Примітка: «-» - кількість жирної кислоти знаходилась за порогом чутливості методу, що використовували

Розробка технологій отримання густих екстрактів з листя та кори клену ясенолистого (4 розділ). Для розробки технології отримання густих екстрактів, по-перше, необхідно було провести визначення оптимальних екстрагентів для вилучення екстрактивних речовин та суми окиснюваних фенолів з листя та кори клену ясенолистого. Дослідження проводили в ряду вода, водно-етанольні суміші зі зростаючою концентрацією останнього, 96% етанол. Результати наведені в табл.7.

Таблиця 7. Вихід екстрактивних речовин та суми окиснюваних фенолів з листя та кори клена ясенолистого в залежності від використаного екстрагенту (m=5, в %)

Таблиця 8. Матриця планування експерименту по встановленню оптимальних параметрів технологічного процесу отримання субстанції з листя клену ясенолистого

Аналіз рівнянь регресії показує, що найбільший вплив на вихід екстрактивних речовин здійснює фактор Х2 - час екстракції, а для суми окиснюваних фенолів головним фактором, насамперед впливаючим на їх вихід, є Х4 - вид екстрагенту.

До них не ввійшли фактори: в першому випадку - Х1, Х3, Х4, в другому - фак-тори Х1, Х2, Х3 та в обох випадках - взаємодії факторів Х1Х2, Х1Х3, Х1Х4, Х2Х3, Х2Х4, Х3Х4 як статистично не значущі.

Розроблено оптимальні технології отримання густих екстрактів з листя та кори клена ясенолистого: З листя клену ясенелистого: співвідношення сировина-екстрагент - 1:15, вид розчинника - 80% етиловий спирт, загальний час настоювання 36 годин, при цьому вихід субстанції складав 21-24 % від маси повітряно сухої сировини, а суми окиснюваних фенолів -не менш 4,0%. З кори клену ясенелистого: співвідношення сировина-екстрагент - 1:15, вид розчинника - 40% етиловий спирт, загальний час настоювання 4,5 години, температура процесу 90оС, при цьому вихід субстанції складав 16,5-17,1 % від маси повітряно сухої сировини.

Розроблено проект технологічного регламенту отримання густого екстракту листя клену ясенолистого. Розроблену технологію цієї субстанції апробовано в умовах ТОВ “Фармацевтична компанія “Здоров'я”.

Були визначені макро- та мікроскопічні ознаки будови листя та кори клену ясенолистого, втрата в масі при висушуванні, загальна зола та ідентифікація. Крім того було визначено кількісний вміст суми окиснюваних фенолів в листі та корі клену ясенолистого та вміст суми гідроксикоричних кислот в листі. Розроблено проект АНД «Листя клену ясенолистого».

Визначено такі параметри густих екстрактів листя та кори клену ясенолистого як: органолептичні показники, розчинність в ряді розчинників, ідентифікація за якісними реакціями, однорідність, вологовміст, випробування на важкі метали, визначення кількісного вмісту основних груп біологічно активних речовин (в субстанції кори клену ясенолистого - вміст суми окиснюваних фенолів, в субстанції листя клену ясенолистого - вміст суми окиснюваних фенолів та вміст суми гідроксикоричних кислот). На підставі цього розроблено проект АНД «Густий екстракт листя клену ясенолистого».

Комплекс доклінічних досліджень цієї субстанції проводився на базі лабораторії морфофункціональних досліджень НФаУ під керівництвом доктора фармацевтичних наук, професора Людмили Миколаївни Малоштан. Густі екстракти кори та листя клена ясенолистого в розведенні 1,25 - 0,5% виявляли пригнічуючу дію на Т-розеткоутворення і в розведенні 0,3% не викликали суттєвих змін. Густі екстракти листя та кори клену ясенолистого в концентрації 1 % виявляли виражену цитотоксичну активність.

