутантов обусловлена утратой способности к образованию какого-то фермента, участвующего в биосинтезе. Для роста мутанта нужен в этом случае конечный продукт того пути биосинтеза, который блокирован из-за выпадения функции фермента. Эти мутанты обладают еще одним ценным свойством: они растут не только в присутствии конечного продукта блокированного пути, но и в присутствии промежуточных продуктов, образующихся на отрезке между блокированным этапом и конечным продуктом. В то же время субстрат для блокированной реакции часто накапливается: если, например, отсутствует фермент b, то в среду выделяется промежуточный продукт. Благодаря этому некоторые мутанты, у которых блокированы разные этапы одного и того же пути синтеза, могут снабжать друг друга недостающими веществами. Мутант с блоком на более позднем этапе (отсутствие фермента d) обеспечивает недостающим промежуточным продуктом клетки другого мутанта с блоком на более раннем этапе (отсутствие фермента b). В результате таких опытов удается расположить определенных мутантов в ряд, в котором каждый предшествующий мутант будет поддерживать рост всех следующих за ним. Путем анализа накапливающихся промежуточных продуктов, выделения и очистки ферментов, а также с помощью других методов удалось уже выяснить многие пути биосинтеза.

1.3 Общее биохимическое значение и применение аминокислот

Исключительная роль аминокислот в жизнедеятельности живого организма связана, в первую очередь, с тем, что они входят в состав белков. При попадании в желудочно-кишечный тракт белки пищи под действием ферментов распадаются на составляющие их аминокислоты, которые затем используются для построения своих собственных белков. Отсюда можно понять, что главным качеством пищевого белка является его способность обеспечить в нужное время и в нужном месте организма необходимое количество аминокислот, т.е. ценность белковых пищевых веществ зависит от аминокислотного состава.

Следует отметить, что организм человека обладает способностью синтезировать только некоторые из нужных ему аминокислот. Имеется ряд незаменимых аминокислот, которые организм построить не может и должен получать с пищей. К ним относятся: валин, лейцин, изолейцин, лизин, метионин, треонин, триптофан, фенилаланин, аргинин.

Входит в состав белков молока, сыворотки, крови. Валин необходим для деятельности нервной системы и реакции образования и выделения аммиака (как вредного) в тканях мозга. Недостаток этой аминокислоты приводит к перевозбуждению, бессоннице, общему угнетению. Суточная потребность равна 4 г.

Эти аминокислоты обнаружены в простых белках, придающих эластичность и прочность коже, в соединительных тканях, в белках мяса, творога. При их недостатке организм подвергается серьезному заболеванию, умственному расстройству (потребность 3-4 г).

Играет важную роль в связывании фосфора при минерализации костей, в соединении тканей, входит (1/5 часть гемина) в гемоглобин. Лизина мало в пшенице, рисе, много в бобовых, нет в белках кукурузы. Отсутствие его приводит к отрицательному балансу азота, к анемии, нарушению потенции у мужчин и лактации у женщин (потребность - 3-5 г).

Содержит атом серы, является донором метильных групп для построения липотропного соединения холина, тимина, адреналина, синтеза никотиновой кислоты. При его недостатке нарушается общий обмен, что ведет к дезорганизации многих проблем. Источники белка есть в мясе, рыбе, молоке, твороге, хлебе (потребность 2-4 г).

Входит в состав белков крови. Процесс распада аминокислоты в организме необратим, и запас ее должен всегда пополняться. Треонин необходим всегда для роста организма, особенно детского (потребность 2-3 г).

Входит в состав гемоглобина, участвуя в процессе дыхания. Конечным продуктом его превращения являются никотиновая кислота, а также серотонин, способный изменять артериальное давление, повышать проницаемость капилляров. Триптофан есть в белках мяса, рыб, молока, пшеницы, риса, бобовых. Недостаток триптофана ведет к серьезному нарушению обмена веществ (потребность - 1 г).

Принимает участие в общем обмене веществ, в синтезе гормона тирозина. При недостатке этой аминокислоты (моча черного цвета) отмечается наследственное заболевание. Недостаток фенилаланина приводит к нарушению психики, слабому физическому развитию детей. Его источники - белки мяса, рыбы, яйца, молока (потребность - 2-4 г).

Участвует в цикле мочеобразования, оказывает детоксилирующее действие при введении избыточного количества других аминокислот, участвует в регуляции роста, обеспечивает спермогенез половых клеток. Источники аргинина - белки мяса, рыб, молока, муки (потребность - 6 г).

При дефиците незаменимых аминокислот замедляется рост организма и начинаются болезни. Самая многотоннажная область применения аминокислот - пищевая промышленность. Так, мононатриевую соль глутаминовой кислоты или глутамат натрия производят в количестве 200 тысяч тонн. Это и незаменимая приправа, придающая продукту вкус и запах куриного бульона, и очень хороший консервант. Аспарагиновую кислоту также производят тысячами тонн. В сочетании с глицином она используется для придания кондитерским изделиям и напиткам различных оттенков кислого или сладкого вкуса. В больших количествах производят лизин, который добавляют к пшеничной муке, что способствует увеличению пищевой ценности растительного белка. Освоено производство метионина высокой чистоты, применяемого в медицине, а также кормового метионина, который выпускается в виде неразделенной смеси энантиомеров, так как высшие организмы в равной степени усваивают его и в D- и в L-форме. В последнее время проблеме производства аминокислот для животноводства уделяется особое внимание.