Густі екстракти кори та листя клену ясенолистого виявляли помірну антимікробну активність по відношенню до штамів St.aureus ATCC 25923 та St.aureus ATCC 6538. Крім того, густий екстракт кори зменшував діаметр росту B.subtillis ATCC 6633 C.аlbicans ATCC 885/653, St.pyogenes Dick-1. Виражену сперміцидну активність виявляв густий екстракт кори клену ясенолистого. Новизна досліджень підтверджена патентом № 78448 України, МПК 2007 А 61К 36/20, А 61 Р 15/18. Контрацептивний засіб з антимікробною та цитотоксичною дією / Ю.А Федченкова, О.П. Хворост, В.М. Маркова, Л.М. Малоштан, В.В. Малий; заявник та патентовласник Національний фармацевтичний університет - № а2005 10411; заявл. 04.11.2005; опубл. 15.03.2007, Бюл. №3.

ВИСНОВКИ

Вперше в Україні проведено комплексне порівняльне фармакогностичне вивчення найбільш поширених рослин роду клен. Створено теоретичне та практичне підґрунтя для подальшої розробки на їх основі нових лікарських засобів.

З листя та кори клену польового, клену звичайного та клену ясенолистого та з субстанцій клену ясенолистого в індивідуальному стані виділено та ідентифіковано 21 речовину. З використанням сучасних фізичних, фізико-хімічних та хімічних методів встановлено структуру вилучених сполук.

Визначено якісний склад та кількісний вміст таких груп БАР: жирних кислот в липофільних фракціях листя, кори та насіння клену ясенолистого, сум хлорофілів та каротиноїдів, мінеральних сполук в листі та корі клену ясенолистого, а також в густих екстрактах з цих видів сировини в порівнянні з грунтом.

Проведено визначення кількісного вмісту суми органічних кислот в розрахунку на яблучну кислоту та аскорбінової кислоти в листі клену звичайного, клену польового та клену ясенолистого і в густому екстракті листя клену ясенолистого. Визначений кількісний вміст в сировині рослин роду клен та субстанціях клену ясенолистого таких груп фенольних сполук як суми окиснюваних фенолів, гідроксикоричних кислот, флавоноїдів, дубильних речовин та катехінів.

Вперше розроблено технології отримання густих екстрактів з кори та листя клену ясенолистого, новизна розробок підтверджена патентом України № 78448 МПК 2007 А 61К 36/20 «Контрацептивний засіб з антимікробною та цитотоксичною дією», заявл. 04.11.2005; опубл. 15.03.2007, Бюл. №3.

З метою стандартизації сировини та отриманих субстанцій: досліджено анатомічну будову листя та кори клену ясенолистого, встановлені мікроскопічні діагностичні ознаки. Отримані дані сировини використані при розробці проектів АНД на рекомендовану рослинну сировину, визначені числові показники листя та кори клену ясенолистого, а також густих екстрактів з цих видів сировини.

Встановлена цитотоксична, антимікробна та сперміцидна дія отриманих субстанцій, що підтверджує перспективність подальших досліджень препаратів з листя та кори клену ясенолистого як перспективних контрацептивних та антимікробних засобів.

Результати роботи впроваджено в навчальний процес Національного фармацевтичного університету, Запорізького державного медичного університету, Тернопільского державного медичного університету ім. І.Я. Горбачевського, Івано-Франківського медичного університету.

Розроблено проекти АНД на сировину «Листя клену», а також на субстанцію «Густий екстракт листя клену». Проект технологічного регламенту отримання густого екстракту з листя клену ясенолистого апробовано в умовах ТОВ “Фармацевтична компанія “Здоров'я”.

Список опублікованих праць за темою дисертації

1. Федченкова Ю.А. Исследование анатомического строения вегетативных органов клена ясенелистого Acer negundo L. (Aceraceae) / Ю.А. Федченкова // Актуальні питання фармацевтичної та медичної науки та практики : зб. наук. ст. - Запоріжжя, 2004. - Т.ІІІ, вип.ХІІ. - С. 285-288.