Таблица 2 Потребление аминокислот в мире возрастает ежегодно на 10 %. Их производство характеризуется следующими цифрами

Аминокислота

м/тод

Цена, долл/год

Метод.

L - глутаминовая кислота

180000

0,5- 1

Микробиологический, химический.

DL - метионин

32000

3

Микробиологический.

L - лизин

8000

3

Химический.

Глицин

2000

Химический.

L - триптофан

20

Химический.

L - треогшн

20

10

Химический, микробиологический.

1.4 Фармакологическое действие аминокислот. обзор фармацевтического рынка лекарственных препаратов

Таблица 3

Название ЛП

Фирма-производитель

Страна-производитель

Глутаминовая кислота

Киевский витаминный завод, ПАО.

Г.Киев, Украина

Тауфон(Таурин)

Фармак,ОАО

г.Киев, Украина

Вита-йодурол

НОВАРТИС ФАРМА АГ

Швейцария

Кетостерил

Фрезениус Каби Дойчланд ГмбХ

Германия

Стимол

Биокодекс

Франция

Церебролизин

ЭВЕР Нейро Фарма ГмбХ,

Австрия

L-цистеин гидрохлорид

«Уральский завод промышленной химии»

Россия

Вицеин

Вектор ГНЦ вирусологии и биотехнологии

Россия

L-метионин

Swanson

США

Кальция Глютаминат

Дарница, Киевская фарм.фабрика

Украина

ГЛАВА II. АНАЛИЗ НЕЗАМЕНИМЫХ АМИНОКИСЛОТ НА ПРИМЕРЕ ЛЕЙЦИНА (В Т.Ч. ИЗОЛЕЙЦИНА), ЛИЗИНА, МЕТИОНИНА

2.1 Физико-химические свойства незаменимых аминокислот: лейцина (изолейцина), лизина, метионина

Кислотно-основные свойства аминокислот. По химическим свойствам аминокислоты - амфотерные электролиты, т. е. сочетают свойства и кислот, и оснований. Кислотные группы аминокислот: карбоксильная (--СООН -> --СОО- + Н+), протонированная б-аминогруппа (--NH+3 -> --NН2 + Н+). Основные группы аминокислот: диссоциированная карбоксильная (--СОО- + Н+ -> --СООН) и б-аминогруппа (--NН2 + Н+ -> NН+3).

Для каждой аминокислоты

имеется как минимум две константы кислотной диссоциации рКа - одна для группы --СООН, а вторая для б-аминогруппы. В водном растворе возможно существование трех форм аминокислот

Доказано, что в водных растворах аминокислоты находятся в виде диполя; или цвиттер-иона.

Влияние рН среды на ионизацию аминокислот. Изменение рН среды от кислой до щелочной влияет на заряд растворенных аминокислот. В кислой среде (рН<7) все аминокислоты несут положительный заряд (существуют в виде катиона), так как избыток протонов в среде подавляет диссоциацию карбоксильной группы:

В кислой среде аминокислоты в электрическом поле движутся к катоду.

В щелочной среде (рН>7), где имеется избыток ионов ОН-, аминокислоты находятся в виде отрицательно заряженных ионов (анионов), так как диссоциирует NН+3-группа:

В этом случае аминокислоты перемещаются в электрическом поле к аноду.

Следовательно, в зависимости от рН среды аминокислоты имеют суммарный нулевой, положительный или отрицательный заряд. Состояние, в котором заряд аминокислоты равен нулю, называется изоэлектрическим. Значение рН, при котором наступает такое состояние и аминокислота не перемещается в электрическом поле ни к аноду, ни к катоду, называется изоэлектрической точкой и обозначается рНI. Изоэлектрическая точка очень точно отражает кислотно-основные свойства разных групп в аминокислотах и является одной из важных констант, характеризующих аминокислоту.

Изоэлектрическая точка неполярных (гидрофобных) аминокислот приближается к нейтральному значению рН (от 5,5 для фенилаланина до 6,3 для пролина), у кислых она имеет низкие значения (для глутаминовой кислоты 3,2, для аспарагиновой 2,8). Изоэлектрическая точка для цистеина и цистина равна 5,0, что указывает на слабые кислотные свойства этих аминокислот. У основных аминокислот -- гистидина и особенно лизина и аргинина -- изоэлектрическая точка значительно выше 7.

В клетках и межклеточной жидкости организма человека и животных рН среды близка к нейтральной, поэтому основные аминокислоты (лизин, аргинин) несут суммарный положительный заряд (катионы), кислые аминокислоты (аспарагиновая и глутаминовая) имеют отрицательный заряд (анионы), а остальные существуют в виде диполя. Кислые и основные аминокислоты больше гидратированы, чем все остальные аминокислоты.

Таблица 4

Описание аминокислоты

растворимость

химические свойства

лейцин-бесцветный крист. порошок

ограниченно раств. в воде, плохо в этаноле, раств. в водных р-рах к-т и щелочей, не раств. в диэтиловом эфире.

Л. метаболизируст до 2-оксо-4-метилпснтановой к-ты, из к-рой в результате дальнейших превращ. образуется 3-гидрокси-3-метилглутарилкофермент А (промежут. соед. в синтезе стероидов), а затем ацетоуксусная к-та и ацетилкофермент А (участвует в цикле трикарбоновых к-т и в биосинтезе жирных к-т)

-аминокислот общая формула может быть представлена в следующем виде:Для

-карбоксильные группы участвуют в образовании пептидных связей белковой молекулы, теряя при этом свои специфические для свободных аминокислот кислотно-основные свойства. Поэтому все разнообразие особенностей структуры и функции белковых молекул связано с химической природой и физико-химическими свойствами радикалов аминокислот.-амино- и-углеродным атомом и не участвующую в образовании пептидной связи при синтезе белка. Почти все-аминокислоты будут отличаться друг от друга химической природой радикала R, представляющего группу атомов в молекуле аминокислоты, связанную сКак видно из общей формулы,

Классификация аминокислот разработана на основе химического строения радикалов, хотя были предложены и другие принципы. Различают ароматические и алифатические аминокислоты, а также аминокислоты, содержащие серу или гидроксильные группы. Часто классификация основана на природе заряда аминокислоты. Если радикал нейтральный (такие аминокислоты содержат только одну амино- и одну карбоксильную группы), то они называются нейтральными аминокислотами. Если аминокислота содержит избыток амино- или карбоксильных групп, то она называется собственно основной или кислой аминокислотой.

Что делать с фармакопеями, какие конкретно пункты взять для сравнения,я вот нашла Беларусскую фармакопею пока только.

ИЗОЛЕЙЦИН (Isoleucinum)

Изолейцин содержит не менее 98,5 % и не более 101,0 % (2S,3S)-2-амино-3-метилпентановой кислоты в пересчете на сухое вещество.

ОПИСАНИЕ (СВОЙСТВА). Белый или почти белый кристаллический порошок либо чешуйки. Умеренно растворим в воде, малорастворим в 96 % спирте. Растворяется в разведенных минеральных кислотах и в разведенных растворах гидроксидов щелочных металлов.

ПОДЛИННОСТЬ (ИДЕНТИФИКАЦИЯ). Первая идентификация: A, С.Вторая идентификация: A, B, D.А. Испытуемый образец выдерживает испытание «Удельное оптическое вращение» как указано в разделе «Испытания».В. 0,5 г испытуемого образца растворяют в воде Р и доводят до объема 25 мл этим же растворителем. Полученный раствор является правовращающим.С. Абсорбционная спектрофотометрия в инфракрасной области (2.2.24).Приготовление: в дисках.

Сравнение: ФСО изолейцина # или спектр, представленный на рисунке 1.

D. Просматривают хроматограммы, полученные в испытании «Нингидрин-положительные вещества». На хроматограмме испытуемого раствора (b) обнаруживается пятно, соответствующее по расположению, размеру и цвету основному пятну на хроматограмме раствора сравнения (а).

ИСПЫТАНИЯ. Раствор S. 0,5 г испытуемого образцарастворяют в 1 М растворе кислоты хлористоводородной и доводят до объема 10 мл этим

же растворителем. Прозрачность (2.2.1). Раствор S должен быть прозрачным. Цветность (2.2.2, метод II). Окраска раствора S должна быть не интенсивнее эталона BY(КЖ).6.Удельное оптическое вращение (2.2.7). От +40,0 до +43,0 в пересчете на сухое вещество. 1,00 г испытуемого образца растворяют в кислоте хлористоводородной Р1 и доводят до объема 25,0 мл этим же растворителем. Нингидрин- положительные вещества. Тонкослойная хроматография (2.2.27).Испытуемый раствор (а). 0,10 г испытуемого образца растворяют в 0,1 М растворе кислоты хлористоводородной и доводят до объема 10 мл этим же растворителем.Испытуемый раствор (b). 1 мл испытуемого раствора (а) доводят водой Р до объема 50 мл.Раствор сравнения (а). 10 мг ФСО изолейцина растворяют в 0,1 М растворе кислоты хлористоводородной и доводят до объема 50 мл этим же растворителем. Раствор сравнения (b). 5 мл испытуемого раствора (b) доводят водой Р до объема 20 мл.Раствор сравнения (с). 10 мг ФСО изолейцина и 10 мг ФСО валина растворяют в 0,1 М растворе кислоты хлористоводородной и доводят до объема 25 мл этим же растворителем. Пластинка: ТСХ пластинка со слоем силикагеля Р. Подвижная фаза: кислота уксусная ледяная Р -- вода Р -- бутанол Р (20:20:60, об/об/об). Наносимый объем пробы: 5 мкл. Фронт подвижной фазы: не менее 15 см от линии старта.Высушивание: на воздухе. Проявление: пластинку опрыскивают раствором нингидрина Р и высушивают при температуре от 100°С до 105°C в течение 15 мин. Пригодность хроматографической системы: раствор сравнения (с): - на хроматограмме обнаруживаются два полностью разделенных пятна. Предельное содержание примесей: - любая примесь (не более 0,5 %): на хроматограмме испытуемого раствора (а) любое пятно, кроме основного, должно быть не интенсивнее пятна на хроматограмме раствора сравнения (b). Хлориды (2.4.4). Не более 0,02 % (200 ppm). 0,25 г испытуемого образца растворяют в воде Р и доводят до объема 15 мл этим же растворителем. Полученный раствор должен выдерживать испытание на хлориды. Сульфаты (2.4.13). Не более 0,03 %