2. Федченкова Ю.А. Визначення кількісного вмісту різних груп біологічно активних сполук в клені ясенелистому та густих екстрактах з його кори та листя / Ю.А. Федченкова, О.П. Хворост // Медична хімія. - 2005. - Т.7, № 2. -С. 95-97. (особистий внесок - участь в проведенні досліджень, узагальненні результатів та написанні статті).

3. Федченкова Ю.А. Вибір оптимальної технології отримання густого екcтракту з листя клену ясенелистого / Ю.А. Федченкова, О.П. Хворост // Фармац. журн. - 2005. - №6. - С. 63-66. (особистий внесок - участь в плануванні та проведенні досліджень, обробці отриманих результатів та написанні статті).

4. Федченкова Ю.А. Визначення деяких числових показників густих екстрактів кори та листя клену ясенолистого / Ю.А. Федченкова, О.П. Хворост // Медична хімія. - 2005.- Т.7, № 4. - С. 83-84. (особистий внесок - участь в кількісному визначенні, в обговоренні експериментальних даних та підготовці статті).

5. Федченкова Ю.А. Перспективи розробки лікарських засобів на основі нової рослинної сировини - листя та кори клена ясенолистого / Ю.А. Федченкова, О.П. Хворост // Актуальні питання фармацевтичної та медичної науки та практики : зб. наук. ст. - Запоріжжя, 2006. - Т.І., вип.XV. - С. 233-234. (особистий внесок - участь в дослідженнях та написанні статті.)

6. Федченкова Ю.А. Елементний склад листа, кори і густих екстрактів Acer negundo L. (Aceraceae) (клена ясенолистого) в порівнянні з грунтом / Ю.А. Федченкова, О.П. Хворост // Створення, виробництво, стандартизація, фармакоекономіка лікарських засобів та біологічно активних добавок : матеріали наук.-практ. конф. з міжнар. участю. - Тернопіль : Укрмедкнига, 2004. -С. 129-131. (особистий внесок - участь в проведенні досліджень, узагальненні результатів та написанні тез.)

7. Федченкова Ю.А. Дослідження ліпофільної фракції зеленого та жовтого листя клена ясенолистого Acer negundo L. (Aceraceae) / Ю.А. Федченкова, О.П. Хворост // Ліки та життя : матеріали ІІ міжнар. мед.-фармац. конгр., м. Київ, 15-18 лют. 2005 р. - К., 2005. - С. 248-249. (особистий внесок - участь в отриманні ліпофільних фракцій, проведенні досліджень, узагальненні результатів та написанні статті.)

8. Федченкова Ю.А. Попередні дослідження хімічного складу клену ясенолистого / Ю.А. Федченкова // Досягнення та перспективи розвитку фармацевтичної галузі України : матеріали VI Нац. з'їзду фармац. України, м. Харків, 28-30 верес. 2005 р.- Х. : Вид-во НФаУ, 2005. - С. 788-789.

9. Пат. № 78448 України, МПК 2007 А 61К 36/20, А 61 Р 15/18. Контрацептивний засіб з антимікробною та цитотоксичною дією / Ю.А. Федченкова, О.П. Хворост, В.М. Маркова, Л.М. Малоштан, В.В. Малий; заявник та патентовласник Національний фармацевтичний університет - № а2005 10411; заявл. 04.11.2005; опубл. 15.03.2007, Бюл. №3. (особистий внесок - участь в оформленні прикладів, в обговоренні експериментальних даних та підготовці заявки.)

10. Федченкова Ю.А. Деякі параметри субстанцій з сировини рослин роду Acer L. / Ю.А. Федченкова О.П. Хворост // Актуальнi питання створення нових лiкарських засобiв : матерiали Всеукраїнської наук.-практ. конф. студ. та молодих вчен., м. Харкiв, 17-18 трав. 2007 р.- Х., 2007.- С. 81-83. (особистий внесок - приймала участь в проведенні досліджень, узагальненні результатів та написанні тез).