(300 ppm). 0,5 г испытуемого образца растворяют в 3 мл кислоты хлористоводородной разведенной Р и доводят водой дистиллированной Р до объема 15 мл. Полученный раствор должен выдерживать испытание на сульфаты. Аммония соли (2.4.1, метод В). Не более 0,02 % (200 ppm). 50 мг испытуемого образца должны выдерживать испытание на аммония соли. Эталон готовят с использованием 0,1 мл эталонного раствора аммония (100 ppm NH4) Р. Железо (2.4.9). Не более 0,001 % (10 ppm). 1,0 г испытуемого образца помещают в делительную воронку, растворяют в 10 мл кислоты хлористоводородной разведенной Р, встряхивают трижды, каждый раз в течение 3 мин, с метилизобутилкетоном Р1 порциями по 10 мл. Объединенные органические слои встряхивают с 10 мл воды Р в течение 3 мин. Водный слой должен выдерживать испытание на железо. Тяжелые металлы (2.4.8, метод D). Не более 0,001 % (10 ррm). 2,0 г испытуемого образца должны выдерживать испытание на тяжелые металлы. Эталон готовят с использованием 2 мл эталонного раствора свинца (10 ppm Pb) P. Потеря в массе при высушивании (2.2.32). Не более 0,5 %. 1,000 г испытуемого образца сушат при температуре 105°С. Сульфатная зола (2.4.14, метод А). Не более 0,1 %. Определение проводят из 1,0 г испытуемого образца.# Остаточные количества органических растворителей (2.4.24). Испытуемый образец должен выдерживать требования статьи (5.4).# Микробиологическая чистота (2.6.12, 2.6.13, 5.1.4). Изолейцин в условиях испытания не обладает антимикробным действием.

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ. 0,100 г испытуемого образца растворяют в 3 мл кислоты муравьиной безводной Р, прибавляют 30 мл кислоты уксусной безводной Р и титруют 0,1 М раствором кислоты хлорной, используя 0,1 мл раствора нафтолбензеина Р в качестве индикатора, до изменения окраски раствора от коричневато-желтой до зеленой. 1 мл 0,1 М раствора кислоты хлорной соответствует 13,12 мг 6H13NO2.

ХРАНЕНИЕ. В защищенном от света месте.

ЛЕЙЦИН (Leucinum),LЕUCINE

H 3 C CO 2 HH NH 2CH 3C6H13NO2 М.м 131,2

ОПРЕДЕЛЕНИЕ. Лейцин содержит не менее 98,5 % и не более 101,0 % (S)-2-амино-4-метилпентановой кислоты в пересчете на сухое вещество.

ОПИСАНИЕ (СВОЙСТВА). Белый или почти белый кристаллический

порошок или блестящие чешуйки. Умеренно растворим в воде, практически нерастворим в 96 % спирте. Растворяется в разведенных минеральных кислотах и в разведенных растворах гидроксидов щелочных металлов.

ПОДЛИННОСТЬ (ИДЕНТИФИКАЦИЯ). Первая идентификация: А, С.Вторая идентификация: А, В, D.А. Испытуемый образец выдерживает испытание «Удельное оптическое вращение» как указано в разделе «Испытания».B. 0,50 г испытуемого образца растворяют в воде Р и доводят до объема 25 мл этим же растворителем. Полученный раствор является ле-вовращающим.С. Абсорбционная спектрофотометрия в инфракрасной области (2.2.24).Приготовление: в дисках.Сравнение: ФСО лейцина # или спектр, представленный на рисунке 1.D. Просматривают хроматограммы, полученные в испытании «Нингидрин-положительные вещества». На хроматограмме испытуемого раствора (b) обнаруживается пятно, соответ-ствующее по расположению, цвету и размеру основному пятну на хроматограмме раствора сравнения (а).

ИСПЫТАНИЯ. Раствор S. 0,5 г испытуемого образца растворяют в 1 М растворе кислоты хлористоводородной и доводят до объема 10 мл этим же растворителем.Прозрачность (2.2.1). Раствор S должен быть прозрачным. Цветность (2.2.2, метод II). Окраска растора S должна быть не интенсивнее эталона BY(КЖ)6. Удельное оптическое вращение (2.2.7).

От +14,5 до +16,5 в пересчете на сухое вещество. 1,00 г испытуемого образца растворяют в кислоте хлористоводородной Р1 и доводят до объема 25,0 мл этим же растворителем. Нингидрин-положительные вещества. Тонкослойная хроматография (2.2.27). Испытуемый раствор (а). 0,10 г испытуемого образца растворяют в 0,1 М растворе кислоты хлористоводородной и доводят до объема 10 мл этим же растворителем. Испытуемый раствор (b). 1 мл испытуемого раствора (а) доводят водой Р до объема 50 мл. Раствор сравнения (a). 10 мг ФСО лейцина растворяют в 0,1 М растворе кислоты хлористоводородной и доводят до объема 50 мл этим же растворителем. Раствор сравнения (b). 5 мл испытуемого раствора (b) доводят водой Р до объема 20 мл. Раствор сравнения (с). 10 мг ФСО лейцина и 10 мг ФСО валина растворяют в 0,1 М растворе кислоты хлористоводородной и доводят до объема 25 мл этим же растворителем. Пластинка: ТСХ пластинка со слоем силикагеля Р. Подвижная фаза: кислота уксусная ледяная Р -- вода Р -- бутанол Р (20:20:60, об/об/об). Наносимый объем пробы: 5 мкл. Фронт подвижной фазы: не менее 15 см от линии старта. Высушивание: на воздухе. Проявление: пластинку опрыскивают раствором нингидрина Р и высушивают при температуре от 100°С до 105°C в течение 15 мин. Пригодность хроматографической системы: раствор сравнения (с): - на хроматограмме обнаруживаются два полностью разделенных пятна. Предельное содержание примесей: - любая примесь (не более 0,5 %): на хроматограмме испытуемого раствора (а) любое пятно, кроме основного, должно быть не интенсивнее пятна на хроматограмме раствора сравнения (b). Хлориды (2.4.4). Не более 0,02 % (200 ppm). 0,25 г испытуемого образца растворяют в воде Р и доводят до объема 15 мл этим же растворителем. Полученный раствор должен выдерживать испытание на хлориды. Сульфаты (2.4.13). Не более 0,03 % (300 ppm). 0,5 г испытуемого образца растворяют в 3 мл кислоте хлористоводородной разведенной Р и доводят водой дистиллированной Р до объема 15 мл. Полученный раствор должен выдерживать испытание на сульфаты. Аммония соли (2.4.1, метод В). Не более 0,02 % (200 ppm). 50 мг испытуемого образца должны выдерживать испытание на аммоний. Эталон готовят с использованием 0,1 мл эталонного раствора аммония (100 ppm NH4) Р. Железо (2.4.9). Не более 0,001 % (10 ppm). 1,0 г испытуемого образца помещают в делительную воронку, растворяют в 10 мл кислоты хлористоводородной разведенной Р, встряхи-вают трижды, каждый раз в течение 3 мин, с метилизобутилкетоном Р1 порциями по 10 мл. Объединенные органические слои встряхивают с 10 мл воды Р в течение 3 мин. Водный слой должен выдерживать испытание на железо. Тяжелые металлы (2.4.8, метод D). Не более 0,001 % (10 ррm). 2,0 г испытуемого образца должны выдерживать испытание на тяжелые металлы. Эталон готовят с использованием 2 мл эталонного раствора свинца (10 ppm Pb) P. Потеря в массе при высушивании (2.2.32). Не более 0,5 %. 1,000 г испытуемого образца сушат при температуре 105°С. Сульфатная зола (2.4.14, метод А). Не более 0,1 %. Определение проводят из 1,0 г испытуемого образца.# Остаточные количества органических растворителей (2.4.24). Испытуемый образец должен выдерживать требования статьи (5.4).# Микробиологическая чистота (2.6.12, 2.6.13, 5.1.4). Лейцин в условиях испытания не обладает антимикробным действием.

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ. 0,100 г испытуемого образца растворяют в 3 мл кислоты муравьиной безводной Р, прибавляют 30 мл кислоты уксусной безводной Р и титруют 0,1 М раствором кислоты хлорной, используя в качестве индикатора 0,1 мл раствора нафтолбензеина Р, до изменения окраски раствора от коричневато-желтой до зеленой.1 мл 0,1 М раствора кислоты хлорной соответствует 13,12 мг C6H13NO2.

ХРАНЕНИЕ. В защищенном от света месте.

ЛИЗИНА ГИДРОХЛОРИД (Lysini hydrochloridum),LYSINE HYDROCHLORIDE

H 2 N CO 2 HH NH 2HClC6H14N2O2 · HCl М.м. 182,7

ОПРЕДЕЛЕНИЕ. Лизина гидрохлорид содержит не менее 98,5 % и не более 101,0 % (S)-2,6-диаминогексановой кислоты гидрохлорида в пересчете на сухое вещество.

ОПИСАНИЕ (СВОЙСТВА). Белый или почти белый кристаллический порошок либо бесцветные кристаллы. Легкорастворим в воде, малорастворим в 96 % спирте.