11. Федченкова Ю.А. Клен ясенелистий -перспективна лікарська декоративна рослина / Ю.А.Федченкова // Відновлення порушених природних екосистем : матеріали Третьої міжнар. наук. конф., м. Донецьк, 7-9 жовт. 2008 р. -Донецьк, 2008. - С. 564-565.

АНОТАЦІЇ

Федченкова Ю.А. «Фармакогностичне вивчення деяких представників роду Acer L. та перспективи використання їх у медицині». - Рукопис.

Дисертація на здобуття наукового ступеня кандидата фармацевтичних наук за фахом - 15.00.02 - фармацевтична хімія та фармакогнозія. Національний фармацевтичний університет, Харків, 2009.

Дисертація присвячена системному фармакогностичному вивченню найбільш поширених представників роду клен - клену польовому, клену звичайному та клену ясенолистому. В індивідуальному стані з листя та кори клену ясенолистого виділено та ідентифіковано 21 речовину, встановлено їх структуру, 7 сполук виділено вперше з цієї рослини. Отримано та досліджено ліпофільні фракції з кори листя та насіння клену ясенолистого. Встановлено якісний склад та кількісний вміст мінеральних сполук та жирних кислот. Визначено кількісний вміст органічних кислот, аскорбінової кислоти, різних груп фенольних сполук. Розроблено технологію отримання густих екстрактів з кори та листя клену ясенолистого, технологію отримання густого екстракту листя апробовано в умовах ТОВ ФК «Здоров'я». Проведено стандартизацію сировини та субстанцій, на них розроблено проекти АНД. Проведений комплекс досліджень біологічної активності довів перспективність розробки на їх основі лікарських препаратів антимікробної, цитотоксичної та сперміцидної дії.

Ключові слова: клен ясенолистий, клен звичайний, клен польовий, фармакогностичне вивчення, БАР, густі екстракти листя та кори, антимікробна, цитотоксична, сперміцидна дія.

Федченкова Ю.А. «Фармакогностическое изучение некоторых представителей рода Acer L. и перспективы применения их в медицине». - Рукопись.

Диссертация на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук по специальности 15.00.02 - фармацевтическая химия и фармакогнозия. Национальный фармацевтический университет, Харьков, 2009.

Диссертация посвящена системному фармакогностическому изучению самых распространенных представителей рода Acer L. - клена полевого, клена обыкновенного и клена ясенелистного. В результате предварительного исследования химического состава этих растений, выбраны перспективные виды сырья - это листья, кора клена ясенелистого, для дальнейшего создания лекарственных форм из субстанций этих видов сырья.

Из листьев, коры клена ясенелистного, клена полевого и клена обыкновенного в индивидуальном состоянии выделено и идентификовано 21 вещество. С помощью физических, физико-химических и химических методов анализа, установлена их структура, 7 веществ выделены из данных видов сырья впервые.

Определено количественное содержание макро- и микроэлементов в сырье и густых экстрактах клена ясенелистного. Значительное содержание калия, натрия, кальция, магния и фосфора в сырье и густых экстрактах будет учитываться при дальнейших исследованиях.

В листьях клена ясенелистного, клена полевого и клена обыкновенного и в густом экстракте листьев клена ясенелистного, определено содержание витамина С и суммы органических кислот. Так же в листьях и коре клена полевого и клена обыкновенного, в различном сырье и субстанциях клена ясенелистного, определено количественное содержание разных групп фенольных соединений: суммы окисляемых фенолов, суммы оксикоричных кислот (спектрофотомерическим методом в пересчетет на хлорогеновую кислоту), флавоноидов (спектрофотомерическим методом в пересчетет на гиперозид), дубильных веществ (комплексометрическим методом в пересчете на галлотанин) и катехинов (в пересчете на (+)-катехин).