ПОДЛИННОСТЬ (ИДЕНТИФИКАЦИЯ). Первая идентификация: A, B, E.Вторая идентификация: A, C, D, E. А. Испытуемый образец выдерживает испытание «Удельное оптическое вращение» как указано в разделе «Испытания». В. Абсорбционная спектрофотометрия в инфракрасной области (2.2.24). Приготовление: в дисках. Сравнение: ФСО лизина гидрохлорида # или спектр, представленный на рисунке 1. Если полученные спектры отличаются, то испытуемый образец и ФСО лизина гидрохлорида растворяют по отдельности в минимальном количестве воды Р, выпаривают при температуре 60°С до сухих остатков, которые используют для получения новых спектров. С. Просматривают хроматограммы, полученные в испытании «Нингидрин-положительные вещества». На хроматограмме испытуемого раствора (b) обнаруживается пятно, соответствующее по расположению, цвету и размеру основному пятну на хроматограмме раствора сравнения (а). D. К 0,1 мл раствора S, приготовленного как указано в разделе «Испытания», прибавляют 2 мл воды Р и 1 мл раствора 50 г/ л фосфорномолибденовой кислоты Р. Образуется желтовато-белый осадок. Е. К 0,1 мл раствора S прибавляют 2 мл воды Р. Полученный раствор дает реакцию (а) на хлориды (2.3.1).

ИСПЫТАНИЯ. Раствор S. 5,0 г испытуемого образца растворяют в воде, свободной от углерода диоксида, Р, приготовленной из воды дистиллированной Р, и доводят до объема 50 мл этим же растворителем.

Прозрачность (2.2.1). Раствор S должен быть прозрачным. Цветность (2.2.2, метод II). Окраска раствора S должна быть не интенсивнее эталона B(К)7 или GY(ЗЖ)7. Удельное оптическое вращение (2.2.7). От +21,0 до +22,5 в пересчете на сухое вещество. 2,00 г испытуемого образца растворяют в кислоте хлористоводородной Р1 и доводят до объема 25,0 мл этим же растворителем. Нингидрин-положительные вещества. Тонкослойная хроматография (2.2.27). Испытуемый раствор (а). 0,10 г испытуемого образца растворяют в воде Р и доводят до объема 10 мл этим же растворителем. Испытуемый раствор (b). 1 мл испытуемого раствора (а) доводят водой Р до объема 50 мл. Раствор сравнения (a). 10 мг ФСО лизина гидрохлорида растворяют в воде Р и доводят до объема 50 мл этим же растворителем. Раствор сравнения (b). 5 мл испытуемого раствора (b) доводят водой Р до объема 20 мл. Раствор сравнения (с). 10 мг ФСО лизина гидрохлорида и 10 мг ФСО аргинина растворяют в воде Р и доводят до объема 25 мл этим же растворителем. Пластинка: ТСХ пластинка со слоем силикагеля Р. Подвижная фаза: аммиака раствор концентрированный Р -- 2-пропанол Р (30:70, об/об). Наносимый объем пробы: 5 мкл. Фронт подвижной фазы: не менее 15 см от линии старта. Высушивание: при температуре от 100°С до 105°С до полного удаления аммиака. Проявление: пластинку опрыскивают раствором нингидрина Р и нагревают при температуре от 100°С до 105°C в течение 15 мин. Пригодность хроматографической системы: раствор сравнения (с): - на хроматограмме обнаруживаются два полностью разделенных пятна.Предельное содержание примесей: - любая примесь (не более 0,5 %): на хроматограмме испытуемого раствора (а) любое пятно, кроме основного, должно быть не интенсивнее пятна на хроматограмме раствора сравнения (b). Сульфаты (2.4.13). Не более 0,03 % (300 ppm). 5 мл раствора S доводят водой дистиллированной Р до объема 15 мл. Полученный раствор должен выдерживать испытание на сульфаты. Аммония соли (2.4.1, метод В). Не более 0,02 % (200 ppm). 50 мг испытуемого образца должны выдерживать испытание на аммония соли. Эталон готовят с использованием0,1 мл эталонного раствора аммония (100 ppm NH4) Р. Железо (2.4.9). Не более 0,003 % (30 ppm). 0,33 г испытуемого образца помещают в делительную воронку, растворяют в 10 мл кислоты хлористоводородной разведенной Р, встряхивают трижды, каждый раз в течение 3 мин, с метилизобутилкетоном Р1 порциями по 10 мл. Объединенные органические слои встряхивают с 10 мл воды Р в течение 3 мин. Водный слой должен выдерживать испытание на железо.# Мышьяк (2.4.2, метод А). Не более 0,0002 % (2 ppm). 0,5 г испытуемого образца должны выдерживать испытание на мышьяк. Тяжелые металлы (2.4.8, метод А). Не более 0,001 % (10 ррm). 12 мл раствора S должны выдерживать испытание на тяжелые металлы. Эталон готовят с использованием эталонного раствора свинца (1 ppm Pb) P. Потеря в массе при высушивании (2.2.32). Не более 0,5 %. 1,000 г испытуемого образца сушат при температуре 105°С. Сульфатная зола (2.4.14, метод А). Не более 0,1 %. Определение проводят из 1,0 г испытуемого образца.# Остаточные количества органических растворителей (2.4.24). Испытуемый образец должен выдерживать требования статьи (5.4).# Микробиологическая чистота (2.6.12, 2.6.13, 5.1.4). Лизина гидрохлорид в условиях испытания не обладает антимикробным действием.