Получены липофильные фракции коры, листьев и семян клена ясенелистного, получены их трехмерные спектры флюоресценции. Определен ряд числовых показателей данных липофильных фракций: относительная плотность, показатель преломления, кислотное число, число омыления и эфирное число, йодное число, количественное содержание сумм хлорофиллов и каротиноидов. Также, с помощью метода газожидкостной хроматографии, определен жирнокислотный состав липофильных фракций коры, листьев и семян клена ясенелистного.

Разработана технология получения густых экстрактов из листьев и коры клена ясенелистного, установлена закономерность извлечения экстрактивных веществ и суммы окисляемых фенолов из листьев и кори клена ясенелистного в зависимости от выбранного экстрагента, которая позволила выбрать для экстрагирования листьев - 80% спирт, и для экстрагирования коры - 40% спирт. Также, для выбора оптимальных технологических параметров процесса получения субстанции из листьев клена ясенелистого применили статистическую графическую систему STATGRAPHICS Plus for Windows з использованием 24 - факторного плана эксперимента. На основании этого разработаны оптимальные технологии получения густых экстрактов коры и листьев клена ясенелистого. Для листа выбрано соотношение сырье-эктрагент - 1:15, экстрагент 80 % спирт, общее время экстракции 36 часов, при этом выход субстанции составлял 21-24 % от массы воздушно-сухого сырья. Для коры выбрано соотношение сырье-экстрагент - 1:15, экстрагент 40 % спирт, общее время экстракции 4,5 часов при температуре 90 оС, при этом выход субстанции составлял 16,5-17,1 % от массы воздушно-сухого сырья.

Технология получения густого экстракта из листьев апробирована в условиях ООО ФК «Здоровье».

Проведена стандартизация сырья и субстанций, разработаны проекты АНД «Лист клена ясенелистного» и «Густой экстракт листа клена ясенелистного».

Проведенный комплекс исследований биологического действия подтвердил перспективность разработки лекарственных форм антимикробной, цитотоксической и спермицидной активности.

Ключевые слова: клен ясенелистный, клен полевой, клен обыкновенный, фармакогностическое изучение, БАВ, густые экстракты коры и листьев, антимикробная, цитотоксическая, спермицидная активность.

Fedchenkova Julia Anatoliyvna. “Pharmacognostic study of some representatives of Acer L. genus and prospects of using them in medicine“.-Manuscript / Thesis for the Candidate of Pharmaceutical Science Degree in speciality 15.00.02 - Pharmaceutical Chemistry and Pharmacognosy. National University of Pharmacy, Kharkiv, 2009.

The thesis is devoted to the systemic pharmacognostic study of the most common representatives of Acer genus: Acer negundo, Acer platanoides and Acer campestre. 21 substances have been isolated from leaves and bark of Acer and their structures have been determined. 7 compounds have been isolated for the first time from this plant. The Lipophilic fraction has been taken and studied from bark, leaves and seeds of Acer. The qualitative composition and qualitative content of macro- and microelements and fatty acids have been dextermined. The quantitative content of organic acids, ascorbic acid and different groups of phenolic compounds have been determined. The Technology of obtaining dense extracts from leaves of Acer negundo have been developed and The Technology of obtaining dense extracts from leaves of Acer negundo have been approved in cinditions of Zdorovya, Ltd. The standardization of the raw material and substances has been carried out, their projects of AND have been developed. The complex of research of the biological activity has proven the availabilityof developing medicines with the antimicrobial, cytotoxic and spermicidal activity on their basis.

Key words: Acer negundo L., A. campestre, A. platanoides, pharmacognostic study, BAS, dense extracts of leaves, antimicrobial, cytotoxic, spermicidal activity.

Размещено на Allbest.ur