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ. 0,150 г испытуемого образца растворяют в 5 мл кислоты муравьиной безводной Р, прибавляют 50 мл кислоты уксусной безводной Р и титруют 0,1 М раствором кислоту хлорной потенциометрически (2.2.20). 1 мл 0,1 М раствора кислоты хлорной соответствует 18,27 мг C6H14N2O2·HCl.

ХРАНЕНИЕ. В защищенном от света месте.

DL-МЕТИОНИНDL-(Methioninum),DL-METHIONINE

H 3 CS CO 2 HNH 2 H и энантиомер C5H112S М.м. 149,2

ОПРЕДЕЛЕНИЕ. DL-Метионин содержит не менее 99,0 % и не более

101,0 % 2(RS)-2-амино-4-(метилсульфанил)бутановой кислоты в пересчете на сухое вещество.

ОПИСАНИЕ (CВОЙСТВА). Почти белый кристаллический порошок или мелкие хлопья. Умеренно растворим в воде, очень мало растворим в 96 % спирте, растворяется в разведенных кислотах и разведенных растворах гидроксидов щелочных металлов. Температура плавления: около 270°С.

ПОДЛИННОСТЬ (ИДЕНТИФИКАЦИЯ). Первая идентификация: А, В. Вторая идентификация: А, С, D. А. Абсорбционная спектрофотометрия в инфракрасной области (2.2.24). Приготовление: испытуемый образец и стандартный образец высушивают при температуре 105°С. Сравнение: ФСО DL-метионина # или спектр, представленный на рисунке 1. В. Просматривают хроматограммы, полученные в испытании «Сопутствующие примеси». На хроматограмме испытуемого раствора (b) обнаруживается основное пятно, соответствующее по расположению, цвету и размеру основному пятну на хроматограмме раствора сравнения (а). С. 2,50 г испытуемого образца растворяют в 1 М растворе кислоты хлористоводородной и доводят до объема 50,0 мл этим же растворителем. Угол оптического вращения (2.2.7): от -0,05° до +0,05°. D. К 0,1 г испытуемого образца прибавляют 0,1 г глицина Р и растворяют в 4,5 мл раствора натрия гидроксида разведенного Р. Прибавляют 1 мл раствора 25 г/л натрия нитропруссида Р и нагревают при температуре 40°С в течение 10 мин. Охлаждают и прибавляют 2 мл смеси из кислоты фосфорной Р и кислоты хлористоводородной Р (1:9, об/об). Появляется насыщенное красное окрашивание.

ИСПЫТАНИЯ. Раствор S. 1,0 г испытуемого образца растворяют в воде, свободной от углерода диоксида, Р и доводят до объема 50 мл этим же растворителем. Прозрачность (2.2.1). Раствор S должен быть прозрачным. Цветность (2.2.2, метод II). Раствор S должен быть бесцветным. рН (2.2.3).

От 5,4 до 6,1. Измеряют рН раствора S. Сопутствующие примеси. Тонкослойная хроматография (2.2.27). Испытуемый раствор (а). 0,2 г испытуемого образца растворяют в воде Р и доводят до объема 10 мл этим же растворителем. Испытуемый раствор (b). 1 мл испытуемого раствора (а) доводят водой Р до объема 50 мл. Раствор сравнения (а). 20 мг ФСО DL-метионина растворяют в воде Р и доводят до объема 50 мл этим же растворителем. Раствор сравнения (b). 1 мл раствора сравнения (а) доводят водой Р до объема 10 мл. Пластинка: ТСХ пластинка со слоем силикагеля G Р. Подвижная фаза: кислота уксусная ледяная Р -- вода Р -- бутанол Р (20:20:60, об/об/об). Наносимый объем пробы: 5 мкл. Фронт подвижной фазы: не менее 10 см от линии старта. Высушивание: на воздухе. Проявление: пластинку опрыскивают раствором нингидрина Р и нагревают при температуре от 100°С до 105°С в течение 15 мин. Предельное содержание примесей: - любая примесь (не более 0,2 %): на хроматограмме испытуемого раствора (а) любое пятно, кроме основного, должно быть не интенсивнее пятна на хроматограмме раствора сравнения (b). Хлориды. Не более 0,02 % (200 ppm). 0,25 г испытуемого образца растворяют в 35 мл воды Р, прибавляют 5 мл кислоты азотной разведенной Р, 10 мл раствора серебра нитрата Р2 и выдерживают в течение 5 мин в защищенном от света месте. Опалесценция полученного раствора не должна превышать опалесценцию эталона, приготовленного таким же образом и в то же время с использованием 10 мл эталонного раствора хлорида (5 ppm Cl) Р и 25 мл воды Р. Пробирки просматривают на черном фоне горизонтально (перпендикулярно оси пробирок). Сульфаты (2.4.13). Не более 0,02 % (200 ppm). 1,0 г испытуемого образца растворяют в 20 мл воды дистиллированной Р при нагревании до температуры 60°С. Охлаждают до температуры 10°С и фильтруют. 15 мл полученного раствора должны выдерживать испытание на сульфаты. Тяжелые металлы (2.4.8, метод D). Не более 0,002 % (20 ppm). 1,0 г испытуемого образца должен выдерживать испытание на тяжелые металлы. Эталон готовят с использованием 2 мл эталонного раствора свинца (10 ppm Pb) Р. Потеря в массе при высушивании (2.2.32). Не более 0,5 %. 1,000 г испытуемого образца сушат при температуре 105°С. Сульфатная зола (2.4.14, метод А). Не более 0,1 %. Определение проводят из 1,0 г испытуемого образца.# Остаточные количества органических растворителей (2.4.24). Испытуемый образец должен выдерживать требования статьи (5.4).# Микробиологическая чистота (2.6.12, 2.6.13, 5.1.4). DL-Метионин в условиях испытания не обладает антимикробным действием.

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ. 0,140 г испытуемого образца растворяют в 3 мл кислоты муравьиной безводной Р и прибавляют 30 мл кислоты уксусной безводной Р. После растворения немедленно титруют 0,1 М раствором кислоты хлорной потенциометрически (2.2.20). 1 мл 0,1 М раствора кислоты хлорной соответствует 14,92 мг С5Н11NO2S.

ХРАНЕНИЕ. В защищенном от света месте.

Размещено на Allbest.ru


Подобные документы

  • Процесс обмена белков, аминокислот и отдельных аминокислот. Биогенные амины, их роль и значение. Окисление биогенных аминов (моноаминоксидазы). Роль гистамина в развитии воспаления и аллергических реакций. Антигистаминные препараты, их задачи и функции.

    презентация [1,4 M], добавлен 13.04.2015

  • Изучение гормонов - производных аминокислот, особенностей их синтеза и механизма действия клетки. Физиологическая роль катехоламинов и их функции - мобилизации защитных сил организма в условиях стрессового воздействия. Анализ из влияния на секрецию.

    контрольная работа [20,5 K], добавлен 27.02.2010

  • Обзор этиологии, диагностики и методов лечения гипотиреоза и тиреотоксикоза. Лекарственные средства, применяемые для их лечения. Синтетические аналоги йодированных производных аминокислот. Фармацевтический анализ субстанции и таблеток пропилтиоурацила.

    курсовая работа [144,1 K], добавлен 05.05.2013

  • Гистогенез и клеточный состав рака. Характер метастазирования рака. Биохимическое изучение рака. Исследования биосинтеза белков методом включения меченых аминокислот. Биохимические изменения при раке. Основные принципы диагностики и терапии рака.

    реферат [14,7 K], добавлен 19.05.2010

  • Симптомы и диагностика рахита - заболевания детей раннего возраста, обусловленного недостатком витамина D, незаменимых аминокислот и минеральных веществ. Причины недостатка фосфатов. Факторы, предрасполагающие к рахиту со стороны матери и ребенка.

    презентация [463,9 K], добавлен 21.12.2013

  • Описания заболевания детей раннего возраста, обусловленного недостатком витамина D, незаменимых аминокислот и минеральных веществ. Изучение основных причин рахитов у детей. Патогенез, клиника и степени тяжести заболевания. Специфическая терапия рахита.

    презентация [855,2 K], добавлен 20.02.2017

  • Особое место белкового обмена в многообразных превращениях веществ во всех живых организмах. Нарушения биосинтеза и распада белков в органах и тканях. Наследственные дефекты биосинтеза белков. Нарушения выделения и конечных этапов метаболизма аминокислот.

    реферат [123,1 K], добавлен 22.01.2010

  • Роль минеральных веществ в обеспечении нормального течения процессов жизнедеятельности организма человека. Препараты, содержащие макро- и микроэлементы. Препараты аминокислот, лекарственные препараты для парентерального питания при невозможности обычного.

    реферат [46,8 K], добавлен 19.08.2013

  • Роль печени и почек в обмене белков. Нормы белков в питании. Участие аминокислот в процессах биосинтеза и катаболизма. Тканевой обмен нуклеотидов. Синтез и катаболизм ДНК и РНК. Регуляция процессов азотистого обмена. Патология азотистого обмена.

    курсовая работа [58,0 K], добавлен 06.12.2008

  • Специфические особенности фармацевтического анализа. Испытание на подлинность лекарственных препаратов. Источники и причины недоброкачественности лекарственных веществ. Классификация и характеристика методов контроля качества лекарственных веществ.

    реферат [3,0 M], добавлен 19.09.2010

Работы в архивах красиво оформлены согласно требованиям ВУЗов и содержат рисунки, диаграммы, формулы и т.д.
PPT, PPTX и PDF-файлы представлены только в архивах.
Рекомендуем скачать работу.